CN115886166A - 一种贻贝多肽功能饮料及其制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种贻贝多肽功能饮料及其制备工艺，属于贻贝低分子肽加工技术领域。以新鲜贻贝为原料，经过取肉脱腥、匀浆、冷冻干燥和粉碎获得80～100目贻贝粉。将获得的贻贝粉与蒸馏水按料液比1：50～80的比例匀浆，将匀浆液进行酶解、离心分离、膜分离、真空冷冻干燥，制得贻贝多肽；然后将其以一定质量配比与其他辅料混合，溶于蒸馏水制得饮料；最后将饮料装罐后于高温瞬时灭菌，冷却后于2～5℃低温保存。本发明制备了一种风味俱佳且具有护肝活性的贻贝低分子肽功能饮料，有利于高附加值、高品质深加工产品的开发，实现贻贝的高值化和高质化利用。
Description
技术领域
本发明涉及贻贝低分子肽加工技术领域，更具体地说，涉及一种贻贝多肽功能饮料及其制备工艺。
背景技术
贻贝，隶属于双壳纲(Bivalvia)、贻贝目(Mytiloida)、贻贝科(Mytilidae)、贻贝属(Mytilus),常见于潮间带至20m水深的浅海,广泛分布于南北半球的寒温带海域。贻贝软体部分含有丰富的不饱和脂肪酸、矿物质等营养成分，尤其是在贻贝干制肉中蛋白质含量可达50％以上，并且含有丙氨酸、谷氨酸、甘氨酸等人体必需的8种氨基酸。除此之外，其鲜味物质含量也较多，还有贝类特有的甘油酸、琥珀酸、等多种功能性物质，但因其难以运输和储存，主要以沿海地区的鲜销形式为主，所以产品附加值较低。因此，市面上贻贝深加工产品种类匮乏，贻贝资源未得到有效利用。
近年来，随者现代城市化生活的加快，亚健康问题日益突出，致使人们不断追求绿色天然的日常饮食。因此，广大消费者对近年来生产的诸多功能性饮料有着极大的兴趣，如何通过饮料进行健康保健功效日益引起人们的重视。促使饮料食品领域的研究人员不断研究开发营养价值高新产品,以满足人们日益增长的对新型功能食品的需要,改善混合饮料口感、稳定性以及营养成分对满足人们的需求具有重要的意义。
发明内容
本发明旨在高效制备高品质、具有对酒精性肝损伤有辅助保护作用的贻贝多肽功能饮料，且保持生物活性成分的稳定。
为了达到上述目的，本发明提供一种基于外源酶水解工艺的提取方法获取上述贻贝多肽，使其高值化和高质化加工。
优选方式下，包括如下步骤：
S1、将新鲜贻贝肉置于脱腥溶液中浸泡；
S2、将步骤S1中得到的脱腥贻贝肉经匀浆和真空冷冻干燥，制得相应冻干物；
S3、将步骤S2得到的冻干物粉碎处理，过80～100目筛，得到贻贝冻干粉；
S4、将步骤S3中得到的贻贝冻干粉与蒸馏水匀浆，调节pH值，在适当温度下，加入蛋白酶酶解，待酶解完成后沸水浴灭酶；
S5、将步骤S4所述贻贝混合肽水解液冷却至室温，离心，收集上清液；
S6、采用膜分离技术对S5所收集到的上清液进行分离；
S7、将步骤S6得到的多肽溶液真空冷冻干燥处理，粉碎后即得贻贝多肽；
进一步地，步骤S1所述贻贝为紫贻贝；所述脱腥溶液为CaCl2和HCl的水溶液，CaCl2的质量分数为0.2～0.3％，HCl的质量分数为0.05～0.10％，浸泡时间为30～60min；脱腥处理的温度为4～8℃。
进一步地，步骤S2所述匀浆具体为：转速7000～8000rpm/min，匀浆时间4～6min。
进一步地，步骤S2和步骤S7中所述真空冷冻干燥为经过8次升温的干燥过程，具体为：﹣50℃、2～4h，﹣40℃、3～5h，﹣30℃、3～6h，﹣20℃、5～10h，﹣10℃、5～15h，﹣0℃、10～15h，5℃、10～15h，10℃、10～15h。
进一步地，步骤S4中贻贝冻干粉与蒸馏水按料液比1：50～80的比例的均浆。
进一步地，步骤S4所述蛋白酶酶解可选择下述任一种方法进行酶解：使用胰蛋白酶在pH 7.0～7.5，温度为37～45℃下进行酶解4～5h；使用中性蛋白酶在pH 7.0～8.0，温度为45～50℃下进行酶解4～5h；使用碱性蛋白酶在pH 8.0～8.5，温度为50～60℃下进行酶解4～5h。
进一步地，所述所述可调节pH值溶液包括柠檬酸和Na2CO3。
进一步地，步骤S5所述离心操作为在4～6℃下，以8000～10000rpm的转速，离心10～15分钟。
进一步地，步骤S6所述膜分离技术所截留的分子量为5KDa。
本发明还提供一种贻贝多肽功能饮料，由以下步骤制得
S1、取贻贝多肽5～8质量份、葡萄浓缩汁15～20质量份、谷胱甘肽0.5～1.0质量份、维生素C0.8～1.5质量份、柠檬酸0.2～0.3质量份、苹果酸0.2～0.3质量份、蜂蜜30～50质量份、甜菊糖苷0.3～0.5质量份，溶于800～1200质量份的蒸馏水中，得功能饮料。
S2、将S1中制得的饮料装罐后，高温瞬时灭菌；
S3、检查罐体有无破裂等异常现象，贴上标签后将饮料于2～5℃低温保存。
进一步地，步骤S2所述高温瞬时灭菌条件为：将装罐后的饮料置于103～105℃条件下持续10～15s。
本发明的有益效果是：
1、贻贝是一种大宗经济贝类，来源广泛，以贻贝为原料开发具有对酒精性肝损伤有辅助保护作用的低分子肽功能饮料，安全无副作用，且生产成本较低，可以满足大规模生产的需求。
2、基于外源酶水解工艺获取的贻贝多肽中含有丰富的氨基酸，对于预防酒精急性损伤的小鼠肝脏具有积极作用，且该工艺对贻贝的蛋白质理化性质无影响。
3、经加工后的贻贝多肽功能饮料，口感丰富，风味俱佳，品质稳定。
4、结合上述工艺所得一种贻贝多肽功能饮料，可实现低值贻贝的高值化和高质化利用，并利于功能性饮料的开发。
具体实施方式
下面列举一部分具体实施例对本发明进行说明，有必要在此指出的是以下具体实施例只用于对本发明作进一步说明，不代表对本发明保护范围的限制。其他人根据本发明做出的非本质的修改或调整仍属于本发明的保护范围。
实施例1：
S1、将新鲜贻贝肉置于脱腥溶液中浸泡30min，脱腥处理的温度为8℃。所述脱腥溶液为CaCl2和HCl的水溶液，CaCl2的质量分数为0.2％，HCl的质量分数为0.10％。
S2、新鲜贻贝肉经8000rpm/min条件匀浆时间4min，再经真空冷冻干燥制得水分含量低于10％的冻干物。所述真空冷冻干燥为经过8次升温的干燥过程，具体为：﹣50℃、2h，﹣40℃、3h，﹣30℃、3h，﹣20℃、5h，﹣10℃、5h，0℃、10h，5℃、10h，10℃、10h。
S3、将步骤S2得到的冻干物粉碎处理，过100目筛，得到贻贝冻干粉。
S4、贻贝冻干粉与蒸馏水按料液比1：50的比例匀浆，调节pH值为7.0，40℃条件下，加入胰蛋白酶酶解4h，待酶解完成后沸水浴灭酶。
S5、将步骤S4所述贻贝混合肽水解液冷却至室温，4℃、8000rpm离心15分钟，收集上清液。
S6、采用膜分离技术对S5收集到的上清液进行分离，截留分子量为5KDa。
S7、将步骤S6得到的多肽溶液真空冷冻干燥处理，粉碎后即得贻贝多肽。所述真空冷冻干燥为经过8次升温的干燥过程，具体为：﹣50℃、3h，﹣40℃、3h，﹣30℃、5h，﹣20℃、5h，﹣10℃、5h，0℃、10h，5℃、11h，10℃、10h。
S8、取步骤S7得到的贻贝多肽以5质量份、葡萄浓缩汁15质量份、谷胱甘肽0.5质量份、维生素C0.8质量份、柠檬酸0.2质量份、苹果酸0.2质量份、蜂蜜30质量份、甜菊糖苷0.3质量份溶于800质量份蒸馏水中，得饮料。
S9、将饮料装罐后，高温瞬时灭菌。所述高温瞬时灭菌条件为：将装罐后的饮料置于105℃条件下持续10s。
S10、检查罐体有无破裂等异常现象，贴上标签后将饮料于4℃低温保存。
实施例2：
S1、将新鲜贻贝肉置于脱腥溶液中浸泡45min，脱腥处理的温度为6℃。所述脱腥溶液为CaCl2和HCl的水溶液，CaCl2的质量分数为0.25％，HCl的质量分数为0.07％。
S2、新鲜贻贝肉经7000rpm/min条件匀浆时间6min，再经真空冷冻干燥制得水分含量低于10％的冻干物。所述真空冷冻干燥为经过8次升温的干燥过程，具体为：﹣50℃、2h，﹣40℃、3h，﹣30℃、3h，﹣20℃、5h，﹣10℃、5h，0℃、10h，5℃、11h，10℃、10h。
S3、将步骤S2得到的冻干物粉碎处理，过100目筛，得到贻贝冻干粉。
S4、贻贝冻干粉与蒸馏水按料液比1：70的比例匀浆，调节pH值为7.5，50℃条件下，加入中性蛋白酶酶解5h，待酶解完成后沸水浴灭酶。
S5、将步骤S4所述贻贝混合肽水解液冷却至室温，4℃、10000rpm离心10分钟，收集上清液。
S6、采用膜分离技术对S5收集到的上清液进行分离，截留分子量为5KDa。
S7、将步骤S6得到的多肽溶液真空冷冻干燥处理，粉碎后即得贻贝多肽。所述真空冷冻干燥为经过8次升温的干燥过程，具体为：﹣50℃、3h，﹣40℃、3h，﹣30℃、3h，﹣20℃、5h，﹣10℃、5h，0℃、10h，5℃、10h，10℃、10h。
S8、取步骤S7得到的贻贝多肽以7质量份、葡萄浓缩汁18质量份、谷胱甘肽0.8质量份、维生素C1.2质量份、柠檬酸0.3质量份、苹果酸0.3质量份、蜂蜜40质量份、甜菊糖苷0.4质量份溶于1000质量份蒸馏水中，得饮料。
S9、将饮料装罐后，高温瞬时灭菌。所述高温瞬时灭菌条件为：将装罐后的饮料置于104℃条件下持续15s。
S10、检查罐体有无破裂等异常现象，贴上标签后将饮料于4℃低温保存。
实施例3：
S1、将新鲜贻贝肉置于脱腥溶液中浸泡60min，脱腥处理的温度为4℃。所述脱腥溶液为CaCl2和HCl的水溶液，CaCl2的质量分数为0.3％，HCl的质量分数为0.05％。
S2、新鲜贻贝肉经8000rpm/min条件匀浆时间5min，再经真空冷冻干燥制得水分含量低于10％的冻干物。所述真空冷冻干燥为经过8次升温的干燥过程，具体为：﹣50℃、2h，﹣40℃、3h，﹣30℃、3h，﹣20℃、5h，﹣10℃、6h，0℃、10h，5℃、11h，10℃、10h。
S3、将步骤S2得到的冻干物粉碎处理，过100目筛，得到贻贝冻干粉。
S4、贻贝冻干粉与蒸馏水按料液比1：60的比例匀浆，调节pH值为8.0，55℃条件下，加入碱性蛋白酶酶解5h，待酶解完成后沸水浴灭酶。
S5、将步骤S4所述贻贝混合肽水解液冷却至室温，4℃、10000rpm离心10分钟，收集上清液。
S6、采用膜分离技术对S5收集到的上清液进行分离，截留分子量为5KDa。
S7、将步骤S6得到的多肽溶液真空冷冻干燥处理，粉碎后即得贻贝多肽。所述真空冷冻干燥为经过8次升温的干燥过程，具体为：﹣50℃、2h，﹣40℃、3h，﹣30℃、3h，﹣20℃、5h，﹣10℃、5h，﹣0℃、10h，5℃、10h，10℃、12h。
S8、取步骤S7得到的贻贝多肽以8质量份、葡萄浓缩汁20质量份、谷胱甘肽1.5质量份、维生素C1.5质量份、柠檬酸0.3质量份、苹果酸0.3质量份、蜂蜜50质量份、甜菊糖苷0.5质量份溶于1200质量份蒸馏水中，得饮料。
S9、将饮料装罐后，高温瞬时灭菌。所述高温瞬时灭菌条件为：将装罐后的饮料置于105℃条件下持续10s。
S10、检查罐体有无破裂等异常现象，贴上标签后将饮料于4℃低温保存。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
实验例
1.材料和试剂
(1)贻贝购自辽宁省大连市新长兴水产品市场；红星二锅头购自北京市红星二锅头有限公司；谷胱甘肽购自浙江省深友生物技术有限公司。
(2)实验动物：昆明种小鼠，雄性，清洁级，体重18～22g，由辽宁长生生物技术股份有限公司提供，许可证号为：SCXK(辽)2015-0001。
(3)实验仪器：酶标仪、高速冷冻离心机、电子天平。
(4)实验试剂：
血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肝组织丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
所用的贻贝多肽为实施例2制得的。
利用实验小鼠，验证贻贝多肽保护肝脏的功效，参考《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)的相关实验方法进行。
2.实验方法
将48只雄性昆明种小鼠(18～22g)随机分为6组(8只/组)，进行5天适应性喂养后，称重并按体重分为空白组、模型组、阳性对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。分组后继续灌胃(食水不限)7天，第8天开始，除空白组小鼠之外，其余小鼠均在灌胃30min后给予56°红星二锅头(13mg/kg/d)，连续3天以诱导急性酒精性肝损伤。最后一次灌胃后空腹(禁食不禁水)16h，称重，摘取眼球取血，在4℃、3000rpm条件下离心15min，取上层血清做好标记保存于﹣80℃冰箱中待测；解剖小鼠，取肝脏，在4℃的生理盐水中反复冲洗，滤纸吸干水分，称取肝脏重量；剪取一定大小的肝组织于塑料离心管内，放入9倍体积(v/m，mL/g)预冷生理盐水，置于冰浴中在匀浆机作用下，制备肝匀浆浑浊液。在4℃、3000rpm条件下离心l5min，得到10％(m/v，g/mL)肝组织匀浆液，分装并置于﹣80℃冰箱待测。
3.实验分组及剂量
4.数据处理
采用SPSS22.0软件对数据进行处理，采用单因素方差分析检验方法进行均数比较。
5.实验结果
5.1实验处理对小鼠血清指标水平的影响
由表1可见，灌胃10天后，贻贝多肽三个剂量组小鼠血清TC、TG和ALT均显著低于模型组；同时，高剂量组的ALT、AST水平与正常组小鼠没有显著性差异，说明贻贝肽可以使受酒精损伤的肝脏恢复正常。因此，贻贝多肽具有对酒精性肝损伤有辅助保护作用。
表1实验处理对小鼠血清生化指标的影响
注：表中实验数据以“平均值±标准差”表示(n＝8)。同一列后标注不同小写英文字母，表示同一指标，不同灌胃组的指标水平存在显著性差异(P＜0.05)。
5.2实验处理对小鼠肝脏抗氧化水平的影响
由表2可见，灌胃10天后，贻贝多肽三个剂量组小鼠肝脏SOD和GSH-PX水平均显著高于模型组，MDA水平低于模型组；同时，高剂量组的MDA、GSH-PX水平与正常组小鼠没有显著性差异，说明贻贝肽可以使受酒精损伤的肝脏恢复正常。因此，贻贝多肽具有对酒精性肝损伤有辅助保护作用。
表2实验处理对小鼠肝脏抗氧化指标的影响
注：表中实验数据以“平均值±标准差”表示(n＝8)。同一列后标注不同小写英文字母，表示同一指标，不同灌胃组的指标水平存在显著性差异(P＜0.05)。
6.实验小结
贻贝多肽各剂量与模型组比较，均能降低小鼠血清TC、TG、ALT，肝脏MDA含量，升高肝脏SOD和GSH-PX含量。根据卫生部颁布《保健食品检验与评价技术规范》中判断标准，可以判定本发明中的贻贝多肽具有保护肝脏的作用，且在一定剂量范围内可以使受损肝脏恢复正常，表明该贻贝多肽在具有对酒精性肝损伤有辅助保护作用和抗氧化方面具有增效作用。
Claims (10)
1.一种贻贝多肽功能饮料，其特征在于，由以下步骤制得：
S1、取贻贝多肽5～8质量份、葡萄浓缩汁15～20质量份、谷胱甘肽0.5～1.0质量份、维生素C0.8～1.5质量份、柠檬酸0.2～0.3质量份、苹果酸0.2～0.3质量份、蜂蜜30～50质量份、甜菊糖苷0.3～0.5质量份，溶于800～1200质量份的蒸馏水中，得功能饮料；
S2、将S1中制得的饮料装罐后，高温瞬时灭菌；
S3、检查罐体有无破裂等异常现象，贴上标签后将饮料于2～5℃低温保存。
2.根据权利要求1所述贻贝多肽功能饮料，其特征在于，步骤S2所述高温瞬时灭菌条件为：将装罐后的饮料置于103～105℃条件下持续10～15s。
3.一种权利要求1中所述的贻贝多肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、将新鲜贻贝肉置于脱腥溶液中浸泡；
S2、将步骤S1中得到的脱腥贻贝肉经匀浆和真空冷冻干燥，制得相应冻干物；
S3、将步骤S2得到的冻干物粉碎处理，过80～100目筛，得到贻贝冻干粉；
S4、将步骤S3中得到的贻贝冻干粉与蒸馏水匀浆，调节pH值，在适当温度下，加入蛋白酶酶解，待酶解完成后沸水浴灭酶；
S5、将步骤S4所述贻贝混合肽水解液冷却至室温，离心，收集上清液；
S6、采用膜分离技术对S5所收集到的上清液进行分离；
S7、将步骤S6得到的多肽溶液真空冷冻干燥处理，粉碎后即得贻贝多肽。
4.根据权利要求3所述贻贝多肽的制备方法，其特征在于，步骤S1所述贻贝为紫贻贝；所述脱腥溶液为CaCl2和HCl的水溶液，CaCl2的质量分数为0.2～0.3％，HCl的质量分数为0.05～0.10％，浸泡时间为30～60min；脱腥处理的温度为4～8℃。
5.根据权利要求3所述贻贝多肽的制备方法，其特征在于，步骤S2所述匀浆具体为：转速7000～8000rpm/min，匀浆时间4～6min。
6.根据权利要求3所述贻贝多肽的制备方法，其特征在于，步骤S2和步骤S7中所述真空冷冻干燥为经过8次升温的干燥过程，具体为：﹣50℃、2～4h，﹣40℃、3～5h，﹣30℃、3～6h，﹣20℃、5～10h，﹣10℃、5～15h，﹣0℃、10～15h，5℃、10～15h，10℃、10～15h。
7.根据权利要求3所述贻贝多肽的制备方法，其特征在于，步骤S4中贻贝冻干粉与蒸馏水按料液比1：50～80的比例的均浆。
8.根据权利要求3所述贻贝多肽的制备方法，其特征在于，步骤S4所述蛋白酶酶解可选择下述任一种方法进行酶解：使用胰蛋白酶在pH 7.0～7.5，温度为37～45℃下进行酶解4～5h、使用中性蛋白酶在pH 7.0～8.0，温度为45～50℃下进行酶解4～5h、使用碱性蛋白酶在pH 8.0～8.5，温度为50～60℃下进行酶解4～5h；所述所述可调节pH值溶液包括柠檬酸和Na2CO3。
9.根据权利要求3所述贻贝多肽的制备方法，其特征在于，步骤S5所述离心操作为在4～6℃下，以8000～10000rpm的转速，离心10～15分钟。
10.根据权利要求3所述贻贝多肽的制备方法，其特征在于，步骤S6所述膜分离技术所截留的分子量为5KDa。
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