CN116035993B - 一种具有舒缓功效的手掌参组合物及其制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种具有舒缓功效的手掌参组合物及其制备工艺，涉及中医药技术领域。所述手掌参组合物包含以下原料：白芍、手掌参、甘草、醋延胡索、郁金、姜黄和三七。所述原料的重量份数如下：白芍35‑60份、手掌参25‑35份、甘草10‑18份、醋延胡索10‑25份、郁金35‑45份、姜黄4‑15份和三七0.5‑8份。通过筛选白芍、手掌参、甘草、醋延胡索、郁金、姜黄和三七的配比，通过本申请的提取工艺，组方提取物实现了优异的抗氧化、舒缓作用，并提供了一种具有显著抗氧化及舒缓功效的手掌参组合物化妆品原料。
Description
技术领域
本发明涉及中医药技术领域，具体涉及一种具有舒缓功效的手掌参组合物及其制备工艺。
背景技术
手掌参也叫作藏三七、佛手参、兰、掌参、手儿参、阴阳参。手掌参外形肥厚，是一种很好的中药材，手掌参属于人参的一种，手掌参可以直接煎服饮用或者炖菜作为配料，都可以发挥其作用。手掌参是手掌参的干燥块茎，在夏秋季节采收，除去根须和泥土，然后晒干，放在牛奶中煮至透心，取出来就是我们常用的中药手掌参了。手掌参具有清热止渴、驱赶平川、滋阴补肾的功效。分布于东北、华北及陕西、宁夏、新疆、山西、内蒙古、四川等省区，生长在山野的阴坡、草甸、林间草地。
手掌参对人们有非常高的保健价值，可以增强体质、促进身体新陈代谢、有效抵抗疾病，还能帮助人们提高身体免疫力。手掌参滋补强壮、消瘀，治疗跌打损伤、疖肿等。手掌参还具有补肾益气、生津润肺、固本养生和强壮机体的作用，所以也被人们称为不老草。手掌参富含丰富的皂角茸、多种糖类、维生素、以及矿物质，是现代人不可多得大保健品。现代药理研究表明手掌参含有多糖、甙类、菲类和芪类等多种活性成分，具有抗过敏和免疫调节等多种药理作用。
专利CN 104906371 A公开了一种手掌参抗肿瘤提取物及其组合物的医药用途和制备方法以及它在制备预防及治疗脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤药物中的应用。所述的提取物通过如下方法获得：先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:0，体积比)洗脱，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比)洗脱，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂(二氯甲烷-甲醇，100:1，体积比)洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥即为该抗肿瘤活性提取物。
专利CN 101077390 B公开了一种手掌参提取物及在制备治疗肺纤维化药物中的应用，手掌参提取物是用下述方法制成：将手掌参生药粉碎后过筛，用所述手掌参生药粉重量4-10倍的体积百分比浓度为50-70％乙醇水溶液浸泡18-30小时后，加热回流提取0.5-3小时，过滤，所述提取次数为1-3次，合并滤液，滤液减压浓缩至50℃时相对密度为1.05-1.2，即制成一种手掌参提取物，经实验证明手掌参提取物对实验性矽肺具有一定的治疗作用，提示手掌参提取物在其它肺部纤维化病变也具有使用价值。
上述发明专利均涉及到手掌参提取物在医药领域的作用，但是并未涉及手掌参在抗氧化、舒缓方面的功效以及在化妆品领域可能的应用。本发明以抗氧化和舒缓功效为指标，首次将白芍、手掌参、甘草、醋延胡索、郁金、姜黄、三七等七种植物复配，在最优植物配比下，组方提取物抗氧化、舒缓功效达到最优，提供了一种具有显著抗氧化及舒缓功效的手掌参组合物化妆品原料，为其在化妆品中的应用提供依据。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有舒缓功效的手掌参组合物及其制备工艺，通过采用不同工艺制备组方提取物筛选最优制备工艺，并分别通过DPPH自由基抑制实验和COX-2体外抑制实验，检测组方提取物的抗氧化功效和舒缓功效。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一方面，本发明提供了一种具有舒缓功效的手掌参组合物，包含以下原料：白芍、手掌参、甘草、醋延胡索、郁金、姜黄和三七。
优选地，所述手掌参组合物按照重量份，包括白芍35-60份、手掌参25-35份、甘草10-18份、醋延胡索10-25份、郁金35-45份、姜黄4-15份和三七0.5-8份。
优选地，所述手掌参组合物包含以下原料：白芍50份、手掌参30份、甘草15份、醋延胡索15份、郁金42.5份、姜黄6份、三七1份或白芍40份、手掌参30份、甘草12.5份、醋延胡索22.5份、郁金37.5份、姜黄12份、三七5份；最优选地，所述组合物包含以下原料：白芍50份、手掌参30份、甘草15份、醋延胡索15份、郁金42.5份、姜黄6份、三七1份。
另一方面，本发明还提供上述具有舒缓功效的手掌参组合物的制备工艺，包含以下具体步骤：
1)白芍、手掌参、甘草、醋延胡索、郁金、姜黄和三七混合；
2)按照料液比1：15-25加入提取溶剂，提取得提取液；
3)提取液过滤、浓缩、冻干，得组方提取物。
优选地，步骤2)中所述的提取溶剂为醇类溶剂、水中的至少一种，进一步优选为乙醇、水中的至少一种，更进一步优选为70-80％乙醇，最优选为75％乙醇。
优选地，步骤2)所述得提取的具体方式为：95-105℃下热回流提取1-3h；进一步优选地，步骤2)所述得提取的具体方式为：100℃下热回流提取2h。
优选地，步骤2)中的料液比为组方药材：提取溶剂＝1：20。
再一方面，本发明提供一种化妆品，所述化妆品的有效成分包括上述制备方法获得的组方提取物。
所述化妆品还可包括本领域常规辅料、表面活性剂、添加剂，包括防腐剂、香精、色素、抗氧化剂、保湿剂、润滑剂中的至少一种。
最后，本发明提供上述手掌参组合物在制备舒缓、抗氧化化妆品中的应用。
优选地，上述化妆品包括面膜、精华液、面霜、身体乳、沐浴露、乳液、精华水、润肤霜中的至少一种。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
通过筛选白芍、手掌参、甘草、醋延胡索、郁金、姜黄、三七的配比，通过本申请的提取工艺，组方提取物实现了优异的抗氧化、舒缓功效，并提供了一种具有显著抗氧化及舒缓功效的手掌参组合物化妆品原料。
附图说明
图1为组方提取物1-10对DPPH的抑制率；
图2为组方提取物1-10对COX-2的抑制率。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，但下述实施例仅为本发明的优选实施例，并非全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本发明的保护范围。值得说明的是，本发明中使用的原料均为普通市售产品，对其来源不做具体限定。实施例中的所用的技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的含义。
实施例1：
称取白芍5g、手掌参3g、甘草1.5g、醋延胡索1.5g、郁金4.25g、姜黄0.6g、三七0.1g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：75％乙醇＝1：20，加入75％乙醇(乙醇：去离子水＝75％：25％)319g，100条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干，得到组方提取物1。
实施例2：
称取白芍5g、手掌参3g、甘草1.5g、醋延胡索1.5g、郁金4.25g、姜黄0.6g、三七0.1g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：去离子水＝1：20，加入去离子水319g，100条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干，得到组方提取物2。
实施例3：
称取白芍5g、手掌参3g、甘草1.25g、醋延胡索2.25g、郁金3.75g、姜黄0.6g、三七0.1g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：75％乙醇＝1：20，加入75％乙醇(乙醇：去离子水＝75％：25％)319g，100条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干，得到组方提取物3。
实施例4：
称取白芍5g、手掌参3g、甘草1.25g、醋延胡索2.25g、郁金3.75g、姜黄0.6g、三七0.1g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：去离子水＝1：20，加入去离子水319g，100条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干，得到组方提取物4。
实施例5：
称取白芍4g、手掌参3g、甘草1.25g、醋延胡索2.25g、郁金3.75g、姜黄1.2g、三七0.5g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：75％乙醇＝1：20，加入75％乙醇(乙醇：去离子水＝75％：25％)319g，100条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干，得到组方提取物5。
实施例6：
称取白芍4g、手掌参3g、甘草1.25g、醋延胡索2.25g、郁金3.75g、姜黄1.2g、三七0.5g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：去离子水＝1：20，加入去离子水319g，100条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干，得到组方提取物6。
对比例1：
称取手掌参10g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：75％乙醇＝1：20，加入75％乙醇(乙醇：去离子水＝75％：25％)200g，100条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干，得到组方提取物7。
对比例2：
称取手掌参10g于三口烧瓶中，按照料液比药材：去离子水＝1：20，加入去离子水200g，100条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干，得到组方提取物8。
对比例3：
称取白芍5g、佛手3g、甘草1.5g、醋延胡索1.5g、郁金4.25g、姜黄0.6g、三七0.1g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：75％乙醇＝1：20，加入75％乙醇(乙醇：去离子水＝75％：25％)319g，100条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干，得到组方提取物9。
对比例4：
称取白芍6.2g、甘草1.8g、醋延胡索1.8g、郁金5.25g、姜黄0.75g、三七0.15g于三口烧瓶中，按照料液比组方药材：75％乙醇＝1：20，加入75％乙醇(乙醇：去离子水＝75％：25％)319g，100条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液浓缩冻干，得到组方提取物10。
DPPH自由基抑制实验
1)DPPH乙醇溶液的配置：
称取20mg DPPH，加入无水乙醇溶解并定容于250mL容量瓶中，DPPH浓度配制为2×10-4mol/L；0-4℃下避光保存，现配现用，4h内有效。(阳性对照选用维生素C)
2)待测液的配置：
取提取物1-8用无水乙醇配制得0.5mg/mL、0.1mg/mL浓度的待测溶液。
3)实验步骤：
按表1加入各试剂。
1)取1mL的待测液与1mL的2×10-4mol/L的DPPH溶液混匀(A管)；
2)取1mL的溶剂与1mL的2×10-4mol/L的DPPH溶液混匀(B管)；
3)取1mL的溶剂与1mL的待测液混匀(C管)；
4)避光反应30min后，在517nm下测A、B、C管吸光度值。
表1试剂配比表
DPPH自由基抑制率计算公式：DPPH抑制率(％)＝(B+C-A)/B
表2组方提取物1-10对DPPH的抑制率
结果显示，组合物提取物能够显著抑制DPPH自由基，且组方提取物1抑制作用最显著，具有显著抗氧化功效。
COX-2体外抑制实验
用COX-2试剂盒测试不同样品对COX-2的抑制率，具体操作根据厂家提供的使用说明：
(1)配制样品培养基：将样品用DMSO稀释至待测浓度(100μg/mL)。
(2)试剂配制：
a.融解除rhCOX-2以外的其它所有试剂至室温，略离心使溶液沉淀至管底，再混匀备用。COX-2Probe、COX-2Cofactor(50X)和COX-2Substrate(50X)配制在DMSO中，可37℃水浴0.5-2min促进融解。使用完毕后宜立即-20℃避光保存。
b.COX-2Cofactor工作液的配制：按照每个样品需要5微升COX-2Cofactor工作液的比例配制适量的COX-2Cofactor工作液。取适量的COX-2Cofactor(50X)，按照1:49的比例用COX-2Assay Buffer稀释。例如4微升COX-2Cofactor(50X)加入196微升COX-2AssayBuffer配制成200微升COX-2Cofactor工作液。配制好的COX-2Cofactor工作液可4℃存放，仅限当日使用。
c.COX-2工作液的配制：按照每个样品需5微升COX-2工作液的比例配制适量的COX-2工作液。取适量的rhCOX-2(25X)(rh-recombinant human，重组)，按照1:24的比例用COX-2Assay Buffer(缓冲液)稀释。例如8微升rhCOX-2(25X)(rh-recombinant human，重组)加入192微升COX-2Assay Buffer配制成200微升COX-2工作液。配制好的COX-2工作液可在冰浴上暂时保存，1小时内酶活性基本稳定。注：所有涉及COX-2的操作应在冰上进行。
d.COX-2Substrate工作液的配制：按照每个样品需5微升COX-2Substrate(底物)工作液的比例配制适量的COX-2Substrate(底物)工作液。取适量的COX-2Substrate(50X)，加入等体积的Substrate Buffer，充分涡旋混匀，该混合物再按照1:24的比例用Milli-Q级纯水(超纯水)或重蒸水稀释，充分涡旋混匀。例如20微升COX-2Substrate(50X)加入20微升Substrate Buffer，涡旋混匀后，再加入960微升Milli-Q级纯水或重蒸水，再充分涡旋混匀，最终获得1毫升COX-2Substrate工作液。配制好的COX-2Substrate工作液可在冰浴上暂时保存，1小时内较为稳定。注：COX-2Substrate工作液也可在样品检测时37℃孵育10分钟的过程中配制。
e.阳性抑制剂Celecoxib(塞来昔布)溶液的配制：本试剂盒提供的阳性对照抑制剂Celecoxib浓度为100μM，配制在DMSO中，可以根据需要使用与待测抑制剂一样的溶剂稀释成所需浓度或浓度梯度。通常Celecoxib(塞来昔布)的IC50约为10nM-100nM。
(3)样品检测：
a.参考表3，使用96孔黑板设置对照孔和样品孔，并按照下表依次加入样品和各溶液。加入待测样品后，混匀，37℃孵育10分钟。
表3试剂配比表
注：*样品溶剂是指配制和稀释待测抑制剂所用的溶剂。
b.各孔加入COX-2Probe(探针)5微升。
c.各孔快速加入COX-2Substrate工作液5微升，混匀。注：加入COX-2Substrate工作液后反应即会开始，如果孔数较多，可以在低温操作或使用排枪操作以减小各孔间加入COX-2Substrate工作液的时间差而导致的误差，混匀也可以在培养板振荡器上进行。
d.37℃避光孵育5分钟后进行荧光测定。激发波长为560nm，发射波长为590nm。当荧光读数偏低时，也可适当延长孵育时间至10-20分钟。
(4)计算：
a.计算每个样品孔和空白对照孔的平均荧光值，可分别记录为RFU(相对荧光单位)空白对照、RFU100％酶活性对照、RFU阳性抑制剂对照和RFU样品。RFU，RelativeFluorescence Unit(相对荧光单位)。
b.计算每个样品的抑制百分率。计算公式如下：
抑制率(％)＝(RFU100％酶活性对照-RFU样品)/(RFU100％酶活性对照-RFU空白对照)×100％
(5)COX-2抑制率检测结果
表4组方提取物1-10对COX-2的抑制率
| 样品编号 | COX-2抑制率(％) | SD |
| 组方提取物1 | 105.67 | 6.02 |
| 组方提取物2 | 67.72 | 2.14 |
| 组方提取物3 | 86.50 | 2.74 |
| 组方提取物4 | 14.93 | 2.11 |
| 组方提取物5 | 95.80 | 2.63 |
| 组方提取物6 | 97.74 | 5.81 |
| 组方提取物7 | 70.24 | 1.97 |
| 组方提取物8 | 69.26 | 2.58 |
| 组方提取物9 | 79.33 | 3.7 |
| 组方提取物10 | 77.26 | 3.64 |
| 阳性对照组 | 97.83 | 3.22 |
结果显示，组合物提取物对COX-2具有抑制作用，且组方提取物1抑制作用最显著，具有显著舒缓功效。
以上结果表明，将白芍、手掌参、甘草、醋延胡索、郁金、姜黄、三七等七种植物复配，并筛选其最优植物配比，组方提取物具有最显著抗氧化及舒缓功效。本专利首次提供了一种具有显著抗氧化及舒缓功效的手掌参组合物，为其作为化妆品原料应用提供依据。
最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (8)
1.一种具有舒缓功效的手掌参组合物，其特征在于，所述手掌参组合物包含以下原料：白芍、手掌参、甘草、醋延胡索、郁金、姜黄和三七；
所述手掌参组合物按照重量份包含以下原料：白芍35-60份、手掌参25-35份、甘草10-18份、醋延胡索10-25份、郁金35-45份、姜黄4-15份和三七0.5-8份；
所述手掌参组合物为所述原料的提取物，所述提取物的提取溶剂为70%-80%乙醇。
2.根据权利要求1所述的一种具有舒缓功效的手掌参组合物，其特征在于，所述手掌参组合物按照重量份包含以下原料：白芍50份、手掌参30份、甘草15份、醋延胡索15份、郁金42.5份、姜黄6份、三七1份或白芍40份、手掌参30份、甘草12.5份、醋延胡索22.5份、郁金37.5份、姜黄12份、三七5份。
3.一种具有舒缓功效的手掌参组合物的制备工艺，其特征在于，包含以下具体步骤：
1）白芍、手掌参、甘草、醋延胡索、郁金、姜黄和三七混合；
2）按照料液比1：15-25加入提取溶剂，提取得提取液；
3）提取液过滤、浓缩、冻干，得组方提取物；
步骤1）中所述的白芍、手掌参、甘草、醋延胡索、郁金、姜黄和三七的重量份为：白芍35-60份、手掌参25-35份、甘草10-18份、醋延胡索10-25份、郁金35-45份、姜黄4-15份和三七0.5-8份；
步骤2）中所述的提取溶剂为70%-80%乙醇。
4.根据权利要求3所述的一种具有舒缓功效的手掌参组合物的制备工艺，其特征在于，步骤2）所述的提取的具体方式为：95-105℃下热回流提取1-3h。
5.根据权利要求3所述的一种具有舒缓功效的手掌参组合物的制备工艺，其特征在于，步骤2）中的料液比为组方药材：提取溶剂=1：20。
6.根据权利要求1-2任一项所述的手掌参组合物在制备舒缓、抗氧化化妆品中的应用。
7.一种化妆品，其特征在于，所述化妆品的有效成分包括权利要求3-5任一项所述的制备工艺制备得到的组方提取物。
8.根据权利要求7所述的一种化妆品，其特征在于，所述化妆品包括面膜、精华液、面霜、沐浴露、乳液、润肤霜中的至少一种。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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