CN115843312A - 结合至t细胞相关癌细胞的多功能性分子及其用途 - Google Patents

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Abstract

公开了多功能性分子，其包括：i)结合至T细胞受体β链恒定结构域1或T细胞受体β链恒定结构域2的抗原结合结构域；以及以下中的一种、两种或全部：(ii)免疫细胞接合物(例如，选自NK细胞接合物、T细胞接合物、B细胞接合物、树突细胞接合物或巨噬细胞接合物)；(iii)细胞因子分子或细胞因子抑制剂分子；(iv)死亡受体信号增强剂；和/或(v)基质修饰部分。另外公开了编码所述多功能性分子的核酸、产生上述分子的方法，以及使用上述分子治疗癌症的方法。

Description

结合至T细胞相关癌细胞的多功能性分子及其用途
交叉引用
本申请要求2020年4月24日提交的美国临时申请第63/014,920号和2020年8月26日提交的美国临时申请第63/070,777号的权益，其中的每一个通过引用以其整体并入本文。
背景技术
淋巴瘤是由淋巴细胞引起的癌症。T细胞淋巴瘤(TCL)是由T细胞引起的淋巴瘤；这些大致占美国所有非霍奇金淋巴瘤的7％。TCL的常见亚型包括：外周T细胞淋巴瘤，非特指型(PTCLNOS)、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)和皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)。每种类型的TCL具有其自身的病理和症状。考虑到对改进淋巴瘤(例如TCL)治疗的持续需求，极其需要靶向淋巴瘤(例如，TCL)的新组合物和治疗。
发明内容
本发明尤其涉及新型分子，例如特异性抗原结合物，例如多特异性或多功能性分子或抗体，其包括(i)结合至淋巴瘤细胞(例如，T细胞)上的肿瘤抗原(例如，包含T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)的T细胞受体或包含T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)的T细胞受体)的抗原结合结构域；以及以下中的一种、两种或全部：(ii)免疫细胞接合物(engager)(例如，选自NK细胞接合物、T细胞接合物、B细胞接合物、树突细胞接合物或巨噬细胞接合物)；(iii)细胞因子分子；和/或(iv)基质修饰部分。术语“多特异性”或“多功能性”在本文中可互换使用。
不希望受理论束缚，预期本文公开的多特异性或多功能性分子使免疫细胞(例如，选自NK细胞、T细胞、B细胞、树突细胞或巨噬细胞的免疫效应细胞)靶向(例如，定位、桥接和/或活化)表达包含TRBC1或TRBC2的T细胞受体的靶细胞(例如，癌细胞(例如，淋巴瘤细胞)，并且/或者改变肿瘤基质，例如，改变癌症部位附近的肿瘤微环境。预期使用本文所述的多特异性分子增加免疫细胞的接近度和/或活性增强了针对靶细胞(例如，癌细胞，例如，淋巴瘤细胞)的免疫应答，从而提供更有效的疗法(例如，更有效的癌症疗法)。不受理论的束缚，认为针对靶细胞(例如，癌细胞)的靶向、定位的免疫应答降低了本文所述的多特异性分子的全身毒性作用。此外，在靶癌细胞是T细胞(例如，表达包含TRBC1或TRBC2的T细胞受体的T细胞)的情况下，认为较小程度靶向非癌性T细胞(例如，不靶向非癌性T细胞)的针对癌性T细胞群体的靶向免疫应答具有比所有T细胞的全身消融更少的有害作用。
不希望受理论束缚，克隆来源的T细胞淋巴瘤及其几种恶化前病况主要是TRBC1或TRBC2呈阳性，但并非两者都呈阳性。在TRBC1+T细胞恶性肿瘤的情况下，本文公开的抗TRBC1分子(例如，结合至TRBC1和NKp30的多功能性分子)可耗尽TRBC1+细胞，同时保留TRBC2+非恶性T细胞。相似地，在TRBC2+T细胞恶性肿瘤的情况下，本文公开的抗TRBC2分子(例如，结合至TRBC2和NKp30的多功能性分子)可耗尽TRBC2+细胞，同时保留TRBC1+非恶性T细胞。
不希望受理论束缚，在一些实施方案中，本文公开的多功能性分子(例如，抗TRBC1/NKp30抗体)仅在表达TRBC1的细胞存在下活化NK细胞。不希望受理论束缚，在一些实施方案中，本文公开的多功能性分子(例如，抗TRBC2/NKp30抗体)仅在表达TRBC2的细胞存在下活化NK细胞。
因此，本文尤其提供了包括上述部分的多特异性分子(例如，多特异性或多功能性抗体分子)、编码其的核酸、产生上述分子的方法，以及使用上述分子治疗癌症的方法。
在一方面，本文提供了一种多功能性分子，其包含(i)结合至T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)或T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)的第一抗原结合结构域，以及(ii)结合至NKp30的第二抗原结合结构域。
本文公开了一种多特异性分子，其包含具有SEQ ID NO:8281的轻链、SEQ ID NO:8283的重链序列的抗TRBC2 Fab-Fc杵(knob)链；以及SEQ ID NO:8286的抗NKp30 scFv-Fc臼(hole)链。在一些实施方案中，多特异性分子可包含与SEQ ID NO:8281、SEQ ID NO:8283或SEQ ID NO:8286序列中的任一者至少80％相同的序列。在一些实施方案中，多特异性分子可包含与SEQ ID NO:8281、SEQ ID NO:8283或SEQ ID NO:8286序列中的任一者至少90％相同的序列。在一些实施方案中，多特异性分子可包含与SEQ ID NO:8281、SEQ ID NO:8283或SEQ ID NO:8286序列中的任一者至少95％相同的序列。
本文公开了一种多特异性分子，其包含具有SEQ ID NO:8292的轻链、SEQ ID NO:8294的重链序列的抗TRBC2 Fab-Fc杵链；以及SEQ IDNO:8286的抗NKp30 scFv-Fc臼链。在一些实施方案中，多特异性分子可包含与SEQ ID NO:8292、SEQ ID NO:8294或SEQ ID NO:8286序列中的任一者至少80％相同的序列。在一些实施方案中，多特异性分子可包含与SEQID NO:8292、SEQ ID NO:8294或SEQ ID NO:8286序列中的任一者至少90％相同的序列。在一些实施方案中，多特异性分子可包含与SEQ ID NO:8292、SEQ ID NO:8294或SEQ ID NO:8286序列中的任一者至少95％相同的序列。
本文公开了一种TRBC2结合分子，其包含具有SEQ ID NO:8297的轻链、SEQ ID NO:8298的重链序列的抗TRBC2 Fab-Fc杵链；和/或SEQ ID NO:8300的Fc臼链。在一些实施方案中，TRBC2结合分子可包含与SEQ ID NO:8297、SEQ ID NO:8298或SEQ ID NO:8300序列中的任一者至少80％相同的序列。在一些实施方案中，TRBC2结合分子可包含与SEQ ID NO:8297、SEQ ID NO:8298或SEQ ID NO:8300序列中的任一者至少90％相同的序列。在一些实施方案中，TRBC2结合分子可包含与SEQ ID NO:8297、SEQ ID NO:8298或SEQ ID NO:8300序列中的任一者至少95％相同的序列。在一些实施方案中，TRBC2结合分子包含抗TRBC2 Fab-Fc杵链，其具有与SEQ ID NO:8297序列至少80％相同的轻链序列，和/或与SEQ ID NO:8298序列至少80％相同的重链序列；和/或与SEQ ID NO:8300序列至少80％相同的Fc臼链。在一些实施方案中，TRBC2结合分子包含抗TRBC2 Fab-Fc杵链，其具有与SEQ ID NO:8297序列至少90％相同的轻链序列，和/或与SEQ ID NO:8298序列至少90％相同的重链序列；和/或与SEQ ID NO:8300序列至少90％相同的Fc臼链。
本文公开了一种TRBC2结合分子，其包含具有SEQ ID NO:8301的轻链、SEQ ID NO:8302的重链序列的抗TRBC2 Fab-Fc杵链；和/或SEQ ID NO:8300的Fc臼链。在一些实施方案中，TRBC2结合分子可包含与SEQ ID NO:8301、SEQ ID No:8302和/或SEQ ID NO:8300序列中的任一者至少80％相同的序列。在一些实施方案中，TRBC2结合分子可包含与SEQ ID NO:8301、SEQ ID No:8302和/或SEQ ID NO:8300序列中的任一者至少90％相同的序列。在一些实施方案中，TRBC2结合分子可包含与SEQ ID NO:8301、SEQ ID NO:8302或SEQ ID NO:8300序列中的任一者至少95％相同的序列。在一些实施方案中，TRBC2结合分子包含抗TRBC2Fab-Fc杵链，其具有与SEQ ID NO:8301序列至少80％相同的轻链序列，和/或与SEQ ID NO:8302序列至少80％相同的重链序列；和/或与SEQ ID NO:8300序列至少80％相同的Fc臼链。在一些实施方案中，TRBC2结合分子包含抗TRBC2 Fab-Fc杵链，其具有与SEQ ID NO:8301序列至少90％相同的轻链序列，和/或与SEQ ID NO:8302序列至少90％相同的重链序列；和/或与SEQ ID NO:8300序列至少90％相同的Fc臼链。
本文公开了一种多特异性分子，其包含具有SEQ ID NO:7380的轻链、SEQ ID NO:7382的重链序列的抗TRBC1 Fab-Fc杵链；以及SEQ IDNO:8286的NKp30 scFv-Fc臼链。在一些实施方案中，多特异性分子包含抗TRBC1 Fab-Fc杵链，其具有与SEQ ID No:7380序列至少80％相同的轻链，和/或与SEQ ID NO:7382序列至少80％相同的重链；和/或与SEQ IDNO:8286序列至少80％相同的NKp30 scFv-Fc臼链。在一些实施方案中，多特异性分子包含抗TRBC1 Fab-Fc杵链，其具有与SEQ ID No:7380序列至少90％相同的轻链，和/或与SEQ IDNO:7382序列至少90％相同的重链；和/或与SEQ ID NO:8286序列至少90％相同的NKp30scFv-Fc臼链。
本文公开了一种NK-p30结合分子，其包含具有SEQ ID NO:8301的轻链、SEQ IDNO:8302的重链序列的抗NKp30 Fab-Fc杵链；和/或SEQ ID NO:8300的Fc臼链。在一些实施方案中，NK-p30结合分子包含抗NKp30 Fab-Fc杵链，其具有与SEQ ID NO:8301具有至少90％序列同一性的轻链，和/或与SEQ ID NO:8302具有至少90％序列同一性的重链序列；和/或与SEQ ID NO:8300具有至少90％序列同一性的Fc臼链。
本文公开了一种TRBC1结合分子，其包含具有SEQ ID NO:8307的轻链、SEQ ID NO:8309的重链序列的抗TRBC1 Fab-Fc杵链；和/或SEQ ID NO:8300的Fc臼链。在一些实施方案中，TRBC1结合分子包含抗TRBC1 Fab-Fc杵链，其具有与SEQ ID NO:8307具有至少90％序列同一性的轻链，和/或与SEQ ID NO:8309具有至少90％序列同一性的重链序列；和/或与SEQID NO:8300具有至少90％序列同一性的Fc臼链。
在一些实施方案中，第一抗原结合结构域结合至TRBC2。在一些实施方案中，第一抗原结合结构域包含表格(表9A或表9B、表10、表11、表12、表13、表14、表15、表17、表39)的任一者中公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，第一抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含重链互补决定区1(VHCDR1)、VHCDR2和VHCDR3，该VL包含轻链互补决定区1(VLCDR1)、VLCDR2和VLCDR3。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7441、201和7442的氨基酸序列。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ IDNO:7443、224和225的氨基酸序列。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7441、201、7442、7443、224和225的氨基酸序列。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:7422、201和7403；SEQ ID NO:7401、201和7403；SEQ ID NO:7394、201和7396；SEQ ID NO:7346、201和7398；SEQ ID NO:7346、201和7400；SEQ ID NO:7405、201和7403；SEQ ID NO:7407、201和7403；SEQ ID NO:7427、201和7403；或SEQ ID NO:7430、201和7403。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:7410、224和225；或SEQ IDNO:7409、224和225。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:7422、201、7403、7410、224和225；SEQ ID NO:7401、201、7403、7410、224和225；SEQ ID NO:7394、201、7396、7410、224和225；SEQ ID NO:7346、201、7398、7410、224和225；SEQ ID NO:7346、201、7400、7410、224和225；SEQ ID NO:7405、201、7403、7410、224和225；SEQ ID NO:7407、201、7403、7410、224和225；SEQ ID NO:7427、201、7403、7410、224和225；SEQ ID NO:7430、201、7403、7410、224和225；SEQ ID NO:7422、201、7403、7409、224和225；SEQ ID NO:7401、201、7403、7409、224和225；SEQ ID NO:7394、201、7396、7409、224和225；SEQ ID NO:7346、201、7398、7409、224和225；SEQ ID NO:7346、201、7400、7409、224和225；SEQ ID NO:7405、201、7403、7409、224和225；SEQ ID NO:7407、201、7403、7409、224和225；SEQ ID NO:7427、201、7403、7409、224和225；或SEQ ID NO:7430、201、7403、7409、224和225。在一些实施方案中，VH包含选自SEQ ID NO:7420、7423、7411、7412、7413、7414、7415、7416、7417、7425、7428和7431的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VL包含选自SEQ ID NO:7419和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:7420和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7423和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7411和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7412和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7413和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7414和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQID NO:7415和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7416和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7417和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7425和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7428和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7431和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7420和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7423和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7411和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7412和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7413和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7414和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQID NO:7415和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7416和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7417和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7425和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7428和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7431和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，第一抗原结合结构域对包含TRBC2的T细胞受体比对不包含TRBC2的T细胞受体具有更高的亲和力，任选地其中第一抗原结合结构域与TRBC2之间结合的KD不超过第一抗原结合结构域与不包含TRBC2的T细胞受体之间结合的KD的40％、30％、20％、10％、1％、0.1％或0.01％。在一些实施方案中，第一抗原结合结构域对包含TRBC2的T细胞受体比对包含TRBC1的T细胞受体具有更高的亲和力，任选地其中第一抗原结合结构域与TRBC2之间结合的KD不超过第一抗原结合结构域与包含TRBC1的T细胞受体之间结合的KD的40％、30％、20％、10％、1％、0.1％或0.01％。在一些实施方案中，第一抗原结合结构域与淋巴瘤细胞或淋巴细胞(例如，T细胞)上TRBC2的结合不明显活化淋巴瘤细胞或淋巴细胞(例如，T细胞)，例如，如通过T细胞增殖、T细胞活化标记物(例如，CD69或CD25)的表达和/或细胞因子(例如，TNFα和IFNγ)的表达所测量的。在一些实施方案中，在表达TRBC2的细胞不存在的情况下，多功能性分子不活化NK细胞或基本上不活化NK细胞。
在一些实施方案中，第一抗原结合结构域结合至TRBC1。在一些实施方案中，第一抗原结合结构域包含表1、表2A或2B、表3A或表3B、表4、表7、表8和表16的任一者中公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，第一抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含重链互补决定区1(VHCDR1)、VHCDR2和VHCDR3，该VL包含轻链互补决定区1(VLCDR1)、VLCDR2和VLCDR3，其中VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含以下氨基酸序列：SEQ IDNO:7346、7355和202；SEQID NO:7346、201和202；SEQ ID NO:7354、201和202；或SEQ ID NO:7354、7355和202。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含以下氨基酸序列：SEQ IDNO:223、224和225；SEQ ID NO:7367、224和225；SEQ ID NO:223、7368和225；SEQ ID NO:223、224和7369；或SEQID NO:7367、7368和7369。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:7346、7355、202、223、224和225；SEQ ID NO:7346、201、202、223、224和225；SEQ ID NO:7346、7355、202、7367、224和225；SEQ ID NO:7346、7355、202、223、7368和225；SEQ ID NO:7346、7355、202、223、224和7369；SEQ ID NO:7346、7355、202、7367、7368和7369；SEQ ID NO:7346、201、202、7367、224和225；SEQ ID NO:7346、201、202、223、7368和225；SEQ ID NO:7346、201、202、223、224和7369；SEQ ID NO:7346、201、202、7367、7368和7369；SEQ ID NO:7354、201、202、223、224和225；SEQ ID NO:7354、201、202、7367、224和225；SEQ ID NO:7354、201、202、223、7368和225；SEQ ID NO:7354、201、202、223、224和7369；SEQ ID NO:7354、201、202、7367、7368和7369；SEQ ID NO:7354、7355、202、223、224和225；SEQ ID NO:7354、7355、202、7367、224和225；SEQ ID NO:7354、7355、202、223、7368和225；SEQ ID NO:7354、7355、202、223、224和7369；或SEQ IDNO:7354、7355、202、7367、7368和7369。在一些实施方案中，VH包含选自SEQ ID NO:7351、253、250-252、254、7343、7344、7350和7352的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，和/或VL包含选自SEQ ID NO:258、255-257、259、260和7357-7360的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:7351和258(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；或SEQ ID NO:253和258(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，第一抗原结合结构域对包含TRBC1的T细胞受体比对不包含TRBC1的T细胞受体具有更高的亲和力，任选地其中第一抗原结合结构域与TRBC1之间结合的KD不超过第一抗原结合结构域与不包含TRBC1的T细胞受体之间结合的KD的40％、30％、20％、10％、1％、0.1％或0.01％。在一些实施方案中，第一抗原结合结构域对包含TRBC1的T细胞受体比对包含TRBC2的T细胞受体具有更高的亲和力，任选地其中第一抗原结合结构域与TRBC1之间结合的KD不超过第一抗原结合结构域与包含TRBC2的T细胞受体之间结合的KD的40％、30％、20％、10％、1％、0.1％或0.01％。在一些实施方案中，第一抗原结合结构域与淋巴瘤细胞或淋巴细胞(例如，T细胞)上TRBC1的结合不明显活化淋巴瘤细胞或淋巴细胞(例如，T细胞)，例如，如通过T细胞增殖、T细胞活化标记物(例如，CD69或CD25)的表达和/或细胞因子(例如，TNFα和IFNγ)的表达所测量的。在一些实施方案中，在表达TRBC1的细胞不存在的情况下，多功能性分子不活化NK细胞或基本上不活化NK细胞。
在一些实施方案中，第二抗原结合结构域包含表格(表16、表17、表20A或表20B、表21A或表21B、表22、表23A或表23B、表24、表25和表26)的任一者中公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，第二抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含重链互补决定区1(VHCDR1)、VHCDR2和VHCDR3，该VL包含轻链互补决定区1(VLCDR1)、VLCDR2和VLCDR3，其中第二抗原结合结构域的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:7313、6001和7315；SEQ ID NO:7313、6001和6002；SEQ ID NO:7313、6008和6009；SEQ ID NO:7313、7385和7315；或SEQ ID NO:7313、7318和6009，SEQ ID NO:7313、7318和6009；SEQ ID NO:C019、C021和C023；SEQ ID NO:C033、C035和C037；SEQ ID NO:C047、C049和C051；SEQ ID NO:C061、C063和C065；SEQ ID NO:C075、C077和C079；SEQ ID NO:C089、C091和C093；SEQ IDNO:C103、C105和C107；或SEQ ID NO:C116、C118和C120。在一些实施方案中，第二抗原结合结构域的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:7326、7327和7329；SEQ ID NO:6063、6064和7293；SEQ ID NO:6070、6071和6072；SEQ ID NO:6070、6064和7321；SEQ ID NO:C026、C028和C030；SEQ ID NO:C040、C042和C044；SEQ ID NO:C054、C056和C058；SEQ ID NO:C068、C070和C072；SEQ ID NO:C082、C084和C086；SEQ ID NO:C096、C098和C100；SEQ ID NO:C110、C112和C113；SEQ ID NO:C123、C125和C127。在一些实施方案中，第二抗原结合结构域的VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:7313、6001、7315、7326、7327和7329；SEQ ID NO:7313、6001、6002、6063、6064和7293；SEQ ID NO:7313、6008、6009、6070、6071和6072；SEQ ID NO:7313、7385、7315、6070、6064和7321；SEQ ID NO:7313、7318、6009、6070、6064和7321；SEQID NO:C019、C021、C023、C026、C028和C030；SEQ ID NO:C033、C035、C037、C040、C042和C044；SEQ ID NO:C047、C049、C051、C054、C056和C058；SEQ ID NO:C061、C063、C065、C068、C070和C072；SEQ ID NO:C075、C077、C079、C082、C084和C086；SEQ ID NO:C089、C091、C093、C096、C098和C100；SEQ ID NO:C103、C105、C107、C110、C112和C113；或SEQ ID NO:C116、C118、C120、C123、C125和C127。在一些实施方案中，第二抗原结合结构域的VH包含选自SEQID NO:7302、7298、7300、7301、7303和7304的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，和/或第二抗原结合结构域的VL包含选自SEQ ID NO:7309、7305、7299、7306-7308的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，第二抗原结合结构域的VH包含选自SEQ ID NO:6121或6123-6128的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，和/或第二抗原结合结构域的VL包含选自SEQ ID NO:7294或6137-6141的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，第二抗原结合结构域的VH包含选自SEQ IDNO:6122或6129-6134的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，和/或第二抗原结合结构域的VL包含选自SEQ ID NO:6136或6142-6147的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，第二抗原结合结构域的VH包含选自SEQ ID NO:C001-C008的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；和/或第二抗原结合结构域的VL包含选自SEQ ID NO:C009-C016的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，第二抗原结合结构域的VH和VL分别包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:7302和7309(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；或SEQ ID NO:7302和7305(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，第二抗原结合结构域分别包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:7311或7310(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:6187或6188(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；或SEQ ID NO:6189或6190(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列，SEQ ID NO:C017-C024中的任一者)。
在一些实施方案中，多功能性分子单价结合至TRBC2。在一些实施方案中，多功能性分子包含图30A-30D中任一个所示的构型，任选地其中：(i)多功能性抗体分子包含抗TRBC2 Fab和抗NKp30 scFv，例如，包含图30A中所示的构型；(ii)多功能性抗体分子包含抗TRBC2Fab和抗NKp30 Fab，例如，包含图30B中所示的构型；(iii)多功能性抗体分子包含抗NKp30 Fab和抗TRBC2 scFv，例如，包含图30C中所示的构型；或(iv)多功能性抗体分子包含抗TRBC2 scFv和抗NKp30scFv，例如，包含图30D中所示的构型。
在一些实施方案中，多功能性分子单价结合至TRBC1。在一些实施方案中，多功能性分子包含图29A-29D中任一个所示的构型，任选地其中：(i)多功能性抗体分子包含抗TRBC1 Fab和抗NKp30 scFv，例如，包含图29A中所示的构型；(ii)多功能性抗体分子包含抗TRBC1Fab和抗NKp30 Fab，例如，包含图29B中所示的构型；(iii)多功能性抗体分子包含抗NKp30 Fab和抗TRBC1 scFv，例如，包含图29C中所示的构型；或(iv)多功能性抗体分子包含抗TRBC1 scFv和抗NKp30scFv，例如，包含图29D中所示的构型。
在一些实施方案中，本文公开的多功能性分子进一步包含二聚化模块，该二聚化模块包含一个或多个免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)，该免疫球蛋白链恒定区包含以下中的一种或多种：成对的空腔-突起(“杵-臼(knob-in-a hole)”)、静电相互作用或链交换。
在一些实施方案中，多功能性分子包含表9A或表9B、表10、表11、表12、表13、表14、表15、表17、表39的任一者中公开的抗TRBC2氨基酸序列，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列，和/或表20A或表20B、表22、表23A或表23B、表24、表25、表26、表21A或表21B、和表17的任一者中公开的抗NKp30氨基酸序列，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，多功能性分子包含SEQ ID NO:7420的抗TRBC2 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7419的抗TRBC2 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7302的抗NKp30 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7309的抗NKp30 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，多功能性分子包含SEQ ID NO:7420的抗TRBC2 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7419的抗TRBC2VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7311的抗NKp30 scFv(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，多功能性分子包含SEQ ID NO:7438、7439和7383(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，多功能性分子包含SEQ ID NO:7423的抗TRBC2VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7419的抗TRBC2 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7302的抗NKp30 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7309的抗NKp30 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，多功能性分子包含SEQ ID NO:7423的抗TRBC2 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7419的抗TRBC2 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7311的抗NKp30 scFv(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，多功能性分子包含SEQ ID NO:7440、7439和7383(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，多功能性分子包含表1、表2A或表2B、表3A或表3B、表4、表7、表8和表16的任一者中公开的抗TRBC1氨基酸序列，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列，和/或表16、表17、表20A或表20B、表21A或表21B、表22、表23A或表23B、表24、表25、表26的任一者中公开的抗NKp30氨基酸序列，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，多功能性分子包含：(i)SEQ ID NO:7351的抗TRBC1 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:258的抗TRBC1 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7302的抗NKp30 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7309的抗NKp30 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；(ii)SEQ ID NO:7351的抗TRBC1 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:258的抗TRBC1 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7311的抗NKp30 scFv(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；或(iii)SEQ ID NO:7382、7380和7383(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，多功能性分子包含：(i)SEQ ID NO:253的抗TRBC1 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:258的抗TRBC1 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7302的抗NKp30 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7309的抗NKp30 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；(ii)SEQ ID NO:253的抗TRBC1 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:258的抗TRBC1 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7311的抗NKp30 scFv(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；或(iii)SEQ ID NO:7379、7380和7383(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，多功能性分子包含：(i)SEQ ID NO:7351的抗TRBC1 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:258的抗TRBC1 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7302的抗NKp30 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7305的抗NKp30 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；(ii)SEQ ID NO:7351的抗TRBC1 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:258的抗TRBC1 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7310的抗NKp30 scFv(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；或(iii)SEQ ID NO:7382、7380和7384(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，多功能性分子包含：(i)SEQ ID NO:253的抗TRBC1 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:258的抗TRBC1 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7302的抗NKp30 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7305的抗NKp30 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；(ii)SEQ ID NO:253的抗TRBC1 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:258的抗TRBC1 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7310的抗NKp30 scFv(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；或(iii)SEQ ID NO:7379、7380和7384(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，多功能性分子包含：重链恒定区变体，例如，Fc区变体，该重链恒定区变体包含导致对至少一种Fc受体的亲和力降低或消除的一个或多个突变，任选地其中一个或多个突变导致抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)或补体依赖性细胞毒性(CDC)降低或消除。在一些实施方案中，Fc区变体包含表18中公开的一个或多个突变，任选地其中Fc区变体包含N297A突变。
在一方面，本公开的特征在于一种多功能性分子，其包含：(i)结合至T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)的第一抗原结合结构域，以及(ii)结合至NKp30的第二抗原结合结构域，其中第一抗原结合结构域包含表5A或表5B、表5A或表5B、表6、或表7的任一者中公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域(例如，SEQ IDNO:B001-B095中的任一者)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
在一些实施方案中，第二抗原结合结构域包含本文公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域。
在另一方面，本公开的特征在于一种多功能性分子，其包含：(i)结合至T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)的第一抗原结合结构域，以及(ii)结合至NKp30的第二抗原结合结构域，其中第二抗原结合结构域包含表格(表23A或表23B、表24、表25、或表26(例如，SEQIDNO:C001-C128中的任一者)或表21A或表21B或表17)的任一者中公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
在一些实施方案中，第一抗原结合结构域包含本文公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域。
在一方面，本公开的特征在于一种多功能性分子，其包含：
(i)结合至T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)的第一抗原结合结构域，以及
(ii)结合至NKp30的第二抗原结合结构域，
其中第一抗原结合结构域包含表5A或表5B、表6、或表7的任一者中公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域(例如，SEQ ID NO:B001-B095中的任一者)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列；并且
其中第二抗原结合结构域包含表8A、表16、表17、表21A或表21B、表24、表25、或表26的任一者中公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域(例如，SEQ ID NO:C001-C128中的任一者)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
在一方面，本文提供了一种结合至TRBC2的抗体分子，其包含表9A或表9B、表10、表11、表12、表13、表14、表15、表17、表39的任一者中公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至TRBC2的抗体分子包含表9或表10中公开的一个或多个CDR(例如，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和/或VLCDR3)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至TRBC2的抗体分子包含表9或表10中公开的一个或多个框架区(例如，VHFWR1、VHFWR2、VHFWR3、VHFWR4、VLFWR1、VLFWR2、VLFWR3和/或VLFWR4)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至TRBC2的抗体分子包含表11中公开的VH和/或VL，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至TRBC2的抗体分子包含表12中公开的氨基酸序列，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
在一方面，本文提供了一种结合至NKp30的抗体分子，其包含表16、表17、表20A或表20B、表21A或表21B、表22、表23A或表23B、表24、表25、表26的任一者中公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
在一方面，本文提供了一种结合至TRBC1的抗体分子，其包含表1、表2A或表2B、表3A或表3B、表4、表7、表8和表16的任一者中公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
在一些实施方案中，抗体分子包含重链恒定区变体，例如，Fc区变体，该重链恒定区变体包含导致对至少一种Fc受体的亲和力降低或消除的一个或多个突变，任选地其中一个或多个突变导致抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)或补体依赖性细胞毒性(CDC)降低或消除。在一些实施方案中，Fc区变体包含表18中公开的一个或多个突变，任选地其中Fc区变体包含N297A突变。
在一些实施方案中，本文公开的氨基酸序列包含信号肽METDTLLLWVLLLWVPGSTG(SEQ ID NO:SEQ ID NO:7444)。在一些实施方案中，本文公开的氨基酸序列不包含信号肽METDTLLLWVLLLWVPGSTG(SEQ ID NO:SEQ ID NO:7444)。
在一方面，本文提供了一种核酸分子，其编码本文公开的多功能性分子或本文公开的抗体分子。在一方面，本文提供了一种载体，例如，表达载体，其包含本文公开的核酸分子。在一方面，本文提供了一种细胞，其包含本文公开的核酸分子或本文公开的载体。在一方面，本文提供了一种药物组合物，其包含本文公开的多功能性分子或本文公开的抗体分子，以及药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂。
在一方面，本文提供了一种制备例如产生本文公开的多功能性分子或本文公开的抗体分子的方法，其包括在合适的条件(例如，适于基因表达和/或同源二聚化或异源二聚化的条件)下，培养本文公开的细胞。
在一方面，本文提供了一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的对象施用本文公开的多功能性分子或本文公开的抗体分子，其中多功能性分子或抗体分子以有效治疗癌症的量施用。在一些实施方案中，该方法进一步包括鉴定、评估或选择需要治疗的对象，其中鉴定、评估或选择包括确定(例如，直接确定或间接确定，例如，获得信息关于)对象是否具有表达包含TRBC1或TRBC2的T细胞受体的癌细胞。在一些实施方案中，该方法进一步包括：响应于确定对象具有表达包含TRBC2的T细胞受体的癌细胞：任选地，选择用包含结合至包含TRBC2的T细胞受体的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的对象，并施用本文公开的包含结合至包含TRBC2的T细胞受体的抗原结合结构域的多功能性分子。在一些实施方案中，该方法进一步包括：响应于确定对象具有表达包含TRBC1的T细胞受体的癌细胞：任选地，选择用包含结合至包含TRBC1的T细胞受体的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的对象，并施用本文公开的包含结合至包含TRBC1的T细胞受体的抗原结合结构域的多功能性分子。
在一方面，本文提供了一种治疗癌症(例如，淋巴瘤或白血病，例如，T细胞淋巴瘤或白血病)的方法，其包括：响应于确定对象具有表达包含TRBC2的T细胞受体的癌细胞，向对象施用本文公开的多功能性分子，其中多功能性分子的第一抗原结合结构域结合至TRBC2，其中多功能性分子以有效治疗癌症的量施用。在一方面，本文提供了一种治疗癌症(例如，淋巴瘤或白血病，例如，T细胞淋巴瘤或白血病)的方法，其包括：响应于确定对象具有表达包含TRBC1的T细胞受体的癌细胞，向对象施用本文公开的多功能性分子，其中多功能性分子的第一抗原结合结构域结合至TRBC1，其中多功能性分子以有效治疗癌症的量施用。
在一方面，本文提供了一种鉴定需要使用本文公开的多功能性分子治疗癌症(例如，淋巴瘤或白血病，例如，T细胞淋巴瘤或白血病或其恶化前状态)的对象的方法，其包括确定(例如，直接确定或间接确定，例如，获得信息关于)对象是否具有表达包含TRBC1或TRBC2的T细胞受体的癌细胞，其中：响应于确定对象具有表达包含TRBC1的T细胞受体的癌细胞，将对象鉴定为使用包含结合至TRBC1的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的候选者，并且任选地不作为使用包含结合至TRBC2的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的候选者，或者响应于确定对象具有表达包含TRBC2的T细胞受体的癌细胞，将对象鉴定为使用包含结合至TRBC2的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的候选者，并且任选地不作为使用包含结合至TRBC1的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的候选者。
在一些实施方案中，该方法进一步包括：响应于将对象鉴定为使用包含结合至TRBC1的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的候选者，用(例如，向对象施用)包含结合至TRBC1的抗原结合结构域的多功能性分子来治疗对象，或者响应于将对象鉴定为使用包含结合至TRBC2的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的候选者，用(例如，向对象施用)包含结合至TRBC2的抗原结合结构域的多功能性分子来治疗对象。
在上述方法的一些实施方案中，癌症是白血病或淋巴瘤或其恶化前状态。在一些实施方案中，癌症选自获得性免疫缺陷综合征(AIDS)相关淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、中枢神经系统(CNS)淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、成淋巴细胞性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)(例如，肝脾T细胞淋巴瘤(HSGDTCL)、皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤或肠病相关T细胞淋巴瘤)、转化滤泡性和转化粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤(蕈样真菌病和塞扎里综合征)、滤泡性淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤/瓦氏巨球蛋白血症(
Figure BDA0004017031980000201
macroglobulinemia)、边缘区B细胞淋巴瘤、胃粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小细胞淋巴细胞性淋巴瘤(CLL/SLL)、结外T/NK细胞淋巴瘤(鼻型)和间变性大细胞淋巴瘤(例如，原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤或全身性间变性大细胞淋巴瘤)。在一些实施方案中，癌症是外周T细胞淋巴瘤(PTCL)。
在一方面，本发明提供了一种组合物，其包含本文公开的多功能性分子或抗体分子，用于治疗患有癌症的对象的方法。
因此，在一方面，本公开的特征在于多功能性分子，其包含：
(i)选择性地结合至T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)或T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)的第一抗原结合结构域，以及(ii)以下中的一种、两种或全部：
(a)免疫细胞接合物，其选自NK细胞接合物(例如，结合至NKp30、NKp46、NKG2D或CD16的分子)、T细胞接合物(例如，结合至CD3以外的T细胞抗原)、B细胞接合物、树突细胞接合物或巨噬细胞接合物；(b)细胞因子分子或细胞因子抑制剂分子；
(c)死亡受体信号接合物；以及
(d)基质修饰部分。
在另一方面，本公开的特征在于一种多功能性分子，其包含：
(i)选择性地靶向表达(例如，在其表面上表达，例如，展示)包含T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)的T细胞受体、TRBC1、包含T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)的T细胞受体或TRBC2的淋巴细胞的第一抗原结合结构域，以及(ii)以下中的一种、两种或全部：
(a)免疫细胞接合物，其选自NK细胞接合物(例如，结合至NKp30、NKp46、NKG2D或CD16的分子)、T细胞接合物(例如，结合至CD3以外的T细胞抗原)、B细胞接合物、树突细胞接合物或巨噬细胞接合物；
(b)细胞因子分子或细胞因子抑制剂分子；
(c)死亡受体信号接合物；以及
(d)基质修饰部分。
在另一方面，本公开的特征在于一种多功能性分子，其包含：
(i)优先结合至淋巴瘤细胞(例如，T细胞)上的肿瘤抗原(例如，包含T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)的T细胞受体、TRBC1、包含T细胞受体β链恒定域结构2(TRBC2)的T细胞受体或TRBC2)的第一抗原结合结构域，以及(ii)以下中的一种、两种或全部：
(a)免疫细胞接合物，其选自NK细胞接合物(例如，结合至NKp30、NKp46、NKG2D或CD16的分子)、T细胞接合物(例如，结合至CD3以外的T细胞抗原)、B细胞接合物、树突细胞接合物或巨噬细胞接合物；
(b)细胞因子分子或细胞因子抑制剂分子；
(c)死亡受体信号接合物；以及
(d)基质修饰部分。
在另一方面，本公开的特征在于一种抗体分子，例如，IgM抗体分子，其包含：(i)选择性地结合至T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)或T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)的第一抗原结合结构域，以及(ii)例如通过结合C1q来活化补体途径的补体活化结构域。
在另一方面，本公开的特征在于多特异性或多功能性分子或抗体，其包括(i)结合至包含T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)的T细胞受体或包含T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)的T细胞受体的抗原结合结构域；(ii)结合至肿瘤抗原的抗原结合结构域，其中肿瘤抗原选自胸苷激酶(TK1)、次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、粘蛋白-1、粘蛋白-16(MUC16)、MUC1、表皮生长因子受体vIII(EGFRvIII)、间皮素、人表皮生长因子受体2(HER2)、间皮素、EBNA-1、LEMD1、磷脂酰丝氨酸、癌胚抗原(CEA)、B细胞成熟抗原(BCMA)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)、卵泡刺激素受体、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、促红细胞生成素产生肝细胞癌A2(EphA2)、EphB2、自然杀伤组2D(NKG2D)配体、双唾液酸神经节苷脂2(GD2)、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD19、CD20、CD22、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44v6、CD45、CD56、CD79b、CD97、CD117、CD123、CD133、CD138、CD171、CD179a、CD213A2、CD248、CD276、PSCA、CS-1、CLECL1、GD3、PSMA、FLT3、TAG72、EPCAM、IL-1、整联蛋白受体、PRSS21、VEGFR2、PDGFR-β、SSEA-4、EGFR、NCAM、前列腺酶、PAP、ELF2M、GM3、TEM7R、CLDN6、TSHR、GPRC5D、ALK、IGLL1及其组合。在一些实施方案中，抗原选自CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CCR4、CD8、CD30、CD45、CD56。
在一个实施方案中，本公开的特征在于多特异性或多功能性分子或抗体，其包括(i)结合至包含T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)的T细胞受体或包含T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)的T细胞受体的抗原结合结构域；(ii)结合至肿瘤抗原的抗原结合结构域，其中肿瘤抗原是CD19。
在另一方面，本公开的特征在于一种核酸分子，其编码本文公开的多功能性分子。
在另一方面，本公开的特征在于一种载体，例如，表达载体，其包含本文公开的核酸分子。
在另一方面，本公开的特征在于一种宿主细胞，其包含本文公开的核酸分子或载体。
在另一方面，本公开的特征在于一种制备例如产生本文公开的多功能性分子的方法，其包括在合适的条件(例如，适于基因表达和/或同源二聚化或异源二聚化的条件)下，培养本文公开的宿主细胞。
在另一方面，本公开的特征在于一种药物组合物，其包含本文公开的多功能性分子。
在另一方面，本公开的特征在于一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的对象施用本文公开的多功能性分子，其中多功能性分子以有效治疗癌症的量施用。在一些实施方案中，癌症是T细胞恶性肿瘤，例如，T细胞淋巴瘤或T细胞白血病。在一些实施方案中，癌症选自：T细胞幼淋巴细胞白血病、T细胞大颗粒淋巴细胞性白血病、儿童全身性EBV阳性T细胞淋巴增生性疾病、种痘水疱病样淋巴瘤、PTCL、PTCL-NOS(非特指型)、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)、间变性大细胞淋巴瘤(ALCT)ALK阳性和ALK阴性、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、原发性皮肤gd T细胞淋巴瘤、原发性皮肤CD8阳性侵袭性表皮细胞毒性T细胞淋巴瘤、原发性皮肤CD4阳性小/中等T细胞淋巴瘤、结外T细胞淋巴瘤、肠病相关T细胞淋巴瘤(EATL)、肝脾T细胞淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)(包括CD30阳性T细胞淋巴增生性障碍、皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤、蕈样真菌病、塞扎里综合征、淋巴瘤样丘疹病)、T细胞急性成淋巴细胞性白血病(T-ALL)、成人T细胞淋巴瘤、未知意义的单克隆T细胞增殖。在一些实施方案中，癌症选自：间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)；血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤；外周T细胞淋巴瘤(PTCL)，非特指型(NOS)；皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)；NKT细胞淋巴瘤；塞扎里综合征；T急性成淋巴细胞性白血病或淋巴瘤；成人T细胞白血病或淋巴瘤；T幼淋巴细胞白血病；和T大颗粒白血病。在一些实施方案中，癌症是PTCL。在一些实施方案中，通过例如新鲜肿瘤组织的流式细胞术分析来分析TRBC亚型表达。在一些实施方案中，多功能性分子与第二药剂组合使用。在一些实施方案中，第二药剂是组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂，例如，罗米地辛(romidepsin)或贝利司他(belinostat)。在一些实施方案中，第二药剂是激酶或酶抑制剂。在一些实施方案中，第二药剂是PI3K抑制剂，例如，杜韦利西布(duvelisib)。在一些实施方案中，第二药剂是法尼基转移酶抑制剂，例如，替吡法尼(tipifamib)。在一些实施方案中，第二药剂是SYK/JAK抑制剂，例如，赛度替尼(cerdulatinib)。在一些实施方案中，第二药剂是化疗。在一些实施方案中，第二药剂是抗CD30抗体。在一些实施方案中，第二药剂是IMiD。
在另一方面，本公开的特征在于一种鉴定需要使用本文公开的多功能性分子治疗癌症的对象的方法，其包括确定(例如，直接确定或间接确定，例如，获得信息关于)对象是否具有表达包含TRBC1或TRBC2的T细胞受体的癌细胞，其中：响应于确定对象具有表达包含TRBC1的T细胞受体的癌细胞，将对象鉴定为使用包含结合至TRBC1的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的候选者，并且任选地不作为使用包含结合至TRBC2的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的候选者，以及响应于确定对象具有表达包含TRBC2的T细胞受体的癌细胞，将对象鉴定为使用包含结合至TRBC2的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的候选者，并且任选地不作为使用包含结合至TRBC1的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的候选者。
在另一方面，本公开的特征在于一种评估需要治疗癌症(例如，淋巴瘤)的对象的方法，其包括确定(例如，直接确定或间接确定，例如，获得信息关于)对象是否具有表达包含TRBC1或TRBC2的T细胞受体的癌细胞。
在另一方面，所讨论的药剂可以具有治疗自身免疫性病况的潜力，例如1型糖尿病、类风湿性关节炎、银屑病/银屑病关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、炎性肠病、溃疡性结肠炎、艾迪生病、格雷夫斯病、干燥综合征、桥本甲状腺炎、重症肌无力、自身免疫性血管炎、恶性贫血和乳糜泻。
上述多功能性分子、核酸、载体、宿主细胞或方法中任一种的另外特征包括以下列举的实施方案中的一个或多个。
本领域技术人员将认识到或仅使用常规实验的方法就能够确定本文所述的本发明具体实施方案的许多等效物。这种等效物旨在被以下列举的实施方案涵盖。
列举的实施方案
1.一种多功能性分子，其包含：
(i)优先结合至淋巴瘤细胞(例如，T细胞)上的肿瘤抗原的第一抗原结合结构域，其中肿瘤抗原是T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)或T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)，
以及
(ii)以下中的一种、两种或全部：
(a)免疫细胞接合物，其选自NK细胞接合物(例如，结合至NKp30、NKp46、NKG2D或CD16的分子)、T细胞接合物、B细胞接合物、树突细胞接合物或巨噬细胞接合物；
(b)细胞因子分子或细胞因子抑制剂分子；
(c)死亡受体信号接合物；以及
(d)基质修饰部分。
1A.一种多功能性分子，其包含：
(i)选择性地结合至T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)或T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)的第一抗原结合结构域，以及
(ii)以下中的一种、两种或全部：
(a)免疫细胞接合物，其选自NK细胞接合物(例如，结合至NKp30、NKp46、NKG2D或CD16的分子)、结合至CD3以外的T细胞抗原的T细胞接合物、B细胞接合物、树突细胞接合物或巨噬细胞接合物；
(b)细胞因子分子或细胞因子抑制剂分子；
(c)死亡受体信号接合物；以及
(d)基质修饰部分。
2.一种多功能性分子，其包含：
(i)选择性地靶向表达T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)或T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)的淋巴细胞的第一抗原结合结构域，以及
(ii)以下中的一种、两种或全部：
(a)免疫细胞接合物，其选自NK细胞接合物(例如，结合至NKp30、NKp46、NKG2D或CD16的分子)、T细胞接合物、B细胞接合物、树突细胞接合物或巨噬细胞接合物；
(b)细胞因子分子或细胞因子抑制剂分子；
(c)死亡受体信号接合物；以及
(d)基质修饰部分。
3.根据实施方案1或2的多功能性分子，其中多功能性分子：
(i)特异性结合至TRBC1或TRBC2的表位，例如，与由如本文所述的抗TRBC1或抗TRBC2抗体分子识别的表位相同或相似的表位；
(ii)表现出与如本文所述的抗TRBC1或抗TRBC2抗体分子相同或相似的结合亲和力或特异性或两者；
(iii)抑制(例如，竞争性抑制)如本文所述的抗TRBC1或抗TRBC2抗体分子的结合；
(iv)与如本文所述的抗TRBC1或抗TRBC2抗体分子结合相同或重叠的表位；或
(v)与如本文所述的抗TRBC1或抗TRBC2抗体分子竞争结合和/或结合相同的表位。
4.根据实施方案3的多功能性分子，其中抗TRBC1或抗TRBC2抗体分子包含选自表1、表2A或表2B、表4、表7、表8的一个或多个CDR、框架区、可变结构域、重链或轻链或抗原结合结构域，或与其基本上相同的序列。
5.根据实施方案1-4中任一项的多功能性分子，其中抗原或肿瘤抗原是TRBC1。
6.根据实施方案1-4中任一项的多功能性分子，其中抗原或肿瘤抗原是TRBC2。
7.根据实施方案1-4或6中任一项的多功能性分子，其中第一抗原结合结构域包含本文公开的抗TRBC2抗原结合结构域，例如，包含表9A或表9B、表10、表11、表12、表13、表14、表15、表17、表39的任一者中公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
8.根据实施方案1-4、6或7中任一项的多功能性分子，其中第一抗原结合结构域对包含TRBC2的T细胞受体比对不包含TRBC2的T细胞受体具有更高的亲和力，任选地其中第一抗原结合结构域与TRBC2之间结合的KD不超过第一抗原结合结构域与不包含TRBC2的T细胞受体之间结合的KD的40％、30％、20％、10％、1％、0.1％或0.01％。
9.根据实施方案1-4或6-8中任一项的多功能性分子，其中第一抗原结合结构域对包含TRBC2的T细胞受体比对包含TRBC1的T细胞受体具有更高的亲和力，任选地其中第一抗原结合结构域与TRBC2之间结合的KD不超过第一抗原结合结构域与包含TRBC1的T细胞受体之间结合的KD的40％、30％、20％、10％、1％、0.1％或0.01％。
10.根据任一前述实施方案的多功能性分子，其中第一抗原结合结构域与淋巴瘤细胞或淋巴细胞(例如，T细胞)上的TRBC1或TRBC2或者淋巴瘤细胞(例如，T细胞)上肿瘤抗原的结合不活化淋巴瘤细胞或淋巴细胞，例如，T细胞。
11.根据任一前述实施方案的多功能性分子，其中第一抗原结合结构域与淋巴瘤细胞或淋巴细胞(例如，T细胞)上的TRBC1或TRBC2或者淋巴瘤细胞(例如，T细胞)上的肿瘤抗原的结合不明显活化淋巴瘤细胞或淋巴细胞(例如，T细胞)，例如，如通过T细胞增殖、T细胞活化标记物(例如，CD69或CD25)的表达和/或细胞因子(例如，TNFα和IFNγ)的表达所测量的。
12.根据实施方案1或2-11中任一项的多功能性分子，其中多功能性分子优先结合至淋巴瘤细胞而非非淋巴瘤细胞，任选地其中多功能性分子与淋巴瘤细胞之间的结合比多功能性分子与非淋巴瘤细胞之间的结合大10、20、30、40或50倍以上。
13.根据实施方案2-9中任一项的多功能性分子，其中：
(i)多功能性分子与表达TRBC1的淋巴细胞之间的结合比多功能性分子与不表达TRBC1的淋巴细胞之间的结合大10、20、30、40或50倍以上，或
(ii)多功能性分子与表达TRBC2的淋巴细胞之间的结合比多功能性分子与不表达TRBC2的淋巴细胞之间的结合大10、20、30、40或50倍以上。
14.根据实施方案1-13中任一项的多功能性分子，其中多功能性分子包含免疫细胞接合物，其选自NK细胞接合物、T细胞接合物、B细胞接合物、树突细胞接合物或巨噬细胞接合物。
15.根据实施方案14的多功能性分子，其中免疫细胞接合物结合至并活化免疫细胞，例如，效应细胞。
16.根据实施方案15的多功能性分子，其中免疫细胞接合物结合至但不活化免疫细胞，例如，效应细胞。
17.根据实施方案14-16中任一项的多功能性分子，其中免疫细胞接合物是T细胞接合物，例如，介导对T细胞的结合和活化的T细胞接合物，或介导对T细胞的结合但不介导其活化的T细胞接合物。
18.根据实施方案17的多功能性分子，其中T细胞接合物结合至TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRζ、ICOS、CD28、CD27、HVEM、LIGHT、CD40、4-1BB、OX40、DR3、GITR、CD30、TIM1、SLAM、CD2或CD226，例如，T细胞接合物是抗TCRβ抗体分子。
19.根据实施方案14-16中任一项的多功能性分子，其中免疫细胞接合物是NK细胞接合物，例如，介导对NK细胞的结合和活化的NK细胞接合物，或介导对NK细胞的结合但不介导其活化的NK细胞接合物。
20.根据实施方案19的多功能性分子，其中NK细胞接合物选自抗体分子，例如，结合至(例如，活化)以下的抗原结合结构域或配体：NKp30、NKp40、NKp44、NKp46、NKG2D、DNAM1、DAP10、CD16(例如，CD16a、CD16b或两者)、CRTAM、CD27、PSGL1、CD96、CD100(SEMA4D)、NKp80、CD244(也称为SLAMF4或2B4)、SLAMF6、SLAMF7、KIR2DS2、KIR2DS4、KIR3DS1、KIR2DS3、KIR2DS5、KIR2DS1、CD94、NKG2C、NKG2E或CD160，例如，NK细胞接合物是结合至(例如，活化)NKp30的抗体分子或配体。
21.根据实施方案19的多功能性分子，其中NK细胞接合物是抗体分子，例如，抗原结合结构域。
22.根据实施方案20或21中任一项的多功能性分子，其中NK细胞接合物能够接合NK细胞。
23.根据实施方案19-22中任一项的多功能性分子，其中NK细胞接合物是结合至NKp30、NKp46、NKG2D或CD16的抗体分子，例如，抗原结合结构域。
24.根据任一前述实施方案的多功能性分子，其中多功能性分子：
(i)特异性结合至NKp30、NKp46、NKG2D或CD16的表位，例如，与由如本文所述的抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子识别的表位相同或相似的表位；
(ii)表现出与如本文所述的抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子相同或相似的结合亲和力或特异性或两者；
(iii)抑制(例如，竞争性抑制)如本文所述的抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子的结合；
(iv)与如本文所述的抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子结合相同或重叠的表位；或
(v)与如本文所述的抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16分子竞争结合和/或结合相同的表位。
25.根据实施方案19-24中任一项的多功能性分子，其中抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子包含选自表16、表17、表20A或表20B、表21A或表21B、表22、表23A或表23B、表24、表25、表26、或表27的一个或多个CDR、框架区、可变结构域、重链或轻链或抗原结合结构域，或与其基本上相同的序列。
26.根据实施方案19-25中任一项的多功能性分子，其中NK细胞接合物是结合至NKp30的抗体分子，例如，抗原结合结构域。
27.根据实施方案19-26中任一项的多功能性分子，其中淋巴瘤细胞或淋巴细胞的裂解由NKp30介导。
28.根据实施方案19-27中任一项的多功能性分子，其中当在淋巴瘤细胞上不存在肿瘤抗原或淋巴细胞上不存在TRBC1或TRBC2的情况下与NK细胞一起孵育时，多功能性分子不活化NK细胞。
29.根据实施方案19-28中任一项的多功能性分子，其中当NK细胞是表达NKp30的NK细胞并且：(1)淋巴瘤细胞上还存在肿瘤抗原，或(2)淋巴细胞上还存在TRBC1或TRBC2时，多功能性分子活化NK细胞。
30.根据实施方案19-29中任一项的多功能性分子，其中当NK细胞不是表达NKp30的NK细胞并且：(1)淋巴瘤细胞上还存在肿瘤抗原，或(2)淋巴细胞上还存在TRBC1或TRBC2时，多功能性分子不活化NK细胞。
31.根据实施方案19-30中任一项的多功能性分子，其中NK细胞接合物包含本文公开的抗NKp30抗原结合结构域，例如，包含表20A或表20B、表22、表23A或表23B、表24、表25、表26、表21A或表21B、和表17的任一者中公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
32.根据实施方案19-25中任一项的多功能性分子，其中NK细胞接合物是结合至NKp46的抗体分子，例如，抗原结合结构域。
33.根据实施方案32的多功能性分子，其中淋巴瘤细胞的裂解由NKp46介导。
34.根据实施方案32或33中任一项的多功能性分子，其中当在淋巴瘤细胞上不存在肿瘤抗原的情况下与NK细胞一起孵育时，多功能性分子不活化NK细胞。
35.根据实施方案32-34中任一项的多功能性分子，其中当NK细胞是表达NKp46的NK细胞并且淋巴瘤细胞上还存在肿瘤抗原时，多功能性分子活化NK细胞。
36.根据实施方案32-35中任一项的多功能性分子，其中当NK细胞不是表达NKp46的NK细胞并且淋巴瘤细胞上还存在肿瘤抗原时，多功能性分子不活化NK细胞。
37.根据实施方案32-36中任一项的多功能性分子，其中NK细胞接合物包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6182的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6182具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
38.根据实施方案32-37中任一项的多功能性分子，其中NK细胞接合物包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6183的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6183具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
39.根据32-38的多功能性分子，其中NK细胞接合物包含scFV，该scFV包含SEQ IDNO:6181的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6181具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
40.根据实施方案19-25中任一项的多功能性分子，其中NK细胞接合物是结合至NKG2D的抗体分子，例如，抗原结合结构域。
41.根据实施方案40的多功能性分子，其中淋巴瘤细胞的裂解由NKG2D介导。
42.根据实施方案40或41中任一项的多功能性分子，其中当在淋巴瘤细胞上不存在肿瘤抗原的情况下与NK细胞一起孵育时，多功能性分子不活化NK细胞。
43.根据实施方案40-42中任一项的多功能性分子，其中当NK细胞是表达NKG2D的NK细胞并且淋巴瘤细胞上还存在肿瘤抗原时，多功能性分子活化NK细胞。
44.根据实施方案40-43中任一项的多功能性分子，其中当NK细胞不是表达NKG2D的NK细胞并且淋巴瘤细胞上还存在肿瘤抗原时，多功能性分子不活化NK细胞。
45.根据实施方案40-44中任一项的多功能性分子，其中NK细胞接合物包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6176的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6176具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
46.根据实施方案40-45中任一项的多功能性分子，其中NK细胞接合物包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6177的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6177具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
47.根据实施方案40-46中任一项的多功能性分子，其中NK细胞接合物包含scFV，该scFV包含SEQ ID NO:6175的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6175具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
48.根据实施方案40-44中任一项的多功能性分子，其中NK细胞接合物包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6179的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6179具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
49.根据实施方案40-44或48中任一项的多功能性分子，其中NK细胞接合物包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6180的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6180具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
50.根据实施方案40-44、48或49中任一项的多功能性分子，其中NK细胞接合物包含scFV，该scFV包含SEQ ID NO:6178的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6178具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
51.根据实施方案19-25中任一项的多功能性分子，其中NK细胞接合物是结合至CD16的抗体分子，例如，抗原结合结构域。
52.根据实施方案51的多功能性分子，其中淋巴瘤细胞的裂解由CD16介导。
53.根据实施方案51或52中任一项的多功能性分子，其中当在淋巴瘤细胞上不存在肿瘤抗原的情况下与NK细胞一起孵育时，多功能性分子不活化NK细胞。
54.根据实施方案51-53中任一项的多功能性分子，其中当NK细胞是表达CD16的NK细胞并且淋巴瘤细胞上还存在肿瘤抗原时，多功能性分子活化NK细胞。
55.根据实施方案51-54中任一项的多功能性分子，其中当NK细胞不是表达CD16的NK细胞并且淋巴瘤细胞上还存在肿瘤抗原时，多功能性分子不活化NK细胞。
56.根据实施方案51-55中任一项的多功能性分子，其中NK细胞接合物包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6185的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6185具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
57.根据实施方案51-56中任一项的多功能性分子，其中NK细胞接合物包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6186的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6186具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
58.根据实施方案51-57中任一项的多功能性分子，其中NK细胞接合物包含scFV，该scFV包含SEQ ID NO:6184的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6184具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
59.根据实施方案19的多功能性分子，其中NK细胞接合物是配体，任选地，该配体进一步包含免疫球蛋白恒定区，例如，Fc区。
60.根据实施方案59的多功能性分子，其中NK细胞接合物是NKp44或NKp46的配体，例如，病毒HA。
61.根据实施方案59的多功能性分子，其中NK细胞接合物是DAP10的配体，例如，NKG2D的辅助受体。
62.根据实施方案59的多功能性分子，其中NK细胞接合物是CD16的配体，例如，CD16a/b配体，例如，进一步包含抗体Fc区的CD16a/b配体。
63.根据实施方案14-16中任一项的多功能性分子，其中免疫细胞接合物介导B细胞、巨噬细胞和/或树突细胞中的一种或多种的结合或活化或两者。
64.根据实施方案63的多功能性分子，其中免疫细胞接合物包含选自CD40配体(CD40L)或CD70配体中的一种或多种的B细胞、巨噬细胞和/或树突细胞接合物；结合至CD40或CD70的抗体分子；抗OX40的抗体分子；OX40配体(OX40L)；Toll样受体的激动剂(例如，TLR4，例如，组成型活性TLR4(caTLR4)或TLR9激动剂)；41BB；CD2激动剂；CD47；或STING激动剂，或其组合。
65.根据实施方案14-16中任一项的多功能性分子，其中免疫细胞接合物是B细胞接合物，例如，CD40L、OX40L或CD70配体，或结合至OX40、CD40或CD70的抗体分子。
66.根据实施方案14-16中任一项的多功能性分子，其中免疫细胞接合物是巨噬细胞接合物，例如，CD2激动剂；CD40L；OX40L；结合至OX40、CD40或CD70的抗体分子；Toll样受体(TLR)的激动剂(例如，TLR4，例如，组成型活性TLR4(caTLR4)或TLR9激动剂)；CD47；或STING激动剂。
67.根据实施方案14-16中任一项的多功能性分子，其中免疫细胞接合物是树突细胞接合物，例如，CD2激动剂、OX40抗体、OX40L、41BB激动剂、Toll样受体激动剂或其片段(例如，TLR4，例如，组成型活性TLR4(caTLR4))、CD47激动剂或STING激动剂。
68.根据实施方案66或67的多功能性分子，其中STING激动剂包含环状二核苷酸，例如，环状二-GMP(cdGMP)、环状二-AMP(cdAMP)或其组合，任选地具有2’,5’或3’,5’磷酸酯键，例如，其中STING激动剂共价偶联至多功能性分子。
69.根据实施方案1-13中任一项的多功能性分子，其中多功能性分子包含细胞因子分子。
70.根据实施方案69的多功能性分子，其中细胞因子分子选自白介素-2(IL-2)、白介素-7(IL-7)、白介素-12(IL-12)、白介素-15(IL-15)、白介素-18(IL-18)、白介素-21(IL-21)或干扰素γ，或其片段或变体，或上述细胞因子中任一种的组合。
71.根据实施方案70的多功能性分子，其中细胞因子分子是白介素-2(IL-2)。
72.根据实施方案69-71中任一项的多功能性分子，其中细胞因子分子是单体或二聚体。
73.根据实施方案69-72中任一项的多功能性分子，其中细胞因子分子进一步包含受体二聚化结构域，例如，IL15Rα二聚化结构域。
74.根据实施方案73的多功能性分子，其中细胞因子分子(例如，IL-15)和受体二聚化结构域(例如，IL15Rα二聚化结构域)不是共价连接的，例如，是非共价缔合的。
75.根据实施方案1-13中任一项的多功能性分子，其中多功能性分子包含细胞因子抑制剂分子。
76.根据实施方案75的多功能性分子，其中细胞因子抑制剂分子是TGF-β抑制剂。
77.根据实施方案75或76中任一项的多功能性分子，其中TGF-β抑制剂抑制：(i)TGF-β1；(ii)TGF-β2；(iii)TGF-β3；(iv)(i)和(ii)；(v)(i)和(iii)；(vi)(ii)和(iii)；或(vii)(i)、(ii)和(iii)(例如，降低其活性)。
78.根据实施方案75-77中任一项的多功能性分子，其中TGF-β抑制剂包含TGF-β受体的一部分(例如，TGF-β受体的胞外结构域)，其能够抑制TGF-β或其功能性片段或变体(例如，降低其活性)。
79.根据实施方案78的多功能性分子，其中TGF-β抑制剂包含以下各项的一部分：(i)TGFBR1；(ii)TGFBR2；(iii)TGFBR3；(iv)(i)和(ii)；(v)(i)和(iii)；(vi)(ii)和(iii)；或(vii)(i)、(ii)和(iii)。
80.根据实施方案75-79中任一项的多功能性分子，其中TGF-β抑制剂包含选自表19的氨基酸序列，或与其具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。
81.根据实施方案1-13中任一项的多功能性分子，其中多功能性分子包含死亡受体信号接合物，其选自TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)分子、死亡受体分子或特异性结合至死亡受体的抗原结合结构域。
82.根据实施方案81的多功能性分子，其中死亡受体信号接合物活化表达TRBC1或TRBC2的淋巴瘤细胞(例如，T细胞)或淋巴细胞中的死亡受体信号传导，例如，并诱导所述细胞的凋亡或细胞死亡。
83.根据实施方案81或82中任一项的多功能性分子，其中死亡受体信号接合物不活化非淋巴瘤细胞和不表达TRBC1或不表达TRBC2的淋巴细胞上的死亡受体信号传导。
84.根据实施方案81-83中任一项的多功能性分子，其中死亡受体信号接合物包含TRAIL分子，例如，一种或多种TRAIL多肽或其片段。
85.根据实施方案84的多功能性分子，其中TRAIL分子特异性结合至死亡受体4(DR4)或死亡受体5(DR5)。
86.根据实施方案84或85中任一项的多功能性分子，其中TRAIL分子包含例如相对于野生型TRAIL多肽截短的TRAIL多肽。
87.根据实施方案86的多功能性分子，其中TRAIL分子至少包含对应于人TRAIL的95-281位氨基酸的残基，例如，包含对应于人TRAIL的95-281位氨基酸的残基的截短TRAIL分子。
88.根据实施方案87的多功能性分子，其中TRAIL分子包含截短的TRAIL多肽，该截短的TRAIL多肽包含例如人TRAIL的95-281位氨基酸而非人TRAIL的1-94位氨基酸。
89.根据实施方案86的多功能性分子，其中TRAIL分子至少包含对应于人TRAIL的122-281位氨基酸的残基，例如，包含对应于人TRAIL的122-281位氨基酸的残基的截短TRAIL分子。
90.根据实施方案89的多功能性分子，其中TRAIL分子包含截短的TRAIL多肽，该截短的TRAIL多肽包含人TRAIL的122-281位氨基酸，例如，而非人TRAIL的1-121位氨基酸。
91.根据实施方案84-90中任一项的多功能性分子，其中死亡受体信号接合物包含一个、两个或三个TRAIL分子。
92.根据实施方案81-83中任一项的多功能性分子，其中死亡受体信号接合物包含特异性结合至死亡受体(例如，死亡受体4(DR4)或死亡受体5(DR5))的抗原结合结构域。
93.根据实施方案92的多功能性分子，其中死亡受体信号接合物包含一个、两个或三个特异性结合至死亡受体的抗原结合结构域。
94.根据实施方案92或93中任一项的多功能性分子，其中特异性结合至死亡受体的抗原结合结构域结合至DR5。
95.根据实施方案92-94中任一项的多功能性分子，其中特异性结合至死亡受体的抗原结合结构域包含替加组单抗(tigatuzumab)、曲齐妥单抗(drozitumab)或可那木单抗(conatumumab)。
96.根据实施方案81-95中任一项的多功能性分子，其中死亡受体信号接合物包含选自表28的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。
97.根据实施方案81-96中任一项的多功能性分子，其中死亡受体信号接合物包含SEQ ID NO:6157的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。
98.根据实施方案81-96中任一项的多功能性分子，其中死亡受体信号接合物包含SEQ ID NO:6158的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。
99.根据实施方案81-96中任一项的多功能性分子，其中死亡受体信号接合物包含SEQ ID NO:6159的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。
100.根据实施方案81-96中任一项的多功能性分子，其中死亡受体信号接合物包含SEQ ID NO:6160的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。
101.根据实施方案81-96中任一项的多功能性分子，其中死亡受体信号接合物包含SEQ ID NO:6161的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。
102.根据实施方案81-96中任一项的多功能性分子，其中死亡受体信号接合物包含SEQ ID NO:6162的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。
103.根据实施方案81-96中任一项的多功能性分子，其中死亡受体信号接合物包含SEQ ID NO:6163的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。
104.根据实施方案81-96中任一项的多功能性分子，其中死亡受体信号接合物包含SEQ ID NO:6164的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。
105.根据实施方案81-96中任一项的多功能性分子，其中死亡受体信号接合物包含SEQ ID NO:6165的氨基酸序列，或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。
106.根据实施方案18的多功能性分子，其中T细胞接合物结合至TCRβ，例如，TCRβV链(TCRBV)。
107.根据实施方案106的多功能性分子，其中T细胞接合物包含结合至(例如，并在一些实施方案中活化)TCRβ的抗原结合结构域(例如，抗体分子或其片段)。
108.根据实施方案106或107中任一项的多功能性分子，其中T细胞接合物包含例如特异性结合至人TCRβV链(TCRβV)的抗TCRβV抗体分子。
109.根据实施方案106-108中任一项的多功能性分子，其中T细胞接合物不结合至表达TRBC1或TRBC2的淋巴瘤细胞或淋巴细胞。
110.根据实施方案106-108中任一项的多功能性分子，其中T细胞接合物能够结合至或结合至表达TRBC1或TRBC2的淋巴瘤细胞或淋巴细胞。
111.根据实施方案106-110中任一项的多功能性分子，其中T细胞接合物不活化表达TRBC1或TRBC2的淋巴瘤细胞或淋巴细胞。
112.根据实施方案106-111中任一项的多功能性分子，其中T细胞接合物包含特异性结合至表29的TCRβV亚家族或亚家族成员的抗TCRβV抗体分子。
113.根据实施方案112的多功能性分子，其中抗TCRβV抗体分子特异性结合至TCRβV6，例如，TCRβV6亚家族，其包含：TCRβV6-4*01、TCRβV6-4*02、TCRβV6-9*01、TCRβV6-8*01、TCRβV6-5*01、TCRβV6-6*02、TCRβV6-6*01、TCRβV6-2*01、TCRβV6-3*01或TCRβV6-1*01。
114.根据实施方案113的多功能性分子，其中抗TCRβV抗体分子包含表30中提供的一个或多个CDR、框架区或可变重链和/或轻链区，或与其具有至少约93％、95％或99％序列同一性。
115.根据实施方案112的多功能性分子，其中抗TCRβV抗体分子特异性结合至TCRβV12，例如，TCRβV12亚家族，其包含：TCRβV12-4*01、TCRβV12-3*01或TCRβV12-5*01。
116.根据实施方案115的多功能性分子，其中抗TCRβV抗体分子包含表31中提供的一个或多个CDR、框架区或可变重链和/或轻链区，或与其具有至少约93％、95％或99％序列同一性。
117.根据实施方案1-13中任一项的多功能性分子，其中多功能性分子包含基质修饰部分。
118.根据实施方案117的多功能性分子，其中基质修饰部分导致以下中的一种或多种：减少基质或胞外基质(ECM)组分的水平或产生；减少肿瘤纤维化；增加间质肿瘤转运；改善肿瘤灌注；扩张肿瘤微脉管系统；降低肿瘤中的间质液压力(IFP)；或者减少或增强药剂(例如，癌症治疗剂或细胞疗法)进入肿瘤或肿瘤脉管系统的渗透或扩散。
119.根据实施方案118的多功能性分子，其中减少的基质或ECM组分选自糖胺聚糖或胞外蛋白，或其组合。
120.根据实施方案1-119中任一项的多功能性分子，其中多功能性分子包含:
(i)免疫细胞接合物(例如，T细胞接合物、NK细胞接合物、B细胞接合物、树突细胞接合物或巨噬细胞接合物)和细胞因子分子，
(ii)免疫细胞接合物(例如，T细胞接合物、NK细胞接合物、B细胞接合物、树突细胞接合物或巨噬细胞接合物)和细胞因子抑制剂分子，
(iii)免疫细胞接合物(例如，T细胞接合物、NK细胞接合物、B细胞接合物、树突细胞接合物或巨噬细胞接合物)和死亡受体信号接合物，
(iv)免疫细胞接合物(例如，T细胞接合物、NK细胞接合物、B细胞接合物、树突细胞接合物或巨噬细胞接合物)和基质修饰部分，
(v)细胞因子分子和基质修饰部分，
(vi)细胞因子分子和死亡受体信号接合物，
(vii)细胞因子抑制剂分子和基质修饰部分，
(viii)细胞因子抑制剂分子和死亡受体信号接合物，
(ix)免疫细胞接合物(例如，T细胞接合物、NK细胞接合物、B细胞接合物、树突细胞接合物或巨噬细胞接合物)、细胞因子分子、死亡受体信号接合物和基质修饰部分，或
(x)免疫细胞接合物(例如，T细胞接合物、NK细胞接合物、B细胞接合物、树突细胞接合物或巨噬细胞接合物)、细胞因子抑制剂分子、死亡受体信号接合物和基质修饰部分。
121.根据实施方案1-120中任一项的多功能性分子，其中多功能性分子包含以下构型:
A,B-[二聚化模块]-C,-D，其中：
(a)二聚化模块包含免疫球蛋白恒定结构域(例如，重链恒定结构域(例如，同源二聚体或异源二聚体重链恒定区，例如，Fc区))或免疫球蛋白可变区的恒定结构域(例如，Fab区)；并且
(b)A、B、C和D独立地为：不存在；(i)优先结合至TRBC1或TRBC2的抗原结合结构域；(ii)免疫细胞接合物，其选自T细胞接合物、NK细胞接合物、B细胞接合物、树突细胞接合物或巨噬细胞接合物；(iii)细胞因子分子或细胞因子抑制剂分子；(iv)死亡受体信号接合物；或(v)基质修饰部分，条件是：
A、B、C和D中的至少一个、两个或三个包含优先结合至TRBC1或TRBC2的抗原结合结构域，并且剩余的A、B、C和D中的任一个不存在，或包含免疫细胞接合物、细胞因子分子、细胞因子抑制剂分子、死亡受体信号接合物或基质修饰部分中的一种。
122.根据实施方案121的多功能性分子，其中：
(1)A包含优先结合至包含TRBC1或TRBC2的T细胞受体的抗原结合结构域，并且B、C或D包含免疫细胞接合物，例如，T细胞接合物，例如，抗TCRβV抗体分子；
(2)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的抗原结合结构域，并且B、C或D包含免疫细胞接合物，例如，NK细胞接合物，例如，抗NKp30或抗NKp46抗体分子；
(3)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的抗原结合结构域，并且B、C或D包含细胞因子分子；
(4)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的抗原结合结构域，并且B、C或D包含细胞因子抑制剂分子；
(5)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的抗原结合结构域，并且B、C或D包含死亡受体信号接合物；
(6)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的抗原结合结构域，并且B、C或D包含基质修饰部分；
(7)A包含结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，B包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且C或D包含免疫细胞接合物，例如，T细胞接合物，例如，抗TCRβV抗体分子；
(8)A包含结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，B包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且C或D包含免疫细胞接合物，例如，NK细胞接合物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子；
(9)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，B包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且C或D包含细胞因子分子；
(10)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，B包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且C或D包含细胞因子抑制剂分子；
(11)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，B包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且C或D包含死亡受体信号接合物；
(12)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，B包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且C或D包含基质修饰部分；
(13)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，C包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且B或D包含免疫细胞接合物，例如，T细胞接合物，例如，抗TCRβV抗体分子；
(14)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，C包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且B或D包含免疫细胞接合物，例如，NK细胞接合物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子；
(15)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，C包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且B或D包含细胞因子分子；
(16)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，C包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且B或D包含细胞因子抑制剂分子；
(17)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，C包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且B或D包含死亡受体信号接合物；
(18)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，C包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且B或D包含基质修饰部分；
(19)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，并且B、C或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，NK细胞接合物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，以及(b)细胞因子分子；
(20)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，并且B、C或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，NK细胞接合物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，以及(b)细胞因子抑制剂分子；
(21)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，并且B、C或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，NK细胞接合物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，以及(b)死亡受体信号接合物；
(22)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，并且B、C或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，NK细胞接合物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，以及(b)基质修饰部分；
(23)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，并且B、C或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，T细胞接合物，例如，抗TCRβV抗体分子，以及(b)细胞因子分子；
(24)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，并且B、C或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，T细胞接合物，例如，抗TCRβV抗体分子，以及(b)细胞因子抑制剂分子；
(25)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，并且B、C或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，T细胞接合物，例如，抗TCRβV抗体分子，以及(b)死亡受体信号接合物；
(26)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，并且B、C或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，T细胞接合物，例如，抗TCRβV抗体分子，以及(b)基质修饰部分；
(27)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，并且B、C或D包含(a)细胞因子分子和(b)基质修饰部分；
(28)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，并且B、C或D包含(a)细胞因子分子和(b)死亡受体信号接合物；
(29)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，并且B、C或D包含(a)细胞因子抑制剂分子和(b)基质修饰部分；
(30)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，并且B、C或D包含(a)细胞因子抑制剂分子和(b)死亡受体信号接合物；
(31)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，并且B、C或D包含(a)死亡受体信号接合物和(b)基质修饰部分；
(32)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，B包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且C或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，NK细胞接合物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，以及(b)细胞因子分子；
(33)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，B包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且C或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，NK细胞接合物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，以及(b)细胞因子抑制剂分子；
(34)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，B包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且C或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，NK细胞接合物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，以及(b)死亡受体信号接合物；
(35)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，B包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且C或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，NK细胞接合物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，以及(b)基质修饰部分；
(36)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，B包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且C或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，T细胞接合物，例如，抗TCRβV抗体分子，以及(b)细胞因子分子；
(37)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，B包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且C或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，T细胞接合物，例如，抗TCRβV抗体分子，以及(b)细胞因子抑制剂分子；
(38)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，B包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且C或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，T细胞接合物，例如，抗TCRβV抗体分子，以及(b)死亡受体信号接合物；
(39)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，B包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且C或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，T细胞接合物，例如，抗TCRβV抗体分子，以及(b)基质修饰部分；
(40)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，B包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且C或D包含(a)细胞因子分子和(b)基质修饰部分；例如CD137；
(41)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，B包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且C或D包含(a)细胞因子分子和(b)死亡受体信号接合物；
(42)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，B包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且C或D包含(a)细胞因子抑制剂分子和(b)基质修饰部分；
(43)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，B包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且C或D包含(a)细胞因子抑制剂分子和(b)死亡受体信号接合物；
(44)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，B包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且C或D包含(a)基质修饰部分和(b)死亡受体信号接合物；
(45)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，C包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且B或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，NK细胞接合物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，以及(b)细胞因子分子；
(46)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，C包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且B或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，NK细胞接合物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，以及(b)细胞因子抑制剂分子；
(47)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，C包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且B或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，NK细胞接合物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，以及(b)死亡受体信号接合物；
(48)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，C包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且B或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，NK细胞接合物，例如，抗NKp30、抗NKp46、抗NKG2D或抗CD16抗体分子，以及(b)基质修饰部分；
(49)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，C包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且B或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，T细胞接合物，例如，抗TCRβV抗体分子，以及(b)细胞因子分子；
(50)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，C包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且B或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，T细胞接合物，例如，抗TCRβV抗体分子，以及(b)细胞因子抑制剂分子；
(51)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，C包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且B或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，T细胞接合物，例如，抗TCRβV抗体分子，以及(b)死亡受体信号接合物；
(52)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，C包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且B或D包含(a)免疫细胞接合物，例如，T细胞接合物，例如，抗TCRβV抗体分子，以及(b)基质修饰部分；
(53)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，C包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且B或D包含(a)细胞因子分子和(b)基质修饰部分；
(54)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，C包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且B或D包含(a)细胞因子分子和(b)死亡受体信号接合物；
(55)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，C包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且B或D包含(a)细胞因子抑制剂分子和(b)基质修饰部分；
(56)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，C包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且B或D包含(a)细胞因子抑制剂分子和(b)死亡受体信号接合物；或
(57)A包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域，C包含优先结合至TRBC1或TRBC2的第二抗原结合结构域，并且B或D包含(a)基质修饰部分和(b)死亡受体信号接合物。
123.根据实施方案121或122的多功能性分子，其中二聚化模块包含一个或多个免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)，该免疫球蛋白链恒定区包含以下中的一种或多种：成对的空腔-突起(“杵-臼”)、静电相互作用或链交换。
124.根据实施方案123的多功能性分子，其中一个或多个免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)在选自例如人IgG1 Fc区的347、349、350、351、366、368、370、392、394、395、397、398、399、405、407或409中的一个或多个位置处包含氨基酸取代，任选地其中一个或多个免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)包含选自以下的氨基酸取代：T366S、L368A或Y407V(例如，对应于空腔或臼)，或T366W(例如，对应于突起或杵)或其组合。
125.根据实施方案1-124中任一项的多功能性分子，其进一步包含接头，例如，在以下中的一个或多个之间的接头：抗原结合结构域和免疫细胞接合物、抗原结合结构域和细胞因子分子、抗原结合结构域和基质修饰部分、免疫细胞接合物和细胞因子分子、免疫细胞接合物和基质修饰部分、细胞因子分子和基质修饰部分、抗原结合结构域和二聚化模块、免疫细胞接合物和二聚化模块、细胞因子分子和二聚化模块，或基质修饰部分和二聚化模块。
126.根据实施方案125的多功能性分子，其中接头选自：可切割接头、不可切割接头、肽接头、柔性接头、刚性接头、螺旋接头或非螺旋接头。
127.根据实施方案125或126的多功能性分子，其中接头是肽接头。
128.根据实施方案127的多功能性分子，其中肽接头包含Gly和Ser。
129.根据实施方案128的多功能性分子，其中肽接头包含选自SEQ ID NO:7249-7252或75-78的氨基酸序列。
130.一种多功能性分子，其包含：
(i)优先结合至TRBC1的第一抗原结合结构域，以及
(ii)NK细胞接合物，例如，抗NKp30抗体分子、抗NKp46抗体分子、抗NKG2D抗体分子或抗CD16抗体分子。
131.根据实施方案130的多功能性分子，其中NK细胞接合物包含抗NKp30抗体分子。
132.根据实施方案130的多功能性分子，其中NK细胞接合物包含抗NKp46抗体分子。
133.根据实施方案130的多功能性分子，其中NK细胞接合物包含抗NKG2D抗体分子。
134.根据实施方案130的多功能性分子，其中NK细胞接合物包括抗CD16抗体分子。
135.一种多功能性分子，其包含：
(i)优先结合至TRBC1的第一抗原结合结构域，以及
(ii)死亡受体信号接合物。
136.一种多功能性分子，其包含：
(i)优先结合至TRBC1的第一抗原结合结构域，以及
(ii)T细胞接合物，例如，结合至TCRβV链(TCRBV)的抗原结合结构域。
137.一种多功能性分子，其包含：
(i)优先结合至TRBC1的第一抗原结合结构域，以及
(ii)细胞因子抑制剂分子，例如，TGF-β抑制剂。
138.根据实施方案1或3-137中任一项的多功能性分子，其中多功能性分子单价结合至TRBC1、TRBC2或肿瘤抗原。
139.根据实施方案1或3-137中任一项的多功能性分子，其中多功能性分子多价(例如，二价、三价、四价、五价、六价、七价、八价、九价或十价)结合至TRBC1、TRBC2或肿瘤抗原。
140.根据实施方案2-137中任一项的多功能性分子，其中多功能性分子单价结合至TRBC1、TRBC2或表达TRBC1或TRBC2的淋巴细胞。
141.根据实施方案2-137中任一项的多功能性分子，其中多功能性分子多价(例如，二价、三价、四价、五价、六价、七价、八价、九价或十价)结合至表达TRBC1或TRBC2的淋巴细胞。
142.根据任一前述实施方案的多功能性分子，其中多功能性分子例如经由免疫细胞接合物单价结合至免疫细胞。
143.根据实施方案1-141中任一项的多功能性分子，其中多功能性分子例如经由免疫细胞接合物多价(例如，二价、三价、四价、五价、六价、七价、八价、九价或十价)结合至免疫细胞。
144.根据任一前述实施方案的多功能性分子，其进一步包含介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的重链恒定区，例如，Fc区。
145.根据任一前述实施方案的多功能性分子，其进一步包含介导抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)的重链恒定区，例如，Fc区。
146.根据实施方案145的多功能性分子，其中结合TRBC1或TRBC2的第一抗原结合结构域包含IgG2重链恒定区，或者免疫细胞接合物、细胞因子抑制剂分子或死亡受体信号接合物包含IgG2重链恒定区。
147.根据任一前述实施方案的多功能性分子，其进一步包含(例如，经由C1q)介导补体依赖性细胞毒性的重链恒定区，例如，Fc区。
148.一种结合TRBC1的抗体分子，其包含选自表1、表2A或表2B、表4、表7、表8、表16的一个或多个CDR、框架区、可变结构域、重链或轻链或抗原结合结构域，或与其基本上相同的序列。
149.根据实施方案148的抗体分子，其包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:215的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:216的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:217的VHFWR3氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:218的VHFWR4氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
150.根据实施方案148或149中任一项的抗体分子，其包含轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:238的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:239的VLFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:240的VLFWR3氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，或SEQ ID NO:241的VLFWR4氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
151.根据实施方案148-150中任一项的抗体分子，其中抗体分子包含VH，该VH包含SEQ ID NO:253的氨基酸序列(或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
152.根据实施方案148-151中任一项的抗体分子，其中抗体分子包含VL，该VL包含SEQ ID NO:258的氨基酸序列(或与其具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
153.一种核酸分子，其编码实施方案1-152中任一项的多功能性分子或抗体分子。
154.一种载体，例如，表达载体，其包含实施方案153的核酸分子。
155.一种宿主细胞，其包含实施方案153的核酸分子或实施方案154的载体。
156.一种制备例如产生实施方案1-152中任一项的多功能性分子或抗体分子的方法，其包括在合适的条件(例如，适于基因表达和/或同源二聚化或异源二聚化的条件)下，培养实施方案155的宿主细胞。
157.一种药物组合物，其包含实施方案1-152中任一项的多功能性分子，以及药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂。
158.一种治疗癌症或恶化前病况的方法，其包括向有需要的对象施用实施方案1-152中任一项的多功能性分子，其中多功能性分子以有效治疗癌症的量施用。
159.根据实施方案158的方法，其进一步包括鉴定、评估或选择需要治疗的对象，其中鉴定、评估或选择包括确定(例如，直接确定或间接确定，例如，获得信息关于)对象是否具有表达包含TRBC1或TRBC2的T细胞受体的癌细胞。
160.根据实施方案159的方法，其进一步包括，响应于确定对象具有表达包含TRBC1的T细胞受体的癌细胞：
任选地，选择用包含结合至包含TRBC1的T细胞受体的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的对象，并且
施用包含结合至包含TRBC1的T细胞受体的抗原结合结构域的多功能性分子。
161.根据实施方案160的方法，其进一步包括不施用包含结合至包含TRBC2的T细胞受体的抗原结合结构域的多功能性分子。
162.一种治疗癌症(例如，淋巴瘤或白血病)的方法，其包括：
响应于确定对象具有表达包含TRBC1的T细胞受体的癌细胞，向有需要的对象施用实施方案1-152中任一项的多功能性分子，其中多功能性分子以有效治疗癌症的量施用。
163.根据实施方案162的方法，其进一步包括，响应于确定对象具有表达包含TRBC2的T细胞受体的癌细胞：
任选地，选择用包含结合至包含TRBC2的T细胞受体的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的对象，并
施用包含结合至包含TRBC2的T细胞受体的抗原结合结构域的多功能性分子。
164.根据实施方案163的方法，其进一步包括不施用包含结合至包含TRBC1的T细胞受体的抗原结合结构域的多功能性分子。
165.根据实施方案158-162中任一项的方法，其中对象具有表达包含TRBC1的T细胞受体的癌细胞。
166.根据实施方案158、159、163或164中任一项的方法，其中对象具有表达包含TRBC2的T细胞受体的癌细胞。
167.一种鉴定需要使用实施方案1-152中任一项的多功能性分子或抗体分子治疗癌症的对象的方法，其包括确定(例如，直接确定或间接确定，例如，获得信息关于)对象是否具有表达包含TRBC1或TRBC2的T细胞受体的癌细胞，其中：
响应于确定对象具有表达包含TRBC1的T细胞受体的癌细胞，将对象鉴定为使用包含结合至TRBC1的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的候选者，并且任选地不作为使用包含结合至TRBC2的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的候选者，以及响应于确定对象具有表达包含TRBC2的T细胞受体的癌细胞，将对象鉴定为使用包含结合至TRBC2的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的候选者，并且任选地不作为使用包含结合至TRBC1的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的候选者。
168.根据实施方案167的方法，其进一步包括：
响应于将对象鉴定为使用包含结合至TRBC1的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的候选者，用(例如，向对象施用)包含结合至TRBC1的抗原结合结构域的多功能性分子来治疗对象，或者响应于将对象鉴定为使用包含结合至TRBC2的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的候选者，用(例如，向对象施用)包含结合至TRBC2的抗原结合结构域的多功能性分子来治疗对象。
169.一种评估需要治疗癌症(例如，淋巴瘤)的对象的方法，其包括确定(例如，直接确定或间接确定，例如，获得信息关于)对象是否具有表达包含TRBC1或TRBC2的T细胞受体的癌细胞。
170.根据实施方案169的方法，其进一步包括响应于评估，用(例如，向对象施用)包含结合至TRBC1的抗原结合结构域的多功能性分子或包含结合至TRBC2的抗原结合结构域的多功能性分子来治疗对象。
171.根据实施方案158-170中任一项的方法，其中癌症是血液癌症或恶化前病况。
172.根据实施方案171的方法，其中血液癌症是白血病或淋巴瘤。
173.根据实施方案172的方法，其中血液癌症选自白血病(例如，急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓样白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、毛细胞白血病、急性单核细胞性白血病(AMoL)、慢性骨髓单核细胞性白血病(CMML)、幼年型粒-单核细胞白血病(JMML)或大颗粒淋巴细胞性白血病)、淋巴瘤(例如，AIDS相关淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(例如，典型霍奇金淋巴瘤或结节性淋巴细胞主导型霍奇金淋巴瘤)、蕈样真菌病、非霍奇金淋巴瘤(例如，B细胞非霍奇金淋巴瘤(例如，伯基特淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B成淋巴细胞性淋巴瘤或套细胞淋巴瘤)或T细胞非霍奇金淋巴瘤(蕈样真菌病、间变性大细胞淋巴瘤或前体T成淋巴细胞性淋巴瘤))、原发性中枢神经系统淋巴瘤、塞扎里综合征、瓦氏巨球蛋白血症)、慢性骨髓增生性赘生物、朗格汉斯细胞组织细胞增生症、多发性骨髓瘤/浆细胞赘生物、骨髓增生异常综合征或骨髓增生异常/骨髓增生性赘生物。
174.根据实施方案172的方法，其中淋巴瘤选自获得性免疫缺陷综合征(AIDS)相关淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、中枢神经系统(CNS)淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、成淋巴细胞性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)(例如，肝脾T细胞淋巴瘤(HSGDTCL)、皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤或肠病相关T细胞淋巴瘤)、转化滤泡性和转化粘膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤(蕈样真菌病和塞扎里综合征)、滤泡性淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤/瓦氏巨球蛋白血症、边缘区B细胞淋巴瘤、胃粘膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小细胞淋巴细胞性淋巴瘤(CLL/SLL)、结外T/NK细胞淋巴瘤(鼻型)或间变性大细胞淋巴瘤(例如，原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤或全身性间变性大细胞淋巴瘤)。
175.根据实施方案158-170中任一项的方法，癌症是实体瘤癌。
176.根据实施方案158-175中任一项的方法，其进一步包括施用第二种治疗性处理。
177.根据实施方案176的方法，其中第二种治疗性处理包括治疗性药剂(例如，化疗药剂、生物药剂、激素疗法)、放射或手术。
178.根据实施方案177的方法，其中治疗性药剂选自：化疗药剂或生物药剂。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员的通常理解相同的含义。尽管在本发明的实践或测试中可以使用与本文所述的方法和材料相似或等效的那些，但下文描述了合适的方法和材料。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献通过引用以它们的整体并入。在冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。另外，材料、方法和实施例仅是说明性的，而非限制性的。
本发明的其他特征和优点将从以下详细描述和权利要求中显而易见。
附图说明
图1A-1D是结合至TRBC1和NKp30的多特异性抗体(例如，双特异性抗体)的示例性形式和构型的示意图。图1A描绘了与抗NKp30scFv融合的抗TRBC1抗体。抗TRBC1抗体包含两条重链和两条轻链。抗NKp30 scFv与抗TRBC1抗体一条重链的N-末端融合。图1B描绘了包含抗TRBC1 Fab、抗NKp30 scFv和Fc二聚体的抗体分子。Fc二聚体包含两条Fc链。抗TRBC1 Fab重链的C-末端与一条Fc链的N-末端融合。抗NKp30 scFv与另一条Fc链的N-末端融合。图1C和1D描绘了与两个抗NKp30 scFv融合的抗TRBC1抗体。抗TRBC1抗体包含两条重链和两条轻链。在图1C中，两个抗NKp30 scFv分别与抗TRBC1抗体的两条轻链的C-末端融合。在图1D中，两个抗NKp30 scFv分别与抗TRBC1抗体的两条重链的N-末端融合。
图2A-2F是包含结合至TRBC1和TRAIL分子(例如，三聚体、二聚体或单体TRAIL分子)的部分的抗体分子的示例性形式和构型的示意图。图2A和2D描绘了包含抗TRBC1 Fab、三聚体TRAIL分子和Fc二聚体的抗体分子。图2B和2E描绘了包含抗TRBC1 Fab、二聚体TRAIL分子和Fc二聚体的抗体分子。图2C和2F描绘了包含抗TRBC1 Fab、单体TRAIL分子和Fc二聚体的抗体分子。Fc二聚体包含两条Fc链。抗TRBC1 Fab重链的C-末端与一条Fc链的N-末端融合。三聚体、二聚体或单体TRAIL分子与另一条Fc链的N-末端融合。在一些实施方案中，图2A所示的抗体分子包含SEQ ID NO:6169、6167和6159的氨基酸序列。在一些实施方案中，图2B所示的抗体分子包含SEQ ID NO:6169、6167和6158的氨基酸序列。在一些实施方案中，图2C所示的抗体分子包含SEQ ID NO:6169、6167和6157的氨基酸序列。在一些实施方案中，图2D所示的抗体分子包含SEQ ID NO:6169、6167和6162的氨基酸序列。在一些实施方案中，图2E所示的抗体分子包含SEQ ID NO:6169、6167和6161的氨基酸序列。在一些实施方案中，图2F所示的抗体分子包含SEQ ID NO:6169、6167和6160的氨基酸序列。
图3A和3B是结合至TRBC1和DR5的多特异性抗体(例如，双特异性抗体)的示例性形式和构型的示意图。图3A描绘了包含抗TRBC1Fab、抗DR5 scFv和Fc二聚体的多特异性抗体(例如，双特异性抗体)。Fc二聚体包含两条Fc链。抗TRBC1 Fab重链的C-末端与一条Fc链的N-末端融合。抗DR5 scFv与另一条Fc链的N-末端融合。图3B描绘了与两个抗DR5 scFv融合的抗TRBC1抗体。抗TRBC1抗体包含两条重链和两条轻链。两个抗DR5 scFv分别与抗TRBC1抗体的两条轻链的C-末端融合。在一些实施方案中，图3A所示的多特异性抗体包含SEQ IDNO:6169、6167和6163的氨基酸序列。在一些实施方案中，图3B所示的多特异性抗体包含SEQ IDNO:6170和6168的氨基酸序列。
图4A-4B示出了H131来源小鼠VH和VL框架1、CDR1、框架2、CDR2、框架3、CDR3和框架4区与它们各自的人源化序列的比对。KabatCDR以粗体示出，Chothia CDR以斜体示出，组合CDR以方框示出。反向突变的框架位置用双下划线表示。图4A示出了鼠H131(SEQ IDNO:1)和人源化H131(SEQ ID NO:9)的VH序列。图4B示出了鼠H131(SEQ ID NO:2)和人源化H131(SEQID NO:10和SEQ ID NO:11)的VL序列。
图5A-5B示出了16G8来源小鼠VH和VL框架1、CDR1、框架2、CDR2、框架3、CDR3和框架4区与它们各自的人源化序列的比对。KabatCDR以粗体示出，Chothia CDR以斜体示出，组合CDR以方框示出。反向突变的框架位置用双下划线表示。图5A示出了鼠16G8(SEQ IDNO:15)和人源化16G8(SEQ ID NO:23-25)的VH序列。图5B示出了鼠16G8(SEQ ID NO:16)和人源化16G8(SEQ ID NO:26-30)的VL序列。
图6描绘了TCRBV基因家族和亚家族的系统发生树，其中相应的抗体被绘图。亚家族身份如下：亚家族A：TCRβV6；亚家族B：TCRβV10；亚家族C：TCRβV12；亚家族D：TCRβV5；亚家族E：TCRβV7；亚家族F：TCRβV11；亚家族G：TCRβV14；亚家族H：TCRβV16；亚家族I：TCRβV18；亚家族J：TCRβV9；亚家族K：TCRβV13；亚家族L：TCRβV4；亚家族M：TCRβV3；亚家族N：TCRβV2；亚家族O：TCRβV15；亚家族P：TCRβV30；亚家族Q：TCRβV19；亚家族R：TCRβV27；亚家族S：TCRβV28；亚家族T：TCRβV24；亚家族U：TCRβV20；亚家族V：TCRβV25；以及亚家族W：TCRβV29亚家族。亚家族成员在本文标题为“TCRβV”的部分中详细描述。
图7是显示JOVI.1和人源化JOVI.1与人TRBC1结合的图。
图8是一组显示JOVI.1Fab(左)和人源化JOVI.1Fab与人TRBC1(右)结合的图。
图9是显示NKp30抗体与NK92细胞结合的图。数据计算为百分比-AF747阳性群体。
图10是显示NKp30抗体活化NK92细胞的图。使用仓鼠抗NKp30mAb生成数据。
图11A-11E是抗TRBC1/NKp30抗体和对照分子的示意图。
图12A-12B是显示抗体与表达Fcγ受体的THP1细胞结合的图。
图13A-13D是显示在与所示抗体一起孵育之后T细胞活化的图。图13A是显示分裂的CD4+％的图。图13B是显示分裂的CD8+％的图。图13C是显示CD4+的CD69-CD25+％的图。图13D是显示CD8+的CD69-CD25+％的图。
图14A-14D是抗TRBC1/NKp30抗体的示意图。在图14B和14D中，“460”表示基于BIM0460的Fab；“578”表示基于BJM0578的Fab；“407”表示基于BJM0407的scFv(图18B)或Fab(图14D)；“411”表示基于BJM0411的scFv(图18B)或Fab(图14D)；“N297A”表示抗体在Fc区中包含N297A突变。
图15A-15D是显示所示抗体与NK细胞系KHYG-1(图15A)和TRBC1+Jurkat细胞(图15B)结合的图。图15C是提供关于测试的抗体信息的表格。图15D是提供与KHYG-1细胞或TRBC1+Jurkat细胞结合的EC50的表格。
图16A-16C是显示在NK-92效应细胞存在下TRBC1+靶细胞杀伤的图。靶细胞是TRBC1+Jurkat细胞(图16A)或H9细胞(图16B)。TRBC2+HPB-ALL细胞用作对照(图16C)。
图17A-17C是显示在原代NK细胞存在下TRBC1+靶细胞杀伤的图。靶细胞是TRBC1+Jurkat细胞(图17A)或H9细胞(图17B)。TRBC2+HPB-ALL细胞用作对照(图17C)。
图18A-18C是显示在抗TRBC1/NKp30抗体存在下，与TRBC1+Jurkat细胞共培养之后NK细胞活化的图。图18A示出了CD69+CD107a+NK细胞％。图18B示出了IFNγ的水平。图18C示出了TNFα的水平。
图19A-19B是显示在TRBC1+Jurkat细胞是否存在下由NK细胞产生的细胞因子水平的图。图19A示出了IFNγ的水平。图19B示出了TNFα的水平。
图20是显示在TRBC1+Jurkat细胞存在下由所示抗体诱导的NK细胞死亡％的图。
图21A和21B分别是单臂抗TRBC1抗体和双特异性抗TRBC1/NKp30抗体的示意图。
图22A-22D是显示在所示抗体存在下NK细胞介导的TRBC1+PDX杀伤的图。
图23是一组显示在所示抗体存在下TRBC1+Jurkat细胞杀伤的图。测试的NK细胞分离自健康供体(上图)或PTCL患者(下图)。
图24是一组显示在图23所示的杀伤测定期间NK细胞活化的图。测试的NK细胞分离自健康供体(上图)或PTCL患者(下图)。
图25A和25B是一组显示在所示抗体存在下与Jurkat细胞共培养时NK细胞的IFNγ(图25A)或TNFα(图25B)分泌水平的图。测试的NK细胞分离自健康供体(上图)或PTCL患者(下图)。
图26A-26C是测量在ELISA中与NKp30结合的图。图26A示出了B7-H6与NKp30的结合。图26B示出了BJM1042与NKp30的结合。图26C示出了在不同浓度的所示抗体存在下B7-H6与NKp30的结合。
图27A-27C是来自体内TRBC1+肿瘤研究的图。图27A示出了研究设计。图27B示出了在所示治疗下的肿瘤体积。图27C是显示治疗后第3天肿瘤体积变化％的水图。在图27C中从左至右示出了以下治疗组：无NK，PBS；无NK，TRBC1xNKp30；NK，PBS；NK，TRBC1；NK，NKp30；以及NK+1mpK BJM1042。
图28A-28B是来自体内TRBC2+肿瘤研究的图。图28A示出了研究设计。图28B示出了在所示治疗下的肿瘤体积。
图29A-29D是抗TRBC1/NKp30抗体的示意图。
图30A-30D是抗TRBC2/NKp30抗体的示意图。
图31A-31B是抗体设计的示意图。图31A是包含抗TRBC2 Fab和抗NKp30 ScFv臂的双特异性抗体的示意图。图31B示出了与图31A相似的设计，其缺乏NK-p30结合链。
图32A-32C是显示抗TRBC2抗体与表达人TRBC2、人TRBC1或人NK-p30的细胞选择性地结合的代表性数据。图32A示出了与TRBC2+HPB-ALL细胞的结合；图32B示出了与NKp30+KHYG-1细胞的结合；图32C示出了与TRBC1+Jurkat细胞的结合。
图33A-33D是显示TRBC2表达细胞系(TRBC2+)而非TRBC1(TRBC1+)表达细胞系的选择性地杀伤的代表性数据。图33A，显示TRBC2xNKp30双特异性分子(bispecifics)在体外用KHYG-1NK细胞作为效应物选择性地杀伤TRBC2+HPB-ALL细胞的数据。图33B，显示TRBC2xNKp30双特异性分子在体外不杀伤TRBC1+Jurkat细胞的数据。图33C，显示TRBC2xNKp30双特异性分子在体外用原代NK细胞作为效应物选择性地杀伤TRBC2+HPB-ALL细胞的数据。图33D，显示TRBC2xNKp30双特异性分子在体外不用原代NK细胞杀伤TRBC1+Jurkat细胞的数据。
图34A-34B是显示TRBC2xNKp30双特异性分子在体外活化与TRBC2+细胞共培养的原代NK细胞的代表性数据。图34A，显示在与TRBC2+HPB-ALL细胞的共培养物中原代NK细胞活化的数据。图34B，显示在与TRBC1+Jurkat细胞的共培养物中缺乏原代NK细胞活化的数据。
图35A-35D是显示TRBC2xNKp30双特异性抗体在TRBC1+细胞和原代NK细胞的共培养物中诱导NK活化状态相关细胞因子的分泌的代表性数据。图35A示出了在体外HPB-ALL细胞和原代NK细胞的共培养物中增加的IFNγ分泌。图35B示出了在体外Jurkat细胞和原代NK细胞的共培养物中缺乏IFNγ分泌。图35C示出了在体外HPB-ALL细胞和原代NK细胞的共培养物中增加的TNFα分泌。图35D示出了在体外Jurkat细胞和原代NK细胞的共培养物中缺乏TNFα分泌。
图36A-36C是显示TRBC2xNKp30双特异性抗体靶向杀伤患者来源的异种移植细胞的代表性数据。图36A，显示TRBC2xNKp30双特异性分子用KHYG-1细胞作为效应物选择性地杀伤来源于成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)患者的TRBC2+细胞(PDX2)的数据。图36B，显示TRBC2xNKp30双特异性分子在体外用KHYG-1细胞作为效应物选择性地杀伤来源于肝脾T细胞淋巴瘤(HTCL)患者的TRBC2+细胞(PDX5)的数据。图35C，显示TRBC2xNKp30双特异性分子在体外不用KHYG-1细胞作为效应物杀伤来源于成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)患者的TRBC1+细胞(PDX3)的数据。
图37是显示使用如图所示的靶特异性双特异性抗体从人PBMC中特异性缺失TRBC1+对TRBC2+T细胞的代表性数据。在治疗后第4天收集数据。
图38是显示在体内使用TRBC1xNKp30或TRBC2xNKp30双特异性抗体从人PBMC中特异性耗尽TRBC1+对TRBC2+T细胞的代表性数据。在第0天对小鼠施用人PBMC，并用TRBC1xNKp30或TRBC2xNKp30抗体进行治疗，在第7天采集全血。
图39是显示在移植有人NK细胞的TRBC2+HPB-ALL来源的异种移植小鼠模型中显著抗肿瘤活性的代表性数据。
具体实施方案
本文公开了包括多个(例如，两个或更多个)功能(或结合特异性)的多功能性分子(本文也称为“多特异性分子”)，其包含(i)优先结合至TRBC1或TRBC2的抗原结合结构域，以及(ii)以下中的一种、两种或全部：(a)免疫细胞接合物，其选自T细胞接合物、NK细胞接合物(例如，结合至NKp30、NKp46、NKG2D或CD16的分子)、B细胞接合物、树突细胞接合物或巨噬细胞接合物；(b)细胞因子分子；以及(c)基质修饰部分。本文还公开了包含优先结合至TRBC1或TRBC2的抗原结合结构域的抗体分子。在一些实施方案中，结合至TRBC1的抗原结合结构域包含表1、表2A或表2B、表3A或表3B、表4、表5A或表5B、表5A或表5B、表6、表7、表8或表16中存在的序列或序列的一部分。在一些实施方案中，结合至TRBC2的抗原结合结构域包含表9A或表9B、表10、表11、表12、表13、表14、表15、表17或表39中存在的序列或序列的一部分。在一些实施方案中，免疫细胞接合物包含NK细胞接合物，该NK细胞接合物包含表20A或表20B、表22、表23A或表23B、表24、表25、表26、表21A或表21B、和表17中存在的序列或序列的一部分。在一些实施方案中，抗原结合结构域包含表1、表2、表3A或表3B、表4、表7、表8、表16中存在的序列或序列的一部分，并且免疫细胞接合物包含NK细胞接合物，该NK细胞接合物包含表20A或表20B、表22、表23A或表23B、表24、表25、表26、表21A或表21B、和表17中存在的序列或序列的一部分。在一些实施方案中，抗原结合结构域包含表9A或表9B、表10、表11、表12、表13、表14、表15、表17、表39中存在的序列或序列的一部分，并且免疫细胞接合物包含NK细胞接合物，该NK细胞接合物包含表20A或表20B、表22、表23A或表23B、表24、表25、表26、表21A或表21B、和表17中存在的序列或序列的一部分。
在实施方案中，多特异性或多功能性分子是双特异性(或双功能性)分子、三特异性(或三功能性)分子或四特异性(或四功能性)分子。
在一些实施方案中，多功能性分子包含抗原结合结构域，其结合包含TRBC1的T细胞受体表面上的肿瘤抗原，将免疫细胞(例如，经由免疫细胞接合物)靶向至表现出包含TRBC1的T细胞受体的淋巴瘤细胞(例如，T细胞)。在一些实施方案中，多功能性分子包含抗原结合结构域，其结合包含TRBC2的T细胞受体表面上的肿瘤抗原，将免疫细胞(例如，经由免疫细胞接合物)靶向至表现出包含TRBC2的T细胞受体的淋巴瘤细胞(例如，T细胞)。
不受理论束缚，预期本文公开的多特异性或多功能性分子在表达包含TRBC1或TRBC2的T细胞受体的细胞(例如，癌细胞，例如，淋巴瘤细胞，例如，T细胞)存在下，例如在表面上定位(例如，桥接)和/或活化免疫细胞(例如选自T细胞、NK细胞、B细胞、树突细胞或巨噬细胞的免疫效应细胞)。在表达包含TRBC1或TRBC2的T细胞受体的细胞(例如，癌细胞，例如，淋巴瘤细胞，例如，T细胞)存在下，预期使用本文所述的多特异性或多功能性分子增加免疫细胞的接近度和/或活性增强针对靶细胞的免疫应答，从而提供更有效的治疗。
不受理论束缚，认为来自正常或发炎条件或病毒特异性T细胞群体的T细胞含有TRBC1+和TRBC2+区室，而恶性肿瘤仅限于TRBC1或TRBC2。在一些实施方案中，通过利用对包含TRBC1的T细胞受体或包含TRBC2的T细胞受体具有特异性但对两种类型的T细胞受体不具有特异性的多特异性或多功能性分子，预期仅有一部分正常T细胞连同表达TRBC1或TRBC2的整组恶性T细胞被杀伤，同时保留TRBC1+或TRBC2+T细胞的其他正常区室。药剂机制中的这种特异性有助于增加免疫细胞对TRBC1+或TRBC2+恶性细胞的接近度或活性，同时保留一部分正常T细胞。因此，它减轻导致有害作用的泛T细胞发育不全。以这种方式，认为使用本文公开的多特异性或多功能性分子可以增加免疫细胞对癌细胞(例如，淋巴瘤细胞，例如，T细胞)和正常T细胞区室(TRBC1或TRBC2)的接近度或活性，而不必增加免疫细胞对T细胞其他区室的接近度或活性。
公开了新型多功能性(例如，多特异性)分子，其包括(i)基质修饰部分和(ii)优先结合至淋巴瘤细胞(例如，T细胞)上的肿瘤抗原(例如，包含TRBC1的T细胞受体或包含TRBC2的T细胞受体)的抗原结合结构域。不受理论束缚，认为本文公开的多功能性分子尤其靶向(例如，定位于)癌症部位，并改变肿瘤基质，例如，改变癌症部位附近的肿瘤微环境。多功能性分子可以进一步包括以下中的一种或两种：免疫细胞接合物(例如，选自T细胞接合物、NK细胞接合物、B细胞接合物、树突细胞接合物或巨噬细胞接合物中的一种、两种、三种或全部)；和/或细胞因子分子。因此，本文尤其提供了包括上述部分的多功能性(例如，多特异性)分子、编码其的核酸、产生上述分子的方法，以及使用上述分子治疗癌症的方法。
因此，本文尤其提供了包括上述部分的多特异性或多功能性分子(例如，多特异性或多功能性抗体分子)、编码其的核酸、产生上述分子的方法，以及使用上述分子治疗疾病或障碍(例如，癌症)的方法。
定义
在一些实施方案中，多功能性分子包括免疫细胞接合物。“免疫细胞接合物”是指结合和/或活化免疫细胞(例如，参与免疫应答的细胞)的一种或多种结合特异性。在实施方案中，免疫细胞选自T细胞、NK细胞、B细胞、树突细胞和/或巨噬细胞。免疫细胞接合物可以是结合至免疫细胞抗原(例如，T细胞、NK细胞抗原、B细胞抗原、树突细胞抗原和/或巨噬细胞抗原)的抗体分子、受体分子(例如，全长受体、受体片段或其融合体(例如，受体-Fc融合体))或配体分子(例如，全长配体、配体片段或其融合体(例如，配体-Fc融合体))。在实施方案中，免疫细胞接合物特异性结合至靶免疫细胞，例如，优先结合至靶免疫细胞。例如，当免疫细胞接合物是抗体分子时，其以小于约10nM的解离常数结合至免疫细胞抗原(例如，T细胞抗原、NK细胞抗原、B细胞抗原、树突细胞抗原和/或巨噬细胞抗原)。
在一些实施方案中，多功能性分子包括细胞因子分子。如本文所用，“细胞因子分子”是指细胞因子的全长、片段或变体；细胞因子进一步包含受体结构域，例如，细胞因子受体二聚化结构域；或细胞因子受体的激动剂，例如，细胞因子受体的抗体分子(例如，激动性抗体)，其引发天然存在的细胞因子的至少一种活性。在一些实施方案中，细胞因子分子选自白介素-2(IL-2)、白介素-7(IL-7)、白介素-12(IL-12)、白介素-15(IL-15)、白介素-18(IL-18)、白介素-21(IL-21)或干扰素γ，或其片段或变体，或上述细胞因子中任一种的组合。细胞因子分子可以是单体或二聚体。在实施方案中，细胞因子分子可进一步包括细胞因子受体二聚化结构域。在其他实施方案中，细胞因子分子是细胞因子受体的激动剂，例如，选自IL-15Ra或IL-21R的细胞因子受体的抗体分子(例如，激动性抗体)。
如本文所用，如在例如抗体分子、细胞因子分子、受体分子中使用的术语“分子”包括全长天然存在的分子以及变体，例如，功能性变体(例如，截短、片段、突变(例如，基本上相似的序列)或其衍生形式)，只要未修饰的(例如，天然存在的)分子的至少一种功能和/或活性仍保留。
在一些实施方案中，多功能性分子包括基质修饰部分。如本文所用，“基质修饰部分”是指能够改变(例如，降解)基质组分的试剂，例如，蛋白质(例如，酶)。在实施方案中，基质组分选自例如ECM组分，例如，糖胺聚糖，例如，透明质酸(也称为玻尿酸或HA)、硫酸软骨素、软骨素、硫酸皮肤素、硫酸肝素、肝素、巢蛋白、腱生蛋白、聚集蛋白聚糖和硫酸角蛋白；或胞外蛋白，例如，胶原、层粘连蛋白、弹性蛋白、纤维蛋白原、纤连蛋白和玻连蛋白。
某些术语定义如下。
如本文所用，冠词“一个”和“一种”是指一个或多于一个(例如，至少一个)该冠词的语法对象。当在本文中与术语“包含”结合使用时，词语“一个”的使用可以表示“一个”，但它也符合“一个或多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的含义。
如本文所用，“约”和“大致”通常是指在给定测量的性质或精度的情况下测量量的可接受的误差程度。示例性误差程度在给定值范围的20％内，通常在10％内，更通常在5％内。
如本文所用，“抗体分子”是指包含至少一个免疫球蛋白可变结构域序列的蛋白质，例如，免疫球蛋白链或其片段。抗体分子包括抗体(例如，全长抗体)和抗体片段。在实施方案中，抗体分子包含全长抗体的抗原结合片段或功能性片段，或全长免疫球蛋白链。例如，全长抗体是天然存在的或通过正常免疫球蛋白基因片段重组过程形成的免疫球蛋白(Ig)分子(例如，IgG抗体)。在实施方案中，抗体分子是指免疫球蛋白分子的免疫活性抗原结合部分，例如抗体片段。抗体片段(例如，功能性片段)是抗体的一部分，例如，Fab、Fab’、Fab’、F(ab’)2、F(ab)2、可变片段(Fv)、结构域抗体(dAb)或单链可变片段(scFv)。功能性抗体片段结合至与由完整(例如，全长)抗体识别的抗原相同的抗原。术语“抗体片段”或“功能性片段”还包括由可变区组成的分离的片段，例如由重链和轻链可变区组成的“Fv”片段或其中轻链和重链可变区通过肽接头连接的重组单链多肽分子(“scFv蛋白”)。在一些实施方案中，抗体片段不包括无抗原结合活性的抗体部分，例如Fc片段或单个氨基酸残基。示例性抗体分子包括全长抗体和抗体片段，例如，dAb(结构域抗体)、单链、Fab、Fab’和F(ab’)2片段，以及单链可变片段(scFv)。
如本文所用，“免疫球蛋白可变结构域序列”是指可形成免疫球蛋白可变结构域结构的氨基酸序列。例如，该序列可包括天然存在的可变结构域的全部或部分氨基酸序列。例如，该序列可包括或可不包括一个、两个或更多个N-或C-末端氨基酸，或者可包括与蛋白质结构的形成相容的其他改变。
在实施方案中，抗体分子是单特异性的，例如，其包含对单个表位的结合特异性。在一些实施方案中，抗体分子是多特异性的，例如，其包含多个免疫球蛋白可变结构域序列，其中第一免疫球蛋白可变结构域序列对第一表位具有结合特异性，第二免疫球蛋白可变结构域序列对第二表位具有结合特异性。在一些实施方案中，抗体分子是双特异性抗体分子。如本文所用，“双特异性抗体分子”是指对多于一个(例如，两个、三个、四个或更多个)表位和/或抗原具有特异性的抗体分子。
如本文所用，“抗原”(Ag)是指可激发免疫应答的分子，例如，涉及某些免疫细胞的活化和/或抗体生成。任何大分子(包括几乎所有的蛋白质或肽)都可以是抗原。抗原也可以来源于基因组重组体或DNA。例如，包含编码能够引发免疫应答的蛋白质的核苷酸序列或部分核苷酸序列的任何DNA编码“抗原”。在实施方案中，抗原不需要仅由基因的全长核苷酸序列编码，抗原也根本不需要由基因编码。在实施方案中，抗原可以是合成的或可以来源于生物样品，例如，组织样品、肿瘤样品、细胞或具有其他生物组分的流体。如本文所用，“肿瘤抗原”或可互换的“癌症抗原”包括存在于癌症(例如，可激发免疫应答的癌细胞或肿瘤微环境)上或与其相关的任何分子。如本文所用，“免疫细胞抗原”包括存在于可激发免疫应答的免疫细胞上或与其相关的任何分子。
抗体分子的“抗原结合位点”或“结合部分”是指参与抗原结合的抗体分子(例如免疫球蛋白(Ig)分子)的一部分。在实施方案中，抗原结合位点由重(H)链和轻(L)链可变(V)区的氨基酸残基形成。重链和轻链可变区内的三个高度不同的区段被称为高变区，设置在称为“框架区”(FR)的更保守的侧翼区段之间。FR是天然存在于免疫球蛋白高变区之间和与其相邻的氨基酸序列。在实施方案中，在抗体分子中，轻链的三个高变区和重链的三个高变区在三维空间中彼此相对设置，以形成抗原结合表面，其与被结合抗原的三维表面互补。重链和轻链中每一条的三个高变区被称为“互补决定区”或“CDR”。框架区和CDR已在例如Kabat,E.A.,等(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department of Health and Human Services,NIH公布第91-3242号和Chothia,C.等(1987)J.Mol.Biol.196:901-917中定义和描述。每条可变链(例如，可变重链和可变轻链)通常由三个CDR和四个FR组成，从氨基末端至羧基末端按氨基酸顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。
如本文所用，术语“T细胞受体β可变链”、“TCRβV”、“TCRβV”、“TCRβV”、“TCRβv”、“TCRβv”、“TCRβv”、“T细胞受体可变β链”、“TCRβV”、“TCR Vβ”、“TCRVβ”、“TCRβV”、“TCRvβ”或“TCR vβ”在本文中可互使用，并且是指包含T细胞受体的抗原识别结构域的T细胞受体β链胞外区。术语TCRβV包括哺乳动物同种型，例如，人TCRβV，人的物种同源物和包含至少一个与TCRβV共同表位的类似物。人TCRβV包含基因家族，该基因家族包含亚家族，包括但不限于：TCRβV6亚家族、TCRβV10亚家族、TCRβV12亚家族、TCRβV5亚家族、TCRβV7亚家族、TCRβV11亚家族、TCRβV14亚家族、TCRβV16亚家族、TCRβV18亚家族、TCRβV9亚家族、TCRβV13亚家族、TCRβV4亚家族、TCRβV3亚家族、TCRβV2亚家族、TCRβV15亚家族、TCRβV30亚家族、TCRβV19亚家族、TCRβV27亚家族、TCRβV28亚家族、TCRβV24亚家族、TCRβV20亚家族、TCRβV25亚家族，或TCRβV29亚家族。在一些实施方案中，TCRβV6亚家族包含：TCRβV6-4*01、TCRβV6-4*02、TCRβV6-9*01、TCRβV6-8*01、TCRβV6-5*01、TCRβV6-6*02、TCRβV6-6*01、TCRβV6-2*01、TCRβV6-3*01或TCRβV6-1*01。在一些实施方案中，TCRβV包含TCRβV6-5*01。TCRβV6-5*01也称为TRBV65；TCRβV 6S5；TCRβV 13S1或TCRβV 13.1。TCRβV6-5*01(例如，人TCRβV6-5*01)的氨基酸序列是本领域已知的，例如，由IMGT ID L36092提供。
如本文所用，“癌症”可以包括所有类型的致癌过程和/或癌性生长。在实施方案中，癌症包括原发性肿瘤以及转移性组织或恶性转化细胞、组织或器官。在实施方案中，癌症包括癌症的所有组织病理学和阶段，例如，侵袭性/严重性的阶段。在实施方案中，癌症包括复发性和/或抗性癌症。术“癌症”和“肿瘤”可互换使用。例如，这两个术语都包括实体和液体肿瘤。如本文所用，术语“癌症”或“肿瘤”包括恶化前以及恶性癌症和肿瘤。
如本文所用，“免疫细胞”是指在免疫系统中起作用的各种细胞中的任一种，例如，以抵御感染剂和外来物质。在实施方案中，该术语包括白细胞，例如，嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞。先天的白细胞包括吞噬细胞(例如，巨噬细胞、嗜中性粒细胞和树突细胞)、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和自然杀伤细胞。先天的白细胞通过接触攻击较大的病原体或通过吞噬然后杀死微生物来鉴定和消除病原体，并且是适应性免疫应答活化的介质。适应性免疫系统的细胞是特殊类型的白细胞，称为淋巴细胞。B细胞和T细胞是淋巴细胞的重要类型，来源于骨髓中的造血干细胞。B细胞参与体液免疫应答，而T细胞参与细胞介导的免疫应答。术语“免疫细胞”包括免疫效应细胞。
如本文所用，术语“免疫效应细胞”是指参与免疫应答(例如，促进免疫效应应答)的细胞。免疫效应细胞的实例包括但不限于T细胞，例如，α/βT细胞和γ/δT细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NK T)细胞和肥大细胞。
术语“效应功能”或“效应应答”是指细胞的特定功能。例如，T细胞的效应功能可以是细胞溶解活性或辅助活性，包括细胞因子的分泌。
本发明的组合物和方法包括多肽和核酸，该多肽和核酸具有指定序列或与其基本上相同或相似的序列，例如，与指定序列至少80％、85％、90％、95％相同或更高的序列。在氨基酸序列的背景下，术语“基本上相同”在本文中用于指含有足够或最小数量的氨基酸残基的第一氨基酸，该氨基酸残基i)与第二氨基酸序列中的比对氨基酸残基相同，或ii)保守取代，使得第一和第二氨基酸序列可具有共同的结构结构域和/或共同的功能活性。例如，含有共同结构结构域的与参考序列(例如，本文提供的序列)具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。
在核苷酸序列的背景下，术语“基本上相同”在本文中用于指含有足够或最小数量的核苷酸的第一核酸序列，该核苷酸与第二核酸序列中的比对核苷酸相同，使得第一和第二核苷酸序列编码具有共同功能活性的多肽，或编码共同结构多肽结构域或共同功能性多肽活性。例如，与参考序列(例如，本文提供的序列)具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的核苷酸序列。
术语“变体”是指具有与参考氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列或由基本上相同的核苷酸序列编码的多肽。在一些实施方案中，变体是功能性变体。
术语“功能性变体”是指具有与参考氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列或由基本上相同的核苷酸序列编码，并且能够具有参考氨基酸序列的一种或多种活性的多肽。
术语“scFv”是指包含至少一个包含轻链可变区的抗体片段和至少一个包含重链可变区的抗体片段的融合蛋白，其中轻链和重链可变区经由短的柔性多肽接头连续连接，并能够表达为单链多肽，并且其中scFv保留了其来源的完整抗体的特异性。除非另有说明，否则如本文所用的scFv可按任一顺序(例如，相对于多肽的N-末端和C-末端)具有VL和VH可变区，scFv可包含VL-接头-VH或可包含VH-接头-VL。
术语“互补决定区”或“CDR”在本文中可互换使用，并且是指抗体可变区内赋予抗原特异性和结合亲和力的氨基酸序列。例如，通常，在每个重链可变区中存在三个CDR(例如，HCDR1、HCDR2和HCDR3)，并且在每个轻链可变区中存在三个CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。给定CDR的精确氨基酸序列边界可使用许多众所周知方案中的任一种来确定，包括Kabat等(1991),“Sequences of Proteins of Immunological Interest,”第5版，Public HealthService,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(“Kabat”编号方案)、Al-Lazikani等,(1997)JMB273,927-948(“Chothia”编号方案)或其组合描述的那些。在Kabat编号方案下，在一些实施方案中，重链可变结构域(VH)中的CDR氨基酸残基编号为31-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)；并且轻链可变结构域(VL)中的CDR氨基酸残基编号为24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。在Chothia编号方案下，在一些实施方案中，VH中的CDR氨基酸编号为26-32(HCDR1)、52-56(HCDR2)和95-102(HCDR3)；并且VL中的CDR氨基酸残基编号为26-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和91-96(LCDR3)。在组合Kabat和Chothia编号方案中，在一些实施方案中，CDR对应于作为Kabat CDR、Chothia CDR或两者的一部分的氨基酸残基。例如，在一些实施方案中，CDR对应于VH(例如，哺乳动物VH，例如，人VH)中的氨基酸残基26-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)；以及VL(例如，哺乳动物VL，例如，人VL)中的氨基酸残基24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。
非人(例如，鼠)抗体的“人源化”形式是嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(例如Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2或抗体的其他抗原结合子序列)，其含有来源于非人免疫球蛋白的最小序列。在很大程度上，人源化抗体及其抗体片段是人免疫球蛋白(受体抗体或抗体片段)，其中受体互补决定区(CDR)的残基被具有所需特异性、亲和力和能力的非人物种(例如小鼠、大鼠或兔)(供体抗体)的CDR残基取代。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基被相应的非人残基取代。此外，人源化抗体/抗体片段可以包含既不存在于受体抗体中也不存在于导入的CDR或框架序列中的残基。这些修饰可以进一步细化和优化抗体或抗体片段性能。通常，人源化抗体或其抗体片段将包含基本上所有的至少一个(通常两个)可变结构域，其中所有或基本上所有的CDR区对应于非人免疫球蛋白的CDR区，并且所有的FR区或其重要的一部分是人免疫球蛋白序列的FR区。人源化抗体或抗体片段还可以包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的恒定区。进一步的细节参见Jones等,Nature,321:522-525,1986；Reichmann等,Nature,332:323-329,1988；Presta,Curr.Op.Struct.Biol.,2:593-596,1992。
“完全人”是指免疫球蛋白，例如抗体或抗体片段，其中整个分子是人源的或由与人形式的抗体或免疫球蛋白相同的氨基酸序列组成。
术语“特异性结合”是指抗体或配体，其识别并结合样品中存在的同源结合伴侣(例如，T细胞上存在的刺激和/或共刺激分子)蛋白，但该抗体或配体基本上不识别或结合样品中的其他分子。
如本文所用，“免疫细胞”是指在免疫系统中起作用的各种细胞中的任一种，例如，以抵御感染剂和外来物质。在实施方案中，该术语包括白细胞，例如，嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞。先天的白细胞包括吞噬细胞(例如，巨噬细胞、嗜中性粒细胞和树突细胞)、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和自然杀伤细胞。先天的白细胞通过接触攻击较大的病原体或通过吞噬然后杀死微生物来鉴定和消除病原体，并且是适应性免疫应答活化的介质。适应性免疫系统的细胞是特殊类型的白细胞，称为淋巴细胞。B细胞和T细胞是淋巴细胞的重要类型，来源于骨髓中的造血干细胞。B细胞参与体液免疫应答，而T细胞参与细胞介导的免疫应答。术语“免疫细胞”包括免疫效应细胞。
如本文所用，术语“免疫效应细胞”是指参与免疫应答(例如，促进免疫效应应答)的细胞。免疫效应细胞的实例包括但不限于T细胞(例如，α/βT细胞、γ/δT细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞)、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NK T)细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、树突细胞和肥大细胞。
术语“效应功能”或“效应应答”是指细胞的特定功能。例如，T细胞的效应功能可以是细胞溶解活性(例如，CD8+T细胞)或辅助活性(例如，CD4+T细胞)，包括细胞因子的分泌。
术语“抗原呈递细胞”或“APC”是指在其表面上展示与主要组织相容性复合体(MHC)复合的外来抗原的免疫系统细胞，例如辅助细胞(例如，B细胞、树突细胞等)。T细胞可使用它们的T细胞受体(TCR)来识别这些复合体。APC加工抗原并将其呈递至T细胞。
术语“基本上纯化的细胞”或“基本上纯化的细胞群体”是指基本上不含其他细胞类型的细胞或细胞群体。基本上纯化的细胞也指已从其他细胞类型中分离的细胞，该细胞通常以其天然存在的状态与其相关。在一些情况下，基本上纯化的细胞群体是指均一细胞群体。在其他情况下，该术语简单地指已从细胞中分离的细胞，它们以它们天然的状态与其天然相关。在一些方面，细胞是体外培养的。在其他方面，细胞不是体外培养的。
如本文所用，术语“来源于”表示第一和第二分子之间的关系。它通常是指第一分子和第二分子之间的结构相似性，并不意味着或包括对来源于第二分子的第一分子的过程或来源限制。例如，在来源于CD3ζ分子的胞内信号传导结构域的情况下，胞内信号传导结构域保留足够的CD3ζ结构，使得其具有所需的功能，即在适当条件下生成信号的能力。这并不意味着或包括对产生胞内信号传导结构域的特定过程的限制，例如，这并不意味着，为了提供胞内信号传导结构域，必须以CD3ζ序列开始并缺失不需要的序列或施加突变，以获得胞内信号传导结构域。
术语“编码”是指多核苷酸(例如基因、cDNA或mRNA)中的特定核苷酸序列的固有特性，其用作在生物过程中合成其他聚合物和大分子的模板，具有限定的核苷酸(例如，rRNA、tRNA和mRNA)序列或限定的氨基酸序列以及由此产生的生物学特性。因此，如果对应于该基因的mRNA的转录和翻译在细胞或其他生物系统中产生蛋白质，则基因、cDNA或RNA编码该蛋白质。编码链(核苷酸序列与mRNA序列相同且通常在序列表中提供)和非编码链(用作基因或cDNA转录模板)可以称为编码该基因或cDNA的蛋白质或其他产物。
序列之间的同源性或序列同一性(该术语在本文中可互换使用)的计算如下进行。
为了确定两个氨基酸序列或两个核酸序列的同一性百分比，对序列进行比对用于最佳比较(例如，可以在第一和第二氨基酸或核酸序列中的一个或两个中引入空位(gap)用于最佳比对，并且可以忽略非同源性序列用于比较)。在优选实施方案中，用于比较的比对的参考序列长度为参考序列长度的至少30％，优选至少40％，更优选至少50％、60％，甚至更优选至少70％、80％、90％、100％。然后比较相应氨基酸位置或核苷酸位置处的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置被与第二序列中相应位置相同的氨基酸残基或核苷酸占据时，则分子在该位置是相同的(如本文所用，氨基酸或核酸“同一性”等同于氨基酸或核酸“同源性”)。
考虑到空位的数量和每个空位的长度，两个序列之间的同一性百分比是序列共有的相同位置数的函数，这些空位是为了两个序列的最佳比对而需要引入的。
可以使用数学算法来完成序列的比较和两个序列之间同一性百分比的确定。在优选实施方案中，使用已并入GCG软件包(可在gcg.com上获得)中GAP程序的Needleman和Wunsch((1970)J.Mol.Biol.48:444-453)算法、使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵，以及空位权重16、14、12、10、8、6或4和长度权重1、2、3、4、5或6来确定两个氨基酸序列之间的同一性百分比。在另一优选实施方案中，使用GCG软件包(可在gcg.com上获得)中的GAP程序、使用NWSgapdna.CMP矩阵，以及空位权重40、50、60、70或80和长度权重1、2、3、4、5或6来确定两个核苷酸序列之间的同一性百分比。一组特别优选的参数(以及除非另有说明应使用的参数)是空位罚分为12、空位扩展罚分为4和移码空位罚分为5的Blossum 62评分矩阵。
可以使用已并入ALIGN程序(2.0版本)的E.Meyers和W.Miller((1989)CABIOS,4:11-17)的算法、使用PAM120权重残基表、空位长度罚分12和空位罚分4来确定两个氨基酸或核苷酸序列之间的同一性百分比。
本文所述的核酸和蛋白质序列可以用作“查询序列”，以对公共数据库进行搜索来例如鉴定其他家族成员或相关序列。可以使用Altschul,等(1990)J.Mol.Biol.215:403-10的NBLAST和XBLAST程序(2.0版本)来进行这种搜素。可以用NBLAST程序进行BLAST核苷酸搜索，评分＝100，字长＝12，以获得与本发明的核酸分子同源的核苷酸序列。可以用XBLAST程序进行BLAST蛋白质搜索，评分＝50，字长＝3，以获得与本发明的蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得空位比对用于比较，可以使用如Altschul等,(1997)Nucleic AcidsRes.25:3389-3402中所述的Gapped BLAST。当使用BLAST和Gapped BLAST程序时，可以使用相应程序(例如，XBLAST和NBLAST)的默认参数。参见ncbi.nlm.nih.gov。
应理解，本发明的分子可具有另外的保守或非必需氨基酸取代，其对它们的功能没有实质性影响。
术语“氨基酸”旨在包括所有分子，无论是天然的还是合成的，其包括氨基官能团和酸官能团，并且能够包括在天然存在的氨基酸的聚合物中。示例性氨基酸包括天然存在的氨基酸；其类似物、衍生物和同系物；具有变体侧链的氨基酸类似物；以及前述中任一种的所有立体异构体。如本文所用，术语“氨基酸”包括D-或L-光学异构体和肽模拟物。
“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基取代的取代。具有相似侧链的氨基酸残基家族已在本领域中定义。这些家族包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。这种保守修饰包括氨基酸取代、添加和缺失。通过本领域已知的标准技术，例如定点诱变和PCR介导的诱变，可以将修饰引入抗体或抗体片段。保守取代是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基取代的取代。具有相似侧链的氨基酸残基家族已在本领域中定义。这些家族包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β-分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此，CAR内的一个或多个氨基酸残基可以被来自同一侧链家族的其他氨基酸残基取代，并且可以使用本文所述的功能性测定来测试改变的CAR。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”(如果是单链)在本文中可互换使用，是指任何长度的氨基酸的聚合物。聚合物可以是线性或分支的，它可包含修饰的氨基酸，并且它可被非氨基酸中断。该术语还包括已修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作，例如与标记组分缀合。多肽可以从天然来源分离，可以通过重组技术从真核或原核宿主产生，或者可以是合成程序的产物。
术语“核酸”、“核酸序列”、“核苷酸序列”或“多核苷酸序列”和“多核苷酸”可互换使用。它们是指任何长度的核苷酸的聚合形式，脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其类似物。多核苷酸可以是单链的或双链的，如果是单链的，可以是编码链或非编码(反义)链。多核苷酸可包含修饰的核苷酸，例如甲基化核苷酸和核苷酸类似物。核苷酸的序列可被非核苷酸组分中断。在聚合之后可以进一步修饰多核苷酸，例如通过与标记组分缀合。核酸可以是重组多核苷酸，或者基因组、cDNA、半合成或合成来源的多核苷酸，其在自然界中不存在或以非天然排列与另一多核苷酸连接。
如本文所用，术语“分离的”是指从其最初或天然环境(例如，天然环境，如果它是天然存在的)中除去的材料。例如，存在于活体动物中的天然存在的多核苷酸或多肽不是分离的，但是通过人为干预从天然系统共存材料中的一些或全部中分离的相同多核苷酸或多肽是分离的。这种多核苷酸可以是载体的一部分和/或这种多核苷酸或多肽可以是组合物的一部分，并且仍然是分离的，因为这种载体或组合物不是自然界中存在的环境的一部分。
术语“内源性”是指来自生物体、细胞、组织或系统或在生物体、细胞、组织或系统内产生的任何材料。
术语“外源性”是指从生物体、细胞、组织或系统引入或在生物体、细胞、组织或系统外产生的任何材料。
术语“表达”是指由启动子驱动的特定核苷酸序列的转录和/或翻译。
术语“转移载体”是指包含分离的核酸并可用于将分离的核酸递送至细胞内部的物质的组合物。许多载体是本领域已知的，包括但不限于线性多核苷酸、与离子或两亲性化合物相关的多核苷酸、质粒和病毒。因此，术语“转移载体”包括自主复制质粒或病毒。该术语还应解释为进一步包括促使核酸转移至细胞中的非质粒和非病毒化合物，例如，聚赖氨酸化合物、脂质体等。病毒转移载体的实例包括但不限于腺病毒载体、腺相关病毒载体、逆转录病毒载体、慢病毒载体等。
术语“表达载体”是指包含重组多核苷酸的载体，该重组多核苷酸包含与待表达的核苷酸序列可操作地连接的表达控制序列。表达载体包含足够的顺式作用元件用于表达；用于表达的其他元件可以由宿主细胞或在体外表达系统中提供。表达载体包括本领域已知的所有载体，包括掺入重组多核苷酸的粘粒、质粒(例如，裸露的或包含在脂质体中)和病毒(例如，慢病毒、逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)。
如本文所用，术语“载体”是指可以用于递送和/或表达核酸分子的任何媒介物。它可以是如本文所述的转移载体或表达载体。
术语“慢病毒”是指逆转录病毒科家族的属。慢病毒是逆转录病毒中唯一能够感染非分裂细胞的；它们可以将大量的遗传信息递送至宿主细胞的DNA中，因此它们是基因递送载体的最有效方法中的一种。
术语“慢病毒载体”是指来源于慢病毒基因组的至少一部分的载体，尤其包括如Milone等,Mol.Ther.17(8):1453-1464(2009)中提供的自失活慢病毒。可用于临床的慢病毒载体的其他实例包括但不限于例如来自Oxford BioMedica的
Figure BDA0004017031980000771
基因递送技术、来自Lentigen的LENTIMAXTM载体系统等。非临床类型的慢病毒载体也是可用的，并且是本领域技术人员已知的。
术语“可操作地连接”或“转录控制”是指调控序列和异源性核酸序列之间的功能性连接，导致后者的表达。例如，当第一核酸序列与第二核酸序列处于功能性关系时，第一核酸序列与第二核酸序列可操作地连接。例如，如果启动子影响编码序列的转录或表达，则启动子与编码序列可操作地连接。可操作地连接的DNA序列可以是彼此相邻的，并且(例如，在需要连接两个蛋白质编码区的情况下)在同一阅读框中。
术语免疫原性组合物的“肠胃外”施用包括例如皮下(s.c.)、静脉内(i.v.)、肌内(i.m.)或胸骨内注射、瘤内或输注技术。
术语“启动子”是指启动多核苷酸序列的特异性转录所需的、由细胞的合成机制或引入的合成机制识别的DNA序列。
术语“启动子/调控序列”是指与启动子/调控序列可操作地连接的基因产物表达所需的核酸序列。在一些情况下，该序列可以是核心启动子序列，在其他情况下，该序列也可包括增强子序列和基因产物表达所需的其他调控元件。例如，启动子/调控序列可以是以组织特异性方式表达基因产物的序列。
术语“组成型启动子”是指当与编码或指定基因产物的多核苷酸可操作地连接时，在细胞的大多数或所有生理条件下在细胞中导致产生基因产物的核苷酸序列。
术语“诱导型启动子”是指当与编码或指定基因产物的多核苷酸可操作地连接时，基本上仅当细胞中存在对应于该启动子的诱导物时才导致在细胞中产生基因产物的核苷酸序列。
术语“组织特异性启动子”是指当与编码基因或由基因指定的多核苷酸可操作地连接时，基本上仅在细胞是对应于该启动子的组织类型的细胞时才导致在细胞中产生基因产物的核苷酸序列。
如本文所用，“瞬时”是指未整合的转基因在数小时、数天或数周的时间段内表达，其中表达的时间段小于如果整合至基因组中或包含在宿主细胞中的稳定质粒复制子内的基因表达的时间段。
术语“转染的”或“转化的”或“转导的”是指外源性核酸转移或导入至宿主细胞的过程。“转染的”或“转化的”或“转导的”细胞是已用外源性核酸转染、转化或转导的细胞。该细胞包括原代对象细胞及其后代。
术语“嵌合抗原受体”或“CAR”在本文中可互换使用，并且是指至少包含胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞质信号传导结构域(本文中也称为“胞内信号传导结构域”)的重组多肽构建体，该细胞质信号传导结构域包含来源于如下定义的刺激分子的功能性信号传导结构域。在一些实施方案中，CAR多肽构建体中的结构域在同一多肽链中，例如，包含嵌合融合蛋白。在一些实施方案中，CAR多肽构建体中的结构域彼此不相邻，例如，在不同的多肽链中。在一方面，CAR的刺激分子是与T细胞受体复合体相关的ζ链。在一方面，细胞质信号传导结构域包含初级信号传导结构域(例如，CD3-ζ的初级信号传导结构域)。在一方面，细胞质信号传导结构域进一步包含一个或多个来源于如下定义的至少一种共刺激分子的功能性信号传导结构域。在一方面，共刺激分子选自4-1BB(即，CD137)、CD27、ICOS和/或CD28。在一方面，CAR包含嵌合融合蛋白，该嵌合融合蛋白包含胞外抗原识别结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域，该胞内信号传导结构域包含来源于刺激分子的功能性信号传导结构域。在一方面，CAR包含嵌合融合蛋白，该嵌合融合蛋白包含胞外抗原识别结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域，该胞内信号传导结构域包含来源于共刺激分子的功能性信号传导结构域和来源于刺激分子的功能性信号传导结构域。在一方面，CAR包含嵌合融合蛋白，该嵌合融合蛋白包含胞外抗原识别结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域，该胞内信号传导结构域包含两个来源于一种或多种共刺激分子的功能性信号传导结构域和来源于刺激分子的功能性信号传导结构域。在一方面，CAR包含嵌合融合蛋白，该嵌合融合蛋白包胞外抗原识别结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域，该胞内信号传导结构域包含至少两个来源于一种或多种共刺激分子的功能性信号传导结构域和来源于刺激分子的功能性信号传导结构域。在一方面，CAR在CAR融合蛋白的氨基末端(N-末端)包含任选的前导序列。在一方面，CAR在胞外抗原识别结构域的N-末端进一步包含前导序列，其中在CAR的细胞加工和定位至细胞膜期间，前导序列任选地从抗原识别结构域(例如，scFv)中被切割。
如本文所用，术语“信号传导结构域”是指蛋白质的功能性部分，其通过在细胞内传递信息起作用，以通过生成第二信使经由限定的信号传导途径调控细胞活性，或通过响应于这种信使起效应物的作用。
如本文所用，术语“胞内信号传导结构域”是指分子的胞内部分。胞内信号传导结构域可以生成促进含有CAR的细胞(例如，CART细胞或表达CAR的NK细胞)的免疫效应功能的信号。例如在CART细胞或表达CAR的NK细胞中的免疫效应功能的实例包括细胞溶解活性和辅助活性，包括细胞因子的分泌。在实施方案中，胞内信号结构域转导效应功能信号，并指导细胞进行特定功能。虽然可以使用整个胞内信号传导结构域，但在许多情况下不需要使用整个链。就使用胞内信号传导结构域的截短部分而言，只要其转导效应功能信号，就可使用这种截短部分代替完整链。因此，术语胞内信号传导结构域是指包括足以转导效应功能信号的胞内信号传导结构域的任何截短部分。在一些实施方案中，胞内信号传导结构域包含初级胞内信号传导结构域。示例性初级胞内信号传导结构域包括来源于负责初级刺激或抗原依赖性刺激的分子的那些。在实施方案中，胞内信号传导结构域可以包含共刺激胞内结构域。示例性共刺激胞内信号传导结构域包括来源于负责共刺激信号或抗原非依赖性刺激的分子的那些。例如，在表达CAR的免疫效应细胞(例如，CART细胞或表达CAR的NK细胞)的情况下，初级胞内信号传导结构域可以包含T细胞受体的细胞质序列，并且共刺激胞内信号传导结构域可以包含来自共受体或共刺激分子的细胞质序列。初级胞内信号传导结构域可以包含信号传导基序，其被称为免疫受体酪氨酸活化基序或ITAM。含有初级细胞质信号传导序列的ITAM的实例包括但不限于来源于CD3ζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CDS、CD22、CD79a、CD79b、CD278(“ICOS”)、FcεRI、CD66d、DAP10和DAP12的那些。
术语“ζ”或“ζ链”、“CD3-ζ”或“TCR-ζ”定义为如GenBank登录号BAG36664.1提供的蛋白质，或来自非人物种(例如，小鼠、啮齿动物、猴、猿等)的等效残基，并且“ζ刺激结构域”或“CD3-ζ刺激结构域”或“TCR-ζ刺激结构域”定义为来自ζ链的细胞质结构域的氨基酸残基，其足以功能性地传递T细胞活化所需的初始信号。在一方面，ζ的细胞质结构域包含GenBank登录号BAG36664.1的52至164位残基，或其功能性直向同源的来自非人物种(例如，小鼠、啮齿动物、猴、猿等)的等效残基。
术语“共刺激分子”是指T细胞上的同源结合伴侣，其与共刺激配体特异性结合，从而介导T细胞的共刺激应答，例如但不限于增殖。共刺激分子是除抗原受体或其配体以外的有效免疫应答所需的细胞表面分子。共刺激分子包括但不限于MHC I类分子、TNF受体蛋白、免疫球蛋白样蛋白、细胞因子受体、整联蛋白、信号淋巴细胞活化分子(SLAM蛋白)、活化NK细胞受体、BTLA、Toll配体受体、OX40、CD2、CD7、CD27、CD28、CD30、CD40、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、4-1BB(CD137)、B7-H3、CDS、ICAM-1、ICOS(CD278)、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、NKG2C、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a，以及与CD83特异性结合的配体。
“共刺激胞内信号传导结构域”是指共刺激分子的胞内部分。胞内信号传导结构域可以包含其来源的分子的整个胞内部分或整个天然胞内信号传导结构域，或其功能性片段。
如本文所用，术语“信号传导途径”是指在信号从细胞的一部分传递至细胞的另一部分中起作用的多种信号转导分子之间的生物化学关系。
如本文所用，术语“细胞表面受体”包括能够接收信号并跨细胞膜传递信号的分子和分子复合体。
本文中可互换使用的术语“抗肿瘤作用”或“抗癌症作用”是指可以通过各种手段表现的生物学作用，包括但不限于例如肿瘤体积减小、肿瘤细胞数量减少、转移数量减少、预期寿命增加、肿瘤细胞增殖减少、肿瘤细胞存活减少或与癌性病况相关的各种生理症状改善。“抗肿瘤作用”也可以通过肽、多核苷酸、细胞和抗体最初预防肿瘤发生的能力来表现。
本文中可互换使用的术语“癌症”或“肿瘤”包括所有类型的致癌过程和/或癌性生长。在实施方案中，癌症包括原发性肿瘤以及转移性组织或恶性转化细胞、组织或器官。在实施方案中，癌症包括癌症的所有组织病理学和阶段，例如，侵袭性/严重性的阶段。在实施方案中，癌症包括复发性和/或抗性癌症。例如，这两个术语都包括实体和液体肿瘤。如本文所用，术语癌症包括恶化前以及恶性癌症和肿瘤。
术语“自体”是指来源于同一个体的任何材料，随后将其再引入该个体。
术语“同种异体”是指来源于与引入材料的个体相同物种的不同动物的任何材料。当一个或多个基因座处的基因不相同时，两个或更多个个体被称为彼此同种异体。在一些方面，来自同一物种的个体的同种异体材料可能在遗传上完全不同于抗原相互作用。
术语“异种”是指来源于不同物种的动物的移植物。
如本文所用，术语“单采血液成分术(apheresis)”是指本领域公认的体外过程，通过该方法从供体或患者中取出供体或患者的血液并使其通过装置分离出选定的特定成分，使剩余部分例如通过再输血返回至供体或患者的循环。因此，在“单采血液成分术样品”的背景下，是指使用单采血液成分术获得的样品。
术语“组合”是指在一个剂量单位形式中的固定组合或组合施用，其中化合物和组合伴侣(例如下文解释的另一种药物，也称为“治疗性药剂”或“助剂”)可同时独立施用或在时间间隔内分开施用，特别是在这些时间间隔允许组合伴侣显示出合作(例如协同作用)的情况下。单个组分可以包装在试剂盒中或分开包装。组分(例如，粉末或液体)中的一种或两种可在施用前重构或稀释至所需剂量。如本文所用，术语“共同施用”或“组合施用”等是指包括向有需要的对象(例如患者)施用选定的组合伴侣，并且旨在包括其中不需要通过同一施用途径或在同一时间施用药剂的治疗方案。如本文所用，术语“药物组合”是指由混合或组合多于一种活性成分产生的产物，并且包括活性成分的固定和非固定组合。术语“固定组合”是指活性成分(例如化合物和组合伴侣)均以单一实体或剂量的形式同时施用至患者。术语“非固定组合”是指活性成分(例如化合物和组合伴侣)作为单独实体同时、并行或依次施用至患者，没有特定的时间限制，其中这种施用在患者体内在治疗上提供两种化合物的有效水平。后者也适用于鸡尾酒疗法，例如三种或更多种活性成分的施用。
术语“有效量”或“治疗有效量”在本文中可互换使用，并且是指本文所述的化合物、制剂、材料或组合物有效实现特定生物学结果的量。
如本文所用，术语“治疗”是指减少或改善增殖性障碍的进展、严重性和/或持续时间，或改善由施用一种或多种疗法(例如，一种或多种治疗性药剂，例如CAR)导致的增殖性障碍的一种或多种症状(优选地，一种或多种可辨别的症状)。在具体实施方案中，术语“治疗”是指改善增殖性障碍的至少一种可测量的物理参数，例如肿瘤的生长，其不一定是患者可辨别的。在其他实施方案中，术语“治疗”是指在身体上通过例如稳定可辨别的症状、在生理上通过例如稳定物理参数或两者来抑制增殖性障碍的进展。在其他实施方案中，术语“治疗”是指减小或稳定肿瘤大小或癌性细胞计数。
如本文所用，术语“治疗性”是指治疗。治疗性作用通过减少、抑制、缓解或根除疾病状态来获得。
如本文所用，术语“预防”是指疾病或疾病状态的预防或保护性治疗。
术语“对象”旨在包括其中可以引发免疫应答的活的生物体(例如，哺乳动物、人)。
下文进一步详细地描述本发明的各个方面。在整个说明书中列出了另外的定义。
抗体分子
在一个实施方案中，抗体分子结合至癌抗原，例如，肿瘤抗原或基质抗原。在一些实施方案中，癌抗原是例如哺乳动物(例如，人)癌抗原。在其他实施方案中，抗体分子结合至免疫细胞抗原，例如，哺乳动物(例如，人)免疫细胞抗原。例如，抗体分子特异性结合至癌抗原或免疫细胞抗原上的表位，例如，线性或构象表位。
在实施方案中，抗体分子是单特异性抗体分子并结合单个表位。例如，具有多个免疫球蛋白可变结构域序列的单特异性抗体分子，免疫球蛋白可变结构域序列中的每一个结合同一表位。
在实施方案中，抗体分子是多特异性或多功能性抗体分子，例如，其包含多个免疫球蛋白可变结构域序列，其中多个中的第一免疫球蛋白可变结构域序列对第一表位具有结合特异性，多个中的第二免疫球蛋白可变结构域序列对第二表位具有结合特异性。在实施方案中，第一和第二表位在同一抗原(例如，同一蛋白质(或多聚体蛋白质的亚基))上。在实施方案中，第一和第二表位重叠。在实施方案中，第一和第二表位不重叠。在实施方案中，第一和第二表位在不同抗原(例如，不同蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基))上。在实施方案中，多特异性抗体分子包含第三、第四或第五免疫球蛋白可变结构域。在实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子、三特异性抗体分子或四特异性抗体分子。
在实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。双特异性抗体对不多于两种抗原具有特异性。双特异性抗体分子的特征在于对第一表位具有结合特异性的第一免疫球蛋白可变结构域序列和对第二表位具有结合特异性的第二免疫球蛋白可变结构域序列。在实施方案中，第一和第二表位在同一抗原(例如，同一蛋白质(或多聚体蛋白质的亚基))上。在实施方案中，第一和第二表位重叠。在实施方案中，第一和第二表位不重叠。在实施方案中，第一和第二表位在不同抗原(例如，不同蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基))上。在实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，以及对第二表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列。在实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的半抗体和对第二表位具有结合特异性的半抗体。在实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的半抗体或其片段，以及对第二表位具有结合特异性的半抗体或其片段。在实施方案中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的scFv或Fab或其片段，以及对第二表位具有结合特异性的scFv或Fab或其片段。
在实施方案中，抗体分子包含双抗体和单链分子，以及抗体的抗原结合片段(例如，Fab、F(ab’)2和Fv)。例如，抗体分子可以包括重(H)链可变结构域序列(本文缩写为VH)和轻(L)链可变结构域序列(本文缩写为VL)。在实施方案中，抗体分子包含重链和轻链或由重链和轻链组成(本文称为半抗体)。在另一实例中，抗体分子包括两个重(H)链可变结构域序列和两个轻(L)链可变结构域序列，从而形成两个抗原结合位点，例如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fc、Fd、Fd’、Fv、单链抗体(例如scFv)、单可变结构域抗体、双抗体(Dab)(二价和双特异性)和嵌合(例如，人源化)抗体，其可通过修饰整个抗体或使用重组DNA技术从头合成的那些抗体来产生。这些功能性抗体片段保留了与它们相应抗原或受体选择性地结合的能力。抗体和抗体片段可以来自任何类型的抗体，包括但不限于IgG、IgA、IgM、IgD和IgE，以及来自任何亚类(例如，IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)的抗体。抗体分子的制剂可以是单克隆或多克隆的。抗体分子也可以是人、人源化、CDR移植或体外生成的抗体。抗体可以具有重链恒定区，选自例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。抗体还可以具有轻链，选自例如κ或λ。术语“免疫球蛋白”(Ig)在本文中可与术语“抗体”互换使用。
抗体分子的抗原结合片段的实例包括：(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab’)2片段，包含通过铰链区的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，(v)由VH结构域组成的双抗体(dAb)片段；(vi)骆驼或骆驼源化可变结构域；(vii)单链Fv(scFv)，参见例如，Bird等(1988)Science242:423-426；和Huston等(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883)；(viii)单结构域抗体。使用本领域技术人员已知的常规技术来获得这些抗体片段，并以与完整抗体相同的方式筛选片段的效用。
抗体分子包括完整分子以及其功能性片段。抗体分子的恒定区可以被改变(例如，突变)，以修改抗体的特性(例如，增加或减少以下中的一种或多种：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数量、效应细胞功能或补体功能)。
抗体分子也可以是单结构域抗体。单结构域抗体可以包括其互补决定区是单结构域多肽的一部分的抗体。实例包括但不限于重链抗体、天然无轻链的抗体、来源于常规4-链抗体的单结构域抗体、工程化抗体和除来源于抗体的那些以外的单结构域支架。单结构域抗体可以是本领域中的任一种，或任何未来的单结构域抗体。单结构域抗体可来源于任何物种，包括但不限于小鼠、人、骆驼、美洲驼、鱼、鲨鱼、山羊、兔和牛。根据本发明的另一方面，单结构域抗体是天然存在的单结构域抗体，称为无轻链的重链抗体。例如，这种单结构域抗体公开于WO9404678中。为清楚起见，这种来源于天然无轻链的重链抗体的可变结构域在本文中称为VHH或纳米抗体，以将其与四条链免疫球蛋白的常规VH区分开。这种VHH分子可以来源于骆驼科物种(例如骆驼、美洲驼、单峰驼、羊驼和原驼)中产生的抗体。除骆驼科以外的其他物种可能会产生天然无轻链的重链抗体；这种VHH在本发明的范围内。
VH和VL区可以细分为高变区，称为“互补决定区”(CDR)，中间散布着更保守的区域，称为“框架区”(FR或FW)。
框架区和CDR的范围已通过许多方法精确地定义(参见，Kabat,E.A.,等(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department ofHealth and Human Services,NIH公布第91-3242号；Chothia,C.等(1987)J.Mol.Biol.196:901-917；以及由Oxford Molecular的AbM抗体建模软件使用的AbM定义。通常参见例如，Antibody Engineering Lab Manual中的Protein Sequence andStructure Analysis of Antibody Variable Domains.(编著：Duebel,S.和Kontermann,R.,Springer-Verlag,Heidelberg)。
如本文所用，术语“互补决定区”和“CDR”是指抗体可变区内赋予抗原特异性和结合亲和力的氨基酸序列。通常，在每个重链可变区中存在三个CDR(HCDR1、HCDR2、HCDR3)，并且在每个轻链可变区中存在三个CDR(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。
给定CDR的精确氨基酸序列边界可使用许多已知方案中的任一种来确定，包括Kabat等(1991),“Sequences of Proteins of Immunological Interest,”第5版，PublicHealth Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(“Kabat”编号方案)、Al-Lazikani等,(1997)JMB273,927-948(“Chothia”编号方案)描述的那些。如本文所用，根据“Chothia”编号方案定义的CDR有时也称为“高变环”。
例如，在Kabat下，重链可变结构域(VH)中的CDR氨基酸残基编号为31-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)；并且轻链可变结构域(VL)中的CDR氨基酸残基编号为24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。在Chothia下，VH中的CDR氨基酸编号为26-32(HCDR1)、52-56(HCDR2)和95-102(HCDR3)；并且VL中的氨基酸残基编号为26-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和91-96(LCDR3)。
每个VH和VL通常包括三个CDR和四个FR，从氨基末端至羧基末端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
抗体分子可以是多克隆或单克隆抗体。
如本文所用，术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指单分子组成的抗体分子的制剂。单克隆抗体组合物展示出对特定表位的单一结合特异性和亲和力。单克隆抗体可以通过杂交瘤技术或通过不使用杂交瘤技术的方法(例如，重组方法)制备。
抗体可以重组产生，例如，通过噬菌体展示或通过组合方法产生。
用于生成抗体的噬菌体展示和组合方法是本领域已知的(如例如，Ladner等,美国专利第5,223,409号；Kang等,国际公布WO92/18619号；Dower等,国际公布第WO91/17271号；Winter等,国际公布第WO92/20791号；Markland等,国际公布第WO92/15679号；Breitling等,国际公布第WO93/01288号；McCafferty等,国际公布第WO92/01047号；Garrard等,国际公布第WO92/09690号；Ladner等,国际公布第WO90/02809号；Fuchs等,(1991)Bio/Technology 9:1370-1372；Hay等,(1992)Hum Antibod Hybridomas 3:81-85；Huse等,(1989)Science246:1275-1281；Griffths等,(1993)EMBO J 12:725-734；Hawkins等,(1992)J Mol Biol 226:889-896；Clackson等,(1991)Nature 352:624-628；Gram等,(1992)PNAS 89:3576-3580；Garrad等,(1991)Bio/Technology9:1373-1377；Hoogenboom等,(1991)Nuc Acid Res 19:4133-4137；和Barbas等,(1991)PNAS 88:7978-7982中描述的，其全部内容通过引用并入本文)。
在一个实施方案中，抗体是完全人抗体(例如，在小鼠中制备的抗体，其已遗传工程化为从人免疫球蛋白序列产生抗体)，或非人抗体，例如，啮齿动物(小鼠或大鼠)、山羊、灵长类动物(例如，猴)、骆驼抗体。优选地，非人抗体是啮齿动物的(小鼠或大鼠抗体)。产生啮齿动物抗体的方法是本领域已知的。
可以使用携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠而非小鼠系统来生成人单克隆抗体。用目的抗原免疫的这些转基因小鼠的脾细胞用于产生杂交瘤，该杂交瘤分泌对来自人蛋白质的表位具有特异性亲和力的人mAb(参见例如，Wood等,国际申请WO91/00906、Kucherlapati等,PCT申请WO91/10741；Lonberg等,国际申请WO92/03918；Kay等,国际申请92/03917；Lonberg,N.等,1994Nature 368:856-859；Green,L.L.等,1994Nature Genet.7:13-21；Morrison,S.L.等,1994Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:6851-6855；Bruggeman等,1993Year Immunol 7:33-40；Tuaillon等,1993PNAS 90:3720-3724；Bruggeman等,1991EurJ Immunol21:1323-1326)。
抗体分子可以是其中可变区或其一部分(例如，CDR)在非人生物体(例如，大鼠或小鼠)中生成的抗体分子。嵌合、CDR移植和人源化的抗体在本发明范围内。在非人生物体(例如，大鼠或小鼠)中生成，然后例如在可变框架或恒定区中修饰以降低人中抗原性的抗体分子在本发明范围内。
“有效人”蛋白质是基本上不引起中和抗体应答(例如，人抗鼠抗体(HAMA)应答)的蛋白质。例如，在慢性或复发性疾病病况的治疗中，例如，如果重复施用抗体分子，HAMA在许多情况下可能是有问题的。HAMA应答可使重复的抗体施用可能无效，因为血清中的抗体清除率增加(参见例如，Saleh等,Cancer Immunol.Immunother.,32:180-190(1990))，并且还因为可能的过敏反应(参见例如，LoBuglio等,Hybridoma,5:5117-5123(1986))。
嵌合抗体可通过本领域已知的重组DNA技术产生(参见Robinson等,国际专利申请PCT/US86/02269；Akira,等,欧洲专利申请184,187；Taniguchi,M.,欧洲专利申请171,496；Morrison等,欧洲专利申请173,494；Neuberger等,国际申请WO86/01533；Cabilly等,美国专利第4,816,567号；Cabilly等,欧洲专利申请125,023；Better等,(1988Science240:1041-1043)；Liu等,(1987)PNAS 84:3439-3443；Liu等,1987,J.Immunol.139:3521-3526；Sun等,(1987)PNAS 84:214-218；Nishimura等,1987,Canc.Res.47:999-1005；Wood等,(1985)Nature 314:446-449；和Shaw等,1988,J.Natl Cancer Inst.80:1553-1559)。
人源化或CDR移植抗体将具有(免疫球蛋白重链和/或轻链的)至少一个或两个但通常为所有三个受体CDR被供体CDR取代。抗体可用非人CDR的至少一部分取代，或者仅CDR中的一些可用非人CDR取代。仅需要取代结合至抗原所需数量的CDR。优选地，供体是啮齿动物抗体，例如，大鼠或小鼠抗体，受体将是人框架或人共有框架。通常，提供CDR的免疫球蛋白称为“供体”，提供框架的免疫球蛋白称为“受体”。在一个实施方案中，供体免疫球蛋白是非人(例如，啮齿动物)的。受体框架是天然存在的(例如，人)框架或共有框架，或与其约85％或更高，优选90％、95％、99％或更高相同的序列。
如本文所用，术语“共有序列”是指由相关序列家族中最频繁出现的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见例如，Winnaker,From Genes to Clones(Verlagsgesellschaft,Weinheim,Germany 1987)。在蛋白质家族中，共有序列中的每个位置被该家族中该位置最频繁出现的氨基酸占据。如果两个氨基酸出现的频率相同，则在共有序列中可以包括任一个。“共有框架”是指共有免疫球蛋白序列中的框架区。
抗体分子可以通过本领域已知的方法人源化(参见例如，Morrison,S.L.,1985,Science 229:1202-1207、Oi等,1986,BioTechniques 4:214，以及Queen等,US 5,585,089、US 5,693,761和US 5,693,762，其全部内容在此通过引用并入)。
人源化或CDR移植的抗体分子可以通过CDR移植或CDR取代产生，其中免疫球蛋白链的一个、两个或所有CDR可以被取代。参见例如，美国专利5,225,539；Jones等,1986Nature 321:552-525；Verhoeyan等,1988Science 239:1534；Beidler等,1988J.Immunol.141:4053-4060；Winter US 5,225,539，其全部内容在此明确地通过引用并入。Winter描述了可用于制备本发明的人源化抗体的CDR移植方法(1987年3月26日提交的UK专利申请GB 2188638A；Winter US 5,225,539)，其内容明确地通过引用并入。
其中特定氨基酸已被取代、缺失或添加的人源化抗体分子也在本发明的范围内。在US 5,585,089(例如，US 5,585,089的第12-16栏)中描述了从供体中选择氨基酸的标准，其内容在此通过引用并入。1992年12月23日公布的Padlan等,EP 519596A1中描述了使抗体人源化的其他技术。
抗体分子可以是单链抗体。单链抗体(scFV)可以是工程化的(参见例如，Colcher,D.等,(1999)Ann N Y Acad Sci 880:263-80；和Reiter,Y.(1996)Clin Cancer Res 2:245-52)。单链抗体可以二聚化或多聚化的，以生成对同一靶蛋白的不同表位具有特异性的多价抗体。
在其他实施方案中，抗体分子具有重链恒定区，选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE的重链恒定区；特别地，选自例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的(例如，人)重链恒定区。在另一实施方案中，抗体分子具有轻链恒定区，选自例如κ或λ的(例如，人)轻链恒定区。恒定区可以被改变(例如，突变)，以修改抗体的特性(例如，增加或减少以下中的一种或多种：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数量、效应细胞功能和/或补体功能)。在一个实施方案中，抗体具有：效应功能；并且可以固定补体。在其他实施方案中，抗体不会：招募效应细胞；或固定补体。在另一实施方案中，抗体结合Fc受体的能力降低或无该能力。例如，它是同种型或亚型、片段或其他突变体，其不支持结合至Fc受体，例如，它具有诱变的或缺失的Fc受体结合区。
改变抗体恒定区的方法是本领域已知的。具有功能改变(例如，对效应配体(例如细胞上的FcR)或补体的C1组分的亲和力改变)的抗体可以通过用不同残基取代抗体恒定部分中的至少一个氨基酸残基来产生(参见例如，EP 388,151A1、美国专利第5,624,821号和美国专利第5,648,260号，其全部内容在此通过引用并入)。可以描述相似类型的改变，如果将其施加至鼠或其他物种免疫球蛋白，将减少或消除这些功能。
抗体分子可以衍生化或与另一功能性分子(例如，另一肽或蛋白质)连接。如本文所用，“衍生化”抗体分子是已被修饰的抗体分子。衍生化方法包括但不限于加入荧光部分、放射性核苷酸、毒素、酶或亲和配体，例如生物素。因此，本发明的抗体分子旨在包括本文所述抗体的衍生化形式和其他修饰形式，包括免疫粘附分子。例如，抗体分子可以(通过化学偶联、基因融合、非共价缔合或其他方式)功能性地连接至一个或多个其他分子实体，例如另一种抗体(例如，双特异性抗体或双抗体)、可检测剂、细胞毒性剂、药剂和/或可介导抗体或抗体部分与另一分子(例如链霉亲和素核心区或多组氨酸标签)缔合的蛋白质或肽。
一种类型的衍生化抗体分子通过将(相同类型或不同类型，例如，产生双特异性抗体的)两种或更多种抗体交联来产生。合适的交联剂包括具有由合适间隔区分开的两个明显反应性基团的异双功能性交联剂(例如，间马来酰亚胺苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯)或同双功能性交联剂(例如，辛二酸二琥珀酰亚胺酯)。这些接头可从Pierce ChemicalCompany,Rockford,Ill获得。
多特异性或多功能性抗体分子
本文定义的多特异性和多功能性分子的示例性结构在全文中描述。示例性结构进一步描述于：Weidle U等,(2013)The Intriguing Options of Multispecific AntibodyFormats for Treatment of Cancer.Cancer Genomics&Proteomics 10:1-18(2013)；和Spiess C等,(2015)Alternative molecular formats and therapeutic applicationsfor bispecific antibodies.Molecular Immunology 67:95-106；其中每一个的全部内容通过引用并入本文)。
在实施方案中，多特异性抗体分子可以包含多于一个抗原结合位点，其中不同位点对不同抗原具有特异性。在实施方案中，多特异性抗体分子可以结合同一抗原上的多于一个(例如，两个或更多个)表位。在实施方案中，多特异性抗体分子包含对靶细胞(例如，癌细胞)具有特异性的抗原结合位点和对免疫效应细胞具有特异性的不同抗原结合位点。在一个实施方案中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。双特异性抗体分子可分为五个不同的结构组：(i)双特异性免疫球蛋白G(BsIgG)；(ii)附加有另外抗原结合部分的IgG；(iii)双特异性抗体片段；(iv)双特异性融合蛋白；以及(v)双特异性抗体缀合物。
BsIgG是每种抗原的单价形式。示例性BsIgG形式包括但不限于crossMab、DAF(二合一)、DAF(四合一)、DutaMab、DT-IgG、杵-臼共同LC、杵-臼组装件、电荷对、Fab臂交换、SEEDbody、triomab、LUZ-Y、Fcab、κλ体、正交Fab。参见Spiess等,Mol.Immunol.67(2015):95-106。示例性BsIgG包括卡妥索单抗(Fresenius Biotech，Trion Pharma，Neopharm)，其含有抗-CD3臂和抗-EpCAM臂；以及厄妥索单抗(Neovii Biotech，Fresenius Biotech)，其靶向CD3和HER2。在一些实施方案中，BsIgG包含经工程化用于异源二聚化。例如，可以使用“杵-臼”策略、SEED平台、(例如，κλ体内的)共同重链和使用异源二聚体Fc区将重链工程化用于异源二聚化。参见Spiess等,Mol.Immunol.67(2015):95-106。已用于避免BsIgG中同源二聚体的重链配对的策略包括杵-臼、duobody、azymetric、电荷对、HA-TF、SEEDbody和差异蛋白A亲和力。参见同上。可以通过在不同宿主细胞中分开表达组分抗体并随后纯化/装配为BsIgG来产生BsIgG。也可以通过在单个宿主细胞中表达组分抗体来产生BsIgG。BsIgG可以使用亲和层析(例如，使用蛋白A和连续pH洗脱)来纯化。
附加有另外抗原结合部分的IgG是双特异性抗体分子的另一种形式。例如，通过将另外抗原结合单元附加至单特异性IgG上，例如，重链或轻链的N-或C-末端处，单特异性IgG可以工程化为具有双特异性。示例性另外抗原结合单元包括单结构域抗体(例如，可变重链或可变轻链)、工程化蛋白质支架和成对的抗体可变结构域(例如，单链可变片段或可变片段)。参见同上。附加IgG形式的实例包括双可变结构域IgG(DVD-Ig)、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)IgG、IgG(L,H)-Fv、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、zybody和DVI-IgG(四合一)。参见Spiess等,Mol.Immunol.67(2015):95-106。IgG-scFv的实例是MM-141(MerrimackPharmaceuticals)，其结合IGF-1R和HER3。DVD-Ig的实例包括ABT-981(AbbVie)，其结合IL-1α和IL-1β；以及ABT-122(AbbVie)，其结合TNF和IL-17A。
双特异性抗体片段(BsAb)是缺乏抗体恒定结构域中的一些或全部的双特异性抗体分子的形式。例如，一些BsAb缺乏Fc区。在实施方案中，双特异性抗体片段包括通过允许BsAb在单个宿主细胞中有效表达的肽接头连接的重链和轻链区。示例性双特异性抗体片段包括但不限于纳米抗体、纳米抗体-HAS、BiTE、双抗体、DART、TandAb、scDiabody、scDiabody-CH3、双抗体-CH3、三联体、微型抗体、微抗体(minibody)、TriBi微抗体、scFv-CH3 KIH、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab’)2、F(ab’)2-scFv2、scFv-KIH、Fab-scFv-Fc、四价HCAb、scDiabody-Fc、双抗体-Fc、串联scFv-Fc和内抗体(intrabody)。参见同上。例如，BiTE形式包含串联scFv，其中组分scFv结合至T细胞上的CD3和癌细胞上的表面抗原。
双特异性融合蛋白包括与其他蛋白质连接的抗体片段，例如，以增加另外的特异性和/或功能性。双特异性融合蛋白的实例是immTAC，其包含与识别HLA呈递肽的亲和力成熟T细胞受体连接的抗CD3 scFv。在实施方案中，对接-锁定(DNL)方法可用于生成更高化合价的双特异性抗体分子。此外，与白蛋白结合蛋白或人血清白蛋白的融合可以延长抗体片段的血清半衰期。参见同上。
在实施方案中，化学缀合(例如，抗体和/或抗体片段的化学缀合)可以用于产生BsAb分子。参见同上。示例性双特异性抗体缀合物包括CovX-体形式，其中低分子量药物位点特异性缀合至每个Fab臂或抗体或其片段中的单个反应性赖氨酸。在实施方案中，缀合改善了低分子量药物的血清半衰期。示例性CovX-体是CVX-241(NCT01004822)，其包含与抑制VEGF或Ang2的两个短肽缀合的抗体。参见同上。
抗体分子可以通过在宿主系统中(例如，至少一种或多种组分的)重组表达来产生。示例性宿主系统包括真核细胞(例如，哺乳动物细胞(例如，CHO细胞)，或昆虫细胞(例如，SF9或S2细胞))和原核细胞(例如，大肠杆菌)。双特异性抗体分子可以通过在不同宿主细胞中分开表达组分并随后纯化/组装来产生。可替代地，抗体分子可以通过在单个宿主细胞中表达组分来产生。双特异性抗体分子的纯化可以通过各种方法进行，例如亲和层析，例如，使用蛋白A和连续pH洗脱。在其他实施方案中，亲和标签可用于纯化，例如，含组氨酸的标签、myc标签或链霉亲和素标签。
CDR移植支架
在实施方案中，抗体分子是CDR移植支架结构域。在实施方案中，支架结构域基于纤连蛋白结构域，例如，纤连蛋白III型结构域。纤连蛋白III型(Fn3)结构域的总折叠与最小功能性抗体片段(抗体重链的可变结构域)的总折叠密切相关。Fn3末端存在三个环；BC、DE和FG环的位置大致对应于抗体VH结构域的CDR1、2和3的位置。Fn3不具有二硫键；因此，与抗体及其片段不同，Fn3在还原条件下是稳定的(参见例如，WO98/56915；WO01/64942；WO00/34784)。Fn3结构域可以(例如，使用本文所述的CDR或高变环)修饰或改变，例如，以选择结合至本文所述的抗原/标记物/细胞的结构域。
在实施方案中，支架结构域(例如，折叠结构域)基于抗体，例如，通过从单克隆抗体的重链可变结构域缺失三条β链产生的“微抗体”支架(参见例如，Tramontano等,1994,JMol.Recognit.7:9；和Martin等,1994,EMBO J.13:5303-5309)。“微抗体”可用于提供两个高变环。在实施方案中，支架结构域是V-样结构域(参见例如，Coia等,WO99/45110)或来源于tendamistatin的结构域，其为通过两个二硫键保持在一起的74个残基六股β折叠片夹心(参见例如，McConnell和Hoess,1995,J Mol.Biol.250:460)。例如，tendamistatin的环可以(例如，使用CDR或高变环)修饰或改变，例如，以选择结合至本文所述的标记物/抗原/细胞的结构域。另一种示例性支架结构域是来源于CTLA-4胞外结构域的β-夹心结构(参见例如，WO00/60070)。
其他示例性支架结构域包括但不限于T细胞受体；MHC蛋白；胞外结构域(例如，纤连蛋白III型重复序列，EGF重复序列)；蛋白酶抑制剂(例如，Kunitz结构域、ecotin、BPTI等)；TPR重复序列；三叶草结构；锌指结构域；DNA结合蛋白；特别是单体DNA结合蛋白；RNA结合蛋白；酶，例如，蛋白酶(特别是灭活的蛋白酶)、RNA酶；伴侣蛋白，例如，硫氧还蛋白和热休克蛋白；以及胞内信号传导结构域(例如SH2和SH3结构域)。参见例如，US 20040009530和US 7,501,121，其通过引用并入本文。
在实施方案中，例如通过以下标准中的一个或多个评估和选择支架结构域：(1)氨基酸序列，(2)几个同源性结构域的序列，(3)三维结构，和/或(4)在pH、温度、盐度、有机溶剂、氧化剂浓度范围内的稳定性数据。在实施方案中，支架结构域是小的、稳定的蛋白质结构域，例如，少于100、70、50、40或30个氨基酸的蛋白质。结构域可包括一个或多个二硫键，或可螯合金属，例如，锌。
基于抗体的融合体
可以生成多种形式，其含有附接至抗体的N或C末端的另外结合实体。这些具有单链或二硫键稳定的Fv或Fab的融合体导致生成对每种抗原具有二价结合特异性的四价分子。scFv和scFab与IgG的组合使得能够产生可识别三种或更多种不同抗原的分子。
抗体-Fab融合体
抗体-Fab融合体是双特异性抗体，其包含与抗体重链C末端融合的第一靶的传统抗体和第二靶的Fab。通常，抗体和Fab将具有共同轻链。可以通过(1)使靶融合体的DNA序列工程化，和(2)将靶DNA转染至合适的宿主细胞中以表达融合蛋白来产生抗体融合体。如Coloma,J.等,(1997)Nature Biotech 15:159所述，似乎抗体-scFv融合体可通过CH3结构域的C-末端和scFv的N-末端之间的(Gly)-Ser接头连接。
抗体-scFv融合体
抗体-scFv融合体是双特异性抗体，其包含传统抗体和与抗体重链C末端融合的唯一特异性的scFv。scFv可以通过scFv的重链直接或通过接头肽与C末端融合。可以通过(1)使靶融合体的DNA序列工程化，和(2)将靶DNA转染至合适的宿主细胞中以表达融合蛋白来产生抗体融合体。如Coloma,J.等,(1997)Nature Biotech 15:159所述，似乎抗体-scFv融合体可通过CH3结构域的C-末端和scFv的N-末端之间的(Gly)-Ser接头连接。
可变结构域免疫球蛋白DVD
相关形式是双可变结构域免疫球蛋白(DVD)，其由通过较短接头序列在V结构域N末端的第二特异性位置的VH和VL结构域组成。
其他示例性多特异性抗体形式包括例如以下US 20160114057A1、US20130243775A1、US 20140051833、US 20130022601、US 20150017187A1、US20120201746A1、US 20150133638A1、US 20130266568A1、US 20160145340A1、WO2015127158A1、US 20150203591A1、US 20140322221A1、US 20130303396A1、US20110293613、US 20130017200A1、US 20160102135A1、WO2015197598A2、WO2015197582A1、US 9359437、US 20150018529、WO2016115274A1、WO2016087416A1、US 20080069820A1、US9145588B、US 7919257和US 20150232560A1中描述的那些。利用全抗体-Fab/scFab形式的示例性多特异性分子包括以下US 9382323B2、US 20140072581A1、US 20140308285A1、US20130165638A1、US 20130267686A1、US 20140377269A1、US 7741446B2和WO1995009917A1中描述的那些。利用结构域交换形式的示例性多特异性分子包括以下US 20150315296A1、WO2016087650A1、US 20160075785A1、WO2016016299A1、US 20160130347A1、US20150166670、US 8703132B2、US 20100316645、US 8227577B2、US 20130078249中描述的那些。
含Fc的实体(微型抗体)
含Fc的实体(也称为微型抗体)可以通过将scFv与恒定重链区结构域3的C-末端(CH3-scFv)和/或与具有不同特异性的抗体的铰链区(scFv-铰链-Fc)融合来产生。还可以制备三价实体，其具有与IgG CH3结构域C-末端融合的二硫键稳定的可变结构域(无肽接头)。
含Fc的多特异性分子
在一些实施方案中，本文公开的多特异性分子包括免疫球蛋白恒定区(例如，Fc区)。示例性Fc区可以选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区；更特别地，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区。
在一些实施方案中，免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)被改变(例如，突变)，以增加或减少以下中的一种或多种：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数量、效应细胞功能或补体功能。
在其他实施方案中，第一和第二免疫球蛋白链恒定区(例如，第一和第二Fc区)的界面被改变(例如，突变)，以例如相对于非工程化界面(例如，天然存在的界面)增加或减少二聚化。例如，免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)的二聚化可以通过提供具有以下中的一种或多种的第一和第二Fc区的Fc界面来增强：成对突起-空腔(“杵-臼”)、静电相互作用或链交换，使得例如相对于非工程化界面形成更大比率的异源多聚体与同源多聚体。
在一些实施方案中，多特异性分子在选自例如人IgG1 Fc区的347、349、350、351、366、368、370、392、394、395、397、398、399、405、407或409中的一个或多个位置处包括配对的氨基酸取代。例如，免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)可以包括选自以下的配对的氨基酸取代：T366S、L368A或Y407V(例如，对应于空腔或臼)和T366W(例如，对应于突起或杵)。
在其他实施方案中，多功能性分子包括半衰期延长剂，例如，人血清白蛋白或人血清白蛋白的抗体分子。
异源二聚化抗体分子及制备方法
已经公开了各种产生多特异性抗体的方法，以解决重链配对不正确的问题。下文描述了示例性方法。示例性多特异性抗体形式和制备所述多特异性抗体的方法也公开于例如Speiss等,Molecular Immunology 67(2015)95-106；和Klein等,mAbs 4:6,653-663；2012年11月/12月；其中每一个的整体内容通过引用并入本文。
异源二聚化双特异性抗体基于天然IgG结构，其中两个结合臂识别不同抗原。通过强制重链异源二聚化，结合使轻链错配(例如，共同轻链)最小化的技术，生成能够限定单价(和同时)抗原结合的IgG衍生化形式。可以使用例如杵-臼或链交换工程化结构域(SEED)来获得强制重链异源二聚化。
杵-臼
如US 5,731,116、US 7,476,724和Ridgway,J.等,(1996)Prot.Engineering 9(7):617-621中描述的杵-臼，广义上涉及：(1)突变一种或两种抗体的CH3结构域以促进异源二聚化；和(2)在促进异源二聚化的条件下组合突变的抗体。“杵”或“突起”通常通过用较大氨基酸取代亲本抗体中的小氨基酸(例如，T366Y或T366W)来产生；“臼”或“空腔”通过用较小氨基酸取代亲本抗体中的较大残基(例如，Y407T、T366S、L368A和/或Y407V)来产生。
对于包括Fc结构域的双特异性抗体，可以利用将特定突变引入重链的恒定区以促进Fc部分正确异源二聚化。Klein等(mAbs(2012)4:6,1-11)综述了几种这种技术，其内容通过引用以其整体并入本文。这些技术包括“杵-臼”(KiH)方法，其涉及将大残基引入抗体重链中的一条的CH3结构域中的一个。这种大残基纳入配对重链另一个CH3结构域中的互补“臼”中，以便促进重链正确配对(参见例如，US 7642228)。
示例性KiH突变包括“杵”重链中的S354C、T366W以及“臼”重链中的Y349C、T366S、L368A、Y407V。其他示例性KiH突变在表1中提供，具有另外任选的稳定化Fc半胱氨酸突变。
表1.示例性Fc KiH突变和任选的半胱氨酸突变
Figure BDA0004017031980000991
Igawa和Tsunoda提供了其他Fc突变，他们在一条链的CH3结构域中鉴定了三个带负电荷的残基，其与另一条链CH3结构域中的三个带正电荷的残基配对。这些特定的带电荷的残基对是：E356-K439、E357-K370、D399-K409，反之亦然。通过单独在链A中引入以下三种突变中的至少两种：E356K、E357K和D399K，以及链B中的K370E、K409D、K439E，或与新鉴定的二硫键结合，它们能够促进非常有效的异源二聚化，同时抑制同源二聚化(Martens T等,Anovel one-armed antic-Met antibody inhibits glioblastoma growth in vivo.ClinCancer Res2006；12:6144-52；PMID:17062691)。Xencor基于结合结构计算和序列信息定义了41种变体对，随后筛选出最大异源二聚体，定义了链A上的S364H、F405A(HA)和链B上的Y349T、T394F(TF)的组合(Moore Gl等,A novel bispecific antibody format enablessimultaneous bivalent and monovalent co-engagement of distinct targetantigens.MAbs 2011；3:546-57；PMID:22123055)。
促进多特异性抗体的异源二聚化的其他示例性Fc突变包括以下参考文献中描述的那些，其中每一个的内容通过引用并入本文，WO2016071377A1、US 20140079689A1、US20160194389A1、US20160257763、WO2016071376A2、WO2015107026A1、WO2015107025A1、WO2015107015A1、US 20150353636A1、US 20140199294A1、US7750128B2、US20160229915A1、US 20150344570A1、US 8003774A1、US 20150337049A1、US20150175707A1、US 20140242075A1、US20130195849A1、US 20120149876A1、US20140200331A1、US 9309311B2、US 8586713、US 20140037621A1、US 20130178605A1、US20140363426A1、US 20140051835A1和US 20110054151A1。
稳定化半胱氨酸突变也已与KiH和其他Fc异源二聚化促进变体组合使用，参见例如，US 7183076。其他示例性半胱氨酸修饰包括例如US20140348839A1、US 7855275B2和US9000130B2中公开的那些。
链交换工程化结构域(SEED)
通过发明链交换工程化结构域(SEED)C(H)3异源二聚体支持双特异性和不对称融合蛋白的设计的异源二聚体Fc平台是已知的。人IgG和IgA C(H)3结构域的这些衍生物产生互补的人SEED C(H)3异源二聚体，其由人IgA和IgG C(H)3序列的交替区段组成。当在哺乳动物细胞中表达时，所得SEED C(H)3结构域对优先缔合形成异源二聚体。SEEDbody(Sb)融合蛋白由[IgG1铰链]-C(H)2-[SEED C(H)3]组成，其可与一种或多种融合伴侣遗传连接(参见例如，Davis Jh等,SEEDbodies:fusion proteins based on strand exchangeengineered domain(SEED)CH3heterodimers in an Fc analogue platform forasymmetric binders or immunofusions and bispecific antibodies.Protein Eng DesSel 2010；23:195-202；PMID:20299542和US 8871912。其中每一个的内容通过引用并入本文)。
Duobody
产生具有正确重链配对的双特异性抗体的“Duobody”技术是已知的。DuoBody技术涉及三个基本步骤，以在生产后的交换反应中生成稳定的双特异性人IgG1抗体。在第一步中，使用标准哺乳动物重组细胞系分别产生两个IgG1，每个IgG1在第三恒定(CH3)结构域中含有单一配对突变。随后，根据回收和纯化的标准过程纯化这些IgG1抗体。在生产和纯化之后(生产后)，两种抗体在特制实验室条件下重组，产生产率非常高(通常>95％)的双特异性抗体产物(参见例如，Labrijn等,PNAS 2013；110(13):5145-5150和Labrijn等,NatureProtocols2014；9(10):2450-63，其中每一个的内容通过引用并入本文)。
静电相互作用
公开了使用含带电荷的氨基酸的CH3氨基酸改变来制备多特异性抗体的方法，使得同源二聚体形成是静电上不利的。EP 1870459和WO2009089004描述了在宿主细胞中共表达不同抗体结构域时促进异源二聚体形成的其他策略。在这些方法中，用带电荷的氨基酸取代两个CH3结构域中构成重链恒定结构域3(CH3)、CH3-CH3界面的一个或多个残基，使得同源二聚体形成是静电上不利的，而异源二聚化是静电上有利的。使用静电相互作用来制备多特异性分子的另外的方法在以下参考文献中描述，其中每一个的内容通过引用并入本文，包括US20100015133、US 8592562B2、US 9200060B2、US 20140154254A1和US9358286A1。
共同轻链
需要避免轻链错配，以生成双特异性IgG的均一制剂。实现其的一种方式是通过使用共同轻链原理，即组合共享一条轻链但仍具有单独特异性的两种结合物。提高从单体混合物形成所需双特异性抗体的示例性方法是通过提供与双特异性抗体的异聚化可变重链区中的每一个相互作用的共同可变轻链。如例如US 7183076B2、US 20110177073A1、EP2847231A1、WO2016079081A1和EP 3055329A1中公开的产生具有共同轻链的双特异性抗体的组合物和方法，其中每一个的内容通过引用并入本文。
CrossMab
减少轻链错配的另一种选择是CrossMab技术，其通过交换一半双特异性抗体的Fab中的CH1和CL结构域来避免非特异性L链错配。这种交叉变体保留了结合特异性和亲和力，但使两个臂如此不同以致防止了L链错配。CrossMab技术(如Klein等同上中综述的)涉及重链和轻链之间的结构域交换，以便促进形成正确配对。简言之，为了构建可通过使用两个不同的轻链-重链对结合至两种抗原的双特异性IgG样CrossMab抗体，应用两步修饰过程。首先，使用异源二聚化方法(例如，杵-臼(KiH)技术)将二聚化界面工程化为每条重链的C-末端，以确保仅有效地形成来自一个抗体(例如，抗体A)和第二抗体(例如，抗体B)的两条不同重链的异源二聚体。接着，交换一个抗体(抗体A)的恒定重链1(CH1)和恒定轻链(CL)结构域，保持可变重链(VH)和可变轻链(VL)结构域一致。CH1和CL结构域的交换确保修饰的抗体(抗体A)轻链仅有效地与修饰的抗体(抗体A)重链二聚化，而未修饰的抗体(抗体B)轻链仅有效地与未修饰的抗体(抗体B)重链二聚化；因此，只有所需的双特异性CrossMab才能有效地形成(参见例如，Cain,C.SciBX 4(28)；doi:10.1038/scibx.2011.783，其内容通过引用并入本文)。
共同重链
提高从单体混合物形成所需双特异性抗体的示例性方法是通过提供与双特异性抗体的异聚化可变轻链区中的每一个相互作用的共同可变重链。例如US 20120184716、US20130317200和US 20160264685A1中公开了产生具有共同重链的双特异性抗体的组合物和方法，其中每一个的内容通过引用并入本文。
氨基酸修饰
产生具有正确轻链配对的多特异性抗体的替代组合物和方法包括各种氨基酸修饰。例如，Zymeworks描述了在CH1和/或CL结构域中具有一个或多个氨基酸修饰、在VH和/或VL结构域中具有一个或多个氨基酸修饰或其组合的异源二聚体，其是轻链和重链之间的界面的一部分，并且在每条重链和所需轻链之间产生优先配对，使得当异源二聚体对的两条重链和两条轻链在细胞中共表达时，第一异源二聚体的重链优先与轻链中的一条而不是另一条配对(参见例如，WO2015181805)。在WO2016026943(Argen-X)、US 20150211001、US20140072581A1、US 20160039947A1和US 20150368352中描述了其他示例性方法。
λ/κ形式
包括λ轻链多肽和κ轻链多肽的多特异性分子(例如，多特异性抗体分子)可用于允许异源二聚化。2017年9月22日提交的PCT/US17/53053中公开了生成包含λ轻链多肽和κ轻链多肽的双特异性抗体分子的方法，通过引用以其整体并入本文。
在实施方案中，多特异性分子包括多特异性抗体分子，例如，包含两种结合特异性的抗体分子，例如，双特异性抗体分子。多特异性抗体分子包括：
对第一表位具有特异性的λ轻链多肽1(LLCP1)；
对第一表位具有特异性的重链多肽1(HCP1)；
对第二表位具有特异性的κ轻链多肽2(KLCP2)；以及
对第二表位具有特异性的重链多肽2(HCP2)。
如本文所用，术语“λ轻链多肽1(LLCP1)”是指包含足够轻链(LC)序列的多肽，使得当与同源重链可变区组合时，可以介导与其表位的特异性结合并与HCP1复合。在实施方案中，它包含CH1区的全部或片段。在实施方案中，LLCP1包含LC-CDR1、LC-CDR2、LC-CDR3、FR1、FR2、FR3、FR4和CH1，或足以介导其表位的特异性结合并与HCP1复合的序列。LLCP1与其HCP1一起提供对第一表位的特异性(而KLCP2与其HCP2一起提供对第二表位的特异性)。如本文别处所述，LLCP1对HCP1比对HCP2具有更高的亲和力。
如本文所用，术语“κ轻链多肽2(KLCP2)”是指包含足够轻链(LC)序列的多肽，使得当与同源重链可变区组合时，可以介导与其表位的特异性结合并与HCP2复合。在实施方案中，它包含CH1区的全部或片段。在实施方案中，KLCP2包含LC-CDR1、LC-CDR2、LC-CDR3、FR1、FR2、FR3、FR4和CH1，或足以介导其表位的特异性结合并与HCP2复合的序列。KLCP2与其HCP2一起提供对第二表位的特异性(而LLCP1与其HCP1一起提供对第一表位的特异性)。
如本文所用，术语“重链多肽1(HCP1)”是指包含足够重链(HC)序列(例如，HC可变区序列)的多肽，使得当与同源LLCP1组合时，可以介导与其表位的特异性结合并与HCP1复合。在实施方案中，它包含CH1区的全部或片段。在实施方案中，它包含CH2和/或CH3区的全部或片段。在实施方案中，HCP1包含HC-CDR1、HC-CDR2、HC-CDR3、FR1、FR2、FR3、FR4、CH1、CH2和CH3，或足以：(i)介导其表位的特异性结合并与LLCP1复合，(ii)如本文所述优先与LLCP1而不是KLCP2复合；以及(iii)如本文所述优先与HCP2而不是HCP1的另一分子复合的序列。HCP1与其LLCP1一起提供对第一表位的特异性(而KLCP2与其HCP2一起提供对第二表位的特异性)。
如本文所用，术语“重链多肽2(HCP2)”是指包含足够重链(HC)序列(例如，HC可变区序列)的多肽，使得当与同源LLCP1组合时，可以介导与其表位的特异性结合并与HCP1复合。在实施方案中，它包含CH1区的全部或片段。在实施方案中，它包含CH2和/或CH3区的全部或片段。在实施方案中，HCP1包含HC-CDR1、HC-CDR2、HC-CDR3、FR1、FR2、FR3、FR4、CH1、CH2和CH3，或足以：(i)介导其表位的特异性结合并与KLCP2复合，(ii)如本文所述优先与KLCP2而不是LLCP1复合；以及(iii)如本文所述优先与HCP1而不是HCP2的另一分子复合的序列。HCP2与其KLCP2一起提供对第二表位的特异性(而LLCP1与其HCP1一起提供对第一表位的特异性)。
在本文公开的多特异性抗体分子的一些实施方案中：
LLCP1对HCP1比对HCP2具有更高的亲和力；和/或
KLCP2对HCP2比对HCP1具有更高的亲和力。
在实施方案中，LLCP1对HCP1的亲和力充分大于其对HCP2的亲和力，使得在预选条件下，例如，在水性缓冲液中，例如，在pH 7的盐水中，例如，在pH 7或在生理条件下，至少75％、80％、90％、95％、98％、99％、99.5％或99.9％的多特异性抗体分子具有与HCP1复合或连接的LLCP1。
在本文公开的多特异性抗体分子的一些实施方案中：
HCP1对HCP2比对HCP1的第二分子具有更大的亲和力；和/或
HCP2对HCP1比对HCP2的第二分子具有更大的亲和力。
在实施方案中，HCP1对HCP2的亲和力充分大于其对HCP1的第二分子的亲和力，使得在预选条件下，例如，在水性缓冲液中，例如，在pH 7的盐水中，例如，在pH 7或在生理条件下，至少75％、80％、90％、95％、98％、99％、99.5％或99.9％的多特异性抗体分子具有与HCP2复合或连接的HCP1。
在另一方面，本文公开了一种制备或产生多特异性抗体分子的方法。该方法包括：在(i)-(iv)缔合的条件下，
(i)提供第一重链多肽(例如，包含第一重链可变区(第一VH)、第一CH1、第一重链恒定区(例如，第一CH2、第一CH3或两者)中的一个、两个、三个或全部的重链多肽)；
(ii)提供第二重链多肽(例如，包含第二重链可变区(第二VH)、第二CH1、第二重链恒定区(例如，第二CH2、第二CH3或两者)中的一个、两个、三个或全部的重链多肽)；
(iii)提供优先与第一重链多肽(例如，第一VH)缔合的λ链多肽(例如，λ轻链可变区(VLλ)、λ轻链恒定链(VLλ)或两者)；以及
(iv)提供优先与第二重链多肽(例如，第二VH)缔合的κ链多肽(例如，λ轻链可变区(VLκ)、λ轻链恒定链(VLκ)或两者)。
在实施方案中，第一和第二重链多肽形成增强异源二聚化的Fc界面。
在实施方案中，将(i)-(iv)(例如，编码(i)-(iv)的核酸)导入单个细胞，例如，单个哺乳动物细胞，例如，CHO细胞。在实施方案中，(i)-(iv)在细胞中表达。
在实施方案中，将(i)-(iv)(例如，编码(i)-(iv)的核酸)导入不同细胞，例如，不同的哺乳动物细胞，例如，两种或更多种CHO细胞。在实施方案中，(i)-(iv)在细胞中表达。
在一个实施方案中，该方法进一步包括纯化细胞表达的抗体分子，例如，使用λ和/或κ特异性纯化，例如，亲和层析。
在实施方案中，该方法进一步包括评估细胞表达的多特异性抗体分子。例如，纯化的细胞表达的多特异性抗体分子可以通过本领域已知的技术进行分析，包括质谱。在一个实施方案中，纯化的细胞表达的抗体分子被裂解，例如，用木瓜蛋白酶消化以产生Fab部分，并使用质谱进行评估。
在实施方案中，该方法以高产率(例如，至少75％、80％、90％、95％、98％、99％、99.5％或99.9％)产生正确配对的κ/λ多特异性(例如，双特异性)抗体分子。
在其他实施方案中，多特异性(例如，双特异性)抗体分子包括：
(i)第一重链多肽(HCP1)(例如，包含第一重链可变区(第一VH)、第一CH1、第一重链恒定区(例如，第一CH2、第一CH3或两者)中的一个、两个、三个或全部的重链多肽)，例如，其中HCP1结合至第一表位；
(ii)第二重链多肽(HCP2)(例如，包含第二重链可变区(第二VH)、第二CH1、第二重链恒定区(例如，第二CH2、第二CH3或两者)中的一个、两个、三个或全部的重链多肽)，例如，其中HCP2结合至第二表位；
(iii)优先与第一重链多肽(例如，第一VH)缔合的λ轻链多肽(LLCP1)(例如，λ轻链可变区(VL1)、λ轻链恒定链(VL1)或两者)，例如，其中LLCP1结合至第一表位；以及
(iv)提供优先与第二重链多肽(例如，第二VH)缔合的κ轻链多肽(KLCP2)(例如，λ轻链可变区(VLk)、λ轻链恒定链(VLk)或两者)，例如，其中KLCP2结合至第二表位。
在实施方案中，第一和第二重链多肽形成增强异源二聚化的Fc界面。在实施方案中，多特异性抗体分子具有第一结合特异性和第二结合特异性，第一结合特异性包括与连接至Fc恒定区CH2-CH3结构域的第一重链可变区异源二聚化的杂合VL1-CL1(具有杵修饰)，第二结合特异性包括与连接至Fc恒定区CH2-CH3结构域的第二重链可变区异源二聚化的杂合VLk-CLk(具有臼修饰)。
TRBC1和TRBC2抗原结合结构域
本发明尤其提供了抗体分子，例如，多特异性(例如，双特异性、三特异性、四特异性)或多功能性分子，其包括例如工程化为含有一个或多个结合至淋巴瘤细胞(例如，T细胞)上的肿瘤抗原的抗原结合结构域。在一些实施方案中，肿瘤抗原包含T细胞受体，该T细胞受体包含TRBC1或TRBC2。在一些实施方案中，抗原结合结构域优先结合至包含TRBC1的T细胞受体(例如，相对于包含TRBC2的T细胞受体)。在一些实施方案中，抗原结合结构域优先结合至包含TRBC2的T细胞受体(例如，相对于包含TRBC1的T细胞受体)。在一些实施方案中，多功能性分子包括例如工程化为含有一个或多个选择性地靶向表达TRBC1或TRBC2的淋巴细胞的抗原结合结构域。在一些实施方案中，抗原结合结构域选择性地靶向表达包含TRBC1的T细胞受体或包含TRBC2的T细胞受体的淋巴细胞。
T细胞受体(TCR)是在淋巴细胞表面、特别是在T淋巴细胞(T细胞)上存在的受体。TCR负责通过相关CD3的信号传导和活化T细胞来识别由其他免疫细胞(例如，B细胞)上的主要组织相容性复合体(MHC)分子呈递的抗原片段。人类中绝大多数的TCR是包含α链和β链的异源二聚体。TCR的α和β链都包含可变区和恒定区。α和β链的可变区由不同的DNA元件(β链为V、D和J元件；α链为V和J元件)编码。这些元件之间的重组在很大程度上产生TCR抗原结合特异性的变化。TCRβ链恒定区选自两个不同的结构域，β恒定结构域1和β恒定结构域2。不希望受理论束缚，认为大多数包含β链的TCR包含含有β恒定结构域1或β恒定结构域2，而非恒定结构域1和恒定结构域2的β链。
在一些实施方案中，本申请的多功能性或多特异性分子或抗体分子包含结合至淋巴瘤细胞(例如，T细胞)上的肿瘤抗原(例如，包含TRBC1的T细胞受体、TRBC1、包含TRBC2的T细胞受体或TRBC2)的抗原结合结构域。在一些实施方案中，本申请的多功能性或多特异性分子或抗体分子包含选择性地靶向表达包含TRBC1的T细胞受体、TRBC1、包含TRBC2的T细胞受体或TRBC2的淋巴细胞的抗原结合结构域。尽管呈递包含TRBC1或TRBC2的T细胞受体的淋巴细胞或淋巴瘤细胞最典型地是T细胞，但癌症导致非疾病表达模式的许多破坏。因此，在一些实施方案中，淋巴瘤细胞或淋巴细胞可能不是T细胞。在一些实施方案中，淋巴瘤细胞或淋巴细胞是B细胞。在一些实施方案中，淋巴瘤细胞或淋巴细胞是自然杀伤细胞。
在一些实施方案中，抗原结合结构域(例如，第一抗原结合结构域)包含本领域已知的抗TRBC1抗体的任何CDR氨基酸序列、框架区(FWR)氨基酸序列或可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，CDR氨基酸序列、框架区(FWR)氨基酸序列或可变区氨基酸序列选自JOVI.1。
TRBC1抗原结合结构域
在一些实施方案中，结合至TRBC1的抗原结合结构域包含表2A或表2B、表3A或表3B或表4中公开的一个或多个CDR(例如，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和/或VLCDR3)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至TRBC1的抗原结合结构域包含表2A或表2B、表3A或表3B或表4中公开的一个或多个框架区(例如，VHFWR1、VHFWR2、VHFWR3、VHFWR4、VLFWR1、VLFWR2、VLFWR3和/或VLFWR4)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至TRBC1的抗原结合结构域包含表7中公开的VH和/或VL，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至TRBC1的抗原结合结构域包含表8中公开的氨基酸序列，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
在一些实施方案中，结合至TRBC1的抗原结合结构域包含表5和/或3B中公开的一个或多个CDR(例如，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和/或VLCDR3)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至TRBC1的抗原结合结构域包含表5和/或3B中公开的一个或多个框架区(例如，VHFWR1、VHFWR2、VHFWR3、VHFWR4、VLFWR1、VLFWR2、VLFWR3和/或VLFWR4)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至TRBC1的抗原结合结构域包含表7中公开的VH和/或VL，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
在一些实施方案中，结合至TRBC1的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含重链互补决定区1(VHCDR1)、VHCDR2和VHCDR3，该VL包含轻链互补决定区1(VLCDR1)、VLCDR2和VLCDR3。
在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7346、7355和202的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7346、201和202的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7354、201和202的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ IDNO:7354、7355和202的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:223、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7367、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:223、7368和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ IDNO:223、224和7369的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7367、7368和7369的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7346、7355、202、223、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7346、201、202、223、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:7346、7355、202、7367、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、7355、202、223、7368和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、7355、202、223、224和7369(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、7355、202、7367、7368和7369(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ IDNO:7346、201、202、7367、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、201、202、223、7368和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、201、202、223、224和7369(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、201、202、7367、7368和7369(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7354、201、202、223、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7354、201、202、7367、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7354、201、202、223、7368和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7354、201、202、223、224和7369(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7354、201、202、7367、7368和7369(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7354、7355、202、223、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7354、7355、202、7367、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7354、7355、202、223、7368和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7354、7355、202、223、224和7369(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；或SEQ ID NO:7354、7355、202、7367、7368和7369(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VH包含选自SEQ ID NO:7351、253、250-252、254、7343、7344、7350和7352的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，和/或VL包含选自SEQ ID NO:258、255-257、259、260和7357-7360的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7351和258的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:253和258的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，结合至淋巴瘤细胞(例如，T细胞)上的肿瘤抗原(例如，包含TRBC1的T细胞受体、TRBC1、包含TRBC2的T细胞受体或TRBC2)的抗原结合结构域(例如，第一抗原结合结构域)包含表1、表2A或表2B、表3A或表3B、表4、表7和表8的任何CDR氨基酸序列、框架区(FWR)氨基酸序列或可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，结合至淋巴瘤细胞(例如，T细胞)上的肿瘤抗原(例如，包含TRBC1的T细胞受体、TRBC1、包含TRBC2的T细胞受体或TRBC2)的抗原结合结构域(例如，第一抗原结合结构域)包含表8的重链和/或轻链氨基酸序列。在一些实施方案中，选择性地靶向表达包含TRBC1的T细胞受体、TRBC1、包含TRBC2的T细胞受体或TRBC2的淋巴细胞的抗原结合结构域(例如，第一抗原结合结构域)包含表1、表2A或表2B、表3A或表3B、表4、表7和表8中公开的任何CDR氨基酸序列、框架区(FWR)氨基酸序列或可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，选择性地靶向表达包含TRBC1的T细胞受体、TRBC1、包含TRBC2的T细胞受体或TRBC2的淋巴细胞的抗原结合结构域(例如，第一抗原结合结构域)包含表8的重链和/或轻链氨基酸序列。结合至包含TRBC1的肿瘤抗原或选择性地靶向表达TRBC1的淋巴细胞的抗原结合结构域可被称为靶向TRBC1(即，TRBC1靶向性抗原结合结构域)。结合至包含TRBC2的肿瘤抗原或选择性地靶向表达TRBC2的淋巴细胞的抗原结合结构域可被称为靶向TRBC2(即，TRBC2靶向性抗原结合结构域)。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:200的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:201的VHCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:202的VHCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。在一些实施方案中，TRBC1抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:200的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:201的VHCDR2氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:202的VHCDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:223的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:224的VLCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:225的VLCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:223的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:224的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:225的VLCDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:203的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:204的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:205的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:206的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:226的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:227的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:228的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:229的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:203的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ IDNO:204的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:205的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:206的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:226的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:227的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:228的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:229的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:207的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:208的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:209的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:210的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:207的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ IDNO:208的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:209的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:210的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:211的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:212的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:213的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:214的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:211的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ IDNO:212的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:213的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:214的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:215的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:216的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:217的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:218的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:215的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ IDNO:216的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:217的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:218的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:219的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:220的VHFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:221的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:222的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:219的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ IDNO:220的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:221的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:222的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:230的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:231的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:232的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:233的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:230的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:231的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:232的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:233的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:234的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:235的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:236的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:237的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:234的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:235的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:236的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:237的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:238的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:239的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:240的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:241的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:238的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:239的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:240的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:241的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:242的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:243的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:244的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:245的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:242的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:243的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:244的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:245的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:246的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:247的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:248的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:249的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:246的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:247的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:248的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:249的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:250的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:250具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:255的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:255具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQID NO:250的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:255的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ IDNO:250的氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:255的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:251的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:251具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:251的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:252的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:252具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:252的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:253的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:253具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:253的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:254的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:254具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:254的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:256的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:256具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:256的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:257的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:257具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:257的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:258的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:258具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:258的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:259的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:259具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:259的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:260的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:260具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:260的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含重链，该重链包含SEQ IDNO:6154的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6154具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含重链，该重链包含SEQ IDNO:6154的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含重链，该重链包含SEQ IDNO:6155的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6155具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含重链，该重链包含SEQ IDNO:6155的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含轻链，该轻链包含SEQ IDNO:6156的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6156具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含轻链，该轻链包含SEQ IDNO:6156的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含重链，该重链包含SEQ IDNO:6167的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6167具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含重链，该重链包含SEQ IDNO:6167的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含重链，该重链包含SEQ IDNO:6168的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6168具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含重链，该重链包含SEQ IDNO:6168的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含轻链，该轻链包含SEQ IDNO:6169的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6169具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含轻链，该轻链包含SEQ IDNO:6169的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:6154的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6154具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，该轻链包含SEQ ID NO:6156的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6156具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:6154的氨基酸序列，该轻链包含SEQID NO:6156的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:6155的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6155具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，该轻链包含SEQ ID NO:6156的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6156具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:6155的氨基酸序列，该轻链包含SEQID NO:6156的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:6167的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6167具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，该轻链包含SEQ ID NO:6169的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6169具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:6167的氨基酸序列，该轻链包含SEQID NO:6169的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:6168的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6168具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，该轻链包含SEQ ID NO:6169的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6169具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向TRBC1的抗原结合结构域包含重链和轻链，该重链包含SEQ ID NO:6168的氨基酸序列，该轻链包含SEQID NO:6169的氨基酸序列。
表2A.来源于JOVI.1的TRBC1靶向性抗原结合结构域的示例性重链CDR和FWR(根据Kabat编号惯例)
Figure BDA0004017031980001211
/>
Figure BDA0004017031980001221
表2B.表2A中所示的来源于JOVI.1的TRBC1靶向性抗原结合结构域的示例性重链CDR和FWR(根据ABM编号惯例)
Figure BDA0004017031980001231
/>
Figure BDA0004017031980001241
表3A.来源于JOVI.1的TRBC1靶向性抗原结合结构域的示例性重链CDR和FWR(根据Kabat编号方案)
Figure BDA0004017031980001242
/>
Figure BDA0004017031980001251
/>
Figure BDA0004017031980001261
/>
Figure BDA0004017031980001271
表3B.表3A的来源于JOVI.1的TRBC1靶向性抗原结合结构域的示例性重链CDR和FWR(根据ABM编号方案)
Figure BDA0004017031980001272
/>
Figure BDA0004017031980001281
/>
Figure BDA0004017031980001291
/>
Figure BDA0004017031980001301
表4.来源于JOVI.1的TRBC1靶向性抗原结合结构域的示例性轻链CDR和FWR(根据Kabat编号方案)
Figure BDA0004017031980001302
/>
Figure BDA0004017031980001311
/>
Figure BDA0004017031980001321
/>
Figure BDA0004017031980001331
表5A.TRBC1靶向性抗原结合结构域的示例性重链CDR和FWR(根据Kabat编号方案)
Figure BDA0004017031980001332
/>
Figure BDA0004017031980001341
表5B.表5A的TRBC1靶向性抗原结合结构域的示例性重链CDR和FWR(根据ABM编号方案)
Figure BDA0004017031980001351
/>
Figure BDA0004017031980001361
表6.TRBC1靶向性抗原结合结构域的示例性轻链CDR和FWR(根据Kabat编号方案)
Figure BDA0004017031980001362
/>
Figure BDA0004017031980001371
/>
Figure BDA0004017031980001381
表7.TRBC1靶向性抗原结合结构域的示例性可变区
Figure BDA0004017031980001382
/>
Figure BDA0004017031980001391
/>
Figure BDA0004017031980001401
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Figure BDA0004017031980001411
/>
Figure BDA0004017031980001421
表8.示例性TRBC1靶向性抗原结合结构域/抗体分子
Figure BDA0004017031980001422
/>
Figure BDA0004017031980001431
/>
Figure BDA0004017031980001441
/>
Figure BDA0004017031980001451
TRBC2抗原结合结构域
在一些实施方案中，结合至TRBC2的抗原结合结构域包含表9或表10中公开的一个或多个CDR(例如，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和/或VLCDR3)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至TRBC2的抗原结合结构域包含表9或表10中公开的一个或多个框架区(例如，VHFWR1、VHFWR2、VHFWR3、VHFWR4、VLFWR1、VLFWR2、VLFWR3和/或VLFWR4)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至TRBC2的抗原结合结构域包含表11中公开的VH和/或VL，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至TRBC2的抗原结合结构域包含表12中公开的氨基酸序列，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
在一些实施方案中，结合至TRBC2的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含重链互补决定区1(VHCDR1)、VHCDR2和VHCDR3，该VL包含轻链互补决定区1(VLCDR1)、VLCDR2和VLCDR3。
在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7441、201和7442的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7422、201和7403的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7401、201和7403的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ IDNO:7394、201和7396的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7346、201和7398的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7346、201和7400的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7405、201和7403的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7407、201和7403的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7427、201和7403的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7430、201和7403的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7443、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7410、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7409、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7441、201、7442、7443、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7422、201、7403、7410、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7401、201、7403、7410、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:7394、201、7396、7410、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、201、7398、7410、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、201、7400、7410、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7405、201、7403、7410、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7407、201、7403、7410、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7427、201、7403、7410、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7430、201、7403、7410、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7422、201、7403、7409、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7401、201、7403、7409、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ IDNO:7394、201、7396、7409、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、201、7398、7409、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、201、7400、7409、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7405、201、7403、7409、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7407、201、7403、7409、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7427、201、7403、7409、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；或SEQ ID NO:7430、201、7403、7409、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VH包含选自SEQ ID NO:7420、7423、7411、7412、7413、7414、7415、7416、7417、7425、7428和7431的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，和/或VL包含选自SEQ ID NO:7419和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7420和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7423和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7411和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7412和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7413和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7414和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7415和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7416和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7417和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7425和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7428和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7431和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7420和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ IDNO:7423和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7411和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7412和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7413和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7414和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7415和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7416和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7417和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7425和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7428和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7431和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，结合至TRBC2的抗原结合结构域包含选自SEQ ID NO:7433、7434、7435、7436和7437的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
表9A.TRBC2靶向性抗原结合结构域的示例性重链CDR和FWR(根据Kabat编号方案)
Figure BDA0004017031980001501
/>
Figure BDA0004017031980001511
/>
Figure BDA0004017031980001521
/>
Figure BDA0004017031980001531
/>
Figure BDA0004017031980001541
表9B.表9A的TRBC2靶向性抗原结合结构域的示例性重链CDR和FWR(根据ABM编号方案)
Figure BDA0004017031980001542
/>
Figure BDA0004017031980001551
/>
Figure BDA0004017031980001561
/>
Figure BDA0004017031980001571
/>
Figure BDA0004017031980001581
表10.TRBC2靶向性抗原结合结构域的示例性轻链CDR和FWR
Figure BDA0004017031980001582
Figure BDA0004017031980001591
表11.TRBC2靶向性抗原结合结构域的示例性可变区
Figure BDA0004017031980001592
/>
Figure BDA0004017031980001601
表12.示例性TRBC2靶向性抗原结合结构域/抗体分子
Figure BDA0004017031980001611
/>
Figure BDA0004017031980001621
在一些实施方案中，本文预期双特异性抗体包含结合至TRBC2的第一抗原结合结构域。在一些实施方案中，示例性TRBC2结合结构域包含TRBC2结合抗体(例如，TRCBC2结合物-1或TRCBC2结合物-2或TRCBC2结合物3或TRCBC2结合物4)的重链和轻链。在一些实施方案中，示例性TRBC2结合结构域包含选自SEQ ID NO:8011、8013、8020或8022的重链可变结构域，或与SEQ ID NO:8011、8013、8020或8022至少90％相同的序列；以及选自SEQ ID NO:8012，8014，8021或8023的轻链可变结构域，或与SEQ ID NO:1、3、31或33至少90％相同的序列，包括其任何组合。
在一些实施方案中，示例性TRBC2结合结构域包含TRBC2结合抗体(例如，TRCBC2结合物-1)的重链和轻链。在一些实施方案中，示例性TRBC2结合结构域在重链中包含氨基酸序列，例如，与SEQ ID NO:8011至少90％相同的重链可变结构域(VH)。在一些实施方案中，示例性TRBC2结合结构域包含与SEQ ID NO:8011至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的重链可变结构域。在一些实施方案中，TRBC2结合结构域包含重链，该重链包含SEQ ID NO:8011的氨基酸序列。
在一些实施方案中，示例性TRBC2结合结构域在轻链中包含氨基酸序列，例如，与SEQ ID NO:8012至少95％相同的轻链可变结构域(VL)。在一些实施方案中，轻链可变结构域与SEQ ID NO:8012至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同。在一些实施方案中，TRBC2结合结构域包含轻链，该轻链包含SEQ ID NO:8012的氨基酸序列。在一些实施方案中，双特异性抗体包含结合至TRBC2的第一抗原结合结构域，并且包含TRBC2结合物的重链VH结构域(SEQ ID NO:8011)和轻链VL结构域(SEQ ID NO:8012)，或具有表13或表14中所述的一个或多个氨基酸序列的TRBC2结合物，或具有表13或表14中所述的结构域中任一个的TRBC2结合物，或相对于表13或表14中所述的结构域的氨基酸序列具有一个或多个氨基酸修饰的一个或多个结构域。
在一些实施方案中，示例性TRBC2结合结构域包含TRBC2结合抗体(例如，TRCBC2结合物-2)的重链和轻链。在一些实施方案中，示例性TRBC2结合结构域包含与SEQ ID NO:8013至少95％相同的重链。在一些实施方案中，示例性TRBC2结合结构域包含与SEQ ID NO:8013至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的重链。在一些实施方案中，示例性TRBC2结合结构域包含与SEQ ID NO:8014至少95％相同的轻链。在一些实施方案中，示例性TRBC2结合结构域包含与SEQ ID NO:8014至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的轻链。在一些实施方案中，双特异性抗体包含结合至TRBC2的第一抗原结合结构域，其包含TRBC2结合物的重链VH(SEQ ID NO:8013)和轻链VL(SEQ ID NO:8014)，或具有表13中所述的结构域中任一个的TRBC2结合物，或相对于表13中所述的结构域的氨基酸序列具有一个或多个氨基酸修饰的一个或多个结构域。
在一些实施方案中，示例性TRBC2结合结构域在重链中包含氨基酸序列，例如，与SEQ ID NO:8020至少90％相同的重链可变结构域(VH)。在一些实施方案中，示例性TRBC2结合结构域包含与SEQ ID NO:8020至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的重链可变结构域。
在一些实施方案中，示例性TRBC2结合结构域在轻链中包含氨基酸序列，例如，与SEQ ID NO:8021至少90％相同的轻链可变结构域(VL)。在一些实施方案中，示例性TRBC2结合结构域包含与SEQ ID NO:8021至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的轻链可变结构域。在一些实施方案中，双特异性抗体包含结合至TRBC2的第一抗原结合结构域，并且包含TRBC2结合物的重链VH(SEQ IDNO:8020)和轻链VL(SEQ IDNO:8021)，或具有表13中所述的结构域中任一个的TRBC2结合物，或相对于表13或表14中所述的结构域的氨基酸序列具有一个或多个氨基酸修饰的一个或多个结构域。
在一些实施方案中，示例性TRBC2结合结构域在重链中包含氨基酸序列，例如，与SEQ ID NO:8022至少90％相同的重链可变结构域(VH)。在一些实施方案中，示例性TRBC2结合结构域包含与SEQ IDNO:8022至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的重链可变结构域。
在一些实施方案中，示例性TRBC2结合结构域在轻链中包含氨基酸序列，例如，与SEQ ID NO:8023至少90％相同的轻链可变结构域(VL)。在一些实施方案中，示例性TRBC2结合结构域包含与SEQ ID NO:8023至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的轻链可变结构域。在一些实施方案中，双特异性抗体包含结合至TRBC2的第一抗原结合结构域，并且包含TRBC2结合物的重链VH(SEQ IDNO:8022)和轻链VL(SEQ ID NO:8023)，或具有表13中所述的结构域中任一个的TRBC2结合物，或相对于表13中所述的结构域的氨基酸序列具有一个或多个氨基酸修饰的一个或多个结构域。
例如，结合TRBC2的重链结构域可包含SEQ ID NO:8011序列QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASPRGFYGYHMHWVRQAPGQGL EWMGFINPYTNDIQYNERFRGRVTITSDESTTTAYMELSSLRSEDTAVYYCAMGNGKWGDGAYRFFDLWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:8011)，并且结合TRBC2的轻链结构域可包含SEQ ID NO:8012序列。DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSENLVHSNGRTYLQWYQQRPGQ SPRLLIYRVSNRFPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCSQS SLEPYTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:8012)。
例如，结合TRBC2的重链结构域可包含SEQ ID NO:8013序列QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASPRGFYGYHMHQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASPRGFYGYHMHWVRQAPGQGLEWMGFINPYTNDIQYNERFRGRVTITSDESTTTAYMELSSLRSEDTAVYYCAMGNGKWGDGAYRFFDLWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:8013)，并且结合TRBC2的轻链结构域可包含SEQ ID NO:8014序列DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSKNLVHSNGRTYLQWYQQRPGQSPRLLIYRVSNRFPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCSQSTREPYTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:8014)。
结合TRBC2的重链结构域可包含SEQ ID NO:8020序列QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASPRGFYGYHMHWVRQAPGQGLEWMGFINPYNNHIQYNERFRGRVTITSDESTTTAYMELSSLRSEDTAVYYCALGEGKWGDGAYRFFDFWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:8020)，并且结合TRBC2的轻链结构域可包含SEQID NO:8021序列：DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSKNLVHSNGRTYLQWYQQRPGQSPRLLIYRVSNRFPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCSQSTREPYTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:8021)。
结合TRBC2的重链结构域可包含SEQ ID NO:8022序列QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASPRGFYGYHMHWVRQAPGQGLEWMGFINPYNNHIQYNERFRGRVTITSDESTTTAYMELSSLRSEDTAVYYCALGAGKWGDGAYRFFDFWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:8022)，并且结合TRBC2的轻链结构域可包含SEQID NO:8023序列：DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSKNLVHSNGRTYLQWYQQRPGQSPRLLIYRVSNRFPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCSQSTREPYTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:8023)。
在一些实施方案中，TRBC2抗原结合结构域可在重链可变结构域中包含突变，与如SEQ ID NO:8024中所述的抗体的VH结构域相比，该突变可选自VH结构域中的T28K突变、Y32F突变和A100N突变。在一些实施方案中，TRBC2抗原结合结构域在重链可变结构域中包含两个或更多个突变，与SEQ ID NO:8024中所述的抗体的VH结构域相比，该突变可选自VH结构域中的T28K突变、Y32F突变和A100N突变。在一些实施方案中，VH结构域可包含突变，该突变相对于SEQ ID NO:8024可在V2或Y27或G31或R98或Y102或N103或A107位处。在一些实施方案中，与如SEQ ID NO:8024中所述的抗体的VH结构域相比，TRBC2抗原结合结构域的VH结构域可包含V2K或V2R突变。在一些实施方案中，与如SEQ ID NO:8024中所述的抗体的VH结构域相比，TRBC2抗原结合结构域的VH结构域可包含Y27F、Y27M、Y27N或Y27W突变。在一些实施方案中，与如SEQ ID NO:8024中所述的抗体的VH结构域相比，TRBC2抗原结合结构域的VH结构域可包含G31K、G31R或G31S突变。在一些实施方案中，与如SEQ ID NO:8024中所述的抗体的VH结构域相比，TRBC2抗原结合结构域的VH结构域可包含R98K突变。在一些实施方案中，与如SEQ ID NO:8024中所述的抗体的VH结构域相比，TRBC2抗原结合结构域的VH结构域可包含Y102F或Y102L突变。在一些实施方案中，与如SEQ ID NO:8024中所述的抗体的VH结构域相比，TRBC2抗原结合结构域的VH结构域可包含N193A、N193E、N103F、N103H、N103L、N103M、N103Q、N103S、N103W或N103Y突变。
在一些实施方案中，TRBC2抗原结合结构域在轻链可变结构域中可包含突变，该突变相对于如SEQ ID NO:8025中所述的抗体的VL结构域可在N35或R55位处。在一些实施方案中，TRBC2抗原结合结构域的VL结构域相对于如SEQ ID NO:8025中所述的抗体的VL结构域可在35位处包含N35M、N35F、N35Y、N35K或N35R突变。
SEQ ID NO:8024-参考抗体VH结构域：QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYVMHWVRQAPGQGLEWMGFINPYNDDIQSNERFRGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARGAGYNFDGAYRFFDFWGQGTMVTVSS(SEQ ID NO:8024)。
SEQ ID NO:8025-参考抗体VL结构域：DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQRLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPRLLIYRVSNRFPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:8025)。
在一些实施方案中，双特异性抗体包含结合至NKp30的第二抗原结合结构域。在一些实施方案中，示例性NKp30结合结构域包含NKp30结合物1的重链和轻链。在一些实施方案中，示例性NKp30结合结构域包含重链，其具有SEQ ID NO:8006的氨基酸序列。在一些实施方案中，示例性NKp30结合结构域包含重链，其具有与SEQ ID NO:8006序列至少90％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，示例性NKp30结合结构域包含重链，其具有与SEQ ID NO:8006序列至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，示例性NKp30结合结构域包含SEQID NO:8003的轻链。在一些实施方案中，示例性NKp30结合结构域包含轻链，其具有与SEQID NO:8003序列至少90％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，示例性NKp30结合结构域包含轻链，其具有与SEQ ID NO:8003序列至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，包含结合至NKp30的第二抗原结合结构域的双特异性抗体包含NKp30结合物1的重链和轻链，其具有下文所述的氨基酸序列。
示例性结合NKp30的重链结构域可包含SEQ ID NO:8030序列：EIQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSITTTGYHWNWVRQAPGKGLEWVGYIYSSGSTSYNPSLKSRFTISRDTSKNTFYLQMNSLRAEDTAVYYCARGDWHYFDYWGQGTMVTVSS(SEQ ID NO:8030)。
示例性结合NKp30的轻链结构域可包含SEQ ID NO:8031序列：DSVTTQSPLSLPVTLGQPASISCSGEKLSDKYVHWYQQRPGQSPRMLIYENDRRPSGVPDRFSGSNSGNDATLKISRVEAEDVGVYFCQFWDSTNSAVFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:8031)。
在一些实施方案中，示例性双特异性抗体包含(i)包含TRBC2结合结构域的第一抗原结合结构域，其具有SEQ ID NO:8011的重链序列，或与SEQ ID NO:8011至少90％相同的序列；和SEQ ID NO:8012的轻链序列，或与SEQ ID NO:8012至少95％相同的序列；以及(ii)包含NKp30结合结构域的第二抗原结合结构域，其分别具有SEQ ID NO:8030和8031的重链和轻链序列。
在一些实施方案中，示例性双特异性抗体包含(i)包含TRBC2结合结构域的第一抗原结合结构域，其具有SEQ ID NO:8013的重链序列，或与SEQ ID NO:8013至少95％相同的序列；和SEQ ID NO:8014的轻链序列，或与SEQ ID NO:8014至少95％相同的序列；以及(ii)包含NKp30结合结构域的第二抗原结合结构域，其分别具有SEQ ID NO:8030和8031的重链和轻链序列。
在一些实施方案中，示例性双特异性抗体包含(i)包含TRBC2结合结构域的第一抗原结合结构域，其具有SEQ ID NO:8011的重链序列，或与SEQ ID NO:8011至少90％相同的序列，和SEQ ID NO:8012的轻链序列，或与SEQ ID NO:8012至少95％相同的序列；以及(ii)包含NKp30结合结构域的第二抗原结合结构域，其分别具有与SEQ ID NO:8030至少90％相同和与SEQ ID NO:8031至少90％相同的重链和轻链序列。
在一些实施方案中，示例性双特异性抗体包含(i)包含TRBC2结合结构域的第一抗原结合结构域，其具有SEQ ID NO:8013的重链序列，或与SEQ ID NO:8013至少95％相同的序列；和SEQ ID NO:8014的轻链序列，或与SEQ ID NO:8014至少95％相同的序列；以及(ii)包含NKp30结合结构域的第二抗原结合结构域，其分别具有与SEQ ID NO:8030至少90％相同和与SEQ ID NO:8031至少90％相同的重链和轻链序列。
在一些实施方案中，双特异性抗体包含：(i)包含TRBC2结合结构域的第一抗原结合结构域，其包含单链可变片段(scFv)；其中scFv包含通过短接头连接的重链和轻链，以及(ii)包含NKp30结合结构域的第二抗原结合结构域，其包含单链可变片段(scFv)；其中scFv包含通过短接头连接的重链和轻链。
在一些实施方案中，TRBC2结合结构域的重链包含HC CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施方案中，TRBC2结合结构域的轻链包含LC CDR1、CDR2和CDR3。在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的重链包含HC CDR1，该HC CDR1具有包含PRGFYGYHMH(SEQ ID NO:8272){或PRGFYGY(根据Chothia编号系统的SEQ ID NO:8041)}或PRGFYGYAMH(SEQ ID NO:8272)的氨基酸序列。在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的重链包含HC CDR1，该HC CDR1具有氨基酸序列RSGFHGYAMH(SEQ ID NO:8207)或PRGFHGYHMH(SEQ ID NO:8211)。在一些实施方案中，重链TRBC2结合结构域包含HC CDR1，该HC CDR1包含氨基酸序列SRSGFHGYAMH(SEQ IDNO:8215)。在一些实施方案中，重链TRBC2结合结构域包含HC CDR1，该HC CDR1包含氨基酸序列PRGFYGYHMH(SEQ ID NO:8219)。在一些实施方案中，重链TRBC2结合结构域包含HCCDR1，该HC CDR1包含氨基酸序列RSSQNLVHSNGRTYLH(SEQ ID NO:8226)。在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的重链包含HC CDR2，该HC CDR2具有氨基酸序列MGFINPYTNDIQYNERFRG(SEQ ID NO:8042)。在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的重链包含HC CDR3，该HC CDR3具有氨基酸序列GNGKWGDGAYRFFDL(SEQ ID NO:8043)。在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的重链包含HC CDR2，该HC CDR2包含氨基酸序列FINPYNNHIQYNERFRG(SEQ ID NO:8044)或FINPYNDDIQYNQKFQG(SEQ ID NO:8208)或YINPYNRDIKYNQKFQG(SEQ ID NO:8212)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列FINPYNHAIKYNQKFQG(SEQ ID NO:8213)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列YINPYTGDIKYNERFRG(SEQ ID NO:8217)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列FINPYNDDIQYNERFRG(SEQ ID NO:8221)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列TINPYNAEIKYNQKFQG(SEQ ID NO:8222)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列TINPYNRDIQYNQKFQG(SEQ ID NO:8225)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列FINPYNRDIKYNERFRG(SEQ ID NO:8228)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列AINPYTNDIKYNERFRG(SEQ ID NO:8229)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列AINPYTNHIQYNERFRG(SEQ ID NO:8230)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列AINPYTRAIKYNERFRG(SEQ ID NO:8231)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列TINPYNGDIQYNERFRG(SEQ ID NO:8232)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列AINPYNTDIKYNERFRG(SEQ ID NO:8233)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列YINPYNGAIKYNQKFQG(SEQ ID NO:8234)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列AINPYNDDIQSNERFRG(SEQ ID NO:8235)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列FINPYNRAIQYNQKFQG(SEQ ID NO:8236)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列FINPYTNEIQYNERFRG(SEQ ID NO:8237)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列YINPYNHDIQYNQKFQG(SEQ ID NO:8237)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列SINPYTHDIQYNERFRG(SEQ ID NO:8238)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列YINPYKNAIQYNQKFQG(SEQ ID NO:8239)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列AINPYNTDIQYNERFRG(SEQ ID NO:8240)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列SINPYNGDIQYNERFRG(SEQ ID NO:8241)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列TINPYNHDAQYNERFRG(SEQ ID NO:8242)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列AINPYNDDIKYNERFRG(SEQ ID NO:8243)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列YINPYTHEIKYNERFRG(SEQ ID NO:8245)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列FINPYKDDIKYNERFRG(SEQ ID NO:8246)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列AINPYNDDIKYNQKFQG(SEQ ID NO:8247)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列AINPYNRDIKYNERFRG(SEQ ID NO:8248)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列AINPYNGDIKYNERFRG(SEQ ID NO:8249)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列YINPYTRDIKYNERFRG(SEQ ID NO:8250)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列TINPYNTDIKYNERFRG(SEQ ID NO:8251)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列TINPYNNDIQYNERFRG(SEQ ID NO:8252)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列YINPYNGNIQYNERFRG(SEQ ID NO:8253)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列AINPYTNEIQYNERFRG(SEQ ID NO:8254)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列SINPYNHDIKYNERFRG(SEQ ID NO:8255)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列FINPYKNEIKYNERFRG(SEQ ID NO:8256)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列YINPYNNEIQYNERFRGR(SEQ ID NO:8257)或序列SINPYNRHIQYNERFRG(SEQ ID NO:8258)或序列SINPYTREIQYNERFRG(SEQ ID NO:8259)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列FINPYTNDIQYNERFRG(SEQ ID NO:8260)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列AINPYTNEIKYNERFRG(SEQ ID NO:8261)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列AINPYNDDIQYNERFRG(SEQ ID NO:8263)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列YINPYNNDIKYNQKFQG(SEQ ID NO:8264)或氨基酸序列TINPYTREIQYNQKFQG(SEQ ID NO:8266)或YINPYNNEIQYNQKFQG(SEQ ID NO:8267)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列AINPYNHEIQYNQKFQG(SEQ ID NO:8268)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列TINPYKHHIKYNERFRG(SEQ ID NO:8269)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列FINPYTRAIKYNERFRG(SEQ ID NO:8270)。在一些实施方案中，HC CDR2具有氨基酸序列SINPYTRHIQYNERFRG(SEQ ID NO:8273)。
在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的重链包含HC CDR3，该HC CDR3具有氨基酸序列GNGKWGDGAYRFFDF(SEQ ID NO:8045)。在一些实施方案中，TRBC2结合结构域的重链包含HC CDR3，该HC CDR3具有氨基酸序列GEGKWGDGAYRFFDF(SEQ ID NO:8046)。在一些实施方案中，TRBC2结合结构域的重链包含HC CDR3，该HC CDR3具有氨基酸序列GAGKWGDGAYRFFDF(SEQ ID NO:8047)。在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的重链包含HC CDR3，该HC CDR3具有氨基酸序列GNGKWGDGAYRFFDF(SEQ ID NO.8216)。在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的重链包含HC CDR3，该HC CDR3具有氨基酸序列GNGKWGDGAYRFFDL(SEQ ID NO.8220)。在一些实施方案中，TRBC2结合结构域的重链包含HC CDR3，该HC CDR3具有氨基酸序列LGNGKWGDGAYRFFDL(SEQ ID NO:8224)。在一些实施方案中，TRBC2结合结构域的重链包含HCCDR3，该HC CDR3具有氨基酸序列MGNGKWGDGAYRFFDL(SEQ ID NO:8227)。在一些实施方案中，TRBC2结合结构域的重链包含HC CDR3，该HC CDR3具有氨基酸序列GNGKWGDGAYRFFDF(SEQ ID NO:8244)。
在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的轻链包含LC CDR1，该LC CDR1具有氨基酸序列RSSENLVHSNGRTYLQ(SEQ ID NO:8048)或RSSQNLVHSNGRTYLQ(SEQ ID NO:8209)。在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的轻链包含LC CDR1，该LC CDR1具有氨基酸序列RSSQNLVHSNARTYLQ(SEQ ID NO:8276)。在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的轻链包含LCCDR2，该LC CDR2具有氨基酸序列RVSNRFP(SEQ ID NO:8049)。在一些实施方案中，TRBC2结合结构域的轻链包含LC CDR2序列，该LC CDR2序列包含RVSNRFP(SEQ ID NO:8218)。
在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的轻链包含LC CDR3，该LC CDR3具有氨基酸序列SQSSLEPYT(SEQ ID NO:8050)或SQSSYVPFT(SEQ ID NO:8214)。在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的轻链包含LC CDR3，该LC CDR3具有氨基酸序列SQSTYEPFT(SEQ ID NO:8223)。在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的轻链包含LC CDR1，该LC CDR1具有氨基酸序列RSSKNLVHSNGRTYLQ(SEQ ID NO:8051)。在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的轻链包含LC CDR1，该LC CDR1具有氨基酸序列RSSKNLVHSNARTYLQ(SEQ ID NO:8271)。在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的轻链包含LC CDR3，该LC CDR3具有氨基酸序列SQSTREPYT(SEQ IDNO:8052)或SQSTHVPYT(SEQ ID NO:8210)。在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的轻链包含LC CDR3，该LC CDR3具有氨基酸序列SQSTHLPYT(SEQ ID NO:8262)。在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的轻链包含LC CDR3，该LC CDR3具有氨基酸序列SQSTQEPYT(SEQ ID NO:8265)。在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的轻链包含LC CDR3，该LC CDR3具有氨基酸序列SQSSLLPYTF(SEQ ID NO:8274)。在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的轻链包含LCCDR3，该LC CDR3具有氨基酸序列SQSTLEPFT(SEQ ID NO:8277)。在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的轻链包含LC CDR3，该LC CDR3具有氨基酸序列SQSSHIPYT(SEQ ID NO:8279)。在一个实施方案中，TRBC2结合结构域的轻链包含LC CDR3，该LC CDR3具有氨基酸序列SQSSLVPYT(SEQ ID NO:8280)。
在一些实施方案中，NKp30结合结构域的重链包含HC CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施方案中，NKp30结合结构域的轻链包含LC CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施方案中，NKp30结合结构域的重链包含HC CDR1，该HC CDR1具有氨基酸序列ITTTGYHWN(SEQ ID NO:8053)或包含序列GYHWN(SEQ ID NO:6000，根据Kabat编号系统)。在一些实施方案中，NKp30结合结构域的重链包含HC CDR2，该HC CDR2具有氨基酸序列YIYSSGSTSYNPSLKS(SEQ ID NO:8054)。在一些实施方案中，NKp30结合结构域的重链包含HC CDR3，该HC CDR3具有氨基酸序列GDWHYFDY(SEQ ID NO:8055)。
在一些实施方案中，NKp30结合结构域的轻链包含LC CDR1，该LC CDR1具有氨基酸序列SGEKLSDKYVH(SEQ ID NO:8056)。在一些实施方案中，NKp30结合结构域的轻链包含LCCDR2，该LC CDR2具有氨基酸序列ENDRRPS(SEQ ID NO:8057)。在一些实施方案中，NKp30结合结构域的轻链包含LC CDR3，该LC CDR3具有氨基酸序列QFWDSTNSAV(SEQ ID NO:8058)。
表13.TCBC2结合结构域
Figure BDA0004017031980001741
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Figure BDA0004017031980001751
表14.来自表13中列出的结构域的TCBC2重链(HC)和轻链(LC)CDR序列。
Figure BDA0004017031980001752
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Figure BDA0004017031980001761
用于生成抗TRBC2 scFv的另外TRBC2结合可变重链(VH)和可变轻链(VL)序列列于表15中：
表15.scFv的TRBC2结合重链和轻链对。在每个序列中，CDR1以加下划线的粗体字体标记(根据组合Kabat和Chothia[ABM]编号系统)，CDR2以斜体字体标记(Kabat编号系统)，CDR3(Kabat编号系统)以加下划线的粗体和斜体字体标记。
Figure BDA0004017031980001762
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Figure BDA0004017031980001771
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Figure BDA0004017031980001781
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Figure BDA0004017031980001791
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Figure BDA0004017031980001801
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Figure BDA0004017031980001811
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Figure BDA0004017031980001821
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Figure BDA0004017031980001831
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Figure BDA0004017031980001841
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Figure BDA0004017031980001851
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Figure BDA0004017031980001861
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Figure BDA0004017031980001871
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Figure BDA0004017031980001881
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Figure BDA0004017031980001891
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Figure BDA0004017031980001901
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Figure BDA0004017031980001911
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Figure BDA0004017031980001921
/>
Figure BDA0004017031980001931
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Figure BDA0004017031980001941
/>
Figure BDA0004017031980001951
在一些实施方案中，双特异性抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，第一抗原结合结构域对包含TRBC2的T细胞受体比对不包含TRBC2的T细胞受体具有更高的亲和力，任选地其中第一抗原结合结构域与TRBC2之间结合的KD不超过第一抗原结合结构域与不包含TRBC2的T细胞受体之间结合的KD的40％、30％、20％、10％、1％、0.1％或0.01％。在一些实施方案中，第一抗原结合结构域对包含TRBC2的T细胞受体比对包含TCRBC1的T细胞受体具有更高的亲和力，任选地其中第一抗原结合结构域与TRBC2之间结合的KD不超过第一抗原结合结构域与包含TCRBC1的T细胞受体之间结合的KD的40％、30％、20％、10％、1％、0.1％或0.01％。在一些实施方案中，第一抗原结合结构域与淋巴瘤细胞或淋巴细胞(例如，T细胞)上TRBC2的结合不明显活化淋巴瘤细胞或淋巴细胞(例如，T细胞)，例如，如通过T细胞增殖、T细胞活化标记物(例如，CD69或CD25)的表达和/或细胞因子(例如，TNFα和IFNγ)的表达所测量的。在一些实施方案中，在表达TRBC2的细胞不存在的情况下，多功能性分子不活化NK细胞或基本上不活化NK细胞。
在一些实施方案中，抗原结合结构域可包含突变或以下突变的组合：-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、Y27N，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、G31K，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、Y27M，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、Y27W，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N和VL结构域中的R55K，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N和VL结构域中的N35K，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103H，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103A，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103Y，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N和VL结构域中的N35R，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103S和VL结构域中的N35M，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103M，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103W和VL结构域中的N35R，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N和VL结构域中的N35F，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103S和VL结构域中的N35K，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、R98K，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103S和VL结构域中的N35R，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103L，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103S和VL结构域中的N35F，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103S和VL结构域中的N35Y，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103L和VL结构域中的N35M，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103L和VL结构域中的N35R，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103W和VL结构域中的N35K，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103L和VL结构域中的N35Y，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103F，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103W，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103L和VL结构域中的N35K，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103L和VL结构域中的N35F，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103W和VL结构域中的N35M，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103F和VL结构域中的N35Y，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、Y27F，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103Q，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103S，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103M和VL结构域中的N35F，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103F和VL结构域中的N35M，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103F和VL结构域中的N35F，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、G31R，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103W和VL结构域中的N35F，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、V2R，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、G31S，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、A107S，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103E和VL结构域中的N35M，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、V2K，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103E，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、Y102F、N103M和VL结构域中的N35K，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、Y102F、N103M和VL结构域中的N35F，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、Y102F、N103M和VL结构域中的N35R，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、Y102F和VL结构域中的N35R，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103M和VL结构域中的N35M，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103M和VL结构域中的N35Y，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103M和VL结构域中的N35R，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、N103F和VL结构域中的N35K，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、Y102L、N103W和VL结构域中的N35R，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、Y102L、N103W和VL结构域中的N35K，
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、Y102F，以及
-VH结构域中的T28K、Y32F、A100N、Y102L、N103M和VL结构域中的N35R。
相对于TCRBC1或TRBC2野生型序列，考虑如上列出的描述突变的残基。在一些实施方案中，TCRBC1或TRBC2野生型序列或参考序列。在一些实施方案中，参考VH和VL序列分别如SEQ ID NO:8024和SEQ ID NO:8025所示。
在一些实施方案中，双特异性抗体包含：(i)包含结合至TRBC2结构域的scFv的第一抗原结合结构域，并且可包含与以下氨基酸序列至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％相同的重链氨基酸序列：
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASPRGFYGYVMHWVRQAPGQGLEWMGFINPYTNDIQYNERFRGRVTITSDKSTTTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGNGKWGDGAYRFFDLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO:8001)。
在一些实施方案中，双特异性抗体包含：(i)包含结合至TRBC2结构域的scFv的第一抗原结合结构域，并且可包含与以下氨基酸序列至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％相同的轻链氨基酸序列：
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSENLVHSNGRTYLQWYQQRPGQSPRLLIYRVSNRFPGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCSQSSLEPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:8002)。
在一些实施方案中，双特异性抗体包含：(ii)结合至NKp30的第二抗原结合结构域，其包含结合至NKp30的scFv，该scFv具有与以下氨基酸序列至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％相同的序列：
EIQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSITTTGYHWNWVRQAPGKGLEWVGYIYSSGSTSYNPSLKSRFTISRDTSKNTFYLQMNSLRAEDTAVYYCARGDWHYFDYWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDSVTTQSPLSLPVTLGQPASISCSGEKLSDKYVHWYQQRPGQSPRMLIYENDRRPSGVPDRFSGSNSGNDATLKISRVEAEDVGVYFCQFWDSTNSAVFGGGTKVEIKDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:8003)。
在一些实施方案中，第一抗原结合结构域对包含TRBC2的T细胞受体比对不包含TRBC2的T细胞受体具有更高的亲和力，任选地其中第一抗原结合结构域与TRBC2之间结合的KD不超过第一抗原结合结构域与不包含TRBC2的T细胞受体之间结合的KD的40％、30％、20％、10％、1％、0.1％或0.01％。在一些实施方案中，第一抗原结合结构域对包含TRBC2的T细胞受体比对包含TCRBC1的T细胞受体具有更高的亲和力，任选地其中第一抗原结合结构域与TRBC2之间结合的KD不超过第一抗原结合结构域与包含TCRBC1的T细胞受体之间结合的KD的40％、30％、20％、10％、1％、0.1％或0.01％。在一些实施方案中，第一抗原结合结构域与淋巴瘤细胞或淋巴细胞(例如，T细胞)上TRBC2的结合不明显活化淋巴瘤细胞或淋巴细胞(例如，T细胞)，例如，如通过T细胞增殖、T细胞活化标记物(例如，CD69或CD25)的表达和/或细胞因子(例如，TNFα和IFNγ)的表达所测量的。在一些实施方案中，在表达TRBC2的细胞不存在的情况下，多功能性分子不活化NK细胞或基本上不活化NK细胞。
在一些实施方案中，多功能性分子单价结合至TRBC2。
结合至TRBC1/TRBC2和NKp30的抗体分子
在一些实施方案中，本公开的特征在于一种结合至TRBC1和NKp30的多功能性抗体分子。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含图29A-29D中任一个所示的构型。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含抗TRBC1 Fab。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含抗TRBC1 scFv。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含抗NKp30 Fab。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含抗NKp30 scFv。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含抗TRBC1 Fab和抗NKp30 scFv，例如，包含图29A中所示的构型。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含抗TRBC1 Fab和抗NKp30 Fab，例如，包含图29B中所示的构型。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含抗NKp30 Fab和抗TRBC1 scFv，例如，包含图29C中所示的构型。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含抗TRBC1 scFv和抗NKp30 scFv，例如，包含图29D中所示的构型。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含本文公开的抗TRBC1抗原结合结构域，例如，表1、表2A或表2B、表3A或表3B、表4、表7、表8中公开的抗TRBC1抗原结合结构域。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含本文公开的抗NKp30抗原结合结构域，例如，表16、表17、表20A或表20B、表21A或表21B、表22、表23A或表23B、表24、表25、表26中公开的抗NKp30抗原结合结构域。
在一些实施方案中，结合至TRBC1和NKp30的示例性多功能性抗体分子公开于表16中。
在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含SEQ ID NO:7351的抗TRBC1 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:258的抗TRBC1 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7302的抗NKp30 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7309的抗NKp30VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，抗TRBC1/NKp30抗体分子包含SEQ ID NO:7351的抗TRBC1 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:258的抗TRBC1 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7311的抗NKp30 scFv(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，抗TRBC1/NKp30抗体分子包含SEQ ID NO:7382、7380和7383(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含SEQ ID NO:253的抗TRBC1 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:258的抗TRBC1 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7302的抗NKp30 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7309的抗NKp30VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，抗TRBC1/NKp30抗体分子包含SEQ ID NO:253的抗TRBC1 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:258的抗TRBC1 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7311的抗NKp30 scFv(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，抗TRBC1/NKp30抗体分子包含SEQ ID NO:7379、7380和7383(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含SEQ ID NO:7351的抗TRBC1 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:258的抗TRBC1 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7302的抗NKp30 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7305的抗NKp30VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，抗TRBC1/NKp30抗体分子包含SEQ ID NO:7351的抗TRBC1 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:258的抗TRBC1 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7310的抗NKp30 scFv(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，抗TRBC1/NKp30抗体分子包含SEQ ID NO:7382、7380和7384(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含SEQ ID NO:253的抗TRBC1 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:258的抗TRBC1 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7302的抗NKp30 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7305的抗NKp30VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，抗TRBC1/NKp30抗体分子包含SEQ ID NO:253的抗TRBC1 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，SEQ ID NO:258的抗TRBC1 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7310的抗NKp30 scFv(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，抗TRBC1/NKp30抗体分子包含SEQ ID NO:7379、7380和7384(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，本文提供了一种结合至TRBC1分子的抗体或其片段，其中结合至TRBC1的抗体或其片段包含重链，该重链包含具有序列GYVMH(SEQ ID NO 8643)的HC-CDR1；具有FINPYNDDIQSNERFRG(SEQ ID NO:8644)序列的HC-CDR2；和具有GAGYNFDGAYRFFDF(SEQ ID NO:8645)序列的HC-CDR3；以及轻链，该轻链包含RSSQRLVHSNGNTYLH(SEQ ID NO:8646)的LC-CDR1、RVSNRFP(SEQ ID NO:8647)的LC-CDR2、SEQ ID NO:SQSTHVPYT(SEQ IDNO:8648)的LC-CDR3。
在一些实施方案中，本文提供了一种结合至TRBC1分子的抗体或其片段，其中结合至TRBC1的抗体或其片段包含重链，该重链包含具有序列GYVMH(SEQ ID NO 8643)的HC-CDR1；具有序列FIIPIFGTANYAQKFQG(SEQ ID NO:8649)的HC-CDR2和具有序列GAGYNFDGAYRFFDF(SEQ ID NO:8650)的HC-CDR3；以及轻链，该轻链包含具有序列RSSQRLVHSNGNTYLH(SEQ ID NO:8651)的LC-CDR1、具有序列RVSNRFP(SEQ ID NO:8652)的LC-CDR2和具有序列SQSTHVPYT(SEQ ID NO:8653)的LC-CDR3。
在一些实施方案中，本文提供了一种结合至TRBC1分子的抗体或其片段，其中结合至TRBC1的抗体或其片段包含重链，该重链包含具有序列GYVMH(SEQ ID NO 8643)的HC-CDR1；具有序列FINPYNDDIQSNERFRG(SEQ ID NO:8654)的HC-CDR2和具有序列GAGYNFDGAYRFFDF(SEQ ID NO:8655)的HC-CDR3；以及轻链，该轻链包含具有序列RSSQRLVHSNGNTYLH(SEQ ID NO:8656)的LC-CDR1、具有序列RVSNRFP(SEQ ID NO:8657)的LC-CDR2和具有序列SQSTHVPYT(SEQ ID NO:8658)的LC-CDR3。
在一些实施方案中，本文提供了一种结合至TRBC1分子的抗体或其片段，其中结合至TRBC1的抗体或其片段包含重链，该重链包含具有序列GYVMH(SEQ ID NO 8643)的HC-CDR1；具有序列FIIPIFGTANYAQKFQG(SEQ ID NO:8659)的HC-CDR2和具有序列GAGYNFDGAYRFFDF(SEQ ID NO:8660)的HC-CDR3；以及轻链，该轻链包含具有序列RSSQRLVHSNGNTYLH(SEQ ID NO:8661)的LC-CDR1、具有序列RVSNRFP(SEQ ID NO:8662)的LC-CDR2和具有序列SQSTHVPYT(SEQ ID NO:8663)的LC-CDR3。
在一些实施方案中，本文提供了一种结合至TRBC1分子的抗体或其片段，其中结合至TRBC1的抗体或其片段包含重链，该重链包含具有序列GYVMH(SEQ ID NO 8643)的HC-CDR1；具有序列FINPYNDDIQSNERFRG(SEQ ID NO:8664)的HC-CDR2和具有序列GAGYNFDGAYRFFDF(SEQ ID NO:8665)的HC-CDR3；以及轻链，该轻链包含具有序列RSSQRLVHSNGNTYLH(SEQ ID NO:8666)的LC-CDR1、具有序列RVSNRFP(SEQ ID NO:8667)的LC-CDR2和具有序列SQSTHVPYT(SEQ ID NO:8668)的LC-CDR3。
表16.结合至TRBC1和/或NKp30的示例性抗体分子
Figure BDA0004017031980002041
/>
Figure BDA0004017031980002051
/>
Figure BDA0004017031980002061
/>
Figure BDA0004017031980002071
/>
Figure BDA0004017031980002081
在一些实施方案中，本公开的特征在于一种结合至TRBC2和NKp30两者的多功能性抗体分子。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含图30A-30D中任一个所示的构型。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含抗TRBC2 Fab。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含抗TRBC2 scFv。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含抗NKp30Fab。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含抗NKp30 scFv。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含抗TRBC2 Fab和抗NKp30 scFv，例如，包含图30A中所示的构型。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含抗TRBC2 Fab和抗NKp30 Fab，例如，包含图30B中所示的构型。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含抗NKp30 Fab和抗TRBC2scFv，例如，包含图30C中所示的构型。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含抗TRBC2 scFv和抗NKp30 scFv，例如，包含图30D中所示的构型。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含本文公开的抗TRBC2抗原结合结构域，例如，表9A或表9B、表10、表11、表12、表13、表14、表15、表17、表39中公开的抗TRBC2抗原结合结构域。在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含本文公开的抗NKp30抗原结合结构域，例如，表20A或表20B、表22、表23A或表23B、表24、表25、表26、表21A或表21B、和表17中公开的抗NKp30抗原结合结构域。
在一些实施方案中，结合至TRBC2和NKp30的示例性多功能性抗体分子公开于表17中。
在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含SEQ ID NO:7420的抗TRBC2 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7419的抗TRBC2 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7302的抗NKp30 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7309的抗NKp30VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，抗TRBC2/NKp30抗体分子包含SEQ ID NO:7420的抗TRBC2 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7419的抗TRBC2 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7311的抗NKp30 scFv(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，抗TRBC2/NKp30抗体分子包含SEQ ID NO:7438、7439和7383(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含SEQ ID NO:7423的抗TRBC2 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7419的抗TRBC2 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7302的抗NKp30 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7309的抗NKp30VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，抗TRBC2/NKp30抗体分子包含SEQ ID NO:7423的抗TRBC2 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7419的抗TRBC2 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7311的抗NKp30 scFv(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，抗TRBC2/NKp30抗体分子包含SEQ ID NO:7440、7439和7383(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含SEQ ID NO:7420的抗TRBC2 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7419的抗TRBC2 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7302的抗NKp30 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7305的抗NKp30VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，抗TRBC2/NKp30抗体分子包含SEQ ID NO:7420的抗TRBC2 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7419的抗TRBC2 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7310的抗NKp30 scFv(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，抗TRBC2/NKp30抗体分子包含SEQ ID NO:7438、7439和7384(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，多功能性抗体分子包含SEQ ID NO:7423的抗TRBC2 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7419的抗TRBC2 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7302的抗NKp30 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7305的抗NKp30VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，抗TRBC2/NKp30抗体分子包含SEQ ID NO:7423的抗TRBC2 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7419的抗TRBC2 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7310的抗NKp30 scFv(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，抗TRBC2/NKp30抗体分子包含SEQ ID NO:7440、7439和7384(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
表17.结合至TRBC2和/或NKp30的示例性多特异性抗体分子或其部分
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多功能性抗体效应功能和Fc变体
在一些实施方案中，例如，如本文所述，本文公开的多功能性分子(例如，抗TRBC1/NKp30抗体分子或抗TRBC2/NKp30抗体分子)包含Fc区。在一些实施方案中，Fc区是野生型Fc区，例如，野生型人Fc区。在一些实施方案中，Fc区包含变体，例如，在Fc区中包含至少一个氨基酸残基的添加、取代或缺失的Fc区，其导致例如对至少一种Fc受体的亲和力降低或消除。
抗体的Fc区与许多受体或配体相互作用，包括Fc受体(例如，FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIIA)、补体蛋白Clq和其他分子，例如蛋白A和G。这些相互作用对于各种效应功能和下游信号传导事件是必需的，包括：抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。
在一些实施方案中，包含变体Fc区的多功能性分子(例如，抗TRBC1/NKp30抗体分子或抗TRBC2/NKp30抗体分子)对Fc受体(例如，本文所述的Fc受体)的亲和力降低(例如，消除)。在一些实施方案中，将降低的亲和力与具有野生型Fc区的其他方面相似抗体进行比较。
在一些实施方案中，包含变体Fc区的多功能性分子(例如，抗TRBC1/NKp30抗体分子或抗TRBC2/NKp30抗体分子)具有以下特性中的一种或多种：(1)效应功能降低(例如，ADCC、ADCP和/或CDC降低)；(2)与一种或多种Fc受体的结合减少；和/或(3)与C1q补体的结合减少。在一些实施方案中，将特性(1)-(3)中任一个或全部的降低与具有野生型Fc区的其他方面相似抗体进行比较。
在一些实施方案中，包含变体Fc区的多功能性分子(例如，抗TRBC1/NKp30抗体分子或抗TRBC2/NKp30抗体分子)对人Fc受体(例如，FcγR I、FcγR II和/或FcγR III)的亲和力降低。在一些实施方案中，包含变体Fc区的多功能性分子(例如，抗TRBC1/NKp30抗体分子或抗TRBC2/NKp30抗体分子)包含人IgG1区或人IgG4区。
示例性Fc区变体提供于表18中并且还公开于Saunders O,(2019)Frontiers inImmunology；第10卷，第1296条，其全部内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，多功能性分子(例如，抗TRBC1/NKp30抗体分子或抗TRBC2/NKp30抗体分子)包含表18中公开的Fc区变体(例如，突变)中的任一个或全部或任何组合。在一些实施方案中，多功能性分子(例如，抗TRBC1/NKp30抗体分子或抗TRBC2/NKp30抗体分子)包含Asn297Ala(N297A)突变。在一些实施方案中，多功能性分子(例如，抗TRBC1/NKp30抗体分子或抗TRBC2/NKp30抗体分子)包含Leu234Ala/Leu235Ala(LALA)突变。
表18：示例性Fc修饰
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靶向TRBC1的抗体分子
在另一方面，本公开的特征在于一种结合TRBC1的抗体分子，例如，单克隆抗体分子或其片段。
在一些实施方案中，结合至TRBC1的抗体分子或其片段包含表2A或表2B、表3A或表3B或表4中公开的一个或多个CDR(例如，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和/或VLCDR3)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至TRBC1的抗体分子或其片段包含表2A或表2B、表3A或表3B或表4中公开的一个或多个框架区(例如，VHFWR1、VHFWR2、VHFWR3、VHFWR4、VLFWR1、VLFWR2、VLFWR3和/或VLFWR4)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至TRBC1的抗体分子或其片段包含表7中公开的VH和/或VL，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至TRBC1的抗体分子或其片段包含表8中公开的氨基酸序列，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
在一些实施方案中，结合至TRBC1的抗体分子或其片段包含VH和VL，该VH包含重链互补决定区1(VHCDR1)、VHCDR2和VHCDR3，该VL包含轻链互补决定区1(VLCDR1)、VLCDR2和VLCDR3。
在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7346、7355和202的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7346、201和202的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7354、201和202的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ IDNO:7354、7355和202的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:223、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7367、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:223、7368和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ IDNO:223、224和7369的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7367、7368和7369的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7346、7355、202、223、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7346、201、202、223、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:7346、7355、202、7367、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、7355、202、223、7368和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、7355、202、223、224和7369(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、7355、202、7367、7368和7369(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ IDNO:7346、201、202、7367、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、201、202、223、7368和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、201、202、223、224和7369(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、201、202、7367、7368和7369(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7354、201、202、223、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7354、201、202、7367、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7354、201、202、223、7368和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7354、201、202、223、224和7369(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7354、201、202、7367、7368和7369(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7354、7355、202、223、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7354、7355、202、7367、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7354、7355、202、223、7368和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7354、7355、202、223、224和7369(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；或SEQ ID NO:7354、7355、202、7367、7368和7369(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VH包含选自SEQ ID NO:7351、253、250-252、254、7343、7344、7350和7352的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，和/或VL包含选自SEQ ID NO:258、255-257、259、260和7357-7360的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7351和258的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:253和258的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，抗体分子或其片段包含：
重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含SEQ ID NO:215的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:216的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:217的VHFWR3氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:218的VHFWR4氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，以及
轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含SEQ ID NO:238的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:239的VLFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:240的VLFWR3氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:241的VLFWR4氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。
在一些实施方案中，抗体分子或其片段包含VH，该VH包含SEQ ID NO:200的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:201的VHCDR2氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:202的VHCDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体分子或其片段包含VL，该VL包含SEQ ID NO:223的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:224的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:225的VLCDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体分子或其片段包含VH和/或VL，该VH包含SEQ ID NO:253的氨基酸序列(或与其具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，该VL包含SEQ ID NO:258的氨基酸序列(或与其具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，抗体分子或其片段包含基本上与SEQ IDNO:253和/或258同源的VH和/或VL。
靶向TRBC2的抗体分子
在另一方面，本公开的特征在于一种结合TRBC2的抗体分子，例如，单克隆抗体分子或其片段。
在一些实施方案中，结合至TRBC2的抗体分子或其片段包含表9或表10中公开的一个或多个CDR(例如，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和/或VLCDR3)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至TRBC2的抗体分子或其片段包含表9或表10中公开的一个或多个框架区(例如，VHFWR1、VHFWR2、VHFWR3、VHFWR4、VLFWR1、VLFWR2、VLFWR3和/或VLFWR4)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至TRBC2的抗体分子或其片段包含表11中公开的VH和/或VL，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至TRBC2的抗体分子或其片段包含表12中公开的氨基酸序列，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
在一些实施方案中，结合至TRBC2的抗体分子或其片段包含VH和VL，该VH包含重链互补决定区1(VHCDR1)、VHCDR2和VHCDR3，该VL包含轻链互补决定区1(VLCDR1)、VLCDR2和VLCDR3。
在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7441、201和7442的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7422、201和7403的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7401、201和7403的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ IDNO:7394、201和7396的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7346、201和7398的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7346、201和7400的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7405、201和7403的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7407、201和7403的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7427、201和7403的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7430、201和7403的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7443、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7410、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7409、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7441、201、7442、7443、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7422、201、7403、7410、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7401、201、7403、7410、224和225的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含以下氨基酸序列：SEQ ID NO:7394、201、7396、7410、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、201、7398、7410、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、201、7400、7410、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7405、201、7403、7410、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7407、201、7403、7410、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7427、201、7403、7410、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7430、201、7403、7410、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7422、201、7403、7409、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7401、201、7403、7409、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ IDNO:7394、201、7396、7409、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、201、7398、7409、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7346、201、7400、7409、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7405、201、7403、7409、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7407、201、7403、7409、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；SEQ ID NO:7427、201、7403、7409、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；或SEQ ID NO:7430、201、7403、7409、224和225(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VH包含选自SEQ ID NO:7420、7423、7411、7412、7413、7414、7415、7416、7417、7425、7428和7431的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，和/或VL包含选自SEQ ID NO:7419和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7420和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7423和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7411和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7412和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7413和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7414和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7415和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7416和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7417和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7425和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7428和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7431和7419的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7420和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ IDNO:7423和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7411和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7412和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7413和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7414和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7415和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7416和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7417和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7425和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7428和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7431和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在另一方面，本公开的特征在于一种抗体分子，例如，IgM抗体分子，其包含：(i)选择性地结合至T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)或T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)的第一抗原结合结构域，以及(ii)例如通过结合C1q来活化补体途径的补体活化结构域。在一些实施方案中，抗体分子(例如，IgM抗体分子)包含靶向TRBC1的抗原结合结构域。在一些实施方案中，抗体分子是IgM抗体分子，例如，其多聚化为四聚体、五聚体和/或六聚体并且能够活化补体途径。在一些实施方案中，IgM抗体分子包含靶向TRBC1的抗原结合结构域，其包含重链，该重链包含SEQ ID NO:6173的氨基酸序列(或与SEQ IDNO:6173具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
METDTLLLWVLLLWVPGSTGQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTGYVMHWVRQAPGQGLEWMGFINPYNDDIQSNERFRGRVTITSDKSTTTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGAGYNFDGAYRFFDFWGQGTLVTVSSGSASAPTLFPLVSCENSPSDTSSVAVGCLAQDFLPDSITFSWKYKNNSDISSTRGFPSVLRGGKYAATSQVLLPSKDVMQGTDEHVVCKVQHPNGNKEKNVPLPVIAELPPKVSVFVPPRDGFFGNPRKSKLICQATGFSPRQIQVSWLREGKQVGSGVTTDQVQAEAKESGPTTYKVTSTLTIKESDWLGQSMFTCRVDHRGLTFQQNASSMCVPDQDTAIRVFAIPPSFASIFLTKSTKLTCLVTDLTTYDSVTISWTRQNGEAVKTHTNISESHPNATFSAVGEASICEDDWNSGERFTCTVTHTDLPSPLKQTISRPKGVALHRPDVYLLPPAREQLNLRESATITCLVTGFSPADVFVQWMQRGQPLSPEKYVTSAPMPEPQAPGRYFAHSILTVSEEEWNTGETYTCVVAHEALPNRVTERTVDKSTGKPTLYNVSLVMSDTAGTCY(SEQID NO:6173)。
在一些实施方案中，IgM抗体分子包含靶向TRBC1的抗原结合结构域，其包含轻链，该轻链包含SEQ ID NO:6174的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6174具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
MKNHLLFWGVLAVFIKAVHVKAQEDERIVLVDNKCKCARITSRIIRSSEDPNEDIVERNIRIIVPLNNRENISDPTSPLRTRFVYHLSDLCKKCDPTEVELDNQIVTATQSNICDEDSATETCYTYDRNKCYTAVVPLVYGGETKMVETALTPDACYPD(SEQ ID NO:6174)。
在一些实施方案中，IgM抗体分子包含靶向TRBC1的抗原结合结构域，其包含SEQID NO:6173和6174的氨基酸序列(或与SEQ IDNO:6173和6174具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)和本文(例如，表4或表7中)提供的轻链序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，补体活化结构域包含能够结合C1q或被C1q结合的抗体分子的一部分，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD或IgE的一部分。在一些实施方案中，补体活化结构域包含Ch2、Ch3或Ch4结构域。
不希望受理论束缚，认为接近靶细胞(例如，表达TRBC1或TRBC2的细胞，例如，表达TRBC1或TRBC2的淋巴细胞，例如，表达TRBC1或TRBC2的淋巴瘤细胞)的补体活化可诱导靶细胞死亡。在一些实施方案中，使用抗体分子(例如，IgM抗体分子或本文所述方法中的多功能性分子)诱导补体介导的靶细胞的细胞死亡。
在另一方面，本公开的特征在于一种结合至TRBC1和NKp30的多特异性抗体分子(例如，双特异性抗体分子)。在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含一个或多个结合至TRBC1的部分，例如，一个或多个结合至TRBC1的Fab，例如，一个或两个结合至TRBC1的Fab。在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含一个或多个结合至NKp30的部分，例如，一个或多个结合至NKp30的scFv，例如，一个或两个结合至NKp30的scFv。在一些实施方案中，结合至TRBC1的部分包含本文公开的抗TRBC1序列，例如，包含表1、表2A或表2B、表4、表7、表8中公开的CDR、VH、VL、重链或轻链序列，或与其具有至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至NKp30的部分包含本文公开的抗NKp30序列，例如，包含表20A或表20B、表22、表23A或表23B、表24、表25、表26和表21A或表21B中公开的CDR、VH、VL、重链或轻链序列，或与其具有至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的序列。
在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含图1A中所示的构型。在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含抗TRBC1抗体分子和抗NKp30抗体分子，例如，包含两条重链和两条轻链的抗TRBC1抗体分子，以及与抗TRBC1抗体重链中的一条的N-末端融合的抗NKp30scFv。在一些实施方案中，抗TRBC1抗体的两条重链例如经由杵-臼突变形成异源二聚体。在一些实施方案中，抗TRBC1抗体的两条重链包含N297A突变。在一些实施方案中，抗TRBC1抗体的两条重链不包含N297A突变。在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含第一链、第二链、第三链和第四链，其中第一链包含抗TRBC1轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)；第二链包含抗NKp30 scFv、抗TRBC1重链可变区(VH)、CH1、CH2和CH3；第三链包含抗TRBC1 VH、CH1、CH2和CH3；并且第四链包含抗TRBC1 VL和CL。
在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含图1B中所示的构型。在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含抗TRBC1抗体分子和抗NKp30抗体分子。在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含抗TRBC1Fab、抗NKp30 scFv和包含两条Fc链的Fc二聚体。在一些实施方案中，抗TRBC1 Fab重链的C-末端与一条Fc链的N-末端融合，并且抗NKp30scFv与另一条Fc链的N-末端融合。在一些实施方案中，两条Fc链例如经由杵-臼突变形成异源二聚体。在一些实施方案中，两条Fc链包含N297A突变。在一些实施方案中，两条Fc链不包含N297A突变。在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含第一链、第二链和第三链，其中第一链包含抗TRBC1 VL和CL；第二链包含抗TRBC1 VH、CH1、CH2和CH3；第三链包含抗NKp30 scFv、CH2和CH3。
在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含图1C中所示的构型。在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含抗TRBC1抗体分子和抗NKp30抗体分子，例如，包含两条重链和两条轻链的抗TRBC1抗体分子，以及分别与抗TRBC1抗体分子的两条轻链的C-末端融合的两个抗NKp30 scFv。在一些实施方案中，抗TRBC1抗体的两条重链形成同源二聚体。在一些实施方案中，抗TRBC1抗体的两条重链包含N297A突变。在一些实施方案中，抗TRBC1抗体的两条重链不包含N297A突变。在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含第一链、第二链、第三链和第四链，其中第一链包含抗TRBC1 VL、CL和抗NKp30 scFv；第二链包含抗TRBC1 VH、CH1、CH2和CH3；第三链包含抗TRBC1 VH、CH1、CH2和CH3；第四链包含抗TRBC1 VL、CL和抗NKp30scFv。
在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含图1D中所示的构型。在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含抗TRBC1抗体分子和抗NKp30抗体分子，例如，包含两条重链和两条轻链的抗TRBC1抗体分子，以及分别与抗TRBC1抗体分子的两条重链的N-末端融合的两个抗NKp30 scFv。在一些实施方案中，抗TRBC1抗体的两条重链形成同源二聚体。在一些实施方案中，抗TRBC1抗体的两条重链包含N297A突变。在一些实施方案中，抗TRBC1抗体的两条重链不包含N297A突变。在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含第一链、第二链、第三链和第四链，其中第一链包含抗TRBC1 VL和CL；第二链包含抗NKp30 scFv、抗TRBC1 VH、CH1、CH2和CH3；第三链包含抗NKp30 scFv、抗TRBC1VH、CH1、CH2和CH3；并且第四链包含抗TRBC1VL和CL。
在另一方面，本公开的特征在于一种抗体分子，其包含结合至TRBC1的部分和TRAIL分子(例如，三聚体、二聚体或单体TRAIL分子)。在一些实施方案中，抗体分子包含一个或多个结合至TRBC1的部分，例如，一个或多个结合至TRBC1的Fab，例如，一个结合至TRBC1的Fab。在一些实施方案中，结合至TRBC1的部分包含本文公开的抗TRBC1序列，例如，包含表1、表2A或表2B、表4、表7、表8中公开的CDR、VH、VL、重链或轻链序列，或与其具有至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，抗体分子包含TRAIL分子(例如，三聚体、二聚体或单体TRAIL分子)。在一些实施方案中，TRAIL的每个单体包含人TRAIL的122-281位氨基酸残基，或与其具有至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，TRAIL的每个单体包含人TRAIL的95-281位氨基酸残基，或与其具有至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的序列。
在一些实施方案中，抗体分子包含图2A-2F中所示的构型。在一些实施方案中，抗体分子包含结合至TRBC1的部分和三聚体、二聚体或单体TRAIL分子，例如，包含抗TRBC1Fab、三聚体、二聚体或单体TRAIL分子和包含两条Fc链的Fc二聚体。在一些实施方案中，两条Fc链例如经由杵-臼突变形成异源二聚体。在一些实施方案中，两条Fc链包含N297A突变。在一些实施方案中，两条Fc链不包含N297A突变。在一些实施方案中，抗TRBC1 Fab的重链的C-末端与一条Fc链的N-末端融合。在一些实施方案中，三聚体、二聚体或单体TRAIL分子与另一Fc链的N-末端融合。在一些实施方案中，抗体分子包含第一链、第二链和第三链。在一些实施方案中，第一链包含抗TRBC1 VL和CL，例如，包含SEQ ID NO:6169的氨基酸序列，或与其具有至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，第二链包含抗TRBC1 VH、CH1、CH2和CH3，例如，包含SEQ ID NO:6167的氨基酸序列，或与其具有至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，第三链包含三聚体TRAIL分子、CH2和CH3，例如，包含SEQ ID NO:6159或6162的氨基酸序列，或与其具有至70％、80％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，第三链包含二聚体TRAIL分子、CH2和CH3，例如，包含SEQ ID NO:6158或6161的氨基酸序列，或与其具有至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，第三链包含单体TRAIL分子、CH2和CH3，例如，包含SEQ ID NO:6157或6160的氨基酸序列，或与其具有至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的序列。
在另一方面，本公开的特征在于一种结合至TRBC1和DR5的多特异性抗体分子(例如，双特异性抗体分子)。在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含一个或多个结合至TRBC1的部分，例如，一个或多个结合至TRBC1的Fab，例如，一个结合至TRBC1的Fab。在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含一个或多个结合至DR5的部分，例如，一个或多个结合至DR5的scFv，例如，一个或两个结合至DR5的scFv。在一些实施方案中，结合至TRBC1的部分包含本文公开的抗TRBC1序列，例如，包含表1、表2A或表2B、表4、表7、表8中公开的CDR、VH、VL、重链或轻链序列，或与其具有至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至DR5的部分包含本文公开的抗DR5序列，例如，包含表28中公开的CDR、VH、VL、重链或轻链序列，或与其具有至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的序列。
在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含图3A中所示的构型。在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含抗TRBC1 Fab、抗DR5 scFv和包含两条Fc链的Fc二聚体。在一些实施方案中，两条Fc链例如经由杵-臼突变形成异源二聚体。在一些实施方案中，两条Fc链包含N297A突变。在一些实施方案中，两条Fc链不包含N297A突变。在一些实施方案中，抗TRBC1 Fab的重链的C-末端与一条Fc链的N-末端融合。在一些实施方案中，抗DR5 scFv与另一条Fc链的N-末端融合。在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含第一链、第二链和第三链。在一些实施方案中，第一链包含抗TRBC1 VL和CL，例如，包含SEQ ID NO:6169的氨基酸序列，或与其具有至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，第二链包含抗TRBC1 VH、CH1、CH2和CH3，例如，包含SEQ ID NO:6167的氨基酸序列，或与其具有至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，第三链包含抗DR5scFv、CH2和CH3，例如，包含SEQ ID NO:6163的氨基酸序列，或与其具有至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的序列。
在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含图3B中所示的构型。在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含抗TRBC1抗体分子和抗DR5抗体分子，例如，包含两条重链和两条轻链的抗TRBC1抗体分子，以及分别与抗TRBC1抗体的两条轻链的C-末端融合的两个抗DR5scFv。在一些实施方案中，抗TRBC1抗体的两条重链包含N297A突变。在一些实施方案中，抗TRBC1抗体的两条重链不包含N297A突变。在一些实施方案中，多特异性抗体分子包含第一链、第二链、第三链和第四链。在一些实施方案中，第一链包含抗TRBC1 VL、CL和抗DR5scFv，例如，包含SEQ ID NO:6170的氨基酸序列，或与其具有至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，第二链包含抗TRBC1 VH、CH1、CH2和CH3，例如，包含SEQ ID NO:6168的氨基酸序列，或与其具有至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，第四链包含抗TRBC1 VH、CH1、CH2和CH3，例如，包含SEQ ID NO:6168的氨基酸序列，或与其具有至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，第一链包含抗TRBC1 VL、CL和抗DR5 scFv，例如，包含SEQ ID NO:6170的氨基酸序列，或与其具有至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的序列。
本文公开的抗体分子的用途包括但不限于本文公开的治疗癌症(例如，表达TRBC1的癌症)的方法；本文公开的鉴定、评估或选择需要治疗的对象的方法(例如，确定对象是否具有表达TRBC1的癌细胞)；以及实验室或诊断分析的方法(例如，包括检测TRBC1或TRBC1表达细胞的存在和/或水平的免疫学测定)。
细胞因子分子和细胞因子抑制剂分子
细胞因子通常是例如通过信号转导途径影响细胞活性的多肽。因此，多特异性或多功能性多肽的细胞因子是有用的，并且可以与受体介导的信号传导相关，该信号传导传递来自细胞膜外的信号，以调节细胞内的应答。细胞因子是蛋白质类信号传导化合物，其是免疫应答的介质。它们控制许多不同的细胞功能，包括增殖、分化和细胞存活/凋亡；细胞因子也参与几种病理生理学过程，包括病毒感染和自身免疫性疾病。细胞因子在各种刺激下由先天免疫系统(单核细胞、巨噬细胞、树突细胞)和适应性免疫系统(T细胞和B细胞)的各种细胞合成。细胞因子可分为两组：促炎性和抗炎性。促炎性细胞因子(包括IFNγ、IL-1、IL-6和TNF-α)主要来源于先天免疫细胞和Th1细胞。抗炎性细胞因子(包括IL-10、IL-4、IL-13和IL-5)由Th2免疫细胞合成。
本发明尤其提供了多特异性(例如，双特异性、三特异性、四特异性)或多功能性分子，其包括例如工程化为含有一种或多种细胞因子分子，例如，免疫调节(例如，促炎性)细胞因子及其变体，例如，功能性变体。因此，在一些实施方案中，细胞因子分子是白介素或其变体，例如，功能性变体。在一些实施方案中，白介素是促炎性白介素。在一些实施方案中，白介素选自白介素-2(IL-2)、白介素-12(IL-12)、白介素-15(IL-15)、白介素-18(IL-18)、白介素-21(IL-21)、白介素-7(IL-7)或干扰素γ。在一些实施方案中，细胞因子分子是促炎性细胞因子。
在某些实施方案中，细胞因子是单链细胞因子。在某些实施方案中，细胞因子是多链细胞因子(例如，细胞因子包含2条或更多条(例如，2条)多肽链)。示例性多链细胞因子是IL-12。
有用的细胞因子的实例包括但不限于GM-CSF、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-21、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、MIP-1α、MIP-1β、TGF-β、TNF-α和TNFβ。在一个实施方案中，多特异性或多功能性多肽的细胞因子是选自GM-CSF、IL-2、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15、IL-21、IFN-α、IFN-γ、MIP-1α、MIP-1β和TGF-β的细胞因子。在一个实施方案中，多特异性或多功能性多肽的细胞因子是选自IL-2、IL-7、IL-10、IL-12、IL-15、IFN-α和IFN-γ的细胞因子。在某些实施方案中，细胞因子被突变，以除去N-和/或O-糖基化位点。糖基化的消除增加了可在重组生产中获得的产物的均一性。
在一个实施方案中，多特异性或多功能性多肽的细胞因子是IL-2。在具体实施方案中，IL-2细胞因子可以引发选自以下细胞应答中的一种或多种：活化T淋巴细胞中的增殖、活化T淋巴细胞中的分化、细胞毒性T细胞(CTL)活性、活化B细胞中的增殖、活化B细胞中的分化、自然杀伤(NK)细胞中的增殖、NK细胞中的分化、活化T细胞或NK细胞的细胞因子分泌，以及NK/淋巴细胞活化的杀伤细胞(LAK)抗肿瘤细胞毒性。在另一具体实施方案中，IL-2细胞因子是对IL-2受体α-亚基的结合亲和力降低的突变型IL-2细胞因子。α-亚基(也称为CD25)与β-和γ-亚基(也分别称为CD122和CD132)一起形成异源三聚体高亲和力IL-2受体，而仅由β-和γ-亚基组成的二聚体受体被称为中间亲和力IL-2受体。如PCT专利申请第PCT/EP2012/051991号(其通过引用以其整体并入本文)中所述，与野生型IL-2多肽相比，与IL-2受体α-亚基结合降低的突变型IL-2多肽在调节性T细胞中诱导IL-2信号传导的能力降低，在T细胞中诱导较少的活化诱导的细胞死亡(AICD)，并且体内毒性分布(toxicityprofile)降低。使用这种毒性降低的细胞因子特别有利于根据本发明的多特异性或多功能性多肽，其因为Fc结构域的存在而具有长的血清半衰期。在一个实施方案中，根据本发明的多特异性或多功能性多肽的突变型IL-2细胞因子包含至少一个氨基酸突变，与未突变型IL-2细胞因子相比，其降低或消除突变型IL-2细胞因子对IL-2受体(CD25)α亚基的亲和力，但保留突变型IL-2细胞因子对中间亲和力IL-2受体(由IL-2受体的β和γ亚基组成)的亲和力。在一个实施方案中，一个或多个氨基酸突变是氨基酸取代。在具体实施方案中，突变型IL-2细胞因子在选自对应于人IL-2的42、45和72位残基位置的一个、两个或三个位置处包含一个、两个或三个氨基酸取代。在更具体实施方案中，突变型IL-2细胞因子在对应于人IL-2的42、45和72位残基的位置处包含三个氨基酸取代。在甚至更具体的实施方案中，突变型IL-2细胞因子是包含氨基酸取代F42A、Y45A和L72G的人IL-2。在一个实施方案中，突变型IL-2细胞因子在对应于人IL-2的第3位位置处另外包含氨基酸突变，其消除IL-2的O-糖基化位点。特别地，所述另外的氨基酸突变是用丙氨酸残基取代苏氨酸残基的氨基酸取代。可用于本发明的特定突变型IL-2细胞因子在对应于人IL-2的3、42、45和72位残基的位置处包含四个氨基酸取代。具体的氨基酸取代是T3A、F42A、Y45A和L72G。如PCT专利申请第PCT/EP2012/051991号和所附实施例中所证明的，所述四倍突变型IL-2多肽(IL-2qm)表现出与CD25无可检测到的结合、在T细胞中诱导凋亡的能力降低、在T.sub.reg细胞中诱导IL-2信号传导的能力降低，以及体内毒性分布降低。然而，它保留了活化效应细胞中的IL-2信号传导、诱导效应细胞增殖和由NK细胞生成作为次级细胞因子的IFN-γ的能力。
根据上述实施方案中任一项的IL-2或突变型IL-2细胞因子可包含另外的突变，该突变提供了进一步的优点，例如表达或稳定性增加。例如，第125位处的半胱氨酸可被中性氨基酸(例如丙氨酸)取代，以避免形成二硫键连接的IL-2二聚体。因此，在某些实施方案中，根据本发明的多特异性或多功能性多肽的IL-2或突变型IL-2细胞因子在对应于人IL-2的第125位残基的位置处包含另外的氨基酸突变。在一个实施方案中，所述另外的氨基酸突变是氨基酸取代C125A。
在具体实施方案中，多特异性或多功能性多肽的IL-2细胞因子包含SEQ ID NO:7227
[APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFAQSIISTLT]的多肽序列。在另一具体实施方案中，多特异性或多功能性多肽的IL-2细胞因子包含SEQ ID NO:7228[APASSSTKKT QLQLEHLLLD LQMILNGINN YKNPKLTRMLTAKFAMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNGAQSKNFHL RPRDLISNIN VIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFAQSIISTLT]的多肽序列。
在另一实施方案中，多特异性或多功能性多肽的细胞因子是IL-12。在具体实施方案中，所述IL-12细胞因子是单链IL-12细胞因子。在甚至更具体的实施方案中，单链IL-12细胞因子包含SEQ IDNO:7229[IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWT LDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS]的多肽序列。在一个实施方案中，IL-12细胞因子可以引发选自以下的细胞应答中的一种或多种：NK细胞中的增殖、NK细胞中的分化、T细胞中的增殖和T细胞中的分化。
在另一实施方案中，多特异性或多功能性多肽的细胞因子是IL-10。在具体实施方案中，所述IL-10细胞因子是单链IL-10细胞因子。在甚至更具体的实施方案中，单链IL-10细胞因子包含SEQ ID NO:7230[SPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLRLRRCHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRNGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSSPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLRLRRCHRFLPCENKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRN]的多肽序列。在另一具体实施方案中，IL-10细胞因子是单体IL-10细胞因子。在更具体的实施方案中，单体IL-10细胞因子包含SEQ ID NO:7231，
SPGQGTQSENSCTHFPGNLPNMLRDLRDAFSRVKTFFQMKDQLDNLLLKESLLEDFKGYLGCQALSEMIQFYLEEVMPQAENQDPDIKAHVNSLGENLKTLRLRLRRCHRFLPCENGGGSGGKSKAVEQVKNAFNKLQEKGIYKAMSEFDIFINYIEAYMTMKIRN的多肽序列。在一个实施方案中，IL-10细胞因子可以引发选自以下的细胞应答中的一种或多种：细胞因子分泌的抑制、抗原呈递细胞的抗原呈递的抑制、氧自由基释放的减少和T细胞增殖的抑制。根据本发明的多特异性或多功能性多肽，其中细胞因子是IL-10，特别用于下调炎症，例如，用于治疗炎性障碍。
在另一实施方案中，多特异性或多功能性多肽的细胞因子是IL-15。在具体实施方案中，所述IL-15细胞因子是对IL-15受体α-亚基的结合亲和力降低的突变型IL-15细胞因子。不希望受理论束缚，与野生型IL-15多肽相比，与IL-15受体α-亚基结合降低的突变型IL-15多肽在全身结合至成纤维细胞的能力降低，导致药代动力学和毒性分布改善。使用毒性降低的细胞因子(例如所述的突变型IL-2和突变型IL-15效应部分)特别有利于根据本发明的多特异性或多功能性多肽，其因为Fc结构域的存在而具有长的血清半衰期。在一个实施方案中，根据本发明的多特异性或多功能性多肽的突变型IL-15细胞因子包含至少一个氨基酸突变，与未突变型IL-15细胞因子相比，其降低或消除突变型IL-15细胞因子对IL-15受体α-亚基的亲和力，但保留突变型IL-15细胞因子对中间亲和力IL-15/IL-2受体(由IL-15/IL-2受体的β-和γ-亚基组成)的亲和力。在一个实施方案中，氨基酸突变是氨基酸取代。在具体实施方案中，突变型IL-15细胞因子在对应于人IL-15的第53位残基的位置处包含氨基酸取代。在更具体实施方案中，突变型IL-15细胞因子是包含氨基酸取代E53A的人IL-15。在一个实施方案中，突变型IL-15细胞因子在对应于人IL-15的第79位位置处另外包含氨基酸突变，其消除IL-15的N-糖基化位点。特别地，所述另外的氨基酸突变是用丙氨酸残基取代天冬酰胺残基的氨基酸取代。在甚至更具体的实施方案中，IL-15细胞因子包含SEQ ID NO:7232，NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLASGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGAVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS的多肽序列。在一个实施方案中，IL-15细胞因子可以引发选自以下的细胞应答中的一种或多种：活化T淋巴细胞中的增殖、活化T淋巴细胞中的分化、细胞毒性T细胞(CTL)活性、活化B细胞中的增殖、活化B细胞中的分化、自然杀伤(NK)细胞中的增殖、NK细胞中的分化、活化T细胞或NK细胞的细胞因子分泌，以及NK/淋巴细胞活化杀伤细胞(LAK)抗肿瘤细胞毒性。
可在多特异性或多功能性多肽中用作效应部分的突变型细胞因子分子可以通过使用本领域公知的遗传或化学方法进行缺失、取代、插入或修饰来制备。遗传方法可包括编码DNA序列的位点特异性诱变、PCR、基因合成等。可以例如通过测序验证正确的核苷酸改变。取代或插入可涉及天然以及非天然的氨基酸残基。氨基酸修饰包括公知的化学修饰方法，例如添加或去除糖基化位点或碳水化合物附着物等。
在一个实施方案中，多特异性或多功能性多肽的细胞因子(特别是单链细胞因子)是GM-CSF。在具体实施方案中，GM-CSF细胞因子可以引发粒细胞、单核细胞或树突细胞中的增殖和/或分化。在一个实施方案中，多特异性或多功能性多肽的细胞因子(特别是单链细胞因子)是IFN-α。在具体实施方案中，IFN-α细胞因子可以引发选自以下的细胞应答中的一种或多种：抑制病毒感染细胞中的病毒复制，以及上调主要组织相容性复合体I(MHC I)的表达。在另一具体实施方案中，IFN-α细胞因子可以抑制肿瘤细胞中的增殖。在一个实施方案中，多特异性或多功能性多肽的细胞因子(特别是单链细胞因子)是IFNγ。在具体实施方案中，IFN-γ细胞因子可以引发选自以下的细胞应答中的一种或多种：巨噬细胞活性增加、MHC分子表达增加和NK细胞活性增加。在一个实施方案中，多特异性或多功能性多肽的细胞因子(特别是单链细胞因子)是IL-7。在具体实施方案中，IL-7细胞因子可以引发T和/或B淋巴细胞的增殖。在一个实施方案中，多特异性或多功能性多肽的细胞因子(特别是单链细胞因子)是IL-8。在具体实施方案中，IL-8细胞因子可以引发嗜中性粒细胞的趋化性。在一个实施方案中，多特异性或多功能性多肽的细胞因子(特别是单链细胞因子)是MIP-1α。在具体实施方案中，MIP-1α细胞因子可以引发单核细胞和T淋巴细胞中的趋化性。在一个实施方案中，多特异性或多功能性多肽的细胞因子(特别是单链细胞因子)是MIP-1β。在具体实施方案中，MIP-1β细胞因子可以引发单核细胞和T淋巴细胞中的趋化性。在一个实施方案中，多特异性或多功能性多肽的细胞因子(特别是单链细胞因子)是TGF-β。在具体实施方案中，TGF-β细胞因子可以引发选自以下的细胞应答中的一种或多种：单核细胞中的趋化性、巨噬细胞中的趋化性、活化的巨噬细胞中IL-1表达的上调和活化的B细胞中IgA表达的上调。
在一个实施方案中，本发明的多特异性或多功能性多肽以比对照细胞因子的解离常数(KD)大至少约1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10倍的解离常数(KD)结合至细胞因子受体。在另一实施方案中，多特异性或多功能性多肽以比包含两个或更多个效应部分的相应多特异性或多功能性多肽的KD大至少2、3、4、5、6、7、8、9或10倍的KD结合至细胞因子受体。在另一实施方案中，多特异性或多功能性多肽以比包含两种或更多种细胞因子的相应多特异性或多功能性多肽的解离常数KD大约10倍的解离常数KD结合至细胞因子受体。
在一些实施方案中，本文公开的多特异性分子包括细胞因子分子。在实施方案中，细胞因子分子包括细胞因子的全长、片段或变体；细胞因子受体结构域，例如，细胞因子受体二聚化结构域；或细胞因子受体的激动剂，例如，细胞因子受体的抗体分子(例如，激动性抗体)。
在一些实施方案中，细胞因子分子选自IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、IL-7、IL-21或干扰素γ，或其片段或变体，或上述细胞因子中任一种的组合。细胞因子分子可以是单体或二聚体。在实施方案中，细胞因子分子可进一步包括细胞因子受体二聚化结构域。
在其他实施方案中，细胞因子分子是细胞因子受体的激动剂，例如，选自IL-15Ra或IL-21R的细胞因子受体的抗体分子(例如，激动性抗体)。
在一个实施方案中，细胞因子分子是IL-15，例如，人IL-15，例如，包含以下氨基酸序列：
NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:7017)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7017的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在一些实施方案中，细胞因子分子包含受体二聚化结构域，例如，IL15Rα二聚化结构域。在一个实施方案中，IL15Rα二聚化结构域包含以下氨基酸序列：MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVL(SEQ ID NO:7018)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7018的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不超过五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。在一些实施方案中，多特异性分子的细胞因子分子(例如，IL-15)和受体二聚化结构域(例如，IL15Rα二聚化结构域)例如经由接头(例如，Gly-Ser接头，例如，包含氨基酸序列SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ(SEQ ID NO:7019)的接头)共价连接。在其他实施方案中，多特异性分子的细胞因子分子(例如，IL-15)和受体二聚化结构域(例如，IL15Rα二聚化结构域)不是共价连接的，例如，是非共价缔合的。
在其他实施方案中，细胞因子分子是IL-2，例如，人IL-2，例如，包含以下氨基酸序列：
APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT(SEQ ID NO:7020)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7020的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，细胞因子分子是IL-18，例如，人IL-18，例如，包含以下氨基酸序列：
YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED(SEQ ID NO:7021)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7021的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，细胞因子分子是IL-21，例如，人IL-21，例如，包含以下氨基酸序列：
QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS(SEQ ID NO:7022)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7022的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，细胞因子分子是干扰素γ，例如，人干扰素γ，例如，包含以下氨基酸序列：
QDPYVKEAENLKKYFNAGHSDVADNGTLFLGILKNWKEESDRKIMQSQIVSFYFKLFKNFKDDQSIQKSVETIKEDMNVKFFNSNKKKRDDFEKLTNYSVTDLNVQRKAIHELIQVMAELSPAAKTGKRKRSQMLFRG(SEQ IDNO:7023)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7023的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
TGF-β抑制剂
本发明尤其进一步提供了多特异性(例如，双特异性、三特异性、四特异性)或多功能性分子，其包括例如工程化为含有一种或多种细胞因子抑制剂分子，例如，免疫调节(例如，促炎性)细胞因子的抑制剂及其变体，例如，功能性变体。因此，在一些实施方案中，细胞因子抑制剂分子是TGF-β抑制剂。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂结合至并抑制TGF-β，例如，降低TGF-β的活性。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂抑制TGF-β1(例如，降低其活性)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂抑制TGF-β2(例如，降低其活性)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂抑制TGF-β3(例如，降低其活性)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂抑制TGF-β1和TGF-β3(例如，降低其活性)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂抑制TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3(例如，降低其活性)。
在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGF-β受体的一部分(例如，TGF-β受体的胞外结构域)，其能够抑制TGF-β或其功能性片段或变体(例如，降低其活性)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR1多肽(例如，TGFBR1的胞外结构域或其功能性变体)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR2多肽(例如，TGFBR2的胞外结构域或其功能性变体)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR3多肽(例如，TGFBR3的胞外结构域或其功能性变体)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR1多肽(例如，TGFBR1的胞外结构域或其功能性变体)和TGFBR2多肽(例如，TGFBR2的胞外结构域或其功能性变体)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR1多肽(例如，TGFBR1的胞外结构域或其功能性变体)和TGFBR3多肽(例如，TGFBR3的胞外结构域或其功能性变体)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR2多肽(例如，TGFBR2的胞外结构域或其功能性变体)和TGFBR3多肽(例如，TGFBR3的胞外结构域或其功能性变体)。
可用作TGF-β抑制剂的示例性TGF-β受体多肽已公开于US 8993524、US 9676863、US 8658135、US 20150056199、US 20070184052和WO2017037634中，它们全部通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR1的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:95的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:96的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:97的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。
在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR2的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:98的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:99的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。
在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含TGFBR3的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:106的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:107的胞外结构域，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含SEQ ID NO:108的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少80％、85％、90％或95％相同的序列)。
在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含不多于一个TGF-β受体胞外结构域。在一些实施方案中，TGF-β抑制剂包含两个或更多个(例如，两个、三个、四个、五个或更多个)例如经由接头连接在一起的TGF-β受体胞外结构域。
表19.TGF-β多肽或TGF-β受体多肽的示例性氨基酸序列
Figure BDA0004017031980002491
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Figure BDA0004017031980002501
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Figure BDA0004017031980002511
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Figure BDA0004017031980002521
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Figure BDA0004017031980002531
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Figure BDA0004017031980002541
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Figure BDA0004017031980002551
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免疫细胞接合物
本文公开的多特异性或多功能性分子的免疫细胞接合物可介导免疫细胞(例如，免疫效应细胞)的结合和/或活化。在一些实施方案中，免疫细胞选自T细胞、NK细胞、B细胞、树突细胞或巨噬细胞接合物或其组合。在一些实施方案中，免疫细胞接合物选自T细胞接合物、NK细胞接合物、B细胞接合物、树突细胞接合物或巨噬细胞接合物或其组合中的一种、两种、三种或全部。免疫细胞接合物可以是免疫系统的激动剂。在一些实施方案中，免疫细胞接合物可以是抗体分子、配体分子(例如，进一步包含免疫球蛋白恒定区(例如，Fc区)的配体)、小分子、核苷酸分子。
自然杀伤细胞接合物
自然杀伤(NK)细胞以抗体非依赖性方式识别并破坏肿瘤和病毒感染的细胞。NK细胞的调控是通过活化和抑制NK细胞表面上的受体介导的。活化受体的一个家族是天然细胞毒性受体(NCR)，其包括NKp30、NKp44和NKp46。NCR通过识别癌细胞上的硫酸乙酰肝素启动肿瘤靶向性。NKG2D是在活化的杀伤(NK)细胞上提供刺激和共刺激先天免疫应答的受体，导致细胞毒性活性。DNAM1是参与细胞间粘附、淋巴细胞信号传导、细胞毒性和由细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和NK细胞介导的淋巴因子分泌的受体。DAP10(也称为HCST)是跨膜衔接蛋白，其与KLRK1缔合，以在淋巴和髓样细胞中形成活化受体KLRK1-HCST；该受体在触发针对表达细胞表面配体(例如MHC I类链相关MICA和MICB以及U(任选地L1)6结合蛋白(ULBP))的靶细胞的细胞毒性中起主要作用；KLRK1-HCST受体在针对肿瘤的免疫监视中起作用并且是肿瘤细胞的细胞溶解所必需的；实际上，不表达KLRK1配体的黑色素瘤细胞会逃脱由NK细胞介导的免疫监视。CD16是IgG Fc区的受体，其结合复合或聚集的IgG以及单体IgG，从而介导抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)和其他抗体依赖性应答，例如吞噬作用。
本发明尤其提供了多特异性(例如，双特异性、三特异性、四特异性)或多功能性分子，其工程化为含有介导NK细胞的结合和/或活化的一种或多种NK细胞接合物。因此，在一些实施方案中，NK细胞接合物选自抗原结合结构域或配体，其结合至(例如，活化)：NKp30、NKp40、NKp44、NKp46、NKG2D、DNAM1、DAP10、CD16(例如，CD16a、CD16b或两者)、CRTAM、CD27、PSGL1、CD96、CD100(SEMA4D)、NKp80、CD244(也称为SLAMF4或2B4)、SLAMF6、SLAMF7、KIR2DS2、KIR2DS4、KIR3DS1、KIR2DS3、KIR2DS5、KIR2DS1、CD94、NKG2C、NKG2E或CD160。
在一些实施方案中，NK细胞接合物是结合至NKp30(例如，NK细胞表面上存在(例如，表达或展示)的NKp30)的抗原结合结构域，并且包含表20A或表20B、表22、表23A或表23B、表24、表25、表26、表21A或表21B、和表17中公开的任何CDR氨基酸序列、框架区(FWR)氨基酸序列或可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，NK细胞接合物是结合至NKp30(例如，NK细胞表面上存在(例如，表达或展示)的NKp30)的抗原结合结构域，并且包含美国专利第6,979,546号、美国专利第9,447,185号、PCT申请第WO2015121383A1号、PCT申请第WO2016110468A1号、PCT申请第WO2004056392A1号或美国申请公布第US 20070231322A1号中公开的任何CDR氨基酸序列、框架区(FWR)氨基酸序列或可变区氨基酸序列，这些序列在此通过引用并入。在一些实施方案中，NK细胞接合物(例如，结合至NKp30的抗原结合结构域)与NK细胞的结合活化NK细胞。结合至NKp30(例如，NK细胞表面上存在(例如，表达或展示)的NKp30)的抗原结合结构域可被称为靶向NKp30、NK细胞或两者。
在一些实施方案中，结合至NKp30的抗原结合结构域包含表20A或表20B、表21A或表21B、或表22中公开的一个或多个CDR(例如，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和/或VLCDR3)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至NKp30的抗原结合结构域包含表20A或表20B、表21A或表21B、或表22中公开的一个或多个框架区(例如，VHFWR1、VHFWR2、VHFWR3、VHFWR4、VLFWR1、VLFWR2、VLFWR3和/或VLFWR4)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至NKp30的抗原结合结构域包含表25中公开的VH和/或VL，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至NKp30的抗原结合结构域包含表26中公开的氨基酸序列，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
在一些实施方案中，结合至NKP30的抗原结合结构域包含表23和/或表24中公开的一个或多个CDR(例如，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和/或VLCDR3)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至NKP30的抗原结合结构域包含表23和/或表24中公开的一个或多个框架区(例如，VHFWR1、VHFWR2、VHFWR3、VHFWR4、VLFWR1、VLFWR2、VLFWR3和/或VLFWR4)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。在一些实施方案中，结合至NKP30的抗原结合结构域包含表25中公开的VH和/或VL，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
在一些实施方案中，结合至NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含重链互补决定区1(VHCDR1)、VHCDR2和VHCDR3，该VL包含轻链互补决定区1(VLCDR1)、VLCDR2和VLCDR3。
在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、6001和7315的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、6001和6002的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、6008和6009的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ IDNO:7313、7385和7315的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、7318和6009的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:C019、C021和C023的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:C033、C035和C037的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:C047、C049和C051的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:C061、C063和C065的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:C075、C077和C079的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:C089、C091和C093的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:C103、C105和C107的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:C116、C118和C120的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7326、7327和7329的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:6063、6064和7293的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:6070、6071和6072的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ IDNO:6070、6064和7321的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、6001、7315、7326、7327和7329的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、6001、6002、6063、6064和7293的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、6008、6009、6070、6071和6072的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、7385、7315、6070、6064和7321的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7313、7318、6009、6070、6064和7321的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ IDNO:C019、C021、C023、C026、C028和C030的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:C033、C035、C037、C040、C042和C044的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:C047、C049、C051、C054、C056和C058的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:C061、C063、C065、C068、C070和C072的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:C075、C077、C079、C082、C084和C086的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ IDNO:C089、C091、C093、C096、C098和C100的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:C103、C105、C107、C110、C112和C113的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:C116、C118、C120、C123、C125和C127的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:C026、C028和C030的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:C040、C042和C044的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:C054、C056和C058的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ IDNO:C068、C070和C072的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:C082、C084和C086的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:C096、C098和C100的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:C110、C112和C113的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:C123、C125和C127的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VH包含选自SEQ ID NO:7298或7300-7304的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，和/或VL包含选自SEQ ID NO:7299或7305-7309的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7302和7305的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7302和7309的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，VH包含选自SEQ ID NO:6121或6123-6128的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，和/或VL包含选自SEQ ID NO:7294或6137-6141的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH包含选自SEQ ID NO:6122或6129-6134的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，和/或VL包含选自SEQ ID NO:6136或6142-6147的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7295和7296的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:7297和7296的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，VH和VL分别包含SEQ ID NO:6122和6136的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，结合至NKp30的抗原结合结构域包含SEQ ID NO:7310的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，结合至NKp30的抗原结合结构域包含SEQ ID NO:7311的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。在一些实施方案中，结合至NKp30的抗原结合结构域包含SEQ ID NO:6187、6188、6189或6190的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6000的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6001的VHCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6002的VHCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。在一些实施方案中，NKp30抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6000的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6001的VHCDR2氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6002的VHCDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6063的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6064的VLCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:7293的VLCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6063的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6064的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:7293的VLCDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ IDNO:6000的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6001的VHCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6002的VHCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，该VL包含SEQ ID NO:6063的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6064的VLCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:7293的VLCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。在一些实施方案中，NKp30抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ ID NO:6000的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6001的VHCDR2氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6002的VHCDR3氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:6063的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6064的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:7293的VLCDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6007的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6008的VHCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6009的VHCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。在一些实施方案中，NKp30抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6007的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6008的VHCDR2氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6009的VHCDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6070的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6071的VLCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6072的VLCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6070的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6071的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:6072的VLCDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ IDNO:6007的重链互补决定区1(VHCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6008的VHCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6009的VHCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，该VL包含SEQ ID NO:6070的轻链互补决定区1(VLCDR1)氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6071的VLCDR2氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6072的VLCDR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3或4个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)。在一些实施方案中，NKp30抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ ID NO:6007的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6008的VHCDR2氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6009的VHCDR3氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:6070的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:6071的VLCDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:6072的VLCDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6003的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6004的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6005的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6006的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6066的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6067的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:7292的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6069的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ IDNO:6003的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6004的VHFWR2氨基酸序列、SEQID NO:6005的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6006的VHFWR4氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:6066的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6067的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:7292的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6069的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6003的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6004的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6005的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6006的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6066的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6067的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:7292的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6069的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ IDNO:6003的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6004的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6005的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6006的VHFWR4氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:6066的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6067的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:7292的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6069的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6010的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6011的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6012的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6013的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6073的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6074的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6075的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6076的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ IDNO:6010的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6011的VHFWR2氨基酸序列、SEQID NO:6012的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6013的VHFWR4氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:6073的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6074的VLFWR2氨基酸序列、SEQ ID NO:6075的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6076的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6010的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6011的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6012的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6013的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6073的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6074的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6075的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6076的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ IDNO:6010的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6011的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6012的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6013的VHFWR4氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:6073的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6074的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6075的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6076的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6014的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6015的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6016的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6017的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6014的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6015的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6016的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6017的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6077的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6078的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6079的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6080的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6077的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6078的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6079的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6080的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6018的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6019的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6020的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6021的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6018的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6019的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6020的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6021的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6081的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6082的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6083的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6084的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6081的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6082的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6083的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6084的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6022的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6023的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6024的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6025的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6022的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6023的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6024的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6025的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6085的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6086的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6087的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6088的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6085的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6086的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6087的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6088的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6026的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6027的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6028的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6029的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6026的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6027的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6028的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6029的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6089的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6090的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6091的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6092的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6089的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6090的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6091的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6092的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6030的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6032的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6033的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6034的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6030的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6032的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6033的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6034的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6093的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6094的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6095的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6096的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6093的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6094的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6095的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6096的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6035的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6036的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6037的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6038的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6035的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6036的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6037的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6038的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6039的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6040的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6041的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6042的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6039的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6040的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6041的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6042的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6097的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6098的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6099的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6100的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6097的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6098的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6099的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6100的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6043的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6044的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6045的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6046的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6043的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6044的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6045的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6046的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6101的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6102的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6103的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6104的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6101的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6102的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6103的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6104的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6047的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6048的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6049的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6050的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6047的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6048的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6049的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6050的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6105的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6106的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6107的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6108的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6105的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6106的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6107的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6108的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6051的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6052的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6053的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6054的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6051的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6052的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6053的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6054的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6109的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6110的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6111的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6112的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6109的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6110的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6111的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6112的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6055的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6056的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6057的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6058的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6055的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6056的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6057的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6058的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6113的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6114的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6115的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6116的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6113的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6114的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6115的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6116的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6059的重链框架区1(VHFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6060的VHFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6061的VHFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6062的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6059的VHFWR1氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6060的VHFWR2氨基酸序列(或从中具有不多于1、2、3、4、5或6个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6061的VHFWR3氨基酸序列(或具有不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ IDNO:6062的VHFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6117的轻链框架区1(VLFWR1)氨基酸序列、SEQ ID NO:6118的VLFWR2氨基酸序列、SEQ IDNO:6119的VLFWR3氨基酸序列，和/或SEQ ID NO:6120的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6117的VLFWR1氨基酸序列(或具有不多于1、2或3个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6118的VLFWR2氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)、SEQ ID NO:6119的VLFWR3氨基酸序列(或具有不多于1个突变(例如，取代、添加或缺失)的序列)，和/或SEQ ID NO:6120的VLFWR4氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6148的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6148具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6149的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6149具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6150的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6150具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6148的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6149的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6150的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ IDNO:6148的氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:6150的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ ID NO:6149的氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:6150的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6151的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6151具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6152的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6152具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6153的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6153具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6151的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH，该VH包含SEQ ID NO:6152的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VL，该VL包含SEQ ID NO:6153的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ IDNO:6151的氨基酸序列，该VL包含SEQ IDNO:6153的氨基酸序列。在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含VH和VL，该VH包含SEQ ID NO:6152的氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:6153的氨基酸序列。
在一些实施方案中，靶向NKp30的抗原结合结构域包含scFv。在一些实施方案中，scFv包含选自SEQ ID NO:6187-6190的氨基酸序列，或与其具有至少约93％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。
表20A.NKp30靶向性抗原结合结构域的示例性重链CDR和FWR(根据Kabat编号方案)
Figure BDA0004017031980002851
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Figure BDA0004017031980002861
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Figure BDA0004017031980002871
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Figure BDA0004017031980002881
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Figure BDA0004017031980002891
表20B.表20A的NKp30靶向性抗原结合结构域的示例性重链CDR和FWR(根据ABM编号方案)
Figure BDA0004017031980002892
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Figure BDA0004017031980002901
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Figure BDA0004017031980002911
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Figure BDA0004017031980002921
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Figure BDA0004017031980002931
表21A.NKp30靶向性抗原结合结构域的示例性重链CDR和FWR(根据Kabat编号方案)
Figure BDA0004017031980002932
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Figure BDA0004017031980002941
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Figure BDA0004017031980002951
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Figure BDA0004017031980002981
Figure BDA0004017031980002991
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表21B.表21A的NKp30靶向性抗原结合结构域的示例性重链CDR和FWR(根据ABM编号方案)
Figure BDA0004017031980002992
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Figure BDA0004017031980003001
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Figure BDA0004017031980003021
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Figure BDA0004017031980003041
表22.NKp30靶向性抗原结合结构域的示例性轻链CDR和FWR
Figure BDA0004017031980003051
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Figure BDA0004017031980003111
表23A.NKp30靶向性抗原结合结构域的示例性重链CDR和FWR
Figure BDA0004017031980003112
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Figure BDA0004017031980003121
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Figure BDA0004017031980003131
表23B.表23A的NKp30靶向性抗原结合结构域的示例性重链CDR和FWR(根据ABM编号方案)
Figure BDA0004017031980003132
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Figure BDA0004017031980003141
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Figure BDA0004017031980003151
表24.NKp30靶向性抗原结合结构域的示例性轻链CDR和FWR
Figure BDA0004017031980003161
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Figure BDA0004017031980003171
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Figure BDA0004017031980003181
表25.NKp30靶向性抗原结合结构域的示例性可变区
Figure BDA0004017031980003182
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Figure BDA0004017031980003191
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Figure BDA0004017031980003241
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Figure BDA0004017031980003261
表26.示例性NKp30靶向性抗原结合结构域/抗体分子
Figure BDA0004017031980003262
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Figure BDA0004017031980003271
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Figure BDA0004017031980003281
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Figure BDA0004017031980003301
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Figure BDA0004017031980003311
在一些实施方案中，NK细胞接合物是结合至NKp46(例如，NK细胞表面上存在(例如，表达或展示)的NKp46)的抗原结合结构域，并且包含表27中公开的任何CDR氨基酸序列、框架区(FWR)氨基酸序列或可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，NK细胞接合物(例如，结合至NKp46的抗原结合结构域)与NK细胞的结合活化NK细胞。结合至NKp46(例如，NK细胞表面上存在(例如，表达或展示)的NKp46)的抗原结合结构域可被称为靶向NKp46、NK细胞或两者。
在一些实施方案中，NK细胞接合物是结合至NKG2D(例如，NK细胞表面上存在(例如，表达或展示)的NKG2D)的抗原结合结构域，并且包含表27中公开的任何CDR氨基酸序列、框架区(FWR)氨基酸序列或可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，NK细胞接合物(例如，结合至NKG2D的抗原结合结构域)与NK细胞的结合活化NK细胞。结合至NKG2D(例如，NK细胞表面上存在(例如，表达或展示)的NKG2D)的抗原结合结构域可被称为靶向NKG2D、NK细胞或两者。
在一些实施方案中，NK细胞接合物是结合至CD16(例如，NK细胞表面上存在(例如，表达或展示)的CD16)的抗原结合结构域，并且包含表27中公开的任何CDR氨基酸序列、框架区(FWR)氨基酸序列或可变区氨基酸序列。在一些实施方案中，NK细胞接合物(例如，结合至CD16的抗原结合结构域)与NK细胞的结合活化NK细胞。结合至CD16(例如，NK细胞表面上存在(例如，表达或展示)的CD16)的抗原结合结构域可被称为靶向CD16、NK细胞或两者。
表27.NKp46、NKG2D或CD16靶向性抗原结合结构域的示例性可变区
Figure BDA0004017031980003321
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Figure BDA0004017031980003331
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Figure BDA0004017031980003341
在一个实施方案中，NK细胞接合物是NKp30的配体，例如，是B7-6，例如，包含以下氨基酸序列：
DLKVEMMAGGTQITPLNDNVTIFCNIFYSQPLNITSMGITWFWKSLTFDKEVKVFEFFGDHQEAFRPGAIVSPWRLKSGDASLRLPGIQLEEAGEYRCEVVVTPLKAQGTVQLEVVASPASRLLLDQVGMKENEDKYMCESSGFYPEAINITWEKQTQKFPHPIEISEDVITGPTIKNMDGTFNVTSCLKLNSSQEDPGTVYQCVVRHASLHTPLRSNFTLTAARHSLSETEKTDNFS(SEQ ID NO:7233)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7233的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在一些实施方案中，NK细胞接合物是NKp44或NKp46的配体，其是病毒HA。病毒血凝素(HA)是病毒表面上的糖蛋白。HA蛋白允许病毒经由唾液酸糖部分结合至细胞膜，这有助于病毒膜与细胞膜的融合(参见例如，Eur J Immunol.2001年9月；31(9):2680-9“Recognition of viral hemagglutinins by NKp44 but not by NKp30”；和Nature.2001年2月22日；409(6823):1055-60“Recognition of haemagglutinins on virus-infectedcells by NKp46 activates lysis by human NK cells”，其中每一个的内容通过引用并入本文)。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是NKG2D的配体，选自MICA、MICB或ULBP1，例如，其中：
(i)MICA包含以下氨基酸序列：
EPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLTEVHLDGQPFLRCDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRMTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETKEWTMPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLKSGVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASGFYPWNITLSWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICQGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHW(SEQ ID NO:7234)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7234具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列；
(ii)MICB包含以下氨基酸序列：
AEPHSLRYNLMVLSQDESVQSGFLAEGHLDGQPFLRYDRQKRRAKPQGQWAEDVLGAKTWDTETEDLTENGQDLRRTLTHIKDQKGGLHSLQEIRVCEIHEDSSTRGSRHFYYDGELFLSQNLETQESTVPQSSRAQTLAMNVTNFWKEDAMKTKTHYRAMQADCLQKLQRYLKSGVAIRRTVPPMVNVTCSEVSEGNITVTCRASSFYPRNITLTWRQDGVSLSHNTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRIRQGEEQRFTCYMEHSGNHGTHPVPSGKVLVLQSQRTD(SEQ IDNO:7235)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7235的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列；或
(iii)ULBP1包含以下氨基酸序列：
GWVDTHCLCYDFIITPKSRPEPQWCEVQGLVDERPFLHYDCVNHKAKAFASLGKKVNVTKTWEEQTETLRDVVDFLKGQLLDIQVENLIPIEPLTLQARMSCEHEAHGHGRGSWQFLFNGQKFLLFDSNNRKWTALHPGAKKMTEKWEKNRDVTMFFQKISLGDCKMWLEEFLMYWEQMLDPTKPPSLAPG(SEQ ID NO:7236)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7236的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是DNAM1的配体，选自NECTIN2或NECL5，例如，其中：
(i)NECTIN2包含以下氨基酸序列：
QDVRVQVLPEVRGQLGGTVELPCHLLPPVPGLYISLVTWQRPDAPANHQNVAAFHPKMGPSFPSPKPGSERLSFVSAKQSTGQDTEAELQDATLALHGLTVEDEGNYTCEFATFPKGSVRGMTWLRVIAKPKNQAEAQKVTFSQDPTTVALCISKEGRPPARISWLSSLDWEAKETQVSGTLAGTVTVTSRFTLVPSGRADGVTVTCKVEHESFEEPALIPVTLSVRYPPEVSISGYDDNWYLGRTDATLSCDVRSNPEPTGYDWSTTSGTFPTSAVAQGSQLVIHAVDSLFNTTFVCTVTNAVGMGRAEQVIFVRETPNTAGAGATGG(SEQ ID NO:7237)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7237的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列；或
(ii)NECL5包含以下氨基酸序列：
WPPPGTGDVVVQAPTQVPGFLGDSVTLPCYLQVPNMEVTHVSQLTWARHGESGSMAVFHQTQGPSYSESKRLEFVAARLGAELRNASLRMFGLRVEDEGNYTCLFVTFPQGSRSVDIWLRVLAKPQNTAEVQKVQLTGEPVPMARCVSTGGRPPAQITWHSDLGGMPNTSQVPGFLSGTVTVTSLWILVPSSQVDGKNVTCKVEHESFEKPQLLTVNLTVYYPPEVSISGYDNNWYLGQNEATLTCDARSNPEPTGYNWSTTMGPLPPFAVAQGAQLLIRPVDKPINTTLICNVTNALGARQAELTVQVKEGPPSEHSGISRN(SEQ ID NO:7238)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7238的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是DAP10的配体，其是NKG2D的衔接子(参见例如，Proc Natl Acad Sci U S A.2005年5月24日；102(21):7641-7646；和Blood，2011年9月15日，第118卷，第11期，其中每一个的全部内容通过引用并入本文)。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是CD16的配体，其是CD16a/b配体，例如，进一步包含抗体Fc区的CD16a/b配体(参见例如，Front Immunol.2013；4:76讨论的抗体如何使用Fc通过CD16触发NK细胞，其全部内容并入本文)。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是CRTAM的配体，其是NECL2，例如，其中NECL2包含以下氨基酸序列：
QNLFTKDVTVIEGEVATISCQVNKSDDSVIQLLNPNRQTIYFRDFRPLKDSRFQLLNFSSSELKVSLTNVSISDEGRYFCQLYTDPPQESYTTITVLVPPRNLMIDIQKDTAVEGEEIEVNCTAMASKPATTIRWFKGNTELKGKSEVEEWSDMYTVTSQLMLKVHKEDDGVPVICQVEHPAVTGNLQTQRYLEVQYKPQVHIQMTYPLQGLTREGDALELTCEAIGKPQPVMVTWVRVDDEMPQHAVLSGPNLFINNLNKTDNGTYRCEASNIVGKAHSDYMLYVYDPPTTIPPPTTTTTTTTTTTTTILTIITDSRAGEEGSIRAVDH(SEQ ID NO:7239)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7239的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是CD27的配体，其是CD70，例如，其中CD70包含以下氨基酸序列：
QRFAQAQQQLPLESLGWDVAELQLNHTGPQQDPRLYWQGGPALGRSFLHGPELDKGQLRIHRDGIYMVHIQVTLAICSSTTASRHHPTTLAVGICSPASRSISLLRLSFHQGCTIASQRLTPLARGDTLCTNLTGTLLPSRNTDETFFGVQWVRP(SEQ ID NO:7240)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7240的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是PSGL1的配体，其是L-选择素(CD62L)，例如，其中L-选择素包含以下氨基酸序列：
WTYHYSEKPMNWQRARRFCRDNYTDLVAIQNKAEIEYLEKTLPFSRSYYWIGIRKIGGIWTWVGTNKSLTEEAENWGDGEPNNKKNKEDCVEIYIKRNKDAGKWNDDACHKLKAALCYTASCQPWSCSGHGECVEIINNYTCNCDVGYYGPQCQFVIQCEPLEAPELGTMDCTHPLGNFSFSSQCAFSCSEGTNLTGIEETTCGPFGNWSSPEPTCQVIQCEPLSAPDLGIMNCSHPLASFSFTSACTFICSEGTELIGKKKTICESSGIWSNPSPICQKLDKSFSMIKEGDYN(SEQ ID NO:7241)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQID NO:7241的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是CD96的配体，其是NECL5，例如，其中NECL5包含以下氨基酸序列：
WPPPGTGDVVVQAPTQVPGFLGDSVTLPCYLQVPNMEVTHVSQLTWARHGESGSMAVFHQTQGPSYSESKRLEFVAARLGAELRNASLRMFGLRVEDEGNYTCLFVTFPQGSRSVDIWLRVLAKPQNTAEVQKVQLTGEPVPMARCVSTGGRPPAQITWHSDLGGMPNTSQVPGFLSGTVTVTSLWILVPSSQVDGKNVTCKVEHESFEKPQLLTVNLTVYYPPEVSISGYDNNWYLGQNEATLTCDARSNPEPTGYNWSTTMGPLPPFAVAQGAQLLIRPVDKPINTTLICNVTNALGARQAELTVQVKEGPPSEHSGISRN(SEQ ID NO:7238)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7238的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是CD100(SEMA4D)的配体，其是CD72，例如，其中CD72包含以下氨基酸序列：
RYLQVSQQLQQTNRVLEVTNSSLRQQLRLKITQLGQSAEDLQGSRRELAQSQEALQVEQRAHQAAEGQLQACQADRQKTKETLQSEEQQRRALEQKLSNMENRLKPFFTCGSADTCCPSGWIMHQKSCFYISLTSKNWQESQKQCETLSSKLATFSEIYPQSHSYYFLNSLLPNGGSGNSYWTGLSSNKDWKLTDDTQRTRTYAQSSKCNKVHKTWSWWTLESESCRSSLPYICEMTAFRFPD(SEQ ID NO:7242)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7242的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是NKp80的配体，其是CLEC2B(AICL)，例如，其中CLEC2B(AICL)包含以下氨基酸序列：
KLTRDSQSLCPYDWIGFQNKCYYFSKEEGDWNSSKYNCSTQHADLTIIDNIEEMNFLRRYKCSSDHWIGLKMAKNRTGQWVDGATFTKSFGMRGSEGCAYLSDDGAATARCYTERKWICRKRIH(SEQ ID NO:7243)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7243的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，NK细胞接合物是CD244的配体，其是CD48，例如，其中CD48包含以下氨基酸序列：
QGHLVHMTVVSGSNVTLNISESLPENYKQLTWFYTFDQKIVEWDSRKSKYFESKFKGRVRLDPQSGALYISKVQKEDNSTYIMRVLKKTGNEQEWKIKLQVLDPVPKPVIKIEKIEDMDDNCYLKLSCVIPGESVNYTWYGDKRPFPKELQNSVLETTLMPHNYSRCYTCQVSNSVSSKNGTVCLSPPCTLARS(SEQ ID NO:7244)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7244的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在一些实施方案中，NK细胞接合物是病毒血凝素(HA)，HA是存在于流感病毒表面上的糖蛋白。它负责将病毒结合至膜上具有唾液酸的细胞，例如上呼吸道中的细胞或红细胞。HA具有至少18种不同的抗原。这些亚型被命名为H1至H18。NCR可以识别病毒蛋白。NKp46已显示出能够与流感的HA和副粘病毒(包括仙台病毒和新城疫病毒)的HA-NA相互作用。除NKp46以外，NKp44也可以与不同流感亚型的HA功能上相互作用。
死亡受体信号接合物
死亡受体(例如，死亡受体4和5(DR4和DR5，分别也称为TRAIL-R1和TRAIL-R2))是在正常人组织中广泛表达的三聚体I型跨膜蛋白。死亡受体的活化导致诱导细胞死亡的胞内信号传导。TNF相关的凋亡诱导配体(TRAIL)(也称为Apo2L)是三聚体蛋白，其结合至死亡受体，活化它们诱导细胞死亡的信号传导(Amarante-Mendes和Griffith.PharmacolTher.2015年11月；155:117-31)。
本发明尤其提供了多特异性(例如，双特异性、三特异性、四特异性)或多功能性分子，其工程化为含有一个或多个死亡受体信号接合物，该死亡受体信号接合物介导与死亡受体的结合和/或靶细胞(例如，肿瘤抗原呈递细胞(例如，癌细胞，例如，淋巴瘤细胞)或表达TRBC1或TRBC2的淋巴细胞)上死亡受体信号传导的活化。因此，在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含一种或多种TRAIL多肽或其片段(TRAIL分子)、一种或多种死亡受体或其片段(死亡受体分子)，或一种或多种特异性结合至死亡受体(例如，并活化死亡受体信号传导)的抗原结合结构域。不希望受理论束缚，认为可活化靶细胞上的死亡受体信号传导的死亡受体信号接合物可以诱导靶细胞(例如，靶疾病细胞，例如，靶癌细胞)死亡。
死亡受体信号接合物可包含来自或来源于本领域技术人员已知的TRAIL和死亡受体形式的TRAIL分子和/或死亡受体分子。在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含人TRAIL分子或死亡受体分子。在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含小鼠TRAIL分子或死亡受体分子。在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含哺乳动物TRAIL分子或死亡受体分子。在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含(例如，相对于野生型TRAIL分子或死亡受体分子)截短的TRAIL分子或死亡受体分子。
在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含截短的TRAIL分子，其至少包含对应于人TRAIL的95-281位氨基酸的残基，例如，包含对应于人TRAIL的95-281位氨基酸的残基的截短TRAIL分子。在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含截短的TRAIL分子，其包含人TRAIL的95-281位残基。
在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含截短的TRAIL分子，其至少包含对应于人TRAIL的122-281位氨基酸的残基，例如，包含对应于人TRAIL的122-281位氨基酸的残基的截短TRAIL分子。在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含截短的TRAIL分子，其包含人TRAIL的122-281位残基。
在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含一个、两个或三个TRAIL分子(例如，死亡受体信号接合物分别是单体、二聚体或三聚体TRAIL分子)。在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含一个、两个或三个死亡受体分子(例如，死亡受体信号接合物分别是单体、二聚体或三聚体死亡受体分子)。在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含特异性结合至死亡受体(例如，一种或多种死亡受体，例如，相同或不同的死亡受体)的一个、两个或三个抗原结合结构域。
在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含选自表28的氨基酸序列(或与选自表28的序列具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含SEQ ID NO:6157的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6157具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含SEQ ID NO:6158的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6158具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含SEQ ID NO:6159的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6159具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含SEQ ID NO:6160的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6160具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含SEQ ID NO:6161的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6161具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含SEQ ID NO:6162的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6162具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含SEQ ID NO:6163的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6163具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含SEQ ID NO:6164的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6164具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含SEQ ID NO:6165的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6165具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
在一些实施方案中，死亡受体信号接合物包含在与本发明多功能性分子的另一组分相同的多肽链上，例如，死亡受体信号接合物包含在与优先结合至淋巴瘤细胞(例如，T细胞)上的肿瘤抗原的第一抗原结合结构域的重链和/或轻链相同的多肽链上，其中肿瘤抗原是T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)或T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)、选择性地靶向表达T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)或T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)的淋巴细胞的第一抗原结合结构域的重链和/或轻链、免疫细胞接合物、细胞因子分子或基质修饰部分，例如，作为融合蛋白。在一些实施方案中，多功能性分子包含融合蛋白，该融合蛋白包含死亡受体信号接合物和优先结合至淋巴瘤细胞(例如，T细胞)上的肿瘤抗原的第一抗原结合结构域的轻链，其中肿瘤抗原是T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)或T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)。在一些实施方案中，多功能性分子包含融合蛋白，该融合蛋白包含死亡受体信号接合物和选择性地靶向表达T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)或T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)的淋巴细胞的第一抗原结合结构域的轻链。
在一些实施方案中，包含死亡受体信号接合物和靶向TRBC1的第一抗原结合结构域的轻链的融合蛋白包含SEQ ID NO:6170的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6170具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
在一些实施方案中，包含死亡受体信号接合物和靶向TRBC1的第一抗原结合结构域的轻链的融合蛋白包含SEQ ID NO:6171的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6171具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
在一些实施方案中，包含死亡受体信号接合物和靶向TRBC1的第一抗原结合结构域的轻链的融合蛋白包含SEQ ID NO:6172的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6172具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
在一些实施方案中，多功能性分子包含融合蛋白，该融合蛋白包含死亡受体信号接合物以及靶向TRBC1的第一抗原结合结构域的轻链和靶向TRBC1的第一抗原结合结构域的重链，该轻链包含SEQ ID NO:6170的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6170具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，该重链包含SEQ ID NO:6167的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6167具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，多功能性分子包含融合蛋白，该融合蛋白包含死亡受体信号接合物以及靶向TRBC1的第一抗原结合结构域的轻链和靶向TRBC1的第一抗原结合结构域的重链，该轻链包含SEQ ID NO:6170的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6170具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，该重链包含SEQ ID NO:6168的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6168具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
在一些实施方案中，多功能性分子包含融合蛋白，该融合蛋白包含死亡受体信号接合物以及靶向TRBC1的第一抗原结合结构域的轻链和靶向TRBC1的第一抗原结合结构域的重链，该轻链包含SEQ ID NO:6171的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6171具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，该重链包含SEQ ID NO:6167的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6167具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，多功能性分子包含融合蛋白，该融合蛋白包含死亡受体信号接合物以及靶向TRBC1的第一抗原结合结构域的轻链和靶向TRBC1的第一抗原结合结构域的重链，该轻链包含SEQ ID NO:6171的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6171具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，该重链包含SEQ ID NO:6168的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6168具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
在一些实施方案中，多功能性分子包含融合蛋白，该融合蛋白包含死亡受体信号接合物以及靶向TRBC1的第一抗原结合结构域的轻链和靶向TRBC1的第一抗原结合结构域的重链，该轻链包含SEQ ID NO:6172的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6172具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，该重链包含SEQ ID NO:6167的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6167具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。在一些实施方案中，多功能性分子包含融合蛋白，该融合蛋白包含死亡受体信号接合物以及靶向TRBC1的第一抗原结合结构域的轻链和靶向TRBC1的第一抗原结合结构域的重链，该轻链包含SEQ ID NO:6172的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6172具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)，该重链包含SEQ ID NO:6168的氨基酸序列(或与SEQ ID NO:6168具有至少约77％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列)。
表28.示例性死亡受体信号接合物
Figure BDA0004017031980003451
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Figure BDA0004017031980003461
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Figure BDA0004017031980003511
T细胞接合物
本发明尤其提供了多特异性(例如，双特异性、三特异性、四特异性)或多功能性分子，其工程化为含有介导T细胞的结合和/或活化的一种或多种T细胞接合物。因此，在一些实施方案中，T细胞接合物选自抗原结合结构域或配体，其结合至(例如，并在一些实施方案中活化)CD3、TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRζ、ICOS、CD28、CD27、HVEM、LIGHT、CD40、4-4BB、OX40、DR3、GITR、CD30、TIM1、SLAM、CD2或CD226中的一种或多种。在其他实施方案中，T细胞接合物选自抗原结合结构域或配体，其结合至但不活化CD3、TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRζ、ICOS、CD28、CD27、HVEM、LIGHT、CD40、4-4BB、OX40、DR3、GITR、CD30、TIM1、SLAM、CD2或CD226中的一种或多种。
TCRβV抗原结合结构域
在一些实施方案中，T细胞接合物是结合至(例如，并在一些实施方案中活化)TCRβ的抗原结合结构域(例如，抗体分子或其片段)。本发明尤其提供了抗体分子及其片段，其结合(例如，特异性结合)至人TCRβV链(TCRβV)，例如，如本文所述的TCRβV基因家族，例如，TCRβV亚家族。TCRβV家族和亚家族是本领域已知的，例如，如Yassai等,(2009)Immunogenetics61(7)第493-502页；Wei S.和Concannon P.(1994)Human Immunology 41(3)第201-206页中描述的。本文所述的抗体可以是重组抗体，例如，重组非鼠抗体，例如，重组人或人源化抗体。在整个发明中，TCRβV和TCRBV可互换使用。
在一些实施方案中，本发明提供了包含抗TCRβV抗体分子的T细胞接合物，其结合至人TCRβV，例如，TCRβV家族，例如，基因家族。在一些实施方案中，TCRBV基因家族包含一个或多个(例如，如本文(例如，图6中)所述的)亚家族。在一些实施方案中，TCRβV基因家族包含亚家族，该亚家族包含：TCRβV6亚家族、TCRβV10亚家族、TCRβV12亚家族、TCRβV5亚家族、TCRβV7亚家族、TCRβV11亚家族、TCRβV14亚家族、TCRβV16亚家族、TCRβV18亚家族、TCRβV9亚家族、TCRβV13亚家族、TCRβV4亚家族、TCRβV3亚家族、TCRβV2亚家族、TCRβV15亚家族、TCRβV30亚家族、TCRβV19亚家族、TCRβV27亚家族、TCRβV28亚家族、TCRβV24亚家族、TCRβV20亚家族、TCRβV25亚家族，或TCRβV29亚家族。
在一些实施方案中，TCRβV6亚家族也称为TCRβV13.1。在一些实施方案中，TCRβV6亚家族包含：TCRβV6-4*01、TCRβV6-4*02、TCRβV6-9*01、TCRβV6-8*01、TCRβV6-5*01、TCRβV6-6*02、TCRβV6-6*01、TCRβV6-2*01、TCRβV6-3*01或TCRβV6-1*01。在一些实施方案中，TCRβV6包含TCRβV6-5*01。在一些实施方案中，TCRβV6(例如，TCRβV6-5*01)被SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:2识别，例如，结合。在一些实施方案中，TCRβV6(例如，TCRβV6-5*01)被SEQ IDNO:9和/或SEQ ID NO:10识别，例如，结合。在一些实施方案中，TCRβV6被SEQ ID NO:9和/或SEQ ID NO:11识别，例如，结合。
在一些实施方案中，TCRβV10亚家族也称为TCRβV12。在一些实施方案中，TCRβV10亚家族包含：TCRβV10-1*01、TCRβV10-1*02、TCRβV10-3*01或TCRβV10-2*01。
在一些实施方案中，TCRβV12亚家族也称为TCRβV8.1。在一些实施方案中，TCRβV12亚家族包含：TCRβV12-4*01、TCRβV12-3*01或TCRβV12-5*01。在一些实施方案中，TCRβV12被SEQ ID NO:15和/或SEQ ID NO:16识别，例如，结合。在一些实施方案中，TCRβV12被SEQ IDNO:23-25中的任一者和/或SEQ ID NO:26-30中的任一者识别，例如，结合。
在一些实施方案中，TCRβV5亚家族选自：TCRβV5-5*01，TCRβV5-6*01、TCRβV5-4*01、TCRβV5-8*01、TCRβV5-1*01。
在一些实施方案中，TCRβV7亚家族包含TCRβV7-7*01、TCRβV7-6*01、TCRβV7-8*02、TCRβV7-4*01、TCRβV7-2*02、TCRβV7-2*03、TCRβV7-2*01、TCRβV7-3*01、TCRβV7-9*03或TCRβV7-9*01。
在一些实施方案中，TCRβV11亚家族包含：TCRβV11-1*01、TCRβV11-2*01或TCRβV11-3*01。
在一些实施方案中，TCRβV14亚家族包含TCRβV14*01。
在一些实施方案中，TCRβV16亚家族包含TCRβV16*01。
在一些实施方案中，TCRβV18亚家族包含TCRβV18*01。
在一些实施方案中，TCRβV9亚家族包含TCRβV9*01或TCRβV9*02。
在一些实施方案中，TCRβV13亚家族包含TCRβV13*01。
在一些实施方案中，TCRβV4亚家族包含TCRβV4-2*01、TCRβV4-3*01或TCRβV4-1*01。
在一些实施方案中，TCRβV3亚家族包含TCRβV3-1*01。
在一些实施方案中，TCRβV2亚家族包含TCRβV2*01。
在一些实施方案中，TCRβV15亚家族包含TCRβV15*01。
在一些实施方案中，TCRβV30亚家族包含TCRβV30*01或TCRβV30*02。
在一些实施方案中，TCRβV19亚家族包含TCRβV19*01或TCRβV19*02。
在一些实施方案中，TCRβV27亚家族包含TCRβV27*01。
在一些实施方案中，TCRβV28亚家族包含TCRβV28*01。
在一些实施方案中，TCRβV24亚家族包含TCRβV24-1*01。
在一些实施方案中，TCRβV20亚家族包含TCRβV20-1*01或TCRβV20-1*02。
在一些实施方案中，TCRβV25亚家族包含TCRβV25-1*01。
在一些实施方案中，TCRβV29亚家族包含TCRβV29-1*01。
表29：TCRβV亚家族和亚家族成员列表
Figure BDA0004017031980003541
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Figure BDA0004017031980003551
抗TCRβV抗体
在一方面，本发明提供了抗TCRβV抗体分子，其结合至人TCRβV，例如，TCRβV基因家族，例如，(例如，如本文(例如，图6中)所述的)TCRβV亚家族中的一个或多个。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子结合至选自以下的一个或多个TCRβV亚家族：TCRβV6亚家族、TCRβV10亚家族、TCRβV12亚家族、TCRβV5亚家族、TCRβV7亚家族、TCRβV11亚家族、TCRβV14亚家族、TCRβV16亚家族、TCRβV18亚家族、TCRβV9亚家族、TCRβV13亚家族、TCRβV4亚家族、TCRβV3亚家族、TCRβV2亚家族、TCRβV15亚家族、TCRβV30亚家族、TCRβV19亚家族、TCRβV27亚家族、TCRβV28亚家族、TCRβV24亚家族、TCRβV20亚家族、TCRβV25亚家族，或TCRβV29亚家族。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子结合至TCRβV6亚家族，其包含：TCRβV6-4*01、TCRβV6-4*02、TCRβV6-9*01、TCRβV6-8*01、TCRβV6-5*01、TCRβV6-6*02、TCRβV6-6*01、TCRβV6-2*01、TCRβV6-3*01或TCRβV6-1*01。在一些实施方案中，TCRβV6亚家族包含TCRβV6-5*01。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子结合至TCRβV10亚家族，其包含：TCRβV10-1*01、TCRβV10-1*02、TCRβV10-3*01或TCRβV10-2*01。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子结合至TCRβV12亚家族，其包含：TCRβV12-4*01、TCRβV12-3*01或TCRβV12-5*01。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子结合至TCRβV5亚家族，其包含：TCRβV5-5*01、TCRβV5-6*01、TCRβV5-4*01、TCRβV5-8*01、TCRβV5-1*01。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子不结合至TCRβV12，或以小于(例如，小于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155中所述的16G8鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性结合至TCRβV12。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子以大于(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155中所述的16G8鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性结合至TCRβV12。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子以大于(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155中所述的16G8鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性结合至除TCRβV12以外的TCRβV区(例如，本文所述的TCRβV区，例如，TCRβV6亚家族(例如，TCRβV6-5*01))。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子不结合至TCRβV5-5*01或TCRβV5-1*01，或以小于(例如，小于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155中所述的TM23鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性结合至TCRβV5-5*01或TCRβV5-1*01。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子以大于(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155中所述的TM23鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性结合至TCRβV5-5*01或TCRβV5-1*01。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子以大于(例如，大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或约2、5或10倍)如美国专利5,861,155中所述的TM23鼠抗体或其人源化形式的亲和力和/或结合特异性的亲和力和/或结合特异性结合至除TCRβV5-5*01或TCRβV5-1*01以外的TCRβV区(例如，本文所述的TCRβV区，例如，TCRβV6亚家族(例如，TCRβV6-5*01))。
抗TCRβ V6抗体
因此，在一方面，本发明提供了抗TCRβV抗体分子，其结合至人TCRβV6，例如，TCRβV6亚家族，其包含：TCRβV6-4*01、TCRβV6-4*02、TCRβV6-9*01、TCRβV6-8*01、TCRβV6-5*01、TCRβV6-6*02、TCRβV6-6*01、TCRβV6-2*01、TCRβV6-3*01或TCRβV6-1*01。在一些实施方案中，TCRβV6亚家族包含TCRβV6-5*01。
在一些实施方案中，TCRβV6-5*01由SEQ ID NO:43的核酸序列或与其具有85％、90％、95％、99％或更多同一性的序列编码。
SEQ ID NO:43
ATGAGCATCGGCCTCCTGTGCTGTGCAGCCTTGTCTCTCCTGTGGGCAGGTCCAGTGAATGCTGGTGTCACTCAGACCCCAAAATTCCAGGTCCTGAAGACAGGACAGAGCATGACACTGCAGTGTGCCCAGGATATGAACCATGAATACATGTCCTGGTATCGACAAGACCCAGGCATGGGGCTGAGGCTGATTCATTACTCAGTTGGTGCTGGTATCACTGACCAAGGAGAAGTCCCCAATGGCTACAATGTCTCCAGATCAACCACAGAGGATTTCCCGCTCAGGCTGCTGTCGGCTGCTCCCTCCCAGACATCTGTGTACTTCTGTGCCAGCAGTTACTC
在一些实施方案中，TCRβV6-5*01包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列，或与其具有85％、90％、95％、99％或更多同一性的氨基酸序列。
SEQ ID NO:44
MSIGLLCCAALSLLWAGPVNAGVTQTPKFQVLKTGQSMTLQCAQDMNHEYMSWYRQDPGMGLRLIHYSVGAGITDQGEVPNGYNVSRSTTEDFPLRLLSAAPSQTSVYFCASSY
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)是非鼠抗体分子，例如，人或人源化抗体分子。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)是人抗体分子。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)是人源化抗体分子。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)是分离的或重组的。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含至少一个来自本文所述抗体(例如，选自BHM1709或BHM1710的，或如表30中所述的，或由表30中的核苷酸序列编码的抗体)的抗原结合区(例如，可变区或其抗原结合片段)，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含至少一个、两个、三个或四个来自本文所述抗体(例如，选自BHM1709或BHM1710的，或如表30中所述的，或由表30中的核苷酸序列编码的抗体)的可变区，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含至少一个或两个来自本文所述抗体(例如，选自BHM1709或BHM1710的，或如表30中所述的，或由表30中的核苷酸序列编码的抗体)的重链可变区，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含至少一个或两个来自本文所述抗体(例如，选自BHM1709或BHM1710的，或如表30中所述的，或由表30中的核苷酸序列编码的抗体)的轻链可变区，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含IgG4(例如，人IgG4)的重链恒定区。在另一实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括IgG1(例如，人IgG1)的重链恒定区。在一个实施方案中，重链恒定区包含表32中所述的氨基序列，或与其基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括κ轻链恒定区，例如，人κ轻链恒定区。在一个实施方案中，轻链恒定区包含表32中所述的氨基序列，或与其基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括至少一个、两个或三个来自本文所述抗体(例如，选自BHM1709或BHM1710的，或如表30中所述的，或由表30中的核苷酸序列编码的抗体)的重链可变区的互补决定区(CDR)，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括至少一个、两个或三个(或统称为所有)来自重链可变区的CDR，该重链可变区包含表30中所示的氨基酸序列，或由表30中所示的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，CDR中的一个或多个(或统称为所有CDR)相对于表30中所示的或由表30中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个改变，例如，氨基酸取代或缺失。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括至少一个、两个或三个来自本文所述抗体(例如，选自BHM1709或BHM1710的，或如表30中所述的，或由表30中的核苷酸序列编码的抗体)的轻链可变区的互补决定区(CDR)，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括至少一个、两个或三个(或统称为所有)来自轻链可变区的CDR，该轻链可变区包含表30中所示的氨基酸序列，或由表30中所示的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，CDR中的一个或多个(或统称为所有CDR)相对于表30中所示的或由表30中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个改变，例如，氨基酸取代或缺失。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括至少一个、两个、三个、四个、五个或六个(或统称为所有)来自重链和轻链可变区的CDR，该重链和轻链可变区包含表30中所示的氨基酸序列，或由表30中所示的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，CDR中的一个或多个(或统称为所有CDR)相对于表30中所示的或由表30中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个改变，例如，氨基酸取代或缺失。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括来自本文所述抗体(例如，选自BHM1709或BHM1710的，或如表30中所述的，或由表30中的核苷酸序列编码的抗体)的所有六个CDR，或密切相关的CDR，例如，相同或具有至少一个氨基酸改变但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)的CDR。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)可包括本文所述的任何CDR。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括至少一个、两个或三个来自本文所述抗体(例如，选自BHM1709或BHM1710的，或如表30中所述的抗体)的重链可变区的根据Kabat等的CDR(例如，如表30中所述的根据Kabat定义的至少一个、两个或三个CDR)，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表30中所示的根据Kabat等的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括至少一个、两个或三个来自本文所述抗体(例如，选自BHM1709或BHM1710的，或如表30中所述的抗体)的轻链可变区的根据Kabat等的CDR(例如，如表30中所述的根据Kabat定义的至少一个、两个或三个CDR)，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表30中所示的根据Kabat等的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括至少一个、两个、三个、四个、五个或六个来自本文所述抗体(例如，选自BHM1709或BHM1710的，或如表30中所述的，或由表30中的核苷酸序列编码的抗体)的重链和轻链可变区的根据Kabat等的CDR(例如，如表30中所述的根据Kabat定义的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR)；或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表30中所示的根据Kabat等的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括来自本文所述抗体(例如，选自BHM1709或BHM1710的，或如表30中所述的，或由表30中的核苷酸序列编码的抗体)的重链和轻链可变区的根据Kabat等的所有六个CDR(例如，如表30中所述的根据Kabat定义的所有六个CDR)；或由表30中的核苷酸序列编码；或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表30中所示的根据Kabat等的所有六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。在一个实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)可包括本文所述的任何CDR。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括至少一个、两个或三个高变环，其具有与本文所述抗体(例如，选自BHM1709或BHM1710的抗体)的相应高变环相同的标准结构，例如，与本文所述抗体的重链和/或轻链可变结构域的至少环1和/或环2相同的标准结构。参见例如，Chothia等,(1992)J.Mol.Biol.227:799-817；Tomlinson等,(1992)J.Mol.Biol.227:776-798对于高变环标准结构的描述。这些结构可以通过检查这些参考文献中所述的表格来确定。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括至少一个、两个或三个来自本文所述抗体(例如，选自BHM1709或BHM1710的，或如表30中所述的抗体)的重链可变区的根据Chothia等的CDR(例如，如表30中所述的根据Chothia定义的至少一个、两个或三个CDR)，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表30中所示的根据Chothia等的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括至少一个、两个或三个来自本文所述抗体(例如，选自BHM1709或BHM1710的，或如表30中所述的抗体)的轻链可变区的根据Chothia等的CDR(例如，如表30中所述的根据Chothia定义的至少一个、两个或三个CDR)，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表30中所示的根据Chothia等的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括至少一个、两个、三个、四个、五个或六个来自本文所述抗体(例如，选自BHM1709或BHM1710的，或如表30中所述的，或由表30中的核苷酸序列编码的抗体)的重链和轻链可变区的根据Chothia等的CDR(例如，如表30中所述的根据Chothia定义的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR)；或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表30中所示的根据Chothia等的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括来自本文所述抗体(例如，选自BHM1709或BHM1710的，或如表30中所述的，或由表30中的核苷酸序列编码的抗体)的重链和轻链可变区的根据Chothia等的所有六个CDR(例如，如表30中所述的根据Chothia定义的所有六个CDR)；或由表30中的核苷酸序列编码；或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表30中所示的根据Chothia等的所有六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。在一个实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)可包括本文所述的任何CDR。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括根据Kabat等、Chothia等或如表30中所述定义的CDR或高变环的组合。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)可以含有根据Kabat和Chothia定义的CDR或高变环的任何组合。
在一些实施方案中，如表30中所述的组合CDR是包含Kabat CDR和Chothia CDR的CDR。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括表30中鉴定为组合CDR的CDR或高变环的组合。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)可以含有表30中所述的相应“组合”CDR的CDR或高变环的任何组合。
在实施方案中，例如，包含可变区、CDR(例如，组合CDR、Chothia CDR或Kabat CDR)或本文(例如，表30中)提及的其他序列的实施方案中，抗体分子是单特异性抗体分子、双特异性抗体分子、二价抗体分子、双互补位抗体分子(biparatopic antibody molecule)或包含抗体的抗原结合片段的抗体分子，例如，半抗体或半抗体的抗原结合片段。在某些实施方案中，抗体分子包含多特异性分子，例如，(例如，如本文所述的)双特异性分子。
在实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括：
(i)SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的轻链互补决定区1(LC CDR1)、轻链互补决定区2(LC CDR2)和轻链互补决定区3(LC CDR3)中的一个、两个或全部，和/或
(ii)SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:9的重链互补决定区1(HC CDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)和重链互补决定区3(HC CDR3)中的一个、两个或全部。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含SEQ ID NO:2的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3以及SEQ ID NO:1的HC CDR1、HCCDR2和HC CDR3。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含SEQ ID NO:10的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3以及SEQ ID NO:9的HC CDR1、HCCDR2和HC CDR3。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含SEQ ID NO:11的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3以及SEQ ID NO:9的HC CDR1、HCCDR2和HC CDR3。
在实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含：
(i)SEQ ID NO:6的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:7的LC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:8的LC CDR3氨基酸序列；和/或
(ii)SEQ ID NO:3的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:4的HC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:5的HC CDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含：
(i)轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:6的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:7的LC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:8的LC CDR3氨基酸序列；和/或
(ii)重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO:3的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:4的HC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:5的HC CDR3氨基酸序列。
在实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含：
(i)SEQ ID NO:51的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:52的LC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:53的LC CDR3氨基酸序列；和/或
(ii)SEQ ID NO:45的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:46的HC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:47的HC CDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含：
(i)轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:51的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:52的LC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:53的LC CDR3氨基酸序列；和/或
(ii)重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO:45的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:46的HC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:47的HC CDR3氨基酸序列。
在实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含：
(i)SEQ ID NO:54的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:55的LC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:56的LC CDR3氨基酸序列；和/或
(ii)SEQ ID NO:48的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:49的HC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:50的HC CDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含：
(i)轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:54的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:55的LC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:56的LC CDR3氨基酸序列；和/或
(ii)重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO:48的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:49的HC CDR2氨基酸序列，或SEQ ID NO:50的HC CDR3氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)的轻链或重链可变框架(例如，包括至少FR1、FR2、FR3和任选地FR4的区域)可以选自：(a)轻链或重链可变框架，其包括至少80％、85％、87％、90％、92％、93％、95％、97％、98％或100％的来自人轻链或重链可变框架的氨基酸残基，例如，来自人成熟抗体、人种系序列或人共有序列的轻链或重链可变框架残基；(b)轻链或重链可变框架，其包括20％至80％、40％至60％、60％至90％或70％至95％的来自人轻链或重链可变框架的氨基酸残基，例如，来自人成熟抗体、人种系序列或人共有序列的轻链或重链可变框架残基；(c)非人框架(例如，啮齿动物框架)；或(d)已被修饰例如以去除抗原性或细胞毒性决定簇(例如，去免疫化或部分人源化)的非人框架。在一个实施方案中，轻链或重链可变框架区(特别是FR1、FR2和/或FR3)包括与人种系基因的VL或VH区段的框架至少70％、75％、80％、85％、87％、88％、90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％相同的或相同的轻链或重链可变框架序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含重链可变结构域，其具有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、十个、十五个、二十个或更多个来自BHM1709或BHM1710的氨基酸序列(例如，图4A中或SEQ ID NO:9中所示的整个可变区中FR区的氨基酸序列)的改变，例如，氨基酸取代或缺失。
可替代地，或者与本文所述的重链取代组合，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含轻链可变结构域，其具有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、十个、十五个、二十个或更多个来自BHM1709或BHM1710的氨基酸序列(例如，图4B中或SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11中所示的整个可变区中FR区的氨基酸序列)的氨基酸改变，例如，氨基酸取代或缺失。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括图4A中所示的一个、两个、三个或四个重链框架区，或基与其本上相同的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括图4B中所示的一个、两个、三个或四个轻链框架区，或与其基本上相同的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含BHM1709或BHM1710的轻链框架区1，例如，如图4B中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含BHM1709或BHM1710的轻链框架区2，例如，如图4B中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含BHM1709或BHM1710的轻链框架区3，例如，如图4B中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含BHM1709或BHM1710的轻链框架区4，例如，如图4B中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含框架区，例如，框架区1(FR1)，其包含改变，例如，根据Kabat编号的第10位处的取代(例如，保守取代)。在一些实施方案中，FR1在第10位处包含苯丙氨酸，例如，丝氨酸至苯丙氨酸的取代。在一些实施方案中，取代相对于人种系轻链框架区序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含框架区，例如，框架区2(FR2)，其包含改变，例如，根据Kabat编号的本文公开位置处的取代(例如，保守取代)。在一些实施方案中，FR2在第36位处包含组氨酸，例如，根据Kabat编号的第36位处的取代，例如，酪氨酸至组氨酸的取代。在一些实施方案中，FR2在第46位处包含丙氨酸，例如，根据Kabat编号的第46位处的取代，例如，精氨酸至丙氨酸的取代。在一些实施方案中，取代相对于人种系轻链框架区序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含框架区，例如，框架区3(FR3)，其包含改变，例如，根据Kabat编号的本文公开位置处的取代(例如，保守取代)。在一些实施方案中，FR3在第87位处包含苯丙氨酸，例如，根据Kabat编号的第87位处的取代，例如，酪氨酸至苯丙氨酸的取代。在一些实施方案中，取代相对于人种系轻链框架区序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含：(a)框架区1(FR1)，其在第10位处包含苯丙氨酸，例如，根据Kabat编号的第10位处的取代，例如，丝氨酸至苯丙氨酸的取代；(b)框架区2(FR2)，其在第36位处包含组氨酸，例如，根据Kabat编号的第36位处的取代，例如，酪氨酸至组氨酸的取代，并且在第46位处包含丙氨酸，例如，根据Kabat编号的第46位处的取代，例如，精氨酸至丙氨酸的取代；以及(c)框架区3(FR3)，其在第87位处包含苯丙氨酸，例如，根据Kabat编号的第87位处的取代，例如，酪氨酸至苯丙氨酸的取代，例如，如SEQ IDNO:10的氨基酸序列中所示。在一些实施方案中，取代相对于人种系轻链框架区序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含：(a)框架区2(FR2)，其在第36位处包含组氨酸，例如，根据Kabat编号的第36位处的取代，例如，酪氨酸至组氨酸的取代，并且在第46位处包含丙氨酸，例如，根据Kabat编号的第46位处的取代，例如，精氨酸至丙氨酸的取代；以及(b)框架区3(FR3)，其在第87位处包含苯丙氨酸，例如，根据Kabat编号的第87位处的取代，例如，酪氨酸至苯丙氨酸的取代，例如，如SEQ ID NO:11的氨基酸序列中所示。在一些实施方案中，取代相对于人种系轻链框架区序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含：(a)框架区1(FR1)，其包含改变，例如，根据Kabat编号的一个或多个(例如，所有)本文公开位置处的取代(例如，保守取代)；(b)框架区2(FR2)，其包含改变，例如，根据Kabat编号的一个或多个(例如，所有)本文公开位置处的取代(例如，保守取代)，以及(c)框架区3(FR3)，其包含改变，例如，根据Kabat编号的一个或多个(例如，所有)本文公开位置处的取代(例如，保守取代)。在一些实施方案中，取代相对于人种系轻链框架区序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含BHM1709或BHM1710的重链框架区1，例如，如图4A中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含BHM1709或BHM1710的重链框架区2，例如，如图4A中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含BHM1709或BHM1710的重链框架区3，例如，如图4A中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含BHM1709或BHM1710的重链框架区4，例如，如图4A中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含框架区，例如，框架区3(FR3)，其包含改变，例如，根据Kabat编号的本文公开位置处的取代(例如，保守取代)。在一些实施方案中，FR3在第73位处包含苏氨酸，例如，根据Kabat编号的第73位处的取代，例如，谷氨酸至苏氨酸的取代。在一些实施方案中，FR3在第94位处包含甘氨酸，例如，根据Kabat编号的第94位处的取代，例如，精氨酸至甘氨酸的取代。在一些实施方案中，取代相对于人种系重链框架区序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含框架区3(FR3)，其在第73位处包含苏氨酸，例如，根据Kabat编号的第73位处的取代，例如，谷氨酸至苏氨酸的取代，并且在第94位处包含甘氨酸，例如，根据Kabat编号的第94位处的取代，例如，精氨酸至甘氨酸的取代，例如，如SEQ ID NO:10的氨基酸序列中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含BHM1709或BHM1710的重链框架区1-4，例如，SEQ ID NO:9，或如图4A和4B中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含BHM1709的轻链框架区1-4，例如，SEQ ID NO:10，或如图4A和4B中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含BHM1710的轻链框架区1-4，例如，SEQ ID NO:11，或如图4A和4B中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含BHM1709的重链框架区1-4，例如，SEQ ID NO:9；以及BHM1709的轻链框架区1-4，例如，SEQ ID NO:10，或如图4A和4B中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含BHM1710的重链框架区1-4，例如，SEQ ID NO:9；以及BHM1710的轻链框架区1-4，例如，SEQ ID NO:11，或如图4A和4B中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)的重链或轻链可变结构域或两者包括与本文公开的氨基酸基本上相同(例如，与本文所述抗体(例如，选自BHM1709或BHM1710的，或如表30中所述的，或由表30中的核苷酸序列编码的抗体)的可变区至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的氨基酸序列；或者其与本文所述抗体的可变区相差至少1或5个残基，但少于40、30、20或10个残基。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含至少一个、两个、三个或四个抗原结合区(例如，可变区)，其具有如表30中所述的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的序列，或与表30中所示的序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的序列)。在另一实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包括VH和/或VL结构域，其由具有表30中所述的核苷酸序列或与其基本上相同的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的序列，或与表30中所示的序列相差不多于3、6、15、30或45个核苷酸的序列)的核酸编码。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含：
VH结构域，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列、与SEQ ID NO:9的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:9的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和/或
VL结构域，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列、与SEQ ID NO:10的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:10的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)包含：
VH结构域，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列、与SEQ ID NO:9的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:9的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和/或
VL结构域，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列、与SEQ ID NO:11的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:11的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)是全抗体或其片段(例如，Fab、F(ab’)2、Fv或单链Fv片段(scFv))。在实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)是单克隆抗体或具有单特异性的抗体。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)也可以是人源化、嵌合、骆驼、鲨鱼或体外生成的抗体分子。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)是人源化抗体分子。抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)的重链和轻链可以是全长的(例如，抗体可以包括至少一条(优选两条)完整重链和至少一条(优选两条)完整轻链)，或者可以包括抗原结合片段(例如，Fab、F(ab’)2、Fv、单链Fv片段、单结构域抗体、双抗体(dAb)、二价抗体，或双特异性抗体或其片段、其单结构域变体或骆驼抗体)。
在一些实施方案中，例如，如本文所述，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)是多特异性分子(例如，双特异性分子)的形式。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)具有重链恒定区(Fc)，其选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE的重链恒定区。在一些实施方案中，Fc区选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的重链恒定区。在一些实施方案中，Fc区选自IgG1或IgG2(例如，人IgG1或IgG2)的重链恒定区。在一些实施方案中，重链恒定区是人IgG1。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)具有轻链恒定区，其选自例如κ或λ(优选κ(例如，人κ))的轻链恒定区。在一个实施方案中，恒定区被改变(例如，突变)，以修改抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)的特性(例如，以增加或减少以下中的一种或多种：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数量、效应细胞功能或补体功能)。例如，恒定区在第296位(M至Y)、298位(S至T)、300位(T至E)、477位(H至K)和478位(N至F)处被突变，以改变Fc受体结合(例如，突变的位置例如相对于人IgG1对应于SEQ ID NO:212或214的第132位(M至Y)、134位(S至T)、136位(T至E)、313位(H至K)和314位(N至F)；或SEQ ID NO:215、216、217或218的第135位(M至Y)、137位(S至T)、139位(T至E)、316位(H至K)和317位(N至F))。
表30：鼠、嵌合和人源化抗体分子的氨基酸和核苷酸序列。抗体分子包括鼠mAbH131，以及人源化mAb H131克隆BHM1709和BHM1710。显示了重链和轻链CDR的氨基酸、重链和轻链可变区的氨基酸和核苷酸序列，以及重链和轻链。
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抗TCRβV12抗体
因此，在一方面，本发明提供了抗TCRβV抗体分子，其结合至人TCRβV12，例如，TCRβV12亚家族，其包含：TCRβV12-4*01、TCRβV12-3*01或TCRβV12-5*01。在一些实施方案中，TCRβV12亚家族包含TCRβV12-4*01。在一些实施方案中，TCRβV12亚家族包含TCRβV12-3*01。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)是非鼠抗体分子，例如，人或人源化抗体分子。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)是人抗体分子。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)是人源化抗体分子。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)是分离的或重组的。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含至少一个来自本文所述抗体(例如，表31中所述的，或由表31中的核苷酸序列编码的抗体)的抗原结合区(例如，可变区或其抗原结合片段)，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含至少一个、两个、三个或四个来自本文所述抗体(例如，如表31中所述的，或由表31中的核苷酸序列编码的抗体)的可变区，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含至少一个或两个来自本文所述抗体(例如，如表31中所述的，或由表31中的核苷酸序列编码的抗体)的重链可变区，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含至少一个或两个来自本文所述抗体(例如，如表31中所述的，或由表31中的核苷酸序列编码的抗体)的轻链可变区，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含IgG4(例如，人IgG4)的重链恒定区。在另一实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括IgG1(例如，人IgG1)的重链恒定区。在一个实施方案中，重链恒定区包含表32中所述的氨基序列，或与其基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括κ轻链恒定区，例如，人κ轻链恒定区。在一个实施方案中，轻链恒定区包含表32中所述的氨基序列，或与其基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括至少一个、两个或三个来自本文所述抗体(例如，如表31中所述的，或由表31中的核苷酸序列编码的抗体)的重链可变区的互补决定区(CDR)，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括至少一个、两个或三个(或统称为所有)来自重链可变区的CDR，该重链可变区包含表31中所示的氨基酸序列，或由表31中所示的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，CDR中的一个或多个(或统称为所有CDR)相对于表31中所示的或由表31中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个改变，例如，氨基酸取代或缺失。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括至少一个、两个或三个来自本文所述抗体(例如，如表31中所述的，或由表31中的核苷酸序列编码的抗体)的轻链可变区的互补决定区(CDR)，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括至少一个、两个或三个(或统称为所有)来自轻链可变区的CDR，该轻链可变区包含表31中所示的氨基酸序列，或由表31中所示的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，CDR中的一个或多个(或统称为所有CDR)相对于表31中所示的或由表31中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个改变，例如，氨基酸取代或缺失。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括至少一个、两个、三个、四个、五个或六个(或统称为所有)来自重链和轻链可变区的CDR，该重链和轻链可变区包含表31中所示的氨基酸序列，或由表31中所示的核苷酸序列编码。在一个实施方案中，CDR中的一个或多个(或统称为所有CDR)相对于表31中所示的或由表31中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个改变，例如，氨基酸取代或缺失。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括来自本文所述抗体(例如，如表31中所述的，或由表31中的核苷酸序列编码的抗体)的所有六个CDR，或密切相关的CDR，例如，相同或具有至少一个氨基酸改变但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)的CDR。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)可包括本文所述的任何CDR。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括至少一个、两个或三个来自本文所述抗体(例如，选自表31中所述的抗体)的重链可变区的根据Kabat等的CDR(例如，如表31中所述的根据Kabat定义的至少一个、两个或三个CDR)，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表31中所示的根据Kabat等的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括至少一个、两个或三个来自本文所述抗体(例如，如表31中所述的抗体)的轻链可变区的根据Kabat等的CDR(例如，如表31中所述的根据Kabat定义的至少一个、两个或三个CDR)，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表31中所示的根据Kabat等的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个来自本文所述抗体(例如，如表31中所述的，或由表31中的核苷酸序列编码的抗体)的重链和轻链可变区的根据Kabat等的CDR(例如，如表31中所述的根据Kabat定义的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR)；或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表31中所示的根据Kabat等的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括来自本文所述抗体(例如，如表31中所述的，或由表31中的核苷酸序列编码的抗体)的重链和轻链可变区的根据Kabat等的所有六个CDR(例如，如表31中所述的根据Kabat定义的所有六个CDR)；或由表31中的核苷酸序列编码；或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表31中所示的根据Kabat等的所有六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)可包括本文所述的任何CDR。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括至少一个、两个或三个高变环，其具有与本文所述抗体(例如，表31中所述的抗体)的相应高变环相同的标准结构，例如，与本文所述抗体的重链和/或轻链可变结构域的至少环1和/或环2相同的标准结构。参见例如，Chothia等,(1992)J.Mol.Biol.227:799-817；Tomlinson等,(1992)J.Mol.Biol.227:776-798对于高变环标准结构的描述。这些结构可以通过检查这些参考文献中所述的表格来确定。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括至少一个、两个或三个来自本文所述抗体(例如，选自表31中所述的抗体)的重链可变区的根据Chothia等的CDR(例如，如表31中所述的根据Chothia定义的至少一个、两个或三个CDR)，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表31中所示的根据Chothia等的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括至少一个、两个或三个来自本文所述抗体(例如，如表31中所述的抗体)的轻链可变区的根据Chothia等的CDR(例如，如表31中所述的根据Chothia定义的至少一个、两个或三个CDR)，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表31中所示的根据Chothia等的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个来自本文所述抗体(例如，如表31中所述的，或由表31中的核苷酸序列编码的抗体)的重链和轻链可变区的根据Chothia等的CDR(例如，如表31中所述的根据Chothia定义的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR)；或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表31中所示的根据Chothia等的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括来自本文所述抗体(例如，如表31中所述的，或由表31中的核苷酸序列编码的抗体)的重链和轻链可变区的根据Chothia等的所有六个CDR(例如，如表31中所述的根据Chothia定义的所有六个CDR)；或由表31中的核苷酸序列编码；或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表31中所示的根据Chothia等的所有六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)可包括本文所述的任何CDR。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含至少一个、两个或三个来自本文所述抗体(例如，选自表31中所述的抗体)的重链可变区的根据组合CDR的CDR(例如，如表31中所述的根据组合CDR定义的至少一个、两个或三个CDR)，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表31中所示的根据组合CDR的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括至少一个、两个或三个来自本文所述抗体(例如，如表31中所述的抗体)的轻链可变区的根据组合CDR的CDR(例如，如表31中所述的根据组合CDR定义的至少一个、两个或三个CDR)，或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表31中所示的根据组合CDR的一个、两个或三个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含至少一个、两个、三个、四个、五个或六个来自本文所述抗体(例如，如表31中所述的，或由表31中的核苷酸序列编码的抗体)的重链和轻链可变区的根据组合CDR的CDR(例如，如表31中所述的根据组合CDR定义的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR)；或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表31中所示的根据组合CDR的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括来自本文所述抗体(例如，如表31中所述的，或由表31中的核苷酸序列编码的抗体)的重链和轻链可变区的根据组合CDR的所有六个CDR(例如，如表31中所述的根据组合CDR定义的所有六个CDR)；或由表31中的核苷酸序列编码；或与上述序列中任一者基本上相同(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的序列；或者其相对于表31中所示的根据组合CDR的所有六个CDR具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代)。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)可包括本文所述的任何CDR。
在一些实施方案中，如表30中所述的组合CDR是包含Kabat CDR和Chothia CDR的CDR。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括表30中鉴定为组合CDR的CDR或高变环的组合。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)可以含有表30中所述的相应“组合”CDR的CDR或高变环的任何组合。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括根据Kabat等、Chothia等或如表30中所述定义的CDR或高变环的组合。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)可以含有根据Kabat和Chothia定义的CDR或高变环的任何组合。
在实施方案中，例如，包含可变区、CDR(例如，组合CDR、Chothia CDR或Kabat CDR)或本文(例如，表31中)提及的其他序列的实施方案中，抗体分子是单特异性抗体分子、双特异性抗体分子、二价抗体分子、双互补位抗体分子或包含抗体的抗原结合片段的抗体分子，例如，半抗体或半抗体的抗原结合片段。在某些实施方案中，抗体分子包含多特异性分子，例如，(例如，如本文所述的)双特异性分子。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括：
(i)SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:30的轻链互补决定区1(LC CDR1)、轻链互补决定区2(LC CDR2)和轻链互补决定区3(LC CDR3)中的一个、两个或全部，和/或
(ii)SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:25的重链互补决定区1(HC CDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)和重链互补决定区3(HC CDR3)中的一个、两个或全部。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
(i)SEQ ID NO:20的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:21的LC CDR2氨基酸序列或SEQ ID NO:22的LC CDR3氨基酸序列；和/或
(ii)SEQ ID NO:17的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:18的HC CDR2氨基酸序列或SEQ ID NO:19的HC CDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
(i)轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:20的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:21的LC CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:2的LC CDR3氨基酸序列；和/或
(ii)重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO:17的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:18的HC CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:19的HC CDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
(i)SEQ ID NO:63的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:64的LC CDR2氨基酸序列或SEQ ID NO:65的LC CDR3氨基酸序列；和/或
(ii)SEQ ID NO:57的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:58的HC CDR2氨基酸序列或SEQ ID NO:59的HC CDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
(i)轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:63的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:64的LC CDR2氨基酸序列或SEQ ID NO:65的LC CDR3氨基酸序列；和/或
(ii)重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO:57的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:58的HC CDR2氨基酸序列或SEQ ID NO:59的HC CDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
(i)SEQ ID NO:66的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:67的LC CDR2氨基酸序列或SEQ ID NO:68的LC CDR3氨基酸序列；和/或
(ii)SEQ ID NO:60的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:61的HC CDR2氨基酸序列或SEQ ID NO:62的HC CDR3氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
(i)轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:63的LC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:64的LC CDR2氨基酸序列或SEQ ID NO:65的LC CDR3氨基酸序列；和/或
(ii)重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO:57的HC CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:58的HC CDR2氨基酸序列或SEQ ID NO:59的HC CDR3氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)的轻链或重链可变框架(例如，包括至少FR1、FR2、FR3和任选地FR4的区域)可以选自：(a)轻链或重链可变框架，其包括至少80％、85％、87％、90％、92％、93％、95％、97％、98％或100％的来自人轻链或重链可变框架的氨基酸残基，例如，来自人成熟抗体、人种系序列或人共有序列的轻链或重链可变框架残基；(b)轻链或重链可变框架，其包括20％至80％、40％至60％、60％至90％或70％至95％的来自人轻链或重链可变框架的氨基酸残基，例如，来自人成熟抗体、人种系序列或人共有序列的轻链或重链可变框架残基；(c)非人框架(例如，啮齿动物框架)；或(d)已被修饰例如以去除抗原性或细胞毒性决定簇(例如，去免疫化或部分人源化)的非人框架。在一个实施方案中，轻链或重链可变框架区(特别是FR1、FR2和/或FR3)包括与人种系基因的VL或VH区段的框架至少70％、75％、80％、85％、87％、88％、90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％、99％相同的或相同的轻链或重链可变框架序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含重链可变结构域，其具有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、十个、十五个、二十个或更多个来自表31中所述的氨基酸序列(例如，图5A和5B中或SEQ ID NO:23-25中所示的整个可变区中FR区的氨基酸序列)的改变，例如，氨基酸取代或缺失。
可替代地，或者与本文所述的重链取代组合，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链可变结构域，其具有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、十个、十五个、二十个或更多个来自本文所述抗体的氨基酸序列(例如，图5A和5B中或SEQ IDNO:26-30中所示的整个可变区中FR区的氨基酸序列)的氨基酸改变，例如，氨基酸取代或缺失。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括图5A中所示的一个、两个、三个或四个重链框架区，或与其基本上相同的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括图5B中所示的一个、两个、三个或四个轻链框架区，或与其基本上相同的序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链框架区1，例如，如图5B中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链框架区2，例如，如图5B中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链框架区3，例如，如图5B中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链框架区4，例如，如图5B中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链，该轻链包含框架区，例如，框架区1(FR1)，其包含改变，例如，根据Kabat编号的一个或多个(例如，所有)本文公开位置处的取代(例如，保守取代)。在一些实施方案中，FR1在第1位处包含天冬氨酸，例如，根据Kabat编号的第1位处的取代，例如，丙氨酸至天冬氨酸的取代。在一些实施方案中，FR1在第2位处包含天冬酰胺，例如，根据Kabat编号的第2位处的取代，例如，异亮氨酸至天冬酰胺的取代、丝氨酸至天冬酰胺的取代或酪氨酸至天冬酰胺的取代。在一些实施方案中，FR1在第4位处包含亮氨酸，例如，根据Kabat编号的第4位处的取代，例如，甲硫氨酸至亮氨酸的取代。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链，该轻链包含框架区，例如，框架区1(FR1)，其包含根据Kabat编号的第1位处的取代(例如，丙氨酸至天冬氨酸的取代)、根据Kabat编号的第2位处的取代(例如，异亮氨酸至天冬酰胺的取代、丝氨酸至天冬酰胺的取代，或酪氨酸至天冬酰胺的取代)，以及根据Kabat编号的第4位处的取代(例如，甲硫氨酸至亮氨酸的取代)。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链，该轻链包含框架区，例如，框架区1(FR1)，其包含根据Kabat编号的第1位处的取代(例如，丙氨酸至天冬氨酸的取代)，以及根据Kabat编号的第2位处的取代(例如，异亮氨酸至天冬酰胺的取代、丝氨酸至天冬酰胺的取代，或酪氨酸至天冬酰胺的取代)。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链，该轻链包含框架区，例如，框架区1(FR1)，其包含根据Kabat编号的第1位处的取代(例如，丙氨酸至天冬氨酸的取代)，以及根据Kabat编号的第4位处的取代(例如，甲硫氨酸至亮氨酸的取代)。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链，该轻链包含框架区，例如，框架区1(FR1)，其包含根据Kabat编号的第2位处的取代(例如，异亮氨酸至天冬酰胺的取代、丝氨酸至天冬酰胺的取代，或酪氨酸至天冬酰胺的取代)，以及根据Kabat编号的第4位处的取代(例如，甲硫氨酸至亮氨酸的取代)。在一些实施方案中，取代相对于人种系轻链框架区序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链，该轻链包含框架区，例如，框架区3(FR3)，其包含改变，例如，根据Kabat编号的一个或多个(例如，所有)本文公开位置处的取代(例如，保守取代)。在一些实施方案中，FR3在第66位处包含甘氨酸，例如，根据Kabat编号的第66位处的取代，例如，赖氨酸至甘氨酸的取代或丝氨酸至甘氨酸的取代。在一些实施方案中，FR3在第69位处包含天冬酰胺，例如，根据Kabat编号的第69位处的取代，例如，酪氨酸至天冬酰胺的取代。在一些实施方案中，FR3在第71位处包含酪氨酸，例如，根据Kabat编号的第71位处的取代，例如，苯丙氨酸至酪氨酸的取代或丙氨酸至酪氨酸的取代。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链，该轻链包含框架区，例如，框架区3(FR3)，其包含根据Kabat编号的第66位处的取代(例如，赖氨酸至甘氨酸的取代或丝氨酸至甘氨酸的取代)，以及根据Kabat编号的第69位处的取代(例如，酪氨酸至天冬酰胺的取代)。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链，该轻链包含框架区，例如，框架区3(FR3)，其包含根据Kabat编号的第66位处的取代(例如，赖氨酸至甘氨酸的取代或丝氨酸至甘氨酸的取代)，以及根据Kabat编号的第71位处的取代(例如，苯丙氨酸至酪氨酸的取代或丙氨酸至酪氨酸的取代)。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链，该轻链包含框架区，例如，框架区3(FR3)其包含根据Kabat编号的第69位处的取代(例如，酪氨酸至天冬酰胺的取代)，以及根据Kabat编号的第71位处的取代(例如，苯丙氨酸至酪氨酸的取代或丙氨酸至酪氨酸的取代)。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链，该轻链包含框架区，例如，框架区3(FR3)，其包含根据Kabat编号的第66位处的取代(例如，赖氨酸至甘氨酸的取代或丝氨酸至甘氨酸的取代)、根据Kabat编号的第69位处的取代(例如，酪氨酸至天冬酰胺的取代)，以及根据Kabat编号的第71位处的取代(例如，苯丙氨酸至酪氨酸的取代或丙氨酸至酪氨酸的取代)。在一些实施方案中，取代相对于人种系轻链框架区序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链，该轻链包含：框架区1(FR1)，其包含根据Kabat编号的第2位处的取代，例如，异亮氨酸至天冬酰胺的取代；以及框架区3(FR3)，其包含根据Kabat编号的第69位处的取代(例如，苏氨酸至天冬酰胺的取代)和根据Kabat编号的第71位处的取代(例如，苯丙氨酸至酪氨酸的取代)，例如，如SEQ ID NO:26的氨基酸序列中所示。在一些实施方案中，取代相对于人种系轻链框架区序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链，该轻链包含：(a)框架区1(FR1)，其包含根据Kabat编号的第1位处的取代(例如，丙氨酸至天冬氨酸的取代)和根据Kabat编号的第2位处的取代(例如，异亮氨酸至天冬酰胺的取代)；以及(b)框架区3(FR3)，其包含根据Kabat编号的第69位处的取代(例如，苏氨酸到天冬酰胺的取代)和根据Kabat编号的第71位处的取代(例如，苯丙氨酸到酪氨酸的取代)，例如，如SEQ IDNO:27的氨基酸序列中所示。在一些实施方案中，取代相对于人种系轻链框架区序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链，该轻链包含：(a)框架区1(FR1)，其包含根据Kabat编号的第2位处的取代，例如，丝氨酸至天冬酰胺的取代；和根据Kabat编号的第4位处的取代，例如，甲硫氨酸至亮氨酸的取代；以及(b)框架区3(FR3)，其包含根据Kabat编号的第69位处的取代(例如，苏氨酸到天冬酰胺的取代)和根据Kabat编号的第71位处的取代(例如，苯丙氨酸到酪氨酸的取代)，例如，如SEQ ID NO:28的氨基酸序列中所示。在一些实施方案中，取代相对于人种系轻链框架区序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链，该轻链包含：(a)框架区1(FR1)，其包含根据Kabat编号的第2位处的取代，例如，丝氨酸至天冬酰胺的取代；以及(b)框架区3(FR3)，其包含根据Kabat编号的第66位处的取代，例如，赖氨酸至甘氨酸的取代；根据Kabat编号的第69位处的取代，例如，苏氨酸至天冬酰胺的取代；和根据Kabat编号的第71位处的取代，例如，丙氨酸至酪氨酸的取代，例如，如SEQ ID NO:29的氨基酸序列中所示。在一些实施方案中，取代相对于人种系轻链框架区序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链，该轻链包含：(a)框架区1(FR1)，其包含根据Kabat编号的第2位处的取代，例如，酪氨酸至天冬酰胺的取代；以及(b)框架区3(FR3)，其包含根据Kabat编号的第66位处的取代，例如，丝氨酸至甘氨酸的取代；根据Kabat编号的第69位处的取代，例如，苏氨酸至天冬酰胺的取代；和根据Kabat编号的第71位处的取代，例如，丙氨酸至酪氨酸的取代，例如，如SEQ ID NO:29的氨基酸序列中所示。在一些实施方案中，取代相对于人种系轻链框架区序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含：(a)框架区1(FR1)，其包含改变，例如，根据Kabat编号的本文公开的一个或多个(例如，所有)位置处的取代(例如，保守取代)，以及(b)框架区3(FR3)，其包含改变，例如，根据Kabat编号的本文公开的一个或多个(例如，所有)位置处的取代(例如，保守取代)。在一些实施方案中，取代相对于人种系轻链框架区序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含重链框架区1，例如，如图5A中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含重链框架区2，例如，如图5A中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含重链框架区3，例如，如图5A中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含重链框架区4，例如，如图5A中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含重链框架区1-4，例如，SEQ ID NO:20-23，或如图5A中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含轻链框架区1-4，例如，SEQ ID NO:26-30，或图5B中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含重链框架区1-4，例如，SEQ ID NO:23-25；以及轻链框架区1-4，例如，SEQ ID NO:26-30，或如图5A和5B中所示。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)的重链或轻链可变结构域或两者包括与本文公开的氨基酸基本上相同(例如，与本文所述抗体(例如，如表31中所述或由表31中的核苷酸序列编码的抗体)的可变区至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高相同)的氨基酸序列；或者其与本文所述抗体的可变区相差至少1或5个残基，但少于40、30、20或10个残基。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含至少一个、两个、三个或四个抗原结合区(例如，可变区)，其具有如表31中所述的氨基酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的序列，或与表31中所示的序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的序列)。在另一实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包括VH和/或VL结构域，其由具有表31中所述的核苷酸序列或与其基本上相同的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的序列，或与表31中所示的序列相差不多于3、6、15、30或45个核苷酸的序列)的核酸编码。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
VH结构域，其包含选自SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:25的氨基酸序列的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:25至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24或SEQ IDNO:25的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；和/或
VL结构域，其包含选自SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:30的氨基酸序列的氨基酸序列、与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ IDNO:28、SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:30的氨基酸序列至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29或SEQID NO:30的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
VH结构域，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:23至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:23的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；以及
VL结构域，其包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:26至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:26的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
VH结构域，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:23至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:23的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；以及
VL结构域，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:27至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:27的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
VH结构域，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:23至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:23的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；以及
VL结构域，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:28至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:28的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
VH结构域，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:23至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:23的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；以及
VL结构域，其包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:29至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:29的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
VH结构域，其包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:23至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:23的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；以及
VL结构域，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:30至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:30的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
VH结构域，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:24至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:24的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；以及
VL结构域，其包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:26至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:26的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
VH结构域，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:24至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:24的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；以及
VL结构域，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:27至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:27的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
VH结构域，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:24至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:24的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；以及
VL结构域，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:28至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:28的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
VH结构域，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:24至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:24的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；以及
VL结构域，其包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:29至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:29的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
VH结构域，其包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:24至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:24的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；以及
VL结构域，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:30至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:30的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
VH结构域，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:25至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:25的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；以及
VL结构域，其包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:26至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:26的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
VH结构域，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:25至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:25的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；以及
VL结构域，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:27至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:27的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
VH结构域，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:25至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:25的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；以及
VL结构域，其包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:28至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:28的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
VH结构域，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:25至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:25的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；以及
VL结构域，其包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:29至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:29的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)包含：
VH结构域，其包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:25至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:25的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列；以及
VL结构域，其包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列、与氨基酸序列SEQ ID NO:30至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:30的氨基酸序列相差不多于1、2、5、10或15个氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)是全抗体或其片段(例如Fab、F(ab’)2、Fv或单链Fv片段(scFv))。在实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV6(例如，抗TCRβV6-5*01)抗体分子)是单克隆抗体或具有单特异性的抗体。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)也可以是人源化、嵌合、骆驼、鲨鱼或体外生成的抗体分子。在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)是人源化抗体分子。抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)的重链和轻链可以是全长的(例如，抗体可以包括至少一条(优选两条)完整重链和至少一条(优选两条)完整轻链)，或者可以包括抗原结合片段(例如，Fab、F(ab’)2、Fv、单链Fv片段、单结构域抗体、双抗体(dAb)、二价抗体，或双特异性抗体或其片段、其单结构域变体或骆驼抗体)。
在一些实施方案中，例如，如本文所述，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)是多特异性分子(例如，双特异性分子)的形式。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)具有重链恒定区(Fc)，其选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE的重链恒定区。在一些实施方案中，Fc区选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的重链恒定区。在一些实施方案中，Fc区选自IgG1或IgG2(例如，人IgG1或IgG2)的重链恒定区。在一些实施方案中，重链恒定区是人IgG1。
在一些实施方案中，抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)具有轻链恒定区，其选自例如κ或λ(优选κ(例如，人κ))的轻链恒定区。在一个实施方案中，恒定区被改变(例如，突变)，以修改抗TCRβV抗体分子(例如，抗TCRβV12抗体分子)的特性(例如，以增加或减少以下中的一种或多种：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数量、效应细胞功能或补体功能)。例如，恒定区在第296位(M至Y)、298位(S至T)、300位(T至E)、477位(H至K)和478位(N至F)处被突变，以改变Fc受体结合(例如，突变的位置例如相对于人IgG1对应于SEQ IDNO:212或214的第132位(M至Y)、134位(S至T)、136位(T至E)、313位(H至K)和314位(N至F)；或SEQ ID NO:215、216、217或218的第135位(M至Y)、137位(S至T)、139位(T至E)、316位(H至K)和317位(N至F))。
表31：鼠和人源化抗体分子的氨基酸和核苷酸序列。抗体分子包括鼠mAb 16G8和人源化mAb 16G8。显示了重链和轻链CDR的氨基酸、重链和轻链可变区的氨基酸和核苷酸序列，以及重链和轻链。
Figure BDA0004017031980004031
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Figure BDA0004017031980004041
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Figure BDA0004017031980004051
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Figure BDA0004017031980004061
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Figure BDA0004017031980004081
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Figure BDA0004017031980004101
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Figure BDA0004017031980004111
表32.人IgG重链和人κ轻链的恒定区氨基酸序列
Figure BDA0004017031980004112
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Figure BDA0004017031980004121
B细胞、巨噬细胞和树突细胞接合物
广泛地说，B细胞(也称为B淋巴细胞)是一类淋巴细胞亚型的白血细胞。它们通过分泌抗体在适应性免疫系统的体液免疫组分中起作用。另外，B细胞呈递抗原(它们也被分类为专职性抗原呈递细胞(APC))并分泌细胞因子。巨噬细胞是一类经由吞噬作用吞噬和消化细胞碎片、外来物质、微生物、癌细胞的白血细胞。除吞噬作用以外，它们在非特异性防御(先天免疫)中起重要作用，并且还通过募集其他免疫细胞(例如淋巴细胞)来帮助启动特异性防御机制(适应性免疫)。例如，它们作为T细胞的抗原呈递者是重要的。除增加炎症和刺激免疫系统以外，巨噬细胞还起到重要的抗炎作用，并且可以通过释放细胞因子来减少免疫反应。树突细胞(DC)是抗原呈递细胞，其在加工抗原材料中起作用，并将其呈递在免疫系统T细胞的细胞表面上。
本发明尤其提供了多特异性(例如，双特异性、三特异性、四特异性)或多功能性分子，其包括例如工程化为含有介导B细胞、巨噬细胞和/或树突细胞的结合和/或活化的一种或多种B细胞、巨噬细胞和/或树突细胞接合物。
因此，在一些实施方案中，免疫细胞接合物包含选自CD40配体(CD40L)或CD70配体中的一种或多种的B细胞、巨噬细胞和/或树突细胞接合物；结合至CD40或CD70的抗体分子；抗OX40的抗体分子；OX40配体(OX40L)；Toll样受体的激动剂(例如，如本文所述的，例如，TLR4，例如，组成型活性TLR4(caTLR4)或TLR9激动剂)；41BB；CD2；CD47；或STING激动剂，或其组合。
在一些实施方案中，B细胞接合物是CD40L、OX40L或CD70配体，或结合至OX40、CD40或CD70的抗体分子。
在一些实施方案中，巨噬细胞接合物是CD2激动剂。在一些实施方案中，巨噬细胞接合物是抗原结合结构域，其结合至：CD40L或结合CD40的抗原结合结构域或配体、(例如，如本文所述的)Toll样受体(TLR)激动剂，例如，TLR9或TLR4(例如，caTLR4(组成型活性TLR4)、CD47或STING激动剂。在一些实施方案中，STING激动剂是环状二核苷酸，例如，环状二-GMP(cdGMP)或环状二-AMP(cdAMP)。在一些实施方案中，STING激动剂是生物素化的。
在一些实施方案中，树突细胞接合物是CD2激动剂。在一些实施方案中，树突细胞接合物是配体、受体激动剂或抗体分子，其结合至以下中的一种或多种：OX40L、41BB、(例如，如本文所述的)TLR激动剂(例如，TLR9激动剂、TLR4(例如，caTLR4(组成型活性TLR4))、CD47或/和STING激动剂。在一些实施方案中，STING激动剂是环状二核苷酸，例如，环状二-GMP(cdGMP)或环状二-AMP(cdAMP)。在一些实施方案中，STING激动剂是生物素化的。
在其他实施方案中，免疫细胞接合物介导B细胞、巨噬细胞和/或树突细胞中的一种或多种的结合或活化。示例性B细胞、巨噬细胞和/或树突细胞接合物可以选自以下中的一种或多种：CD40配体(CD40L)或CD70配体；结合至CD40或CD70的抗体分子；抗OX40的抗体分子；OX40配体(OX40L)；Toll样受体激动剂(例如，TLR4，例如，组成型活性TLR4(caTLR4)或TLR9激动剂)；41BB激动剂；CD2；CD47；或STING激动剂，或其组合。
在一些实施方案中，B细胞接合物选自CD40L、OX40L或CD70配体，或结合至OX40、CD40或CD70的抗体分子中的一种或多种。
在其他实施方案中，巨噬细胞接合物选自以下中的一种或多种：CD2激动剂；CD40L；OX40L；结合至OX40、CD40或CD70的抗体分子；Toll样受体激动剂或其片段(例如，TLR4，例如，组成型活性TLR4(caTLR4))；CD47激动剂；或STING激动剂。
在其他实施方案中，树突细胞接合物选自CD2激动剂、OX40抗体、OX40L、41BB激动剂、Toll样受体激动剂或其片段(例如，TLR4，例如，组成型活性TLR4(caTLR4))、CD47激动剂或STING激动剂中的一种或多种。
在一个实施方案中，OX40L包含以下氨基酸序列：
QVSHRYPRIQSIKVQFTEYKKEKGFILTSQKEDEIMKVQNNSVIINCDGFYLISLKGYFSQEVNISLHYQKDEEPLFQLKKVRSVNSLMVASLTYKDKVYLNVTTDNTSLDDFHVNGGELILIHQNPGEFCVL(SEQ IDNO:7245)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7245的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在另一实施方案中，CD40L包含以下氨基酸序列：
MQKGDQNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL(SEQ ID NO:7246)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7246的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在其他实施方案中，STING激动剂包含环状二核苷酸，例如，环状二-GMP(cdGMP)、环状二-AMP(cdAMP)或其组合，任选地具有2’,5’或3’,5’磷酸酯键。
在一个实施方案中，免疫细胞接合物包括41BB配体，例如，包含以下氨基酸序列：
ACPWAVSGARASPGSAASPRLREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE(SEQ ID NO:7247)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7247的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
Toll样受体
Toll样受体(TLR)是进化上保守的受体，是果蝇Toll蛋白的同源物，并且识别被称为病原体相关微生物模式(PAMP)(其仅由微生物病原体表达)或危险相关分子模式(DAMP)(其是从坏死或死亡细胞释放的内源性分子)的高度保守的结构基序。PAMP包括各种细菌细胞壁组分(例如脂多糖(LPS)、肽聚糖(PGN)和脂肽)，以及鞭毛蛋白、细菌DNA和病毒双链RNA。DAMP包括胞内蛋白质(例如热休克蛋白)以及来自胞外基质的蛋白片段。通过相应的PAMP或DAMP对TLR的刺激启动信号级联放大，导致转录因子(例如AP-1、NF-κB和干扰素调控因子(IRF))的活化。TLR的信号传导导致各种细胞应答，包括指导适应性免疫应答的干扰素(IFN)、促炎性细胞因子和效应细胞因子的产生。TLR涉及许多炎性和免疫病症，并且在癌症中起作用(Rakoff-Nahoum S.和Medzhitov R.,2009.Toll-like receptors andcancer.Nat Revs Cancer 9:57-63)。
TLR是I型跨膜蛋白，其特征在于含有富亮氨酸重复序列(LRR)的胞外结构域和含有称为Toll/IL-1受体(TIR)结构域的保守区的胞质尾区。已表征了10种人和12种鼠TLR(人中TLR1至TLR10，小鼠中TLR1至TLR9、TLR11、TLR12和TLR13)，TLR10的同源物是假基因。TLR2是识别来自革兰氏阳性细菌的各种PAMP(包括细菌脂蛋白、脂甘露聚糖和脂磷壁酸)所必需的。TLR3涉及病毒来源的双链RNA。TLR4主要由脂多糖活化。TLR5检测细菌鞭毛蛋白，TLR9是对未甲基化CpG DNA的应答所必需的。最后，TLR7和TLR8识别小的合成抗病毒分子，并且据报道单链RNA是它们的天然配体。已报道，TLR11识别尿路病原性大肠杆菌和来自刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)的抑制蛋白(profilin)样蛋白。TLR彼此异源二聚化的能力明显扩展了TLR特异性的所有组成成分。例如，TLR2和TLR6的二聚体是对二酰化脂蛋白的应答所必需的，而TLR2和TLR1相互作用以识别三酰化脂蛋白。TLR的特异性也受到各种衔接子和辅助分子的影响，例如MD-2和CD14，它们响应于LPS与TLR4形成复合体。
TLR信号传导由至少两种不同的途径组成：导致炎性细胞因子产生的MyD88依赖性途径，以及与IFN-β的刺激和树突细胞的成熟相关的MyD88非依赖性途径。MyD88依赖性途径是所有TLR的共同途径，除了TLR3(Adachi O.等,1998.Targeted disruption of theMyD88 gene results in loss of IL-1-and IL-18-mediated function.Immunity.9(1):143-50)。在由PAMP或DAMP活化时，TLR异源或同源二聚化，经由细胞质TIR结构域诱导衔接蛋白的募集。单独的TLR通过使用不同的衔接分子诱导不同的信号传导应答。TLR4和TLR2信号传导需要衔接子TIRAP/Mal，其涉及MyD88依赖性途径。TLR3通过衔接子TRIF/TICAM-1以MyD88非依赖性方式响应于双链RNA触发IFN-β的产生。TRAM/TICAM-2是另一种参与MyD88非依赖性途径的衔接分子，其功能限于TLR4途径。
TLR3、TLR7、TLR8和TLR9识别病毒核酸，并诱导I型IFN。导致诱导I型IFN的信号传导机制根据活化的TLR而不同。它们涉及干扰素调控因子、IRF、已知在抗病毒防御、细胞生长和免疫调控中起关键作用的转录因子家族。三种IRF(IRF3、IRF5和IRF7)充当病毒介导的TLR信号传导的直接转换器。TLR3和TLR4活化IRF3和IRF7，而TLR7和TLR8活化IRF5和IRF7(Doyle S.等,2002.IRF3 mediates aTLR3/TLR4-specific antiviral geneprogram.Immunity.17(3):251-63)。此外，由TLR9配体CpG-A刺激的I型IFN生产已显示由PI(3)K和mTOR介导(Costa-Mattioli M.和Sonenberg N.2008.RAPping production of typeI interferon in pDCs through mTOR.Nature Immunol.9:1097-1099)。
TLR-9
TLR9识别DNA分子中未甲基化的CpG序列。与细菌基因组或病毒DNA相比，CpG位点在脊椎动物基因组上相对罕见(约1％)。TLR9由免疫系统的许多细胞表达，例如B淋巴细胞、单核细胞、自然杀伤(NK)细胞和浆细胞样树突细胞。TLR9在胞内内体区室中表达，并且通过与富含CpG基序的DNA结合而起到警示免疫系统病毒和细菌感染的作用。TLR9信号导致启动促炎性反应的细胞的活化，该促炎性反应导致细胞因子(例如I型干扰素和IL-12)的产生。
TLR激动剂
TLR激动剂可以激动一种或多种TLR，例如，人TLR-1、2、3、4、5、6、7、8、9或10中的一种或多种。在一些实施方案中，本文所述的辅助剂是TLR激动剂。在一些实施方案中，TLR激动剂特异性激动人TLR-9。在一些实施方案中，TLR-9激动剂是CpG部分。如本文所用，CpG部分是具有以下序列的线性二核苷酸：5’-C-磷酸酯-G-3’，即，胞嘧啶和鸟嘌呤仅由一个磷酸酯分开。
在一些实施方案中，CpG部分包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或更多个CpG二核苷酸。在一些实施方案中，CpG部分由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个CpG二核苷酸组成。在一些实施方案中，CpG部分具有1-5、1-10、1-20、1-30、1-40、1-50、5-10、5-20、5-30、10-20、10-30、10-40或10-50个CpG二核苷酸。
在一些实施方案中，TLR-9激动剂是合成的ODN(寡脱氧核苷酸)。CpG ODN是短的合成单链DNA分子，其在特定的序列背景(CpG基序)中含有未甲基化的CpG二核苷酸。与存在于基因组细菌DNA中的天然磷酸二酯(PO)骨架相反，CPG ODN具有部分或完全硫代磷酸化(PS)骨架。CPG ODN有三大类：A、B和C类，它们的免疫刺激活性不同。CPG-A ODN的特征在于含PO中心CPG的回文基序和PS修饰的3’聚G串。它们诱导pDC高产量产生IFN-α，但是是TLR9依赖性NF-κB信号传导和促炎性细胞因子(例如，IL-6)产生的弱刺激物。CPG-B ODN含有具有一个或多个CPG二核苷酸的完整PS骨架。它们强烈活化B细胞和TLR9依赖性NF-κB信号传导，但弱刺激IFN-α分泌。CPG-C ODN组合了A类和B类两者的特征。它们含有完整的PS骨架和含CPG的回文基序。C类CPG ODN诱导强的pDC产生IFN-α以及B细胞刺激。
基质修饰部分
实体瘤具有与正常组织相似的不同结构，并且包含两个不同但相互依赖的区室：赘生性细胞诱导的实质(赘生性细胞)和基质，它们分散于其中。所有肿瘤都具有基质，并且需要基质进行营养支持和去除废物。在作为细胞悬浮液生长的肿瘤(例如，白血病、腹水肿瘤)的情况下，血浆用作基质(Connolly JL等,Tumor Structure and Tumor StromaGeneration.在:Kufe DW等编著的Holland-Frei Cancer Medicine.第6版.Hamilton:BCDecker；2003)。基质包括各种细胞类型，包括成纤维细胞/肌成纤维细胞、神经胶质细胞、上皮细胞、脂肪细胞、血管细胞、平滑肌细胞和免疫细胞，以及胞外基质(ECM)和胞外分子(LiHanchen等,Tumor Microenvironment:The Role of the Tumor Stroma in Cancer.J ofCellular Biochemistry 101:805-815(2007))。
本文所述的基质修饰部分包括能够降解基质组分的部分(例如，蛋白质，例如，酶)，该基质组分例如ECM组分，例如，糖胺聚糖，例如，透明质酸(也称为玻尿酸或HA)、硫酸软骨素、软骨素、硫酸皮肤素、硫酸肝素、肝素、巢蛋白、腱生蛋白、聚集蛋白聚糖和硫酸角蛋白；或胞外蛋白，例如，胶原、层粘连蛋白、弹性蛋白、纤维蛋白原、纤连蛋白和玻连蛋白。
基质修饰酶
在一些实施方案中，基质修饰部分是酶。例如，基质修饰部分可以包括但不限于透明质酸酶、胶原酶、软骨素酶、基质金属蛋白酶(例如，巨噬细胞金属弹性蛋白酶)。
透明质酸酶
透明质酸酶是在整个动物界发现的一组中性和酸活性酶。透明质酸酶在底物特异性和作用机制方面不同。透明质酸酶有三大类：(1)哺乳动物型透明质酸酶(EC 3.2.1.35)，其是以四糖和六糖为主要终产物的内切-β-N-乙酰己糖胺酶。它们具有水解和转糖苷酶活性，并且可以降解透明质酸和硫酸软骨素；(2)细菌透明质酸酶(EC 4.2.99.1)降解透明质酸，并在不同程度上降解硫酸软骨素和硫酸皮肤素。它们是内切-β-N-乙酰己糖胺酶，其通过β消除反应来操作，主要产生二糖终产物；(3)来自水蛭、其他寄生虫和甲壳类的透明质酸酶(EC 3.2.1.36)是内切-β-葡萄糖醛酸酶，其通过β1-3键的水解生成四糖和六糖终产物。
哺乳动物透明质酸酶可进一步分为两组：(1)中性活性酶和(2)酸活性酶。人基因组中有六种透明质酸酶样基因：HYAL1、HYAL2、HYAL3、HYAL4、HYALP1和PH20/SPAM1。HYALP1是假基因，HYAL3未显示出针对任何已知底物具有酶活性。HYAL4是软骨素酶，并且缺乏针对透明质酸的活性。HYAL1是原型酸活性酶，PH20是原型中性活性酶。酸活性透明质酸酶(例如HYAL1和HYAL2)在中性pH下缺乏催化活性。例如，HYAL1在体外pH超过4.5时无催化活性(Frost和Stern,“A Microtiter-Based Assay for Hyaluronidase Activity NotRequiring Specialized Reagents”,Analytical Biochemistry,第251卷,第263-269页(1997))。HYAL2是体外比活性非常低的酸活性酶。
在一些实施方案中，透明质酸酶是哺乳动物透明质酸酶。在一些实施方案中，透明质酸酶是重组人透明质酸酶。在一些实施方案中，透明质酸酶是中性活性透明质酸酶。在一些实施方案中，透明质酸酶是中性活性可溶性透明质酸酶。在一些实施方案中，透明质酸酶是重组PH20中性活性酶。在一些实施方案中，透明质酸酶是重组PH20中性活性可溶性酶。在一些实施方案中，透明质酸酶是糖基化的。在一些实施方案中，透明质酸酶具有至少一个N-连接的聚糖。可以使用本领域技术人员已知的常规方法来产生重组透明质酸酶，例如，US7767429，其全部内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，透明质酸酶是rHuPH20(也称为
Figure BDA0004017031980004201
目前由Halozyme制造；2005年被FDA批准(参见例如，Scodeller P(2014)Hyaluronidase and otherExtracellular Matrix Degrading Enzymes for Cancer Therapy:New Uses and Nano-Formulations.J Carcinog Mutage 5:178；US 7767429；US 8202517；US 7431380；US8450470；US 8772246；US 8580252，其中每一个的全部内容通过引用并入本文)。rHuPH20由含有编码人透明质酸酶PH20可溶性片段的DNA质粒的遗传工程化CHO细胞产生。在一些实施方案中，透明质酸酶是糖基化的。在一些实施方案中，透明质酸酶具有至少一个N-连接的聚糖。可以使用本领域技术人员已知的常规方法来产生重组透明质酸酶，例如，US 7767429，其全部内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，rHuPH20具有与LNFRAPPVIPNVPFLWAWNAPSEFCLGKFDEPLDMSLFSFIGSPRINATGQGVTIFYVDRLGYYPYIDSITGVTVNGGIPQKISLQDHLDKAKKDITFYMPVDNLGMAVIDWEEWRPTWARNWKPKDVYKNRSIELVQQQNVQLSLTEATEKAKQEFEKAGKDFLVETIKLGKLLRPNHLWGYYLFPDCYNHHYKKPGYNGSCFNVEIKRNDDLSWLWNESTALYPSIYLNTQQSPVAATLYVRNRVREAIRVSKIPDAKSPLPVFAYTRIVFTDQVLKFLSQDELVYTFGETVALGASGIVIWGTLSIMRSMKSCLLLDNYMETILNPYIINVTLAAKMCSQVLCQEQGVCIRKNWNSSDYLHLNPDNFAIQLEKGGKFTVRGKPTLEDLEQFSEKFYCSCYSTLSCKEKADVKDTDAVDVCIADGVCIDAFLKPPMETEEPQIFYNASPSTLS(SEQ ID NO:7248)的氨基酸序列至少95％(例如，至少96％、97％、98％、99％、100％)相同的序列。
在本文提供的方法中的任一种中，抗透明质酸剂可以是降解透明质酸的药剂，或者可以是抑制透明质酸合成的药剂。例如，抗透明质酸剂可以是透明质酸降解酶。在另一实例中，抗透明质酸剂是抑制透明质酸合成的药剂。例如，抗透明质酸剂是抑制透明质酸合成的药剂，例如针对HA合酶的有义或反义核酸分子，或是小分子药物。例如，抗透明质酸剂是4-甲基伞形酮(MU)或其衍生物，或来氟米特或其衍生物。这种衍生物包括例如4-甲基伞形酮(MU)的衍生物，即6,7-二羟基-4-甲基香豆素或5,7-二羟基-4-甲基香豆素。
在本文提供的方法的进一步实例中，透明质酸降解酶是透明质酸酶。在一些实例中，透明质酸降解酶是PH20透明质酸酶或其缺少C-末端糖基磷脂酰肌醇(GPI)附着位点或GPI附着位点的一部分的截短形式。在具体实例中，透明质酸酶是选自人、猴、牛、绵羊、大鼠、小鼠或豚鼠PH20的PH20。例如，透明质酸降解酶是中性活性和N-糖基化的人PH20透明质酸酶，并且选自(a)透明质酸酶多肽，其是全长PH20或PH20的C-末端截短形式，其中截短形式至少包括SEQ ID NO:7248的36-464位(例如36-481位、36-482位、36-483位)氨基酸残基，其中全长PH20具有SEQ ID NO:7248中所述的氨基酸序列；或(b)透明质酸酶多肽，其包含与SEQ ID NO:7248中所述的多肽或氨基酸序列的截短形式具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的氨基酸序列；或(c)包含氨基酸取代的(a)或(b)的透明质酸酶多肽，其中透明质酸酶多肽具有与SEQ ID NO:7248中所述的多肽或其相应截短形式具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的氨基酸序列。在示例性实例中，透明质酸降解酶是包含称为rHuPH20的组合物的PH20。
在其他实例中，抗透明质酸剂是通过与聚合物缀合而被修饰的透明质酸降解酶。聚合物可以是PEG，抗透明质酸剂可以是PEG化的透明质酸降解酶。因此，在本文提供的方法的一些实例中，透明质酸降解酶通过与聚合物缀合而被修饰。例如，透明质酸降解酶与PEG缀合，因此透明质酸降解酶是PEG化的。在示例性实例中，透明质酸降解酶是PEG化的PH20酶(PEGPH20)。在本文提供的方法中，皮质类固醇可以是糖皮质激素，其选自可的松、地塞米松、氢化可的松、甲基泼尼松龙、泼尼松龙和强的松。
软骨素酶
软骨素酶是在整个动物界发现的酶，其通过内切糖苷酶反应降解糖胺聚糖，特别是软骨素和硫酸软骨素。在一些实施方案中，软骨素酶是哺乳动物软骨素酶。在一些实施方案中，软骨素酶是重组人软骨素酶。在一些实施方案中，软骨素酶是HYAL4。其他示例性软骨素酶包括软骨素酶ABC(来源于普通变形杆菌(Proteus vulgaris)；日本专利申请公开第6-153947号、T.Yamagata等,J.Biol.Chem.,243,1523(1968)、S.Suzuki等,J.Biol.Chem.,243,1543(1968))、软骨素酶AC(来源于肝素黄杆菌(Flavobacterium heparinum)；T.Yamagata等,J.Biol.Chem.,243,1523(1968))、软骨素酶AC II(来源于金黄节杆菌(Arthrobacter aurescens)；K.Hiyama和S.Okada,J.Biol.Chem.,250,1824(1975)、K.Hiyama和S.Okada,J.Biochem.(Tokyo),80,1201(1976))、透明质酸酶ACIII(来源于黄杆菌Hp102(Flavobacterium sp.Hp102)；Hirofumi Miyazono等,Seikagaku,61,1023(1989))、软骨素酶B(来源于肝素黄杆菌；Y.M.Michelacci和C.P.Dietrich,Biochem.Biophys.Res.Commun.,56,973(1974)、Y.M.Michelacci和C.P.Dietrich,Biochem.J.,151,121(1975)、Kenichi Maeyama等,Seikagaku,57,1189(1985))、软骨素酶C(来源于黄杆菌Hp102；Hirofumi Miyazono等,Seikagaku,61,1023(1939))等。
基质金属蛋白酶
基质金属蛋白酶(MMP)是锌依赖性内肽酶，其是参与胞外基质(ECM)降解的主要蛋白酶。MMP能够降解多种胞外分子和许多生物活性分子。人中已鉴定了24种MMP基因，其可以基于结构域组织和底物偏好组织化为六组：胶原酶(MMP-1、-8和-13)、明胶酶(MMP-2和MMP-9)、基质溶素(MMP-3、-10和-11)、基质溶解因子(MMP-7和MMP-26)、膜型(MT)-MMP(MMP-14、-15、-16、-17、-24和-25)和其他(MMP-12、-19、-20、-21、-23、-27和-28)。在一些实施方案中，基质修饰部分是人重组MMP(例如，MMP-1、-2、-3、-4、-5、-6、-7、-8、-9、10、-11、-12、-13、-14、15、-15、-17、-18、-19、20、-21、-22、-23或-24)。
胶原酶
三种哺乳动物胶原酶(MMP-1、-8和-13)是能够切割胶原性胞外基质的主要分泌型内肽酶。除原纤维胶原以外，胶原酶可以切割几种其他基质和非基质蛋白，包括生长因子。胶原酶以无活性的前体形式合成，一旦被活化，它们的活性就会被金属蛋白酶的特异性组织抑制剂TIMP以及非特异性蛋白酶抑制剂抑制(Ala-aho R等,Biochimie.Collagenasesin cancer.2005年3月-4月；87(3-4):273-86)。在一些实施方案中，基质修饰部分是胶原酶。在一些实施方案中，胶原酶是人重组胶原酶。在一些实施方案中，胶原酶是MMP-1。在一些实施方案中，胶原酶是MMP-8。在一些实施方案中，胶原酶是MMP-13。
巨噬细胞金属弹性蛋白酶
巨噬细胞金属弹性蛋白酶(MME，也称为MMP-12)是MMP基质溶素亚群的成员，并且催化可溶性和不溶性弹性蛋白以及多种基质和非基质底物的水解，包括IV型胶原、纤连蛋白、层粘连蛋白、玻连蛋白、巢蛋白、乙酰肝素和硫酸软骨素(Erja
Figure BDA0004017031980004231
等,Journal ofInvestigative Dermatology(2000)114,1113-1119；doi:10.1046/j.1523-1747.2000.00993)。在一些实施方案中，基质修饰部分是MME。在一些实施方案中，MME是人重组MME。在一些实施方案中，MME是MMP-12。
另外的基质修饰部分
在一些实施方案中，基质修饰部分导致以下中的一种或多种：减少基质或胞外基质(ECM)组分的水平或产生；减少肿瘤纤维化；增加间质肿瘤转运；改善肿瘤灌注；扩张肿瘤微脉管系统；降低肿瘤中的间质液压力(IFP)；或者减少或增强药剂(例如，癌症治疗剂或细胞疗法)进入肿瘤或肿瘤脉管系统的渗透或扩散。
在一些实施方案中，减少的基质或ECM组分选自糖胺聚糖或胞外蛋白，或其组合。在一些实施方案中，糖胺聚糖选自透明质酸(也称为玻尿酸或HA)、硫酸软骨素、软骨素、硫酸皮肤素、肝素、硫酸肝素、巢蛋白、腱生蛋白、聚集蛋白聚糖和硫酸角蛋白。在一些实施方案中，胞外蛋白选自胶原、层粘连蛋白、弹性蛋白、纤维蛋白原、纤连蛋白或玻连蛋白。在一些实施方案中，基质修饰部分包括降解肿瘤基质或胞外基质(ECM)的酶分子。在一些实施方案中，酶分子选自透明质酸酶分子、胶原酶分子、软骨素酶分子、基质金属蛋白酶分子(例如，巨噬细胞金属弹性蛋白酶)，或上述中任一种的变体(例如，片段)。术语“酶分子”包括酶的全长、片段或变体，例如，保留天然存在的酶的至少一个功能特性的酶变体。
在一些实施方案中，基质修饰部分减少玻尿酸的水平或产生。在其他实施方案中，基质修饰部分包含透明质酸降解酶、抑制透明质酸合成的药剂，或针对玻尿酸的抗体分子。
在一些实施方案中，透明质酸降解酶是透明质酸酶分子，例如，其全长或变体(例如，其片段)。在一些实施方案中，透明质酸降解酶在中性或酸性pH(例如，约pH 4-5)中具有活性。在一些实施方案中，透明质酸酶分子是哺乳动物透明质酸酶分子，例如，重组人透明质酸酶分子，例如，其全长或变体(例如，其片段，例如，截短形式)。在一些实施方案中，透明质酸酶分子选自HYAL1、HYAL2或PH-20/SPAM1，或其变体(例如，其截短形式)。在一些实施方案中，截短形式缺少C-末端糖基磷脂酰肌醇(GPI)附着位点或GPI附着位点的一部分。在一些实施方案中，透明质酸酶分子是糖基化的，例如，包含至少一个N-连接的聚糖。
在一些实施方案中，透明质酸酶分子包含以下氨基酸序列：
LNFRAPPVIPNVPFLWAWNAPSEFCLGKFDEPLDMSLFSFIGSPRINATGQGVTIFYVDRLGYYPYIDSITGVTVNGGIPQKISLQDHLDKAKKDITFYMPVDNLGMAVIDWEEWRPTWARNWKPKDVYKNRSIELVQQQNVQLSLTEATEKAKQEFEKAGKDFLVETIKLGKLLRPNHLWGYYLFPDCYNHHYKKPGYNGSCFNVEIKRNDDLSWLWNESTALYPSIYLNTQQSPVAATLYVRNRVREAIRVSKIPDAKSPLPVFAYTRIVFTDQVLKFLSQDELVYTFGETVALGASGIVIWGTLSIMRSMKSCLLLDNYMETILNPYIINVTLAAKMCSQVLCQEQGVCIRKNWNSSDYLHLNPDNFAIQLEKGGKFTVRGKPTLEDLEQFSEKFYCSCYSTLSCKEKADVKDTDAVDVCIADGVCIDAFLKPPMETEEPQIFYNASPSTLS(SEQ ID NO:7256)、其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7256的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在一些实施方案中，透明质酸酶分子包含：
(i)SEQ ID NO:7256的36-464位氨基酸序列；
(ii)PH20的36-481位、36-482位或36-483位氨基酸序列，其中PH20具有SEQ IDNO:7256中所述的氨基酸序列；或
(iii)与SEQ ID NO:7256中所述的多肽或氨基酸序列的截短形式具有至少95％至100％序列同一性的氨基酸序列；或
(iv)对于SEQ ID NO:7256中所述的氨基酸序列具有30、20、10、5或更少个氨基酸取代的氨基酸序列。在一些实施方案中，透明质酸酶分子包含与SEQ ID NO:7256的氨基酸序列至少95％(例如，至少95％、96％、97％、98％、99％、100％)相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，透明质酸酶分子由与SEQ ID NO:7256的核苷酸序列至少95％(例如，至少96％、97％、98％、99％、100％)相同的核苷酸序列编码。
在一些实施方案中，透明质酸酶分子是PH20，例如，rHuPH20。在一些实施方案中，透明质酸酶分子是HYAL1，并且包含以下氨基酸序列：
FRGPLLPNRPFTTVWNANTQWCLERHGVDVDVSVFDVVANPGQTFRGPDMTIFYSSQGTYPYYTPTGEPVFGGLPQNASLIAHLARTFQDILAAIPAPDFSGLAVIDWEAWRPRWAFNWDTKDIYRQRSRALVQAQHPDWPAPQVEAVAQDQFQGAARAWMAGTLQLGRALRPRGLWGFYGFPDCYNYDFLSPNYTGQCPSGIRAQNDQLGWLWGQSRALYPSIYMPAVLEGTGKSQMYVQHRVAEAFRVAVAAGDPNLPVLPYVQIFYDTTNHFLPLDELEHSLGESAAQGAAGVVLWVSWENTRTKESCQAIKEYMDTTLGPFILNVTSGALLCSQALCSGHGRCVRRTSHPKALLLLNPASFSIQLTPGGGPLSLRGALSLEDQAQMAVEFKCRCYPGWQAPWCERKSMW(SEQ ID NO:7253)，或其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7253的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
在一些实施方案中，透明质酸降解酶(例如，透明质酸酶分子)进一步包含聚合物，例如，与聚合物(例如，PEG)缀合。在一些实施方案中，透明质酸降解酶是PEG化的PH20酶(PEGPH20)。在一些实施方案中，透明质酸降解酶(例如，透明质酸酶分子)进一步包含免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)，其选自例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的重链恒定区，更特别是人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区。在一些实施方案中，免疫球蛋白恒定区(例如，Fc区)与透明质酸降解酶(例如，透明质酸酶分子)连接，例如，共价连接。在一些实施方案中，免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)被改变(例如，突变)，以增加或减少以下中的一种或多种：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数量、效应细胞功能或补体功能。在一些实施方案中，透明质酸降解酶(例如，透明质酸酶分子)形成二聚体。
在一些实施方案中，基质修饰部分包含透明质酸合成的抑制剂，例如，HA合酶。在一些实施方案中，抑制剂包含针对HA合酶的有义或反义核酸分子，或是小分子药物。在一些实施方案中，抑制剂是4-甲基伞形酮(MU)或其衍生物(例如，6,7-二羟基-4-甲基香豆素或5,7-二羟基-4-甲基香豆素)，或来氟米特或其衍生物。
在一些实施方案中，基质修饰部分包含针对玻尿酸的抗体分子。
在一些实施方案中，基质修饰部分包含胶原酶分子(例如，哺乳动物胶原酶分子)，或其变体(例如，片段)。在一些实施方案中，胶原酶分子是胶原酶分子IV，例如，包含以下氨基酸序列：
YNFFPRKPKWDKNQITYRIIGYTPDLDPETVDDAFARAFQVWSDVTPLRFSRIHDGEADIMINFGRWEHGDGYPFDGKDGLLAHAFAPGTGVGGDSHFDDDELWTLGEGQVVRVKYGNADGEYCKFPFLFNGKEYNSCTDTGRSDGFLWCSTTYNFEKDGKYGFCPHEALFTMGGNAEGQPCKFPFRFQGTSYDSCTTEGRTDGYRWCGTTEDYDRDKKYGFCPETAMSTVGGNSEGAPCVFPFTFLGNKYESCTSAGRSDGKMWCATTANYDDDRKWGFCPDQGYSLFLVAAHEFGHAMGLEHSQDPGALMAPIYTYTKNFRLSQDDIKGIQELYGASPDIDLGTGPTPTLGPVTPEICKQDIVFDGIAQIRGEIFFFKDRFIWRTVTPRDKPMGPLLVATFWPELPEKIDAVYEAPQEEKAVFFAGNEYWIYSASTLERGYPKPLTSLGLPPDVQRVDAAFNWSKNKKTYIFAGDKFWRYNEVKKKMDPGFPKLIADAWNAIPDNLDAVVDLQGGGHSYFFKGAYYLKLENQSLKSVKFGSIKSDWLGC(SEQ ID NO:7254)，或其片段，或与其基本上相同(例如，与其95％至99.9％相同，或对于SEQ ID NO:7254的氨基酸序列具有至少一个氨基酸改变，但不多于五个、十个或十五个改变(例如，取代、缺失或插入，例如，保守取代))的氨基酸序列。
接头
本文公开的多特异性或多功能性分子可以进一步包括接头，例如，在以下中的一个或多个之间的接头：抗原结合结构域和细胞因子分子、抗原结合结构域和免疫细胞接合物、抗原结合结构域和基质修饰部分、细胞因子分子和免疫细胞接合物、细胞因子分子和基质修饰部分、免疫细胞接合物和基质修饰部分、抗原结合结构域和免疫球蛋白链恒定区、细胞因子分子和免疫球蛋白链恒定区、免疫细胞接合物和免疫球蛋白链恒定区，或基质修饰部分和免疫球蛋白链恒定区。在实施方案中，接头选自：可切割接头、不可切割接头、肽接头、柔性接头、刚性接头、螺旋接头或非螺旋接头，或其组合。
在一个实施方案中，多特异性分子可以包括一个、两个、三个或四个接头，例如，肽接头。在一个实施方案中，肽接头包括Gly和Ser。在一些实施方案中，肽接头选自GGGGS(SEQID NO:7249)；GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7250)；GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7251)；以及DVPSGPGGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:7252)。在一些实施方案中，肽接头是A(EAAAK)nA(SEQ IDNO:7255)家族的接头(例如，如Protein Eng.(2001)14(8):529-532中所述的)。这些是刚性螺旋接头，其中n为2-5。在一些实施方案中，肽接头选自AEAAAKEAAAKAAA(SEQ ID NO:75)；AEAAAKEAAAKEAAAKAAA(SEQ ID NO:76)；AEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKAAA(SEQ ID NO:77)；以及AEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKAAA(SEQ ID NO:78)。
核酸
还公开了编码上述多特异性或多功能性分子的核酸。
在某些实施方案中，如本文所述，本发明的特征在于核酸，其包含编码抗体分子的重链和轻链可变区以及CDR或高变环的核苷酸序列。例如，本发明的特征在于第一和第二核酸，它们分别编码选自本文公开的抗体分子中一种或多种抗体分子的重链和轻链可变区。核酸可以包含如本文表中所述的核苷酸序列，或与其基本上相同的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的序列，或与本文表中所示的序列相差不多于3、6、15、30或45个核苷酸的序列)。
在某些实施方案中，核酸可以包含编码来自重链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环的核苷酸序列，该重链可变区具有本文表中所述的氨基酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的序列，和/或具有一个或多个取代，例如，保守取代)。在其他实施方案中，核酸可以包含编码来自轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环的核苷酸序列，该轻链可变区具有本文表中所述的氨基酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的序列，和/或具有一个或多个取代，例如，保守取代)。在另一实施方案中，核酸可以包含编码来自重链和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR或高变环的核苷酸序列，该重链和轻链可变区具有本文表中所述的氨基酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的序列，和/或具有一个或多个取代，例如，保守取代)。
在某些实施方案中，核酸可以包含编码来自重链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环的核苷酸序列，该重链可变区具有本文表中所述的核苷酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交)。在另一实施方案中，核酸可以包含编码来自轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR或高变环的核苷酸序列，该轻链可变区具有本文表中所述的核苷酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交)。在另一实施方案中，核酸可以包含编码来自重链和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR或高变环的核苷酸序列，该重链和轻链可变区具有本文表中所述的核苷酸序列，或与其基本上同源的序列(例如，与其至少约85％、90％、95％、99％或更多相同的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交)。
在某些实施方案中，核酸可以包含编码细胞因子分子、免疫细胞接合物或本文公开的基质修饰部分的核苷酸序列。
在另一方面，本申请的特征在于宿主细胞和载体，它们含有本文所述的核酸。如下文更详细描述，核酸可存在于单一载体中或存在于同一宿主细胞或不同宿主细胞中的不同载体中。
载体
本文进一步提供了载体，其包含编码本文所述的多特异性或多功能性分子的核苷酸序列。在一个实施方案中，载体包含编码本文所述的多特异性或多功能性分子的核苷酸。在一个实施方案中，载体包含本文所述的核苷酸序列。载体包括但不限于病毒、质粒、粘粒、λ噬菌体或酵母人工染色体(YAC)。
许多载体系统可以被使用。例如，一类载体利用来源于动物病毒(例如，牛乳头瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、牛痘病毒、杆状病毒、逆转录病毒(劳斯肉瘤病毒、MMTV或MOMLV)或SV40病毒)的DNA元件。另一类载体利用来源于RNA病毒(例如塞姆利基森林病毒、东方马脑炎病毒和黄病毒)的RNA元件。
另外，可通过引入一个或多个允许选择转染的宿主细胞的标记物来选择已将DNA稳定整合至其染色体中的细胞。标记可提供例如对营养缺陷型宿主的质子转移、杀生物剂抗性(例如，抗生素)或对重金属(例如铜)的抗性等。选择性标记基因可以直接与待表达的DNA序列连接，或通过共转化导入同一细胞。mRNA的最佳合成也可能需要另外的元件。这些元件可包括剪接信号，以及转录启动子、增强子和终止信号。
一旦制备了用于表达的表达载体或含有构建体的DNA序列，就可以将表达载体转染或导入合适的宿主细胞中。这可以使用各种技术来实现，例如，原生质体融合、磷酸钙沉淀、电穿孔、逆转录病毒转导、病毒转染、基因枪、基于脂质的转染或其他常规技术。在原生质体融合的情况下，细胞在培养基中生长并筛选合适的活性。用于培养所得转染的细胞和用于回收产生的抗体分子的方法和条件是本领域技术人员已知的，并且可基于本说明书根据所用的特定表达载体和哺乳动物宿主细胞而改变或优化。
细胞
在另一方面，本申请的特征在于宿主细胞和载体，它们含有本文所述的核酸。核酸可存在于单一载体中或存在于同一宿主细胞或不同宿主细胞中的不同载体中。宿主细胞可以是真核细胞，例如，哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母细胞或原核细胞，例如，大肠杆菌。例如，哺乳动物细胞可以是培养的细胞或细胞系。示例性哺乳动物细胞包括淋巴细胞系(例如，NSO)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、COS细胞、卵母细胞和来自转基因动物的细胞，例如，乳腺上皮细胞。
本发明还提供了包含编码如本文所述的抗体分子的核酸的宿主细胞。
在一个实施方案中，宿主细胞遗传工程化为包含编码抗体分子的核酸。
在一个实施方案中，宿主细胞通过使用表达盒遗传工程化。短语“表达盒”是指核苷酸序列，其能够影响基因在与这种序列相容的宿主中表达。这种盒可包括启动子、含或不含内含子的开放阅读框，以及终止信号。也可以使用实现表达所需或有帮助的另外因子，例如，诱导型启动子。
本发明还提供了包含本文所述载体的宿主细胞。
细胞可以是但不限于真核细胞、细菌细胞、昆虫细胞或人细胞。合适的真核细胞包括但不限于Vero细胞、Hela细胞、COS细胞、CHO细胞、HEK293细胞、BHK细胞和MDCKII细胞。合适的昆虫细胞包括但不限于Sf9细胞。
用途和组合疗法
本文所述的方法包括通过使用本文所述的多特异性分子(例如，使用本文所述的药物组合物)治疗对象的癌症。还提供了减少或改善对象癌症症状的方法，以及抑制癌症生长和/或杀伤一种或多种癌细胞的方法。在实施方案中，本文所述的方法在施用本文所述的或本文所述的药物组合物的对象中减小肿瘤的大小和/或减小癌细胞的数量。
在实施方案中，癌症是血液癌症。在实施方案中，血液癌症是白血病或淋巴瘤。如本文所用，“血液癌症”是指造血组织或淋巴组织的肿瘤，例如，影响血液、骨髓或淋巴结的肿瘤。示例性血液恶性肿瘤包括但不限于白血病(例如，急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓样白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、毛细胞白血病、急性单核细胞性白血病(AMoL)、慢性骨髓单核细胞性白血病(CMML)、幼年型粒-单核细胞白血病(JMML)或大颗粒淋巴细胞性白血病)、淋巴瘤(例如，AIDS相关淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(例如，典型霍奇金淋巴瘤或结节性淋巴细胞主导型霍奇金淋巴瘤)、蕈样真菌病、非霍奇金淋巴瘤(例如，B细胞非霍奇金淋巴瘤(例如，伯基特淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B成淋巴细胞性淋巴瘤或套细胞淋巴瘤)或T细胞非霍奇金淋巴瘤(蕈样真菌病、间变性大细胞淋巴瘤或前体T成淋巴细胞性淋巴瘤))、原发性中枢神经系统淋巴瘤、塞扎里综合征、瓦氏巨球蛋白血症)、慢性骨髓增生性赘生物、朗格汉斯细胞组织细胞增生症、多发性骨髓瘤/浆细胞赘生物、骨髓增生异常综合征或骨髓增生异常/骨髓增生性赘生物。
在实施方案中，癌症是实体癌。示例性实体癌包括但不限于卵巢癌、直肠癌、胃癌、睾丸癌、肛门区癌、子宫癌、结肠癌、直肠癌、肾细胞癌、肝癌、非小细胞肺癌、小肠癌、食管癌、黑色素瘤、卡波西肉瘤、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内恶性黑色素瘤、子宫癌、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、表皮样癌、子宫颈鳞状细胞癌、输卵管癌、子宫内膜癌、阴道癌、软组织肉瘤、尿道癌、外阴癌、阴茎癌、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾盂癌、脊髓轴肿瘤、中枢神经系统(CNS)赘生物、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、所述癌症的转移病变，或其组合。
在某些实施方案中，癌症是上皮、间充质或血液恶性肿瘤。在某些实施方案中，所治疗的癌症是实体瘤(例如，类癌、癌或肉瘤)、软组织肿瘤(例如，血红素恶性肿瘤)和转移病变，例如，本文公开的癌症中任一种的转移病变。在一个实施方案中，所治疗的癌症是纤维化或结缔组织增生性实体瘤，例如，具有以下中的一种或多种的肿瘤：有限的肿瘤灌注、压缩的血管、纤维化的肿瘤间质或增加的间质液压。在一个实施方案中，实体瘤选自胰腺癌(例如，胰腺癌或胰腺导管腺癌)、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、肺癌(例如，小细胞肺癌(SCLC)或非小细胞肺癌(NSCLC))、皮肤癌、卵巢癌、肝癌、食管癌、子宫内膜癌、胃癌、头颈癌、肾癌或前列腺癌中的一种或多种。
癌症的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴恶性肿瘤。这种癌症的更具体实例在下文中指出，并且包括：鳞状细胞癌(例如，上皮鳞状细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃(gastric、stomach)癌(包括胃肠癌)、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾(kidney、renal)癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌以及头颈癌。术语“癌症”包括原发性恶性细胞或肿瘤(例如，其细胞未迁移至对象身体中除最初恶性肿瘤或肿瘤部位以外的部位的那些)和继发性恶性细胞或肿瘤(例如，由转移、恶性细胞或肿瘤细胞迁移至不同于最初肿瘤部位的继发性部位引起的那些)。
癌症或恶性肿瘤的其他实例包括但不限于：急性儿童成淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓样白血病、肾上腺皮质癌、成人(原发性)肝细胞癌、成人(原发性)肝癌、成人急性淋巴细胞白血病、成人急性髓样白血病、成人霍奇金病、成人霍奇金淋巴瘤、成人淋巴细胞白血病、成人非霍奇金淋巴瘤、成人原发性肝癌、成人软组织肉瘤、AIDS相关淋巴瘤、AIDS相关恶性肿瘤、肛门癌、星形细胞瘤、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑干神经胶质瘤、脑肿瘤、乳腺癌、肾盂癌和输尿管癌、中枢神经系统(原发性)淋巴瘤、中枢神经系统淋巴瘤、小脑星形细胞瘤、脑星形细胞瘤、宫颈癌、儿童(原发性)肝细胞癌、儿童(原发性)肝癌、儿童急性成淋巴细胞性白血病、儿童急性髓样白血病、儿童脑干神经胶质瘤、儿童小脑星形细胞瘤、儿童脑星形细胞瘤、儿童颅外生殖细胞肿瘤、儿童霍奇金病、儿童霍奇金淋巴瘤、儿童下丘脑和视觉通路神经胶质瘤、儿童成淋巴细胞性白血病、儿童成神经管细胞瘤、儿童非霍奇金淋巴瘤、儿童松果体和幕上原始神经外胚层肿瘤、儿童原发性肝癌、儿童横纹肌肉瘤、儿童软组织肉瘤、儿童视觉通路和下丘脑神经胶质瘤、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病、结肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、内分泌胰岛细胞癌、子宫内膜癌、室管膜瘤、上皮癌、食管癌、尤文氏肉瘤和相关肿瘤、外分泌胰腺癌、颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、肝外胆管癌、眼癌、女性乳腺癌、戈谢病、胆囊癌、胃癌、胃肠类癌瘤、胃肠肿瘤、生殖细胞肿瘤、妊娠滋养细胞肿瘤、毛细胞白血病、头颈癌、肝细胞癌、霍奇金病、霍奇金淋巴瘤、高丙种球蛋白血症、下咽癌、肠癌、眼内黑色素瘤、胰岛细胞癌、胰岛细胞胰腺癌、卡波西肉瘤、肾癌、喉癌、唇和口腔癌、肝癌、肺癌、淋巴增生性障碍、巨球蛋白血症、男性乳腺癌、恶性间皮瘤、恶性胸腺瘤、成神经管细胞瘤、黑色素瘤、间皮瘤、转移性隐匿性原发性鳞状颈癌、转移性原发性鳞状颈癌、转移性鳞状颈癌、多发性骨髓瘤、多发性骨髓瘤/浆细胞赘生物、骨髓增生异常综合征、髓性白血病、髓样白血病、骨髓增生性障碍、鼻腔和副鼻窦癌、鼻咽癌、成神经细胞瘤、妊娠期间的非霍奇金淋巴瘤、非黑色素瘤皮肤癌、非小细胞肺癌、隐匿性原发性转移性鳞状颈癌、口咽癌、骨/恶性纤维肉瘤、骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤、骨肉瘤/骨恶性纤维组织细胞瘤、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞肿瘤、卵巢低恶性潜能肿瘤、胰腺癌、副蛋白血症、紫癜、甲状旁腺癌、阴茎癌、嗜铬细胞瘤、垂体肿瘤、浆细胞赘生物/多发性骨髓瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性肝癌、前列腺癌、直肠癌、肾细胞癌、肾盂和输尿管癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、结节病肉瘤、塞扎里综合征、皮肤癌、小细胞肺癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状颈癌、胃癌、幕上原始神经外胚层和松果体肿瘤、T细胞淋巴瘤、睾丸癌、胸腺瘤、甲状腺癌、肾盂和输尿管的移行细胞癌、肾盂和输尿管移行癌、滋养细胞肿瘤、输尿管和肾盂细胞癌、尿道癌、子宫癌、子宫肉瘤、阴道癌、视觉通路和下丘脑神经胶质瘤、外阴癌、瓦氏巨球蛋白血症、威尔姆斯瘤，以及位于上述器官系统中的除瘤形成以外的任何其他过度增殖性疾病。
在其他实施方案中，如上文和本文所述的多特异性分子用于治疗过度增殖性障碍，例如，过度增殖性结缔组织障碍(例如，过度增殖性纤维化疾病)。在一个实施方案中，过度增殖性纤维化疾病是多系统或器官特异性的。示例性过度增殖性纤维化疾病包括但不限于多系统(例如，系统性硬化症、多灶性纤维硬化，骨髓移植接受者的硬皮病移植物抗宿主病、肾源性系统性纤维化、硬皮病)和器官特异性障碍(例如，眼、肺、肝、心脏、肾、胰腺、皮肤和其他器官的纤维化)。在其他实施方案中，障碍选自肝硬化或结核病。在其他实施方案中，障碍是麻风病。
在实施方案中，多特异性分子(或药物组合物)以适于待治疗或预防的疾病的方式施用。施用的量和频率将由例如患者病况以及患者疾病类型和严重性等因素来确定。合适的剂量可通过临床试验来确定。例如，当指示“有效量”或“治疗量”时，医生可以考虑个体在肿瘤大小、感染或转移程度、对象的年龄、体重和病况方面的差异来确定待施用的药物组合物(或多特异性分子)的精确量。在实施方案中，本文所述的药物组合物可以104至109个细胞/kg体重(例如，105至106个细胞/kg体重)的剂量施用，包括那些范围内的所有整数值。在实施方案中，本文所述的药物组合物可以以这些剂量施用多次。在实施方案中，本文所述的药物组合物可以使用免疫疗法中所述的输注技术来施用(参见例如，Rosenberg等,NewEng.J.of Med.319:1676,1988)。
在实施方案中，癌症是骨髓增生性赘生物，例如，原发性或特发性骨髓纤维化(MF)、原发性血小板增多症(ET)、真性红细胞增多症(PV)或慢性髓性白血病(CML)。在实施方案中，癌症是骨髓纤维化。在实施方案中，对象患有骨髓纤维化。在实施方案中，对象具有钙网蛋白突变，例如，本文公开的钙网蛋白突变。在实施方案中，对象不具有JAK2-V617F突变。在实施方案中，对象具有JAK2-V617F突变。在实施方案中，对象具有MPL突变。在实施方案中，对象不具有MPL突变。
在实施方案中，癌症是实体癌。示例性实体癌包括但不限于卵巢癌、直肠癌、胃癌、睾丸癌、肛门区癌、子宫癌、结肠癌、直肠癌、肾细胞癌、肝癌、非小细胞肺癌、小肠癌、食管癌、黑色素瘤、卡波西肉瘤、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内恶性黑色素瘤、子宫癌、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、表皮样癌、子宫颈鳞状细胞癌、输卵管癌、子宫内膜癌、阴道癌、软组织肉瘤、尿道癌、外阴癌、阴茎癌、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾盂癌、脊髓轴肿瘤、中枢神经系统(CNS)赘生物、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、所述癌症的转移病变，或其组合。
在实施方案中，将多特异性分子或药物组合物肠胃外施用至对象。在实施方案中，将细胞静脉内、皮下、瘤内、结内、肌内、皮内或腹膜内施用至对象。在实施方案中，将细胞直接施用(例如，注射)至肿瘤或淋巴结中。在实施方案中，将细胞作为输注物(例如，如Rosenberg等,New Eng.J.of Med.319:1676,1988中所述)或静脉内推注施用。在实施方案中，将细胞作为可注射的贮库制剂施用。
在实施方案中，对象是哺乳动物。在实施方案中，对象是人、猴、猪、狗、猫、牛、绵羊、山羊、兔、大鼠或小鼠。在实施方案中，对象是人。在实施方案中，对象是儿科对象，例如，小于18岁，例如，小于17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1岁或更小。在实施方案中，对象是成人，例如，至少18岁，例如，至少19、20、21、22、23、24、25、25-30、30-35、35-40、40-50、50-60、60-70、70-80或80-90岁。
组合疗法
本文公开的多特异性或多功能性分子可以与第二治疗性药剂或程序组合使用。
在实施方案中，多特异性或多功能性分子和第二治疗性药剂或程序在对象已被诊断患有癌症之后(例如，已消除对象的癌症之前)施用/进行。在实施方案中，多特异性或多功能性分子和第二治疗性药剂或程序同时或并行施用/进行。例如，当第二种治疗的递送开始时，一种治疗的递送仍在进行，例如，治疗的施用存在重叠。在其他实施方案中，多特异性或多功能性分子和第二治疗性药剂或程序依次施用/进行。例如，一种治疗的递送在另一种治疗的递送开始之前停止。
在实施方案中，组合疗法可以导致比单独用任一药剂的单一疗法更有效的治疗。在实施方案中，第一和第二治疗的组合比单独的第一或第二治疗更有效(例如，导致症状和/或癌细胞更大的减少)。在实施方案中，与作为单一疗法施用时实现相似作用通常所需的第一或第二治疗剂量相比，组合疗法允许使用较低剂量的第一或第二治疗。在实施方案中，组合疗法具有部分累加效应、完全累加效应或大于累加效应。
在一个实施方案中，多特异性或多功能性分子与疗法(例如，癌症疗法(例如，一种或多种抗癌药剂、免疫疗法、光动力疗法(PDT)、手术和/或放射))组合施用。术语“化疗”、“化疗药剂”和“抗癌药剂”在本文中可互换使用。多特异性或多功能性分子的施用和疗法(例如，癌症疗法)可以是依次发生的(有或无重叠)或同时发生的。在疗程(例如，癌症疗法)期间，多特异性或多功能性分子的施用可以是连续的或间歇的。本文所述的某些疗法可以用于治疗癌症和非癌性疾病。例如，使用本文所述的方法和组合物可以PDT在癌性和非癌性病况中的功效(例如，Agostinis,P.等,(2011)CA Cancer J.Clin.61:250-281中综述的)。
抗癌疗法
在其他实施方案中，多特异性或多功能性分子与低或小分子量的化疗药剂组合施用。示例性低或小分子量的化疗药剂包括但不限于13-顺式视黄酸(异维甲酸，
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)、2-CdA(2-氯脱氧腺苷，克拉屈滨，LEUSTATINTM)、5-阿扎胞苷(阿扎胞苷，/>
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)、5-氟尿嘧啶(5-FU，氟尿嘧啶，/>
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)、6-巯基嘌呤(6-MP，巯基嘌呤，/>
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)、6-TG(6-硫代鸟嘌呤，硫代鸟嘌呤，THIOGUANINE/>
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)、abraxane(蛋白结合型紫杉醇)、放线菌素D(更生霉素，/>
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)、阿利维A酸/>
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全反式视黄酸(ATRA，维甲酸，/>
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)、六甲蜜胺(六甲嘧胺，HMM，/>
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)、氨甲蝶呤(甲氨蝶呤，甲氨蝶呤钠，MTX，TREXALLTM，/>
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)、氨磷汀/>
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阿糖胞嘧啶(Ara-C，阿糖胞苷，/>
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)、三氧化二砷/>
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天冬酰胺酶(欧文氏菌L-天冬氨酸酶，L-天冬氨酸酶，/>
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)、BCNU(卡莫斯汀，/>
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)、苯达莫司汀/>
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蓓萨罗丁/>
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博来霉素/>
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白消安/>
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)、甲酰四氢叶酸钙(嗜橙菌因子，亚叶酸，甲酰四氢叶酸)、喜树碱-11(CPT-11，伊立替康，/>
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)、卡培他滨/>
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卡铂/>
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卡莫司汀晶片(具有卡莫司汀植入物的prolifeprospan 20，/>
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晶片)、CCI-779(坦罗莫司，/>
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)、CCNU(洛莫司汀，CeeNU)、CDDP(顺铂，/>
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)、苯丁酸氮芥(瘤可宁)、环磷酰胺(/>
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)、达卡巴嗪(DIC，DTIC，咪唑甲酰胺，
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)、正定霉素(道诺霉素，盐酸道诺霉素，盐酸红比霉素，/>
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)、地西他滨/>
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右雷佐生/>
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DHAD(米托蒽醌，
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)、多西他赛/>
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多柔比星
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表柔比星(ELLENCETM)、雌莫司汀/>
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依托泊苷(VP-16，磷酸依托泊苷，/>
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)、氟尿苷/>
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氟达拉滨/>
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氟尿嘧啶(霜剂)((CARACTM，
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)、吉西他滨/>
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羟基脲(/>
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DROXIATM，MYLOCELTM)、伊达比星/>
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异环磷酰胺/>
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伊沙匹隆(IXEMPRATM)、LCR(醛基长春碱，长春新碱，VCR，/>
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VINCASAR/>
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)、L-PAM(L-沙可来新，美法仑，苯丙氨酸氮芥，/>
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)、氮芥(盐酸氮芥，氮介，氮芥子气，
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)、美司钠(MESNEXTM)、丝裂霉素(丝裂霉素-C，MTC，/>
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奥沙利铂(ELOXATINTM)、紫杉醇(/>
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ONXALTM)、培门冬酶(PEG-L-天冬酰胺酶，/>
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)、培美曲塞/>
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喷司他汀
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甲苄肼/>
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链脲菌素/>
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替莫唑胺
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替尼泊苷(VM-26，/>
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)、TESPA(硫代磷酰胺，噻替派，TSPA，
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)、拓扑替康/>
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长春碱(硫酸长春碱，长春花碱，VLB，
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)、长春瑞滨(酒石酸长春瑞滨，/>
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)和伏立诺他/>
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在另一实施方案中，多特异性或多功能性分子与生物制剂联合施用。用于治疗癌症的生物制剂是本领域已知的，并且本发明的结合分子可例如与这些已知的生物制剂联合施用。例如，FDA已批准以下生物制剂用于治疗乳腺癌：
Figure BDA0004017031980004391
(曲妥珠单抗，Genentech Inc.，加利福尼亚州南旧金山市；在HER2阳性乳腺癌中具有抗肿瘤活性的人源化单克隆抗体)；/>
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(氟维司群，AstraZeneca Pharmaceuticals,LP，特拉华州威尔明顿市；用于治疗乳腺癌的雌激素受体拮抗剂；/>
Figure BDA0004017031980004393
(阿那曲唑，AstraZeneca Pharmaceuticals,LP；阻断芳香酶(制备雌激素所需的酶)的非甾体芳香酶抑制剂；/>
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(依西美坦，Pfizer Inc.，纽约州纽约市；用于治疗乳腺癌的不可逆的甾体芳香酶灭活剂)；/>
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(来曲唑，Novartis Pharmaceuticals，新泽西州东汉诺威市；FDA批准用于治疗乳腺癌的非甾体芳香酶抑制剂；以及/>
Figure BDA0004017031980004396
(他莫昔芬，AstraZeneca Pharmaceuticals,LP；FDA批准用于治疗乳腺癌的非甾体抗雌激素)。可以与本发明的结合分子组合的其他生物制剂包括：/>
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(贝伐单抗，GenentechInc.；旨在抑制血管生成的第一个FDA批准的疗法)；以及/>
Figure BDA0004017031980004398
(替伊莫单抗，Biogen Idec，马萨诸塞州剑桥市；目前批准用于治疗B细胞淋巴瘤的放射性标记的单克隆抗体)。
另外，FDA已批准以下生物制剂用于治疗结肠直肠癌：
Figure BDA0004017031980004399
Figure BDA00040170319800043910
(西妥昔单抗，ImClone Systems Inc.，纽约州纽约市，和Bristol-Myers Squibb，纽约州纽约市；是针对表皮生长因子受体(EGFR)的单克隆抗体)；/>
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(甲磺酸伊马替尼；蛋白激酶抑制剂)；以及/>
Figure BDA00040170319800043912
(盐酸左旋咪唑，Janssen PharmaceuticaProducts,LP，新泽西州泰特斯维尔市；在Dukes’C期结肠癌患者手术切除后，FDA在1990年批准的与5-氟尿嘧啶组合作为辅助治疗的免疫调节剂)。
对于肺癌的治疗，示例性生物制剂包括
Figure BDA00040170319800043913
(盐酸埃罗替尼，OSIPharmaceuticals Inc.，纽约州梅尔维尔市；旨在靶向人表皮生长因子受体1(HER1)途径的小分子。
对于多发性骨髓瘤的治疗，示例性生物制剂包括
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万珂(硼替佐米，Millennium Pharmaceuticals，马萨诸塞州剑桥市；蛋白酶体抑制剂)。另外的生物制剂包括/>
Figure BDA0004017031980004402
(沙利度胺，Clegene Corporation，新泽西州沃伦市；免疫调节药剂并且似乎具有多种作用，包括抑制骨髓瘤细胞生长和存活以及抗血管生成的能力。
另外的示例性癌症治疗性抗体包括但不限于3F8、阿巴伏单抗、阿德木单抗、阿夫土珠单抗、培戈-阿拉赛珠单抗、阿伦单抗
Figure BDA0004017031980004403
Figure BDA0004017031980004404
喷替酸阿妥莫单抗/>
Figure BDA0004017031980004405
马安那莫单抗、安芦组单抗(IMA-638)、阿泊珠单抗、阿西莫单抗/>
Figure BDA0004017031980004406
巴维昔单抗、贝妥莫单抗
Figure BDA0004017031980004407
贝利木单抗/>
Figure BDA0004017031980004408
贝索单抗/>
Figure BDA0004017031980004409
贝伐珠单抗/>
Figure BDA00040170319800044010
bivatuzumab mertansine、博纳吐单抗、本妥昔单抗、莫坎妥珠单抗、卡罗单抗喷地肽/>
Figure BDA00040170319800044011
卡妥索单抗/>
Figure BDA00040170319800044012
CC49、西妥昔单抗(C225，/>
Figure BDA00040170319800044013
)、泊西他组单抗、西妥木单抗、泰坦-克利妥珠单抗、可那木单抗、达西组单抗、地诺单抗/>
Figure BDA00040170319800044014
地莫单抗、依美昔单抗、依决洛单抗/>
Figure BDA00040170319800044015
埃罗妥珠单抗、西依匹莫单抗、依帕珠单抗、厄妥索单抗/>
Figure BDA00040170319800044016
埃达组单抗、法妥组单抗、芬妥木单抗、非苏木单抗、加利昔单抗、吉妥珠单抗/>
Figure BDA00040170319800044017
吉妥昔单抗、glembatumumab vedotin、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan，/>
Figure BDA00040170319800044018
)、伊戈伏单抗/>
Figure BDA00040170319800044019
英妥木单抗、奥英妥珠单抗、伊匹木单抗、伊妥木单抗、拉贝珠单抗/>
Figure BDA00040170319800044020
来沙木单抗、林妥珠单抗、卢卡木单抗、鲁昔单抗、马帕木单抗、马妥珠单抗、米拉组单抗、明瑞莫单抗、米妥莫单抗、他那可单抗、埃托-那普妥莫单抗、耐昔妥珠单抗、尼妥珠单抗
Figure BDA00040170319800044021
诺非妥莫单抗锝/>
Figure BDA00040170319800044022
奥法木单抗/>
Figure BDA00040170319800044023
奥拉单抗、莫妥组单抗、奥戈伏单抗/>
Figure BDA00040170319800044024
帕尼单抗
Figure BDA00040170319800044025
pemtumomab/>
Figure BDA00040170319800044026
帕妥珠单抗/>
Figure BDA00040170319800044027
平妥莫单抗、普林木单抗、雷莫芦单抗、雷珠单抗/>
Figure BDA0004017031980004411
利妥木单抗、利妥昔单抗/>
Figure BDA0004017031980004412
Figure BDA0004017031980004413
罗妥木单抗、沙妥莫单抗喷地肽、西罗珠单抗、司妥昔单抗、松妥组单抗、tacatuzumab tetraxetan/>
Figure BDA0004017031980004414
帕他莫单抗、替妥莫单抗、TGN1412、替西木单抗(曲美木单抗)、替加组单抗、TNX-650、托西莫单抗/>
Figure BDA0004017031980004415
曲妥珠单抗/>
Figure BDA0004017031980004416
曲美木单抗、西莫白介素单抗、维妥组单抗、伏洛昔单抗、伏妥莫单抗/>
Figure BDA0004017031980004417
扎芦木单抗/>
Figure BDA0004017031980004418
和扎木单抗
Figure BDA0004017031980004419
在其他实施方案中，多特异性或多功能性分子与病毒癌症治疗性药剂组合施用。示例性病毒癌症治疗性药剂包括但不限于牛痘病毒(vvDD-CDSR)、表达癌胚抗原的麻疹病毒、重组牛痘病毒(TK-缺失加GM-CSF)、塞内卡谷病毒-001、新城疫病毒、柯萨奇病毒A21、GL-ONC1、EBNA1 C-末端/LMP2嵌合蛋白的重组修饰的牛痘安卡拉疫苗、表达癌胚抗原的麻疹病毒、G207溶瘤病毒、表达p53的修饰的牛痘病毒安卡拉疫苗、OncoVEX GM-CSF修饰的1型单纯疱疹病毒、禽痘病毒疫苗载体、重组牛痘前列腺特异性抗原疫苗、人乳头瘤病毒16/18L1病毒样颗粒/AS04疫苗、MVA-EBNA1/LMP2注射疫苗、四价HPV疫苗、四价人乳头瘤病毒(6、11、16、18型)重组疫苗
Figure BDA00040170319800044110
重组禽痘-CEA(6D)/TRICOM疫苗；重组牛痘-CEA(6D)-TRICOM疫苗、重组修饰的牛痘安卡拉-5T4疫苗、重组禽痘-TRICOM疫苗、溶瘤性疱疹病毒NV1020、HPV L1 VLP疫苗V504、二价人乳头瘤病毒(16型和18型)疫苗/>
Figure BDA00040170319800044111
单纯疱疹病毒HF10、Ad5CMV-p53基因、重组牛痘DF3/MUC1疫苗、重组牛痘-MUC-1疫苗、重组牛痘-TRICOM疫苗、ALVAC MART-1疫苗、表达人前脑啡肽原(NP2)的复制缺陷型I型单纯疱疹病毒(HSV-1)载体、野生型呼肠孤病毒、呼肠孤病毒3型Dearing/>
Figure BDA00040170319800044112
溶瘤性病毒HSV1716、编码爱泼斯坦-巴尔病毒靶抗原的重组修饰的牛痘安卡拉(MVA)基疫苗、重组禽痘前列腺特异性抗原疫苗、重组牛痘前列腺特异性抗原疫苗、重组牛痘-B7.1疫苗、rAd-p53基因、Ad5-delta24RGD、HPV疫苗580299、JX-594(胸苷激酶缺失的牛痘病毒加GM-CSF)、HPV-16/18L1/AS04、禽痘病毒疫苗载体，牛痘-酪氨酸酶疫苗、MEDI-517HPV-16/18VLP AS04疫苗、含有单纯疱疹病毒TK99UN的胸苷激酶的腺病毒载体、HspE7、FP253/氟达拉滨、ALVAC(2)黑色素瘤多抗原治疗性疫苗、ALVAC-hB7.1、金丝雀痘-hIL-12黑色素瘤疫苗、Ad-REIC/Dkk-3、rAd-IFN SCH 721015、TIL-Ad-INFg、Ad-ISF35和柯萨奇病毒A21(CVA21，/>
Figure BDA0004017031980004421
)。
在其他实施方案中，多特异性或多功能性分子与纳米药物组合施用。示例性癌症纳米药物包括但不限于
Figure BDA0004017031980004422
(白蛋白结合型紫杉醇纳米颗粒)、CRLX101(与线性环糊精基聚合物缀合的CPT)、CRLX288(将多西他赛与可生物降解的聚合物聚(乳酸-co-乙醇酸)缀合)、阿糖胞苷脂质体(脂质体Ara-C，DEPOCYTTM)、道诺霉素脂质体
Figure BDA0004017031980004423
多柔比星脂质体/>
Figure BDA0004017031980004424
包封的道诺霉素柠檬酸盐脂质体/>
Figure BDA0004017031980004425
和PEG抗-VEGF适体/>
Figure BDA0004017031980004426
在一些实施方案中，多特异性或多功能性分子与紫杉醇或紫杉醇制剂(例如，
Figure BDA0004017031980004427
蛋白结合型紫杉醇(例如，/>
Figure BDA0004017031980004428
))组合施用。示例性紫杉醇制剂包括但不限于白蛋白结合型紫杉醇纳米颗粒(/>
Figure BDA0004017031980004429
由Abraxis Bioscience销售)、二十二碳六烯酸结合型紫杉醇(DHA-紫杉醇，Taxoprexin，由Protarga销售)、聚谷氨酸结合型紫杉醇(PG-紫杉醇，聚谷氨酸紫杉醇，CT-2103，XYOTAX，由Cell Therapeutic销售)、肿瘤活化的前药(TAP)、ANG105(与三个紫杉醇分子结合的血管肽-2，由ImmunoGen销售)、紫杉醇-EC-1(与erbB2识别肽EC-1结合的紫杉醇；参见Li等,Biopolymers(2007)87:225-230)，以及葡萄糖缀合的紫杉醇(例如，2’-紫杉醇甲基2-吡喃葡萄糖基琥珀酸酯，参见Liu等,Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters(2007)17:617-620)。
用于治疗癌症的示例性RNAi和反义RNA药剂包括但不限于CALAA-01、siG12DLODER(Local Drug EluteR)和ALN-VSP02。
其他癌症治疗性药剂包括但不限于细胞因子(例如，阿地白介素(IL-2，白介素-2，
Figure BDA0004017031980004431
)、α干扰素(IFN-α，干扰素α，/>
Figure BDA0004017031980004432
A(干扰素α-2b)，/>
Figure BDA0004017031980004433
(干扰素α-2a))、依泊汀α/>
Figure BDA0004017031980004434
非格司亭(G-CSF，粒细胞集落刺激因子，
Figure BDA0004017031980004435
)、GM-CSF(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子，沙格司亭，LEUKINETM)、IL-11(白介素-11，奥普瑞白介素，/>
Figure BDA0004017031980004436
)、干扰素α-2b(PEG缀合物)(PEG干扰素，PEG-INTRONTM)和培非格司亭(NEULASTATM))、激素疗法药剂(例如，氨鲁米特/>
Figure BDA0004017031980004437
阿那曲唑/>
Figure BDA0004017031980004438
比卡鲁胺/>
Figure BDA0004017031980004439
依西美坦/>
Figure BDA00040170319800044310
氟羟甲睾酮/>
Figure BDA00040170319800044311
氟他胺/>
Figure BDA00040170319800044312
氟维司群/>
Figure BDA00040170319800044313
戈舍瑞林/>
Figure BDA00040170319800044314
来曲唑/>
Figure BDA00040170319800044315
亮丙瑞林(ELIGARDTM，/>
Figure BDA00040170319800044316
LUPRON/>
Figure BDA00040170319800044317
VIADURTM)、甲地孕酮(醋酸甲地孕酮，/>
Figure BDA00040170319800044318
)、尼鲁米特
Figure BDA00040170319800044319
Figure BDA00040170319800044320
奥曲肽(醋酸奥曲肽，/>
Figure BDA00040170319800044321
Figure BDA00040170319800044322
)、雷洛昔芬/>
Figure BDA00040170319800044323
罗米司亭/>
Figure BDA00040170319800044324
他莫昔芬/>
Figure BDA00040170319800044325
和托瑞米芬/>
Figure BDA00040170319800044326
)、磷脂酶A2抑制剂(例如，阿那格雷/>
Figure BDA00040170319800044327
生物反应调节剂(例如，BCG/>
Figure BDA00040170319800044328
和达依泊汀α/>
Figure BDA00040170319800044329
)、靶向疗法药剂(例如，硼替佐米/>
Figure BDA00040170319800044330
达沙替尼(SPRYCELTM)、denileukin diftitox/>
Figure BDA00040170319800044331
埃罗替尼/>
Figure BDA00040170319800044332
依维莫司/>
Figure BDA00040170319800044333
吉非替尼/>
Figure BDA00040170319800044334
甲磺酸伊马替尼(STI-571，GLEEVECTM)、拉帕替尼/>
Figure BDA00040170319800044335
索拉菲尼/>
Figure BDA00040170319800044336
和SU11248(舒尼替尼，
Figure BDA00040170319800044337
))、免疫调节和抗血管生成药剂(例如，CC-5013(来那度胺，/>
Figure BDA00040170319800044338
)和沙利度胺/>
Figure BDA00040170319800044339
)、糖皮质激素(例如，可的松(氢化可的松，氢化可的松磷酸钠，氢化可的松琥珀酸钠，/>
Figure BDA00040170319800044340
HYDROCORT/>
Figure BDA00040170319800044341
氢化可的松磷酸盐/>
Figure BDA00040170319800044342
)、Decadron(地塞米松，醋酸地塞米松，地塞米松磷酸钠，/>
Figure BDA00040170319800044343
Figure BDA00040170319800044344
)、甲基泼尼松龙(6-甲基泼尼松龙，醋酸甲基泼尼松龙，甲基泼尼松龙琥珀酸钠，/>
Figure BDA0004017031980004441
Figure BDA0004017031980004442
)、泼尼松龙/>
Figure BDA0004017031980004443
Figure BDA0004017031980004444
和强的松/>
Figure BDA0004017031980004445
Figure BDA0004017031980004446
)，以及双膦酸盐类(例如，帕米膦酸盐/>
Figure BDA0004017031980004447
和唑来膦酸/>
Figure BDA0004017031980004448
)。
在一些实施方案中，多特异性或多功能性分子与酪氨酸激酶抑制剂(例如，受体酪氨酸激酶(RTK)抑制剂)组合使用。示例性酪氨酸激酶抑制剂包括但不限于表皮生长因子(EGF)途径抑制剂(例如，表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂)、血管内皮生长因子(VEGF)途径抑制剂(例如，针对VEGF的抗体、VEGF捕获剂、血管内皮生长因子受体(VEGFR)抑制剂(例如，VEGFR-1抑制剂、VEGFR-2抑制剂、VEGFR-3抑制剂))、血小板衍生生长因子(PDGF)途径抑制剂(例如，血小板衍生生长因子受体(PDGFR)抑制剂(例如，PDGFR-β抑制剂))、RAF-1抑制剂、KIT抑制剂和RET抑制剂。在一些实施方案中，与AHCM药剂组合使用的抗癌药剂选自：阿昔替尼(AG013736)、博舒替尼(SKI-606)、西地尼布(RECENTINTM，AZD2171)、达沙替尼(
Figure BDA0004017031980004449
BMS-354825)、厄洛替尼/>
Figure BDA00040170319800044410
吉非替尼/>
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伊马替尼(/>
Figure BDA00040170319800044412
CGP57148B，STI-571)、拉帕替尼/>
Figure BDA00040170319800044413
来他替尼(CEP-701)、来那替尼(HKI-272)、尼洛替尼/>
Figure BDA00040170319800044427
semaxanib(塞马西尼，SU5416)、舒尼替尼(/>
Figure BDA00040170319800044414
SU11248)、toceranib/>
Figure BDA00040170319800044415
凡德他尼(/>
Figure BDA00040170319800044416
ZD6474)、瓦他拉尼(PTK787，PTK/ZK)、曲妥珠单抗/>
Figure BDA00040170319800044417
贝伐珠单抗/>
Figure BDA00040170319800044418
利妥昔单抗/>
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西妥昔单抗/>
Figure BDA00040170319800044420
帕尼单抗/>
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雷珠单抗/>
Figure BDA00040170319800044422
尼洛替尼/>
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索拉非尼/>
Figure BDA00040170319800044424
阿仑单抗/>
Figure BDA00040170319800044425
吉妥珠单抗/>
Figure BDA00040170319800044426
ENMD-2076、PCI-32765、AC220、多韦替尼乳酸盐(TKI258，CHIR-258)、BIBW 2992(TOVOKTM)、SGX523、PF-04217903、PF-02341066、PF-299804、BMS-777607、ABT-869、MP470、BIBF 1120
Figure BDA0004017031980004451
AP24534、JNJ-26483327、MGCD265、DCC-2036、BMS-690154、CEP-11981、替沃扎尼(AV-951)、OSI-930、MM-121、XL-184、XL-647、XL228、AEE788、AG-490、AST-6、BMS-599626、CUDC-101、PD153035、培利替尼(EKB-569)、凡德他尼(zactima)、WZ3146、WZ4002、WZ8040、ABT-869(利尼伐尼)、AEE788、AP24534(普纳替尼)、AV-951(替沃扎尼)、阿昔替尼、BAY 73-4506(瑞戈非尼)、丙氨酸布立尼布(BMS-582664)、布立尼布(BMS-540215)、西地尼布(AZD2171)、CHIR-258(多韦替尼)、CP 673451、CYC116、E7080、Ki8751、马赛替尼(AB1010)、MGCD-265、二磷酸莫替沙尼(AMG-706)、MP-470、OSI-930、盐酸帕唑帕尼、PD173074、对甲苯磺酸索拉非尼(Bay 43-9006)、SU 5402、TSU-68(SU6668)、瓦他拉尼、XL880(GSK1363089，EXEL-2880)。选定的酪氨酸激酶抑制剂选自舒尼替尼、埃罗替尼、吉非替尼或索拉非尼。在一个实施方案中，酪氨酸激酶抑制剂是舒尼替尼。
在一个实施方案中，多特异性或多功能性分子与以下中的一种或多种组合施用：抗血管生成药剂，或血管靶向药剂或血管破坏药剂。示例性抗血管生成药剂包括但不限于VEGF抑制剂(例如，抗VEGF抗体(例如，贝伐单抗)；VEGF受体抑制剂(例如，伊曲康唑)；细胞增殖和/或内皮细胞迁移的抑制剂(例如，羟酰胺基三唑、TNP-470)；血管生成刺激物的抑制剂(例如，苏拉明)等。血管靶向药剂(VTA)或血管破坏药剂(VDA)旨在损伤癌瘤的脉管系统(血管)，从而导致中枢性坏死(例如，Thorpe,P.E.(2004)Clin.Cancer Res.第10卷:415-427中综述的)。VTA可以是小分子。示例性小分子VTA包括但不限于微管去稳定药物(例如，康普瑞汀A-4磷酸二钠(CA4P)、ZD6126、AVE8062、Oxi 4503)；以及vadimezan(ASA404)。
免疫检查点抑制剂
在其他实施方案中，本文所述的方法包括免疫检查点抑制剂与多特异性或多功能性分子组合使用。该方法可以用于体内治疗性方案。
在实施方案中，免疫检查点抑制剂抑制检查点分子。示例性检查点分子包括但不限于CTLA4、PD1、PD-L1、PD-L2、TIM3、LAG3、CD160、2B4、CD80、CD86、B7-H3(CD276)、B7-H4(VTCN1)、HVEM(TNFRSF14或CD270)、BTLA、KIR、I类MHC、II类MHC、GAL9、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1和A2aR。参见例如，Pardoll.Nat.Rev.Cancer12.4(2012):252-64，通过引用并入本文。
在实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-1抑制剂，例如，抗PD-1抗体，例如纳武单抗、派姆单抗或匹地利珠单抗。纳武单抗(也称为MDX-1106、MDX-1106-04、ONO-4538或BMS-936558)是特异性抑制PD1的完全人IgG4单克隆抗体。参见例如，US 8,008,449和WO2006/121168。派姆单抗(也称为Lambrolizumab、MK-3475、MK03475、SCH-900475或
Figure BDA0004017031980004461
Merck)是结合至PD-1的人源化IgG4单克隆抗体。参见例如，Hamid,O.等,(2013)NewEngland Journal of Medicine 369(2):134-44、US 8,354,509和WO2009/114335。匹地利珠单抗(也称为CT-011或Cure Tech)是结合至PD1的人源化IgG1k单克隆抗体。参见例如，WO2009/101611。在一个实施方案中，PD-1抑制剂是抗体分子，具有与其基本上相同或相似的序列，例如，与纳武单抗、派姆单抗或匹地利珠单抗的序列至少85％、90％、95％相同或更高的序列。另外的抗PD1抗体(例如，AMP514(Amplimmune))描述于例如US8,609,089、US2010028330和/或US 20120114649中。
在一些实施方案中，PD-1抑制剂是免疫粘附素，例如，包含与恒定区(例如，免疫球蛋白的Fc区)融合的PD-1配体(例如，PD-L1或PD-L2)胞外/PD-1结合部分的免疫粘附素。在实施方案中，PD-1抑制剂是AMP-224(B7-DCIg，例如，描述于WO2011/066342和WO2010/027827中)，其是阻断B7-H1与PD-1之间相互作用的PD-L2 Fc融合可溶性受体。
在实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L1抑制剂，例如，抗体分子。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是YW243.55.S70、MPDL3280A、MEDI-4736、MSB-0010718C或MDX-1105。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是MSB0010718C(也称为A09-246-2；Merck serono)，其是结合至PD-L1的单克隆抗体。示例性人源化抗PD-L1抗体描述于例如WO2013/079174中。在一个实施方案中，PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体，例如，YW243.55.S70。YW243.55.S70抗体描述于例如WO2010/077634中。在一个实施方案中，PD-L1抑制剂是MDX-1105(也称为BMS-936559)，其描述于例如WO2007/005874中。在一个实施方案中，PD-L1抑制剂是MDPL3280A(Genentech/Roche)，其是针对PD-L1的人Fc-优化的IgG1单克隆抗体。参见例如，美国专利第7,943,743号和美国公布第20120039906号。在一个实施方案中，PD-L1抑制剂是抗体分子，具有与其基本上相同或相似的序列，例如，与YW243.55.S70、MPDL3280A、MEDI-4736、MSB-0010718C或MDX-1105的序列至少85％、90％、95％相同或更高的序列。
在实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L2抑制剂，例如，AMP-224(其是阻断PD1和B7-H1之间相互作用的PD-L2 Fc融合可溶性受体)。参见例如，WO2010/027827和WO2011/066342。
在一个实施方案中，免疫检查点抑制剂是LAG-3抑制剂，例如，抗LAG-3抗体分子。在实施方案中，抗LAG-3抗体是BMS-986016(也称为BMS986016；Bristol-Myers Squibb)。BMS-986016和其他人源化抗LAG-3抗体描述于例如US 2011/0150892、WO2010/019570和WO2014/008218中。
在实施方案中，免疫检查点抑制剂是TIM-3抑制剂，例如，抗TIM3抗体分子，例如，美国专利第8,552,156号、WO2011/155607、EP 2581113和美国公布第2014/044728号中描述的。
在实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4抑制剂，例如，抗CTLA-4抗体分子。示例性抗CTLA4抗体包括曲美木单抗(来自Pfizer的IgG2单克隆抗体，以前称为替西木单抗、CP-675、206)；和伊匹木单抗(也称为MDX-010，CAS号477202-00-9)。其他示例性抗CTLA-4抗体描述于例如美国专利第5,811,097号中。
援引并入
本文提及的所有出版物和专利在此通过引用以其整体并入，如同每个单独的出版物或专利被明确且单独地表明通过引用并入。
实施例
实施例1：免疫接种亚美尼亚仓鼠以生成抗NKp30抗体
简言之，用完全弗氏佐剂中的人NKp30蛋白胞外结构域对亚美尼亚仓鼠进行免疫，并在第14天和第28天用不完全弗氏佐剂(IFA)中的NKp30强化两次。在第56天，再给予一次IFA进行强化，三天后收获动物。收集脾，并与P3X63Ag8.653鼠骨髓瘤细胞系融合。将125ul的0.9x10^5个细胞/孔置于96孔板中，并在第7天、第11天以及之后根据需要，在用于选择的HAT或HT不存在或存在下，供应125μl的I-20+2ME+HAT(IMDM(4g/L葡萄糖)(补充有20％胎牛血清、4mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠、50U青霉素、50μg链霉素和50μM 2-ME)以及杂交瘤克隆因子(最终1％)。融合后大致2周(细胞约50％融汇)，收集上清液并测定结合。
实施例2：NKp30 mAb的杂交瘤筛选
在筛选前18小时用BG160(hNKp30细胞抗原)转染Expi293细胞。筛选当天，将转染的细胞稀释至0.05x10^6/mL，并加入抗亚美尼亚仓鼠Fc Alexa Fluor 488至终浓度为0.4ug/mL。将50uL(2,500个细胞)该混合物加入至384孔板的每个孔中。使用相同密度的未转染293细胞与次级细胞作为阴性对照。将5uL杂交瘤上清液加入至细胞混合物中，并将板在37℃下孵育1小时。然后该板在镜面球(Mirrorball)上进行成像。鉴定阳性克隆，并通过连续稀释亚克隆，以获得克隆选择的杂交瘤。使用相同方案再次确认之后，收获杂交瘤细胞，并回收相应的重链和轻链序列。将DNA亚克隆至pcDNA3.4中，随后表达相应的抗体并进一步验证。
实施例3：NKp30抗体与NK92细胞的结合
用含有0.5％ BSA和0.1％叠氮化钠的PBS(染色缓冲液)洗涤NK-92细胞，并以200,000个细胞/孔加入至96孔V形板中。将仓鼠NKp30抗体加入至2.0倍连续稀释液的细胞中，并在室温下孵育1小时。用染色缓冲液洗涤板两次。以1∶100稀释液(1.4mg/ml储液)加入与AF647缀合的针对仓鼠Fc的第二抗体(Jackson，127-605-160)，并与细胞在4℃下孵育30分钟，随后用染色缓冲液洗涤。随后在室温下用4％多聚甲醛将细胞固定10分钟。在CytoFLEXLS(Beckman Coulter)上读取板。数据计算为百分比-AF747阳性群体(图9)。
实施例4：使用NK92细胞系测量NKp30抗体活性的生物测定
在PBS中将NKp30抗体连续稀释三倍，并在平底96孔板中在2-8℃下孵育过夜。在PBS中将板洗涤两次，并将40,000个NK-92细胞加入含有IL-2的生长培养基中。将板在37℃、5％ CO2的潮湿培养箱中孵育16-24小时，然后收集上清液。按照MSD测定说明来测量上清液中的IFNγ水平(图10)。从与仓鼠同种型IgG一起孵育的细胞中收集的上清液被用作阴性对照，并且来自与NKp30单克隆抗体(R&D，克隆210847)一起孵育的细胞的上清液用作阳性对照。使用仓鼠抗NKp30 mAB生成数据。
实施例5：测量人源化JOVI.1变体与人TRBC1结合的ELISA
进行ELISA测定，以测定人源化JOVI.1变体与人TRBC1的结合。用100uL的1ug/mL每种JOVI.1变体分别包被微孔板，并用2％ BSA封闭。将hTRBC1(BIM0444)的连续稀释液(7个点，5倍稀释液，100nM至6.4pM)以100uL/孔转移至包被且封闭的板，并在室温下孵育1小时。将板洗涤三次，并与抗his标签Fc辣根过氧化物酶缀合物孵育30min，随后加入TMB(HRP的底物)。将板显影5min，用1M HCL终止并在450nm的波长下读数。ELISA数据显示出抗TRBC1 mAb(二价)与人TRBC1的直接结合(图7)。
实施例6：测量人源化JOVI.1变体与人TRBC1结合的测定
进行Octet测定，以检查JOVI.1人源化变体的结合。蛋白质A生物传感器在25℃下用PBS平衡。用20ug/mL的hTRBC1(BIM0444)PBS溶液装载传感器至应答为1.5nM，随后加入JOVI1.1 fab(BIM0446和BIM0460)的连续稀释液(7个点，2倍稀释液，50nM至0.78nM)。进一步的Octet参数包括：
基线：PBS中30秒
装载：20秒至应答为1.5nm
基线：60秒
缔合：60秒
解离：PBS中60秒
Octet数据显示出抗TRBC1 Fab与hTRBC1的结合(图8)。hTRBC1被捕获在传感器尖端上并浸入含有不同浓度的单价Fab溶液中。
实施例7：人源化抗NKp30抗体的生成和表征
选择一系列仓鼠抗NKp30抗体。这些抗体显示出结合至人NKp30和食蟹猴NKp30，并诱导NK-90细胞产生IFNγ(数据未显示)。表25中公开了示例性仓鼠抗NKp30抗体15E1、9G1、15H6、9D9、3A12和12D10的VH和VL序列。表25中也公开了基于15E1、9G1和15H6的示例性人源化抗NKp30抗体的VH和VL序列。表21A或表21B以及表22中公开了这些抗体的Kabat CDR。
选择基于15E1的两种人源化构建体。第一种构建体BJM0407是包含重链可变区和λ轻链可变区的Fab，该重链可变区包含SEQ IDNO:7302的氨基酸序列，该λ轻链可变区包含SEQ ID NO:7305的氨基酸序列。它相应的scFv构建体BJM0859包含SEQ ID NO:7310的氨基酸序列。第二种构建体BJM0411是包含重链可变区和κ轻链可变区的Fab，该重链可变区包含SEQ ID NO:7302的氨基酸序列，该κ轻链可变区包含SEQ ID NO:7309的氨基酸序列。它相应的scFv构建体BJM0860包含SEQ ID NO:7311的氨基酸序列。BJM0407和BJM0411显示出可比较的生物物理学特征，例如，与NKp30的结合亲和力和热稳定性。scFv构建体BJM0859和BJM0860也显示出可比较的生物物理学特性。
实施例8：人源化抗TRBC1抗体的生成和表征
鼠抗TRBC1抗体JOVI.1被人源化，导致许多人源化变体。表7中公开了示例性人源化变体的VH和VL序列。选择一种人源化变体BIM0460，其包含VH和VL，该VH包含SEQ ID NO:253的氨基酸序列，该VL包含SEQ ID NO:258的氨基酸序列。通过种系化进一步修饰BIM0460，导致许多种系化变体。表7中也公开了示例性种系化变体的VH和VL序列。选择一种种系化变体BJM0578，其包含VH和VL，该VH包含SEQ ID NO:7351的氨基酸序列，该VL包含SEQID NO:258的氨基酸序列。表3和表4中公开了这些人源化和种系化变体的Kabat CDR。BIM0460显示出以17nM的亲和力结合至人TRBC1。BJM0578显示出以110nM的亲和力结合至人TRBC1。
实施例9：细胞因子分泌和T细胞活化分析。
本实施例探测了ADCC-禁用形式对于结合至TRBC1和NKp30的抗体是否是优选的。板包被时或Fc接合时的溶液中的JOVI.1接合诱导T细胞增殖和活化(数据未显示)。这可能是治疗T细胞淋巴瘤患者(例如，外周T细胞淋巴瘤(PTCL)患者)的义务。
如图11A-11E中所示生成5种构建体。BJM1052是包含抗TRBC1Fab(基于BIM0460)和抗NKp30 scFv(基于BJM0407)的双特异性抗体(图11A)。BJM1052包含SEQ ID NO:7379(抗TRBC1 HC)、SEQ ID NO:7380(抗TRBC1 LC)和SEQ ID NO:7383(抗NKp30 scFv-Fc)的氨基酸序列。BJM1052在其Fc区中包含N297A突变。BJM1042是包含抗TRBC1 Fab(基于BJM0578)和抗NKp30 scFv(基于BJM0407)的双特异性抗体(图11B)。BJM1042包含SEQ ID NO:7382(抗TRBC1HC)、SEQ ID NO:7380(抗TRBC1 LC)和SEQ ID NO:7383(抗NKp30scFv-Fc)的氨基酸序列。BJM1042在其Fc区中包含N297A突变。BJM0889是包含抗TRBC1 Fab(基于BIM0460)的单臂抗体(图11C)。BJM1083是包含抗TRBC1 Fab(基于BJM0578)的单臂抗体(图11D)。BJM0889和BJM1083在Fc区中都包含N297A突变。BJM1083包含具有SEQ ID NO:8307序列的轻链；以及具有SEQ ID NO:8309序列的重链。BJM1053与BJM1052相似，除了BJM1053具有ADCC启用Fc区。
如图12A和12B中所示，Fc启用抗体BJM1053和hIgG1与表达Fcγ受体的THP1细胞结合，而N297A突变抗体(BJM1052、BJM1042和BJM0889)未显示出显著结合。
为了测试具有N297A突变(Fc禁用)的抗体是否更安全，将抗TRBC1/NKp30抗体和对照分子以100、10或1nM加入至PBMC溶液中，并在第1天和第5天测量T细胞增殖。Fc禁用抗体BJM1052和BJM1042显示出比Fc启用抗体BJM1053更少的淋巴细胞成簇(数据未显示)。在第5天，如增殖T细胞的百分比(图13A和13B)以及CD69-CD25+T细胞的百分比(图13C和13D)所证明的，用BJM1052和BJM1042治疗的PBMC中的T细胞活化显著降低。
实施例10：与TRBC1和NKp30的体外结合
如图14A-14D中所示生成各种构建体。图14A中所示的是包含抗TRBC1 Fab(基于BIM0460或BJM0578)和抗NKp30 scFv(基于BJM0407或BJM0411)的双特异性抗体。双特异性抗体可在其Fc区中具有或不具有N297A突变。图14B中列出的分子具有图14A中所示的构型。
图14C示出了包含抗TRBC1 Fab(基于BIM0460或BJM0578)和抗NKp30 Fab(基于BJM0407或BJM0411)的双特异性抗体。双特异性抗体可在其Fc区中具有或不具有N297A突变。图14D中列出的分子具有图14C中所示的构型。
所有测试的抗TRBC1/NKp30抗体表现出与NK细胞系KHYG-1(图15A和15D)以及TRBC1+Jurkat细胞(图15B和15D)结合。
实施例11：TRBC1+细胞系的体外细胞溶解
在本实施例中，测试了抗TRBC1/NKp30抗体在NK细胞存在下诱导杀伤表达TRBC1的细胞的能力。图11A-11E中示出了本实施例中测试的抗体。
在第一项研究中，将NK-92效应细胞与CFSE标记的靶细胞以5∶1比率培养4h。使用流式细胞术和对死亡靶细胞的门控来测量靶细胞裂解。在NK-92效应细胞存在下，抗TRBC1/NKp30双特异性抗体BJM1052和BJM1042诱导杀伤TRBC1+Jurkat细胞(图16A)和H9细胞(图16B)，但不杀伤TRBC2+HPB-ALL细胞(图16C)。
在第二项研究中，将原代NK细胞与CFSE标记的靶细胞以5∶1比率培养4h。对于H9细胞，使用10∶1的E∶T比率。使用流式细胞术来测量靶细胞裂解。在原代NK细胞存在下，抗TRBC1/NKp30双特异性抗体BJM1052和BJM1042诱导杀伤TRBC1+Jurkat细胞(图17A)和H9细胞(图17B)，但不杀伤TRBC2+HPB-ALL细胞(图17C)。
在第三项研究中，NK细胞和靶细胞在抗TRBC1/NKp30抗体BJM1052和BJM1042存在下共培养4小时，收集上清液，并使用MSD测量细胞因子水平。如CD69+CD107a+NK细胞的百分比(图18A)、IFNγ分泌(图18B)和TNFα分泌(图18C)所证明的，靶细胞裂解与NK细胞活化相关。
下一项研究检查了在靶细胞不存在的情况下，抗TRBC1/NKp30抗体BJM1052和BJM1042是否活化NK细胞。在靶细胞不存在的情况下，将原代NK细胞与50nM抗体孵育4h，然后收集上清液，以测量IFNγ和TNFα水平。如图19A和19B中所示，抗TRBC1/NKp30抗体介导的NK细胞活化需要NK细胞和靶细胞都存在。
最后，抗TRBC1/NKp30抗体BJM1052和BJM1042在靶细胞存在下不诱导NK细胞死亡(图20)。
实施例12：患者来源的TRBC1+PDX的选择性体外细胞溶解
T细胞淋巴瘤的常见亚型包括：外周T细胞淋巴瘤，非特指型(PTCL-NOS)；间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)；血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)；以及皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)。T细胞淋巴瘤的不常见亚型包括：成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)；T细胞成淋巴细胞性淋巴瘤；肝脾γ-δT细胞淋巴瘤；肠病型T细胞淋巴瘤；鼻NK/T细胞淋巴瘤；治疗相关的T细胞淋巴瘤。在分离自健康供体的PBMC和分离自PTCL患者的PBMC中观察到相似的TRBC1频率和表达(数据未显示)。
两个患者来源的异种移植物(PDX)样品被测试为TRBC1阳性：PDX3来源于急性成淋巴细胞性白血病(T-ALL)患者，PDX6来源于原发性皮肤CD30+T细胞淋巴增生性障碍(CTCL)患者。
图21A和21B中所示的抗体用于功能性杀伤测定。BJM0145是单臂抗TRBC1抗体。BJM0773是包含抗TRBC1 Fab和抗NKp30 scFv的双特异性抗体。在BJM0145或BJM0773(0.01-10nM)存在下，PDX样品用CFSE标记，以5∶1的E∶T比率与原代NK细胞或KHYG1细胞培养5小时。使用以下运算来测量特异性杀伤：
治疗的死亡％(PDX+NK)-死亡PDX％
100％(最大杀伤)-死亡PDX％
如图22A-22D中所示，抗TRBC1/NKp30抗体BJM0773有效地杀伤TRBC1阳性的PDX3和PDX6。单臂抗TRBC1抗体BJM0145在原代NK细胞存在下由于ADCC而表现出弱杀伤(图22A和22C)，但在KHYG1细胞存在下不表现出弱杀伤，KHYG1细胞是CD16缺陷型NK细胞(图22B和22D)。单臂抗TRBC1抗体或双特异性抗TRBC1/NKp30抗体不杀伤TRBC1阴性的PDX(数据未显示)。
实施例13：使用来自PTCL患者的NK细胞对TRBC1+Jurkat细胞的体外细胞溶解
本实施例检查了在分离自PTCL患者的NK细胞存在下，抗TRBC1/NKp30抗体是否可以介导TRBC1+靶细胞的杀伤。
NK细胞和NKp30+NK细胞以正常比例存在于PTCL患者PBMC中(数据未显示)。通过阴性选择从PTCL患者和健康供体PBMC中富集NK细胞，然后与200U/ml IL-2孵育过夜。第二天，在10nM抗体存在下，将NK细胞与Jurkat细胞共培养4h。
如图23中所示，在抗TRBC1/NKp30抗体BJM1042存在下，PTCL患者来源的NK细胞杀伤TRBC1+Jurkat细胞。如CD69+CD107+NK细胞的百分比所证明的，NK细胞在杀伤测定期间被活化(图24)。双特异性抗TRBC1/NKp30抗体BJM1052和BJM1042比单臂抗TRBC1抗体FJM0889诱导更高水平的IFNγ(图25A)和TNFα(图25B)。
实施例14：与NKp30天然配体B7-H6的竞争
NKp30的天然配体包括B7-H6、pp65、BAT3和BAG6。B7-H6存在于许多癌细胞系和原发性癌细胞(例如，T和B细胞淋巴瘤、白血病和黑色素瘤)上。膜结合的B7-H6可以介导原代人NK细胞的活化和靶细胞的杀伤。另一方面，可溶性B7-H6存在于血清或肿瘤微环境中，并且可以抑制抗NKp30 mAb的结合，下调NKp30表达，减弱NKp30介导的活化和靶细胞杀伤。
本实施例检查了双特异性抗TRBC1/NKp30抗体是否与B7-H6竞争结合至NKp30。
如图26A和26B中所示，双特异性抗TRBC1/NKp30抗体BJM1042比B7-H6更强地结合至NKp30。在竞争测定中，将B7H6(4μg/ml，约143nM)和不同浓度的抗体(BJM1042、抗NKp30或抗NKp46)同时加入至NKp30包被的ELISA板。如图26C中所示，B7H6结合信号随着竞争抗体浓度的增加而减弱。BJM1042与B7-H6竞争结合NKp30，达到与阳性对照抗NKp30抗体相似的水平(图26C)。阴性对照抗NKp46抗体不干扰B7-H6与NKp30的结合，这表明在该ELISA中观察到的干扰是特异性的(图26C)。
实施例15：TRBC1细胞系衍生模型的体内杀伤
本实施例检查了抗TRBC1/NKp30抗体BJM1042在体内模型中的抗肿瘤活性。
在第0天，将H9肿瘤细胞皮下植入到NOG-IL-15小鼠中。肿瘤植入后第16天，将体外扩增的原代NK细胞移植到小鼠中。NK植入后两周(肿瘤植入后第31天)，将小鼠按肿瘤体积随机化，并用1mg/kg BJM1042或相关对照进行给药。在暴露于测试品后，每天测量肿瘤体积和体重。
抗TRBC1/NKp30抗体BJM1042在用原代NK细胞移植的NOG IL-15小鼠中诱导皮下H9肿瘤消退(图27B和27C)。在NK细胞不存在的情况下，BJM1042也抑制肿瘤生长，但与NK细胞存在下的治疗相比程度较低(图27B和27C)。用抗TRBC1对照抗体BJM1083观察到相似的结果(图27B和27C)。
实施例16：TRBC1的体内特异性
在本实施例中，在原代NK细胞移植的NOG-IL-15小鼠中使用表达TRBC2的HPB-ALL异种移植物评估了BJM1042的特异性。
在第0天，将5e6个TRBC2+HPB-ALL细胞皮下植入到NOG-IL-15小鼠中。肿瘤植入后第12天，将2e6个体外扩增的原代NK细胞移植到小鼠中。NK植入后第2天(肿瘤植入后第14天)，将小鼠按肿瘤体积随机化，并用0.5mg/kg BJM1042或相关对照进行给药。每周用治疗剂治疗小鼠两次。每周通过卡尺定量肿瘤体积两次。每周测量体重两次。
诱导表达TRBC1的H9和Jurkat肿瘤消退的抗TRBC1/NKp30抗体BJM1042不影响表达TRBC2的HPB-ALL肿瘤的生长(图28B)。该分子在所用剂量下耐受性良好，并且不会导致体重下降或任何其他明显的副作用(数据未显示)。
实施例17：抗TRBC1/NKp30抗体的生物物理学分析
分析抗TRBC1/NKp30抗体BJM1042和BJM1052的生物物理学特性。BJM1042和BJM1052表现出高稳定性和低聚集倾向。BJM1042和BJM1052显示出与FcRn的结合保留以及与Fcγ受体的结合减少或可忽略。
实施例18：示例性抗TRBC1抗体分子的Biacore分析
在本实施例中，分析了一系列示例性抗TRBC1抗体分子对TRBC1的结合亲和力。简言之，通过使用BIAcore T200进行表面等离子体共振(SPR)测量。经由抗人Fc抗体将示例性抗TRBC1抗体构建体中的每一种固定在CM5芯片上至应答为50RU。将人TRBC1(BIM0443)以15.6、31.2、62.5、125、250和500nM的浓度、20μl/min的流速注射到其上固定有每种抗体构建体的表面上。使用1∶1结合模型拟合数据。
如表33中所示，与亲本抗体相比，示例性抗体对人TRCB1显示出保留的亲和力。
表33：Biacore结果
Figure BDA0004017031980004571
实施例19：示例性抗NKp30抗体分子的Biacore分析
在本实施例中，分析了一系列示例性抗NKp30抗体分子对NKp30的结合亲和力。简言之，通过使用BIAcore T200进行表面等离子体共振(SPR)测量。经由抗小鼠Fc抗体将人NKp30(BKM0179)固定在CM5芯片上至应答为50RU。将每种示例性抗体构建体以3.9、7.8、15.6、31.2、62.5和125nM的浓度以及20μl/min的流速注射到其上固定有人NKp30的表面上。使用1∶1结合模型拟合数据。
如表34中所示，与亲本抗体相比，示例性抗体中的大多数对人NKp30显示出保留的亲和力。
表34：Biacore结果
Figure BDA0004017031980004581
实施例20.示例性抗TRBC2抗体的生成
使用基于展示的方法将抗TRBC1抗体工程化，以引入对TRBC2的特异性。通过多个分子进化周期，抗TRBC1抗体被突变，以实现TRBC2结合并失去TRBC1结合。为此，使用随机诱变(1)或修改版Kunkel诱变(2)构建scFv文库。使用标准噬菌体展示(3)和酵母展示技术(4)进行对人TRBC2的文库选择。在选择期间，加入不同浓度的竞争剂未标记的TRBC1，以富集不结合TRBC1的突变体。在选择后采用标准筛选方法(例如ELISA和流式细胞术)来鉴定特异性结合TRBC2的单个克隆。点击测序和突变-活性相关性分析后，使用相同的上述方法构建第二代文库，以改善特异性TRBC2结合，除去可能的CDR脱酰胺位点，并基于最接近的种系比对将CDR人源化。如上重复文库选择和单个克隆筛选，变化之处在于应用更严格的条件来选择具有增强但特异性的TRBC2亲和力的克隆。点击测序后，将scFv基因重新格式化为生物学相关的抗体形式，用于表达、纯化和分类。
Jovi1特异性结合TRBC1，而非TRBC2。通过5次分子进化迭代，Jovi1被突变，以实现TRBC2结合并失去TRBC1结合。为此，使用随机或定点诱变构建总共12个scFv文库。另外，使用定点诱变构建2个scFv文库以除去可能的CDR脱酰胺位点，并基于最接近的种系比对将CDR和框架人源化。对于所有文库，使用标准噬菌体展示(1)和酵母展示技术(2)的组合进行对人TRBC2的选择。在选择期间，加入不同浓度的竞争剂——未标记的TRBC1，以富集不结合TRBC1的突变体。选择后采用标准筛选方法(例如ELISA和流式细胞术)来鉴定特异性结合TRBC2的单个克隆。点击测序后，将一组12个scFv基因重新格式化为生物学相关的抗体形式，用于表达、纯化和分类。最后，在CDRH3处突变最终点击中的一个，以产生具有不同亲和力的一系列新抗体。
实施例21.抗TRBC2突变抗体的结合特异性
在本实施例中，进行表面等离振子共振测定来检查抗TRBC2xNKp30双特异性抗体(双特异性分子)与hTRBC2、hTRBC1或hNKp30蛋白的结合。图31A和31B示出了一些双特异性设计。图31A示出了包含抗TRBC2 Fab和抗NKp30 scFv的双特异性抗体。双特异性抗体可在其Fc区中具有或不具有N297A突变。图31B表示单价TRBC2对照的设计。简言之，经由抗人Fc抗体将2ug/mL的TRBC2xNKp30双特异性分子固定在CM5芯片上至70RU。将人TRBC2或人TRBC1抗原稀释至125nM，然后连续稀释两倍。缔合为300秒，解离为600秒。该测定在1×HBS-EP+缓冲液pH 7.4和25℃下运行。使用评估双特异性分子与NKp30结合的1∶1结合模型拟合数据，经由抗小鼠Fc抗体将2ug/mL的人NKp30固定在CM5芯片上至70RU。将TRBC2xNKp30双特异性分子稀释至50nM，然后连续稀释两倍。缔合为300秒，解离为600秒。该测定在1×HBS-EP+缓冲液pH 7.4和25℃下运行。使用1∶1结合模型拟合数据。
如表35所示，所有TRBC2xNKp30双特异性分子显示出与TRBC2和NKp30的特异性结合。
表35.抗TRBC2xNKp30双特异性分子的显示hTRBC2、hTRBC1或hNKp30蛋白的SPR测定结果。
Figure BDA0004017031980004601
实施例22.TRBC2xNKp30双特异性分子选择性地结合至TRBC2+细胞系，而非TRBC1+细胞
进行基于流式细胞术的测定，以检查抗TRBC2xNKp30与TRBC2+HPB-ALL细胞、TRBC1+Jurkat细胞或NKp30+KHYG-1细胞的结合。所有测试的抗TRBC1/NKp30双特异性分子表现出与TRBC2+HPB-ALL细胞(图32A、表36)以及NK细胞系KHYG-1(图32B和表37)结合，同时显示出针对TRBC1+Jurkat细胞的选择性(图32C)。
表36.结合特征
Figure BDA0004017031980004602
表37.结合特征
Figure BDA0004017031980004611
将每种抗体稀释至200nM，然后连续稀释三倍降至0.003387nM。将抗体与每种细胞系在4℃下孵育1小时。然后将细胞与第二抗体Alexa Fluor 647抗人IgG(JacksonImmunoResearch 109-605-098)以1∶37.5在4℃下孵育1小时。将Zombie UV(BioLegend423107)活力染料以1∶1000加入至细胞中，并在室温下孵育30分钟。在CytoFlex LX流式细胞仪上分析细胞。
实施例23.TRBC2xNKp30双特异性分子选择性杀伤TRBC2+T-NHL细胞系，而非TRBC1+细胞
在本实施例中，测试了抗TRBC2/NKp30突变抗体在NK效应细胞(KHYG-1细胞或原代人NK细胞)存在下诱导杀伤TRBC2+恶性细胞的能力。将KHYG-1效应细胞与CFSE标记的靶HPB-ALL细胞以5∶1比率培养4h。使用流式细胞术和对死亡靶细胞的门控来测量靶细胞裂解。在KHYG-1效应NK细胞存在下，抗TRBC2/NKp30双特异性抗体BKM0311和BKM0312诱导杀伤TRBC2+HPB-ALL细胞(图33A)、HH和HDMAR2细胞(表38)，但不杀伤TRBC1+Jurkat细胞(图33B)。图33A证明了TRBC2xNKp30双特异性分子在体外用KHYG-1NK细胞作为效应物选择性地杀伤TRBC2+HPB-ALL细胞，EC50为09821(BKM0311)和0.2324(BKM0312)。图33B证明了TRBC2xNKp30双特异性分子在体外不杀伤TRBC1+Jurkat细胞。
表38.用KHYG-1细胞作为效应物的TRBC2+细胞的特异性裂解
TRBC2+细胞 EC50(nM)
HPB-ALL 0.081
HH 0.618
HDMAR2 0.064
在另一项研究中，将原代NK细胞与CFSE标记的靶HPB-ALL细胞以5∶1比率培养4h。使用流式细胞术和对死亡靶细胞的门控来测量靶细胞裂解。抗TRBC2/NKp30双特异性抗体BKM0311和BKM0312与原代NK细胞共培养会诱导杀伤TRBC2+HPB-ALL细胞(图33C)，但不杀伤TRBC1+Jurkat细胞(图33D)。图33C证明了TRBC2xNKp30双特异性分子在体外用原代NK细胞作为效应物选择性地杀伤TRBC2+HPB-ALL细胞，BKM0311的EC50为0.3570，BKM0312的EC50为0.4469。图33D证明了TRBC2xNKp30双特异性分子在体外不用原代NK细胞杀伤TRBC1+Jurkat细胞。
实施例24.TRBC2xNKp30双特异性分子在体外活化与TRBC2+细胞共培养的原代NK细胞
在本实施例中，提供了证明TRBC2xNKp30双特异性抗体在TRBC2+细胞存在下体外活化NK细胞的数据。在TRBC2/NKp30双特异性抗体BKM0311和BKM0312存在下，将原代NK细胞与TRBC2+HPB-ALL靶细胞或TRBC1+Jurkat细胞共培养4小时。如CD69+CD107a+NK细胞的百分比所证明的，通过流式细胞术评估NK细胞活化。活化的NK细胞的百分比随TRBC2xNKp30双特异性分子治疗而增加，并且该活化是TRBC2特异性的。然而，没有观察到NK细胞自相残杀(fratricide)(数据未显示)。图34A示出了在与TRBC2+HPB-ALL细胞的共培养物中原代NK细胞活化。BKM0311的EC50测定为0.4397，BKM0312的EC50为0.5176。图34B示出了在与TRBC1+Jurkat细胞的共培养物中缺乏原代NK细胞活化。
实施例25.TRBC2xNKp30双特异性抗体在TRBC1+细胞和原代NK细胞的共培养物中诱导NK活化状态相关细胞因子的分泌
在TRBC2/NKp30双特异性抗体BKM0311和BKM0312存在下，将原代NK细胞与TRBC2+HPB-ALL靶细胞或TRBC1+Jurkat细胞共培养，并孵育4小时。然后收集上清液，并使用MSD测量细胞因子水平。注意到IFNγ(图35A)和TNFα分泌(图35C)随TRBC2xNKp30双特异性分子治疗而增加，并且与NK细胞活化和HPB-ALL靶细胞裂解相关。IFNγ分泌(图35B)和TNFα分泌(图35D)是TRBC2特异性的。在另一项研究中，测试了在靶细胞不存在的情况下，抗TRBC2xNKp30双特异性分子BKM0311和BKM0312活化NK细胞的能力。在靶细胞不存在的情况下，将原代NK细胞与50nM抗体一起孵育4h，然后收集上清液，以测量IFNγ和TNFα水平。抗TRBC2/NKp30抗体介导的NK细胞活化需要NK细胞和靶细胞都存在(数据未显示)，并且抗TRBC2/NKp30双特异性分子BKM0311和BKM0312在靶细胞存在下不诱导NK细胞死亡(数据未显示)。
实施例26.TRBC2xNKp30双特异性抗体特异性靶向杀伤TRBC2+T细胞淋巴瘤-PDX样品
在分离自健康供体和不同亚型的T-NHL患者的PBMC中，观察到了可比较的TRBC2频率和表达(数据未显示)。两个患者来源的异种移植物(PDX)样品被测试为TRBC2阳性：PDX2来源于成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)患者，PDX5来源于肝脾T细胞淋巴瘤(HTCL)患者。来源于成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)患者的TRBC1+PDX3用作阴性对照。
在BKM0311和BKM0312(0.01-100nM)存在下，PDX样品用CFSE标记，以5∶1的E∶H比率与原代NK细胞或KHYG1细胞培养4小时。使用以下运算来测量特异性杀伤：
治疗的死亡％(PDX+NK)-死亡PDX％
100％(最大杀伤)-死亡PDX％
在与CD16缺陷型NK、KHYG-1细胞或原代NK细胞共培养的PDX中，在基于流式细胞术的功能性细胞杀伤测定中测试了TRBC2xNKp30双特异性分子BKM0311和BKM0312。如(图36A和36B)中所示，抗TRBC2xNKp30双特异性分子BKM0311和BKM0312有效且特异性杀伤TRBC2+PDX样品(图36A和36B)，同时显示出针对TRBC1+PDX3样品无活性(图36C)。当使用原代NK细胞代替KHYG-1细胞作为效应物时，注意到BKM0311和BKM0312的相似活性(数据未显示)。单臂抗TRBC2抗体BKM0343和BKM0344不杀伤TRBC2+PDX样品，这表明双特异性分子的NKp30臂的显著作用。
实施例27.在体外使用TRBC1xNKp30或TRBC2xNKp30双特异性抗体从人PBMC中特异性耗尽TRBC1+T细胞与TRBC2+T细胞
在本实施例中，体外测试了双特异性构建体中TRBC1和TRBC2抗体的选择性。健康人供体PBMC来源的T细胞群体含有TRBC1+和TRBC2+区室，而T细胞恶性肿瘤主要是单型的。
已应用了利用人PBMC的体外测定系统，其中在健康供体PBMC中，用10nM抗NKp30xTRBC1双特异性抗体构建体或10nM抗NKp30xTRBC2双特异性抗体构建体治疗96h(第4天)，并利用具有专有TRBC1和TRBC2检测抗体的流式板通过流式细胞术进行评估。图37示出了TRBC2xNKp30特异性地耗尽TRBC2+T细胞群体，同时保留TRBC1+群体，而TRBC1xNKp30特异性耗尽TRBC1+T细胞群体，同时保留TRBC+群体。这些药剂的作用是时间和剂量依赖性的(数据未显示)。
实施例28.在体内使用TRBC1xNKp30或TRBC2xNKp30双特异性抗体从人PBMC中特异性耗尽TRBC1+T细胞与TRBC2+T细胞。
在本实施例中，体内测试了双特异性构建体中TRBC1和TRBC2抗体的选择性。所有动物工作均在CRADL饲养所(Cambridge,MA)进行，并符合IACUC批准的方案。NSG小鼠获自JAX Laboratories，NOG-IL-15小鼠来自Taconic Biosciences。
对于PD分析，在第0天将2千万个hPBMC植入到NOD-scid IL2Rg null(NSG)小鼠中，并在第0天、第3天和第6天用1ug/小鼠的IL-15处理，以保留体内NK细胞功能。然后在第3天和第6天，经由静脉内(iv)途径以1mg/kg或3mg/kg的剂量用抗TRBC1xNKp30或抗TRBC2xNKp30治疗小鼠，并在第7天采集全血。
将肝素化的全血转移至集束管(cluster tube)中，用ACK裂解缓冲液裂解，随后进行20min Fc阻断。用Jovi.1(TRBC1抗体)对TRBC2xNKp30治疗的小鼠血液进行染色，而用BKM0213(TRBC2抗体)对TRBC1xNKp30治疗的小鼠血液进行染色。用PBS洗涤细胞，随后用含有CD56-PE(NK标记物)、CD3-AF700(T细胞标记物)、CD4-BV421(T细胞标记物)、CD8-Percpcy5.5(T细胞标记物)、CD25-PE Dazzle(晚期活化)、CD69-BV605(早期活化)和活/死染色的抗体混合物染色。然后固定细胞，并在CytoFLEX LX上进行流式评估。图38示出了TRBC2xNKp30在体内特异性耗尽TRBC2+T细胞群体，同时保留TRBC1+群体，而TRBC1xNKp30在体内特异性耗尽TRBC1+T细胞的群体，同时保留TRBC2+群体。在脾细胞中注意到相似活性(数据未显示)，并且结果与体外发现的那些相似。另外，在用抗NKp30xTRBC1和抗NKp30xTRBC2治疗的小鼠中，注意到CD56+CD69+CD25+NK细胞的活化增加(30％)(数据未显示)。
实施例29.TRBC2xNKp30双特异性分子在TRBC2+T-NHL细胞系衍生小鼠模型中的体内抗肿瘤活性
T-NHL的人源化模型已用于评估TRBC2xNKp30双特异性分子的抗肿瘤活性。将HPB-ALL肿瘤细胞皮下植入到6-8周龄雌性NOG-IL-15小鼠中。一旦建立了肿瘤负荷，在肿瘤植入后第12天，将体外扩增的原代NK细胞静脉内移植到小鼠中。NK植入后第5天(肿瘤植入后第17天)，将小鼠按肿瘤体积随机化，并以1mg/kg的剂量和每周两次的方案用PBS对照、抗TRBC2xNKp30(BKM0311)抗体、单价抗TRBC2抗体(BKM0343)、抗NKp30(BJM1077)抗体进行给药(总共6次给药)。在研究持续期间，每周测量肿瘤体积和体重两次。
1mg/kg剂量的TRBC2xNKp30抗体BKM0311抗体在原代NK细胞移植的NOG IL-15小鼠中显示出剂量线性血清暴露(数据未显示)、并且诱导HPB-ALL皮下肿瘤静止和87％的TGI(图39)。用抗TRBC2对照抗体BJM0343观察到相似结果，但程度稍低；抗NKp30对照处理未显示出抗肿瘤作用。
实施例30.双特异性抗体的杵-臼(KIH)设计
以下表39中示出了TRBC1xNKp30双特异性分子和TRBC2xNKp30双特异性分子的具体示例性KIH设计的序列。
表39.单特异性和双特异性抗体的杵-臼设计的序列(氨基酸链中的CDR序列加下划线)
Figure BDA0004017031980004661
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Figure BDA0004017031980004671
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Figure BDA0004017031980004681
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Figure BDA0004017031980004691
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Figure BDA0004017031980004701
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Figure BDA0004017031980004711
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Figure BDA0004017031980004721
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Figure BDA0004017031980004731
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Figure BDA0004017031980004741
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Figure BDA0004017031980004751
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Figure BDA0004017031980004761
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Figure BDA0004017031980004771
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Figure BDA0004017031980004781
等效物
本领域技术人员将认识到或仅使用常规实验的方法就能够确定本文所述的本发明具体实施方案的许多等效物。这些等效物旨在被以下权利要求涵盖。

Claims (126)

1.一种多功能性分子，其包含：(i)结合至T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)的第一抗原结合结构域，以及(ii)结合至NKp30的第二抗原结合结构域，其中所述第一抗原结合结构域包含表9A或表9B、表10、表11、表12、表13、表14、表15和表17和表39的任一者中公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
2.根据权利要求1所述的多功能性分子，其中所述第一抗原结合结构域包含VH和VL，所述VH包含重链互补决定区1(VHCDR1)、VHCDR2和VHCDR3，所述VL包含轻链互补决定区1(VLCDR1)、VLCDR2和VLCDR3，其中：所述VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含SEQ ID NO:7441、201和7442的氨基酸序列；或所述VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO:7443、224和225的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的多功能性分子，其中所述VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含以下氨基酸序列：
SEQ ID NO:7422、201和7403；
SEQ ID NO:7401、201和7403；
SEQ ID NO:7394、201和7396；
SEQ ID NO:7346、201和7398；
SEQ ID NO:7346、201和7400；
SEQ ID NO:7405、201和7403；
SEQ ID NO:7407、201和7403；
SEQ ID NO:7427、201和7403；或
SEQ ID NO:7430、201和7403。
4.根据权利要求2或3所述的多功能性分子，其中所述VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含以下氨基酸序列：
SEQ ID NO:7410、224和225；或
SEQ ID NO:7409、224和225。
5.根据权利要求2-4中任一项所述的多功能性分子，其中所述VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含以下氨基酸序列：
SEQ ID NO:7422、201、7403、7410、224和225；
SEQ ID NO:7401、201、7403、7410、224和225；
SEQ ID NO:7394、201、7396、7410、224和225；
SEQ ID NO:7346、201、7398、7410、224和225；
SEQ ID NO:7346、201、7400、7410、224和225；
SEQ ID NO:7405、201、7403、7410、224和225；
SEQ ID NO:7407、201、7403、7410、224和225；
SEQ ID NO:7427、201、7403、7410、224和225；
SEQ ID NO:7430、201、7403、7410、224和225；
SEQ ID NO:7422、201、7403、7409、224和225；
SEQ ID NO:7401、201、7403、7409、224和225；
SEQ ID NO:7394、201、7396、7409、224和225；
SEQ ID NO:7346、201、7398、7409、224和225；
SEQ ID NO:7346、201、7400、7409、224和225；
SEQ ID NO:7405、201、7403、7409、224和225；
SEQ ID NO:7407、201、7403、7409、224和225；
SEQ ID NO:7427、201、7403、7409、224和225；或
SEQ ID NO:7430、201、7403、7409、224和225。
6.根据权利要求2-5中任一项所述的多功能性分子，其中所述VH包含选自SEQ ID NO:7420、7423、7411、7412、7413、7414、7415、7416、7417、7425、7428和7431的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，并且/或者所述VL包含选自SEQ ID NO:7419和7418的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
7.根据权利要求2-6中任一项所述的多功能性分子，其中所述VH和VL分别包含以下氨基酸序列：
SEQ ID NO:7420和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7423和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7411和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7412和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7413和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7414和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7415和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7416和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7417和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7425和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7428和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7431和7419(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7420和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7423和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7411和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7412和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7413和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7414和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7415和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7416和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7417和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7425和7418(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7428和7418，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列；
SEQ ID NO:7431和7418，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的多功能性分子，其中：
(i)所述第一抗原结合结构域对包含TRBC2的T细胞受体比对不包含TRBC2的T细胞受体具有更高的亲和力，任选地其中所述第一抗原结合结构域与TRBC2之间结合的KD不超过所述第一抗原结合结构域与不包含TRBC2的T细胞受体之间结合的KD的40％、30％、20％、10％、1％、0.1％或0.01％；
(ii)所述第一抗原结合结构域对包含TRBC2的T细胞受体比对包含TRBC1的T细胞受体具有更高的亲和力，任选地其中所述第一抗原结合结构域与TRBC2之间结合的KD不超过所述第一抗原结合结构域与不包含TRBC1的T细胞受体之间结合的KD的40％、30％、20％、10％、1％、0.1％或0.01％；或
(iii)所述第一抗原结合结构域与淋巴瘤细胞或淋巴细胞(例如，T细胞)上TRBC2的结合不明显活化所述淋巴瘤细胞或淋巴细胞(例如，T细胞)，例如，如通过T细胞增殖、T细胞活化标记物(例如，CD69或CD25)的表达和/或细胞因子(例如，TNFα和IFNγ)的表达所测量的。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的多功能性分子，其中所述第二抗原结合结构域包含表20A或表20B、表22、表23A或表23B、表24、表25、表26、表21A或表21B、和表17的任一者中公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的多功能性分子，其中所述第二抗原结合结构域包含VH和VL，所述VH包含重链互补决定区1(VHCDR1)、VHCDR2和VHCDR3，所述VL包含轻链互补决定区1(VLCDR1)、VLCDR2和VLCDR3，其中所述第二抗原结合结构域的VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3分别包含以下氨基酸序列：
SEQ ID NO:7313、6001和7315；
SEQ ID NO:7313、6001和6002；
SEQ ID NO:7313、6008和6009；
SEQ ID NO:7313、7385和7315；
SEQ ID NO:7313、7318和6009；
SEQ ID NO:C019、C021和C023；
SEQ ID NO:C033、C035和C037；
SEQ ID NO:C047、C049和C051；
SEQ ID NO:C061、C063和C065；
SEQ ID NO:C075、C077和C079；
SEQ ID NO:C089、C091和C093；
SEQ ID NO:C103、C105和C107；或
SEQ ID NO:C116、C118和C120。
11.根据权利要求10所述的多功能性分子，其中所述第二抗原结合结构域的VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含以下氨基酸序列：
SEQ ID NO:7326、7327和7329；
SEQ ID NO:6063、6064和7293；
SEQ ID NO:6070、6071和6072；
SEQ ID NO:6070、6064和7321；
SEQ ID NO:C026、C028和C030；
SEQ ID NO:C040、C042和C044；
SEQ ID NO:C054、C056和C058；
SEQ ID NO:C068、C070和C072；
SEQ ID NO:C082、C084和C086；
SEQ ID NO:C096、C098和C100；
SEQ ID NO:C110、C112和C113；或
SEQ ID NO:C123、C125和C127。
12.根据权利要求10或11所述的多功能性分子，其中所述第二抗原结合结构域的VHCDR1、VHCDR2、VHCDR3、VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3分别包含以下氨基酸序列：
SEQ ID NO:7313、6001、7315、7326、7327和7329；
SEQ ID NO:7313、6001、6002、6063、6064和7293；
SEQ ID NO:7313、6008、6009、6070、6071和6072；
SEQ ID NO:7313、7385、7315、6070、6064和7321；
SEQ ID NO:7313、7318、6009、6070、6064和7321；
SEQ ID NO:C019、C021、C023、C026、C028和C030；
SEQ ID NO:C033、C035、C037、C040、C042和C044；
SEQ ID NO:C047、C049、C051、C054、C056和C058；
SEQ ID NO:C061、C063、C065、C068、C070和C072；
SEQ ID NO:C075、C077、C079、C082、C084和C086；
SEQ ID NO:C089、C091、C093、C096、C098和C100；
SEQ ID NO:C103、C105、C107、C110、C112和C113；或
SEQ ID NO:C116、C118、C120、C123、C125和C127。
13.根据权利要求10-12中任一项所述的多功能性分子，其中：
(i)所述第二抗原结合结构域的VH包含选自SEQ ID NO:7302、7298、7300、7301、7303和7304的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，并且/或者所述第二抗原结合结构域的VL包含选自SEQ ID NO:7309、7305、7299和7306-7308的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
(ii)所述第二抗原结合结构域的VH包含选自SEQ ID NO:6121或6123-6128的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，并且/或者所述第二抗原结合结构域的VL包含选自SEQ ID NO:7294或6137-6141的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；或
(iii)所述第二抗原结合结构域的VH包含选自SEQ ID NO:6122或6129-6134的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，并且/或者所述第二抗原结合结构域的VL包含选自SEQ ID NO:6136或6142-6147的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)或
(iv)所述第二抗原结合结构域的VH包含选自SEQ IDNO:C001-C008的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)，并且/或者所述第二抗原结合结构域的VL包含选自SEQ ID NO:C009-C016的氨基酸序列(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
14.根据权利要求10-13中任一项所述的多功能性分子，其中所述第二抗原结合结构域的VH和VL分别包含以下氨基酸序列：
SEQ ID NO:7302和7309(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:7302和7305(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)或
SEQ ID NO:C017-C024中的任一者。
15.根据权利要求10-14中任一项所述的多功能性分子，其中所述第二抗原结合结构域包含以下氨基酸序列：
SEQ ID NO:7311或7310(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
SEQ ID NO:6187或6188(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；或
SEQ ID NO:6189或6190(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的多功能性分子，其中所述多功能性分子单价结合至TRBC2。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的多功能性分子，其中所述多功能性分子包含图30A-30D中任一个所示的构型，其中：
(i)所述多功能性抗体分子包含抗TRBC2 Fab和抗NKp30 scFv，例如，包含图30A中所示的构型；
(ii)所述多功能性抗体分子包含抗TRBC2 Fab和抗NKp30 Fab，例如，包含图30B中所示的构型；
(iii)所述多功能性抗体分子包含抗NKp30 Fab和抗TRBC2 scFv，例如，包含图30C中所示的构型；或
(iv)所述多功能性抗体分子包含抗TRBC2 scFv和抗NKp30 scFv，例如，包含图30D中所示的构型。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的多功能性分子，其进一步包含二聚化模块，所述二聚化模块包含一个或多个免疫球蛋白链恒定区(例如，Fc区)，所述免疫球蛋白链恒定区包含以下中的一种或多种：成对的空腔-突起(“杵-臼”)、静电相互作用或链交换。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的多功能性分子，其包含表9A或表9B、表10、表11、表12、表13、表14、表15、表17、表39的任一者中公开的抗TRBC2氨基酸序列，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列，和/或表格表20A或表20B、表22、表23A或表23B、表24、表25、表26、表21A或表21B、表17和表15的任一者中公开的抗NKp30氨基酸序列，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的多功能性分子，其包含：
(i)SEQ ID NO:7420的抗TRBC2 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7419的抗TRBC2 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ IDNO:7302的抗NKp30 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7309的抗NKp30 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；
(ii)SEQ ID NO:7420的抗TRBC2 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7419的抗TRBC2 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ IDNO:7311的抗NKp30 scFv(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；或
(iii)SEQ ID NO:7438、7439和7383(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
21.根据权利要求1-19中任一项所述的多功能性分子，其包含：(i)SEQ ID NO:7423的抗TRBC2 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7419的抗TRBC2 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7302的抗NKp30 VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7309的抗NKp30 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；(ii)SEQ ID NO:7423的抗TRBC2VH(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)、SEQ ID NO:7419的抗TRBC2 VL(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)和SEQ ID NO:7311的抗NKp30 scFv(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)；或(iii)SEQ ID NO:7440、7439和7383(或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列)。
22.一种多功能性分子，其包含：(i)结合至T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)的第一抗原结合结构域，以及(ii)结合至NKp30的第二抗原结合结构域，其中所述第一抗原结合结构域包含表5A或表5B、表5A或表5B、表6、或表7的任一者中公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域(例如，SEQ IDNO:B001-B095中的任一者)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
23.根据权利要求22所述的多功能性分子，其中所述第二抗原结合结构域包含本文公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域。
24.一种多功能性分子，其包含：
(i)结合至T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)的第一抗原结合结构域，以及
(ii)结合至NKp30的第二抗原结合结构域，
其中所述第二抗原结合结构域包含表格表23A或表23B、表24、表25、或表26的任一者中公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域(例如，SEQ ID NO:C001-C128中的任一者)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
25.根据权利要求24所述的多功能性分子，其中所述第一抗原结合结构域包含本文公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域。
26.一种结合至TRBC2的抗体分子，其包含表9A或表9B、表10、表11、表12、表13、表14、表15、和表17、表39的任一者中公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
27.一种结合至TRBC1的抗体分子，其包含表5A或表5B、表5A或表5B、表6、或表7的任一者中公开的一个或多个CDR、框架区、可变区或抗原结合结构域(例如，SEQ ID NO:B001-B095中的任一者)，或与其具有至少85％、90％、95％或99％同一性的序列。
28.根据权利要求1-21中任一项所述的多功能性分子或根据权利要求22所述的抗体分子，其进一步包含重链恒定区变体，例如，Fc区变体，所述重链恒定区变体包含导致对至少一种Fc受体的亲和力降低或消除的一个或多个突变，任选地其中所述一个或多个突变导致抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)或补体依赖性细胞毒性(CDC)降低或消除。
29.根据权利要求1-25中任一项所述的多功能性分子或根据权利要求26或27所述的抗体分子，其中所述Fc区变体包含表18中公开的一个或多个突变，任选地其中所述Fc区变体包含N297A突变。
30.一种核酸分子，其编码权利要求1-25中任一项所述的多功能性分子或权利要求26或27所述的抗体分子。
31.一种载体，其包含权利要求30所述的核酸分子。
32.一种细胞，其包含权利要求30所述的核酸分子或权利要求31所述的载体。
33.一种制备例如产生权利要求1-25中任一项所述的多功能性分子或权利要求26-27中任一项所述的抗体分子的方法，其包括在适于基因表达和/或同源二聚化或异源二聚化的条件下培养权利要求32所述的细胞。
34.一种药物组合物，其包含权利要求1-25中任一项所述的多功能性分子或权利要求26-27中任一项所述的抗体分子，以及药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂。
35.一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的对象施用权利要求1-25中任一项所述的多功能性分子，其中所述多功能性分子以有效治疗所述癌症的量施用。
36.根据权利要求35所述的方法，其进一步包括鉴定、评估或选择需要治疗的对象，其中鉴定、评估或选择包括确定对象是否具有表达包含TRBC2的T细胞受体的癌细胞。
37.根据权利要求36所述的方法，其进一步包括，响应于确定对象具有表达包含TRBC2的T细胞受体的癌细胞：选择用包含结合至包含TRBC2的T细胞受体的抗原结合结构域的多功能性分子进行治疗的所述对象，并施用包含结合至包含TRBC2的T细胞受体的抗原结合结构域的多功能性分子。
38.一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的对象施用有效量的权利要求34所述的药物组合物，或包含有效量的权利要求1-25、26或27中任一项所述的多功能性分子的组合物。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述癌症是T细胞淋巴瘤或白血病，其中所述癌细胞表达包含TRBC2的T细胞受体。
40.一种鉴定需要治疗癌症的对象的方法，其包括确定所述对象是否存在表达包含TRBC2的T细胞受体的癌细胞，其中：确定所述对象具有表达包含TRBC2的T细胞受体的癌细胞。
41.根据权利要求35-40中任一项所述的方法，其中所述癌症是白血病或淋巴瘤。
42.根据权利要求35-41中任一项所述的方法，其中所述癌症选自获得性免疫缺陷综合征(AIDS)相关淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、成人T细胞白血病/淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、中枢神经系统(CNS)淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、成淋巴细胞性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)(例如，肝脾T细胞淋巴瘤(HSGDTCL)、皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤或肠病相关T细胞淋巴瘤)、转化滤泡性和转化粘膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤(蕈样真菌病和塞扎里综合征)、滤泡性淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤/瓦氏巨球蛋白血症、边缘区B细胞淋巴瘤、胃粘膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小细胞淋巴细胞性淋巴瘤(CLL/SLL)、结外T/NK细胞淋巴瘤(鼻型)和间变性大细胞淋巴瘤(例如，原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤或全身性间变性大细胞淋巴瘤)。
43.根据权利要求35-42中任一项所述的方法，其中所述癌症是外周T细胞淋巴瘤(PTCL)。
44.一种多功能性分子，其包含：(i)结合至T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)的第一抗原结合结构域，所述第一抗原结合结构域包含重链和轻链，所述重链包含重链互补决定区(CDR)HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，所述轻链包含轻链互补决定区(CDR)LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，以及(ii)结合至NKp30的第二抗原结合结构域。
45.根据权利要求44所述的多功能性分子，其中所述HC-CDR3包含SEQ ID NO:8043的氨基酸序列。
46.根据权利要求44所述的多功能性分子，其中所述HC-CDR3包含SEQ ID NO:8045的氨基酸序列。
47.根据权利要求44所述的多功能性分子，其中所述HC-CDR3包含SEQ ID NO:8046的氨基酸序列。
48.根据权利要求44所述的多功能性分子，其中所述HC-CDR3包含SEQ ID NO:8047的氨基酸序列。
49.根据权利要求45所述的多功能性分子，其中所述HC-CDR1包含SEQ ID NO:8041的氨基酸序列。
50.根据权利要求45或49所述的多功能性分子，其中所述HC-CDR2包含SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:8044的氨基酸序列。
51.根据权利要求45、49或50中任一项所述的多功能性分子，其中所述LC-CDR1包含SEQID NO:8045或SEQ ID NO:8051的氨基酸序列。
52.根据权利要求45、49-51中任一项所述的多功能性分子，其中所述LC-CDR2包含SEQID NO:8049的氨基酸序列。
53.根据权利要求45、49-52中任一项所述的多功能性分子，其中所述LC-CDR3包含SEQID NO:8050或8052的氨基酸序列。
54.根据权利要求45、49-53中任一项所述的多功能性分子，其中所述结合至NKp30的第二抗原结合结构域包含重链和轻链，所述重链包含重链互补决定区(CDR)HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，所述轻链包含轻链互补决定区(CDR)LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中所述重链包含SEQ ID NO:8055的HC-CDR3氨基酸序列。
55.根据权利要求45、49-54中任一项所述的多功能性分子，其中所述第二抗原结合结构域包含SEQ ID NO:8058的轻链互补决定区LC-CDR3氨基酸序列。
56.根据权利要求45、49-55中任一项所述的多功能性分子，其中所述NKp30结合结构域包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:8053的HC-CDR1氨基酸序列；以及SEQ ID NO:8054的HC-CDR2氨基酸序列。
57.根据权利要求45、49-56中任一项所述的多功能性分子，其中所述NKp30结合结构域包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:8056的LC-CDR1氨基酸序列和SEQ ID NO:8057的LC-CDR2氨基酸序列。
58.根据权利要求45、49-57中任一项所述的多功能性分子，其中所述TRBC2结合结构域包含与SEQ ID NO:8011至少90％相同的重链。
59.根据权利要求45、49-57中任一项所述的多功能性分子，其中所述TRBC2结合结构域包含与SEQ ID NO:8012至少95％相同的轻链。
60.根据权利要求45、49-57中任一项所述的多功能性分子，其中所述TRBC2结合结构域包含scFv。
61.根据权利要求46所述的多功能性分子，其中所述HC-CDR1是SEQ ID NO:8041。
62.根据权利要求46所述的多功能性分子，其中所述HC-CDR2是SEQ ID NO:8042或SEQID NO:8044。
63.根据权利要求46或61-62中任一项所述的多功能性分子，其中所述LC-CDR1包含SEQID NO:8048或SEQ ID NO:8051的氨基酸序列。
64.根据权利要求46或61-63中任一项所述的多功能性分子，其中所述LC-CDR2包含SEQID NO:8049的氨基酸序列。
65.根据权利要求46或61-64中任一项所述的多功能性分子，其中所述LC-CDR3包含SEQID NO:8050或8051的氨基酸序列。
66.根据权利要求46或61-65中任一项所述的多功能性分子，其中所述结合至NKp30的第二抗原结合结构域包含重链和轻链，所述重链包含重链互补决定区(CDR)HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，所述轻链包含轻链互补决定区(CDR)LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中所述重链包含SEQ ID NO:8055的HC-CDR3氨基酸序列。
67.根据权利要求46或61-66中任一项所述的多功能性分子，其中所述第二抗原结合结构域包含SEQ ID NO:8058的轻链互补决定区LC-CDR3氨基酸序列。
68.根据权利要求46或61-67中任一项所述的多功能性分子，其中所述NKp30结合结构域包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:8053的HC-CDR1氨基酸序列；以及SEQ ID NO:8054的HC-CDR2氨基酸序列。
69.根据权利要求46或61-68中任一项所述的多功能性分子，其中所述NKp30结合结构域包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:8056的LC-CDR1氨基酸序列和SEQ ID NO:8057的LC-CDR2氨基酸序列。
70.根据权利要求46或61-69中任一项所述的多功能性分子，其中所述TRBC2结合结构域包含与SEQ ID NO:8011至少90％相同的重链。
71.根据权利要求46或61-70中任一项所述的多功能性分子，其中所述TRBC2结合结构域包含与SEQ ID NO:8012至少95％相同的轻链。
72.根据权利要求46或61-71中任一项所述的多功能性分子，其中所述TRBC2结合结构域包含scFv。
73.根据权利要求47或48所述的多功能性分子，其中所述HC-CDR1包含SEQ ID NO:8041的氨基酸序列。
74.根据权利要求47或48所述的多功能性分子，其中所述HC-CDR2是SEQ ID NO:8044。
75.根据权利要求47或48所述的多功能性分子，其中所述LC-CDR1包含SEQ ID NO:8048或SEQ ID NO:8051的氨基酸序列，所述LC-CDR2包含SEQ ID NO:8049的氨基酸序列，并且所述LC-CDR3包含SEQ ID NO:8050或8052的氨基酸序列。
76.根据权利要求45-48中任一项所述的多功能性分子，其中所述第一抗原结合结构域包含HC-CDR1，所述HC-CDR1包含SEQ IDNO:8041的氨基酸序列。
77.根据权利要求45-48中任一项所述的多功能性分子，其中所述第一抗原结合结构域包含HC-CDR2，所述HC-CDR2包含SEQ IDNO:8042的氨基酸序列。
78.根据权利要求45-48中任一项所述的多功能性分子，其中所述第一抗原结合结构域包含HC-CDR2，所述HC-CDR2包含SEQ IDNO:8044的氨基酸序列。
79.根据权利要求45-48中任一项所述的多功能性分子，其中所述第一抗原结合结构域包含LC-CDR1，所述LC-CDR1包含SEQ IDNO:8048的氨基酸序列。
80.根据权利要求45-48中任一项所述的多功能性分子，其中所述第一抗原结合结构域包含LC-CDR1，所述LC-CDR1包含SEQ IDNO:8051的氨基酸序列。
81.根据权利要求45-48中任一项所述的多功能性分子，其中所述第一抗原结合结构域包含LC-CDR2，所述LC-CDR2包含SEQ IDNO:8049的氨基酸序列。
82.根据权利要求45-48中任一项所述的多功能性分子，其中所述第一抗原结合结构域包含LC-CDR3，所述LC-CDR3包含SEQ IDNO:8050的氨基酸序列。
83.根据权利要求45-48中任一项所述的多功能性分子，其中所述第一抗原结合结构域包含LC-CDR3，所述LC-CDR3包含SEQ IDNO:8052的氨基酸序列。
84.根据权利要求76-83中任一项所述的多功能性分子，其中所述第二抗原结合结构域包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:8055的HC-CDR3氨基酸序列。
85.根据权利要求76-84中任一项所述的多功能性分子，其中所述第二抗原结合结构域包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:8058的LC-CDR3氨基酸序列。
86.一种抗体或其结合片段，其包含结合至T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)的抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含重链和轻链，所述重链包含重链互补决定区(CDR)HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，所述轻链包含轻链互补决定区(CDR)LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中所述HC-CDR3包含SEQ ID NO:8043的氨基酸序列。
87.一种抗体或其结合片段，其包含结合至T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)的抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含重链和轻链，所述重链包含重链互补决定区(CDR)HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，所述轻链包含轻链互补决定区(CDR)LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中所述HC-CDR3包含SEQ ID NO:8045的氨基酸序列。
88.一种抗体或其结合片段，其包含结合至T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)的抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含重链和轻链，所述重链包含重链互补决定区(CDR)HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，所述轻链包含轻链互补决定区(CDR)LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中所述HC-CDR3包含SEQ ID NO:8046的氨基酸序列。
89.一种抗体或其结合片段，其包含结合至T细胞受体β链恒定结构域2(TRBC2)的抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含重链和轻链，所述重链包含重链互补决定区(CDR)HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，所述轻链包含轻链互补决定区(CDR)LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，其中所述HC-CDR3包含SEQ ID NO:8047的氨基酸序列。
90.根据权利要求86-89中任一项所述的抗体或结合片段，其中所述HC-CDR1包含SEQID NO:8041的氨基酸序列。
91.根据权利要求86-90中任一项所述的抗体或结合片段，其中所述HC-CDR2包含SEQID NO:8042或SEQ ID NO:8044的氨基酸序列。
92.根据权利要求86-91中任一项所述的抗体或结合片段，其中所述LC-CDR1包含SEQID NO:8048或SEQ ID NO:8051的氨基酸序列。
93.根据权利要求86-89中任一项所述的抗体或结合片段，其中所述LC-CDR2包含SEQID NO:8049的氨基酸序列。
94.根据权利要求86-93中任一项所述的抗体或结合片段，其中所述LC-CDR3包含SEQID NO:8050或8052的氨基酸序列。
95.根据权利要求86-94中任一项所述的抗体或结合片段，其中所述TRBC2结合结构域包含与SEQ ID NO:8011至少90％相同的重链。
96.根据权利要求86-93或95中任一项所述的抗体或结合片段，其中所述TRBC2结合结构域包含与SEQ ID NO:8012至少95％相同的轻链。
97.根据权利要求86-96中任一项所述的抗体或结合片段，其中所述TRBC2结合结构域包含scFv。
98.根据权利要求86-97中任一项所述的抗体或结合片段，其进一步包含结合不同靶的一个或多个结合结构域。
99.根据权利要求98所述的抗体或结合片段，其中所述抗体是多特异性抗体。
100.根据权利要求98所述的抗体或结合片段，其中所述抗体是双特异性抗体。
101.根据权利要求44-85中任一项所述的多功能性分子，其中所述分子结合至人细胞。
102.根据权利要求101所述的多功能性分子，其中所述分子结合至表达NKp30和TRBC2的人T细胞。
103.根据权利要求101所述的多功能性分子，其中所述分子不结合至不表达TRBC2的人T细胞。
104.一种治疗癌症的方法，包括向有需要的对象施用包含权利要求44-101中任一项所述的多功能性分子或编码其的多核苷酸的组合物。
105.根据权利要求104所述的方法，其中所述组合物进一步包含细胞，所述细胞包含编码权利要求44-103中任一项所述的多功能性分子的所述多核苷酸。
106.根据权利要求104所述的方法，其中所述细胞是人细胞。
107.根据权利要求104或105所述的方法，其中所述细胞表达由所述多核苷酸编码的所述多功能性分子。
108.根据权利要求104-106中任一项所述的方法，其中所述癌症是T细胞癌症。
109.一种多功能性分子，其包含选自SEQ ID NO:8059-8026的序列中任一者的重链或轻链或两者。
110.一种多特异性分子，其包含具有SEQ ID NO:8281的轻链、SEQ ID NO:8283的重链序列的抗TRBC2 Fab-Fc杵链；以及SEQ IDNO:8286的抗NKp30 scFv-Fc臼链。
111.一种多特异性分子，其包含具有SEQ ID NO:8292的轻链、SEQ ID NO:8294的重链序列的抗TRBC2 Fab-Fc杵链；以及SEQ IDNO:8286的抗NKp30 scFv-Fc臼链。
112.一种TRBC2结合分子，其包含具有SEQ ID NO:8297的轻链、SEQ ID NO:8298的重链序列的抗TRBC2 Fab-Fc杵链；和/或SEQ ID NO:8300的Fc臼链。
113.一种TRBC2结合分子，其包含具有SEQ ID NO:8301的轻链、SEQ ID NO:8302的重链序列的抗TRBC2 Fab-Fc杵链；和/或SEQ ID NO:8300的Fc臼链。
114.一种多特异性分子，其包含具有SEQ ID NO:7380的轻链、SEQ ID NO:7382的重链序列的抗TRBC1 Fab-Fc杵链；以及SEQ IDNO:8286的NKp30 scFv-Fc臼链。
115.一种NK-p30结合分子，其包含具有SEQ ID NO:8301的轻链、SEQ ID NO:8302的重链序列的抗NKp30 Fab-Fc杵链；和/或SEQ ID NO:8300的Fc臼链。
116.一种TRBC1结合分子，其包含具有SEQ ID NO:8307的轻链、SEQ ID NO:8309的重链序列的抗NKp30 Fab-Fc杵链；和/或SEQ ID NO:8300的Fc臼链。
117.一种结合至TRBC1分子的抗体或其片段，其中结合至所述TRBC1的所述抗体或其片段包含重链，所述重链包含具有序列GYVMH(SEQ ID NO 8643)的HC-CDR1；具有FINPYNDDIQSNERFRG(SEQ ID NO:8644)序列的HC-CDR2；和具有GAGYNFDGAYRFFDF(SEQ IDNO:8645)序列的HC-CDR3；以及轻链，所述轻链包含RSSQRLVHSNGNTYLH(SEQ ID NO:8646)的LC-CDR1、RVSNRFP(SEQ ID NO:8647)的LC-CDR2、SQSTHVPYT(SEQ ID NO:8648)的LC-CDR3。
118.一种结合至TRBC1分子的抗体或其片段，其中结合至所述TRBC1的所述抗体或其片段包含重链，所述重链包含具有序列GYVMH(SEQ ID NO 8643)的HC-CDR1；具有序列FIIPIFGTANYAQKFQG(SEQ ID NO:8649)的HC-CDR2和具有序列GAGYNFDGAYRFFDF(SEQ IDNO:8650)的HC-CDR3；以及轻链，所述轻链包含具有序列RSSQRLVHSNGNTYLH(SEQ ID NO:8651)的LC-CDR1、具有序列RVSNRFP(SEQ ID NO:8652)的LC-CDR2和具有序列SQSTHVPYT(SEQ ID NO:8653)的LC-CDR3。
119.一种结合至TRBC1分子的抗体或其片段，其中结合至所述TRBC1的所述抗体或其片段包含重链，所述重链包含具有序列GYVMH(SEQ ID NO 8643)的HC-CDR1；具有序列FINPYNDDIQSNERFRG(SEQ ID NO:8654)的HC-CDR2和具有序列GAGYNFDGAYRFFDF(SEQ IDNO:8655)的HC-CDR3；以及轻链，所述轻链包含具有序列RSSQRLVHSNGNTYLH(SEQ ID NO:8656)的LC-CDR1、具有序列RVSNRFP(SEQ ID NO:8657)的LC-CDR2和具有序列SQSTHVPYT(SEQ ID NO:8658)的LC-CDR3。
120.一种结合至TRBC1分子的抗体或其片段，其中结合至所述TRBC1的所述抗体或其片段包含重链，所述重链包含具有序列GYVMH(SEQ ID NO 8643)的HC-CDR1；具有序列FIIPIFGTANYAQKFQG(SEQ ID NO:8659)的HC-CDR2和具有序列GAGYNFDGAYRFFDF(SEQ IDNO:8660)的HC-CDR3；以及轻链，所述轻链包含具有序列RSSQRLVHSNGNTYLH(SEQ ID NO:8661)的LC-CDR1、具有序列RVSNRFP(SEQ ID NO:8662)的LC-CDR2和具有序列SQSTHVPYT(SEQ ID NO:8663)的LC-CDR3。
121.一种结合至TRBC1分子的抗体或其片段，其中结合至所述TRBC1的所述抗体或其片段包含重链，所述重链包含具有序列GYVMH(SEQ ID NO 8643)的HC-CDR1；具有序列FINPYNDDIQSNERFRG(SEQ ID NO:8664)的HC-CDR2和具有序列GAGYNFDGAYRFFDF(SEQ IDNO:8665)的HC-CDR3；以及轻链，所述轻链包含具有序列RSSQRLVHSNGNTYLH(SEQ ID NO:8666)的LC-CDR1、具有序列RVSNRFP(SEQ ID NO:8667)的LC-CDR2和具有序列SQSTHVPYT(SEQ ID NO:8668)的LC-CDR3。
122.一种多功能性分子，其包含：(i)抗TRBC1抗体或其结合片段，所述抗体或其结合片段包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO 8643的HC-CDR1，或具有SEQ ID NO:8644序列的HC-CDR2，或具有SEQ ID NO:8645序列的HC-CDR3，所述轻链包含具有SEQ IDNO:8646序列的LC-CDR1，或具有SEQ ID NO:8647序列的LC-CDR2，或具有SEQ ID NO:8648序列的LC-CDR3；以及(ii)结合至NKp30的第二抗原结合结构域。
123.一种多功能性分子，其包含：(i)抗TRBC1抗体或其结合片段，所述抗体或其结合片段包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO 8643的HC-CDR1，或具有SEQ ID NO:8649序列的HC-CDR2，或具有SEQ ID NO:8650序列的HC-CDR3，所述轻链包含具有SEQ IDNO:8651序列的LC-CDR1，或具有SEQ ID NO:8652序列的LC-CDR2，或具有SEQ ID NO:8653序列的LC-CDR3；以及(ii)结合至NKp30的第二抗原结合结构域。
124.一种多功能性分子，其包含：(i)抗TRBC1抗体或其结合片段，所述抗体或其结合片段包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO 8643的HC-CDR1，或具有SEQ ID NO:8654序列的HC-CDR2，或具有SEQ ID NO:8655序列的HC-CDR3，所述轻链包含具有SEQ IDNO:8656序列的LC-CDR1，或具有SEQ ID NO:8657序列的LC-CDR2，或具有序列8658的LC-CDR3；以及(ii)结合至NKp30的第二抗原结合结构域。
125.一种多功能性分子，其包含：(i)抗TRBC1抗体或其结合片段，所述抗体或其结合片段包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO 8643的HC-CDR1，或具有SEQ ID NO:8659序列的HC-CDR2，或具有SEQ ID NO:8660序列的HC-CDR3，所述轻链包含具有SEQ IDNO:8661序列的LC-CDR1，或具有SEQ ID NO:8662序列的LC-CDR2，或具有序列8663的LC-CDR3；以及(ii)结合至NKp30的第二抗原结合结构域。
126.一种多功能性分子，其包含：(i)抗TRBC1抗体或其结合片段，所述抗体或其结合片段包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO 8643的HC-CDR1，或具有SEQ ID NO:8664序列的HC-CDR2，或具有SEQ ID NO:8665序列的HC-CDR3，所述轻链包含具有SEQ IDNO:8666序列的LC-CDR1，或具有SEQ ID NO:8667序列的LC-CDR2，或具有序列8668的LC-CDR3；以及(ii)结合至NKp30的第二抗原结合结构域。
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