CN1253550C - 一株曲霉菌及利用其生产果酸钙的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一株曲霉菌菌株，该菌为曲霉菌属的黄曲霉菌(Aspergillus flavus)SFAH-4060，已于2004年8月4日在中国微生物菌种保藏管委会普通微生物中心(CGMCC)进行了保藏，保藏号为CGMCC No.1204。本发明还公开了利用该曲霉菌菌株生产果酸钙的方法，该方法以淀粉和碳酸钙为原料发酵，能直接生产柠檬酸和苹果酸复合果酸钙盐，明显降低了生产成本，发酵果酸产率达到90～100g/L(以苹果酸计)，转化率90%以上。
Description
技术领域
本发明属于微生物和生化工程领域，尤其涉及一株曲霉菌及利用其发酵淀粉质原料生产果酸钙的方法。
背景技术
钙是人体含量最多的一种无机元素，成年人体中钙约占体重的1.5～2％。人体中的钙99％的存在于骨骼和牙齿中，1％的存在于血液和细胞等软组织中，血液和细胞中的钙，担负着维持细胞正常生理活动，维持机体酸碱平衡，参与机体物质代谢等重要的生理功能。这部分钙主要通过与蛋白结合的形式参与各种生理过程。钙结合蛋白具有特异性、高亲和力，能够可逆地与钙相结合，广泛的存在于细胞内外，以其与钙亲和力的不同来感受或调节钙离子浓度，参与肌肉收缩、血液凝固、神经肌肉的应激性、毛细血管的渗透性等生理过程；参与酶的激活、激素分泌和代谢过程的催化、启动、运输、分泌等生理功能，维持人体细胞的正常生理状态。如肌钙蛋白C，有四个钙结合位点，参与肌肉的收缩和舒张。钙调蛋白存在于所有真核细胞浆内，有四个钙结合位点，负责调节核酸代谢、细胞分泌、细胞运动和增殖分裂。钙在机体内有第二信使之称，是生命活动的调节剂。钙在机体内需要维持一个正常生理水平，骨骼和牙齿是机体钙的储备库，在钙缺乏的情况下，机体将从骨骼和牙齿中通过骨钙动员，使钙质进入血液，维持血钙平衡，长期缺钙会引起骨质疏松等疾病。
人体所需的钙一般通过食物摄取，不同地区、不同的膳食结构摄取钙的量会有很大的差距，一般饮食不能满足人体对钙的需求，特别是正在生长的青少年和机能退化的中老年人，所以要适当食用强化钙产品来满足人体对钙的需求，保持身体健康。
目前市场上比较常见的补钙产品按钙源可以分为三大类：一是以碳酸钙为主要原料的无机钙强化剂，优点是含钙量高，价格便宜，缺点是碳酸钙可以中和胃酸，长期服用会引起胃涨、胃痛、食欲不振等不适。二是活性生物钙，一般以海洋生物牡蛎壳等为原料经高温煅烧而成，含钙量高，但水溶液是强碱性，对胃肠刺激性大，也有以动物骨骼为原料加工而成的生物钙，主要成分为羟基磷灰石，溶解度和吸收效果均不好，并且由于原料来源比较复杂，质量不易控制。三是有机钙强化剂，如葡萄糖酸钙、乳酸钙、醋酸钙等，优点是溶解度好，但含钙量低，吸收率低，须大量服用。
一种良好的钙营养强化剂应该钙含量高，吸收率和生物利用率好，安全无毒副作用，水溶液呈中性。近年来研制开发的果酸钙(柠檬酸-苹果酸复合钙盐)是一符合上述标准的新一代有机钙源。
果酸钙(柠檬酸-苹果酸钙(Calcium citrate malate简写成CCM))是钙、柠檬酸和苹果酸按一定比例配合生成的有机酸钙复合物，性质既不同于柠檬酸钙也不同于苹果酸钙，溶解度比两种钙盐都高，并且具有高生物学吸收利用性，能够减少铁吸收阻碍，而且风味好、安全无毒副作用。日本专利昭和56/097248(1981)介绍了一种生产CCM的方法：按一定摩尔比配制柠檬酸、苹果酸溶液，然后加碳酸钙50-60℃中和反应，分离结晶，110-120℃干燥。也可以用氯化钙和柠檬酸钠和苹果酸钠制备。美国专利47722847(1988)公布了一种强化钙的果汁的制作方法，该发明首先按照果汁的类型配制不同比例的柠檬酸和苹果酸溶液，加入一定量的碳酸钙或氧化钙、氢氧化钙，反应完全的溶液加入果汁调配罐调配强化钙果汁，这种果汁中的钙含量与牛奶中钙含量相当，大鼠饲喂实验证明吸收性和生物利用性都比牛奶好。美国专利5186965(1993)公布的CCM的制备方法是：首先配制一定摩尔比的柠檬酸和苹果酸溶液，然后加入碳酸钙或氧化钙、氢氧化钙至中和完全，反应温度40-60℃最佳，待反应充分，采用离心、过滤等方法进行固液分离，采用空气干燥或加热干燥、冷冻干燥等方法干燥，干燥温度不高于100℃，然后把干燥钙盐磨制成直径1mm以下的粉末。Patrick，L.(Alter Med Rev 1999Apr；4(2)：74-85)研究论文比较CCM和碳酸钙对骨质疏松的治疗作用，表明CCM有较高的生物学活性，能有效预防和治疗骨质疏松。Smith，K.T.等人实验表明CCM中钙的吸收好于碳酸钙和牛奶(Calcif Tissue Int 1987 Dec；41(6)：351-352)。
综合上述CCM的生产方法，一般是按照一定的比例配制柠檬酸和苹果酸混合溶液，然后加入碳酸钙或氧化钙或氢氧化钙中和，通过结晶或直接干燥法生产。所用苹果酸一般为DL-苹果酸，如采用L-苹果酸制造成本还会增加。经检索，关于利用微生物菌株发酵法生产果酸钙，特别是利用曲霉菌发酵淀粉质原料生产果酸钙的方法至今未见报道。
发明内容
针对上述现有技术的不足，本发明首先要解决的关键技术问题是分离选育出一种能高产复合果酸钙的菌株；同时本发明还要解决的技术问题是提出一种利用该选育的微生物菌株发酵生产和分离纯化果酸钙(柠檬酸-苹果酸复合钙盐)的方法。
本发明过程中涉及的技术方案详述如下：
按本领域技术人员已知的方法，从土壤中分离筛选积累少量的苹果酸和柠檬酸的原始菌株，经摇瓶发酵进行初、复筛得到SFA-208菌株，SFA-208菌株经紫外线照射、γ射线辐射和化学诱变剂(硫酸二乙酯、亚硝基胍等)处理获得一株高产柠檬酸和苹果酸复合果酸的菌株，实验室编号为SFAH-4060，该菌株生物学特性为：菌株分生孢子梗较短，顶端膨大呈囊状，上面生有类似保铃球瓶状小梗，小梗多为单层，瓶状小梗上生有3～5个分生孢子，孢子球形、梨形。该菌株能够利用葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、D-木糖、纤维二糖、棉子糖、D-甘露糖、L-山梨糖、甘露醇、淀粉、糊精等多种碳源。在察氏培养基上所述SFAH-4060菌株的培养特征，放置30℃培养2天有生长，菌落圆形，白色，直径0.5cm；培养4天，菌落圆形，表面生有淡黄色孢子，直径2cm左右；培养7天菌落圆形，表面孢子色泽不均匀，呈黄色到黄绿色，菌落直径约3-4cm；基内菌丝不产生色素。放置36℃培养2天有生长，菌落圆形，白色，直径0.5-1cm；培养四天，菌落直径3-4cm，孢子呈黄到黄绿色；培养7天，菌落直径约4cm，表面孢子色泽不均匀，呈黄到黄绿色；基内菌丝不产生色素。在麦芽汁培养基上所述SFAH-4060菌株的培养特征，放置30℃培养，培养2天，菌落圆形，直径约2cm，中间菌丝比较致密，周围菌丝向四周发散，表面有少量黄色孢子生成；培养4天菌落圆形，直径约5～6cm表面孢子呈绿色。培养7天，菌落布满9cm平板，表面平整长满绿色孢子，菌落中心约2cm呈绒毛状突起，菌落表面和背面可见从菌落中心向四周发散的沟纹。放置36℃培养，培养2天菌落圆形，直径约2.5-3cm，中间菌丝比较致密，周围菌丝向四周发散，表面有少量黄色孢子生成；培养4天菌落圆形，直径约5-6cm表面孢子呈绿色。培养7天，菌落布满9cm平板，表面平整长满暗绿色孢子，菌落中心约2cm呈绒毛状突起，菌落表面和背面可见从菌落中心向四周发散的沟纹。
根据相关文献鉴定：该菌属于曲霉菌属的黄曲霉菌(Aspergillus flavus)，已于2004年8月4日在中国微生物菌种保藏管委会普通微生物中心(CGMCC)进行了保藏，保藏中心地址为北京市中关村中国科学院微生物所内，邮政编码为100080，保藏号为CGMCC No.1204。
上述的黄曲霉菌(Aspergillus flavus)SFAH-4060保藏号CGMCC NO.1204在含如下配比的种子培养基上，能较稳定的保持高产苹果酸和柠檬酸的特性并产生足够量的菌种孢子用于接种，培养基为9-11°BX麦芽汁，pH 5～8，加20g/L的琼脂配制成固体培养基，0.08MPa灭菌20～30分钟，放置成斜面，用接种环划线接种该菌种，30℃～36℃培养60～72小时，培养完毕后可直接用于接种或置4℃冰箱保存备用。
上述的黄曲霉菌(Aspergillus flavus)SFAH-4060保藏号CGMCC NO.1204在含如下质量配比的发酵培养基上，能够直接发酵生产柠檬酸和苹果酸复合果酸钙盐，发酵培养基质量配比为：淀粉100～130g/L，玉米浆5～10g/L，硫酸铵2～4g/L，硫酸亚铁0.04g/L，碳酸钙60～80g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁0.2g/L。其中淀粉可以用葡萄糖100～120g/L、全糖粉100～120g/L、结晶葡萄糖母液100～120g/L、蔗糖100～120g/L之一替代，不影响发酵最终结果。
上述的黄曲霉菌种(Aspergillus flavus)SFAH-4060保藏号CGMCC NO.1204经50L发酵罐扩大培养，发酵生产柠檬酸和苹果酸复合果酸钙盐的工艺流程是：斜面菌种→麸曲菌种→深层通风发酵生产柠檬酸和苹果酸复合果酸钙盐→过滤→脱色→浓缩→结晶→干燥→成品；其中种子及深层通风发酵生产柠檬酸和苹果酸复合果酸钙盐的控制条件是：麸曲种子培养温度为32℃～36℃，培养时间为60～72小时；所采用的发酵培养基淀粉含量为100～120g/L；罐压：1kg/cm2，温度：34℃～36℃，通气量(空气体积m3/发酵液体积m3·分钟)1∶0.5～1.0，搅拌转速200～300r/min；发酵时间100～120小时。2m3发酵采用三级发酵，发酵生产柠檬酸-苹果酸复合钙盐工艺流程为：斜面菌种→麸曲菌种→一级种子→二级种子→深层通风发酵生产柠檬酸和苹果酸复合果酸钙盐过滤→脱色→浓缩→结晶→干燥→成品。其中种子及深层通风发酵生产柠檬酸和苹果酸复合果酸钙盐的控制条件是：麸曲种子培养温度为32℃～36℃，时间为60～72小时；一级种子培养温度34℃～36℃，时间是20～28小时，二级种子培养温度为34℃～36℃，时间为12～16小时，所采用的液体种子培养基为淀粉40-80g/L，玉米浆10-20g/L，硫酸铵2g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁0.2g/L；所采用的发酵培养基淀粉含量为100～120g/L；罐压：1kg/cm2，温度：34℃～36℃，通气量(空气体积m3/发酵液体积m3·分钟)1：0.2～0.5，搅拌转速100～150r/min，发酵时间为80～100小时，发酵结束的放罐标准残糖1g/L以下。发酵液脱色、浓缩、结晶等采用常规方法。
上述种子及深层通风发酵生产柠檬酸和苹果酸复合果酸钙盐的优选控制条件是：麸曲种子培养温度为34℃～36℃，时间为65～70小时，一级种子培养温度34℃～36℃，时间是24～28小时，二级种子培养温度为35℃～36℃，时间为12～16小时，所采用的液体种子培养基为：淀粉50g/L，玉米浆15g/L，硫酸铵2g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁0.2g/L；所采用的发酵培养基淀粉含量为110-120g/L，玉米浆5-7g/L，硫酸铵2g/L，硫酸亚铁0.04g/L，碳酸钙78g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁0.2g/L；罐压：1kg/cm2，温度：35℃～36℃，通气量(空气体积m3/发酵液体积m3·分钟)1：0.5，搅拌转速130r/min；发酵时间为80～90小时。
利用筛选分离的黄曲霉菌(Aspergillus flavus)SFAH-4060保藏号CGMCC NO.1204可以充分地以淀粉和碳酸钙为原料发酵，直接生产柠檬酸和苹果酸复合果酸钙盐，明显降低了生产成本，发酵果酸产率达到90～100g/L(以苹果酸计)，转化率90％以上。发酵结束残糖降至0.1％以下。通过本发明的方法制得的果酸钙(柠檬酸-苹果酸钙)为白色粉末状结晶，25℃溶解度为0.9～1.1，柠檬酸和苹果酸的摩尔比约2∶3～4。发酵产生的有机酸为生理活性物质，能够被人体直接吸收利用，产品的安全性能高。
具体实施方式
实施例1
黄曲霉菌(Aspergillus flavus)SFAH-4060保藏号CGMCC NO.1204菌株形态观察。察氏培养基组成：蔗糖30.0g，硝酸钠2.0g，磷酸氢二钾1.0g，硫酸镁0.5g，氯化钾0.5g，硫酸亚铁0.01g，水1000ml，pH7.0～7.2，固体培养基加琼脂20.0g。麦芽汁培养基的制备：啤酒用大麦芽粉碎后加入3倍水混合均匀，60℃水浴保温糖化至无淀粉反应为止(检查方法是取糖化液0.5ml加碘液2滴，无蓝紫色出现，即停止糖化)，糖化液加热煮沸过滤，取滤清液稀释至11°BX麦芽汁，加入20g/L的琼脂配制固体培养基。上述两种培养基0.08MPa蒸汽灭菌25-30分钟，倾倒无菌培养皿(9cm)，冷却凝固后点种黄曲霉菌(Aspergillus flavus)SFAH-4060保藏号CGMCC NO.1204菌株成熟孢子，分别放置30℃和36℃培养，观察菌落培养特征。
在察氏培养基上所述黄曲霉菌(Aspergillus flavus)SFAH-4060保藏号CGMCCNO.1204菌株的培养特征如下，放置30℃培养2天有生长，菌落圆形，白色，直径0.5cm；培养4天，菌落圆形，表面生有淡黄色孢子，直径2cm左右；培养7天菌落圆形，表面孢子色泽不均匀，呈黄色到黄绿色，菌落直径约3-4cm；基内菌丝不产生色素。放置36℃培养2天有生长，菌落圆形，白色，直径0.5-1cm；培养四天，菌落直径3-4cm，孢子呈黄到黄绿色；培养7天，菌落直径约4cm，表面孢子色泽不均匀，呈黄到黄绿色；基内菌丝不产生色素。
在麦芽汁培养基上所述黄曲霉菌(Aspergillus flavus)SFAH-4060保藏号CGMCCNO.1204菌株的培养特征如下，放置30℃培养，培养2天，菌落圆形，直径约2cm，中间菌丝比较致密，周围菌丝向四周发散，表面有少量黄色孢子生成；培养4天菌落圆形，直径约5～6cm表面孢子呈绿色。培养7天，菌落布满9cm平板，表面平整长满绿色孢子，菌落中心约2cm呈绒毛状突起，菌落表面和背面可见从中心向四周发散的沟纹。放置36℃培养，培养2天菌落圆形，直径约2.5-3cm，中间菌丝比较致密，周围菌丝向四周发散，表面有少量黄色孢子生成；培养4天菌落圆形，直径约5-6cm表面孢子呈绿色。培养7天，菌落布满9cm平板，表面平整长满暗绿色孢子，菌落中心约2cm呈绒毛状突起，菌落表面和背面可见从中心向四周发散的沟纹。
实施例2
斜面菌种的培养。麦芽汁培养基按照实施例1所述的方法配制，灌制试管斜面，0.08MPa蒸汽灭菌25-30分钟，趁热摆制成斜面，冷却成型后备用。用上述方法配制的斜面用于黄曲霉菌种(Aspergillus flavus)SFAH-4060保藏号CGMCC NO.1204日常保存和传接菌种。接种后斜面菌种放置36℃培养60-72小时，表面长满绿色孢子，取出备用。
实施例3
黄曲霉菌(Aspergillus flavus)SFAH-4060保藏号CGMCC NO.1204麸曲菌种的制备：小麦麸皮按不同的比例加水配制，料水混合均匀后分装500ml三角瓶，每瓶干料15g左右，0.1MPa蒸汽灭菌30分钟以上，取出趁热打散，冷却后接种1～2环斜面孢子，混合均匀，置28～36℃培养，培养过程中经过堆积、打散、扣瓶等常规步骤，待孢子成熟后取出作为发酵种子，培养过程一般为48～72小时，成熟麸曲种子呈黄绿色。比较了不同的料水比配方和不同的培养温度对菌株SFAH4060生孢子数的影响，结果见表1，表2。
表1
| 麸皮∶水 | 孢子数(个/克绝干麸曲) |
| 1∶1 | 8.25×109 |
| 1∶0.9 | 10.34×109 |
| 1∶0.8 | 9.87×109 |
表2
| 培养温度℃ | 孢子数(个/克绝干麸曲) |
| 28 | 0.52×109 |
| 30 | 1.44×109 |
| 32 | 6.97×109 |
| 34 | 11.58×109 |
| 36 | 8.66×109 |
实施例4
50L发酵罐装32L发酵培养基(淀粉110g/L，玉米浆5g/L，硫酸铵2g/L，硫酸亚铁0.04g/L，碳酸钙70g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁0.2g/L)灭菌后接种黄曲霉菌(Aspergillus flavus)SFAH-4060保藏号CGMCC NO.1204麸曲种子15g(干重，加无菌水制备成菌悬液)，搅拌转速250r/min，通气比1∶1，罐压1kg/cm2，36℃培养112小时残糖降至1g/L以下，结束发酵。发酵液滤除菌丝体，过滤清液加入1％的活性碳70℃保温30分钟脱色过滤，清液80℃减压浓缩至16-17Be°，冷却结晶。固液分离后母液可再结晶一次。共计得果酸钙2.71kg。
实施例5
50L发酵罐装32L发酵培养基(发酵培养基配方为：淀粉108g/L，预先液化，玉米浆7g/L，硫酸铵3g/L，硫酸亚铁0.04g/L，碳酸钙75g/L)，灭菌后按10％(质量体积百分比)接种SFAH-4060液体种子。液体培养基为：淀粉60g/L，玉米浆10g/L，硫酸铵2g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁0.2g/L，0.08MPa蒸汽灭菌后接种麸曲种子，36℃摇床培养24小时；发酵罐控制工艺条件为搅拌转速300r/min，通气比1∶1，罐压1kg/cm2，36℃培养100小时残糖降至1g/L以下，结束发酵。发酵液滤除菌丝体，过滤清液经脱色、减压浓缩后结晶。固液分离后的母液可以再结晶一次，共计的果酸钙2.85kg。
实施例6
50L发酵罐装32L发酵培养基(发酵培养基配方为：葡萄糖110g/L，玉米浆8g/L，硫酸铵4g/L，硫酸亚铁O.04g/L，碳酸钙80g/L)，灭菌后按10％(体积百分比)接种黄曲霉菌(Aspergillus flavus)SFAH-4060保藏号CGMCC NO.1204液体种子。液体种子培养基为：葡萄糖60g/L，玉米浆10g/L，硫酸铵3g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁0.2g/L，0.08MPa蒸汽灭菌后接种麸曲种子，34℃摇床培养24小时；发酵罐控制工艺条件为搅拌转速300r/min，通气比1∶1，罐压1kg/cm2，35℃发酵120小时残糖降至1g/L以下，结束发酵。发酵液滤除菌丝体，过滤清液经脱色、减压浓缩后结晶。固液分离后的母液可以再结晶一次，共计的果酸钙2.82kg。
实施例7
2m3发酵罐装料1.3M3，发酵培养基质量配比为：淀粉110g/L，玉米浆5g/L，硫酸铵2g/L，硫酸亚铁0.04g/L，碳酸钙78g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁0.2g/L，按10％(体积百分比)的接种量采用三级发酵进行果酸钙发酵。麸曲种子培养温度为34℃，时间为68小时，一级种子培养温度36℃，时间是28小时，二级种子培养温度为36℃，时间为14小时，液体种子培养基质量配比为：淀粉50g/L，玉米浆15g/L，硫酸铵2g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁0.2g/L。发酵工艺条件为：罐压1kg/cm2，温度36℃，通气量比1∶0.5，搅拌转速130r/min；发酵88小时残糖降至1g/L，结束发酵。经测定产酸为95.8g/L(以苹果酸计)，转化率为94％。
Claims (10)
1.一株曲霉菌菌株，该菌为曲霉菌属的黄曲霉菌(Aspergillus flavus)SFAH-4060，已于2004年8月4日在中国微生物菌种保藏管委会普通微生物中心进行了保藏，保藏号为CGMCC No.1204。
2.如权利要求1所述的曲霉菌菌株，其特征在于，所述黄曲霉菌(Aspergillusflavus)SFAH-4060保藏号CGMCC NO.1204生物学特性为：菌株分生孢子梗较短，顶端膨大呈囊状，上面生有类似保铃球瓶状小梗，小梗多为单层，瓶状小梗上生有3～5个分生孢子，孢子球形、梨形；该菌株能够利用葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、D-木糖、纤维二糖、棉子糖、D-甘露糖、L-山梨糖、甘露醇、淀粉、糊精多种碳源。
3.如权利要求1或2所述的曲霉菌菌株，其特征在于，所述黄曲霉菌(Aspergillusflavus)SFAH-4060保藏号CGMCC NO.1204在察氏培养基上的培养特征为，放置30℃培养2天有生长，菌落圆形，白色，直径0.5cm；培养4天，菌落圆形，表面生有淡黄色孢子，直径2cm左右；培养7天菌落圆形，表面孢子色泽不均匀，呈黄色到黄绿色，菌落直径约3～4cm；基内菌丝不产生色素；放置36℃培养2天有生长，菌落圆形，白色，直径0.5～1cm；培养四天，菌落直径3～4cm，孢子呈黄到黄绿色；培养7天，菌落直径约4cm，表面孢子色泽不均匀，呈黄到黄绿色；基内菌丝不产生色素。
4.如权利要求1或2所述的曲霉菌菌株，其特征在于，所述黄曲霉菌(Aspergillusflavus)SFAH-4060保藏号CGMCC NO.1204在麦芽汁培养基上的培养特征为，放置30℃培养2天，菌落圆形，直径约2cm，中间菌丝比较致密，周围菌丝向四周发散，表面有少量黄色孢子生成；培养4天菌落圆形，直径约5～6cm表面孢子呈绿色；培养7天，菌落布满9cm平板，表面平整长满绿色孢子，菌落中心约2cm呈绒毛状突起，菌落表面和背面可见从中心向四周发散的沟纹；放置36℃培养，培养2天菌落圆形，直径约2.5～3cm，中间菌丝比较致密，周围菌丝向四周发散，表面有少量黄色孢子生成；培养4天菌落圆形，直径约5～6cm表面孢子呈绿色；培养7天，菌落布满9cm平板，表面平整长满暗绿色孢子，菌落中心约2cm呈绒毛状突起，菌落表面和背面可见从中心向四周发散的沟纹。
5.如权利要求1或2所述的曲霉菌菌株，其特征在于，所述黄曲霉菌(Aspergillusflavus)SFAH-4060保藏号CGMCC NO.1204培养和保存备用的条件是：培养基为9～11°BX麦芽汁，pH5～8；加20g/L的琼脂可制成固体培养基；0.08MPa灭菌20～30分钟；培养温度30℃～36℃；培养时间60～72小时；培养完毕后可直接用于接种或置4℃冰箱保存备用。
6.如权利要求1或2所述的曲霉菌菌株，其特征在于，所述黄曲霉菌(Aspergillusflavus)SFAH-4060保藏号CGMCC NO.1204在含如下质量配比的发酵培养基上，能够发酵直接生产柠檬酸和苹果酸复合果酸钙盐，发酵培养基质量配比为：淀粉100～130g/L，玉米浆5～10g/L，硫酸铵2～4g/L，硫酸亚铁0.04g/L，碳酸钙60～80g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁0.2g/L。
7.如权利要求6所述的曲霉菌菌株，其特征在于，所述淀粉可以用葡萄糖100～120g/L、全糖粉100～120g/L、结晶葡萄糖母液100～120g/L、蔗糖100～120g/L之一替代。
8.一种利用权利要求1或2所述的曲霉菌菌株生产果酸钙的方法，其特征在于，所述黄曲霉菌(Aspergillus flavus)SFAH-4060保藏号CGMCC NO.1204在50L发酵罐扩大培养，发酵生产柠檬酸和苹果酸复合果酸钙盐的工艺条件是：①工艺流程是：斜面菌种→麸曲菌种→深层通风发酵生产柠檬酸和苹果酸复合果酸钙盐→过滤→脱色→浓缩→结晶→干燥→成品；②种子及深层通风发酵生产柠檬酸和苹果酸复合果酸钙盐的控制条件是：麸曲种子培养温度为32℃～36℃，培养时间为60～72小时；所采用的发酵培养基淀粉含量为100～120g/L；罐压：1kg/cm2，温度：34℃～36℃，通气量以空气体积m3/发酵液体积m3·分钟计1∶0.5～1.0，搅拌转速200～300r/min；发酵时间100～120小时；③发酵结束的放罐标准，残糖1g/L以下；④采用常规方法脱色、浓缩、结晶、干燥。
9.一种利用权利要求1或2所述的曲霉菌菌株生产果酸钙的方法，其特征在于，所述黄曲霉菌(Aspergillus flavus)SFAH-4060保藏号CGMCC NO.1204在2m3发酵罐采用三级发酵，发酵生产柠檬酸和苹果酸复合果酸钙盐的工艺条件是：①工艺流程是：斜面菌种→麸曲菌种→一级种子→二级种子→深层通风发酵生产柠檬酸和苹果酸复合果酸钙盐过滤→脱色→浓缩→结晶→干燥→成品；②种子及深层通风发酵生产柠檬酸和苹果酸复合果酸钙盐的控制条件是：麸曲种子培养温度为32℃～36℃，时间为60～72小时，一级种子培养温度34℃～36℃，时间是20～28小时，二级种子培养温度为34℃～36℃，时间为12～16小时，所采用的液体种子培养基为：淀粉40-60g/L，玉米浆10-20g/L，硫酸铵2g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁0.2g/L；所采用的发酵培养基淀粉含量为100～130g/L；罐压：1kg/cm2，温度：34℃～36℃，通气量以空气体积m3/发酵液体积m3·分钟计1∶0.2～0.5，搅拌转速100～150r/min；发酵时间为80～100小时；③发酵结束的放罐标准，残糖1g/L以下；④采用常规方法脱色、浓缩、结晶、干燥。
10.如权利要求9所述的曲霉菌菌株生产果酸钙的方法，其特征在于，所述种子及深层通风发酵生产柠檬酸和苹果酸复合果酸钙盐的控制条件是：麸曲种子培养温度为34℃～36℃，时间为65～70小时，一级种子培养温度34℃～36℃，时间是24～28小时，二级种子培养温度为35℃～36℃，时间为12～16小时，所采用的液体种子培养基为：淀粉50g/L，玉米浆15g/L，硫酸铵2g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁0.2g/L；所采用的发酵培养基淀粉含量为110-120g/L，玉米浆5-7g/L，硫酸铵2g/L，硫酸亚铁0.04g/L，碳酸钙78g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁0.2g/L；罐压：1kg/cm2，温度：35℃～36℃，通气量以空气体积m3/发酵液体积m3·分钟计1∶0.5，搅拌转速130r/min；发酵时间为80～90小时。
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