CN107853452A - 一种微生物饲料添加剂的生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种微生物饲料添加剂的生产方法，包括多菌种混合培养生产微生物饲料添加剂及腐植酸生物饲料添加剂；多菌种混合培养生产微生物饲料添加剂的方法，菌种为：植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母；将酿酒酵母与产朊假丝酵母制成酵母菌混合种子液；将植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌制成乳酸菌混合种子液；将上述所得到的酵母菌混合种子液、嗜酸乳杆菌混合种子液接种于酵母菌与乳酸菌混合种子培养基中，得到酵母菌与乳酸菌混合种子液；本发明是一种可很好地降低生产成本、生产能耗，菌种间可以互相很好地协同作用，提高动物的免疫力，提高饲料利用率，促进动物健康生长的微生物饲料添加剂的方法。
Description
技术领域
本发明涉及微生物发酵技术，具体涉及一种微生物饲料添加剂的生产方法。
背景技术
食品安全问题是关系到人民健康和国计民生的重大问题，特别是在我国入世以后，农产品安全问题已经成为影响我国农产品产业竞争力的关键因素。猪肉是人们摄取的主要动物性食品，安全饲料是动物性食品安全的基础。研制开发使用安全，有利猪生长的饲料添加物，是发展“无公害养猪技术”的关键，而饲用微生物制剂是目前比较公认的首选的好的方法。随着微生物应用技术的广泛开展，在活菌制剂的应用方面，人们希望一种产品能够行使多种功能，解决多方面的问题，许多产品都是由多种微生物组成。目前，这类产品的生产形式上，一般采用将单一菌种分开培养，然后将多种菌的培养物混合在一起，组成多菌种多功能产品。这种生产方式，要求每种菌使用一次发酵罐，要求生产设备投资较大，能耗较高，大大提高了生产成本。目前对于具有协同作用关系的菌株筛选和组合还是一个随机过程，缺乏有效的理论指导，而且对于已经应用的混合培养体系也不能有效地协调菌间的关系，使其达最佳生态水平，发挥最大效应。这严重地阻碍了混合菌培养的发展和应用。
发明内容
本发明提供了一种微生物饲料添加剂的生产方法，解决了以上所述的技术问题。
本发明解决上述技术问题的方案如下：一种微生物饲料添加剂的生产方法，其特征在于，所述微生物饲料添加剂包括多菌种混合培养生产微生物饲料添加剂及腐植酸生物饲料添加剂；
其中所述多菌种混合培养生产微生物饲料添加剂所使用的菌种为：植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母；其工艺为：将酿酒酵母与产朊假丝酵母制成酵母菌混合种子液；将植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌制成乳酸菌混合种子液；将上述所得到的酵母菌混合种子液、乳酸菌混合种子液接种于酵母菌与乳酸菌混合种子培养基中，得到酵母菌与乳酸菌混合种子液；将酵母菌与乳酸菌混合种子液按 0.2-0.3％的接种量接种于混合发酵培养基中分段混合发酵后得到成品；所述的酵母菌混合种子在培养基中于26-30℃，160-180r/min，培养20-30h，得酵母菌混合种子液；其中酵母菌混合种子培养基为：蛋白胨10.0g，葡萄糖20.0g，酵母膏5.0g，蒸馏水1000mL，调pH值为 6.8～7.0；乳酸菌混合种子在培养基中于30-34℃下，培养20-30h，得乳酸菌混合种子液；其中乳酸菌混合种子培养基制备为：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、磷酸氢二钾2g、柠檬酸二铵2g、乙酸钠5g、葡萄糖20g、吐温801mL、七水硫酸镁0.58g、四水硫酸锰0.25g、水 1000mL、调pH值6.2-6.4；将得到的酵母菌混合种子液、乳酸菌混合种子液接种于酵母菌与乳酸菌混合种子液培养基中，在30-34℃下， 160-180r/min，培养30-40h，得到酵母菌与乳酸菌混合种子液；所述的酵母菌与乳酸菌混合种子培养基为：2％红糖、1.5％葡萄糖、0.5％蛋白胨、0.5％萝卜汁、0.1％K2HPO4，0.1％MgSO4.7H2O、0.15％植物油、水1000mL，调pH值6.4-6.6；所述的混合发酵培养基为：1-3％红糖、1.5％葡萄糖、0.1-0.3％蛋白胨、0.5-1.5％豆粕、0.1-0.6％萝卜汁、0.1％K2HPO4，0.1％MgSO4.7H2O、水1000mL，pH 6.4-6.6；所述的酵母菌与乳酸菌分段混合发酵培养则分两阶段进行，前期好氧培养：培养温度28-30℃、通气量300L/min，每通1h停10min，搅拌转速 40-50r/min，每3h 30min停30min，培养20-30h；后期厌氧发酵：培养温度32-34℃、通气量0L/min，搅拌转速40-50r/min，每30min停 30min，培养20-30h；
其中所述腐植酸生物饲料添加剂的生产方法，包括以下步骤：
a.将50～80％的腐植酸钠、15～40％的油类饼粉和2～15％的谷壳混合；b.按料液比1∶0.5～1.3加入饲料酵母、啤酒酵母、酒精酵母、白地霉或假丝酵母菌液和无机元素溶液，该无机元素溶液含有钾、钠、铁和钙，搅拌均匀后制成球形、圆柱形、长条形、方块形的形状；c.将成型的发酵物料装入固体发酵罐，物料体积与空气比为1∶ 1～3/分钟，在温度20～38℃，湿度60～98％的条件下，发酵2～5 天；d.发酵后取出，经干燥至含水量小于15％，自然冷却、粉碎；
最后将多菌种混合培养生产微生物饲料添加剂及腐植酸生物饲料添加剂进行混合，得到微生物饲料添加剂。
进一步，所述发酵物料为直径2mm～16mm的球形、长度×直径＝20mm～100mm×2mm～16mm的圆柱形、或长×宽×高＝20mm～ 100mm×5mm～20mm×2mm～8mm的长条形、方块形。
进一步，腐植酸钠、油类饼粉、谷壳均应粉碎过40目筛。
进一步，混合发酵培养基中加入0.0-0.3％植物油。
进一步，将酵母菌与乳酸菌混合种子液按0.2％的接种量接种于混合发酵培养基中进行混合发酵。
进一步，所述的混合发酵培养基为：2％红糖、1.5％葡萄糖、0.1％蛋白胨、1％豆粕、0.5％萝卜汁、0.1％K2HPO4，0.1％MgSO4.7H2O、 0.15％植物油、水1000mL，调pH 6.4-6.6。
进一步，所述酵母菌混合种子液、乳酸菌混合种子液分别按 1-2％、0.5-1.5％的接种量接种于酵母菌与乳酸菌混合种子培养基中。
进一步，将酵母菌混合种子液、乳酸菌混合种子液分别按1.5％、 1％的接种量接种于酵母菌与乳酸菌混合种子培养基中。
进一步，所述酵母菌混合种子液中酿酒酵母与产朊假丝酵母的菌数比为1∶1-3。
进一步，乳酸菌混合种子液中植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌的菌数比为1∶1-2。
本发明一方面通过多次研究及试验对于生产用菌种进行选择，并通过对植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌 (Lactobacillus acidophilus)、产朊假丝酵母(Candida tails)、酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae)4种生产用菌的特性与性能进行了研究、测试，试验，发明人发现上述4种菌种的有效组合对于本发明的产品具有很好地效果。且本发明所使用的菌种均为农业部允许使用的饲料级益生菌菌种。本发明利用酵母菌为兼性好氧菌、乳酸菌为微好氧菌的特点，先进行好气性培养，使酵母菌产生大量的菌体和代谢产物，同时这种培养条件又不损害乳酸菌的存活，通过前期培养之后，停止通气培养，使酵母菌能够进行酒精发酵，产生一定量的酒精和二氧化碳，为酯香物质的生成以及乳酸菌的微好氧生长提供条件，同时乳酸菌能够利用酵母菌的代谢产物进行生长，进一步降低pH 值，为降低产品杂菌的污染创造条件，且降低了生产能耗。
本发明利用酵母菌的培养基成分简单，代谢产物营养丰富，而乳酸菌的培养基成分复杂，且价格较贵，酵母菌的代谢产物或死亡细胞自溶物能够提供乳酸菌生长的营养要求，研究优化得到了植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)、产朊假丝酵母(Candida tails)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)4种菌混合培养的培养基配方(即2％红糖、1.5％葡萄糖、0.1％蛋白胨、1％豆粕、0.5％萝卜汁、0.1％K2HPO4，0.1％MgSO4.7H2O、0.15％植物油、水1000mL，pH 6.4-6.6。大大降低了一般乳酸菌培养基中的蛋白胨含量，省去了酵母粉(膏)成分，而采用了价格便宜、丰富的豆粕粉做氮源，采用红塘代替了部分蔗糖或者葡萄糖做碳源，降低生产原料成本1510.9元/吨左右。
本发明的有益效果是：本发明提出了将植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、产朊假丝酵母 (Candida tails)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)进行混合培养，创造性地提出了分段发酵技术，本发明混合发酵前期主要好氧培养酵母菌获得菌体和代谢产物，后期主要厌氧培养乳酸菌获得菌体并使酵母菌发酵产生酒香味。并同时很好地研究出了针对本发明所述的四种菌混合发酵培养基，四种菌混合发酵培养条件，这些都是没有相关文献报道的。而本发明产品可以成功制备的关健也在于上述条件的确定。
本发明产品用于猪和鸡的饲喂对动物具有促生长、提高料肉比、提高免疫力、减少环境污染和防止疾病发生等功能；能够提高公猪精子的活力，降低精子畸形率；肉产品中不存在激素和抗生素残留，避免了抗药性和药物残留，本发明的推广应用可提高我国猪肉产品的国际市场竞争力，确保猪肉产品的质量和卫生安全，是继抗生素之后的新一代产品。因而本发明是一种可有效地利用4种菌很好地混合发酵生产微生物饲料添加剂这种优良产品的生产方法，本发明可大大降低生产成本，促进该类产品的推广应用。
本发明另一方面提供的腐植酸生物饲料添加剂以及生产方法，采用固体发酵法取代现有地液体发酵法。为实现固体发酵法，将发酵物料制成各种形状，如球形、圆柱形、长条形、方块形等。发酵物料成形的作用是增加物料的间隙度，解决了微生物固体发酵的供氧和通风散热问题，使固体深层发酵成为可能。所用菌种为各种对动物无害的真菌，如饲料酵母、啤酒酵母、酒精酵母、白地霉、假丝酵母和某些曲霉等。因为本发明中的固体发酵过程采用生料、非无菌条件，所以发酵所用菌种必须具备繁殖生长快，抗杂菌能力强，适应性强等特点。发酵菌种的作用是降解代谢腐植酸及物料中的各种物质而产生微生物菌体，并转化无机金属元素为有机或生物金属元素。本产品能够明显地增强动物免疫功能，提高其生长能力和抗病能力。本发明与现有技术相比，可提高单位发酵罐产量7-8倍，能耗可降低50％以上，设备投资和生产成本大幅度降低，经济效益十分显著。
最后本发明通过将将多菌种混合培养生产微生物饲料添加剂及腐植酸生物饲料添加剂进行混合，得到的微生物饲料添加剂能够较高程度和较好效果地增强动物免疫功能，提高其生长能力和抗病能力。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例详细说明如后。本发明的具体实施方式由以下实施例详细给出。
具体实施方式
以下是对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。根据下面说明和权利要求书，本发明的优点和特征将更清楚。
需要说明的是，当组件被称为“固定于”另一个组件，它可以直接在另一个组件上或者也可以存在居中的组件。当一个组件被认为是“连接”另一个组件，它可以是直接连接到另一个组件或者可能同时存在居中组件。当一个组件被认为是“设置于”另一个组件，它可以是直接设置在另一个组件上或者可能同时存在居中组件。本文所使用的术语“垂直的”、“水平的”、“左”、“右”以及类似的表述只是为了说明的目的。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明提供了一种微生物饲料添加剂的生产方法，所述微生物饲料添加剂包括多菌种混合培养生产微生物饲料添加剂及腐植酸生物饲料添加剂；
其中所述多菌种混合培养生产微生物饲料添加剂所使用的菌种为：植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母；其工艺为：将酿酒酵母与产朊假丝酵母制成酵母菌混合种子液；将植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌制成乳酸菌混合种子液；将上述所得到的酵母菌混合种子液、乳酸菌混合种子液接种于酵母菌与乳酸菌混合种子培养基中，得到酵母菌与乳酸菌混合种子液；将酵母菌与乳酸菌混合种子液按 0.2-0.3％的接种量接种于混合发酵培养基中分段混合发酵后得到成品；所述的酵母菌混合种子在培养基中于26-30℃，160-180r/min，培养20-30h，得酵母菌混合种子液；其中酵母菌混合种子培养基为：蛋白胨10.0g，葡萄糖20.0g，酵母膏5.0g，蒸馏水1000mL，调pH值为 6.8～7.0；乳酸菌混合种子在培养基中于30-34℃下，培养20-30h，得乳酸菌混合种子液；其中乳酸菌混合种子培养基制备为：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、磷酸氢二钾2g、柠檬酸二铵2g、乙酸钠5g、葡萄糖20g、吐温801mL、七水硫酸镁0.58g、四水硫酸锰0.25g、水 1000mL、调pH值6.2-6.4；将得到的酵母菌混合种子液、乳酸菌混合种子液接种于酵母菌与乳酸菌混合种子液培养基中，在30-34℃下， 160-180r/min，培养30-40h，得到酵母菌与乳酸菌混合种子液；所述的酵母菌与乳酸菌混合种子培养基为：2％红糖、1.5％葡萄糖、0.5％蛋白胨、0.5％萝卜汁、0.1％K2HPO4，0.1％MgSO4.7H2O、0.15％植物油、水1000mL，调pH值6.4-6.6；所述的混合发酵培养基为：1-3％红糖、1.5％葡萄糖、0.1-0.3％蛋白胨、0.5-1.5％豆粕、0.1-0.6％萝卜汁、0.1％K2HPO4，0.1％MgSO4.7H2O、水1000mL，pH 6.4-6.6；所述的酵母菌与乳酸菌分段混合发酵培养则分两阶段进行，前期好氧培养：培养温度28-30℃、通气量300L/min，每通1h停10min，搅拌转速 40-50r/min，每3h 30min停30min，培养20-30h；后期厌氧发酵：培养温度32-34℃、通气量0L/min，搅拌转速40-50r/min，每30min停 30min，培养20-30h；
其中所述腐植酸生物饲料添加剂的生产方法，包括以下步骤：
a.将50～80％的腐植酸钠、15～40％的油类饼粉和2～15％的谷壳混合；b.按料液比1∶0.5～1.3加入饲料酵母、啤酒酵母、酒精酵母、白地霉或假丝酵母菌液和无机元素溶液，该无机元素溶液含有钾、钠、铁和钙，搅拌均匀后制成球形、圆柱形、长条形、方块形的形状；c.将成型的发酵物料装入固体发酵罐，物料体积与空气比为1∶ 1～3/分钟，在温度20～38℃，湿度60～98％的条件下，发酵2～5 天；d.发酵后取出，经干燥至含水量小于15％，自然冷却、粉碎；
最后将多菌种混合培养生产微生物饲料添加剂及腐植酸生物饲料添加剂进行混合，得到微生物饲料添加剂。
进一步，所述发酵物料为直径2mm～16mm的球形、长度×直径＝20mm～100mm×2mm～16mm的圆柱形、或长×宽×高＝20mm～ 100mm×5mm～20mm×2mm～8mm的长条形、方块形。
进一步，腐植酸钠、油类饼粉、谷壳均应粉碎过40目筛。
进一步，混合发酵培养基中加入0.0-0.3％植物油。
进一步，将酵母菌与乳酸菌混合种子液按0.2％的接种量接种于混合发酵培养基中进行混合发酵。
进一步，所述的混合发酵培养基为：2％红糖、1.5％葡萄糖、0.1％蛋白胨、1％豆粕、0.5％萝卜汁、0.1％K2HPO4，0.1％MgSO4.7H2O、 0.15％植物油、水1000mL，调pH 6.4-6.6。
进一步，所述酵母菌混合种子液、乳酸菌混合种子液分别按 1-2％、0.5-1.5％的接种量接种于酵母菌与乳酸菌混合种子培养基中。
进一步，将酵母菌混合种子液、乳酸菌混合种子液分别按1.5％、 1％的接种量接种于酵母菌与乳酸菌混合种子培养基中。
进一步，所述酵母菌混合种子液中酿酒酵母与产朊假丝酵母的菌数比为1∶1-3。
进一步，乳酸菌混合种子液中植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌的菌数比为1∶1-2。
本发明一方面通过多次研究及试验对于生产用菌种进行选择，并通过对植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌 (Lactobacillus acidophilus)、产朊假丝酵母(Candida tails)、酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae)4种生产用菌的特性与性能进行了研究、测试，试验，发明人发现上述4种菌种的有效组合对于本发明的产品具有很好地效果。且本发明所使用的菌种均为农业部允许使用的饲料级益生菌菌种。本发明利用酵母菌为兼性好氧菌、乳酸菌为微好氧菌的特点，先进行好气性培养，使酵母菌产生大量的菌体和代谢产物，同时这种培养条件又不损害乳酸菌的存活，通过前期培养之后，停止通气培养，使酵母菌能够进行酒精发酵，产生一定量的酒精和二氧化碳，为酯香物质的生成以及乳酸菌的微好氧生长提供条件，同时乳酸菌能够利用酵母菌的代谢产物进行生长，进一步降低pH 值，为降低产品杂菌的污染创造条件，且降低了生产能耗。
本发明利用酵母菌的培养基成分简单，代谢产物营养丰富，而乳酸菌的培养基成分复杂，且价格较贵，酵母菌的代谢产物或死亡细胞自溶物能够提供乳酸菌生长的营养要求，研究优化得到了植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)、产朊假丝酵母(Candida tails)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)4种菌混合培养的培养基配方(即2％红糖、1.5％葡萄糖、0.1％蛋白胨、1％豆粕、0.5％萝卜汁、0.1％K2HPO4，0.1％MgSO4.7H2O、0.15％植物油、水1000mL，pH 6.4-6.6。大大降低了一般乳酸菌培养基中的蛋白胨含量，省去了酵母粉(膏)成分，而采用了价格便宜、丰富的豆粕粉做氮源，采用红塘代替了部分蔗糖或者葡萄糖做碳源，降低生产原料成本1510.9元/吨左右。
对于多菌种混合培养生产微生物饲料添加剂的生产方法具有以下具体实施例：
实施例1
下面举例对本发明做更详细的描述：
菌种：产朊假丝酵母[ACC20060]、酿酒酵母[ACC20065]、植物乳杆菌[ACC10644]、嗜酸乳杆菌[ACC10637](均为中国农业微生物菌种保藏中心购买得到)。
分别将上述四种菌种进行菌种活化，将产朊假丝酵母、酿酒酵母分别接种于PDA斜面培养基上，20-30℃，培养30-40h；连续活化后，分别培养制取产朊假丝酵母、酿酒酵母液体种子；而植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌分别接种于MRS斜面培养基，30-40℃，培养30-40h；连续活化后，分别培养制取植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌液体种子。
将酿酒酵母与产朊假丝酵母混合接种于YPD种子培养基中，在 26-30℃下，160-180r/min，培养20-30h，得到酵母菌混合种子，然后再接种到酵母菌混合种子培养基中于26-30℃，160-180r/min，培养 20-30h，得酵母菌混合种子液。其中酵母菌混合种子培养基的制备为：蛋白胨10.0g，葡萄糖20.0g，酵母膏5.0g，蒸馏水1000mL，调 pH值为6.8～7.0，灭菌处理，待用。发明人还发现酵母菌混合种子液中酿酒酵母与产朊假丝酵母的菌数比为1∶1-3时，可以优化本发明的产品。
将植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌混合接种于MRS种子培养基中，在 30-34℃下，培养20-30h，得到乳酸菌混合种子，然后再接种到乳酸菌混合种子培养基中在30-34℃下，培养20-30h，得乳酸菌混合种子液。其中乳酸菌混合种子培养基制备为：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、磷酸氢二钾2g、柠檬酸二铵2g、乙酸钠5g、葡萄糖20g、吐温801mL、七水硫酸镁0.58g、四水硫酸锰0.25g、水1000mL、调 pH值6.2-6.4，灭菌处理，待用。发明人还发现乳酸菌混合种子液中植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌的菌数比为1∶1-2时可以优化本发明的产品。
将上述所得到的酵母菌混合种子液、嗜酸乳杆菌混合种子液分别按1-2％、0.5-1.5％的接种量接种于酵母菌与乳酸菌混合种子培养基中，在30-34℃下，160-180r/min，培养30-40h，得到酵母菌与乳酸菌混合种子液。所述的酵母菌与乳酸菌混合种子培养基制备为：2％红糖、1.5％葡萄糖、0.5％蛋白胨、0.5％萝卜汁、0.1％K2HPO4，0.1％ MgSO4.7H2O、0.15％植物油、水1000mL，调pH值6.4-6.6；灭菌处理，待用。
将酵母菌与乳酸菌混合种子液按0.2-0.3％的接种量接种于混合发酵培养基中进行混合发酵，混合发酵培养基通过以下组分的制备： 1-3％红糖、1.5％葡萄糖、0.1-0.3％蛋白胨、0.5-1.5％豆粕、0.1-0.6％萝卜汁、0.1％K2HPO4，0.1％MgSO4.7H2O、0.0-0.3％植物油、水 1000mL，pH 6.4-6.6；灭菌处理，待用。
酵母菌与乳酸菌的分段混合发酵培养条件为：前期好氧培养：培养温度28-30℃、通气量300L/min，每通1h停10min，搅拌转速 40-50r/min，每3h 30min停30min，培养20-30h；后期厌氧发酵：培养温度32-34℃、通气量0L/min，搅拌转速40-50r/min，每30min停30min，培养20-30h。
最后经产品质量检测，灌装、包装，验收。
将本发明所制得的产品，在饲料中按日粮的0.3％添加产品直接饲喂，其效果明显，简单易行，值得推广。但添加0.3％的饲用微生物制剂发酵饲料后饲喂，也可能能够起到较好的饲喂效果，节省成本。
通过使用本发明的产品，证明本发明所得到的复合微生物制剂使猪肤色红润，生长势好，猪的体质增强；日增重提高15.4％；饲料利用率提高11.7％；粪便中的大肠菌群数量降低，氨气等有害气体减少；蛋白质和脂肪的粪表观消化率差异显著；粪便中总磷含量降低。
本发明生产的产品主要技术指标：
有效活菌数：≥2.5×108CFU/mL
其中：乳酸菌≥2.0×108CFU/mL
酵母菌≥0.5×108CFU/mL
大肠菌群数：≤3个/100mL。
沙门氏菌：不得检出。
pH值：3.0-5.0。
保质期：不得低于6个月(≥6个月)。
实施例2
将酵母菌混合种子液、嗜酸乳杆菌混合种子液分别按1.5％、1％的接种量接种于酵母菌与乳酸菌混合种子培养基中；将酵母菌与乳酸菌混合种子液按0.2％的接种量接种子混合发酵培养基中进行混合发酵。
混合发酵培养基通过以下组分的制备可以达到最佳：2％红糖、 1.5％葡萄糖、0.1％蛋白胨、1％豆粕、0.5％萝卜汁、0.1％K2HPO4， 0.1％MgSO4.7H2O、0.15％植物油、水1000mL，调pH 6.4-6.6；灭菌处理，待用。其它步骤同实施例1。
对于腐植酸生物饲料添加剂的生产方法具有以下具体实施例：
实施例3：
菌液制法：1.摇瓶菌液培养：取去皮土豆200克，切成小块，煮沸 10分钟，沙布过滤，定量至1000ml，分装于10个500ml瓶中，每瓶装置100ml，121℃灭菌20分钟，冷却至室温后接入斜面菌种，于 28℃培养14～18小时后，备用。
2.种子罐菌液培养：取450克玉米粉，加白糖75克，加自来水溶解搅拌后倒入种子罐，加水至15升，121℃灭菌30分钟，冷却至30℃后无菌操作接入摇瓶菌液1000ml，于温度28～30℃，通气量为15升 /分条件下培养14～18小时，即为发酵用菌液。
无机元素溶液的制备，根据指定的配方，将适量的钾、钠、铁和钙等无机元素粉碎至80目以上，溶于无菌水或自来水，即为无机元素溶液。
取65kg腐植酸钠，30kg豆饼粉和5kg麸皮，腐植酸钠、豆饼粉和麸皮均应粉碎过40目筛，混合搅拌均匀，料液比1∶1，加入15升菌液和85升无机元素溶液，搅拌均匀后制成颗粒度为Φ＝4mm的球形，装入固体发酵罐，置于通气比为物料体积∶空气＝1∶1/分钟，温度25℃，湿度60％条件下，发酵5天，发酵完成后取出，干燥至含水量不超过15％，随后自然冷却，粉碎至40目以上，包装后即为成品。
实施例4：
与实施例1不同在于，取70kg腐植酸钠，25kg豆饼粉和5kg麸皮，腐植酸钠、豆饼粉和麸皮均应粉碎过40目筛，混合搅拌均匀，料液比为1∶1.1，加入25升菌液和85升无机元素溶液，以及10g的水溶性维生素。搅拌均匀后制成直径为Φ＝6mm、长度为20～100mm圆柱形颗粒，装入固体发酵罐，置于通气比为物料体积∶空气＝1∶3/ 分钟，温度35℃，湿度90％条件下，发酵2天，发酵完成后取出，干燥至含水量不超过15％，随后自然冷却，粉碎至40目以上，包装后即为成品。
实施例5：
与实施例1不同在于将发酵物料制成厚×宽＝8mm×15mm，长度为100mm的长条形。
实施例6：
与实施例1不同在于将发酵物料制成厚×宽＝5mm×5mm，长为 50mm的方块形。
本发明的有益效果是：本发明提出了将植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、产朊假丝酵母 (Candida tails)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)进行混合培养，创造性地提出了分段发酵技术，本发明混合发酵前期主要好氧培养酵母菌获得菌体和代谢产物，后期主要厌氧培养乳酸菌获得菌体并使酵母菌发酵产生酒香味。并同时很好地研究出了针对本发明所述的四种菌混合发酵培养基，四种菌混合发酵培养条件，这些都是没有相关文献报道的。而本发明产品可以成功制备的关健也在于上述条件的确定。
本发明产品用于猪和鸡的饲喂对动物具有促生长、提高料肉比、提高免疫力、减少环境污染和防止疾病发生等功能；能够提高公猪精子的活力，降低精子畸形率；肉产品中不存在激素和抗生素残留，避免了抗药性和药物残留，本发明的推广应用可提高我国猪肉产品的国际市场竞争力，确保猪肉产品的质量和卫生安全，是继抗生素之后的新一代产品。因而本发明是一种可有效地利用4种菌很好地混合发酵生产微生物饲料添加剂这种优良产品的生产方法，本发明可大大降低生产成本，促进该类产品的推广应用。
本发明另一方面提供的腐植酸生物饲料添加剂以及生产方法，采用固体发酵法取代现有地液体发酵法。为实现固体发酵法，将发酵物料制成各种形状，如球形、圆柱形、长条形、方块形等。发酵物料成形的作用是增加物料的间隙度，解决了微生物固体发酵的供氧和通风散热问题，使固体深层发酵成为可能。所用菌种为各种对动物无害的真菌，如饲料酵母、啤酒酵母、酒精酵母、白地霉、假丝酵母和某些曲霉等。因为本发明中的固体发酵过程采用生料、非无菌条件，所以发酵所用菌种必须具备繁殖生长快，抗杂菌能力强，适应性强等特点。发酵菌种的作用是降解代谢腐植酸及物料中的各种物质而产生微生物菌体，并转化无机金属元素为有机或生物金属元素。本产品能够明显地增强动物免疫功能，提高其生长能力和抗病能力。本发明与现有技术相比，可提高单位发酵罐产量7-8倍，能耗可降低50％以上，设备投资和生产成本大幅度降低，经济效益十分显著。
最后本发明通过将将多菌种混合培养生产微生物饲料添加剂及腐植酸生物饲料添加剂进行混合，得到的微生物饲料添加剂能够较高程度和较好效果地增强动物免疫功能，提高其生长能力和抗病能力。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制；凡本行业的普通技术人员均可按说明书附图所示和以上所述而顺畅地实施本发明；但是,凡熟悉本专业的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变等，均仍属于本发明的技术方案的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种微生物饲料添加剂的生产方法，其特征在于，所述微生物饲料添加剂包括多菌种混合培养生产微生物饲料添加剂及腐植酸生物饲料添加剂；
其中所述多菌种混合培养生产微生物饲料添加剂所使用的菌种为：植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、产朊假丝酵母、酿酒酵母；其工艺为：将酿酒酵母与产朊假丝酵母制成酵母菌混合种子液；将植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌制成乳酸菌混合种子液；将上述所得到的酵母菌混合种子液、乳酸菌混合种子液接种于酵母菌与乳酸菌混合种子培养基中，得到酵母菌与乳酸菌混合种子液；将酵母菌与乳酸菌混合种子液按0.2-0.3％的接种量接种于混合发酵培养基中分段混合发酵后得到成品；所述的酵母菌混合种子在培养基中于26-30℃，160-180r/min，培养20-30h，得酵母菌混合种子液；其中酵母菌混合种子培养基为：蛋白胨10.0g，葡萄糖20.0g，酵母膏5.0g，蒸馏水1000mL，调pH值为6.8～7.0；乳酸菌混合种子在培养基中于30-34℃下，培养20-30h，得乳酸菌混合种子液；其中乳酸菌混合种子培养基制备为：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、磷酸氢二钾2g、柠檬酸二铵2g、乙酸钠5g、葡萄糖20g、吐温801mL、七水硫酸镁0.58g、四水硫酸锰0.25g、水1000mL、调pH值6.2-6.4；将得到的酵母菌混合种子液、乳酸菌混合种子液接种于酵母菌与乳酸菌混合种子液培养基中，在30-34℃下，160-180r/min，培养30-40h，得到酵母菌与乳酸菌混合种子液；所述的酵母菌与乳酸菌混合种子培养基为：2％红糖、1.5％葡萄糖、0.5％蛋白胨、0.5％萝卜汁、0.1％K2HPO4，0.1％MgSO4.7H2O、0.15％植物油、水1000mL，调pH值6.4-6.6；所述的混合发酵培养基为：1-3％红糖、1.5％葡萄糖、0.1-0.3％蛋白胨、0.5-1.5％豆粕、0.1-0.6％萝卜汁、0.1％K2HPO4，0.1％MgSO4.7H2O、水1000mL，pH 6.4-6.6；所述的酵母菌与乳酸菌分段混合发酵培养则分两阶段进行，前期好氧培养：培养温度28-30℃、通气量300L/min，每通1h停10min，搅拌转速40-50r/min，每3h 30min停30min，培养20-30h；后期厌氧发酵：培养温度32-34℃、通气量0L/min，搅拌转速40-50r/min，每30min停30min，培养20-30h；
其中所述腐植酸生物饲料添加剂的生产方法，包括以下步骤：
a.将50～80％的腐植酸钠、15～40％的油类饼粉和2～15％的谷壳混合；b.按料液比1∶0.5～1.3加入饲料酵母、啤酒酵母、酒精酵母、白地霉或假丝酵母菌液和无机元素溶液，该无机元素溶液含有钾、钠、铁和钙，搅拌均匀后制成球形、圆柱形、长条形、方块形的形状；c.将成型的发酵物料装入固体发酵罐，物料体积与空气比为1∶1～3/分钟，在温度20～38℃，湿度60～98％的条件下，发酵2～5天；d.发酵后取出，经干燥至含水量小于15％，自然冷却，粉碎；
最后将多菌种混合培养生产微生物饲料添加剂及腐植酸生物饲料添加剂进行混合，得到微生物饲料添加剂。
2.根据权利要求1所述一种微生物饲料添加剂的生产方法，其特征在于，所述发酵物料为直径2mm～16mm的球形、长度×直径＝20mm～100mm×2mm～16mm的圆柱形、或长×宽×高＝20mm～100mm×5mm～20mm×2mm～8mm的长条形、方块形。
3.根据权利要求1所述一种微生物饲料添加剂的生产方法，其特征在于，腐植酸钠、油类饼粉、谷壳均应粉碎过40目筛。
4.根据权利要求1所述一种微生物饲料添加剂的生产方法，其特征在于，混合发酵培养基中加入0.0-0.3％植物油。
5.根据权利要求1所述一种微生物饲料添加剂的生产方法，其特征在于，将酵母菌与乳酸菌混合种子液按0.2％的接种量接种于混合发酵培养基中进行混合发酵。
6.根据权利要求4所述一种微生物饲料添加剂的生产方法，其特征在于，所述的混合发酵培养基为：2％红糖、1.5％葡萄糖、0.1％蛋白胨、1％豆粕、0.5％萝卜汁、0.1％K2HPO4，0.1％MgSO4.7H2O、0.15％植物油、水1000mL，调pH 6.4-6.6。。
7.根据权利要求1所述一种微生物饲料添加剂的生产方法，其特征在于，所述酵母菌混合种子液、乳酸菌混合种子液分别按1-2％、0.5-1.5％的接种量接种于酵母菌与乳酸菌混合种子培养基中。
8.根据权利要求7所述一种微生物饲料添加剂的生产方法，其特征在于，将酵母菌混合种子液、乳酸菌混合种子液分别按1.5％、1％的接种量接种于酵母菌与乳酸菌混合种子培养基中。
9.根据权利要求1所述一种微生物饲料添加剂的生产方法，其特征在于，所述酵母菌混合种子液中酿酒酵母与产朊假丝酵母的菌数比为1∶1-3。
10.根据权利要求1-9任一所述一种微生物饲料添加剂的生产方法，其特征在于，乳酸菌混合种子液中植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌的菌数比为1∶1-2。
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