CN112273656A - 一种可增强免疫力的黑蒜口服液及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种可增强免疫力的黑蒜口服液，由如下重量份数的组分制成：黑蒜提取物20‑30份、桑枝提取物10‑20份、番茄汁15‑20份、生姜汁1‑3份、柠檬汁3‑5份；其制备方法，包括如下步骤：(1)将番茄汁、生姜汁、柠檬汁与蒸馏水混合均匀得到混合液，而后将混合液、黑蒜提取物、桑枝提取物以及适量的水于60‑75℃条件下搅拌混匀；(2)灌装，压盖，灭菌，得到黑蒜口服液。本发明通过组分间的合理搭配，多种营养成分的搭配，可有效提升人体免疫力，减少黑蒜的不良气味，同时改善其适口性并保留或增加其有益功能，具有口感好、营养价值高、质量稳定性好等优点，具有抗氧化、延缓衰老等功效。

Description

一种可增强免疫力的黑蒜口服液及其制备方法
技术领域
本发明涉及功能性食品技术领域，具体涉及一种可增强免疫力的黑蒜口服液及其制备方法。
背景技术
免疫力低下的身体易于被感染或患癌症；免疫力超常也会产生对身体有害的结果，如引发过敏反应、自身免疫疾病等。各种原因使免疫系统不能正常发挥保护作用，在此情况下，极易招致细菌、病毒、真菌等感染，因此免疫力低下最直接的表现就是容易生病。因经常患病，加重了机体的消耗，所以一般有体质虚弱、营养不良、精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等表现，生病、打针吃药便成了家常便饭。每次生病都要很长时间才能恢复，而且常常反复发作。长此以往会导致身体和智力发育不良，还易诱发重大疾病。
大蒜被称为最好的天然抗生素食品和保健食品，其药用价值已引起国内外有关科研部门的关注。大蒜是一种药食两用的食物，大蒜对防病治病虽有如此功能，但过多生吃大蒜，易动火，耗血，影响视力，对胃肠道也有刺激作用。所以，阴虚火旺，患有胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、肾炎、心脏病和便秘者不宜多吃。由于大蒜有较强的杀伤力，在杀死肠内致病菌的同时，也会把肠内的有益菌杀死，引起维生素B2缺乏症，易患口角炎、舌炎、口唇炎等皮肤病。虽然大蒜的有效成份很多，但最受关注的是大蒜经发酵所产生的S-烯丙基半胱氨酸，口本大学生物资源部有贺丰彦教授说：它能增强免疫力的功效，能激活免疫系统的辅助T细胞，这种细胞在人体内发挥着司令部的作用，可命令体内的“防卫细胞”捕捉杀死病菌等外敌。同时，能清理人的血管内壁里沉积的杂质，增强血管的弹性，改善血液流动速度，有很好的稳压作用。
黑蒜又名黑大蒜、发酵黑蒜、黑蒜头，是用新鲜的生蒜，带皮放在高温高湿的发酵箱里发酵60-90天，让其自然发酵制成的食品，它在保留生大蒜原有成份，对增强人体免疫力、恢复人体疲劳，保持人体健康起到巨大积极作用，而且味道酸甜，食后无蒜味，不上火，是速效性的保健食品。与新鲜的生大蒜相比，黑蒜在感官、气味和营养价值等方面都有明显的优势，黑蒜中的蛋白质、氨基酸和多酚类物质等成分的含量显著提高。黑蒜具有抗氧化、美容养颜和调节血糖等作用，受到越来越多消费者的喜爱，具有广阔的市场前景。
随着黑大蒜的有益效果被公众广泛认可，开发出不同的产品来满足民众对黑大蒜应用有更多的选择，这是食品加工企业奉行的义务，但就将黑蒜制成不同类型产品的过程中，仍要将黑蒜再行加工，不仅费工、费时，还会使黑蒜的再加工过程造成质量无法保证、损失浪费等问题，为了使得黑蒜得到更有益的应用，选择工艺方便、可控，适宜批量生产的方法制备黑蒜口服液是一种为之方便的方法。黑蒜富含类黄酮等生物活性物质的报道已有大量实验得以证实，因此黑蒜常被用来制作成各种保健食品，尤其是饮品，然而这些饮品中的活性物质在较长的保质期内易生成沉淀影响产品的澄清度，从而降低产品的感官品质。此外，黑蒜虽然经过发酵后刺激性气味有所缓解，但是并没有完全消除，对产品的气味和口感还是有一定的影响，从而导致对开发相关产品存在一定局限性。
发明内容
为了部分解决上述技术问题，本发明提供了一种可增强免疫力的黑蒜口服液及其制备方法，具体技术方案如下：一种可增强免疫力的黑蒜口服液，由如下重量份数的组分制成：黑蒜提取物20-30份、桑枝提取物10-20份、番茄汁15-20份、生姜汁1-3份、柠檬汁3-5份；上述黑蒜提取物的制备方法包括如下步骤：(1)黑蒜切碎，用95％的乙醇浸提3次，每次3-7天；合并浸提液，将浸提液加入至搅拌器中，向搅拌器中加入上述黑蒜0.01-0.03倍重量的果胶酶混合物，并在40℃条件下搅拌2h，使用超高压提取技术在100MPa和55℃下进行压力处理24h后，过滤并将收集到的滤液浓缩去除乙醇后得到浓缩液；(2)将步骤(1)中过滤得到的滤渣用3倍重量的蒸馏水将滤渣分散，再用95％的乙醇提取，提取3次，收集提取液并将提取液浓缩去除乙醇后得到浓缩提取液；(3)将步骤(1)中的浓缩液和步骤(2)中的浓缩提取液混合均匀得到黑蒜提取物。
优选地，一种可增强免疫力的黑蒜口服液由如下重量份数的组分制成：黑蒜提取物30份、桑枝提取物15份、番茄汁15份、生姜汁3份、柠檬汁3份。
上述果胶酶混合物包括果胶酶、纤维素酶和半纤维素，且上述果胶酶、纤维素酶和半纤维素重量份数比为2:1:1。
上述步骤(2)中乙醇的用量为滤渣重量的2倍。
上述桑枝提取物的制备方法包括如下步骤：将桑枝烘干并粉碎过筛，得到桑枝粉末，将桑枝粉末和无水乙醇以固液比1g：(15-20)mL混匀，加热至沸腾后煮沸4h，得到第一煎煮液，将第一煎煮液过滤后的第一滤液和第一滤渣分别收集起来；第一滤渣和水以固液比1g：(15-20)mL混匀加热至沸腾后煮沸4h，得到第二煎煮液，将第二煎煮液过滤后得到第二滤液；将第一滤液和第二滤液合并，并在减压条件下除去乙醇后得到桑枝提取物。
上述桑枝在烘干后进行蒸汽爆破处理，蒸汽压为1-1.5MPa，维持压力120-150秒，然后粉碎过筛。
一种可增强免疫力的黑蒜口服液的制备方法，包括如下步骤：(1)将番茄汁、生姜汁、柠檬汁与蒸馏水混合均匀得到混合液，而后将混合液、黑蒜提取物、桑枝提取物于60-75℃条件下搅拌混匀；(2)灌装，压盖，灭菌，得到黑蒜口服液。
上述步骤(1)中番茄汁、生姜汁、柠檬汁的总重量与所用蒸馏水的重量比为1:2。
上述步骤(2)中灭菌采用巴士灭菌，具体条件为在80℃下处理30min。
本发明相比现有技术具有以下优点：
1、本发明一种可增强免疫力的黑蒜口服液，通过黑蒜提取物、桑枝提取物和番茄汁、生姜汁、柠檬汁等组分的合理搭配，多种营养成分的搭配，可有效提升人体免疫力，减少黑蒜的不良气味，同时改善其适口性并保留或增加其有益功能，具有口感好、营养价值高、质量稳定性好等优点，具有抗氧化、延缓衰老等功效；
2、本发明一种可增强免疫力的黑蒜口服液涉及的组分黑蒜提取物通过对黑蒜进行超高压处理并得到了黑蒜醇提取产物，大大增加了黑蒜提取物中各活性成分的含量，可溶性固形物含量大大增加；本发明黑蒜提取物和桑枝提取物的结合使用有利于增加大肠粘膜增值以及提高肠道粘膜免疫能力；
3、IFN-g是Th1抗癌免疫应答的标志性细胞因子，IL-4是主导Th2免疫应答的细胞因子，黑蒜提取物诱导高水平的IFN-g，而柠檬提取物引起IL-4的升高，黑蒜提取物和柠檬提取物的组合导致免疫系统的全身活化，这是由于IFN-g和IL-4水平的升高所致；Th17细胞具有促炎症作用，IFN-γ、IL-4、IL-2可通过抑制Th17细胞分化延缓炎症进展；生姜汁中活性成分可通过降低促进因子的表达同时增加抑制因子IFN-γ的表达发挥免疫调节作用，能有效改善机体免疫应答机制缓解滑膜炎症。
4、本发明提供的黑蒜口服液制备方法简单，适于产业化应用；
5、番茄汁的使用不仅减少了黑蒜的不良气味，且本发明使用的番茄汁中含有丰富的番茄红素，番茄红素作为自然界植物中最强的抗氧化剂之一，能有效清除自由基，防治因衰老、免疫力下降而引起的各种疾病。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以下各实施例及对比例中所使用的黑蒜提取物均通过下述步骤方法制备得到：(1)黑蒜切碎，用95％的乙醇浸提3次，每次5天；合并浸提液，将浸提液加入至搅拌器中，向搅拌器中加入上述黑蒜0.03倍重量的果胶酶混合物，并在40℃条件下搅拌2h，使用超高压提取技术在100MPa和55℃下进行压力处理24h后，过滤并将收集到的滤液浓缩去除乙醇后得到浓缩液；(2)将步骤(1)中过滤得到的滤渣用3倍重量的蒸馏水将滤渣分散，再用95％的乙醇提取，提取3次，收集提取液并将提取液浓缩得到浓缩提取液；(3)将步骤(1)中的浓缩液和步骤(2)中的浓缩提取液混合均匀得到黑蒜提取物。
以下各实施例及对比例中所使用的桑枝提取物均通过下述步骤方法制备得到：将桑枝在烘干后进行蒸汽爆破处理，蒸汽压为1-1.5MPa，维持压力120秒，然后粉碎过筛，得到桑枝粉末，将桑枝粉末和无水乙醇以固液比1g：15mL混匀，加热至沸腾后煮沸4h，得到第一煎煮液，将第一煎煮液过滤后的第一滤液和第一滤渣分别收集起来；第一滤渣和水以固液比1g：15mL混匀加热至沸腾后煮沸4h，得到第二煎煮液，将第二煎煮液过滤后得到第二滤液；将第一滤液和第二滤液合并，并在减压条件下除去乙醇后，冷冻干燥，得到桑枝提取物。
以下各实施例及对比例中所使用的番茄汁、生姜汁、柠檬汁均为现榨现用，均通过以下方法得到：将原料果实洗净放入自动榨汁机中榨汁并滤去不溶物得到。
实施例1：
一种可增强免疫力的黑蒜口服液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将番茄汁15份、生姜汁1份、柠檬汁3份与蒸馏水38份混合均匀得到混合液，而后将混合液、黑蒜提取物20份、桑枝提取物15份于65℃条件下搅拌混匀；
(2)灌装，压盖，灭菌，得到黑蒜口服液。
实施例2：
一种可增强免疫力的黑蒜口服液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将番茄汁20份、生姜汁3份、柠檬汁3与蒸馏水52份混合均匀得到混合液，而后将混合液、黑蒜提取物30份、桑枝提取物15份于65℃条件下搅拌混匀；
(2)灌装，压盖，灭菌，得到黑蒜口服液。
实施例3：
一种可增强免疫力的黑蒜口服液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将番茄汁17份、生姜汁1份、柠檬汁5份与蒸馏水46份混合均匀得到混合液，而后将混合液、黑蒜提取物25份、桑枝提取物20份于65℃条件下搅拌混匀；
(2)灌装，压盖，灭菌，得到黑蒜口服液。
实施例4：
一种可增强免疫力的黑蒜口服液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将番茄汁15份、生姜汁3份、柠檬汁3份与蒸馏水42份混合均匀得到混合液，而后将混合液、黑蒜提取物30份、桑枝提取物15份于65℃条件下搅拌混匀；
(2)灌装，压盖，灭菌，得到黑蒜口服液。
对比例1：
一种黑蒜口服液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将番茄汁15份、柠檬汁3份与蒸馏水36份混合均匀得到混合液，而后将混合液、黑蒜提取物30份、桑枝提取物15份于65℃条件下搅拌混匀；
(2)灌装，压盖，灭菌，得到黑蒜口服液。
测试例1：黑蒜口服液的感官评价
分别对实施例1-4和对比例1制得的黑蒜口服液进行色泽、口感和稳定性等方面的感官评价，结果如表1所示：
表1
样品 色泽 气味 口感 稳定性(12个月)
实施例1 透明、澄清 无刺激性气味 无涩感、无苦味 无悬浮物
实施例2 透明、澄清 无刺激性气味 无涩感、无苦味 无悬浮物
实施例3 透明、澄清 无刺激性气味 无涩感、无苦味 无悬浮物
实施例4 透明、澄清 无刺激性气味 无涩感、无苦味 无悬浮物
对比例1 透明、澄清 无刺激性气味 无涩感、无苦味 无悬浮物
测试例2：实施例1-4和对比例1制得的一种可增强免疫力的黑蒜口服液的细胞活力测试
实验动物：昆明种小鼠，雄性，体重18-22g
实验前一周，将小鼠保持在温度可控的房间(温度：22±1℃；相对湿度：55±5％)内，光周期为12小时(开灯时间为08：00-20：00小时)，并正常提供饮用水和饮食。一周后，用二氧化碳气体麻醉处死小鼠，并无菌除去每只大鼠的小肠和大肠，将切除的肠组织切成小块，并悬浮在由RPMI-1640、10％热灭活的胎牛血清和1％青霉素-链霉素溶液组成的完全培养基中，然后使用细胞过滤器过滤收集细胞悬液，将收集的肠细胞悬液混合在一起，在400×g冷冻离心10分钟，为了消除红血球，将细胞沉淀重悬于低渗缓冲液中，并在相同条件下再次离心；然后将细胞沉淀物悬浮在3ml 40％Percoll溶液中，并在70％Percoll溶液上分层，然后在室温下1800×g离心15分钟；密度梯度离心后，收集位于界面处的白细胞，并用PBS洗涤两次，即得到本发明使用的从小肠粘膜和大肠粘膜收集的固有层白细胞；将收集到的固有层白细胞分别接种至96孔细胞培养盘内，浓度为5×104个/孔，第一列为对照组不加培养基，第二列到第七列分别以实施例1-4和对比例1-2制得的增强免疫力的黑蒜口服液为培养基，做好相应标记；在条件为37℃、5％CO2的细胞培养箱中培养24h；而后取出96孔培养盘每孔加10μL0.4％的台盼蓝染色液，轻轻晃动混匀，染色2-3分钟，在显微镜下计数每孔被染色的死细胞个数和细胞总个数；通过计数细胞个数，计算每孔的细胞死亡率，根据对照组的平均细胞死亡率，判断本发明的黑蒜口服液对固有层细胞活力的影响；通过实验结果表明相较于对照组本发明制备得到的黑蒜口服液具有较好的细胞活力。
测试例3：免疫力能力测试
将昆明种小鼠随机分为五组实验组和一组对照组，其中五组实验组各组每天分别将实施例1-4和对比例1制得的增强免疫力的黑蒜口服液按照260mg/kg的剂量灌胃，正常对照组每天灌胃等量的生理盐水，连续灌胃15天。
吞噬功能：末次灌胃30分钟后，每只小鼠注射20％鸡红细胞溶液1mL/只；注射30分钟后，脱颈椎处死小鼠，经腹腔注入生理盐水2mL，揉动小鼠腹部1分钟，然后用吸管吸取腹腔液体lmL，均匀涂于2片载玻片上；于37℃保温30分钟后，用生理盐水洗涤一遍，1：1丙酮甲醛液固定4％Giemsa-磷酸缓冲液(北京雷根生物科技有限公司提供)染色3分钟，计数吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数和计算吞噬百分率及吞噬指数。吞噬指数＝(被吞噬鸡红细胞数/200个巨噬细胞)/2，吞噬百分率＝(吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/200个巨噬细胞)×100。结果如下表2：
表2
样品 吞噬百分率(％) 吞噬指数(T)
实施例1 39.16 0.372
实施例2 39.61 0.394
实施例3 39.78 0.390
实施例4 41.36 0.439
对比例1 33.19 0.307
对照组 1.93 0.018
测试例4：抗炎能力测试
选取6周龄SPF级Wistar雌性大鼠90只，体重150-180g，90只Wistar雌性大鼠随机分为6组，实施例2组、实施例3组、实施例4组、对比例1组、对照组、空白组，每组15只，按组分笼喂养，喂养条件：自然光线，室温18.22℃，湿度50％一70％，通风良好，1.2天更换垫料一次，保持鼠笼清洁、干燥；喂养方法：同一室内分组分笼饲养，保证充足饲料及饮用水，使其自由饮水及摄食。
胶原诱导性关节炎大鼠模型的构建：将牛胶原蛋白II型溶于0.1mol/L的醋酸中，配成2mg/ml，搅拌溶解，置4℃冰箱过夜，与弗氏完全佐剂等体积混合，乳化制成II型胶原乳剂。除空白组外其余五组大鼠分别于尾根及双后足垫部多点皮内注射0.2mL/只致炎以复制稳定的CIA模型。致炎第7天遵照上述方法予胶原乳剂0.4mL/只加强免疫。评定依据为关节红肿程度、范围及关节肿大、变形情况，关节炎指数积分越高，症状越重，每只足4分，最高积分16分，积分超过6分即认为造模成功。
造模成功的大鼠第7天开始灌胃给药，空白组及对照组灌服等容积生理盐水，其余各组分别灌服相应实施例制备得到的黑蒜口服液，时间为28天，给药剂量为260mg/kg。
采用等水容积法，分别于造模前、给药前及给药第7、14、21及28天测量大鼠右后肢踝关节毛际以下容积(mL)并计算其关节肿胀率。
关节肿胀度率＝(每次所测值-第1天所测值)/第1天所测值。
各组大鼠给药前后双后肢足趾关节肿胀率变化结果如表3所示：
表3
样品 N 给药前 给药第7天 给药第14天 给药第21天 给药第28天
实施例2 12 0.65±0.01 0.61±0.02 0.64±0.02 0.45±0.01 0.25±0.04
实施例3 13 0.64±0.15 0.72±0.02 0.65±0.04 0.47±0.08 0.35±0.02
实施例4 12 0.65±0.12 0.71±0.09 0.65±0.10 0.45±0.10 0.23±0.01
对比例1 14 0.63±0.06 0.65±0.14 0.71±0.03 0.64±0.12 0.58±0.02
对照组 13 0.64±0.18 0.73±0.14 0.74±0.12 0.66±0.10 0.65±0.02
空白组 12 0.13±0.05 0.13±0.06 0.14±0.02 0.14±0.08 0.15±0.02
给药前，与空白组比较，各造模组肿胀率均明显升高；给药后，与对照组同一时间比较，实施例2-4组以及对比例1组肿胀率均有不同程度下降，但对比例1组关节肿胀率下降程度不明显。
结论：人体免疫是人体对外界的病原微生物等的防御机能，或者说是防御系统，在正常情况下，它能够保证人体不受外界病原微生物的侵害。在人体免疫力正常的情况下，人体自身能够抵御相当多的病菌的侵害，避免对人体造成损伤。免疫力在人体生命机制中发挥重要的作用，而人体的营养、劳累、心情、环境、疾病、用药、辐射等导致自身的免疫力下降。越来越多研究表明，中药对人体免疫力的调节越来越发挥重要作用。本实验结果显示，本发明可提高巨噬细胞吞噬能力及肠膜固有层白细胞的细胞活力，可初步证实本发明黑蒜口服液对免疫力低下小鼠的免疫力有增强作用；且具有缓解关节炎症反应作用。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (9)

1.一种可增强免疫力的黑蒜口服液，其特征在于：由如下重量份数的组分制成：黑蒜提取物20-30份、桑枝提取物10-20份、番茄汁15-20份、生姜汁1-3份、柠檬汁3-5份；上述黑蒜提取物的制备方法包括如下步骤：(1)黑蒜切碎，用95％的乙醇浸提3次，每次3-7天；合并浸提液，将浸提液加入至搅拌器中，向搅拌器中加入上述黑蒜0.01-0.03倍重量的果胶酶混合物，并在40℃条件下搅拌2h，使用超高压提取技术在100MPa和55℃下进行压力处理24h后，过滤并将收集到的滤液浓缩得到浓缩液；(2)将步骤(1)中过滤得到的滤渣用3倍重量的蒸馏水将滤渣分散，再用95％的乙醇提取，提取3次，收集提取液并将提取液浓缩去除乙醇后得到浓缩提取液；(3)将步骤(1)中的浓缩液和步骤(2)中的浓缩提取液混合均匀得到黑蒜提取物。
2.根据权利要求1所述的一种可增强免疫力的黑蒜口服液，其特征在于：由如下重量份数的组分制成：黑蒜提取物30份、桑枝提取物15份、番茄汁15份、生姜汁3份、柠檬汁3份。
3.根据权利要求2所述的一种可增强免疫力的黑蒜口服液，其特征在于：所述果胶酶混合物包括果胶酶、纤维素酶和半纤维素，且所述果胶酶、纤维素酶和半纤维素重量份数比为2:1:1。
4.根据权利要求3所述的一种可增强免疫力的黑蒜口服液，其特征在于：所述步骤(2)中乙醇的用量为滤渣重量的2倍。
5.根据权利要求4所述的一种可增强免疫力的黑蒜口服液，其特征在于：所述桑枝提取物的制备方法包括如下步骤：将桑枝烘干并粉碎过筛，得到桑枝粉末，将桑枝粉末和无水乙醇以固液比1g：(15-20)mL混匀，加热至沸腾后煮沸4h，得到第一煎煮液，将第一煎煮液过滤后的第一滤液和第一滤渣分别收集起来；第一滤渣和水以固液比1g：(15-20)/mL混匀加热至沸腾后煮沸4h，得到第二煎煮液，将第二煎煮液过滤后得到第二滤液；将第一滤液和第二滤液合并，并在减压条件下除去乙醇后得到桑枝提取物。
6.根据权利要求5所述的一种可增强免疫力的黑蒜口服液，其特征在于：所述桑枝在烘干后进行蒸汽爆破处理，蒸汽压为1-1.5MPa，维持压力120-150秒，然后粉碎过筛。
7.一种权利要求1-6任一项所述的可增强免疫力的黑蒜口服液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将番茄汁、生姜汁、柠檬汁与蒸馏水混合均匀得到混合液，而后将混合液、黑蒜提取物、桑枝提取物于60-75℃条件下搅拌混匀；(2)灌装，压盖，灭菌，得到黑蒜口服液。
8.根据权利要求7所述的一种一种可增强免疫力的黑蒜口服液的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中番茄汁、生姜汁、柠檬汁的总重量与所用蒸馏水的重量比为1:2。
9.根据权利要求7所述的一种可增强免疫力的黑蒜口服液的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中灭菌采用巴士灭菌，具体条件为在80℃下处理30min。
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