CN111671855A - 一种芫参藏药组合物的制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种芫参藏药组合物，以藏族人民常食的药食同源植物为主，辅以手掌参和西洋参，进一步开发制备成芫参颗粒，具有较好的稳定性和安全性，以生理盐水为对照显示芫参颗粒可有效延长小鼠的常压及减压条件下的耐缺氧存活时间，能够显著降低组织MDA含量，提高SOD活性，并能够抑制H2O2诱导的红细胞膜氧化；且与红景天口服液的剂量比较，高剂量组可能具有更好的抗氧化效果；可进一步开发成为能有效改善人的免疫力、增强抗缺氧、抗疲劳、抗氧化等功能的藏药，能明显提高人类特别是高海拔地区人的身体机能的药物，可有效提升运动能力和抗疲劳能力。

Description

一种芫参藏药组合物的制备方法及其应用
技术领域
本发明属于藏药技术领域，涉及一种芫参藏药组合物的制备方法及其应用。
背景技术
疲劳(Fatigue)是一种复杂、不可预测且可能持久的病理生理现象，可分为机体疲劳和精神疲劳。一般来说，机体疲劳可以通过休息和放松或者精神疲劳的缓解而缓解。根据中医理论，机体过度疲劳是精神疲劳的主要原因，与脾、肝、肺和心脏的健康密切相关。中医主要通过调节免疫功能障碍，调节下丘脑-垂体-肾上腺轴的异常活动，以及发挥抗氧化的作用以缓解疲劳。随着生活节奏的加快，以及工作及生活压力的增强，疲劳人群越来越多，同时所表现出来的疲劳状态也愈发严重，如果处理或治疗不当，可能发展为慢性疲劳，严重影响人体的生理和心理健康，例如降低工作效率，影响睡眠质量等等。此外，疲劳在竞技体育领域也是备受关注的话题，因此如何快速缓解疲劳，以及提高机体的运动能力近年来受到了极大的关注。
机体氧化还原系统在多种生物学功能中均具有重要的调节作，在正常情况下，机体通过自身的调节可以使体内的氧化和抗氧化系统达到平衡，但是，由于各种内外环境的不良刺激超出机体的处理能力，就可能导致相应的氧化损伤。氧化损伤和机体多种疾病相关，包括衰老、高血压、肿瘤等。高原为我国特有的缺氧环境，长期缺氧对于居住在高原的人们产生了较大的健康危害，抗缺氧药物的研发具有重要意义。
我国的青藏高原，由于其独特的地理位置和环境，复杂的自然条件，造就了品种丰富且功能独特的藏药资源。近年来，针对藏药的研究得到了广泛的关注，但是主要集中在基础研究，制剂的开发和应用研究有待进一步增强。开展藏药资源的开发利用研究，对于藏药产业的可持续发展具有重要的价值。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种芫参藏药组合物，还提供该藏药组合物的应用及芫参颗粒的制备方法。
为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
1.一种芫参藏药组合物，所述藏药组合物由手掌参、芫根和西洋参组成。
进一步，所述藏药组合物的原料按质量份数计，由手掌参、芫根和西洋参组成芫根60-65份、手掌参7-10份、和西洋参7-10份组成。
进一步，所述藏药组合物的原料按质量份数计，由手掌参、芫根和西洋参组成芫根65份、手掌参7.5份、和西洋参7.5份组成。
2.芫参藏药组合物在制备抗氧化药物中的应用。
3.芫参藏药组合物在制备抗缺氧药物中的应用。
4.芫参藏药组合物在制备抗疲劳药物中的应用。
5.芫参颗粒的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
a.将洗净干燥的芫根打磨粉碎，按质量比1:8-10加入纯水，煮沸提取1-1.5小时，固液分离；固体再按质量比1:8-10加入纯水，煮沸提取1-1.5小时，固液分离；合并两次滤液浓缩为芫根水提取物浸膏；
b.按芫根水提取物浸膏固含物的2-3倍加入麦芽糊精后喷雾干燥成粉末，为芫根提取物干粉；
c.取芫根提取物干粉60-65份，白砂糖20份，手掌参粉7-10份，西洋参粉7-10份，混合均匀后再加75％乙醇制备成软材，过20目筛成粒，干燥至水份小于5％即可。
进一步，步骤a.将洗净干燥的芫根打磨粉碎，按质量比1:10加入纯水，煮沸提取1小时，固液分离；固体再按质量比1:8加入纯水，煮沸提取1小时，固液分离；合并两次滤液浓缩为芫根水提取物浸膏；
进一步，步骤a中滤液浓缩至相对密度为1.10-1.25的芫根水提取物浸膏；
进一步，步骤c中芫根提取物干粉65份，白砂糖20份，手掌参粉7.5份，西洋参粉7.5份。
进一步，白砂糖、手掌参粉和西洋参粉均为100目。
本发明的有益效果在于：本发明提供的芫参藏药组合物以藏族人民常食的药食同源植物为主，辅以手掌参和西洋参，进一步开发制备成芫参颗粒，具有较好的稳定性和安全性，以生理盐水为对照显示芫参颗粒可有效延长小鼠的常压及减压条件下的耐缺氧存活时间，能够显著降低组织MDA含量，提高SOD活性，并能够抑制H2O2诱导的红细胞膜氧化；且与红景天口服液2ml/Kg的剂量比较，高剂量组可能具有更好的抗氧化效果；可进一步开发成为能有效改善人的免疫力、增强抗缺氧、抗疲劳、抗氧化等功能的藏药，能明显提高人类特别是高海拔地区人的身体机能的药物。各项实验证明本发明以手掌参、芫根、西洋参为主要成分开发制备的芫参颗粒，具有较好的稳定性和安全性，显示其可有效延长小鼠的负重游泳时间，降低小鼠在游泳后的全血乳酸和血清尿素氮水平，且可显著提升肝糖原和肌糖原水平，表明其可有效提升小鼠的运动能力和抗疲劳能力。
具体实施方式
下面对本发明的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1
一种芫参颗粒的制备方法：
a.将洗净干燥的芫根打磨粉碎，按质量比1:10加入纯水，100℃煮沸提取1小时，固液分离；固体再按质量比1:8加入纯水，100℃煮沸提取1小时，固液分离；合并两次滤液浓缩至相对密度为1.10-1.25(20℃)的芫根水提取物浸膏；
b.按芫根水提取物浸膏固含物的2倍加入麦芽糊精后喷雾干燥成粉末，为芫根提取物干粉；
c.取芫根提取物干粉650g，白砂糖(100目)200g，手掌参粉(100目)75g，西洋参粉(100目)75g，混合均匀后再加适量75％乙醇制备成软材(制软材的程度以手握成团，轻压即散为宜)，过20目筛成粒，于40-60℃干燥至水份小于5％即可。
实施例2
一种芫参颗粒的制备方法：
d.将洗净干燥的芫根打磨粉碎，按质量比1:8加入纯水，100℃煮沸提取1小时，固液分离；固体再按质量比1:8加入纯水，100℃煮沸提取1小时，固液分离；合并两次滤液浓缩至相对密度为1.10-1.25(20℃)的芫根水提取物浸膏；
e.按芫根水提取物浸膏固含物的2倍加入麦芽糊精后喷雾干燥成粉末，为芫根提取物干粉；
f.取芫根提取物干粉600g，白砂糖(100目)200g，手掌参粉(100目)100g，西洋参粉(100目)100g，混合均匀后再加适量75％乙醇制备成软材(制软材的程度以手握成团，轻压即散为宜)，过20目筛成粒，于40-60℃干燥至水份小于5％即可。
实施例3
一种芫参颗粒的制备方法：
g.将洗净干燥的芫根打磨粉碎，按质量比1:10加入纯水，100℃煮沸提取1小时，固液分离；固体再按质量比1:10加入纯水，100℃煮沸提取1小时，固液分离；合并两次滤液浓缩至相对密度为1.10-1.25(20℃)的芫根水提取物浸膏；
h.按芫根水提取物浸膏固含物的2倍加入麦芽糊精后喷雾干燥成粉末，为芫根提取物干粉；
i.取芫根提取物干粉630g，白砂糖(100目)200g，手掌参粉(100目)85g，西洋参粉(100目)85g，混合均匀后再加适量75％乙醇制备成软材(制软材的程度以手握成团，轻压即散为宜)，过20目筛成粒，于40-60℃干燥至水份小于5％即可。
实施例4
芫参颗粒对小鼠耐缺氧和抗氧化实验
1、实验动物：清洁级ICR小鼠，雌雄各半，体重25.0-30.0g，由陆军军医大学实验动物中心提供。
2、试药和仪器：芫参颗粒(实施例1制备)；红景天口服液(西藏藏药集团股份有限公司，规格：10ml/支，批号：170530)；钠石灰(天津市福晨化学仪器厂，批号：20171009)；30％H2O2溶液(廊坊鹏彩精细化工有限公司，批号：20180716)；丙二醛检测试剂盒(含硫代巴比妥钠(TBA)、抗氧化剂、MDA标准品、MDA检测液)和超氧化物歧化酶测试盒(含磷酸盐缓冲液、氮蓝四唑溶液、酶溶液和稀释液)购自南京建成生物工程研究所；FA2004型电子天平(上海花潮电器有限公司)；JT-C型电子匀浆机(漯河市金田试验设备研究所)；Vortex-Genie2型漩涡混合器(美国SI仪器公司)；TG16MW型台式高速实验室离心机(湖南赫西仪器装备有限)；V-1200型可见分光光度计(南京卓恒科学仪器有限公司)；FYL-YS-150L型恒温孵育箱(北京福意电器有限公司)。
3、给药方案
将375只ICR小鼠随机分为5组，每组75只，分别为空白对照组(生理盐水)、芫参颗粒低剂量组(10g/Kg)、芫参颗粒中剂量组(20g/Kg)、芫参颗粒高剂量组(40g/Kg)，红景天口服液组(2ml/Kg)每天灌胃一次给药(均以生理盐水配制至0.2ml)，并于给药后第1、3、7、14、30天分别取5只进行试验，其中小鼠常压耐缺氧试验、小鼠减压耐缺氧试验各取5只，芫参颗粒对组织中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量的影响、芫参颗粒对H2O2诱导红细胞溶血的影响实验共用5只。试验过程中小鼠自由饮食、饮水，并定期更换垫料，维持室温20～25℃。
4、小鼠常压耐缺氧试验
分别于末次给药1h后，将各组小鼠分别置于500mL用凡士林密封的广口瓶中(瓶内预先放置10g钠石灰，以吸收二氧化碳和水)，每瓶放1只小鼠，加盖后立即计时，以小鼠最后一次呼吸时间为指标，观察记录小鼠存活时间。采用平均值±标准差(mean±SD)进行数据的描述性统计，采用SPSS 22.0进行数据的统计学分析，组件比较采用方差分析(LSD法)，P<0.05表明差异有统计学意义，以下同。不同组别小鼠在不同给药时间后常压耐缺氧试验存活时间见表1，芫参颗粒低、中、高剂量组在连续给药7天后均可显著延长小鼠的常压耐缺氧存活时间(P<0.05)，且高剂量组在连续给药30天后小鼠的常压耐缺氧存活时间优于红景天口服液组(P<0.05)，表明芫参颗粒在小鼠体内具有抗缺氧的作用。
表1芫参颗粒对小鼠常压耐缺氧能力的影响(n＝5，mean±SD)
Figure BDA0002551861930000051
注：*与对照组比较P<0.05，#与红景天口服液组比较P<0.05
5、小鼠减压耐缺氧试验
分别于末次给药1h后，将各组小鼠分别置于2L用干燥器中(瓶内预先放置10g钠石灰，以吸收二氧化碳和水)，干燥器通过一橡胶管连接于抽气泵和一玻璃平衡瓶，抽气泵抽气至200mmHg，将干燥器盖盖紧并打开气阀，使干燥器和玻璃瓶气压平衡，关闭气阀，观察记录小鼠存活时间。不同组别小鼠在不同给药时间后减压耐缺氧试验存活时间见表2，芫参颗粒低、中、高剂量组在连续给药7天后均可显著延长小鼠的减压耐缺氧存活时间(P<0.05)，且高剂量组在给药1天后即可显著延长小鼠的减压耐缺氧存活时间(P<0.05)；此外与红景天口服液组比较，芫参颗粒中、高剂量组分别在给药14天、3天后即可更好的延长小鼠的减压耐缺氧存活时间(P<0.05)；表明芫参颗粒在小鼠体内具有抗缺氧的作用。
表2芫参颗粒对小鼠减压耐缺氧能力的影响(n＝5，mean±SD)
Figure BDA0002551861930000052
Figure BDA0002551861930000061
注：*与对照组比较P<0.05，#与红景天口服液组比较P<0.05
6、芫参颗粒对组织中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量的影响
分别于末次给药1h后，取各组小鼠用锋利剪刀断头，迅速取心、脑组织，冰冷的生理盐水洗净，滤纸拭干，称重，制成10％生理盐水匀浆液，分别采用丙二醛检测试剂盒(TBA比色法)、超氧化物歧化酶测试盒(黄嘌呤氧化酶法)测定各组织中MDA和SOD的含量。
丙二醛含量测定：按照试剂盒说明书，首先将TBA工涡旋混匀作液，置于4℃避光保存；按照TBA工作液、抗氧化剂、MDA检测液100:6:300的体积配制MDA检测工作液；取1mmol/L的MDA标准品采用生理盐水稀释成10μmol/L；取100μL匀浆液加入离心管中，以生理盐水为空白对照，以MDA标准品为标准对照，分别加入200μL MDA检测工作液，混匀，加盖水浴煮沸，流水冷却至室温，取上清液，采用分光光度计测定535nm处吸光度值，按照MDA浓度(nmol/mg)＝(OD测定-OD空白)/(OD标准-OD空白)×100/组织质量浓度(mg)计算MDA在组织中的含量。
SOD含量测定：首先将氮蓝四唑溶液采用稀释液稀释36倍作为工作液，将酶溶液稀释40倍作为工作液；取20μL匀浆液加入96孔板中，以20μL稀释液作为空白对照1，分别加入180μL氮蓝四唑工作液和20μL酶工作液，37℃孵育20分钟后，测定其在560nm处的吸光度；另取40μL稀释液加入180μL氮蓝四唑工作液作为空白对照2，经孵育后测定吸光度。以I＝(A空白对照1-A空白对照2-A样品)/(A空白对照1-A空白对照2)计算抑制率，以SOD浓度(U/mg)＝I/(1-I)/组织质量浓度(mg)计算SOD在组织中的含量。
不同组别小鼠在不同给药时间后，测定心、脑组织中MDA含量结果见表3和表4，芫参颗粒低、中、高剂量组在连续给药7天后，小鼠心肌中MDA含量均明显降低(P<0.05)；芫参颗粒低、中、高剂量组在连续给药14天后，小鼠脑组织中MDA含量均明显降低(P<0.05)；且高剂量组在给药3天后，小鼠心、脑组织中MDA含量均明显降低(P<0.05)；此外与红景天口服液组比较，芫参颗粒高剂量组在给药7天后即可更好的降低小鼠心肌中的MDA含量(P<0.05)；表明芫参颗粒可参与小鼠体内自由基代谢过程，参与清除组织中过剩的自由基，产生抗氧化的作用，从而提高机体的抗氧化能力。
表3芫参颗粒对小鼠心组织中MDA含量的影响(n＝5，mean±SD)
Figure BDA0002551861930000071
注：*与对照组比较P<0.05，#与红景天口服液组比较P<0.05
表4芫参颗粒对小鼠脑组织中MDA含量的影响(n＝5，mean±SD)
Figure BDA0002551861930000072
注：*与对照组比较P<0.05，#与红景天口服液组比较P<0.05
不同组别小鼠在不同给药时间后，测定心、脑组织中SOD含量结果见表5和表6，芫参颗粒低、中、高剂量组在连续给药30天后，小鼠心肌中SOD含量均明显升高(P<0.05)；芫参颗粒低、中、高剂量组在连续给药7天后，小鼠脑组织中SOD含量均明显升高(P<0.05)；且高剂量组在给药7天后，小鼠心、脑组织中SOD含量均明显升高(P<0.05)；此外与红景天口服液组比较，芫参颗粒高剂量组在给药7天后即可更好的升高小鼠心肌和脑组织中的SOD含量(P<0.05)；表明芫参颗粒可提高小鼠体内SOD活性，从而减轻组织细胞的过氧化损伤，从而提高机体的抗氧化能力。
表5芫参颗粒对小鼠心组织中总SOD活性的影响(n＝5，mean±SD)
Figure BDA0002551861930000081
注：*与对照组比较P<0.05，#与红景天口服液组比较P<0.05
表6芫参颗粒对小鼠脑组织中总SOD活性的影响(n＝5，mean±SD)
Figure BDA0002551861930000082
注：*与对照组比较P<0.05，#与红景天口服液组比较P<0.05
7、芫参颗粒对H2O2诱导红细胞溶血的影响
分别于末次给药1h后，取各组小鼠用锋利剪刀断头，取血，采用生理盐水洗涤制成5％红细胞悬液。分别取红细胞悬液1ml加入H2O2使其最终浓度为2mmol/L，37℃孵育1h后，5000rpm离心15min，取上清液生理盐水稀释20倍后置于分光光度计测定415nm处吸光度值。
不同组别小鼠在不同给药时间后芫参颗粒对H2O2诱导红细胞溶血抑制作用结果见表7，芫参颗粒低、中、高剂量组在连续给药7天后均可明显抑制H2O2诱导的红细胞溶血(P<0.05)，且中、高剂量组在给药3天后即可明显抑制H2O2诱导的红细胞溶血(P<0.05)；此外与红景天口服液组比较，芫参颗粒高剂量组在给药14天后可更好的抑制H2O2诱导的红细胞溶血(P<0.05)；表明芫参颗粒在小鼠体内具有抗氧化的作用。
表7芫参颗粒对H2O2诱导红细胞溶血的影响(n＝5，mean±SD)
Figure BDA0002551861930000091
注：*与对照组比较P<0.05，#与红景天口服液组比较P<0.05
以上实验表明本发明以手掌参、芫根、西洋参为主要成分开发制备的芫参颗粒，具有较好的稳定性和安全性，以生理盐水为对照显示芫参颗粒可有效延长小鼠的常压及减压条件下的耐缺氧存活时间，能够显著降低组织MDA含量，提高SOD活性，并能够抑制H2O2诱导的红细胞膜氧化；且与红景天口服液2ml/Kg的剂量比较，高剂量组可能具有更好的抗氧化效果；可进一步开发成为能有效改善人的免疫力、增强抗缺氧、抗疲劳、抗氧化等功能的藏药，能明显提高人类特别是高海拔地区人的身体机能的药物。
实施例5
芫参颗粒对小鼠运动能力和抗疲劳作用的实验
1、实验动物：清洁级昆明小鼠，雄性，体重20.0-30.0g，由南方医科大学实验动物中心提供。
2、试药和仪器：芫参颗粒(实施例1制备的)；98％浓硫酸(南京盛庆和化工有限公司，批号：171205)；肝素(上海沪鼎生物科技有限公司，批号：180509)；全血乳酸检测试剂盒(含1mmol/L乳酸标准液、蛋白沉淀剂、酶工作液、显色剂、终止剂)购自南京建成生物工程研究所；尿素氮检测试剂盒(含1μg/mL尿素氮标准液、碱化的脲酶试液、次氯酸工作液、酚试剂)购自上海索桥生物科技有限公司；糖原含量检测试剂盒(含强碱提取液、0.1mg/ml的葡萄糖标准液、蒽酮粉剂)购自上海索桥生物科技有限公司；FA2004型电子天平(上海花潮电器有限公司)；Eppendorf单道可调量程移液器(德国Eppendorf公司)；Vortex-Genie2型漩涡混合器(美国SI仪器公司)；TG16MW型台式高速实验室离心机(湖南赫西仪器装备有限)；V-1200型可见分光光度计(南京卓恒科学仪器有限公司)；SHZ-A型水浴锅(上海跃进医疗器械有限公司)。
3、给药方案
将120只昆明小鼠随机分为4组，每组30只，分别为空白对照组(生理盐水)、芫参颗粒低剂量组(10g/Kg)、芫参颗粒中剂量组(20g/Kg)、芫参颗粒高剂量组(40g/Kg)，每天灌胃一次给药，试验过程中小鼠自由饮食、饮水，并定期更换垫料，维持室温20～25℃。连续给药30天，期间每周将小鼠置于水温为25℃，水高度为30cm的游泳箱中，不负重游泳10min，进行游泳训练一次，并观察是否有异常情况。
4、小鼠负重游泳试验
20只小鼠按照上述给药方案连续给药30天，期间每周将小鼠置于水温为25℃，水高度为30cm的游泳箱中，不负重游泳10min，进行游泳训练一次，并观察是否有异常情况。连续给药30天后，在每只小鼠尾部绑上相当于体重5％的铁丝，置于水温为25℃，水高度为30cm的游泳箱中，进行负重游泳试验。以小鼠头部沉入水面10s不能上浮为止，记录小鼠负重游泳的力竭时间。采用平均值±标准差(mean±SD)进行数据的描述性统计，采用SPSS22.0进行数据的统计学分析，组件比较采用方差分析(LSD法)，P<0.05表明差异有统计学意义，以下同。
不同组别小鼠在不同给药时间后对小鼠负重游泳能力的影响结果见表8，由表8可知芫参颗粒按照10g/Kg、20g/Kg、40g/Kg连续给药30天后，均可明显延长小鼠负重游泳的时间(P<0.05)，表明芫参颗粒在小鼠体内具有抗疲劳的作用，能够有效提高小鼠的运动能力。
表8芫参颗粒对小鼠负重游泳能力的影响(n＝5，mean±SD)
Figure BDA0002551861930000101
Figure BDA0002551861930000111
注：*与对照组比较P<0.05。
5、全血乳酸含量测定
20只小鼠分四组，按照上述给药方案连续给药30天后，将小鼠置于水温为25℃，水高度为30cm的游泳箱中，不负重游泳60min，建立小鼠疲劳模型。分别于游泳前，游泳停止后30、60min尾静脉采全血，置于肝素化EP管中。采用全血乳酸检测试剂盒测定小鼠全血乳酸含量。分别取0.1ml全血、乳酸标准液加入0.6ml蛋白沉淀剂，静置10min后，4500r/min离心8min，取上清液20μl加入200μl酶工作液和30μl显色剂，涡旋混匀，37℃孵育10min，加入终止剂终止反应，采用分光光度计于530nm测定吸收波长，以血乳酸含量＝(测定管OD值-空白管OD值)/(标准管OD值-空白管OD值)*标准管浓度计算全血乳酸含量。
不同组别小鼠在不同给药时间后对小鼠全血乳酸含量的影响结果见表9，芫参颗粒按照10g/Kg、20g/Kg、40g/Kg连续给药30天后，小鼠在游泳前测定全血乳酸含量较对照组差异均无统计学意义(P>0.05)；在游泳停止后30min、60min分别测定全血乳酸含量，芫参颗粒低、中、高剂量组小鼠全血乳酸含量均明显低于对照组(P<0.05)；表明芫参颗粒可有助于减少小鼠运动后体内乳酸含量，从而提高机体的抗疲劳能力。
表9芫参颗粒对小鼠全血乳酸含量的影响(n＝5，mean±SD)
Figure BDA0002551861930000112
注：*与对照组比较P<0.05。
6、血清尿素氮含量测定
20只小鼠分四组，按照上述给药方案连续给药30天后，将小鼠置于水温为25℃，水高度为30cm的游泳箱中，不负重游泳60min，建立小鼠疲劳模型。于游泳停止后40min摘眼球取血，4500r/min离心10min，取上清液采用尿素氮检测试剂盒测定小鼠血浆中尿素氮含量。分别取0.1m血浆、尿素氮标准液加入200μl碱化的脲酶，涡旋15s混匀后于37℃孵育10min，分别加入350μl次氯酸工作液和酚试剂，涡旋混匀，37℃孵育10min，采用分光光度计于630nm测定吸收波长，以血浆尿素氮含量＝(测定管OD值-空白管OD值)/(标准管OD值-空白管OD值)*标准管浓度计算尿素氮含量。
不同组别小鼠在不同给药时间后对小鼠血清尿素氮含量的影响结果见表10，芫参颗粒按照10g/Kg、20g/Kg、40g/Kg连续给药30天后，小鼠游泳停止后40min测定血清尿素氮含量，芫参颗粒低、中、高剂量组小鼠血清尿素氮含量均明显低于对照组(P<0.05)；表明芫参颗粒可有助于减少小鼠运动后体内尿素氮含量，从而提高机体的抗疲劳能力。
表3芫参颗粒对小鼠血清尿素氮含量的影响(n＝5，mean±SD)
组别 血清尿素氮含量(mmol/L)
对照组 11.48±1.19
芫参颗粒低剂量组 9.11±0.74*
芫参颗粒中剂量组 8.23±0.86*
芫参颗粒高剂量组 8.18±0.71*
注：*与对照组比较P<0.05。
7、肝糖原和肌糖原含量测定
60只小鼠分四组，按照上述给药方案连续给药30天后，将小鼠置于水温为25℃，水高度为30cm的游泳箱中，不负重游泳60min，建立小鼠疲劳模型。分别于游泳前、游泳停止后60min、90min后用锋利剪刀断头，迅速取肝脏、肌肉组织，冰冷的生理盐水洗净，滤纸拭干。称取肝脏或肌肉组织约0.2g，置于10ml试管中，加入0.75ml强碱提取液，沸水浴中煮沸20min，每隔5min振摇试管1次，使其充分混匀，待组织完全溶解，取出试管，流水冷却，加蒸馏水定容至5ml，4500r/min离心10min，完成糖原的提取；分别取取上清液和葡萄糖标准液60μl，加入240μl经浓硫酸溶解的蒽酮，混匀后置于95℃水浴10min，冷却后取200μl采用分光光度计于620nm测定吸收波长，以糖原含量＝0.555*(测定管OD值-空白管OD值))/(标准管OD值-空白管OD值)/组织质量计算糖原含量。
不同组别小鼠在不同给药时间后对小鼠肝糖原和肌糖原含量的影响结果见表11和表12，芫参颗粒按照10g/Kg、20g/Kg、40g/Kg连续给药30天后，小鼠在游泳前测定肝糖原、肌糖原含量较对照组差异均有统计学意义(P<0.05)，表明芫参颗粒连续使用30天后可明显提高小鼠体内肝糖原和肌糖原的储备；在游泳停止后60min、90min测定肝糖原含以及在游泳停止后90min测定肌糖原含量，芫参颗粒低、中、高剂量组小鼠肝糖原和肌糖原含量均明显高于对照组(P<0.05)；在游泳停止后60min测定肌糖原含量，芫参颗粒中、高剂量组小鼠肌糖原含量明显高于对照组(P<0.05)；表明芫参颗粒可有助于增加小鼠体内肝糖原和肌糖原的储备，从而提高机体的运动和抗疲劳能力。
表11芫参颗粒对小鼠肝糖原含量的影响(n＝5，mean±SD)
Figure BDA0002551861930000131
注：*与对照组比较P<0.05。
表12芫参颗粒对小鼠肌糖原含量的影响(n＝5，mean±SD)
Figure BDA0002551861930000132
注：*与对照组比较P<0.05。
以上实验表明本发明以手掌参、芫根、西洋参为主要成分开发制备的芫参颗粒，具有较好的稳定性和安全性，显示其可有效延长小鼠的负重游泳时间，降低小鼠在游泳后的全血乳酸和血清尿素氮水平，且可显著提升肝糖原和肌糖原水平，表明其可有效提升小鼠的运动能力和抗疲劳能力。
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种芫参藏药组合物，其特征在于，所述藏药组合物由手掌参、芫根和西洋参组成。
2.根据权利要求1所述的芫参藏药组合物，其特征在于，所述藏药组合物的原料按质量份数计，由手掌参、芫根和西洋参组成芫根60-65份、手掌参7-10份、和西洋参7-10份组成。
3.根据权利要求2所述的芫参藏药组合物，其特征在于，所述藏药组合物的原料按质量份数计，由手掌参、芫根和西洋参组成芫根65份、手掌参7.5份、和西洋参7.5份组成。
4.权利要求1-3任一项所述的芫参藏药组合物在制备抗氧化药物中的应用。
5.权利要求1-3任一项所述的芫参藏药组合物在制备抗缺氧药物中的应用。
6.权利要求1-3任一项所述的芫参藏药组合物在制备抗疲劳药物中的应用。
7.芫参颗粒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
a.将洗净干燥的芫根打磨粉碎，按质量比1:8-10加入纯水，煮沸提取1-1.5小时，固液分离；固体再按质量比1:8-10加入纯水，煮沸提取1-1.5小时，固液分离；合并两次滤液浓缩为芫根水提取物浸膏；
b.按芫根水提取物浸膏固含物的2-3倍加入麦芽糊精后喷雾干燥成粉末，为芫根提取物干粉；
c.取芫根提取物干粉60-65份，白砂糖20份，手掌参粉7-10份，西洋参粉7-10份，混合均匀后再加75％乙醇制备成软材，过20目筛成粒，干燥至水份小于5％即可。
8.根据权利要求7所述芫参颗粒的制备方法，其特征在于，步骤a中滤液浓缩至相对密度为1.10-1.25的芫根水提取物浸膏。
9.根据权利要求7所述芫参颗粒的制备方法，其特征在于，步骤c中芫根提取物干粉65份，白砂糖20份，手掌参粉7.5份，西洋参粉7.5份。
10.根据权利要求7所述芫参颗粒的制备方法，其特征在于，白砂糖、手掌参粉和西洋参粉均为100目。
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