RU2668126C2 - Композиция, содержащая комбинацию экстракта бузины и штамма lactobacillus rhamnosus - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к иммуностимулирующей композиции. Иммуностимулирующая композиция, содержащая комбинацию экстракта бузины и по меньшей мере одного штамма Lactobacillus rhamnosus, характеризующаяся тем, что экстракт бузины имеет содержание антоцианинов в диапазоне от 0,5 до 25 масс. % в пересчете на сухое вещество в экстракте и содержание белков в диапазоне от 2 до 10 масс. % в пересчете на сухое вещество в экстракте, где композиция содержит от 20 до 200 мг сухого экстракта бузины в разовой дозе, а штамм Lactobacillus rhamnosus представляет собой GG (АТСС 53103), и композиция содержит количество Lactobacillus rhamnosus в диапазоне от 1⋅10КОЕ в разовой дозе до 1⋅10КОЕ в разовой дозе. Вышеописанная композиция обладает выраженными иммуностимулирующими свойствами. 7 з.п. ф-лы, 2 табл., 4 пр.

Description

Настоящее изобретение относится к композиции, содержащей комбинацию экстракта бузины и по меньшей мере одного штамма Lactobacillus rhamnosus, предназначенной для стимуляции иммунитета и/или стимуляции противоинфекционного и/или противовоспалительного ответа.

Бузина черная, или Sambucus nigra L, относится к семейству Adoxaceae. Род Sambucus включает 25 видов, распространенных по всему миру в регионах с умеренным климатом. Бузина черная, S. nigra ssp. nigra, широко культивируется в Европе, в частности - в Дании, Италии и Австрии, в северных регионах Африки и западной части Азии. Бузина канадская, S. nigra ssp. canadensis, является аборигенным растением для северо-востока Северной Америки и культивируется в Орегоне, Пенсильвании и Канзасе, хотя ее селекция производится в Канаде.

Различные органы бузины - кору, корни, ствол, цветки, листья и плоды - традиционно используют в столь различных областях, как медицина, пищевая промышленность и производство инструментов и игрушек. Наиболее важным промышленным производством в наши дни является производство экстрактов ягод бузины, предназначенных для нутрицевтических рынков и производства красителей.

В некоторых публикациях описан эффект экстракта ягод бузины на продукцию цитокинов (Barak et al., European Cytokine network, vol. 12 (2), 290-296, 2001). В частности, уже продемонстрирован эффект экстракта бузины, состоящий в облегчении симптомов, связанных с инфекцией гриппа, вызванной вирусами гриппа (А и/или B и/или С), а также его противовирусный эффект на вирусы простого герпеса 1 типа, респираторно-синцитиальный вирус и вирусы гриппа (Zakay-Rones et al., The Journal of International Medical Research, vol. 32, 132-140, 2004).

Многочисленные научные исследования продемонстрировали положительные эффекты на здоровье некоторых микроорганизмов, содержащихся в ферментированных пищевых продуктах, в частности - в молочных продуктах. Эти микроорганизмы обычно называют «пробиотиками». Согласно определению, принятому в настоящее время, пробиотиками являются живые микроорганизмы, которые при потреблении их в достаточных количествах оказывают положительный эффект на здоровье организма-носителя (отчет ВОЗ об оценке лечебных и пищевых свойств пробиотиков, содержащихся в пищевых продуктах, включая порошковое молоко, содержащее живые лактобактерии, Кордоба, Аргентина, 1-4 октября 2001 г.).

В публикациях WO 96/20607, ЕР 0794707, ЕР 283714 и FR 292912657 показано, что потребление пищевых продуктов, содержащих пробиотические бактерии, может оказать благоприятные эффекты на здоровье, в частности - за счет восстановления баланса кишечной флоры, повышения устойчивости к инфекциям и модулирования иммунного ответа.

Пробиотическими микроорганизмами, используемыми в пищевом рационе человека, обычно являются лактобактерии, в основном относящиеся к родам Lactobacillus и Bifidobacterium, и в частности - к виду Lactobacillus paracasei.

Lactobacillus - это род грамположительных бактерий, неподвижных, имеющих различные формы и размеры, факультативно анаэробных. Они получили такое название, поскольку большинство из видов этих бактерий преобразуют лактозу и другие простые сахара в молочную кислоту. У людей лактобациллы являются микроорганизмами-хозяевами, которые широко распространены в качестве комменсалов и обычно полезны или даже необходимы. Они являются важным элементом кишечной флоры.

Lactobacillus rhamnosus - это бактерия, которую вначале считали подвидом Lactobacillus casei, но генетические исследования показали, что она является отдельным видом. Lactobacillus rhamnosus обычно обнаруживают в желудке и пищеварительном тракте. Эта бактерия обладает свойствами, которые благоприятны для кишечного тракта, а также для иммунной системы, в частности - для борьбы против патогенных микроорганизмов в кишечном и мочевыводящем трактах.

Пробиотики могут оказывать прямые эффекты на химус и микрофлору, называемые внутрипросветными эффектами, или эффекты на уровне энтероцитов или иммунокомпетентных клеток лимфоидной ткани, ассоциированной с желудочно-кишечным трактом (GALT; от англ.: gut-associated lymphoid tissue), называемые скин-эффектами. Они также могут оказывать непрямые эффекты, связанные с модификациями экосистемы или локальной иммунной системы.

Некоторые пробиотики обладают способностью к адгезии к пищеварительному эпителию. Это свойство может обеспечивать экологическое преимущество, увеличивая вероятность тесных взаимосвязей с энтероцитарным эпителием и локальной иммунной системой. Исследование показало, что у некоторых субъектов адгезивный штамм Lactobacillus rhamnosus может в течение длительного времени колонизировать слизистую оболочку тощей и/или прямой кишок (Alanderet al., Letters in Applied Microbiology, 24 (5), vol. 361-364, 1997).

Все более и более многочисленные работы демонстрируют биологические эффекты многочисленных штаммов; важно подчеркнуть, что эти эффекты, по-видимому, являются штамм-зависимыми.

В заявке на патент США US 2006/0233895 описана композиция, содержащая экстракт бузины, который потенциально может быть объединен с пробиотиком, таким как Lactobacillus casei. Тем не менее, эта композиция обязательно содержит смесь экстрактов кошачьего когтя (Uncaria tomentosa), розового лапачо (Pau d'Arco), шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis) и артемизин. Кроме того, эта композиция не предназначена для стимуляции иммунитета, а используется для лечения болезни Лайма, которая вызывается бактериальной инфекцией и поэтому очень сильно отличается от инфекций, вызываемых вирусами типа вирусов гриппа.

В заявке на патент WO 2010/043696 описана композиция, содержащая комбинацию экстракта бузины черной и штамма Lactobacillus paracasei, Lactobacillus casei, Lactobacillus bulgaricus или Streptococcus thermophilus, предназначенная для стимуляции иммунитета. В этой заявке продемонстрирована синергия между экстрактом бузины и Lactobacillus paracasei в отношении продукции интерлейкина-10 (IL-10) и интерферона-гамма. Однако предел воспалительной реакции неизвестен. Данные по другим цитокинам и хемокинам CXCL10 типа могут исключить риск слишком значительного усиления этой воспалительной реакции.

Поэтому настоящее изобретение относится к комбинации, содержащей экстракт бузины и по меньшей мере один штамм Lactobacillus rhamnosus.

Этак комбинация предпочтительно является синергетической комбинацией.

Настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей такую комбинацию, и предпочтительно - к композиции, содержащей экстракт бузины и по меньшей мере один штамм Lactobacillus rhamnosus.

Настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей экстракт бузины и по меньшей мере один штамм Lactobacillus rhamnosus, и кроме того - витамины и/или минеральные соли.

В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения композиция по настоящему изобретению может быть получена способом, включающим следующие стадии:

- приготовление комбинации;

- добавление комбинации в композицию по настоящему изобретению.

В этом случае комбинацию приготавливают перед ее добавлением к композиции. Однако также можно приготовить композицию по настоящему изобретению посредством добавления каждого из компонентов комбинации в композицию по отдельности, то есть без предварительного приготовления комбинации.

Композиция по настоящему изобретению предпочтительно предназначена для введения оральным путем.

Композиция по настоящему изобретению предпочтительно является пищевым продуктом, пищевой добавкой, лекарственным средством или безрецептурным (ОТС; от англ.: Over The Counter) продуктом.

Экстракт бузины по настоящему изобретению предпочтительно получают из ягод и/или цветков бузины, и предпочтительно - из ягод бузины. Экстракт бузины по настоящему изобретению предпочтительно является водорастворимым экстрактом.

Экстракт бузины, используемый в контексте настоящего изобретения, может быть охарактеризован, с одной стороны, содержанием в нем антоцианинов, а с другой стороны - содержанием крупных молекул, таких как белки (в частности, лектинов). Антоцианины являются природными пигментами листьев, лепестков и плодов, находящимися в вакуолях клеток, растворимыми в воде, цвет которых в видимой области спектра варьируется от оранжево-красного до пурпурно-синего.

Экстракт бузины предпочтительно содержит антоцианины, предпочтительно - пеларгонидины и цианидины, в количестве, лежащем в диапазоне от примерно 0,5 масс. % до примерно 25 масс. %, более предпочтительно - от примерно 3 масс. % до примерно 25 масс. %, и еще более предпочтительно - от примерно 8 масс. % до примерно 16 масс. %, в пересчете на сухое вещество экстракта. Содержание антоцианинов предпочтительно равно примерно 12 масс. %, в пересчете на сухое вещество экстракта. Эти содержания выражают через цианидин-3-глюкозид способом высокоэффективной жидкостной хроматографии, описанным Wu et al. (J. Agric. Food Chem. 52 (26), 7846-7856, 2004).

Экстракт бузины предпочтительно содержит белки в количестве, лежащем в диапазоне от 2 масс. % до 10 масс. %, в пересчете на сухое вещество (N×6,25 согласно способу Кьельдаля:

, Coord. В. Godon, Collection Sciences et techniques agro-alimentaires, Technique et Documentation Lavoisier, Paris, 1985).

В контексте настоящего изобретения экстракт бузины является коммерчески доступным или может быть получен способом, включающим следующие стадии:

Свежие или замороженные ягоды бузины могут быть подвергнуты прессованию для получения сока после фильтрации. Сок может быть подвергнут стадии ферментативного гидролиза (пектиназой или смесью пектинметилэстеразы и полигалактуроназы) для осветления его перед фильтрацией (Girard and Fukumoto, Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 40 (2), 91-157, 2000). Также можно провести водную экстракцию высушенных и измельченных ягод с последующим разделением твердого вещества и жидкости посредством фильтрации. Полученные таким образом экстракты могут быть использованы без дополнительной обработки, сконцентрированы или высушены до порошкообразной формы.

Содержание антоцианинов на этой стадии лежит в диапазоне от 0,5 масс. % до 3 масс. % в пересчете на общую массу сухого вещества в экстракте и предпочтительно равно примерно 1 масс. % (анализ посредством ВЭЖХ, в пересчете на цианидин-3-глюкозид).

Экстракт бузины может быть обогащен, в частности - антоцианинами и/или молекулами с высокой молекулярной массой (белками, полифенолами, полисахаридами). Для этого можно использовать несколько способов, хорошо известных специалистам в данной области техники:

- ультрафильтрацию: стадия диафильтрации предварительно разбавленного сока с последующим сверхконцентрированием на органической или минеральной мембране с порогом отсечки, лежащим в диапазоне от 1 «Да до 20 кДа, и предпочтительно - от 3 кДа до 10 кДа (Girard and Fukumoto, Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 40 (2), 91-157, 2000);

- пропускание через колонку с абсорбентной полимерной смолой Amberlite XAD;

- экстракцию водно-спиртовыми (смесь в любых пропорциях воды и С1-С4 спирта) или водными растворами с кислым pH (Bronnum-Hansen and Flink, Int. J. Food Sci. Tech. 21 (2), 605-614, 1986; Lee and Wrolstad, J. Food Sci. 69 (7), 564-573, 2004). Такая экстракция предпочтительно может быть осуществлена непосредственно из высушенных и измельченных ягод или из пюре, полученного из свежих ягод.

Полученный таким образом экстракт можно сконцентрировать термически (при температуре, не превышающей 50°C, и под вакуумом) для повышения содержания сахара в градусах Брикса и стабилизации в отношении микробиологических загрязнений. Он также может быть высушен как таковой или на основе (например, на мальтодекстрине, лактозе и т.д.).

Полученный обогащенный сок предпочтительно имеет содержание сахара в диапазоне от 40° Брикса до 60° Брикса, содержание антоцианинов в диапазоне от 3 масс. % до 25 масс. % и содержание белков в диапазоне от 5 масс. % до 10 масс. % (способ Кьельдаля, N×6,25), в пересчете на массу сухого вещества.

Предпочтительно, количество сухого экстракта бузины в разовой дозе, содержащееся в композиции по настоящему изобретению, лежит в диапазоне от примерно 10 мг до примерно 1 г. Более предпочтительно, композиция содержит от примерно 20 мг до примерно 200 мг сухого экстракта бузины в разовой дозе, и еще более предпочтительно - от примерно 20 мг до примерно 60 мг сухого экстракта бузины в разовой дозе.

В контексте настоящего изобретения термин «разовая доза» обозначает количество композиции по настоящему изобретению, вводимое за один раз. Предпочтительная разовая доза по настоящему изобретению может соответствовать, например, объему йогурта в диапазоне от 100 мл до 125 мл, капсуле стандартного размера или таблетке массой 2 г. Соответственно, независимо от массы композиции, количество сухого экстракта бузины и/или штамма Lactobacillus rhamnosus в разовой дозе остается постоянным.

Штаммом Lactobacillus rhamnosus, особенно подходящим в контексте настоящего изобретения, является штамм Lactobacillus rhamnosus GG (АТСС 53103). Этот штамм Lactobacillus rhamnosus является штаммом, выделенным в 1983 г. из кишечного тракта здоровых людей. Этот штамм является предметом патента US 4839281. Показано, что штамм Lactobacillus rhamnosus GG является полезным для профилактики различных типов диареи у взрослых и детей (Guandalini et al., J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 30 (1), 54-60, 2000; Osterlund et al., Br. J. Cancer 97, 1028-1034, 2007). Также сообщали, что штамм Lactobacillus rhamnosus GG способствует снижению риска инфекций дыхательных путей у детей (Hojsak et al., Clin. Nutr. 29 (3), 312-316, 2010).

Lactobacillus rhamnosus также обеспечивает существенную поддержку иммунной системе, в частности - при борьбе с патогенными микроорганизмами кишечного и мочевыводящего трактов. Lactobacillus rhamnosus прикрепляется к слизи кишечника, где он стимулирует рост полезных бактерий, способствующих пищеварению. Lactobacillus rhamnosus - это бактерия, которая способствует удалению и предотвращению роста вредных бактерий в кишечнике.

Композиция предпочтительно содержит от 1⋅10⁷ до 1⋅10¹¹ КОЕ (колониеобразующих единиц) Lactobacillus rhamnosus в разовой дозе, более предпочтительно - от 1⋅10⁸ до 1⋅10⁹ КОЕ в разовой дозе, и еще более предпочтительно - 5⋅10⁸ КОЕ в разовой дозе.

В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения композиция содержит, в пересчете на разовую дозу,

- от 10 мг до 1 г сухого экстракта бузины, предпочтительно - от 20 мг до 200 мг, более предпочтительно - от 20 мг до 100 мг, и еще более предпочтительно - от 40 мг до 80 мг, и столь же предпочтительно - от 20 мг до 60 мг;

- от 1⋅10⁷ до 1⋅10¹¹ КОЕ Lactobacillus rhamnosus, предпочтительно - от 1⋅10⁸ до 1⋅10⁹ КОЕ, в разовой дозе.

В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения композиция содержит, в пересчете на разовую дозу,

- от 2 мг до 200 мг антоцианинов бузины, предпочтительно - от 2 мг до 100 мг, и более предпочтительно - от 2 мг до 20 мг, и столь же предпочтительно - от 20 мг до 50 мг;

- от 2 мг до 100 мг белков бузины, предпочтительно - от 10 мг до 20 мг;

и

- от 1⋅10⁷ до 1⋅10¹¹ КОЕ Lactobacillus rhamnosus, предпочтительно - от 1⋅10⁸ до 1⋅10⁹ КОЕ в разовой дозе.

В предпочтительном случае при этом наблюдают синергический эффект.

Комбинация экстракта бузины и штамма Lactobacillus rhamnosus по настоящему изобретению показала хорошую способность вызывать и/или стимулировать неспецифический иммунный ответ, продемонстрировав тем самым, что она представляет интерес для пищевой и/или фармацевтической областей.

Композиция по настоящему изобретению предпочтительно может быть представлена в любых формах выпуска, обычно используемых в пищевой и/или фармацевтической областях для введения оральным или сублингвальным путем.

В случае пищевого продукта это могут быть, в частности, свежие молочные продукты, йогурты, кисломолочные продукты, молочные смеси первого уровня, порошки, пастилки, овощные соки, напитки и их смеси, предпочтительно - из группы, включающей свежие молочные продукты, фруктовые и/или растительные соки или фруктовые компоты.

В предпочтительном варианте фрукт выбран из группы, включающей яблоко, апельсин, красные фрукты, клубнику, персик, абрикос, чернослив, малину, черную смородину, красную смородину, лимон, грейпфрут, банан, ананас, киви, грушу, вишню, кокос, пассифлору, манго, инжир, ревень, дыню, экзотические фрукты, личи, виноград, чернику или их смеси.

Термин «пищевая добавка» в контексте настоящего изобретения означает пищевой продукт, назначение которого состоит в дополнении нормального пищевого рациона, и который представляет собой концентрированный источник питательных веществ или других веществ, оказывающих питательный или физиологический эффект, по отдельности или в комбинации.

Предпочтительно пищевая добавка содержит витамины и/или минеральные вещества и/или микроэлементы.

Среди этих витаминов могут быть, в частности, названы витамины A, С, D и E и витамины группы B, в частности - В1, В2, В3, В5, В6, В8, В9 и В12.

Витамин A (ретинол или каротиноиды), витамин E и витамин C являются тремя основными антиоксидантными витаминами. Витамин A содержится исключительно в пищевых продуктах животного происхождения. Однако некоторые растения содержат провитамины А, то есть вещества, которые в организме могут быть преобразованы в витамин A. Он исключительно важен для зрения и для роста бронхиальных трубок, кишечника или кожи. Витамин А также участвует в иммунных механизмах. Антиоксидантные вещества противодействуют эффектам свободных радикалов за счет сдерживания вызванных ими повреждений, восстановления повреждений, нанесенных клеткам, замедления феномена окисления. Если в организме содержится избыток свободных радикалов, они могут способствовать старению клеток. Эти антиоксидантные витамины обладают способностью регулировать продукцию свободных радикалов, образующихся в ходе метаболизма кислорода, избыточная продукция которых ответственна за очень многие расстройства, в частности - на уровне сердечно-сосудистой системы, иммунитета, рака, кожи, ускоренного старения, нейродегенеративных заболеваний и т.д. В частности, витамин С является хорошо известным антиоксидантом, растворимым в воде. Люди зависят от внешних источников витамина C для удовлетворения своих потребностей в витамине С. Соответственно, аскорбиновая кислота, аскорбат натрия или их смеси являются источниками витамина С. Витамин С необходим для образования кровеносных сосудов и мышц. Он способствует всасыванию железа, содержащегося в пищевых продуктах, и участвует в нескольких гормональных механизмах. Он также играет роль в удалении токсичных веществ. Дефицит витамина C может снизить сопротивление инфекциям. Витамин E также является хорошо известным антиоксидантом. Витамин Е может действовать в синергии с витамином С в отношении защиты жизненно важной функции клеток, связанной с удалением нормальных оксидантов. Альфа-токоферилацетат, триметилтокоферилацетат и/или сукцинат витамина Е являются источниками витамина Е. Витамин Е оказывает особенно важный защитный эффект в отношении клеток организма. Он играет важную роль в механизмах воспроизводства и участвует в образовании эритроцитов.

Витамин B является жирорастворимым витамином, хотя он прежде всего является гормоном, синтезируемым в организме человека из производного холестерола под действием ультрафиолетового излучения солнечного света. Он существует в двух формах - D2 (эргокальциферол) или D3 (холекальциферол). Эти две молекулы являются 9,10-секостероидами. Витамин D участвует во всасывании кальция и фосфора в кишечнике, а также в их реабсорбции почками, он является истинным гормоном. С другой стороны, он влияет более чем на 200 генов, что объясняет его важность, неожиданную до недавнего времени, при многих заболеваниях, к которым относятся артрит, кожные поражения, связанные с псориазом, диабет, некоторые виды рака и даже деменция.

Витамины группы B образуют группу водорастворимых витаминов, которые играют важную роль в метаболизме клеток, среди которых можно назвать:

- витамин B1 или тиамин, который является кофактором в комплексе пируватдекарбоксилазы;

- витамин B2 или рибофлавин, который является предшественником флавинадениндинуклеотида;

- витамин В3 (РР) или никотинамид, который является предшественником никотинамидадениндинуклеотида;

витамин В5 или пантотеновая кислота, который является предшественником и компонентом коэнзима A;

- витамин Вб или пиридоксин, который является коэнзимом реакций, связанных с метаболизмом аминокислот и белков:

- витамин В8 (Н) или биотин, который является коэнзимом метаболических реакций жирных кислот, углеводов и аминокислот;

- витамин В9 или фолиевая кислота и витамин В12 или цианкобаламин, которые являются кофакторами с S-аденозилметионином.

Витамины группы B часто функционируют совместно, способствуя здоровью организма. Они усиливают метаболизм, способствуют сохранению хорошего здоровья кожи и мышц, укрепляют иммунную систему, укрепляют нервную систему и задерживают когнитивные расстройства, вызванные болезнью Альцгеймера, стимулируют рост клеток и их деление, борются с симптомами, вызванными чрезмерными стрессом.

Минеральные вещества предпочтительно выбраны из железа, цинка, селена, хрома, марганца, молибдена и их смесей. Минеральные соли - это вещества, производные от горных пород, которые входят в состав живых организмов, и которые содержатся в животных и растительных пищевых продуктах. Они поступают в ионизированной форме, основными минеральными элементами являются кальций, железо, магний, фосфор, калий, натрий, сера и микроэлементы, такие как алюминий, мышьяк, бор, хлор, хром, кобальт, медь, фтор, йод, марганец, молибден, никель, свинец, кремний, селен, ванадий, цинк.

Железо входит в состав минеральных солей, жизненно важных для нормального функционирования организма. Оно играет фундаментальную роль в структуре гемоглобина, содержащегося в эритроцитах, в структуре миоглобина, содержащегося в мышцах, и в структуре многочисленных ферментов, необходимых для функционирования организма. Дефицит железа часто встречается в мире, он приводит к анемии, сопровождающейся снижением физических и интеллектуальных возможностей, и к снижению сопротивляемости инфекциям.

Цинк играет антиоксидантную роль как кофактор ферментов, принимающих непосредственное участие в защите против оксидантов. Оксид цинка, глюконат цинка, цитрат цинка, ацетат цинка, хлорид цинка, лактат цинка или сульфат цинка могут быть использованы по отдельности или в смеси в композициях по настоящему изобретению. Предпочтительным является глюконат цинка.

Селен также играет антиоксидантную роль как кофактор ферментов, в частности - глутатионпероксидазы, которая принимает непосредственное участие в защите против оксидантов.

Хром - это микроэлемент, который участвует в метаболизме углеводов, он стимулирует действие инсулина. Кроме того, он участвует в метаболизме липидов и в метаболизме холестерола, способствуя снижению его концентрации. Хром также играет роль в метаболизме нуклеиновых кислот.

Марганец - это микроэлемент, необходимый для эффективности витамина B1. Он также входит в состав некоторых металлопротеинов, например - супероксиддисмутазы.

Он действует как кофактор многих ферментов. Кроме того, он является металлом, необходимым для синтеза ферментов, участвующих в борьбе против оксидативного стресса, и предотвращает повреждение, вызванное свободными радикалами.

Молибден участвует на многих уровнях в качестве компонента некоторых ферментов, в частности - ксантиноксидазы.

Он играет роль в росте костей и формировании структуры зубов. Он оказывает положительное влияние на метаболизм железа. Кроме того, молибден участвует в детоксификации организма и в синтезе мочевой кислоты.

Согласно настоящему изобретению могут быть добавлены необязательные дополнительные активные ингредиенты, например - коэнзим Q10 и/или экстракт женьшеня. Коэнзим Q10 или убихинон является веществом, сходным с витамином, которое жизненно важно для функционирования организма человека. Коэнзим Q10 естественным образом присутствует во всех человеческих клетках и обеспечивает выработку энергии для организма в митохондриях. Примерно 95% потребности организма в энергии удовлетворяется за счет коэнзима Q10. Это вещество нельзя заменить никаким другим веществом. Если повысить потребление коэнзима Q10 за счет пищевых добавок, то способность организма выдерживать физические нагрузки повышается. Более эффективным становится метаболизм липидов, и обеспечиваются максимальное потребление кислорода и максимальная продолжительность физической нагрузки. Снижение концентрации коэнзима Q10 связано со старением и стрессом.

Женьшень - это лекарственное растение, которое имеет превосходную репутацию в Азии. Прежде всего, женьшень является стимулятором нервной, физической и интеллектуальной систем и повышает физическую выносливость. Он является стимулятором вазомоторных реакций, которые оказывают фундаментальное действие на организм, и обеспечивает большую устойчивость к различным стрессам.

Композицию по настоящему изобретению можно ввести оральным путем или любым другим путем введения фармацевтических препаратов.

Композиции по настоящему изобретению могут быть предназначены для введения млекопитающим, включая человека. Эти композиции получают таким образом, чтобы их можно было вводить оральным, сублингвальным, подкожным, внутримышечным, внутривенным, трансдермальным, местным или ректальным путями. В этом случае активные ингредиенты могут быть введены животным или людям в виде разовых лекарственных форм в смеси со стандартными фармацевтическими основами.

В случае пищевой добавки или лекарственного средства могут быть использованы следующие лекарственные формы: капсулы, таблетки для проглатывания, жевательные таблетки, шипучие таблетки, пастилки, пилюли, порошки, гранулы, растворы или суспензии для орального применения и формы для сублингвального и буккального введения, формы для подкожного, местного, внутримышечного, внутривенного, интраназального или интраокулярного и ректального введения. Предпочтительной лекарственной формой является капсула.

Если твердую композицию получают в форме таблетки, активные ингредиенты смешивают с фармацевтическим наполнителем, таким как желатин, крахмал, лактоза, стеарат магния, тальк, аравийская камедь, диоксид кремния или аналогичные. Можно нанести на таблетки покрытие из сахарозы или других подходящих материалов или, вместо этого, их можно обработать так, чтобы они имели продленную или отсроченную активность, и чтобы они непрерывно выделяли предварительно заданное количество активного ингредиента.

Препарат в капсулах получают посредством смешивания активного ингредиента с разбавителем (необязательная стадия) и розлива полученной смеси в мягкие или твердые капсулы.

Препарат в форме сиропа или эликсира может содержать активные ингредиенты совместно с подсластителем, вкусовой добавкой и подходящим красителем.

Порошки или гранулы, диспергируемые в воде, могут содержать активные ингредиенты, смешанные с суспензирующими средствами и с вкусовыми добавками или подсластителями.

Для ректального введения используют суппозитории, которые приготавливают с использованием связующих, которые плавятся при температуре, имеющейся в прямой кишке, например - с маслом какао или полиэтиленгликолями.

Для парентерального (внутривенного, внутримышечного и т.п.), интраназального или интраокулярного введения используют водные суспензии, изотонические солевые растворы или стерильные растворы для инъекций, которые содержат диспергирующие агенты и/или фармацевтически совместимые смачивающие агенты.

Активные ингредиенты также могут быть приготовлены в форме микрокапсул, потенциально - с одним или более дополнительными основами.

Предпочтительно, композиция по настоящему изобретению предназначена для введения оральным путем.

Другим объектом настоящего изобретения является композиция по настоящему изобретению для ее применения в качестве лекарственного средства.

Другим объектом настоящего изобретения является композиция по настоящему изобретению для ее применения для стимуляции иммунитета и/или укрепления иммунной защиты и/или для стимуляции противоинфекционного и/или противовоспалительного ответа и/или для поддержания жизнеспособности.

Очевидно, что применение, связанное с поддержанием жизнеспособности, основано на заявленных свойствах витаминов В2, В5, В6, В12, С и железа. Это заявления о полезности для здоровья, утвержденные Европейским агентством по безопасности пищевых продуктов (EFSA; от англ.: European Food Safety Authority) для этих питательных веществ. Они основаны на научных данных по измерению метаболической продукции энергии за счет углеводов, липидов или белков. Это влияет также на синтез гормонов, которые влияют на метаболизм, таких как стероидные гормоны.

Соответственно, это применение поддерживается следующими литературными источниками:

- EFSA Journal 2009; 7 (9): 1215.

Научное мнение об обоснованности заявлений о полезности для здоровья, связанных с железом и образованием эритроцитов и гемоглобина (ID 249, ID 1589), функцией иммунной системы (ID 252, ID 259), когнитивной функцией (ID 253) и делением клеток (ID 368), в соответствии со Статьей 13 (1) Регламента (ЕС) №1924/2006.

- Huskisson Е., Maggini S., Ruf М., Journal of International Medical Research 2007, 25: 277-289.

Роль витаминов и минеральных веществ в энергетическом метаболизме и самочувствии.

- Institute of Medicine (1998), National Academy press, Washington, DC )592 pages). Рекомендуемое употребление с пищей тиамина, рибофлавина, ниацина, витамина В6, фолата, витамина В12, пантотеновой кислоты, биотина и холина.

Отчет постоянно действующего комитета по научной оценке рекомендуемого употребления с пищей, его комиссии по фолату, другим витаминам группы B и холину, подкомитета по верхним допустимым уровням питательных веществ в пище и совета по питанию Института медицины США.

Другим объектом настоящего изобретения является композиция для применения при лечении и/или профилактике респираторных и/или кишечных инфекций.

Другим объектом настоящего изобретения является композиция для применения при лечении и/или профилактике симптомов, вызванных, в частности, инфекцией вирусом простого герпеса 1 типа, респираторно-синцитиальным вирусом и вирусами гриппа (А и/или В и/или С) и парагриппа, предпочтительно - симптомов гриппоподобных состояний, в частности - вызванных вирусами гриппа (А и/или B и/или С).

Композиция по настоящему изобретению особенно хорошо подходит для лечения и/или профилактики симптомов гриппоподобных состояний, вызванных инфекцией вирусами гриппа (Orthomyxovirus, вирусы гриппа А, В или С). Эти симптомы включают простуду, ринит, кашель, воспаления слизистой оболочки носа (выделения из носа, закупорка носовых ходов, приступы чихания), боли в горле (с различными проявлениями: пощипывание, трудности с глотанием), повышенную температуру, головную боль, боли, усталость.

Эти «зимние болезни» связаны с ослаблением нашей иммунной защиты.

Другой задачей настоящего изобретения является применение композиции для приготовления пищевого продукта, пищевой добавки или лекарственного средства.

Другой задачей настоящего изобретения является применение композиции для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения и/или профилактики респираторных и/или кишечных инфекций.

Другой задачей настоящего изобретения является применение композиции для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения и/или профилактики симптомов инфекции вирусом простого герпеса 1 типа, респираторно-синцитиальным вирусом и вирусами гриппа (А и/или B и/или С) и парагриппа, в частности - вызванных вирусами гриппа (А и/или B и/или С).

Другой задачей настоящего изобретения является применение композиции для приготовления лекарственного препарата, предназначенного для стимуляции иммунитета и/или укрепления иммунной защиты и/или стимуляции противоинфекционного и/или противовоспалительного ответа и/или для поддержания жизнеспособности.

Наконец, еще одним объектом настоящего изобретения является обеспечение способа укрепления иммунной защиты, который включает введение оральным путем композиции, основанной на комбинации экстракта бузины и по меньшей мере одного штамма Lactobacillus rhamnosus.

Композиция по настоящему изобретению пригодна для людей всех возрастов. Она особенно хорошо подходит для очень маленьких детей. Термин «очень маленькие дети» в контексте настоящего изобретения относится к детям в возрасте от 6 месяцев до 3 лет. Композиция по настоящему изобретению достаточно хорошо подходит для «юниоров», причем термин «юниор» в контексте настоящего изобретения относится к ребенку в возрасте от 3 лет до 17 лет. Композиция по настоящему изобретению также пригодна для взрослых, причем термин «взрослый» в контексте настоящего изобретения относится к человеку в возрасте от 18 лет до 60 лет. Однако композиция по настоящему изобретению также вполне пригодна для «пожилых людей», причем термин «пожилой человек» в контексте настоящего изобретения относится к лицу в возрасте не менее 60 лет.

Изобретение можно лучше понять на основании не ограничивающих его примеров, приведенных ниже, которые являются конкретными вариантами осуществления композиций по настоящему изобретению.

Описание примеров осуществления изобретения

Пример 1

Приготовление экстракта бузины, используемого в контексте настоящего изобретения

Экстракт бузины получили из сока ягод бузины, обогащенного антоцианинами и высушенного на мальтодекстрине. Обогащение осуществили способом мембранной фильтрации следующим образом: 26 литров осветленного сока бузины разбавили 284 литрами воды (11 объемов воды на 1 объем сока). Полученные таким образом 310 литров перемешали и нагрели до 45°C, затем провели диафильтрацию на первой мембране с отсекаемой молекулярной массой, равной 5 кДа, с добавлением 7 объемов воды на объем сока (то есть 181 л). Пермеат, полученный при диализе, затем сконцентрировали посредством ультрафильтрации на мембране с отсекаемой молекулярной массой, равной 5 кДа (экспериментальная мембрана с отсекаемой молекулярной массой, равной 5/10 кДа, и площадью поверхности, равной 5,8 м²). Ретентат из процесса ультрафильтрации термически сконцентрировали под вакуумом при температуре, не превышавшей 50°C, затем атомизировали на мальтодекстриновую основу так, чтобы количество мальтодекстрина было меньше или равно 30 масс. %.

Характеристики полученного при этом экстракта были следующими:

- содержание антоцианинов: от 10 масс. % до 14 масс. % в пересчете на сухое вещество в экстракте (в пересчете на цианидин-3-глюкозид согласно способу ВЭЖХ, описанному Wu et al., J. Agric. Food Chem. 52 (26), 7846-7856, 2004);

- содержание белков: от 5 масс. % до 7 масс. % в пересчете на сухое вещество в экстракте (N×6,25 согласно способу Кьельдаля).

Пример 2

Пищевая добавка в форме капсулы

Такая композиция особенно хорошо подходит для взрослых:

- Лиофилизированный штамм пробиотика Lactobacillus rhamnosus: 35 мг, то есть 5⋅10⁸ КОЕ;

- Экстракт бузины (Sambucus nigra) согласно Примеру 1: 50 мг;

- Витамин A: 400 мкг;

- Витамин B1: 550 мкг;

- Витамин B2: 700 мкг;

- Витамин B5: 3 мг;

- Витамин B6: 700 мкг;

- Витамин B8: 25 мкг;

- Витамин B9: 100 мкг;

- Витамин B12: 0,625 мкг;

- Витамин C: 40 мг;

- Витамин D: 2,5 мкг;

- Витамин E: 6 мг;

- Железо: 2,5 мг;

- Цинк: 2,5 мг;

- Селен: 15 мкг;

- Хром: 12,5 мкг;

- Марганец: 500 мкг;

- Молибден: 12,5 мкг.

Пример 3

Пищевая добавка в форме саше

Такая композиция особенно хорошо подходит для очень маленьких детей:

- Лиофилизированный штамм пробиотика Lactobacillus rhamnosus: 35 мг, то есть 5⋅10⁸ КОЕ;

- Экстракт бузины (Sambucus nigra) согласно Примеру 1: 25 мг;

- Витамин C: 18 мг;

- Витамин B6: 600 мкг;

- Витамин E: 2,4 мг;

- Цинк: 2,5 мг;

- Селен: 15 мкг.

Пример 4

Исследование in vitro комбинированных иммуномодуляторных эффектов штамма Lactobacillus rhamnosus с экстрактом бузины в мононуклеарных клетках из периферической крови

Материалы и методы

Мононуклеарные клетки из периферической крови выделили из здоровых субъектов, ресуспензировали и распределили в 24-ячеечных планшетах с концентрацией 5×10⁵ клеток в ячейке. Эти клетки инкубировали в течение 18 часов при 37°C под 5%-ным СO₂. Эти клетки стимулировали липополисахаридом в концентрации 10 мкг/мл, либо в присутствии 100 мкг/мл экстракта бузины, то есть без 5⋅10⁵ КОЕ Lactobacillus rhamnosus, либо в присутствии 100 мкг/мл экстракта бузины и 5⋅10⁵ КОЕ Lactobacillus rhamnosus. Супернатанты культур собирали для анализа различных цитокинов способом проточной цитометрии; их центрифугировали при 1600 об/мин в течение 10 минут при 4°C и консервировали при -20°C до начала анализа.

Анализ на цитокины выполнили с использованием оборудования Luminex, которое основано на принципе проточной цитометри. Эта технология Luminex основана на принципе твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA; от англ.: enzyme-linked immunosorbent assay) 96-ячеечных микропланшетов, которые в качестве основы содержали микрошарики, содержавшие два флуорохрома в определенном соотношении, которое сообщает им идентифицирующий их цветовой код (различные виды флуоресценции). Оптическая система цитометра (Bio-Plex 200) состоит из двух лазеров: красный лазер (λ=635 нм) возбуждает в каждом микрошарике смесь красителей, которая его определяет, и тем самым идентифицирует цитокин, подлежащий анализу. Второй зеленый лазер (λ=532 нм) возбуждает репортерный флуорохром, присоединенный к специфическому детекторному антителу, для количественного определения цитокина. Система управляется компьютером, оборудованным программным обеспечением для сбора и анализа данных (Bio-Plex Manager, версия 4.1). После размораживания супернатанты исследовали в чистом виде и после разбавления в соотношении 1/20 культуральной средой с использованием набора Milliplex (Millipore, стандарт HCYTOMAG-60K-29). Он содержит специфические шарики, детекторные антитела и стандарты для проведения анализа на следующие цитокины: IL-1β (интерлейкин-1β; от англ.: interleukin-1β), IL-1RA (антагонист рецептора интерлейкина-1; от англ.: interleukin-1 receptor antagonist), IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-15, IL-17A, CCL2 ((C-C мотив) лиганд 2; от англ.: С-С motif ligand 2), CCL3, CCL4, CCL5, CCL22, CXCL8 ((С-Х-С мотив) лиганд 8; от англ.: С-Х-С motif ligand 8), CXCL10, TNFa (фактор некроза опухолей альфа; от англ.: tumor necrosis factor alpha), IFNγ (интерферон-гамма; от англ: interferon gamma), GM-CSF (гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор; от англ.: granulocyte-macrophage colony-stimulating factor).

Концентрацию каждого цитокина выразили в пг/мл, она была усреднена по данным, полученным от 6 доноров. Порог обнаружения каждого цитокина равен 3,2 пг/мл. Для проб с концентрацией ниже порога обнаружения было установлено произвольно выбранное значение, соответствовавшее порогу обнаружения ×½, то есть 1,6 пг/мл. Посредством статистического анализа было произведено сравнение десятичных логарифмов концентрации каждого цитокина с использованием дисперсионного анализа (ANOVA; от англ.: analysis of variance).

Результаты

Концентрации цитокинов, полученные при каждом варианте стимуляции, сведены в Таблицах 1 и 2. Для того чтобы на уровне цитокина была синергия, необходимо, чтобы:

- концентрация цитокина, полученная экспериментально при стимуляции мононуклеарных клеток из периферической крови одновременно пробиотиком и экстрактом бузины, была больше, чем сумма концентраций цитокина, полученных при стимуляции экстрактом бузины и пробиотиком по отдельности;

- медианная концентрация цитокина, полученная при использовании комбинации у 6 доноров, была статистически значимо больше, чем концентрация, полученная при стимуляции экстрактом бузины, и концентрация, полученная при стимуляции пробиотиком.

В Таблице 1 суммированы результаты по активности экстракта бузины в комбинации с пробиотиком Lactobacillus rhamnosus и вклад каждого активного ингредиента в продукцию цитокинов мононуклеарными клетками из периферической крови человека.

Повышение концентрации IL-1β в ответ на стимуляцию экстрактом бузины наблюдали только у 2 из 6 исследованных доноров. Пробиотик запустил продукцию IL-Iβ у 5 из 6 доноров.

Комбинация экстракта бузины и пробиотика повысила продукцию IL-1β, но это повышение не достигло статистической значимости.

Все исследованные доноры продуцировали IL-1RA (антагонист рецепторов IL-1) в ответ на стимуляцию экстрактом бузины, что подтверждает противовоспалительную активность экстракта бузины. Все исследованные доноры продуцировали IL-1RA в ответ на стимуляцию Lactobacillus rhamnosus. Концентрация IL-1RA, полученная в ответ на комбинацию экстракта бузины и пробиотика у 6 доноров, была статистически значимо выше, чем при использовании экстракта бузины и пробиотика по отдельности. Кроме того, концентрация IL-1RA, полученная в ответ на комбинацию экстракта бузины и пробиотика, выше, чем сумма концентрации, полученной при стимуляции пробиотиком, и концентрации, полученной при стимуляции экстрактом бузины.

Таким образом, имеется синергия двух активных ингредиентов в отношении продукции IL-1RA.

Повышение концентрации IL-2 в ответ на стимуляцию экстрактом бузины наблюдали лишь у одного из 6 исследованных доноров. Трое из 6 доноров реагировали на пробиотик умеренной продукцией IL-2. Комбинация двух активных ингредиентов не оказала влияния на продукцию IL-2.

Ни один из исследованных доноров не ответил на стимуляцию экстрактом бузины продукцией IL-5. Точно так же, ни один из исследованных доноров не ответил на стимуляцию пробиотиком продукцией IL-5. Комбинация двух активных ингредиентов не оказала влияния на продукцию IL-5.

Все исследованные доноры продуцировали IL-6 в ответ на стимуляцию экстрактом бузины. Пять из 6 доноров ответили на пробиотик; следует отметить, что у нереагировавшего донора был наивысший исходный уровень IL-6. В случае отреагировавших доноров пробиотик был более сильным стимулятором продукции IL-6, чем экстракт бузины. Комбинация двух активных ингредиентов вызвала синергетическую продукцию IL-6.

В Таблице 2 приведен пример результатов по активности экстракта бузины в комбинации с пробиотиком Lactobacillus rhamnosus и вклад каждого активного ингредиента в продукцию IL-6 мононуклеарными клетками из периферической крови человека, полученной от 6 доноров.

Ни один из исследованных доноров не ответил на стимуляцию экстрактом бузины продукцией IL-9. Точно так же, ни один из исследованных доноров не ответил на стимуляцию пробиотиком продукцией IL-9. Комбинация двух активных ингредиентов не оказала влияния на продукцию IL-9.

Четверо из шести исследованных доноров продуцировали IL-10 в ответ на стимуляцию экстрактом бузины. Все исследованные доноры продуцировали IL-10 в ответ на пробиотик. Концентрация IL-10, полученная в ответ на комбинацию экстракта бузины и пробиотика у 6 доноров, была статистически значимо выше, чем концентрация, полученная при стимуляции экстрактом бузины, и концентрация, полученная при стимуляции пробиотиком. Кроме того, концентрация IL-10, полученная при стимуляции комбинацией экстракта бузины и пробиотика, была больше суммы концентрации, полученной при стимуляции пробиотиком, и концентрации, полученной при стимуляции экстрактом бузины, то есть имеется синергия двух активных ингредиентов в отношении продукции IL-10.

Ни один из исследованных доноров не ответил на стимуляцию экстрактом бузины продукцией IL-12р70. С другой стороны, все исследованные доноры продуцировали IL-12р70 в ответ на стимуляцию пробиотиком. Комбинация экстракта бузины и пробиотика не увеличила продукцию IL-12p70.

Ни один из исследованных доноров не ответил на стимуляцию экстрактом бузины продукцией IL-15. Точно так же, ни один из исследованных доноров не ответил на стимуляцию пробиотиком продукцией IL-15. Комбинация двух активных ингредиентов не оказала влияния на продукцию IL-15.

Ни один из исследованных доноров не ответил на стимуляцию экстрактом бузины продукцией IL-17A. То же справедливо и для ответа на пробиотик: он не индуцировал продукцию IL-17A ни у одного из доноров. Комбинация двух активных ингредиентов не оказала влияния на продукцию IL-17A.

Все исследованные доноры ответили на стимуляцию экстрактом бузины продукцией CCL2. Пять из 6 доноров ответили на стимуляцию пробиотиком; следует отметить, что у неответившего донора был наивысший исходный уровень CCL2, причем пробиотик запускал более сильный ответ, чем экстракт бузины. Комбинация двух активных ингредиентов стимулировала высокую секрецию CCL2, которая была статистически значимо выше, чем при стимуляции бузиной, но не пробиотиком.

Все исследованные доноры ответили на стимуляцию экстрактом бузины продукцией CCL3. Пять из 6 доноров ответили на пробиотик; следует отметить, что у неответившего донора был наивысший исходный уровень CCL3, причем пробиотик запускал более сильный ответ, чем экстракт бузины. Концентрация CCL3, полученная при стимуляции комбинацией экстракта бузины и пробиотика у 6 доноров, была статистически значимо выше, чем концентрация, полученная при стимуляции экстрактом бузины, и концентрация, полученная при стимуляции пробиотиком. Кроме того, концентрация CCL3, полученная в ответ на комбинацию экстракта бузины и пробиотика, была выше суммы концентрации, полученной при стимуляции пробиотиком, и концентрации, полученной при стимуляции экстрактом бузины; соответственно, имеется синергия 2 активных ингредиентов в отношении продукции CCL3.

Все исследованные доноры ответили на стимуляцию экстрактом бузины продукцией CCL4. Все исследованные доноры продуцировали CCL4 в ответ на пробиотик, за исключением одного донора, имевшего высокий исходный уровень CCL4, причем пробиотик запускал более сильный ответ, чем экстракт бузины. Концентрация CCL4, полученная при стимуляции комбинацией экстракта бузины и пробиотика у 6 доноров, была статистически значимо выше, чем концентрация, полученная при стимуляции экстрактом бузины, и концентрация, полученная при стимуляции пробиотиком. Кроме того, концентрация CCL4, полученная в ответ на комбинацию экстракта бузины и пробиотика, была выше суммы концентрации, полученной при стимуляции пробиотиком, и концентрации, полученной при стимуляции экстрактом бузины; соответственно, имеется синергия двух активных ингредиентов в отношении продукции CCL4.

Ни один из исследованных доноров не отвечал на стимуляцию экстрактом бузины продукцией CCL5. Только один из 6 доноров продуцировал CCL5 в ответ на пробиотик. Комбинация экстракта бузины и пробиотика не оказала влияния на продукцию CCL5.

Всего два из шести исследованных доноров продуцировали CCL22 в ответ на стимуляцию экстрактом бузины. Все исследованные доноры продуцировали CCL22 в ответ на пробиотик. Комбинация двух активных ингредиентов не оказала синергетического действия на продукцию CCL22.

Все исследованные доноры продуцировали CXCL8 в ответ на стимуляцию экстрактом бузины. Пять из шести доноров реагировали на пробиотик, следует отметить, что не реагировавший донор имел наивысший исходный уровень CXCL8, причем пробиотик запускал более сильный ответ, чем экстракт бузины. Комбинация двух активных ингредиентов вызывает синергическую продукцию CXCL8.

Ни один из исследованных доноров не продуцировал CXCL10 в ответ на экстракт бузины, напротив, экстракт бузины статистически значимо ингибировал конститутивную продукцию CXCL10. Пять из шести доноров ответили на пробиотик. Комбинация двух активных ингредиентов демонстрирует, что экстракт бузины статистически значимо ингибирует продукцию, индуцированную пробиотиком.

Все исследованные доноры продуцировали TNFα в ответ на экстракт бузины. Все исследованные доноры продуцировали TNFα в ответ на пробиотик. Эта продукция была более интенсивной, чем продукция, вызванная экстрактом бузины. Комбинация экстракта бузины и пробиотика не оказала влияния на продукцию TNFα.

Ни один из исследованных доноров не продуцировал IFNγ в ответ на стимуляцию экстрактом бузины; с другой стороны, все исследованные доноры продуцировали IFNγ в ответ на стимуляцию пробиотиком. Комбинация экстракта бузины и пробиотика не оказала влияния на продукцию IFNγ.

Ни один из исследованных доноров не продуцировал GM-CSF в ответ на стимуляцию экстрактом бузины. С другой стороны, пять из шести доноров продуцировали GM-CSF в ответ на стимуляцию пробиотиком. Концентрация GM-CSF, полученная в ответ на стимуляцию комбинацией экстракта бузины и пробиотика у 6 доноров, была статистически значимо выше концентрации, полученной при стимуляции экстрактом бузины, и концентрации, полученной при стимуляции пробиотиком. Кроме того, концентрация GM-CSF, полученная при стимуляции комбинацией экстракта бузины и пробиотика, была выше, чем сумма концентрации, полученной при стимуляции пробиотиком, и концентрации, полученной при стимуляции экстрактом бузины, поэтому имеется синергия двух активных ингредиентов в отношении продукции GM-CSF.

Отсутствие продукции IL-2, IL-5 и IL-9 - цитокинов, которые стимулируют пролиферацию Т-клеток, свидетельствует о том, что комбинация не может активировать клональную экспансию Т-лимфоцитов.

Продукция IFNγ и IL-12р70, типичная для ответа 1 типа, обусловлена Lactobacillus rhamnosus, тогда как умеренная продукция IL-4, характерная для ответа 2 типа, связана с экстрактом бузины. Тип ответа оценивают по отношению IFNγ/IL-4: ответ относится к 1 типу при отношении, большем 100, к 0 типу, если отношение лежит в диапазоне от 0,01 до 100, и к 2 типу, если оно меньше 0,01. Это отношение равно 600 для Lactobacillus rhamnosus, 3 - для экстракта бузины, и 119 - для комбинации экстракта бузины и Lactobacillus rhamnosus, то есть это ответ 1 типа. Поэтому сильный ответ 1 типа, индуцированный пробиотиком, хорошо уравновешен продукцией IL-4, вызванной экстрактом бузины.

Продукция IL-1β, IL-6, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL22, CXCL8, TNFα и GM-CSF экстрактом бузины и Lactobacillus rhamnosus свидетельствует о провоспалительной активности с рекрутментом и активацией клеток в месте воспаления. Принимая во внимание вовлеченные хемокины (CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL22, CXCL8), преимущественно будет осуществляться аттракция клеток, обеспечивающих наследственный иммунитет - гранулоцитов и моноцитов/макрофагов, а также лимфоцитов. Эта провоспалительная активность будет модулироваться продукцией IL-1RA - противовоспалительного цитокина, который связывается с тем же мембранным рецептором, что и IL-1, препятствуя подаче им сигнала клетке. Кроме того, об этом свидетельствует и ингибиторный эффект экстракта бузины на конститутивную и индуцированную продукцию CXCL10 - хемокина, привлекающего активированные лимфоциты, NK-клетки (натуральные киллеры; от англ.: natural killers) и эозинофилы. При этом провоспалительная активность пробиотика, по-видимому, уравновешивается противовоспалительным эффектом экстракта бузины.

Выводы

В условиях испытания авторы настоящего изобретения показали, что комбинация экстракта бузины и Lactobacillus rhamnosus синергична в отношении индукции IL-1RA, IL-6, IL-10, CCL3, CCL4, CXCL8, GM-CSF. Эта комбинация индуцирует продукцию IL-1β, IL-1RA, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12p70, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL22, CXCL8, IFNγ, TNFα и GM-CSF. Этот профиль свидетельствует о том, что комбинация экстракта бузины и Lactobacillus rhamnosus стимулирует иммунную защиту посредством рекрутинга моноцитов, гранулоцитов и лимфоцитов в место воспаления. Профиль 1 типа будет способствовать развитию ответов клеточного типа, в частности - с активацией моноцитов/макрофагов и нейтрофилов, но без лимфопролиферативного эффекта. Воспалительная реакция будет сдерживаться продукцией IL-1RA и IL-10 и ингибированием продукции CXCL10, специфически связанным с экстрактом бузины.

Claims (8)

1. Иммуностимулирующая композиция, содержащая комбинацию экстракта бузины и по меньшей мере одного штамма Lactobacillus rhamnosus, характеризующаяся тем, что экстракт бузины имеет содержание антоцианинов в диапазоне от 0,5 до 25 масс. % в пересчете на сухое вещество в экстракте и содержание белков в диапазоне от 2 до 10 масс. % в пересчете на сухое вещество в экстракте, где композиция содержит от 20 до 200 мг сухого экстракта бузины в разовой дозе, а штамм Lactobacillus rhamnosus представляет собой GG (АТСС 53103) и композиция содержит количество Lactobacillus rhamnosus в диапазоне от 1⋅10⁷ КОЕ в разовой дозе до 1⋅10¹¹ КОЕ в разовой дозе.

2. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что она является пищевой добавкой.

3. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что она является лекарственным средством.

4. Композиция по п. 2, отличающаяся тем, что она является пищевой добавкой, выбранной из группы, состоящей из капсул, таблеток для проглатывания, жевательных таблеток, шипучих таблеток, пастилок, пилюль, порошков, гранул, растворов или суспензий для перорального приема и формы для подъязычного и буккального введения.

5. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит от 20 до 100 мг сухого экстракта бузины в разовой дозе, и от 1⋅10⁷ до 1⋅10¹¹ КОЕ Lactobacillus rhamnosus в разовой дозе, предпочтительно - от 1⋅10⁸ до 1⋅10⁹ КОЕ Lactobacillus rhamnosus в разовой дозе.

6. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит витамины и/или минеральные соли.

7. Композиция по любому из пп. 1-6, отличающаяся тем, что она предназначена для применения для стимуляции иммунитета и/или укрепления иммунной защиты, и/или стимуляции противоинфекционного и/или противовоспалительного ответа, и/или для поддержания жизнеспособности.

8. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что она предназначена для применения для лечения и/или профилактики симптомов гриппоподобных состояний, вызванных, в частности, вирусами гриппа.