CN116200433A - 一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法 - Google Patents

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Abstract

本申请涉及微生物发酵技术领域，具体公开了一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法，包括以下步骤：冬虫夏草菌属真菌菌种经过斜面培养、摇瓶培养、液体菌种种子扩大培养和深层发酵培养，到达发酵终点，收集发酵液匀浆处理，酶解，固液分离，收集过滤液，脱色，过滤，收集过滤液，浓缩，干燥，获得麦角硫因产品。其具有低成本、可规模化生产的优点。

Description

一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法
技术领域
本申请涉及微生物发酵技术领域，更具体地说，它涉及一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法。
背景技术
麦角硫因(ergothioneine，EGT)，学名为2-巯基-L-组氨酸三甲基内盐，其分子结构中含有以下通式(1)所示咪唑-2-硫酮基团。麦角硫因是存在于很多动植物体内，含量丰富的一种天然氨基酸，不能由动物机体自身合成，只能从食物中摄取，属于稀有氨基酸。
Figure BDA0004020378140000011
有研究表明，麦角硫因具有强抗氧化特效，还可以保护细胞免受紫外线和γ射线所导致的细胞损伤甚至死亡，因此在医药、食品行业，尤其是化妆品行业具有广泛的应用前景。但是麦角硫因在绝大多数生物体中的含量均极少，且动物不能自身合成麦角硫因，只能通过食物获得。而进一步研究表明，许多微生物如真菌和放线菌都能够合成麦角硫因，因此利用生物发酵技术合成麦角硫因越来越受到人们的重视。Melville.D.B和Genghof.D.S等的研究表明麦角硫因是许多微生物细胞的普遍成分，且在几种真菌内能够合成，但不能在细菌内合成。蕈菌中麦角硫因含量相对较高，常见的蕈菌有双孢蘑菇、木耳、香菇、灵芝等。
目前，以蕈菌菌丝体深层发酵技术生物合成制备麦角硫因,是生产麦角硫因的主流方向，但因普遍发酵规模小，发酵产率低，工艺不完善，成本高等原因没有形成规模化生产。
发明内容
为了规模化生产麦角硫因，降低成本，本申请提供一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法。
本申请提供的一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法采用如下的技术方案：
一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法，包括以下步骤：冬虫夏草菌属真菌菌种经过斜面培养、摇瓶培养、液体菌种种子扩大培养和深层发酵培养，到达发酵终点，收集发酵液匀浆处理，酶解，固液分离，收集过滤液，脱色，过滤，收集过滤液，浓缩，干燥，获得麦角硫因产品。
通过采用上述技术方案，通过对发酵培养基的优化和提取工艺的优化，提供了一种低成本、高得率、规模化生产麦角硫因的生物发酵技术，采集野生冬虫夏草作为冬虫夏草菌属真菌，经过分离、纯化、传代培养获得冬虫夏草菌属真菌，经研究发现，冬虫夏草菌属真菌具有发酵培养生物合成麦角硫因的能力，通过培养工艺的改进，代谢调控等方式提高麦角硫因的收率，实现低成本、可规模化生产。
优选的，所述的冬虫夏草菌属真菌菌种为中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉中的任意一种。
通过采用上述技术方案，由于冬虫夏草菌属真菌菌种来自于野生的冬虫夏草，既保留了冬虫夏草原有的品质，又具有一定的选择性，可根据生产环境和生产条件择优选择适宜的菌种。
优选的，所述发酵终点的判断方法为：检测发酵液还原糖含量≤100mg/L，氨氮含量≤200mg/L。
通过采用上述技术方案，研究表明，当发酵液中还原糖含量和氨氮含量在该范围内时，发酵效果最佳，制得的麦角硫因品质较好。
优选的，所述酶解方法为：收集发酵液，调节pH、温度，添加酶制剂，反应一定时间后，灭酶。
通过采用上述技术方案，将发酵液的pH、温度调至适宜条件，使酶制剂的活性最强，使酶解反应充分，从而使酶解效果最佳。
优选的，所述酶制剂包括以下一种或多种的组合：纤维素酶、蛋白酶、核酸酶、葡聚糖酶、淀粉酶、溶壁酶、崩溃酶和糖化酶。
通过采用上述技术方案，酶制剂采用上述一种或多种酶的组合，既增加了酶的多样性和选择性，还能够有效优化酶解反应。
优选的，所述灭酶的方法为：升温至80-100℃，保持10-30min，或者升温至130-150℃，保持5-20s。
通过采用上述技术方案，由于高温可以使酶失活，将温度升至一定程度或者温度保持在一定时间，可快速使酶失活，温度越高，保持的时间可越短。
优选的，所述固液分离的方式包括以下一种或多种的组合：硅藻土过滤、棉饼过滤、板框过滤、真空过滤、离心过滤和膜过滤。
通过采用上述技术方案，由于固液分离的方式的方式有很多种，选择适合发酵液的过滤方式才是根本，上述过滤方式均可有效过滤发酵液，提供了多样行和可选择性，可根据生产条件选择合适的过滤方式。
优选的，所述脱色的方式包括以下一种或多种的组合：双氧水脱色、含氯化合物脱色、臭氧脱色、活性炭脱色和膜过滤脱色。
通过采用上述技术方案，选择上述一种或多种脱色的组合，不仅能够达到有效脱色的目的，而且方便、快捷，省时省力。
优选的，所述过滤的方式包括以下一种或多种的组合：袋式过滤、滤芯过滤、膜过滤、透析和凝胶层析。
通过采用上述技术方案，不论选择哪种过滤方式，都能够有效除去发酵液中的颗粒杂质和有害物质，得到较纯的麦角硫因。
优选的，所述浓缩的方法包括以下一种或多种的组合：膜浓缩、蒸发浓缩、真空浓缩、减压浓缩。
通过采用上述技术方案，由于过滤液浓度较低，并且具有一定的水分，选用合适的浓缩方法对过滤液进行浓缩，能够在除去多余水分的同时，提高麦角硫因的浓度。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1、本申请采集野生冬虫夏草作为冬虫夏草菌属真菌，通过对发酵培养基的优化和提取工艺的优化，经过分离、纯化、传代培养获得冬虫夏草菌属真菌，实现低成本、可规模化生产。
2、本申请中优选采用选择一种或多种脱色的组合，不仅能够达到有效脱色的目的，而且方便、快捷，省时省力。
3、本申请选用多种浓缩方法对过滤液进行浓缩，能够在除去多余水分的同时，提高麦角硫因的浓度。
具体实施方式
以下结合实施例和对比例对本申请作进一步详细说明。
实施例
斜面培养、摇瓶培养、液体菌种种子扩大培养和深层发酵培养条件如下：
斜面培养：将菌种接种于斜面培养基，在16±4℃培养5-10天，获得斜面菌体；斜面培养基质量组成为：葡萄糖2.2-2.6％、土豆汁0.6-0.8％、酵母粉0.6-0.8％、蛋白胨1.2-1.5％、硫酸镁0.02-0.04％、磷酸二氢钾0.02-0.04％、溶剂为纯化水，pH值5.5-6.5。
摇瓶培养：菌种在pH值6.0-7.0、温度16±4℃，摇床转速75±15r/min，培养4-10天获得种子液；种子培养基含重量百分比的以下组分：葡萄糖0.5-3.0％、玉米粉0.5-3.0％、土豆汁0.5-5.0％、酵母膏0.1-1.5％、蛋白胨0.5-5.0％、硫酸镁0-0.05％、磷酸二氢钾0-0.05％和余量的水。
液体菌种种子扩大培养：将种子液接种到种子罐进行三级种子扩大培养，每级种子液接种量为8-18％，种子罐通气量为0.8-1.2vvm，培养温度18-20℃，种子罐培养基配制为：葡萄糖2.2-2.6％、玉米粉1.2-1.5％、土豆汁0.6-0.8％、酵母膏0.6-0.8％、酵母粉0.2-0.4％、酵母抽提物0.1-0.3％、蚕蛹粉0.1-0.3％、蛋白胨1.2-1.5％、硫酸镁0.02-0.04％、磷酸二氢钾0.02-0.04％、溶剂为纯化水，pH值5.5-6.5。
深层发酵培养：取三级种子培养罐种子液接种到发酵罐中进行发酵培养，发酵培养条件：种量为8-18％，pH值6.0-7.0，温度16±4℃，通气量1:0.5-1:2V/V，培养时间5-15天；发酵培养基含重量百分比的以下组分：葡萄糖0.5-2.0％、玉米粉0.5-2.5％、土豆汁1.5-5.0％、尿素0.1-1.0％、蚕蛹粉0.5-3.0％、酵母浸粉0.5-1.5％、菊芋1.5-5.0％、酵母膏0.5-1.5％、组氨酸0.01-0.10％、半胱氨酸0.01-0.10％、组氨酸三甲基内盐0-0.05％、硫酸镁0-0.05％、磷酸二氢钾0-0.05％。
实施例1
一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法，包括以下步骤：冬虫夏草菌属真菌菌种经过斜面培养、摇瓶培养、液体菌种种子扩大培养和深层发酵培养，到达发酵终点，收集发酵液匀浆处理，酶解，固液分离，收集过滤液，脱色，过滤，收集过滤液，浓缩，干燥，获得麦角硫因产品。
一、获得含麦角硫因发酵液
菌种：采集野生冬虫夏草，经过分离、纯化、传代培养获得冬虫夏草唯一无性型菌种中国被毛孢、蝙蝠蛾拟青霉作为菌种，任选其一。
斜面培养：将菌种接种于斜面培养基，在16℃培养5天，获得斜面菌体；斜面培养基质量组成为：葡萄糖2.2％、土豆汁0.6％、酵母粉0.6％、蛋白胨1.2％、硫酸镁0.02％、磷酸二氢钾0.02％、溶剂为纯化水，pH值5.5。
摇瓶培养：菌种在pH值6.0、温度18℃，摇床转速75r/min，培养4天获得种子液；种子培养基含重量百分比的以下组分：葡萄糖0.5％、玉米粉0.5％、土豆汁0.5％、酵母膏0.1％、蛋白胨0.5％和余量的水；
液体菌种种子扩大培养：将种子液接种到种子罐进行三级种子扩大培养，每级种子液接种量为8％，种子罐通气量为0.8vvm，培养温度18℃，种子罐培养基配制为：葡萄糖2.2％、玉米粉1.2％、土豆汁0.6％、酵母膏0.6％、酵母粉0.2％、酵母抽提物0.1％、蚕蛹粉0.1％、蛋白胨1.2％、硫酸镁0.02％、磷酸二氢钾0.02％、溶剂为纯化水，pH值5.5。
深层发酵培养：取三级种子培养罐种子液接种到发酵罐中进行发酵培养，发酵培养条件：种量为8％，pH值6.0，温度16℃，通气量1.1V/V，培养时间8天；发酵培养基含重量百分比的以下组分：葡萄糖1.5％、玉米粉1.0％、土豆汁2.5％、尿素0.1％、蚕蛹粉1.2％、酵母浸粉1.5％、菊芋2.5％、酵母膏0.8％、组氨酸0.03％、半胱氨酸0.03％、组氨酸三甲基内盐0.01％、硫酸镁0.02％、磷酸二氢钾0.02％。
二、麦角硫因的制备
收集上述制备的发酵液，匀浆处理，调节pH值至4.2，温度60℃，加入纤维素酶(安琪集团安占美公司生产的型号为CE-10的酸性纤维素酶)450ml/吨发酵液，同时加入葡聚糖酶(安琪集团安占美公司生产的型号为SF的β-葡聚糖酶)反应时间4-8h，升温至90℃灭酶20min。
离心机进行固液分离，收集滤液，加入1.0％活性炭脱色，过滤除去活性炭，25微米袋式过滤器做前处理，150nm陶瓷膜或超滤膜进行预处理，收集陶瓷膜或超滤膜透过液，用规格型号为600D的纳滤膜处理，收集透过液，再用200D的纳滤膜处理，收集浓缩液并浓缩至浓度为≥5％，加入乙醇使麦角硫因浓缩液里的乙醇含量达到15％，采用三效蒸发器进一步浓缩至浓缩液浓度≥20％，冷冻干燥至水分含量低于5％，获得麦角硫因粗品。
所述发酵终点的判断方法为：检测发酵液还原糖含量≤100mg/L，氨氮含量≤200mg/L。
所述酶解方法为：收集发酵液，调节pH、温度，添加酶制剂，反应一定时间后，灭酶。
所述酶包括以下一种或多种的组合：纤维素酶、蛋白酶、核酸酶、葡聚糖酶、淀粉酶、溶壁酶、崩溃酶和糖化酶。
所述固液分离方式包括以下一种或多种的组合：硅藻土过滤、棉饼过滤、板框过滤、真空过滤、离心过滤和膜过滤。
所述脱色方式包括以下一种或多种的组合：双氧水脱色、含氯化合物脱色、臭氧脱色、活性炭脱色和膜过滤脱色。
所述过滤方式包括以下一种或多种的组合：袋式过滤、滤芯过滤、膜过滤、透析和凝胶层析。
所述浓缩方法包括以下一种或多种的组合：膜浓缩、蒸发浓缩、真空浓缩和减压浓缩。特别的，稀溶液中加入乙醇配成含乙醇浓度10％的溶液再进行浓缩。
所述干燥方法包括以下一种或多种的组合：真空干燥、冷冻干燥、热风干燥、喷雾干燥和微波干燥。
实施例2
一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法，包括以下步骤：冬虫夏草菌属真菌菌种经过斜面培养、摇瓶培养、液体菌种种子扩大培养和深层发酵培养，到达发酵终点，收集发酵液匀浆处理，酶解，固液分离，收集过滤液，脱色，过滤，收集过滤液，浓缩，干燥，获得麦角硫因产品。
一、获得含麦角硫因发酵液
菌种：采集野生冬虫夏草，经过分离、纯化、传代培养获得冬虫夏草唯一无性型菌种中国被毛孢、蝙蝠蛾拟青霉作为菌种，任选其一。
斜面培养：将菌种接种于斜面培养基，在18℃培养7天，获得斜面菌体；斜面培养基质量组成为：葡萄糖2.5％、土豆汁0.6％、酵母粉0.8％、蛋白胨1.5％、硫酸镁0.02％、磷酸二氢钾0.02％、溶剂为纯化水，pH值6.0。
摇瓶培养：菌种在pH值6.0、温度18℃，摇床转速120r/min，培养7天获得种子液；种子培养基含重量百分比的以下组分：葡萄糖1.2％、玉米粉0.6％、土豆汁1.2％、酵母膏1.2％、蛋白胨0.8％、硫酸镁0.02％、磷酸二氢钾0.02％和余量的水；
液体菌种种子扩大培养：将种子液接种到种子罐进行三级种子扩大培养，每级种子液接种量为10％，种子罐通气量为1.1vvm，培养温度18℃，种子罐培养基配制为：葡萄糖2.4％、玉米粉1.2％、土豆汁0.6％、酵母膏0.8％、酵母粉0.3％、酵母抽提物0.15％、蚕蛹粉0.2％、蛋白胨1.2％、硫酸镁0.02％、磷酸二氢钾0.02％、溶剂为纯化水，pH值6.0。
深层发酵培养：取三级种子培养罐种子液接种到发酵罐中进行发酵培养，发酵培养条件：种量为12％，pH值6.0，温度18℃，通气量1.1V/V，培养时间8天；发酵培养基含重量百分比的以下组分：葡萄糖1.5％、玉米粉1.0％、土豆汁2.5％、尿素0.1％、蚕蛹粉1.2％、酵母浸粉1.5％、菊芋2.5％、酵母膏0.8％、组氨酸0.03％、半胱氨酸0.03％、组氨酸三甲基内盐0.01％、硫酸镁0.02％、磷酸二氢钾0.02％。
二、麦角硫因的制备
收集上述制备的发酵液，匀浆处理，调节pH值至4.3，温度60℃，加入纤维素酶(安琪集团安占美公司生产的型号为CE-10的酸性纤维素酶)450ml/吨发酵液，同时加入葡聚糖酶(安琪集团安占美公司生产的型号为SF的β-葡聚糖酶)反应时间4-8h，升温至100℃灭酶30min。
离心机进行固液分离，收集滤液，加入1.0％活性炭脱色，过滤除去活性炭，25微米袋式过滤器做前处理，150nm陶瓷膜或超滤膜进行预处理，收集陶瓷膜或超滤膜透过液，用规格型号为600D的纳滤膜处理，收集透过液，再用200D的纳滤膜处理，收集浓缩液并浓缩至浓度为≥5％，加入乙醇使麦角硫因浓缩液里的乙醇含量达到15％，采用三效蒸发器进一步浓缩至浓缩液浓度≥20％，冷冻干燥至水分含量低于5％，获得麦角硫因粗品。
所述发酵终点的判断方法为：检测发酵液还原糖含量≤100mg/L，氨氮含量≤200mg/L。
所述酶解方法为：收集发酵液，调节pH、温度，添加酶制剂，反应一定时间后，灭酶。
所述酶包括以下一种或多种的组合：纤维素酶、蛋白酶、核酸酶、葡聚糖酶、淀粉酶、溶壁酶、崩溃酶和糖化酶。
所述固液分离方式包括以下一种或多种的组合：硅藻土过滤、棉饼过滤、板框过滤、真空过滤、离心过滤和膜过滤。
所述脱色方式包括以下一种或多种的组合：双氧水脱色、含氯化合物脱色、臭氧脱色、活性炭脱色和膜过滤脱色。
所述过滤方式包括以下一种或多种的组合：袋式过滤、滤芯过滤、膜过滤、透析和凝胶层析。
所述浓缩方法包括以下一种或多种的组合：膜浓缩、蒸发浓缩、真空浓缩和减压浓缩。特别的，稀溶液中加入乙醇配成含乙醇浓度20％的溶液再进行浓缩。
所述干燥方法包括以下一种或多种的组合：真空干燥、冷冻干燥、热风干燥、喷雾干燥和微波干燥。
实施例3
一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法，包括以下步骤：冬虫夏草菌属真菌菌种经过斜面培养、摇瓶培养、液体菌种种子扩大培养和深层发酵培养，到达发酵终点，收集发酵液匀浆处理，酶解，固液分离，收集过滤液，脱色，过滤，收集过滤液，浓缩，干燥，获得麦角硫因产品。
一、获得含麦角硫因发酵液
菌种：采集野生冬虫夏草，经过分离、纯化、传代培养获得冬虫夏草唯一无性型菌种中国被毛孢、蝙蝠蛾拟青霉作为菌种，任选其一。
斜面培养：将菌种接种于斜面培养基，在20℃培养10天，获得斜面菌体；斜面培养基质量组成为：葡萄糖2.6％、土豆汁0.8％、酵母粉0.8％、蛋白胨1.5％、硫酸镁0.04％、磷酸二氢钾0.04％、溶剂为纯化水，pH值6.5。
摇瓶培养：菌种在pH值7.0、温度20℃，摇床转速90r/min，培养10天获得种子液；种子培养基含重量百分比的以下组分：葡萄糖3.0％、玉米粉3.0％、土豆汁5.0％、酵母膏1.5％、蛋白胨5.0％、硫酸镁0.05％、磷酸二氢钾0.05％和余量的水。
液体菌种种子扩大培养：将种子液接种到种子罐进行三级种子扩大培养，每级种子液接种量为18％，种子罐通气量为1.2vvm，培养温度20℃，种子罐培养基配制为：葡萄糖2.6％、玉米粉1.5％、土豆汁0.8％、酵母膏0.8％、酵母粉0.4％、酵母抽提物0.3％、蚕蛹粉0.3％、蛋白胨1.5％、硫酸镁0.04％、磷酸二氢钾0.04％、溶剂为纯化水，pH值6.5。
深层发酵培养：取三级种子培养罐种子液接种到发酵罐中进行发酵培养，发酵培养条件：种量为18％，pH值7.0，温度20℃，通气量1:2V/V，培养时间15天；发酵培养基含重量百分比的以下组分：葡萄糖2.0％、玉米粉2.5％、土豆汁5.0％、尿素1.0％、蚕蛹粉3.0％、酵母浸粉1.5％、菊芋5.0％、酵母膏1.5％、组氨酸0.10％、半胱氨酸0.10％、组氨酸三甲基内盐0.05％、硫酸镁0.05％、磷酸二氢钾0.05％。
二、麦角硫因的制备
收集上述制备的发酵液，匀浆处理，调节pH值至4.5，温度60℃，加入纤维素酶(安琪集团安占美公司生产的型号为CE-10的酸性纤维素酶)450ml/吨发酵液，同时加入葡聚糖酶(安琪集团安占美公司生产的型号为SF的β-葡聚糖酶)反应时间8h，所述灭酶的方法为升温至150℃，保持20s。
离心机进行固液分离，收集滤液，加入1.0％活性炭脱色，过滤除去活性炭，25微米袋式过滤器做前处理，150nm陶瓷膜或超滤膜进行预处理，收集陶瓷膜或超滤膜透过液，用规格型号为600D的纳滤膜处理，收集透过液，再用200D的纳滤膜处理，收集浓缩液并浓缩至浓度为≥5％，加入乙醇使麦角硫因浓缩液里的乙醇含量达到15％，采用三效蒸发器进一步浓缩至浓缩液浓度≥20％，冷冻干燥至水分含量低于5％，获得麦角硫因粗品。
所述发酵终点的判断方法为：检测发酵液还原糖含量≤100mg/L，氨氮含量≤200mg/L。
所述酶解方法为：收集发酵液，调节pH、温度，添加酶制剂，反应一定时间后，灭酶。
所述酶包括以下一种或多种的组合：纤维素酶、蛋白酶、核酸酶、葡聚糖酶、淀粉酶、溶壁酶、崩溃酶和糖化酶。
所述固液分离方式包括以下一种或多种的组合：硅藻土过滤、棉饼过滤、板框过滤、真空过滤、离心过滤和膜过滤。
所述脱色方式包括以下一种或多种的组合：双氧水脱色、含氯化合物脱色、臭氧脱色、活性炭脱色和膜过滤脱色。
所述过滤方式包括以下一种或多种的组合：袋式过滤、滤芯过滤、膜过滤、透析和凝胶层析。
所述浓缩方法包括以下一种或多种的组合：膜浓缩、蒸发浓缩、真空浓缩和减压浓缩。特别的，稀溶液中加入乙醇配成含乙醇浓度30％的溶液再进行浓缩。
所述干燥方法包括以下一种或多种的组合：真空干燥、冷冻干燥、热风干燥、喷雾干燥和微波干燥。
性能检测试验
试验方法
按照上述实施例制备工艺连续制备3批，收集发酵液滤液和麦角硫因粗品，分别进行检测，检测结果如下表1所示。
表1中国被毛孢菌发酵产物检测结果
Figure BDA0004020378140000111
Figure BDA0004020378140000121
备注：发酵液滤液为一制备的发酵终点的发酵液过滤所得，麦角硫因粗品为二方法制备所得，样品1、样品2、样品3分别为连续制备3批所收集的三个批次的样品。
结合实施例并结合表1可以看出，中国被毛孢菌液体深层发酵可生物合成麦角硫因，经检测其3批样品发酵液滤液中麦角硫因最高值为351.19±4.52mg/L，经过提取工艺制备的3批麦角硫因粗品中麦角硫因最高值为115.23±2.48mg/g。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (10)

1.一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法，其特征在于，包括以下步骤：冬虫夏草菌属真菌菌种经过斜面培养、摇瓶培养、液体菌种种子扩大培养和深层发酵培养，到达发酵终点，收集发酵液匀浆处理，酶解，固液分离，收集过滤液，脱色，过滤，收集过滤液，浓缩，干燥，获得麦角硫因产品。
2.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法，其特征在于，所述的冬虫夏草菌属真菌菌种为中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉中的任意一种。
3.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法，其特征在于，所述发酵终点的判断方法为：检测发酵液还原糖含量≤100mg/L，氨氮含量≤200mg/L。
4.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法，其特征在于，所述酶解方法为：收集发酵液，调节pH、温度，添加酶制剂，反应一定时间后，灭酶。
5.根据权利要求4所述的一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法，其特征在于，所述酶制剂包括以下一种或多种的组合：纤维素酶、蛋白酶、核酸酶、葡聚糖酶、淀粉酶、溶壁酶、崩溃酶和糖化酶。
6.根据权利要求4所述的一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法，其特征在于，所述灭酶的方法为：升温至80-100℃，保持10-30min，或者升温至130-150℃，保持5-20s。
7.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法，其特征在于，所述固液分离的方式包括以下一种或多种的组合：硅藻土过滤、棉饼过滤、板框过滤、真空过滤、离心过滤和膜过滤。
8.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法，其特征在于，所述脱色的方式包括以下一种或多种的组合：双氧水脱色、含氯化合物脱色、臭氧脱色、活性炭脱色和膜过滤脱色。
9.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法，其特征在于，所述过滤的方式包括以下一种或多种的组合：袋式过滤、滤芯过滤、膜过滤、透析和凝胶层析。
10.根据权利要求1所述的一种冬虫夏草菌属真菌生物合成制备麦角硫因的方法，其特征在于，所述浓缩的方法包括以下一种或多种的组合：膜浓缩、蒸发浓缩、真空浓缩、减压浓缩。
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