CN116172192A - 一种高活性复合酵素粉及其制备方法 - Google Patents
一种高活性复合酵素粉及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及营养膳食补充剂技术领域，具体涉及一种复合酵素粉，按重量份计包括:植物料50‑60份、菌粉1‑2份、复合酶6‑8份、麦芽糊精15‑19份、酵母抽提物14‑15份、L‑苹果酸2.1‑2.6份、磷脂1.3‑1.8份、蔗糖素0.05‑0.08份。本发明提供了一种口感好且无毒性，易吸收的复合酵素粉，营养全面，可长期饮用。
Description
技术领域
本发明涉及营养膳食补充剂技术领域，，具体为一种高活性复合酵素粉及其制备方法。
背景技术
从生物化学的角度理解，酵素是生物体产生、具有催化作用的生物活性大分子。生物体内的各种酶互相协同，共同协调参与人体的新陈代谢、能量摄取、成长和繁殖等生命现象，能够保证生物体生命活动有条不紊地进行。从食品角度解释，酵素是以乳酸菌等益生菌发酵蔬菜、果品而成的一种富含生物酶(蛋白酶、脂肪酶和超氧化物歧化酶)及乳酸、醋酸和少量乙醇等代谢产物的一种功能食品。
酵素作为新一代保健饮品，深受广大消费者的青睐，益生菌发酵产生的营养因子与原料的营养成分，再加上益生菌的生物活性，使得酵素成为热门时尚的健康饮品，在市场蕴含着巨大的需求空间和市场商机。例如公告号为CN106213488A的发明专利公开了一种高活性多种类酵素粉末产品的制备方法，该技术方案中，通过将发酵菌种接入到发酵浆料中，通过三个阶段的发酵，历时30d左右的时间，可以使发酵浆料中的有效成分充分释放出来，从而获得高营养价值的酵素粉；但是在上述技术方案中，发酵浆料的发酵周期过长，不仅增加了酵素粉的生产成本，而且在长时间的发酵过程中，随着微生物的生长，发酵浆料中的部分物质被微生物当作碳源利用，导致其它营养成分的比例发生改变，从而导致发酵后其化学成分的含量发生变化，并且随着发酵时间的延长，微生物为了自身的繁殖也会不断消耗营养物质，从而造成形成的酵素营养价值未能最大化。
发明内容
针对现有技术中存在的缺陷，本发明提供一种高活性复合酵素粉及其制备方法，通过将菌粉在磁场环境下进行培养后，加入到发酵罐中，再向发酵罐中加入磁性复合纳米颗粒后，将发酵罐处于磁场环境下进行发酵，促进菌体的繁殖，提高发酵效率，从而达到缩短发酵周期的效果，不仅降低了酵素粉的生产成本，而且使得形成的酵素粉中营养成分最多，也最具有活性，从而使得酵素粉的营养价值最大化。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案:
一种高活性复合酵素粉，包括如下重量份原料:植物料50-60份、菌粉1-2份、复合酶6-8份、麦芽糊精15-19份、酵母抽提物14-15份、L-苹果酸2.1-2.6份、磷脂1.3-1.8份、蔗糖素0.05-0.08份。
作为本发明的进一步优选方案，所述植物料包括芹菜、木瓜、蔓越莓、甜菜根、结球甘蓝、蓝莓、钝顶螺旋藻，其中，芹菜:木瓜:蔓越莓:甜菜根:结球甘蓝:蓝莓:钝顶螺旋藻的质量比为(13.2-13.8):(10.0-10.6):(9.2-9.5):(8.1-8.4):(6.3-6.7):(4.2-4.9):(4.1-4.5)。
作为本发明的进一步优选方案，所述菌粉包括酵母菌、醋酸菌，其中，酵母菌:醋酸菌质量的比为1:(1-2)；
所述复合酶包括菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶，其中，菠萝蛋白酶:无花果蛋白酶的质量比为(3.3-3.7):(3.0-3.5)。
一种高活性复合酵素粉的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：将植物料、麦芽糊精放入粉碎机中进行粉碎，收集粉碎料，将粉碎料与水按质量比1:3-6混合均匀，放入容器中，进行蒸煮，降温，静置，得到预处理料；
步骤2：将预处理料和复合酶混合均匀，并置于发酵罐中，然后将菌粉经过培养后，加入到发酵罐中，然后再加入磁性复合纳米颗粒，密封后在30-35℃下，以300-500r/min进行搅拌发酵20-30h，在发酵过程中，将发酵罐处于磁场环境下，待发酵结束后，经磁选将磁性复合纳米颗粒去除，再经过滤，收集滤液；
步骤3：将滤液、酵母抽提物、L-苹果酸、磷脂以及蔗糖素进行搅拌分散，将混合液进行冷冻干燥，收集干燥物，即得高活性复合酵素粉。
作为本发明的进一步优选方案，
所述磁性复合纳米颗粒占预处理料总质量的5-8％；
所述发酵过程中，磁场环境的磁场强度为120-160mT；
所述发酵过程中，通气量为1:0.3-0.6vvm。
作为本发明的进一步优选方案，所述菌粉经过培养，具体方法如下:
将菌粉先在10-20mL液体培养基中，36-38℃、200-260rpm条件下培养过夜，然后用液体培养基进行稀释，得到10-30倍稀释菌液，然后取10-50μL的稀释菌液点到固体培养基上，密封好后，倒置在永磁体的磁极进行培养，在36-38℃条件下培养10-15h，待培养结束后，从固体培养基收集菌体，然后液氮速冻即可。
更进一步，所述液体培养配方如下:蛋白胨10-15g/L，酵母粉5-8g/L，氯化钠10-13g/L；
所述固体培养配方如下:蛋白胨10-15g/L，酵母粉5-8g/L，氯化钠10-13g/L，琼脂粉15-18g/L；
所述永磁体为钕铁硼磁体，N极和S极表面的平均磁场强度为80-100mT；
所述培养过程中，阶梯式调整培养皿与永磁体N极的距离，先将二者的距离调整为1-2cm，培养1-3h，然后调整至2-3cm，继续培养3-5h，再调整至3-4cm，继续培养2-4h，最后调整至1-2cm，培养1-2h即可。
作为本发明的进一步优选方案，所述磁性复合纳米颗粒的制备方法如下:
步骤一：将适量的六水合三氯化铁溶解于去离子水中，边搅拌边向溶液中加入乙酰丙酮甲醇溶液，再加入醋酸钠水溶液，混匀后在70-76℃油浴中搅拌30-50min，冷却至室温后置于冰箱中，析出沉淀，经过滤、水洗、抽滤后，用甲醇水溶液重结晶，得到晶状产物，备用；
步骤二：将适量的1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐和晶状产物加入高压反应釜中，密闭后充入氮气，在250-260℃下，以1000-1300r/min搅拌反应10-13h，待反应结束后降至室温，向体系中加入硫酸亚铁溶液和硫酸锌溶液，置于水浴振荡箱中，加入硼氢化钠，充分反应30-50min，待反应结束后，将得到的产物用无水乙醇和去离子水反复清洗，烘干后得到磁性复合纳米颗粒。
更进一步，上述步骤一中，所述六水合三氯化铁、去离子水、乙酰丙酮甲醇溶液、醋酸钠水溶液的用量比例为(25-30)g:(50-80)mL:(80-120)mL:(45-50)mL；
所述乙酰丙酮甲醇溶液的浓度为35-37wt％；
所述醋酸钠水溶液的浓度为90-93wt％。
更进一步，上述步骤二中，所述1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、晶状产物、硫酸亚铁溶液、硫酸锌溶液以及硼氢化钠的用量比例为(8-12)g:(1-3)g:(5-10)mL:(6-12)mL:(5-7)g；
所述硫酸亚铁溶液的浓度为3-6wt％；
所述硫酸锌溶液的浓度为2-4wt％；
所述充入氮气后的压强为0.2-0.3MPa；
所述水浴振荡箱中的反应条件为:温度30-35℃，转速120-160r/min。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明中，通过将菌粉在磁场环境下进行培养，利用均匀静磁场对菌体有刺激生长作用，可以减缓菌体的衰亡速率，延长其世代时间，并且还可以促进菌体的吸收和排泄，提高机体吸收酶分解产物的能力，从而有助于提高菌体的活力，提高菌体在后期发酵过程中的发酵速率，而且利用磁场环境进行菌体培养，还可以起到筛选的作用，可以将该磁场强度下的生长受到抑制的部分菌体筛除，从而使得培养获得的菌体可以在该磁场强度下正常生长；同时，为了使经过磁场环境下培养的菌体可以充分发挥高效率发酵的功效，本发明中将发酵罐置于磁场环境下，利用磁场对不同微生物具有不同的生长影响，可以加快发酵罐中滋生的生长受到抑制的微生物的衰亡速率，促进其死亡，从而可以减少发酵罐中杂质微生物的数量，从而可以为经过培养的菌体提供事宜的生长环境，促进菌体的繁殖，从而提高发酵效率。
本发明中，为了进一步促进发酵罐中菌体的生长以及提高复合酶的活性，以纳米四氧化三铁作为核体，通过将纳米锌和纳米铁包覆在纳米四氧化三铁表面，从而形成核壳结构的磁性复合纳米颗粒，该磁性复合纳米颗粒中表面负载的纳米锌和纳米铁，可以被蛋白质包裹并与其结合，或停留在细胞表面，附着在细胞表面的纳米颗粒可以与细胞膜上的酶或受体蛋白发生作用，还能作为微生物细胞进行胞外呼吸的末端电子受体，从而有利于细胞间和细胞内的电子传递，促进有机物的氧化，从而促进微生物的代谢过程，从而促进菌体的生长和提高复合酶的活性，从而有利于预处理料的发酵和酶解，加快预处理料中有效成分的析出，从而提高预处理料中有效成分的获取量，有助于提高酵素粉的营养价值；并且该磁性复合纳米颗粒具有一定的磁性，可以通过后期的磁选去除干净，从而不会在酵素粉中引入杂质，使得获得的酵素粉纯度高、营养价值丰富。
本发明中获得的复合酵素粉是一种营养膳食补充剂，通过将植物料和麦芽糊精经发酵、酶解后与酵母抽提物、L-苹果酸、磷脂以及蔗糖素进行冷冻干燥，获得的复合酵素粉不仅具有丰富的膳食纤维，可以吸收并保持水分，增加粪便质量，也为有益于人体的大肠细菌和微生物群提供营养，并代谢产生短链脂肪酸，有益于缓解肠易激复合症的症状，而且具有健脾养胃，促进消化，增强肠道蠕动，润肠通便的作用，可预防和改善便秘，而且还具有清热解毒，抗菌消炎，利尿消肿的作用，可改善胃肠炎症和增强肝脏解毒作用，并且复合酵素粉具有抗氧化、抗疲劳、补充神经营养素，增强代谢作用，可提高机体免疫力，保护视力，养颜抗衰。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种高活性复合酵素粉，包括如下重量份原料:植物料50份、菌粉1份、复合酶6份、麦芽糊精15份、酵母抽提物14份、L-苹果酸2.1份、磷脂1.3份、蔗糖素0.05份；
其中，植物料包括芹菜、木瓜、蔓越莓、甜菜根、结球甘蓝、蓝莓、钝顶螺旋藻，芹菜:木瓜:蔓越莓:甜菜根:结球甘蓝:蓝莓:钝顶螺旋藻的质量比为13.2:10.0:9.2:8.1:6.3:4.2:4.1；
菌粉包括酵母菌、醋酸菌，酵母菌:醋酸菌的质量比为1:1；
复合酶包括菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶，菠萝蛋白酶:无花果蛋白酶的质量比为3.3:3.0。
一种高活性复合酵素粉的制备方法，包括如下步骤:
1)将植物料、麦芽糊精放入粉碎机中进行粉碎，收集粉碎料，将粉碎料与水按质量比1:3混合均匀，放入容器中，进行蒸煮，降温，静置，得到预处理料；
2)将预处理料和复合酶混合均匀，并置于发酵罐中，然后将菌粉经过培养后，加入到发酵罐中，然后再加入占预处理料总质量5％的磁性复合纳米颗粒，密封后在30℃下，以300r/min进行搅拌发酵20h，在发酵过程中，将发酵罐处于磁场强度为120mT的磁场环境下，通气量为1:0.3vvm，待发酵结束后，经磁选将磁性复合纳米颗粒去除，再经过滤，收集滤液；
3)将滤液、酵母抽提物、L-苹果酸、磷脂以及蔗糖素进行搅拌分散，将混合液进行冷冻干燥，收集干燥物，即得高活性复合酵素粉。
其中，上述菌粉经过培养，具体方法如下:
将菌粉先在10mL液体培养基中，36℃、200rpm条件下培养过夜，然后用液体培养基进行稀释，得到10倍稀释菌液，然后取10μL的稀释菌液点到固体培养基上，密封好后，倒置在永磁体的磁极进行培养，在36℃条件下培养10h，待培养结束后，从固体培养基收集菌体，然后液氮速冻即可；
其中，液体培养配方如下:蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L；
固体培养配方如下:蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L，琼脂粉15g/L；
永磁体为钕铁硼磁体，N极和S极表面的平均磁场强度为80mT；
在培养过程中，阶梯式调整培养皿与永磁体N极的距离，先将二者的距离调整为1cm，培养1h，然后调整至2cm，继续培养3h，再调整至3cm，继续培养2h，最后调整至1cm，培养1h即可。
其中，上述磁性复合纳米颗粒的制备方法如下:
1)将25g六水合三氯化铁溶解于50mL去离子水中，边搅拌边向溶液中加入80mL浓度为35wt％的乙酰丙酮甲醇溶液，再加入45mL浓度为90wt％的醋酸钠水溶液，混匀后在70℃油浴中搅拌30min，冷却至室温后置于冰箱中，析出沉淀，经过滤、水洗、抽滤后，用甲醇水溶液重结晶，得到晶状产物，备用；
2)将8g1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐和1g晶状产物加入高压反应釜中，密闭后充入氮气，控制压强为0.2MPa，在250℃下，以1000r/min搅拌反应10h，待反应结束后降至室温，向体系中加入5mL浓度为3wt％的硫酸亚铁溶液和6mL浓度为2wt％的硫酸锌溶液，置于30℃，120r/min水浴振荡箱中，加入5g硼氢化钠，充分反应30min，待反应结束后，将得到的产物用无水乙醇和去离子水反复清洗，烘干后得到磁性复合纳米颗粒。
实施例2
一种高活性复合酵素粉，包括如下重量份原料:植物料55份、菌粉1.5份、复合酶7份、麦芽糊精16份、酵母抽提物15份、L-苹果酸2.3份、磷脂1.5份、蔗糖素0.06份；
其中，植物料包括芹菜、木瓜、蔓越莓、甜菜根、结球甘蓝、蓝莓、钝顶螺旋藻，质量比为13.5:10.3:9.4:8.3:6.5:4.5:4.3；
菌粉包括酵母菌、醋酸菌，质量比为1:1.5；
复合酶包括菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶，质量比为3.5:3.2。
一种高活性复合酵素粉的制备方法，包括如下步骤:
1)将植物料、麦芽糊精放入粉碎机中进行粉碎，收集粉碎料，将粉碎料与水按质量比1:5混合均匀，放入容器中，进行蒸煮，降温，静置，得到预处理料；
2)将预处理料和复合酶混合均匀，并置于发酵罐中，然后将菌粉经过培养后，加入到发酵罐中，然后再加入占预处理料总质量7％的磁性复合纳米颗粒，密封后在32℃下，以400r/min进行搅拌发酵25h，在发酵过程中，将发酵罐处于磁场强度为150mT的磁场环境下，通气量为1:0.5vvm，待发酵结束后，经磁选将磁性复合纳米颗粒去除，再经过滤，收集滤液；
3)将滤液、酵母抽提物、L-苹果酸、磷脂以及蔗糖素进行搅拌分散，将混合液进行冷冻干燥，收集干燥物，即得高活性复合酵素粉。
其中，上述菌粉经过培养，具体方法如下:
将菌粉先在15mL液体培养基中，37℃、240rpm条件下培养过夜，然后用液体培养基进行稀释，得到20倍稀释菌液，然后取30μL的稀释菌液点到固体培养基上，密封好后，倒置在永磁体的磁极进行培养，在37℃条件下培养13h，待培养结束后，从固体培养基收集菌体，然后液氮速冻即可；
其中，液体培养配方如下:蛋白胨12g/L，酵母粉7g/L，氯化钠11g/L；
固体培养配方如下:蛋白胨12g/L，酵母粉7g/L，氯化钠11g/L，琼脂粉16g/L；
永磁体为钕铁硼磁体，N极和S极表面的平均磁场强度为90mT；
在培养过程中，阶梯式调整培养皿与永磁体N极的距离，先将二者的距离调整为1.5cm，培养2h，然后调整至2.5cm，继续培养4h，再调整至3.5cm，继续培养3h，最后调整至1.5cm，培养1h即可。
其中，上述磁性复合纳米颗粒的制备方法如下:
1)将28g六水合三氯化铁溶解于70mL去离子水中，边搅拌边向溶液中加入100mL浓度为36wt％的乙酰丙酮甲醇溶液，再加入46mL浓度为92t％的醋酸钠水溶液，混匀后在73℃油浴中搅拌40min，冷却至室温后置于冰箱中，析出沉淀，经过滤、水洗、抽滤后，用甲醇水溶液重结晶，得到晶状产物，备用；
2)将10g1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐和2g晶状产物加入高压反应釜中，密闭后充入氮气，控制压强为0.25MPa，在255℃下，以1200r/min搅拌反应12h，待反应结束后降至室温，向体系中加入7mL浓度为5wt％的硫酸亚铁溶液和10mL浓度为3wt％的硫酸锌溶液，置于32℃，140r/min水浴振荡箱中，加入6g硼氢化钠，充分反应40min，待反应结束后，将得到的产物用无水乙醇和去离子水反复清洗，烘干后得到磁性复合纳米颗粒。
实施例3
一种高活性复合酵素粉，包括如下重量份原料:植物料60份、菌粉2份、复合酶8份、麦芽糊精19份、酵母抽提物15份、L-苹果酸2.6份、磷脂1.8份、蔗糖素0.08份；
其中，植物料包括芹菜、木瓜、蔓越莓、甜菜根、结球甘蓝、蓝莓、钝顶螺旋藻，质量比为13.8:10.6:9.5:8.4:6.7:4.9:4.5；
菌粉包括酵母菌、醋酸菌，质量比为1:2；
复合酶包括菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶，质量比为3.7:3.5。
一种高活性复合酵素粉的制备方法，包括如下步骤:
1)将植物料、麦芽糊精放入粉碎机中进行粉碎，收集粉碎料，将粉碎料与水按质量比1:6混合均匀，放入容器中，进行蒸煮，降温，静置，得到预处理料；
2)将预处理料和复合酶混合均匀，并置于发酵罐中，然后将菌粉经过培养后，加入到发酵罐中，然后再加入占预处理料总质量8％的磁性复合纳米颗粒，密封后在35℃下，以500r/min进行搅拌发酵30h，在发酵过程中，将发酵罐处于磁场强度为160mT的磁场环境下，通气量为1:0.6vvm，待发酵结束后，经磁选将磁性复合纳米颗粒去除，再经过滤，收集滤液；
3)将滤液、酵母抽提物、L-苹果酸、磷脂以及蔗糖素进行搅拌分散，将混合液进行冷冻干燥，收集干燥物，即得高活性复合酵素粉。
其中，上述菌粉经过培养，具体方法如下:
将菌粉先在20mL液体培养基中，38℃、260rpm条件下培养过夜，然后用液体培养基进行稀释，得到30倍稀释菌液，然后取50μL的稀释菌液点到固体培养基上，密封好后，倒置在永磁体的磁极进行培养，在38℃条件下培养15h，待培养结束后，从固体培养基收集菌体，然后液氮速冻即可；
其中，液体培养配方如下:蛋白胨15g/L，酵母粉8g/L，氯化钠13g/L；
固体培养配方如下:蛋白胨15g/L，酵母粉8g/L，氯化钠13g/L，琼脂粉18g/L；
永磁体为钕铁硼磁体，N极和S极表面的平均磁场强度为100mT；
在培养过程中，阶梯式调整培养皿与永磁体N极的距离，先将二者的距离调整为2cm，培养3h，然后调整至3cm，继续培养5h，再调整至4cm，继续培养4h，最后调整至2cm，培养2h即可。
其中，上述磁性复合纳米颗粒的制备方法如下:
1)将30g六水合三氯化铁溶解于80mL去离子水中，边搅拌边向溶液中加入120mL浓度为37wt％的乙酰丙酮甲醇溶液，再加入50mL浓度为93wt％的醋酸钠水溶液，混匀后在76℃油浴中搅拌50min，冷却至室温后置于冰箱中，析出沉淀，经过滤、水洗、抽滤后，用甲醇水溶液重结晶，得到晶状产物，备用；
2)将12g1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐和3g晶状产物加入高压反应釜中，密闭后充入氮气，控制压强为0.3MPa，在260℃下，以1300r/min搅拌反应13h，待反应结束后降至室温，向体系中加入10mL浓度为6wt％的硫酸亚铁溶液和12mL浓度为4wt％的硫酸锌溶液，置于35℃，160r/min水浴振荡箱中，加入7g硼氢化钠，充分反应50min，待反应结束后，将得到的产物用无水乙醇和去离子水反复清洗，烘干后得到磁性复合纳米颗粒。
对比例1的酵素粉:对比例1与实施例1基本相同，不同之处在于，菌粉未经过培养，直接加入到发酵罐中。
对比例2的酵素粉:对比例2与实施例1基本相同，不同之处在于，发酵罐未处于磁场环境中。
对比例3的酵素粉:对比例3与实施例1基本相同，不同之处在于，发酵罐中未加入磁性复合纳米颗粒。
测试实验:
将实施例1-3的高活性复合酵素粉和对比例1-3的酵素粉分别与水按照质量比1:5进行搅拌混合，进行如下检测。
感官评定方法，50名成员组成感官评定小组进行感官评价，感官评分标准如下表所示，结果取平均值表示。
结果如下表:
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | |
| 风味 | 23.5 | 24.5 | 23.8 |
| 口感 | 23.9 | 24.8 | 24.1 |
| 对比例1 | 对比例2 | 对比例3 | |
| 风味 | 17.3 | 21.3 | 19.2 |
| 口感 | 17.6 | 21.7 | 19.9 |
SOD活力的测定:按照邻苯三酚自氧化法GB/T5009.171-2003《保健食品中超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定》操作，检测结果如下:
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | |
| SOD/(U/mL) | 1126.5 | 1216.3 | 1167.2 |
| 对比例1 | 对比例2 | 对比例3 | |
| SOD/(U/mL) | 813.5 | 1037.6 | 986.2 |
通过上述测试结果可知，本发明中的高活性复合酵素粉的制备方法，可以使物料中的有效成分得到充分释放，提高了物料的利用率，使得制备的高活性复合酵素粉，不仅风味、口感适宜，而且SOD含量高，使得复合酵素粉具有很好的营养价值。
将实施例1-3和对比例1-3中步骤2)所得的滤液进行蛋白酶活力、淀粉酶活力、纤维素酶活力和脂肪酶活力的测试分。
蛋白酶活力的定义：1mL酶液，在40℃、pH为7.0条件下，1min水解酪蛋白产生1μg酪氨酸，定义为一个蛋白酶活力单位。采用GB/T 23527-2009蛋白酶制剂酶活力测方法测定。
淀粉酶活力定义：1mL酶液，在40℃、pH为7.0条件下，1h液化1g可溶性淀粉，即为1个淀粉酶活力单位。采用国标GB 24401-2009中规定的碘比色法测定。
脂肪酶活力定义：1mL酶液，在40℃、pH为7.0条件下，1min水解底物产生1μmol可滴定脂肪酸，即为1个酶活力单位。采用国标GB 23535-2009中规定的酸碱滴定法测定。
纤维素酶活力定义：1mL酶液，在40℃、pH为7.0条件下，每分钟水解滤纸片，产生1.0μg的葡萄糖，即为1个纤维素酶活单位。采用国标GB 23881-2009中规定的滤纸片法测定。
实施例1的混合液中：中性蛋白酶活力为594±2％U/mL，淀粉酶活力为15.6±2％U/mL，纤维素酶活力为5±2％U/mL，脂肪酶活力为25±2％U/mL。
实施例2的混合液中：中性蛋白酶活力为527±2％U/mL，淀粉酶活力为19±2％U/mL，纤维素酶活力为6.3±2％U/mL，脂肪酶活力为28±2％U/mL。
实施例3的混合液中：中性蛋白酶活力为411±2％U/mL，淀粉酶活力为16.7±2％U/mL，纤维素酶活力为5±2％U/mL，脂肪酶活力为25±2％U/mL。
对比例1的混合液中：中性蛋白酶活力为128±2％U/mL，淀粉酶活力为5.4±2％U/mL，纤维素酶活力为2.1±2％U/mL，脂肪酶活力为1.4±2％U/mL。
对比例2的混合液中：中性蛋白酶活力264±2％U/mL，淀粉酶活力为6±2％U/mL，纤维素酶活力为2.2±2％U/mL，脂肪酶活力为1.6±2％U/mL。
对比例3的混合液中：中性蛋白酶活力为188±2％U/mL，淀粉酶活力为4.8±2％U/mL，纤维素酶活力2±2％U/mL，无脂肪酶活力为1.2±2％U/mL。
将本发明实施例1-3制备的高活性复合酵素粉进行如下实验，用以表明所述复合酵素粉的效果。
案例1:
王某，男，74岁，排便困难，粪便量少且干硬，排便时间长，伴有直肠胀感或排便不尽感，而且食欲较差，不易消化，王先生服用本发明实施例1制得的复合酵素粉，每天500mg，连续服用1个月后，排便次数增多，并且排便较为顺畅，同时食欲变好，消化吸收也得到改善。
案例2:
李某，女，37岁，工作压力大，经常熬夜加班，导致皮肤干燥、长痘痘、浮肿，并且经常感觉乏力、不思饮食，李女士服用本发明实施例1制得的复合酵素粉，每天500mg，连续服用2个月后，肤色有明显好转，乏力感消失，食欲也有所增强。
案例3:
张某，女，25岁，体质虚弱差，精气神较差，并且容易昏睡，以及做噩梦并伴随盗汗，张女士服用本发明的复合酵素粉，每天500mg，连续服用2个月后，
体质明显增强，并且精气神得到明显改善。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。
Claims (10)
1.一种复合酵素粉，其特征在于，按重量份计包括:植物料50-60份、菌粉1-2份、复合酶6-8份、麦芽糊精15-19份、酵母抽提物14-15份、L-苹果酸2.1-2.6份、磷脂1.3-1.8份、蔗糖素0.05-0.08份。
2.根据权利要求1所述的复合酵素粉，其特征在于，所述植物料包括芹菜、木瓜、蔓越莓、甜菜根、结球甘蓝、蓝莓、钝顶螺旋藻，质量比为(13.2-13.8):(10.0-10.6):(9.2-9.5):(8.1-8.4):(6.3-6.7):(4.2-4.9):(4.1-4.5)。
3.根据权利要求1所述的复合酵素粉，其特征在于，所述菌粉包括酵母菌、醋酸菌，二者的质量比为1:(1-2)；
所述复合酶包括菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶，二者的质量比为(3.3-3.7):(3.0-3.5)。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的复合酵素粉的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：将植物料、麦芽糊精放入粉碎机中进行粉碎，收集粉碎料，将粉碎料与水按质量比1:3-6混合均匀，放入容器中，进行蒸煮，降温，静置，得到预处理料；
步骤2：将预处理料和复合酶混合均匀，并置于发酵罐中，然后将菌粉经过培养后，加入到发酵罐中，然后再加入磁性复合纳米颗粒，密封后在30-35℃下，以300-500r/min进行搅拌发酵20-30h，在发酵过程中，将发酵罐处于磁场环境下，待发酵结束后，经磁选将磁性复合纳米颗粒去除，再经过滤，收集滤液；
步骤3：将滤液、酵母抽提物、L-苹果酸、磷脂以及蔗糖素进行搅拌分散，将混合液进行冷冻干燥，收集干燥物，即得高活性复合酵素粉。
5.根据权利要求4所述的复合酵素粉的制备方法，其特征在于，
所述磁性复合纳米颗粒占预处理料总质量的5-8％；
所述发酵过程中，磁场环境的磁场强度为120-160mT；
所述发酵过程中，通气量为1:0.3-0.6vvm。
6.根据权利要求4所述的复合酵素粉的制备方法，其特征在于，所述菌粉经过培养，具体方法如下:
将菌粉先在10-20mL液体培养基中，36-38℃、200-260rpm条件下培养过夜，然后用液体培养基进行稀释，得到10-30倍稀释菌液，然后取10-50μL的稀释菌液点到固体培养基上，密封好后，倒置在永磁体的磁极进行培养，在36-38℃条件下培养10-15h，待培养结束后，从固体培养基收集菌体，然后液氮速冻即可。
7.根据权利要求6所述的复合酵素粉的制备方法，其特征在于，所述液体培养配方如下:蛋白胨10-15g/L，酵母粉5-8g/L，氯化钠10-13g/L；
所述固体培养配方如下:蛋白胨10-15g/L，酵母粉5-8g/L，氯化钠10-13g/L，琼脂粉15-18g/L；
所述永磁体为钕铁硼磁体，N极和S极表面的平均磁场强度为80-100mT；
所述培养过程中，阶梯式调整培养皿与所述永磁体的N极的距离，先将二者的距离调整为1-2cm，培养1-3h，然后调整至2-3cm，继续培养3-5h，再调整至3-4cm，继续培养2-4h，最后调整至1-2cm，培养1-2h即可。
8.根据权利要求4所述的复合酵素粉的制备方法，其特征在于，所述磁性复合纳米颗粒的制备方法如下:
步骤一：将适量的六水合三氯化铁溶解于去离子水中，边搅拌边向溶液中加入乙酰丙酮甲醇溶液，再加入醋酸钠水溶液，混匀后在70-76℃油浴中搅拌30-50min，冷却至室温后置于冰箱中，析出沉淀，经过滤、水洗、抽滤后，用甲醇水溶液重结晶，得到晶状产物，备用；
步骤二：将适量的1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐和晶状产物加入高压反应釜中，密闭后充入氮气，在250-260℃下，以1000-1300r/min搅拌反应10-13h，待反应结束后降至室温，向体系中加入硫酸亚铁溶液和硫酸锌溶液，置于水浴振荡箱中，加入硼氢化钠，充分反应30-50min，待反应结束后，将得到的产物用无水乙醇和去离子水反复清洗，烘干后得到磁性复合纳米颗粒。
9.根据权利要求8所述的复合酵素粉的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，所述六水合三氯化铁、去离子水、乙酰丙酮甲醇溶液、醋酸钠水溶液的用量比例为(25-30)g:(50-80)mL:(80-120)mL:(45-50)mL；
所述乙酰丙酮甲醇溶液的浓度为35-37wt％；
所述醋酸钠水溶液的浓度为90-93wt％。
10.根据权利要求8所述的复合酵素粉的制备方法，其特征在于，所述步骤二中，所述1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、晶状产物、硫酸亚铁溶液、硫酸锌溶液以及硼氢化钠的用量比例为(8-12)g:(1-3)g:(5-10)mL:(6-12)mL:(5-7)g；
所述硫酸亚铁溶液的浓度为3-6wt％；
所述硫酸锌溶液的浓度为2-4wt％；
所述充入氮气后的压强为0.2-0.3MPa；
所述水浴振荡箱中的反应条件为:温度30-35℃，转速120-160r/min。
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