CN115974990A - 一种酿酒酵母Rim15蛋白突变体及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种酿酒酵母Rim15蛋白突变体，是由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的调控蛋白的第82位氨基酸由甘氨酸突变为天冬氨酸形成，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还公开了该突变体在提高重组酿酒酵母木糖利用效率和/或提高酿酒酵母对乙酸的耐受性中的应用。实验证明通过在酿酒酵母中表达该突变体，大幅提高了其木糖利用效率和乙酸耐受性。本发明还公开了一种Rim15蛋白的缺失突变体，以及Rim15蛋白缺失突变体在提高重组酿酒酵母对木糖利用效率中的应用。实验表明，缺失Rim15蛋白可以大幅提高重组酿酒酵母的木糖利用效率。预示本发明在利用同时含有葡萄糖和木糖的且含有乙酸等抑制物的木质纤维素为主的原料发酵生产化工产品中应用前景广阔。

Description

一种酿酒酵母Rim15蛋白突变体及其应用

技术领域

本发明涉及一种蛋白突变体及其应用，尤其涉及一种酿酒酵母Rim15蛋白突变体涉及其在提高酿酒酵母木糖利用效率及乙酸耐受性中应用。属于基因工程技术领域。

背景技术

用可再生的木质纤维素材料替代不可再生的化石能源来生产燃料和化学品，是拓展生活资源来源，减少二氧化碳排放和减缓全球变暖进程的一项有前途的战略。生物乙醇是最具有发展前景的液体燃料产品之一，目前有多个国家使用在汽油中混入10-25％的生物乙醇的混合燃料(Ali,Nasir et al.,2020；Dhande,D Y et al.,2021)。

酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是公认的食品级安全微生物(GRAS)，由于其发酵速率快，糖醇转化率高，鲁棒性强等特点，被认为是最佳的乙醇发酵细胞工厂(JinYS,Cate JH.,2017)。为了实现以木质纤维素为原料的乙醇生产，尽可能降低成本，通常从两方面对菌株进行改造。首先，木质纤维素水解主要生成葡萄糖和木糖，但是，野生酿酒酵母通常不能代谢木糖。通过代谢工程手段在酿酒酵母中引入木糖代谢途径的重组酿酒酵母具有利用木糖的能力，但是，木糖利用效率远低于葡萄糖利用效率，并且发酵底物中葡萄糖的存在对木糖利用有明显的负面影响(Jagtap SS,Rao CV.,2018)，因此提高重组菌株在葡萄糖木糖混合发酵中利用木糖的效率成为了本领域迫切需要解决的技术问题。其次，水解液中存在乙酸、糠醛等对酵母生长代谢有抑制作用的化合物(后简称抑制物)(Almario,María P et al.,2013)，这些抑制物会降低甚至阻遏乙醇生产。为此，应尽量赋予发酵菌株在利用葡萄糖的同时高效利用木糖的能力，从而充分利用原料；同时提高菌株对抑制物的耐受性，减少抑制物对生产效率的影响。

近年来，已开始有工作根据细胞全局调控理念，从调节某些重要的蛋白激酶着手，提高重组菌株木糖利用效率或者增强菌株对抑制物的耐受性。据报道，酿酒酵母中的Rim15是一种参与细胞增殖以响应营养物质的蛋白激酶；参与细胞对营养物质增殖反应的信号转导，特别是静止期的建立。但申请人研究发现敲除蛋白激酶Rim15的编码基因RIM15能提高酿酒酵母重组菌株木糖利用效率；同时还发现，表达点突变子Rim15^G82D能实现提高酿酒酵母重组菌株木糖的利用效率同时还能增强其对木质纤维素中主要抑制物乙酸的耐受性。经检索，所述这些研究发现以及Rim15在提高木糖利用效率、增强菌株对抑制物耐受性方面的作用还未见报道。

发明内容

针对目前重组酿酒酵母在葡萄糖木糖共发酵过程中对木糖的利用效率仍需提升，并且对木质纤维素原料耐受性仍需提高的现状，本发明的目的是提供一种酿酒酵母Rim15蛋白突变体涉及其在提高酿酒酵母木糖利用效率及乙酸耐受性中应用。

本发明所述的酿酒酵母Rim15蛋白突变体，其特征在于：所述Rim15蛋白突变体命名为Rim15^G82D，是由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的调控蛋白即酿酒酵母Rim15蛋白的第82位氨基酸由甘氨酸突变为天冬氨酸形成，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明提供了一种表达的Rim15蛋白为上述Rim15蛋白突变体的重组酿酒酵母。

其中：所述重组酿酒酵母优选是酿酒酵母菌株BSGX201-Rim15^G82D，其细胞中携带编码Rim15蛋白突变体Rim15^G82D的基因RIM15^G82D，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

本发明所述酿酒酵母Rim15蛋白突变体在提高重组酿酒酵母木糖利用效率和/或提高酿酒酵母对乙酸的耐受性中的应用。

上述的重组酿酒酵母在提高木糖利用效率和/或提高对乙酸的耐受性中的应用。

实验证实：本发明提供的表达Rim15的点突变子Rim15^G82D促进了重组酿酒酵母利用木糖的效率；增强了酿酒酵母的乙酸耐受性。表达上述Rim15蛋白突变体的酿酒酵母菌株木糖利用效率相对于出发菌株提高了17.5％；在含有2％乙酸的培养基中延迟期短，生长速率快，最终菌体生物量高。

本发明提供了一种酿酒酵母Rim15蛋白的缺失突变体在提高重组酿酒酵母对木糖利用效率中的应用，其中所述酿酒酵母Rim15蛋白的缺失突变体是其细胞缺失核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的编码Rim15蛋白的基因RIM15，该酿酒酵母Rim15蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明提供了一种缺失了Rim15蛋白表达的重组酿酒酵母，其中所述Rim15蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

其中：所述重组酿酒酵母是酿酒酵母菌株BSGX201-Rim15Δ，其细胞中核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的编码Rim15蛋白的基因RIM15被敲除。

上述缺失了Rim15蛋白表达的重组酿酒酵母在提高木糖利用效率中的应用。

实验证实：本发明提供的缺失Rim15蛋白的技术方案显著促进了重组酿酒酵母利用木糖的效率。缺失Rim15蛋白的重组酿酒酵母菌株木糖利用效率相对于出发菌株提高了49.1％。

本发明提供了一种在提高酿酒酵母木糖利用效率的同时提高其对乙酸的耐受性的方法，其特征在于：所述方法是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的调控蛋白Rim15蛋白的第82位氨基酸由甘氨酸突变为天冬氨酸进而获得表达氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的Rim15蛋白突变体的重组酿酒酵母实现。

综上，实施本发明所述技术方案的实验效果显示：敲除蛋白激酶Rim15的编码基因RIM15能提高酿酒酵母重组菌株木糖利用效率；进一步的，表达点突变子Rim15^G82D能实现提高酿酒酵母重组菌株木糖的利用效率同时还能增强其对木质纤维素中主要抑制物乙酸的耐受性。上述实验结果预示本发明在利用同时含有葡萄糖和木糖的，含有乙酸等抑制物的木质纤维素为主的原料发酵生产化工产品如乙醇中具有广阔的应用前景。

附图说明

图1：用于敲除Rim15的基因RIM15的DNA片段dRIM15-KanMX结构图谱。

在本发明的实施例中，基因敲除采用的是同源重组策略。

图2：用于在基因RIM15上引入点突变的质粒sgRNA(Rim15)图谱。

在本发明的实施例中，使用的是CRISPR-Cas9基因编辑技术，质粒sgRNA(Rim15)用于表达guide RNA，从而引导Cas9专一性结合在染色体上RIM15基因处并在该处造成DNA双链断裂。

图3：用于在基因RIM15上引入点突变的DNA片段donor(Rim15)结构图谱。

在染色体上基因RIM15处制造双链断裂后，由片段donor(Rim15)提供带有点突变G82D的RIM15同源片段。

图4：各菌株葡萄糖木糖共发酵代谢图。

敲除基因RIM15的重组菌株BSGX201-Rim15Δ，表达Rim15^G82D点突变子的重组菌株BSGX201-Rim15^G82D，以及它们的出发菌株在以20g/L葡萄糖和20g/L木糖为碳源的共糖培养基上的发酵特征。其中，—■—代表BSGX201菌株；—●—代表BSGX201-Rim15Δ菌株；—▲—代表BSGX201-Rim15^G82D菌株。

图5：各菌株在含有乙酸的培养基中的生长情况图。

敲除基因RIM15的重组菌株BSGX201-Rim15Δ，表达Rim15^G82D点突变子的重组菌株BSGX201-Rim15^G82D，以及它们的出发菌株在含有2％乙酸的培养基中的生长曲线，用于表征菌株的乙酸耐受性。其中，—■—代表BSGX201菌株；—●—代表BSGX201-Rim15Δ菌株；—▲—代表BSGX201-Rim15^G82D菌株。

具体实施方式

下面结合具体附图和实施例对本发明内容进行详细说明。如下所述例子仅是本发明的较佳实施方式而已，应该说明的是，下述说明仅仅是为了解释本发明，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对实施方式所做的任何简单修改，等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。

下述实施例中，所使用的材料、菌株、质粒、试剂等，如无特殊说明，均从商业途径得到。本发明涉及的方法均为遗传工程和分子生物学领域使用的常规技术和方法。例如Methods in yeast genetics and genomics:a Cold Spring Harbor Laboratory coursemanual 2015 edition(Cold Spring Harbor,N.Y.:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,2005)。这些一般性参考文献提供了本领域技术人员已知的定义和方法。本领域的技术人员可以在本发明提供的实施方式的基础上采用本领域其它常规技术、方法和试剂，而不限于本发明具体实施例的限定。

实施例1：菌株BSGX201-Rim15Δ的构建

本发明中，采用同源重组策略敲除菌株BSGX201染色体上的RIM15基因构建菌株BSGX201-Rim15Δ。其中，所述菌株BSGX201来自保藏编号为CGMCC No.17264的酿酒酵母BSGX001(基因型CEN.PK 113-5D derivative；XK,gre3::PPP,cox4Δ,AE,pJX7)，具体的是敲掉除了BSGX001的基因HIS3(GenBank登录号为854377)，该操作使菌株成为组氨酸营养缺陷型菌株，用于转入带有HIS3表达框的质粒的重组菌株的筛选，此菌株已公开(魏闪，山东大学博士学位论文，2019)。

敲除基因RIM15所用DNA片段dRIM15-KanMX的DNA序列如SEQ ID No.5所示，其具体组成如图1中所示，包括：RIM15上游同源臂RIM15-UP，RIM15下游同源臂RIM15-Down，它们分别和染色体上RIM15基因的上游和下游序列同源；由TEF1启动子和终止子控制表达的G418抗性基因KanMX，以及分别在TEF1启动子和终止子外侧的两个同向的LoxP序列。

该dRIM15-KanMXDNA片段的构建采用重叠延伸PCR方法，具体过程如下：以物Rim15(up)-F和Rim15(up)-R为引物，以酵母菌株BSGX201的染色体DNA为模板扩增获得DNA片段A1。其中，RIM15基因在第六条染色体上Chromosome VI(GenBank登录号为NC_001138.5)。以引物Rim15(D)-F和Rim15(D)-R为引物，以酵母菌株BSGX201的染色体为模板扩增获得DNA片段A2。其中，酵母菌株BSGX201的染色体利用任何市面销售的试剂盒，从SC-URA营养缺陷型培养基中培养12-24小时的BSGX201菌体细胞中提取即可。以KanMX-F和KanMX-R为引物，以质粒pUG6(GenBank登录号为AF298793.1)为模板扩增获得DNA片段A3。之后，将等量DNA片段A1，A2，A3加入PCR管，进行融合PCR。上述各PCR反应条件的退火温度均为52℃，合成时间均为1分钟，PCR循环中其他条件按照常规条件进行。回收PCR产物中大小为2100bp的DNA片段，即为dRIM15-KanMXDNA片段。

上述扩增过程使用的引物序列为(5’至3’)：

Rim15(up)-F：CAACTTCTGCATTGTCTGCC

Rim15(up)-R：GACCTGCAGCGTACGAAGCTTCCTGTCTTCCTCTACTGGGCTTATC

Rim15(D)-F：GATATCAGATCCACTAGTGGCCTATGCGATGAAACGCACTGATAAATTT TAAG

Rim15(D)-R：GCCTCGAAATTGAGAAATGAAATTAGATC

KanMX-F：GATAAGCCCAGTAGAGGAAGACAGGAAGCTTCGTACGCTGCAGG

KanMX-R：CTTAAAATTTATCAGTGCGTTTCATCGCATAGGCCACTAGTGGATC

用dRIM15-KanMXDNA片段转化酿酒酵母菌株BSGX201。

转化采用常规酵母醋酸锂(LiAc)转化法。BSGX201接入2mL SC-URA培养基中活化，培养至出现浑浊，活化好的菌转接至新鲜培养基中，菌体密度约为0.2，30℃，200rpm，培养5-6h至对数生长期，OD为0.7-1.0左右。5000rpm，离心5min收集细胞，无菌水洗涤，再次收集后的细胞重悬于1mL 0.1M LiAc中混匀。取50μL于离心管中，13000rpm离心15秒后去上清，然后加入240μL 50％的PEG3350，混匀后再加入36μL 1M LiAc,10μL 10mg/mL的单链鱼精DNA(提前100℃煮沸5min后迅速置于冰上保存，1小时内使用)，70μL无菌重蒸水溶解的dRIM15-KanMX片段2μg。混合液30℃保温30min，42℃热激25min，之后8000rpm，离心15s，去上清。加入500μLYPD液体培养基，30℃培养2-3h。之后，培养液适量涂布在添加600mg/LG418的SC-URA的固体培养基平板中，30℃培养2-3天，待转化子长出。正确的转化子即为酿酒酵母菌株BSGX201-Rim15Δ。所述酿酒酵母菌株BSGX201-Rim15Δ细胞中核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的编码Rim15蛋白的基因RIM15被敲除。

YPD培养基：20g/L蛋白胨，10g/L酵母粉；固体培养基添加20g/L琼脂粉；灭菌条件：115℃，30min。使用前，添加20g/L葡萄糖制成YPD培养基。固体培养基额外添加2％琼脂粉。

SC-URA营养缺陷型培养基：1.7g/L酵母基础氮源(YeastNitrogen Base，withoutAmino Acids andAmmonium Sulfate)，5g/L硫酸铵，0.77g/L CSM-URA，固体培养基添加20g/L琼脂粉，使用10M的NaOH调pH值5.5左右；灭菌条件：115℃，30min。使用前，添加20g/L葡萄糖制成SC-URA营养缺陷型培养基。固体培养基额外添加2％琼脂粉。

实施例2：菌株BSGX201-Rim15^G82D的构建

本发明中，采用CRISPR-Cas9基因编辑技术在菌株BSGX201染色体上的RIM15基因上引入点突变。质粒Cas9-NAT用于表达Cas9核酸酶(Zhang et al.,2014；Lee,Ye-Gi etal.,2022)，该质粒已经商品化，可购自Addgene(https://www.addgene.org/)，商品号：Plasmid#64329；质粒sgRNA(Rim15)用于表达guide RNA(图2)，从而引导Cas9专一性结合在染色体上RIM15基因处并在该处造成DNA双链断裂；DNA片段donor(Rim15)提供带有点突变G82D的RIM15同源片段(图3)，其具体核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。其中，质粒sgRNA(Rim15)的具体核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，其构建是以sgRNA-F和sgRNA-R为引物，以质粒gRNA-HyB(Zhang et al.,2014；Lee,Ye-Gi et al.,2022)为模板，通过反向PCR获得。PCR反应条件的退火温度均为47℃，合成时间均为6分钟30秒，PCR循环中其他条件按照常规条件进行。回收PCR产物转化大肠杆菌，再培养大肠杆菌转化子后提取质粒获得(Sundarraj,Shenbagamoorthy et al.，2022)。DNA片段donor(Rim15)是以donor-F和donor-R为引物，以酵母BSGX201的染色体DNA为模板扩增获得。

上述扩增过程使用的引物序列为(5’至3’)：

sgRNA-F：CTATCATCGGCGACTCCTGTgatcatttatctttcactgcggag

sgRNA-R：ACAGGAGTCGCCGATGATAGgttttagagctagaaatagcaag

donor-F：CGGCAAGGTGCGATATGGCTCTCCACAGTGGAACACGATCACAGGAGTC GCCGATGATAGTGACTCTTCTCCGACGTACATTGCAGACC

引物donor-R：CTGTGGCCTTTTGAAAGACACCTTTATCTTGATCGGATCCGAGAATA AGGTCTGCAATGTACGTCGGAGAAGAGtCACTATCATCGGCG

用质粒Cas9-NAT，质粒sgRNA(Rim15)，以及DNA片段donor(Rim15)同时转化酿酒酵母菌株BSGX201。转化采用常规酵母醋酸锂(LiAc)转化法，具体同步骤实施例1。其中，最后加入的70μL无菌重蒸水溶解了1μg质粒Cas9-NAT，1μg质粒sgRNA(Rim15)，以及1μg DNA片段donor(Rim15)。混合液30℃保温30min，42℃热激25min，之后8000rpm，离心15s，去上清。加入500μLYPD液体培养基，30℃培养2-3h。之后，培养液适量涂布在添加250mg/L hygB(潮霉素B)和200mg/L诺尔斯菌素(Nourseothricin Sulfate)的SC-URA的固体培养基平板中，30℃培养2-3天，待转化子长出。正确的转化子即为菌株BSGX201-Rim15^G82D。所述酿酒酵母菌株BSGX201-Rim15^G82D细胞中携带编码Rim15蛋白突变体Rim15^G82D的基因RIM15^G82D，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

实施例3：重组菌株的葡萄糖木糖共糖发酵特征测试

将出发菌株BSGX201和重组菌株BSGX201-Rim15Δ，BSGX201-Rim15^G82D进行葡萄糖木糖共发酵，比较他们的木糖利用速率及乙醇产量。

发酵过程如下：分别将出发菌株和重组菌株BSGX201-Rim15Δ、BSGX201-Rim15^G82D以初始OD₆₀₀(即细胞生物量)为0.5转接到含有20mL SC-URA培养基的100mL三角瓶中，30℃培养14±2h，进行发酵种子的活化和富集。活化好的种子5500rpm，离心3min，弃去上清，菌体用发酵培养基洗涤1-2次，去除生长培养基的残留。菌体重悬于1mL的发酵培养基中，以初始OD₆₀₀为0.5接入装有40mL发酵培养基的200mL厌氧瓶中，碳源为20g/L葡萄糖和20g/L木糖，200rpm，30℃培养72h，定时取样测菌体的生长。

上述发酵培养基配方为：1.7g/L YNB，5g/L硫酸铵，0.02g/L组氨酸，20g/L葡萄糖(葡萄糖单独灭菌后使用前加入)，20g/L木糖(木糖单独灭菌后使用前加入)。

各菌株发酵液样品13000rpm，离心1min，使用0.22μm的滤膜过滤除菌后使用HPLC检测样品中葡萄糖、木糖和乙醇的浓度。其中HPLC分析使用Bio-Rad公司LC-20A系统，层析柱使用

HPX-87H(Bio-Rad)，用Bio-Rad公司的RID-10A示差检测器检测。流动相为5mmol/L H₂SO₄，流速0.6mL/min，柱温箱温度保持45℃。

检测的发酵结果(图4)显示，BSGX201-Rim15Δ、BSGX201-Rim15^G82D菌株的生长水平略低于出发菌株BSGX201，但重组菌株的木糖利用速率和乙醇产量都高于出发菌株，并且BSGX201-Rim15Δ菌株的代谢能力优于BSGX201-Rim15^G82D菌株。其中，出发菌株BSGX201的木糖体积利用速率为0.114g/l/h，而菌株BSGX201-Rim15Δ和BSGX201-Rim15^G82D菌株的木糖体积利用速率分别为0.170g/l/h和0.134g/l/h，比出发菌株分别提高49.1％和17.5％；出发菌株BSGX201的乙醇终浓度为11.88±0.07g/l，而菌株BSGX201-Rim15Δ和BSGX201-Rim15^G82D菌株的乙醇终浓度分别达到13.81±0.06g/l和13.03±0.01g/l，比出发菌株分别提高16.2％和9.7％。

以上结果表明，敲除转录Rim15的基因或者表达Rim15^G82D点突变子均能显著提高酿酒酵母菌株在葡萄糖木糖共发酵中木糖利用能力，从而提高乙醇得率。

实施例4：重组菌株对乙酸的耐受情况测试

将出发菌株BSGX201、重组菌株BSGX201-Rim15Δ和BSGX201-Rim15^G82D在含有乙酸的培养基中进行培养，通过比较菌株的生长情况反映菌株的乙酸耐受性，比较重组菌株之间的耐受性差异。

培养过程如下：分别将出发菌株和重组菌株BSGX201-Rim15Δ、BSGX201-Rim15^G82D以初始OD₆₀₀0.5转接到含有20mL SC-HIS培养基的100mL三角瓶中，30℃培养12±2h，进行待测种子的活化和富集。SC-HIS培养基配方为：1.7g/L YNB，5g/L硫酸铵，0.02g/L组氨酸(His)，20g/L葡萄糖(葡萄糖单独灭菌后使用前加入)。活化好的种子5500rpm，离心3min，弃去上清，菌体用含有2g/L乙酸的SC-HIS培养基洗涤1-2次，去除残留的生长培养基。菌体重悬于1mL添加乙酸的SC-HIS培养基中，以初始OD₆₀₀为0.5接入装有SC-HIS+2g/L乙酸培养基的24孔板中，每个孔的最终体积为1.5mL。用Multi-Detection Microplate Reader(Synergy HT,BioTek,USA)恒温30℃，连续振板，每隔一小时读取OD₆₀₀。

发酵结果(图5)显示，BSGX201-Rim15Δ的生长速率略低于出发菌株BSGX201，但BSGX201-Rim15^G82D菌株的生长速率显著高于出发菌株BSGX201，表明BSGX201-Rim15^G82D有比出发菌株BSGX201更高的乙酸耐受性。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种酿酒酵母Rim15蛋白突变体，其特征在于：所述Rim15蛋白突变体命名为Rim15^G82D，是由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的调控蛋白即酿酒酵母Rim15蛋白的第82位氨基酸由甘氨酸突变为天冬氨酸形成，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种表达的Rim15蛋白为权利要求1所述Rim15蛋白突变体的重组酿酒酵母。

3.根据权利要求2所述的重组酿酒酵母，其特征在于：所述重组酿酒酵母是酿酒酵母菌株BSGX201-Rim15^G82D，其细胞中携带编码Rim15蛋白突变体Rim15^G82D的基因RIM15^G82D，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.权利要求1所述酿酒酵母Rim15蛋白突变体在提高重组酿酒酵母木糖利用效率和/或提高酿酒酵母对乙酸的耐受性中的应用。

5.权利要求2或3所述的重组酿酒酵母在提高木糖利用效率和/或提高对乙酸的耐受性中的应用。

6.一种酿酒酵母Rim15蛋白的缺失突变体在提高重组酿酒酵母对木糖利用效率中的应用，其中所述酿酒酵母Rim15蛋白的缺失突变体是其细胞缺失核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的编码Rim15蛋白的基因RIM15，该酿酒酵母Rim15蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

7.一种缺失了Rim15蛋白表达的重组酿酒酵母，其中所述Rim15蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

8.根据权利要求7所述的重组酿酒酵母，其特征在于：所述重组酿酒酵母是酿酒酵母菌株BSGX201-Rim15Δ，其细胞中核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的编码Rim15蛋白的基因RIM15被敲除。

9.权利要求7或8所述的重组酿酒酵母在提高木糖利用效率中的应用。

10.一种在提高酿酒酵母木糖利用效率的同时提高其对乙酸的耐受性的方法，其特征在于：所述方法是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的调控蛋白Rim15蛋白的第82位氨基酸由甘氨酸突变为天冬氨酸进而获得表达氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的Rim15蛋白突变体的重组酿酒酵母实现。

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