CN106434421B - 一株ε-聚赖氨酸高产菌株及生产ε-聚赖氨酸方法 - Google Patents

一株ε-聚赖氨酸高产菌株及生产ε-聚赖氨酸方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106434421B
CN106434421B CN201610665007.4A CN201610665007A CN106434421B CN 106434421 B CN106434421 B CN 106434421B CN 201610665007 A CN201610665007 A CN 201610665007A CN 106434421 B CN106434421 B CN 106434421B
Authority
CN
China
Prior art keywords
polylysine
epsilon
fermentation
cultured
fermented
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610665007.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106434421A (zh
Inventor
刘飞
张林军
朱希强
张金华
侯重文
袁超
王林
张祥奎
凌沛学
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong Academy of Pharmaceutical Sciences
Original Assignee
Shandong Academy of Pharmaceutical Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong Academy of Pharmaceutical Sciences filed Critical Shandong Academy of Pharmaceutical Sciences
Priority to CN201610665007.4A priority Critical patent/CN106434421B/zh
Publication of CN106434421A publication Critical patent/CN106434421A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106434421B publication Critical patent/CN106434421B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces
    • C12R2001/47—Streptomyces albus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/01—Preparation of mutants without inserting foreign genetic material therein; Screening processes therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及一株ε‑聚赖氨酸高产菌株及生产ε‑聚赖氨酸方法，属于生物技术领域。本发明的ε‑聚赖氨酸高产菌株EA‑19，分类命名为白色链霉菌（Streptomyces albulus），保藏号为CGMCC No.10156。采用本发明的菌株EA‑19进行补料分批发酵培养，发酵液中ε‑聚赖氨酸的浓度达38.5~39 g/L。本发生产ε‑聚赖氨酸的方法：采用菌株EA‑19进行发酵培养。采用鼓泡法，在发酵培养过程中、发酵培养结束后通风，使得发酵产生的ε‑聚赖氨酸存在于泡沫中、从发酵液中分离出来；从而克服了现有制备方法中ε‑聚赖氨酸难以分离的技术难题；避免了离子交换等产生大量废水的步骤，产品收率提高50%以上；工艺简单易放大，能耗低、设备投资小，易于实现规模化生产。

Description

一株ε-聚赖氨酸高产菌株及生产ε-聚赖氨酸方法
技术领域
本发明涉及一株ε-聚赖氨酸高产菌株及生产ε-聚赖氨酸方法，属于生物技术领域。
背景技术
ε-聚赖氨酸（ε-polylysine）属于微生物食品防腐剂，是一种高效广谱的新型生物防腐剂。ε-聚赖氨酸是L-赖氨酸由α-羧基和ε-氨基连接形成的聚合物，含有25~35个赖氨酸残基，成品为淡黄色粉末，易溶于水，吸湿性强，略有苦味。与其它防腐剂相比，ε-聚赖氨酸具有抑菌谱广、抑菌效率高、稳定性好、安全性高的特点。ε-聚赖氨酸对革兰阳性菌、革兰阴性菌、酵母菌、霉菌均有抑菌效果，对耐热性芽孢杆菌和一些病毒也有抑制作用；在食品中的添加量非常少；能适应较宽的pH范围，还具有很高的热稳定性，可以随食品一起灭菌；在肠胃中几乎不被吸收，对人体的生长发育等没有影响，在人体内可分解为L-赖氨酸而成为人体营养强化剂。除了作为防腐剂，在食品工业中，ε-聚赖氨酸还可用作乳化剂、食疗剂；在医药行业中，还可以作为药物载体以及高吸水性的生物材料。
目前，困扰ε-聚赖氨酸大规模产业化的难题主要有两个：一是现有菌株的产酸能力有限；二是分离工艺复杂，一般需要经过除菌、离子交换、脱色、浓缩、干燥等步骤；如中国专利200910152931.2提供的一种从发酵液中提取ε-聚赖氨酸及其盐的方法，其工艺步骤复杂、设备投资大、成本高、分离过程中还会产生大量污水。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有高产ε-聚赖氨酸能力的菌株；及根据ε-聚赖氨酸及其发酵特性，提供一种工艺简单、成本低的采用该菌株生产ε-聚赖氨酸的方法。
技术方案：
通过紫外-亚硝基胍复合诱变方法，对白色链霉菌（Streptomyces albulus）NBRC14147进行诱变，将诱变株涂布到含有10~40 g/L ε-聚赖氨酸的YMG或LB固体培养基上，28~30 ℃培养2~5天后，挑选出单菌落，经过摇瓶复筛及发酵罐验证后，获得一株具有高产ε-聚赖氨酸能力的菌株EA-19；菌株EA-19补料分批发酵培养，发酵液中ε-聚赖氨酸的浓度达38.5~39 g/L。该菌株EA-19，其形态特征为：孢子丝紧密或松敞螺旋形，含10-50个孢子；孢子球形至卵圆形，表面光滑。经鉴定，该菌株EA-19是一种白色链霉菌（Streptomyces albulus）。
该菌株EA-19已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101），分类命名为白色链霉菌（Streptomyces albulus），保藏号为CGMCC No.10156，保藏时间为2014年12月11日。
一种采用本发明的菌株EA-19生产ε-聚赖氨酸的方法：菌株EA-19进行发酵培养。当发酵液中ε-聚赖氨酸的浓度稳定后，停止发酵培养；发酵周期为42h。测得发酵液中ε-聚赖氨酸的浓度为7.5 g/L。而采用白色链霉菌NBRC14147发酵培养；当发酵液中ε-聚赖氨酸的浓度稳定后，停止发酵培养；发酵周期为42h。测得发酵液中ε-聚赖氨酸的浓度为2.5 g/L。由此可见，本发明的方法能缩短发酵周期，产ε-聚赖氨酸的能力明显提高（是白色链霉菌NBRC14147产ε-聚赖氨酸能力的三倍）。
上述方法，发酵培养过程中搅拌、通风；发酵培养结束后，将发酵液加热到80-90℃维持25-35分钟，然后继续向发酵液通风至发酵液不再产生泡沫；收集发酵培养过程中及发酵培养结束后产生的泡沫，进行消泡、过滤，滤液加有机溶剂进行沉淀，沉淀真空干燥，得到ε-聚赖氨酸成品。该方法采用鼓泡法，在发酵培养过程中、发酵培养结束后通风，使得发酵产生的ε-聚赖氨酸存在于泡沫中、从发酵液中分离出来；从而克服了现有制备方法中ε-聚赖氨酸难以分离的技术难题。“将发酵液加热到80-90 ℃维持25-35分钟”的作用是提高ε-聚赖氨酸的分离效果。
上述方法，维持发酵液的糖浓度为5-30g/L、维持发酵液的pH为3.5-4.5。随着发酵培养的进行，发酵液的糖浓度和pH逐渐降低。当糖浓度过低，菌体会死亡，产酸缓慢，影响最终产量；pH过低也不利于产酸。所以，向发酵液充补料液以维持糖浓度，向发酵液中加氨水以维持pH；所述补料液含葡萄糖。在此条件下，发酵培养168~192 h后，发酵液中ε-聚赖氨酸的浓度即可达到38.5-39g/L的稳定状态。
上述方法，优选的，维持发酵液的糖浓度为9-11g/L。在此糖浓度条件下，菌体生长状态和产酸能力更好。
上述方法，发酵培养用发酵培养基含有葡萄糖 50 g/L、酵母粉5 g/L、硫酸铵10g/L、硫酸亚铁 0.03 g/L、硫酸锌0.04 g/L、硫酸镁0.5 g/L、磷酸氢二钾 0.8 g/L、磷酸二氢钾1.36 g/L、以及0.5~5 g/L的吐温、蔗糖酯、甘油脂和大豆磷脂中的一种以上，以助于发酵液形成的泡沫不易破裂，便于泡沫引流。
上述方法，消泡是指机械搅拌消泡和加入消泡剂消泡中的一种或两种结合。
上述方法，所述过滤为板框过滤。在本发明中，相对于采用其他过滤方式，板框过滤的优势在于：工艺简单易放大，能耗低、设备投资小。
上述方法，所述有机溶剂为乙醇、乙醚、丙醇、丁醇和丙酮中的一种或两种以上，加入量为滤液体积的1~3倍。
上述方法，菌株EA-19的发酵培养条件可以采用制备的ε-聚赖氨酸的常规发酵培养条件；优选的，发酵培养条件为：温度28~30 ℃、搅拌转速100~400 r/min，通风比0.5~1:1V/V•m。
本发明人还发现，ε-聚赖氨酸作为赖氨酸聚合物，有较高的表面活性。在ε-聚赖氨酸发酵中后期，由于产物的积累，会产生大量的泡沫，需要不断的加入消泡剂来消泡，过多的消泡剂不仅增加成本，还会降低发酵液的表面张力，降低溶解氧浓度，对发酵存在一定的抑制作用。
有益效果
本发明的菌株EA-19具备高产ε-聚赖氨酸能力；其进行补料分批发酵，所获得的发酵液中ε-聚赖氨酸的浓度高达38.5-39g/L。
本发明的生产方法，有效利用ε-聚赖氨酸及其发酵的特性，采用鼓泡法，使ε-聚赖氨酸以泡沫形式从发酵液中分离出来，然后采用有机溶剂沉淀法浓缩；避免了离子交换等产生大量废水的步骤，产品收率（成品产量/发酵产量的比值）提高50 %以上；工艺简单易放大，能耗低、设备投资小，易于实现规模化生产。
保藏信息
保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所
保藏日期：2014年12月11日
保藏编号：CGMCC No.10156
分类命名：白色链霉菌Streptomyces albulus。
具体实施方式
下面结合具体实施例以更好地理解本发明。
实施例1 高产菌株EA-19的筛选
（1）将白色链霉菌NBRC14147的孢子使用tirs-马来酸缓冲液制成孢子悬液，孢子浓度约为107~108个/mL。
（2）取孢子悬液5 mL，加入到Φ9 cm无菌平皿；将无菌平皿置于紫外诱变箱内、距15 W 紫外灯30 cm处，进行紫外光照射诱变30 s。
（3）将无菌平皿从紫外诱变箱中取出，再向无菌平皿中的孢子悬液中加入亚硝基胍，使亚硝基胍终浓度为0.8 mg/mL，避光震荡30 min；终止诱变。
（4）诱变结束后，清洗菌体并加入5 mL避光过夜培养（培养时间为16小时左右）。发酵培养基：葡萄糖 50 g/L，酵母粉5 g/L，硫酸铵10 g/L，硫酸亚铁 0.03 g/L，硫酸锌0.04g/L，硫酸镁0.5 g/L，磷酸氢二钾 0.8 g/L，磷酸二氢钾1.36 g/L。
（5）将步骤（4）获得的菌液用含有40 g/L ε-聚赖氨酸的YMG固体培养基进行平板培养，避光培养2天，得到单菌落14个。YMG固体培养基：酵母粉4g/L，麦芽浸粉10g/L，葡萄糖4g/L，琼脂15g/L。
（6）得到的14个单菌落经过摇瓶初筛后，获得菌株EA-19。
（7）将获得的菌株EA-19用tirs-马来酸缓冲液制成EA-19的孢子悬液，孢子浓度约为107~108个/mL；备用。
以下实验为高产菌株EA-19与原始菌株NBRC14147的对比。
1. 对ε-聚赖氨酸的耐受性
将原始菌株NBRC14147和高产菌株EA-19分别接种到含有不同浓度ε-聚赖氨酸的YMG固体培养基中，30 ℃培养2~5天，观察菌体生长情况，具体结果见表1。YMG固体培养基：酵母粉4g/L，麦芽浸粉10g/L，葡萄糖4g/L，琼脂15g/L。
表1 NBRC1147和EA-19对ε-聚赖氨酸（ε-PL）的耐受性
注：－ 无生长，+ 少量生长，++ 生长较多，+++生长旺盛
2. 分批发酵实验
（1）分别将菌株NBRC14147和EA-19的孢子悬液按2 %接种量接种到液体种子培养基中，30 ℃、250 r/min培养24 h；分别得到NBRC14147和EA-19的种子液。种子培养基成分为甘油 20 g/L，酵母粉 5 g/L，硫酸亚铁 0.03 g/L，硫酸锌0.04 g/L，硫酸镁0.5 g/L，磷酸氢二钾 0.8 g/L，磷酸二氢钾1.36 g/L。
（2）按5 %接种量将培养好的NBRC14147和EA-19的种子液分别接种到8 L发酵培养基中，培养温度30 ℃、搅拌转速200~400 r/min，通风比0.5~1:1 (V/V•m)（一分钟内通过单位体积培养液的空气体积比），开始发酵培养。发酵培养基为葡萄糖 50 g/L，酵母粉5 g/L，硫酸铵10 g/L，硫酸亚铁 0.03 g/L，硫酸锌0.04 g/L，硫酸镁0.5 g/L，磷酸氢二钾 0.8 g/L，磷酸二氢钾1.36 g/L。
（3）发酵培养至10~16 h，当发酵液pH降至约4.0时，分别开始流加氨水使pH稳定在4.0上下。
（4）发酵培养至40~48 h，测定发酵液中残留葡萄糖浓度低于5 g/L时，结束发酵，测定发酵液中ε-聚赖氨酸的浓度，具体结果见表2。
表2 NBRC1147和EA-19分批发酵结果
。
实施例2 高产菌株EA-19发酵分离耦合生产ε-聚赖氨酸
（1） 取实施例1制备的EA-19孢子悬液按2 %接种量接种到液体种子培养基中，30℃，250 r/min培养24 h；得EA-19种子液。种子培养基成分为甘油 20 g/L，酵母粉 5 g/L，硫酸亚铁 0.03 g/L，硫酸锌0.04 g/L，硫酸镁0.5 g/L，磷酸氢二钾 0.8 g/L，磷酸二氢钾1.36 g/L。
（2）按5 %接种量将EA-19种子液接种到发酵培养基中，培养温度30 ℃、搅拌转速400 200-500r/min，通风比1:1 (V/V•m)，开始发酵培养。发酵培养基为葡萄糖 50 g/L，酵母粉5 g/L，硫酸铵10 g/L，硫酸亚铁 0.03 g/L，硫酸锌0.04 g/L，硫酸镁0.5 g/L，磷酸氢二钾 0.8 g/L，磷酸二氢钾1.36 g/L，吐温80 0.5 g/L。
（3）发酵培养至12 h时，发酵液pH降至约4.0，开始流加氨水使pH稳定至约4.0。
（4）发酵培养至45 h时，发酵液中的葡萄糖浓度将至10 g/L上下，开始流加补料液，使发酵液中的葡萄糖浓度稳定在10 g/L上下。补料液组成为葡萄糖500 g/L。
（5）发酵培养至65 h时，发酵液中产生大量泡沫，通过尾气管道将泡沫引流到消泡罐中；
（6）发酵培养至172 h时，通过液相检测，发酵液中ε-聚赖氨酸产量达到38.5 g/L，结束发酵。
（7）将发酵液升温至85 ℃，按1:1通风比通风鼓泡16 h，鼓泡产生的泡沫引流到消泡罐中；泡沫在消泡罐中经消泡剂消泡后，再经板框过滤，得到澄清滤液；
（8）向滤液中加入其2倍体积的乙醇，得到聚赖氨酸沉淀，沉淀再经减压干燥得到ε-聚赖氨酸成品；产品收率为81%；与实施例4相比，收率提高了50％以上。
实施例3 高产菌株EA-19发酵分离耦合生产ε-聚赖氨酸
（1） 取实施例1制备的EA-19孢子悬液按2 %接种量接种到液体种子培养基中，30℃、250 r/min培养24 h；得EA-19种子液。种子培养基成分为甘油 20 g/L，酵母粉 5 g/L，硫酸亚铁 0.03 g/L，硫酸锌0.04 g/L，硫酸镁0.5 g/L，磷酸氢二钾 0.8 g/L，磷酸二氢钾1.36 g/L。
（2）按5 %接种量将；得EA-19种子液接种到发酵培养基中，培养温度30 ℃、搅拌转速400 r/min，通风比1:1 V/V•m，开始发酵培养。发酵培养基为葡萄糖 50 g/L，酵母粉5 g/L，硫酸铵10 g/L，硫酸亚铁 0.03 g/L，硫酸锌0.04 g/L，硫酸镁0.5 g/L，磷酸氢二钾 0.8g/L，磷酸二氢钾1.36 g/L，单甘脂 1 g/L。
（3）发酵培养至12 h时，发酵液pH降至约4.0，开始流加氨水使pH稳定至约4.0。
（4）发酵培养至46 h时，发酵液中的葡萄糖浓度降至10 g/L上下，开始流加补料液，使发酵液中的葡萄糖浓度稳定在10 g/L上下；补料液组成为葡萄糖500 g/L。
（5）发酵培养至61 h时，发酵液中产生大量泡沫，通过尾气管道将泡沫引流到消泡罐中。
（6）发酵培养至170 h时，通过液相检测，ε-聚赖氨酸产量达到39.0 g/L，结束发酵。
（7）将发酵液升温至85 ℃，按1:1通风比通风鼓泡12 h，鼓泡产生的泡沫引流到消泡罐中。泡沫在消泡罐中经消泡剂和机械搅拌消泡后，再经板框过滤，得到澄清滤液。
（8）向滤液中加入其1.5倍体积的乙醚，得到聚赖氨酸沉淀，沉淀再经减压干燥得到聚赖氨酸成品；产品收率为83%。
实施例4 高产菌株EA-19采用常规方法进行发酵分离生产ε-聚赖氨酸
具体操作如下：
（1） 取实施例1制备的EA-19孢子悬液按2 %接种量接种到液体种子培养基中，30℃，250 r/min培养24 h；得EA-19种子液。种子培养基成分为甘油 20 g/L，酵母粉 5 g/L，硫酸亚铁 0.03 g/L，硫酸锌0.04 g/L，硫酸镁0.5 g/L，磷酸氢二钾 0.8 g/L，磷酸二氢钾1.36 g/L。
（2）按5 %接种量将EA-19种子液接种到发酵培养基中，培养温度30 ℃、搅拌转速400 200-500r/min，通风比1:1 (V/V•m)，开始发酵培养。发酵培养基为葡萄糖 50 g/L，酵母粉5 g/L，硫酸铵10 g/L，硫酸亚铁 0.03 g/L，硫酸锌0.04 g/L，硫酸镁0.5 g/L，磷酸氢二钾 0.8 g/L，磷酸二氢钾1.36 g/L，吐温80 0.5 g/L。
（3）发酵培养至12 h时，发酵液pH降至约4.0，开始流加氨水使pH稳定至约4.0。
（4）发酵培养至46 h时，发酵液中的葡萄糖浓度降至10 g/L上下，开始流加补料液，使发酵液中的葡萄糖浓度稳定在10 g/L上下；补料液组成为葡萄糖500 g/L。
（5）发酵培养至170 h时，通过液相检测，ε-聚赖氨酸产量达到38.7g/L，结束发酵。
（6）将聚赖氨酸发酵液调pH值为3.0，然后加热至85℃，保温20分钟，再冷却至60℃，经板框过滤、顶洗、复滤后得清滤液；
（7）将清滤液调pH值为8.0，得碱化液；
（8）将碱化液压入树脂吸附柱中进行吸附，并保持吸附过程的pH值保持在8.0范围内，直到树脂吸附达饱和状态；用纯化水洗涤饱和树脂，至洗涤液体澄清为止；
（9）用盐酸进行解析，待pH降至4.0以下，解吸结束，得解析液；
（10）在所述解析液中加入活性炭进行脱色，过滤得脱色液；
（11）将所述脱色液压入滤膜装置进行循环浓缩，将脱色液浓缩至ε-PL含量在30％时，停止浓缩，得浓缩液，浓缩液经干燥而得到ε-聚赖氨酸成品，收率为55%。

Claims (10)

1. 一株ε-聚赖氨酸高产菌株EA-19，分类命名为白色链霉菌（Streptomyces albulus），保藏号为CGMCC No.10156。
2.一种生产ε-聚赖氨酸的方法，其特征在于，采用权利要求1所述的菌株EA-19进行发酵培养。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，发酵培养过程中搅拌、通风；发酵培养结束后，将发酵液加热到80-90℃维持25-35分钟，然后继续向发酵液通风至发酵液不再产生泡沫；收集发酵培养过程中及发酵培养结束后产生的泡沫，进行消泡、过滤，滤液加有机溶剂进行沉淀，沉淀真空干燥，得到ε-聚赖氨酸成品。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，维持发酵液的糖浓度为5-30g/L、维持发酵液的pH为3.5-4.5。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，向发酵液充补料液以维持糖浓度，向发酵液中加氨水以维持pH；所述补料液含葡萄糖。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，维持发酵液的糖浓度为9-11g/L。
7. 根据权利要求2-6中任意一项所述的方法，其特征在于，发酵培养用发酵培养基含有葡萄糖 50 g/L、酵母粉5 g/L、硫酸铵10 g/L、硫酸亚铁 0.03 g/L、硫酸锌0.04 g/L、硫酸镁0.5 g/L、磷酸氢二钾 0.8 g/L、磷酸二氢钾1.36 g/L、以及0.5~5 g/L的吐温、蔗糖酯、甘油脂和大豆磷脂中的一种以上。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，消泡是指机械搅拌消泡和加入消泡剂消泡中的一种或两种结合。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述过滤为板框过滤；所述有机溶剂为乙醇、乙醚、丙醇、丁醇和丙酮中的一种或两种以上，加入量为滤液体积的1~3倍。
10. 根据权利要求9所述的方法，其特征在于，发酵培养条件为：温度28~30 ℃、搅拌转速100~400 r/min，通风比0.5~1:1 V/V•m。
CN201610665007.4A 2016-08-15 2016-08-15 一株ε-聚赖氨酸高产菌株及生产ε-聚赖氨酸方法 Active CN106434421B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610665007.4A CN106434421B (zh) 2016-08-15 2016-08-15 一株ε-聚赖氨酸高产菌株及生产ε-聚赖氨酸方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610665007.4A CN106434421B (zh) 2016-08-15 2016-08-15 一株ε-聚赖氨酸高产菌株及生产ε-聚赖氨酸方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106434421A CN106434421A (zh) 2017-02-22
CN106434421B true CN106434421B (zh) 2019-06-11

Family

ID=58185046

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610665007.4A Active CN106434421B (zh) 2016-08-15 2016-08-15 一株ε-聚赖氨酸高产菌株及生产ε-聚赖氨酸方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106434421B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110373359A (zh) * 2019-08-05 2019-10-25 河南科技大学 一种白色链霉菌X-18及利用该菌生产ε-聚赖氨酸的方法

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110093392B (zh) * 2019-04-04 2022-12-02 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） 一种四霉素a高产菌株yb101及其筛选方法和发酵生产方法
CN110393953A (zh) * 2019-07-11 2019-11-01 北京三聚环保新材料股份有限公司 一种复配消泡剂及其制备方法和应用
CN110373439B (zh) * 2019-08-01 2021-04-27 浙江新银象生物工程有限公司 一种稳定快速生产ε-聚赖氨酸的方法
CN110656065B (zh) * 2019-10-25 2021-09-24 江南大学 一株生产ε-聚赖氨酸的链霉菌及其应用
CN110804572A (zh) * 2019-12-04 2020-02-18 江南大学 一株链霉菌及其制备ε-聚赖氨酸的方法
CN111534559A (zh) * 2020-05-12 2020-08-14 樟树市狮王生物科技有限公司 一种聚赖氨酸制备方法及其制备装置
CN112852668B (zh) * 2021-01-21 2022-09-20 齐鲁工业大学 一株耐酸的小白链霉菌及其在ε-聚赖氨酸发酵中的应用

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101285046A (zh) * 2007-04-09 2008-10-15 天津科技大学 一种诱变菌株白色链霉菌TUST2及利用该诱变菌株生产ε-聚赖氨酸及其盐的方法
CN101525640A (zh) * 2009-04-22 2009-09-09 东北农业大学 一种ε-聚赖氨酸的制备方法
CN102174448A (zh) * 2011-03-02 2011-09-07 南京工业大学 一种小白链霉菌及其在制备聚赖氨酸和聚二氨基丁酸中的应用
CN102229905A (zh) * 2011-06-08 2011-11-02 广东省微生物研究所 不吸水链霉菌Str-8及利用其制备ε-聚赖氨酸及其盐的方法
CN102276701A (zh) * 2011-07-29 2011-12-14 天津市津华盛生物科技有限公司 一种乳酸链球菌素的泡沫分离方法
CN104292313A (zh) * 2014-10-13 2015-01-21 花尔并 一种乳酸链球菌素分离提取的方法
CN105368887A (zh) * 2015-11-05 2016-03-02 天津科技大学 一种ε-聚-L-赖氨酸的发酵生产工艺
CN106349476A (zh) * 2016-08-08 2017-01-25 郑州拜纳佛生物工程股份有限公司 一种ε‑聚赖氨酸的生产方法

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101285046A (zh) * 2007-04-09 2008-10-15 天津科技大学 一种诱变菌株白色链霉菌TUST2及利用该诱变菌株生产ε-聚赖氨酸及其盐的方法
CN101525640A (zh) * 2009-04-22 2009-09-09 东北农业大学 一种ε-聚赖氨酸的制备方法
CN102174448A (zh) * 2011-03-02 2011-09-07 南京工业大学 一种小白链霉菌及其在制备聚赖氨酸和聚二氨基丁酸中的应用
CN102229905A (zh) * 2011-06-08 2011-11-02 广东省微生物研究所 不吸水链霉菌Str-8及利用其制备ε-聚赖氨酸及其盐的方法
CN102276701A (zh) * 2011-07-29 2011-12-14 天津市津华盛生物科技有限公司 一种乳酸链球菌素的泡沫分离方法
CN104292313A (zh) * 2014-10-13 2015-01-21 花尔并 一种乳酸链球菌素分离提取的方法
CN105368887A (zh) * 2015-11-05 2016-03-02 天津科技大学 一种ε-聚-L-赖氨酸的发酵生产工艺
CN106349476A (zh) * 2016-08-08 2017-01-25 郑州拜纳佛生物工程股份有限公司 一种ε‑聚赖氨酸的生产方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ε-聚赖氨酸生产菌株的选育与发酵工艺的研究;姜俊云;《中国优秀博硕士学位论文全文数据库 (硕士) 工程科技Ⅰ辑》;20041215;全文 *
ε-聚赖氨酸高产菌株的复合诱变与筛选;王林 等;《山东省药学会2010年生化与生物技术药物学术研讨会论文集》;20100831;第255-260页 *
ε-聚赖氨酸高产菌株选育与发酵过程优化;陈旭升;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ辑》;20090515;全文 *
发酵泡沫分离耦合工艺的初步研究;崔小颖;《中国优秀硕士学位论文全文数据库工程科技I辑》;20150715;全文 *
发酵泡沫分离耦合生产乳链菌肽的工艺研究;郭凯敏;《中国优秀硕士学位论文全文数据库基础科学辑》;20140715;全文 *
白色链霉菌发酵生产￡一聚赖氨酸工艺的优化;孙湘婷 等;《湖北农业科学》;20130831;第3635-3638页 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110373359A (zh) * 2019-08-05 2019-10-25 河南科技大学 一种白色链霉菌X-18及利用该菌生产ε-聚赖氨酸的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN106434421A (zh) 2017-02-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106434421B (zh) 一株ε-聚赖氨酸高产菌株及生产ε-聚赖氨酸方法
CN103667086B (zh) 一株高生物量富硒酵母，含有其的添加剂和预混料
CN102174449B (zh) 一种高产γ-氨基丁酸的生产方法及应用
CN101285046B (zh) 一种诱变菌株白色链霉菌TUST2及利用该诱变菌株生产ε-聚赖氨酸及其盐的方法
CN101702984B (zh) 一种利用真菌诱导子提高桑黄黄酮产量的桑黄菌丝体液体发酵方法
CN102337299B (zh) 一种芽孢杆菌絮凝剂的制备方法
CN102796673A (zh) 一株阿魏酸酯酶生产菌株及应用该菌株生产阿魏酸酯酶的方法
CN103911322B (zh) 环状芽孢杆菌及其在共生发酵技术制低聚半乳糖中的应用
CN103451137B (zh) 一种新的盐单胞菌及其生产四氢嘧啶的方法
CN103484421A (zh) 一种液体发酵中试生产粉红粘帚霉厚垣孢子的方法
CN102174448B (zh) 一种小白链霉菌及其在制备聚赖氨酸和聚二氨基丁酸中的应用
CN106635934A (zh) 一种嗜热型乳酸杆菌及人工添加该嗜热型乳酸杆菌的玉米浸泡方法
CN104232552A (zh) 一种清洁生产谷氨酸钠的环保工艺
CN115584334B (zh) 屎肠球菌及其在大豆乳清废水酸化、异味解决中的应用
CN102816751B (zh) 一种高活性壳聚糖酶及其制备方法
CN107201383A (zh) 一种可提高d-乳酸生产强度的d-乳酸生产方法
CN100390295C (zh) 一种微生物多糖及其生产方法和应用
CN105462857A (zh) 一种安络小皮伞菌株及其应用
CN109136313A (zh) 利用密西根克雷伯氏菌合成2’-脱氧腺苷的方法
CN109161507A (zh) 一种高产l-鸟氨酸的谷氨酸棒杆菌及其应用
CN105733962B (zh) 一种黄绿木霉hlmm-04菌株及制备烟用香料的方法
CN108239616A (zh) 一株屎肠球菌菌株及其在酸浆豆腐加工中的应用
CN111548967B (zh) 一株恶臭假单胞菌x14及其应用方法
CN107641602A (zh) 一株产朊假丝酵母及其在发酵产蛋白中的应用
CN104711208B (zh) 一种具有高的淀粉分解能力的乳酸菌

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant