CN116172938B - 一种具有舒缓功效的川贝枇杷组合物的制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种具有舒缓功效的川贝枇杷组合物的制备工艺，涉及中医药技术领域。本发明提供的制备工艺，包含以下步骤：1)川贝和枇杷混合，所述川贝和枇杷的质量比为1‑10：1‑10；2)按照料液比1：15‑25加入提取溶剂，提取得组方提取物。通过筛选川贝、枇杷的配比，通过本申请的提取工艺，组方提取物实现了优异的抗氧化、舒缓作用，提供了一种具有显著抗氧化及舒缓功效的川贝枇杷组合物化妆品原料，并提供了一种含有本发明组方提取物的具有保湿舒缓功效的冰镇修护霜的配方。
Description
技术领域
本发明涉及中医药技术领域，具体涉及一种具有舒缓功效的川贝枇杷组合物的制备工艺。
背景技术
川贝是一种百合科、贝母属的植物，为川贝母、暗紫贝母、甘肃贝母、梭砂贝母的乾燥鳞茎。产于中国四川、西藏、青海、甘肃等地。川贝为常用中药，川贝的功效有很多，对人体有很多好处，比如川贝有镇咳、祛痰、降压、抗菌消炎等作用。川贝中含有大量的西贝碱，而且也有抵抗病菌的成分，所以有很显著的消炎杀菌的效果，而且生物碱可以帮助人体降血压、降低血液粘稠度，可以抑制大肠杆菌葡萄球菌等致病菌的生长。如果出现胸闷心烦、风热感冒以及痰热咳喘等病症，可以选择使用川贝进行治疗。
枇杷味道甜美，营养颇丰，富含各种果糖、葡萄糖、钾、磷、铁、钙以及维生素A、B、C等，被称为“果木中独备四时之气者”，具有防止动脉硬化及高血压的食疗作用，同时可以美化肌肤，含有大量的维生素，可以起到滋润肌肤的作用。枇杷，可以润肺止咳、去痰，用于治疗各种咳嗽、咳嗽吐黄痰；含有胡萝卜素和维生素B族，可以促进儿童的身体发育，保护视力；含有抑制流感病毒的成分，可以预防四季感冒；含有粗纤维和矿物质、维生素，可以健脾利水，多吃可以促进排便，有减肥的效果；枇杷还含有有机酸，可以刺激消化腺的分泌，有生津止渴的功效，能够增进食欲，帮助消化吸收；长期食用，可以为身体补充更多的营养，有利于改善体质增强免疫力。
专利CN 106511734 A公开了一种止咳川贝枇杷冲剂，它是颗粒状的冲剂制剂，包括以下重量份的原料制备而成：川贝30份、枇杷叶10-20份、桔梗10-20份、鱼腥草1-3份。克服现有技术中川贝枇杷露所存在的储存不便、制剂形式单一的不足，提供一种川贝枇杷露冲剂及其制备方法。
专利CN 107375652 A公开了一种川贝枇杷膏及其制备方法。该种川贝枇杷膏，由以下按照重量份数的原料组成：川贝40-53份，枇杷叶56-70份，枸杞3-8份，杏仁4-10份，桔梗1-5份，山参1-3和蜂蜜8-15份。该种川贝枇杷膏采用纯中药制剂，安全无毒副作用，原料廉价易得，生产成本低，保质期长，药效快，制备方法简单，长期服用具备清热降火、润喉去燥，理气平喘、止咳化痰的功效。
上述发明专利均涉及到川贝枇杷提取物在医药领域的作用，但是并未涉及该提取物在抗氧化、舒缓方面的功效以及在化妆品领域可能的应用。本发明以抗氧化和舒缓功效为指标，首次将川贝枇杷复配，在最优植物配比下，组方提取物抗氧化、舒缓功效达到最优，提供了一种具有显著抗氧化及舒缓功效的川贝枇杷组合物化妆品原料，为其在化妆品中的应用提供依据。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有舒缓功效的川贝枇杷组合物的制备工艺，通过采用不同工艺制备组方提取物筛选最优制备工艺，并分别通过DPPH自由基抑制实验和COX-2体外抑制实验，检测组方提取物的抗氧化功效和舒缓功效。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一方面，本发明提供了一种具有舒缓功效的川贝枇杷组合物的制备工艺，包含以下步骤：
1)川贝和枇杷混合，所述川贝和枇杷的质量比为1-10：1-10；
2)按照料液比1：15-25加入提取溶剂，提取得组方提取物。
优选地，步骤1)所述川贝和枇杷的质量比包括数值范围中的任意实数和端点值，举例如1：10、1：9、1：8、1：7、1：6、1：5、1：4、1：3、1：2、1：1、2：1、3：1、4：1、5：1、6：1、7：1、8：1、9：1、10：1、2：3、2：5、2：7、2：9、3：4、3：5、3：7、3：8、4：5、4：9、5：7、5：9、6：7、6：4、6：10、7：10、8：10、9：10、10：10等。
进一步优选地，步骤1)所述川贝和枇杷的质量比为1-2：1-10，所述质量比包括数值范围中的任意实数和端点值，举例如1：10、1：9、1：8、1：7、1：6、1：5、1：4、1：3、1：2、1：1、2：1、2：2、2：3、2：4、2：5、2：6、2：7、2：8、2：9、2：10等。
最优选地，所述川贝和枇杷的质量比为1：5。
优选地，步骤2)中所述的提取溶剂选自醇类溶剂、水中的至少一种；进一步优选地，步骤2)中所述的提取溶剂选自乙醇、水中的至少一种；更优选地，步骤2)中所述的提取溶剂为乙醇；最优选地，步骤2)中所述的乙醇为75％乙醇。
优选地，步骤2)所述得提取的具体方式为：80-120℃下热回流提取1-3h；进一步优选地，步骤2)所述得提取的具体方式为：85℃下热回流提取2h。
优选地，步骤2)中的料液比为组方药材：提取溶剂＝1：20。
另一方面，本发明提供了上述制备工艺获得的组方提取物在制备舒缓、抗氧化化妆品中的应用。
在一方面，本发明提供了一种化妆品，所述化妆品的有效成分包括上述制备工艺获得的组方提取物。
优选地，所述化妆品包括但不限于：面膜、精华液、面霜、身体乳、沐浴露、乳液、精华水、润肤霜。
再一方面，本发明提供了一种具有保湿舒缓功效的冰镇修护霜，所述冰镇修护霜的有效成分包括上述制备工艺获得的组方提取物，所述冰镇修护霜的配方为
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
1.通过筛选川贝枇杷两种组分的配比，优化提取工艺，制备所得的组方提取物实现了优异的抗氧化、舒缓功效，制备的组方提取物的DPPH抑制率最高可达86.98±2.50(0.1mg/mL)，COX抑制率最高可达76.62％；
2.提供了一种具有显著抗氧化及舒缓功效的川贝枇杷组合物化妆品原料；
3.提供了一种含有本发明组方提取物的具有保湿舒缓功效的冰镇修护霜的配方。
附图说明
图1为组方提取物1-13对DPPH的抑制率；
图2为组方提取物1-13对COX-2的抑制率，
图3为含实施例9组方提取物的冰镇修护霜的经皮水分散失变化图。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，但下述实施例仅为本发明的优选实施例，并非全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本发明的保护范围。值得说明的是，本发明中使用的原料均为普通市售产品，对其来源不做具体限定。实施例中的所用的技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的含义。
实施例1：
按照川贝：枇杷＝1：1分别称取川贝和枇杷共10g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：去离子水＝1：20，加入去离子水200g，热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干。得到组方提取物1。
实施例2：
按照川贝：枇杷＝1：1分别称取川贝和枇杷共10g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：75％乙醇＝1：20，加入75％乙醇(乙醇：去离子水＝75％：25％)200g，热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干。得到组方提取物2。
实施例3：
按照川贝：枇杷＝1：2分别称取川贝和枇杷共10g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：去离子水＝1：20，加入去离子水200g，热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干。得到组方提取物3。
实施例4：
按照川贝：枇杷＝1：2分别称取川贝和枇杷共10g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：75％乙醇＝1：20，加入75％乙醇(乙醇：去离子水＝75％：25％)200g，热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干。得到组方提取物4。
实施例5：
按照川贝：枇杷＝2：1分别称取川贝和枇杷共10g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：去离子水＝1：20，加入去离子水200g，热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干。得到组方提取物5。
实施例6：
按照川贝：枇杷＝2：1分别称取川贝和枇杷共10g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：75％乙醇＝1：20，加入75％乙醇(乙醇：去离子水＝75％：25％)200g，热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干。得到组方提取物6。
实施例7：
按照川贝：枇杷＝10：1分别称取川贝和枇杷共10g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：75％乙醇＝1：20，加入75％乙醇(乙醇：去离子水＝75％：25％)200g，热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干。得到组方提取物7。
实施例8：
按照川贝：枇杷＝5：1分别称取川贝和枇杷共10g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：75％乙醇＝1：20，加入75％乙醇(乙醇：去离子水＝75％：25％)200g，热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干。得到组方提取物8。
实施例9：
按照川贝：枇杷＝1：5分别称取川贝和枇杷共10g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：75％乙醇＝1：20，加入75％乙醇(乙醇：去离子水＝75％：25％)200g，热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干。得到组方提取物9。
实施例10：
按照川贝：枇杷＝1：10分别称取川贝和枇杷共10g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：75％乙醇＝1：20，加入75％乙醇(乙醇：去离子水＝75％：25％)200g，热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干。得到组方提取物10。
对比例1：
称取川贝10g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：75％乙醇＝1：20，加入75％乙醇(乙醇：去离子水＝75％：25％)200g，热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干。得到组方提取物11。
对比例2：
称取枇杷10g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：75％乙醇＝1：20，加入75％乙醇(乙醇：去离子水＝75％：25％)200g，热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干。得到组方提取物12。
对比例3：
按照川贝：桔梗：枇杷：薄荷脑＝4.5：4.5：30：0.034分别称取川贝、桔梗、枇杷和薄荷脑共20g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：75％乙醇＝1：20，加入75％乙醇(乙醇：去离子水＝75％：25％)400g，热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干。得到组方提取物13。
DPPH自由基抑制实验
1)DPPH乙醇溶液的配置：
称取20mg DPPH，加入无水乙醇溶解并定容于250mL容量瓶中，DPPH浓度配制为2×10-4mol/L；0-4℃下避光保存，现配现用，4h内有效。(阳性对照选用维生素C)
2)待测液的配置：
取提取物1-13用无水乙醇配制得0.5mg/mL、0.1mg/mL浓度的待测溶液。
3)实验步骤：
按表1加入各试剂。
1)取1mL的待测液与1mL的2×10-4mol/L的DPPH溶液混匀(A管)；
2)取1mL的溶剂与1mL的2×10-4mol/L的DPPH溶液混匀(B管)；
3)取1mL的溶剂与1mL的待测液混匀(C管)；
4)避光反应30min后，在517nm下测A、B、C管吸光度值。
表1试剂配比表
| 编号 | DPPH溶液 | 溶剂 | 待测液 | 总体积 |
| A | 1mL | —— | 1mL | 2mL |
| B | 1mL | 1mL | —— | 2mL |
| C | —— | 1mL | 1mL | 2mL |
DPPH自由基抑制率计算公式：DPPH抑制率(％)＝(B+C-A)/B。
表2组方提取物1-13对DPPH的抑制率
结果显示，川贝枇杷方能够显著抑制DPPH自由基，且提取物9抑制作用最显著，具有显著抗氧化功效。
COX-2体外抑制实验
用COX-2试剂盒测试不同样品对COX-2的抑制率，具体操作根据厂家提供的使用说明：
(1)配制样品培养基：将样品用DMSO稀释至待测浓度(100μg/mL)。
(2)试剂配制：
a.融解除rhCOX-2以外的其它所有试剂至室温，略离心使溶液沉淀至管底，再混匀备用。COX-2Probe、COX-2Cofactor(50X)和COX-2Substrate(50X)配制在DMSO中，可37℃水浴0.5-2min促进融解。使用完毕后宜立即-20℃避光保存。
b.COX-2Cofactor工作液的配制：按照每个样品需要5微升COX-2Cofactor工作液的比例配制适量的COX-2Cofactor工作液。取适量的COX-2Cofactor(50X)，按照1:49的比例用COX-2Assay Buffer稀释。例如4微升COX-2Cofactor(50X)加入196微升COX-2AssayBuffer配制成200微升COX-2Cofactor工作液。配制好的COX-2Cofactor工作液可4℃存放，仅限当日使用。
c.COX-2工作液的配制：按照每个样品需5微升COX-2工作液的比例配制适量的COX-2工作液。取适量的rhCOX-2(25X)(rh-recombinant human，重组)，按照1:24的比例用COX-2Assay Buffer(缓冲液)稀释。例如8微升rhCOX-2(25X)(rh-recombinant human，重组)加入192微升COX-2Assay Buffer配制成200微升COX-2工作液。配制好的COX-2工作液可在冰浴上暂时保存，1小时内酶活性基本稳定。注：所有涉及COX-2的操作应在冰上进行。
d.COX-2Substrate工作液的配制：按照每个样品需5微升COX-2Substrate(底物)工作液的比例配制适量的COX-2Substrate(底物)工作液。取适量的COX-2Substrate(50X)，加入等体积的Substrate Buffer，充分涡旋混匀，该混合物再按照1:24的比例用Milli-Q级纯水(超纯水)或重蒸水稀释，充分涡旋混匀。例如20微升COX-2Substrate(50X)加入20微升Substrate Buffer，涡旋混匀后，再加入960微升Milli-Q级纯水或重蒸水，再充分涡旋混匀，最终获得1毫升COX-2Substrate工作液。配制好的COX-2Substrate工作液可在冰浴上暂时保存，1小时内较为稳定。注：COX-2Substrate工作液也可在样品检测时37℃孵育10分钟的过程中配制。
e.阳性抑制剂Celecoxib(塞来昔布)溶液的配制：本试剂盒提供的阳性对照抑制剂Celecoxib浓度为100μM，配制在DMSO中，可以根据需要使用与待测抑制剂一样的溶剂稀释成所需浓度或浓度梯度。通常Celecoxib(塞来昔布)的IC50约为10nM-100nM。
(3)样品检测：
a.参考表3，使用96孔黑板设置对照孔和样品孔，并按照下表依次加入样品和各溶液。加入待测样品后，混匀，37℃孵育10分钟。
表3试剂配比表
注：*样品溶剂是指配制和稀释待测抑制剂所用的溶剂。
b.各孔加入COX-2Probe(探针)5微升。
c.各孔快速加入COX-2Substrate工作液5微升，混匀。注：加入COX-2Substrate工作液后反应即会开始，如果孔数较多，可以在低温操作或使用排枪操作以减小各孔间加入COX-2Substrate工作液的时间差而导致的误差，混匀也可以在培养板振荡器上进行。
d.37℃避光孵育5分钟后进行荧光测定。激发波长为560nm，发射波长为590nm。当荧光读数偏低时，也可适当延长孵育时间至10-20分钟。
(4)计算：
a.计算每个样品孔和空白对照孔的平均荧光值，可分别记录为RFU(相对荧光单位)空白对照、RFU100％酶活性对照、RFU阳性抑制剂对照和RFU样品。RFU，RelativeFluorescence Unit(相对荧光单位)。
b.计算每个样品的抑制百分率。计算公式如下：
抑制率(％)＝(RFU100％酶活性对照-RFU样品)/(RFU100％酶活性对照-RFU空白对照)×100％
(5)COX-2抑制率检测结果
表4组方提取物1-13对COX-2的抑制率
结果显示，川贝枇杷方提取物对COX-2具有抑制作用，且提取物9抑制作用最显著，具有显著抗炎功效。
以上结果表明，川贝枇杷方具有最显著抗氧化及抗炎功效。本专利首次提供了一种具有显著抗氧化及抗炎功效的川贝枇杷方，为其作为化妆品原料应用提供依据。
添加川贝枇杷组合物的冰镇修护霜的舒缓功效实验：
将实施例9添加至冰镇修护霜配方中，配方如表5所示，进行人体皮肤水分散失测试对比，测试12名志愿者0h、1h、2h、4h手臂内侧皮肤的经皮水分散失，实验结果如图3所示。
表5.实验配方
由图3中可看出，含本发明实施例9的冰镇修护霜能将显著降低皮肤水分散失，说明川贝枇杷对冰镇修护霜的影响较大，能够减少皮肤水分散失，具有舒缓肌肤的功效。
最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (8)
1.一种具有舒缓功效的川贝枇杷组合物的制备工艺，其特征在于，包含以下步骤：
1）川贝和枇杷混合，所述川贝和枇杷的质量比为1-10：1-10；
2）按照料液比1：15-25加入提取溶剂，提取得组方提取物；所述的提取溶剂为75%乙醇；所述的提取的具体方式为：80-120℃下热回流提取1-3h。
2.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于，步骤1）所述川贝和枇杷的质量比为1-2：1-10。
3.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于，步骤1）所述川贝和枇杷的质量比为1：5。
4.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于，步骤2）所述的提取的具体方式为：85℃下热回流提取2h；步骤2）中的料液比为组方药材：提取溶剂=1：20。
5.根据权利要求1-4任一项所述的制备工艺获得的组方提取物在制备舒缓、抗氧化化妆品中的应用。
6.一种化妆品，其特征在于，所述化妆品的有效成分包括根据权利要求1-4任一项所述的制备工艺获得的组方提取物。
7. 根据权利要求6所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品包括面膜、精华液、面霜、沐浴露、乳液。
8.一种具有保湿舒缓功效的冰镇修护霜，其特征在于，所述冰镇修护霜的有效成分包括根据权利要求1-4任一项所述的制备工艺获得的组方提取物，所述的冰镇修护霜的配方为
。
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