CN115851698B - 一种血液基因组dna提取试剂盒及其使用方法 - Google Patents
一种血液基因组dna提取试剂盒及其使用方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及DNA提取技术领域。本发明提供了一种血液基因组DNA提取试剂盒及其使用方法，所述试剂盒包括如下组分：裂解液、结合液、漂洗液1、漂洗液2和洗脱液。本发明采用非胍盐成分的试剂进行细胞裂解，组成简单，成本低且效果稳定。本发明的方法可同时对人和多种动物血液DNA进行提取，提取的DNA浓度和纯度均优于现有技术，可更好的满足下游的酶切以及PCR等实验需求。本发明所用的裂解液仅由单一成分组成，便于溶液配制、以及血液核酸提取的标准化，不仅简化了裂解液配方，同时无需在漂洗后进行晾干操作，不仅缩短了时间，而且避免了乙醇干燥过程中导致样本DNA挥发、产生基因组气溶胶对后续检测带来的假阳性问题。
Description
技术领域
本发明涉及DNA提取技术领域，尤其涉及一种血液基因组DNA提取试剂盒及其使用方法。
背景技术
人和动物的血液中存在众多可指示健康状态的分子标志物，在体外诊断、医学科学研究、以及动物的选择性育种中具有广泛的用途。从人体或动物的血液中提取高质量的DNA是临床基因检测和其他分子生物学研究的前提。但由于血液成分复杂、易凝固以及储存条件高等特点，使得于血液中进行高质量的DNA提取变得十分困难，难以满足相关的疾病诊断和生命科学研究的需求。
常用的血液基因组DNA提取方法多见于酚-氯仿法和磁珠吸附法。苯酚抽提法操作复杂，提取时间长，对实验设备要求高，所需试剂成本高，其中试剂中含有毒物质，不仅对实验人员有害，且易污染环境。磁珠法采用改性硅基磁珠，核酸吸附能力强，核酸提取纯度高，即支持手工单管式抽提方案，也可搭配核酸提取仪使用，操作简便快速，但目前磁珠法提取中多采用强蛋白变性剂浓胍盐作为裂解液，而胍盐易受室温、季节温度、盐离子浓度等的影响，极易造成核酸的提取效果不稳定。另外，由于不用生物间存在的种属差异，导致血液组分也存在一定的差别，目前市售的血液DNA提取试剂盒对血液DNA的提取效果常常不稳定，尤其是在处理不同血液样本或来自不同种属动物的血样时，时常存在DNA得率低、纯度低等问题，无法满足下游实验需求。目前还没有一种普适的血液DNA提取方法和试剂盒。
发明内容
本发明的目的在于提供一种血液基因组DNA提取试剂盒及其使用方法，简化产品配方和提取步骤，提高血液样本DNA提取的纯度。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种血液基因组DNA提取试剂盒，包括如下组分：裂解液、结合液、漂洗液1、漂洗液2和洗脱液。
作为优选，所述裂解液的制备方法为：将20～22g一水合高氯酸钠用水溶解，定容到50mL即得。
作为优选，所述结合液为异丙醇。
作为优选，所述漂洗液1制备方法为：所述漂洗液1制备方法为：将6～7g脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠和2～2.5g NaCl用乙醇溶解，用水定容到200mL，调节pH值为7.8～8.2即得；所述漂洗液1中乙醇的体积浓度为45～55％。
作为优选，所述漂洗液2的制备方法为：将0.22～0.26g Tris和2～2.5g NaCl用水溶解，定容到200mL，调节pH值为5.8～6.2即得。
作为优选，所述洗脱液的制备方法为：将0.022～0.26g Tris用水溶解，定容到20mL，用HCl调节pH值为7.8～8.2即得。
本发明还提供了所述试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
(1)将血液样品、蛋白酶K和裂解液混合后68～72℃水浴8～12min，得到物料1；
(2)将物料1、结合液和磁珠混合后静置7～11min，得物料2；
(3)将物料2吸附2～4min后弃清液得物料3；
(4)将物料3先用漂洗液1漂洗1～3次再用漂洗液2漂洗1～3次，得物料4；
(5)将物料4和洗脱液混合，得到血液基因组DNA。
作为优选，所述步骤(1)中血液样品、蛋白酶K和裂解液的体积比为8～12：1：8～12；所述步骤(2)中物料1、结合液和磁珠的体积比为40～44：19～21：1。
作为优选，所述步骤(4)中漂洗液1漂洗的方法为：将物料3和漂洗液1混合后涡旋50～70s，吸附2～4min后弃清液；所述漂洗液1的用量为磁珠体积的35～45倍；所述步骤(4)中漂洗液2漂洗的方法为：将物料3和漂洗液2混合后涡旋50～70s，吸附2～4min后弃清液；所述漂洗液2的用量为磁珠体积的25～35倍。
作为优选，所述步骤(5)中混合后在58～62℃振荡8～12min，吸附4～6min后得到血液基因组DNA；所述洗脱液的用量为磁珠体积的2.5～5倍。
本发明提供了一种血液基因组DNA提取试剂盒及其使用方法，所述试剂盒包括如下组分：裂解液、结合液、漂洗液1、漂洗液2和洗脱液。本发明采用非胍盐成分的试剂进行细胞裂解，组成简单，成本低且效果稳定。
本发明提出的适用于人和多种属动物源性血液DNA提取的试剂，提取方法以及用途，其优点是：
1.针对现有方法和商业化试剂盒对血液DNA提取普适性差，导致一些样本提取DNA质量差、纯度低的缺点，提供了一种基于磁珠法可同时适用于人和多个种属动物的血液样本进行DNA提取的方法。
2.现有技术中多为采用胍盐进行血液DNA的提取，因其易受温度，酸碱度等影响易导致提取效果不稳定，针对此缺点，在本发明技术方案中采用一水合高氯酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠等非胍盐类的稳定试剂应用于DNA提取，无需复杂成分漂洗试剂进行洗涤。进而可有效解决核酸提取效果不稳定的问题。本发明对不同的血液DNA提取结果稳定，获得了更高的DNA浓度和纯度，可更好的满足下游PCR实验及基因测序的需要。
3.本发明未使用传统的乙醇作为第二漂洗液，这就省去了漂洗后所需的晾干时间，避免了乙醇干燥过程中导致样本DNA挥发、产生基因组气溶胶对后续检测带来的假阳性问题。
附图说明
图1为本发明对比例五中血液基因组电泳结果对比，其中M为Marker，1、3、5、7、9为本发明试剂盒的DNA凝胶电泳结果，2、4、6、8、10为J公司试剂盒的DNA凝胶电泳结果(其中1～2、3～4、5～6、7～8、9～10分别源于同一人全血样本)；
图2为本发明对比例五中血液基因组PCR扩增结果示意图，其中包括本发明试剂盒样本扩增曲线、J公司磁珠法组织与血液DNA提取试剂盒样本扩增曲线以及阴性样本；
图3为本发明对比例六中本发明电泳结果，其中M为Marker，1～6分别对应为鸡、鸭、猪、鱼、牛、绵羊六种动物源性血液DNA凝胶电泳结果；
图4为本发明比例六中J公司商业化试剂盒电泳结果，其中M为Marker，1～6分别对应为鸡、鸭、猪、鱼、牛、绵羊六种动物源性血液DNA凝胶电泳结果。
具体实施方式
本发明提供了一种血液基因组DNA提取试剂盒，包括如下组分：裂解液、结合液、漂洗液1、漂洗液2和洗脱液。
在本发明中，所述裂解液的制备方法优选为：将20～22g一水合高氯酸钠用水溶解，定容到50mL即得，进一步优选为：将21.1g一水合高氯酸钠用水溶解，定容到50mL即得。
在本发明中，所述结合液优选为异丙醇。
在本发明中，所述漂洗液1制备方法为：所述漂洗液1制备方法为：将6～7g脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠和2～2.5g NaCl用乙醇溶解，用水定容到200mL，调节pH值为7.8～8.2即得，进一步优选为：将6.6g脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠和2.3g NaCl用乙醇溶解，用水定容到200mL，调节pH值为8.0即得。
在本发明中，所述漂洗液1中乙醇的体积浓度优选为45～55％，进一步优选为50％。
在本发明中，所述漂洗液2的制备方法优选为：将0.22～0.26g Tris和2～2.5gNaCl用水溶解，定容到200mL，调节pH值为5.8～6.2即得，进一步优选为：将0.24g Tris和2.3g NaCl用水溶解，定容到200mL，调节pH值为6.0即得。
在本发明中，所述洗脱液的制备方法为：将0.022～0.26g Tris用水溶解，定容到20mL，用HCl调节pH值为7.8～8.2即得，进一步优选为：将0.024g Tris用水溶解，定容到20mL，用HCl调节pH值为8.0即得。
本发明还提供了所述试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
(1)将血液样品、蛋白酶K和裂解液混合后68～72℃水浴8～12min，得到物料1；
(2)将物料1、结合液和磁珠混合后静置7～11min，得物料2；
(3)将物料2吸附2～4min后弃清液得物料3；
(4)将物料3先用漂洗液1漂洗1～3次再用漂洗液2漂洗1～3次，得物料4；
(5)将物料4和洗脱液混合，得到血液基因组DNA。
在本发明中，所述血液样品优选为人源性血液样本、鸡源性血液样本、鸭源性血液样本、猪源性血液样本、绵羊源性血液样本、牛源性血液样本、鱼源性血液样本。
在本发明中，所述血液样品、蛋白酶K和裂解液优选在离心管中混匀。
在本发明中，所述血液样品、蛋白酶K和裂解液混合时先将血液样品和蛋白酶K混匀再加入裂解液。
在本发明中，所述步骤(1)中混合的方法优选为颠倒1～3次，涡旋10～20s，进一步优选为颠倒2次，涡旋15s。
在本发明中，所述步骤(1)中水浴的温度优选为69～71℃，进一步优选为70℃。
在本发明中，所述步骤(1)中水浴的时间优选为9～11min，进一步优选为10min。
在本发明中，所述步骤(1)中血液样品、蛋白酶K和裂解液的体积比优选为8～12：1：8～12，进一步优选为9～11：1：9～11。
在本发明中，所述步骤(2)中混合的方法优选为颠倒4～6次并振荡3～7s，进一步优选为颠倒5次并振荡5s。
在本发明中，所述步骤(2)中静置的时间优选为9min。
在本发明中，所述静置期间优选每2～4min振荡3～7s，进一步优选为每3min振荡5s。
在本发明中，所述步骤(2)中物料1、结合液和磁珠的体积比优选为40～44：19～21：1，进一步优选为42：20：1。
在本发明中，所述步骤(3)中吸附时优选在磁力架上进行。
在本发明中，所述步骤(4)中漂洗的方法优选为：所述步骤(4)中漂洗液1漂洗的方法为：将物料3和漂洗液1混合后涡旋50～70s，吸附2～4min后弃清液，进一步优选为将物料3和漂洗液1混合后涡旋60s，吸附3min后弃清液。
在本发明中，所述漂洗液1的用量优选为磁珠体积的35～45倍，进一步优选为40倍。
在本发明中，所述步骤(4)中漂洗液2漂洗的方法优选为：将物料3和漂洗液2混合后涡旋50～70s，吸附2～4min后弃清液，进一步优选为：将物料3和漂洗液2混合后涡旋60s，吸附3min后弃清液。
在本发明中，所述漂洗液2的用量优选为磁珠体积的25～35倍，进一步优选为30倍。
在本发明中，所述步骤(5)中混合后优选在58～62℃振荡8～12min，吸附4～6min后得到血液基因组DNA，进一步优选为在60℃振荡10min，吸附5min后得到血液基因组DNA。
在本发明中，所述洗脱液的用量优选为磁珠体积的2.5～5倍，进一步优选为磁珠体积的3～4倍。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
对上述实施方式进行下一步的优选，并采用常见的DNA提取试剂及方法进行对比，具体方案如表1所示：
表1部分实施例中所用试剂的配方
其中，表1中“—”代表的是不添加相应的组分，即相应组分的含量为零。
实施例1
采用上述表格中实施例一的试剂进行以下步骤操作
(1)精密移取200μL人源性血液样品于2.0mL离心管中；
(2)对上述步骤(1)的离心管中加入20μL蛋白酶K，振荡混匀5s；
(3)对上述步骤(2)的离心管中加入200μL裂解液，颠倒混匀3次，涡旋混匀15s，70℃水浴10min；
(4)对上述步骤(3)的离心管中加入200μL异丙醇和20μL的MagPure Particles(磁珠)至样品中，颠倒混匀5次并振荡混匀5s；
(5)对上述步骤(4)的离心管室温静置9min，其间每3min涡旋振荡5s，转移至磁力架上吸附3min，吸弃清液‘
(6)对上述步骤(5)的离心管中加入800μL漂洗液1，涡旋1min重悬磁珠，转移至磁力架上吸附3min，吸弃清液；
(7)重复第(6)步一次；
(8)对上述步骤(7)的离心管中加入600μL漂洗液2，涡旋1min重悬磁珠。转移至磁力架上吸附3min，吸弃清液；
(9)重复第(8)步一次；
(10)对上述步骤(9)的离心管进行短暂离心，并收集管壁上的液滴，转移至磁力架上吸附1min，吸弃所有溶液；
(11)加入50～100μL洗脱液，涡旋打散磁珠，60℃振荡温育10min，再次涡旋打散磁珠，转移至磁力架上吸附5min，把管内液体转移至新的离心管中，即得提取的DNA；
采用Thermo ScientificTMNanoDropTMOne测定DNA浓度与OD值，其浓度为107.3ng/μL，OD260/OD280为1.99，OD260/OD230为2.13。
实施例2
采用上述表格中实施例2所述试剂并采用实施例1的步骤进行人源性血液DNA的提取。
采用Thermo ScientificTMNanoDropTMOne测定DNA浓度与OD值，其浓度为82.1ng/μL，OD260/OD280为1.81，OD260/OD230为1.96。
实施例3
采用上述表格中实施例3所述试剂并采用实施例1的步骤进行人源性血液DNA的提取。
采用Thermo ScientificTMNanoDropTMOne测定DNA浓度与OD值，其浓度为80.5ng/μL，OD260/OD280为1.88，OD260/OD230为1.81。
实施例4
采用上述表格中实施例4所述试剂并采用实施例1的步骤进行人源性血液DNA的提取。
采用Thermo ScientificTMNanoDropTMOne测定DNA浓度与OD值，其浓度为78.2ng/μL，OD260/OD280为1.80，OD260/OD230为2.01。
实施例5
采用上述表格中实施例5所述试剂并采用实施例1的步骤进行人源性血液DNA的提取。
采用Thermo ScientificTMNanoDropTMOne测定DNA浓度与OD值，其浓度为40.7ng/μL，OD260/OD280为1.82，OD260/OD230为1.80。
实施例6
采用上述表格中实施例6所述试剂并采用实施例1的步骤进行人源性血液DNA的提取。
采用Thermo ScientificTMNanoDropTMOne测定DNA浓度与OD值，其浓度为58.2ng/μL，OD260/OD280为1.82，OD260/OD230为1.64。
实施例7
采用上述表格中实施例7所述试剂并采用实施例1的步骤进行人源性血液DNA的提取。
采用Thermo ScientificTMNanoDropTMOne测定DNA浓度与OD值，其浓度为59.4ng/μL，OD260/OD280为1.87，OD260/OD230为1.47。
实施例8
采用上述表格中实施例8所述试剂并采用实施例1的步骤进行人源性血液DNA的提取。
采用Thermo ScientificTMNanoDropTMOne测定DNA浓度与OD值，其浓度为44.1ng/μL，OD260/OD280为1.88，OD260/OD230为1.55。
以核酸浓度纯度为判读依据，经上述实施例对自建体系试剂进行筛选，确定实施例一试剂为最优选结果。
对比例1
采用实施例1所述步骤，其与实施例1的区别在于提取试剂组成不同，其中所述裂解液组份包括：0.8～1.2M GuHCl；pH8.0～8.5、30～100mM Tris-HCl；pH8.0～8.5、30～100mM EDTA，4～8％Tween-20，0.3～1％TritonX-100，0.3～1％SDS和0.3～1mg/ml蛋白酶K。结合液组分包括：异丙醇和NaAC。洗脱液组分包括：pH 8.0～8.5、50～100mM Tris；pH8.0～8.5、50～100mM EDTA；1～1.5M NaCl。进行人源性血液DNA的提取。
采用Thermo ScientificTMNanoDropTMOne测定DNA浓度与OD值，其浓度为146.4ng/μL，OD260/OD280为1.31，OD260/OD230为0.62。
对比例2
采用实施例1所述步骤，其与实施例1的区别在于提取试剂组成不同，其中所述裂解液结合组份包括：50mM GuSCN，25mM Tris-HCl、10mM EDTA、1.5M NaCl、5％PEG 8000、为3％的TritonX-100。漂洗液1组分包括：1.5M NaCl，3％PEG 8000，35％乙醇。漂洗液2组分包括：100mM Tris-HCI、10mM EDTA、3％Triton X-100、3M NaCI、75％乙醇。漂洗液Ⅳ组分包括：100mM Tris-HCI、10mM EDTA。洗脱液组分包括：pH 8.0～8.5、25mM Tris；pH 8.0～8.5、10mM EDTA。进行人源性血液DNA的提取。
采用Thermo ScientificTMNanoDropTMOne测定DNA浓度与OD值，其浓度为51.0ng/μL，OD260/OD280为1.79，OD260/OD230为1.20。
对比例3
采用实施例1所述步骤，其与实施例1的区别在于提取试剂组成不同，其中所述裂解液组份包括：60mM Tris、15mM EDTA、0.6M NaCl、0.3％SDS、0.2％CHAPS、7％NLS、72％GuHCl、3％月桂酸钠、0.2％NH4Cl、1.0％巯基乙醇，pH为7.1和20mg/ml蛋白酶K。结合液组分包括：70％异丙醇、8％PEG 8000、3％Brij58，pH为7.0。漂洗液组分包括7M GuHCl、15mMTris、50％乙醇、40mM碳酸氢钠，pH为9.0。洗脱液组分包括：20mM Tris；0.2mM EDTA，pH为8.5。进行人源性血液DNA的提取。
采用Thermo ScientificTMNanoDropTMOne测定DNA浓度与OD值，其浓度为71.8ng/μL，OD260/OD280为1.74，OD260/OD230为1.32。
对比例4
采用上述表格中实施例1的试剂，其与实施例1的区别在于提取方法采用授权公告号CN 109913445 B中所使用的提取方法，提取人源性血液DNA基因组。
采用Thermo ScientificTMNanoDropTMOne测定DNA浓度与OD值，其浓度为74.6ng/μL，OD260/OD280为1.56，OD260/OD230为0.85。
对比例5
采用本发明实施例1所述试剂与方法，以及J公司(广州美基生物科技有限公司)所生产通用型磁珠法组织与血液DNA提取试剂盒的试剂与方法，分别对五种不同的人源性血液样本进行基因组DNA的提取工作。采用Thermo ScientificTMNanoDropTMOne测定紫外区DNA浓度与OD值，以此判读同一血液样本采用不同方法试剂所提取的DNA质量与纯度的差异，实验结果见表2。
表2本发明试剂盒与J公司的全血DNA提取试剂盒结果比较
吸取5μL DNA样本进行1％琼脂糖凝胶电泳检测基因组的完整性，实验结果见图1，表明本发明试剂及方法所提取的血液DNA效果稳定，分子量大，且具有完整性。
将提取的DNA原液稀释到10ng/μL，进行实时荧光定量PCR扩增，所用引物为人特异引物，其中GAPDH-F：5’-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3’，GAPDH-R：5’-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3’，引物由上海生工生物工程有限责任公司合成。实验结果见图2与表3，表明本发明试剂及方法所提取的血液DNA质量满足PCR扩增及基因测序的要求。
表3本发明试剂盒与J公司试剂盒扩增效果对比
注：定量试剂盒：本发明试剂盒(1、3、5、7、9号样本)以及J公司DNA提取试剂盒(2、4、6、8、10号样本)
对比例6
采用本发明实施例1所述的试剂与方法以及J公司(广州美基生物科技有限公司)所生产通用型磁珠法组织与血液DNA提取试剂盒的试剂与方法，分别进行鸡源性，鸭源性，猪源性，绵羊源性，牛源性，鱼源性共六种动物血液样本的基因组DNA的提取工作。采用Thermo ScientificTMNanoDropTMOne测定紫外区A260、A280，检测所提取的DNA质量与纯度，检测结果如表4所示。同时，采用琼脂糖凝胶电泳检测所提DNA基因组的完整性，本发明实验结果见图3，J公司商业化试剂盒实验结果见图4。结果可知，本发明试剂盒及其方法所提取的血液基因组DNA具有完整性,对血液样品适用性广，可适用于不同动物源性血液DNA的提取。
表4血液基因组DNA的质量检测
由以上实施例可知，本发明提供了一种血液基因组DNA提取试剂盒及其使用方法，所述试剂盒包括如下组分：裂解液、结合液、漂洗液1、漂洗液2和洗脱液。本发明采用非胍盐成分的试剂进行细胞裂解，组成简单，成本低且效果稳定。本发明的方法可同时对人和多种动物血液DNA进行提取，提取的DNA浓度和纯度均优于现有技术，可更好的满足下游的酶切以及PCR等实验需求。本发明所用的裂解液仅由单一成分组成，便于溶液配制、以及血液核酸提取的标准化，不仅简化了裂解液配方，同时无需在漂洗后进行晾干操作，不仅缩短了时间，而且避免了乙醇干燥过程中导致样本DNA挥发、产生基因组气溶胶对后续检测带来的假阳性问题。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种血液基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，由如下组分组成：裂解液、结合液、漂洗液1、漂洗液2和洗脱液；
所述裂解液的制备方法为：将20～22g一水合高氯酸钠用水溶解，定容到50mL即得；
所述漂洗液1制备方法为：将6～7g脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠和2～2.5g NaCl用乙醇溶解，用水定容到200mL，调节pH值为7.8～8.2即得；所述漂洗液1中乙醇的体积浓度为45～55％；
所述漂洗液2的制备方法为：将0.22～0.26g Tris和2～2.5g NaCl用水溶解，定容到200mL，调节pH值为5.8～6.2即得。
2.根据权利要求1所述的一种血液基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述结合液为异丙醇。
3.根据权利要求1～2任意一项所述的一种血液基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述洗脱液的制备方法为：将0.022～0.26g Tris用水溶解，定容到20mL，用HCl调节pH值为7.8～8.2即得。
4.权利要求1～3任意一项所述试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将血液样品、蛋白酶K和裂解液混合后68～72℃水浴8～12min，得到物料1；
(2)将物料1、结合液和磁珠混合后静置7～11min，得物料2；
(3)将物料2吸附2～4min后弃清液得物料3；
(4)将物料3先用漂洗液1漂洗1～3次再用漂洗液2漂洗1～3次，得物料4；
(5)将物料4和洗脱液混合，得到血液基因组DNA。
5.根据权利要求4所述的使用方法，其特征在于，所述步骤(1)中血液样品、蛋白酶K和裂解液的体积比为8～12：1：8～12；所述步骤(2)中物料1、结合液和磁珠的体积比为40～44：19～21：1。
6.根据权利要求5所述的使用方法，其特征在于，所述步骤(4)中漂洗液1漂洗的方法为：将物料3和漂洗液1混合后涡旋50～70s，吸附2～4min后弃清液；所述漂洗液1的用量为磁珠体积的35～45倍；所述步骤(4)中漂洗液2漂洗的方法为：将物料3和漂洗液2混合后涡旋50～70s，吸附2～4min后弃清液；所述漂洗液2的用量为磁珠体积的25～35倍。
7.根据权利要求5所述的使用方法，其特征在于，所述步骤(5)中混合后在58～62℃振荡8～12min，吸附4～6min后得到血液基因组DNA；所述洗脱液的用量为磁珠体积的2.5～5倍。
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