CN115754043A - 一种n-乙酰-l-半胱氨酸的检测方法 - Google Patents
一种n-乙酰-l-半胱氨酸的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115754043A CN115754043A CN202211385761.4A CN202211385761A CN115754043A CN 115754043 A CN115754043 A CN 115754043A CN 202211385761 A CN202211385761 A CN 202211385761A CN 115754043 A CN115754043 A CN 115754043A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- reference substance
- acetyl
- cysteine
- detecting
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Abstract
本发明一种N‑乙酰‑L‑半胱氨酸的检测方法,包括如下步骤:S1:精密量取空白溶液2ml、对照品溶液2ml和供试品溶液2ml,分别置于50ml碘量瓶中;S2:上述碘量瓶中各加45%(w/w)的氢氧化钠溶液3ml,置70℃水浴上加热1h,再各加甲酸2ml轻轻摇晃放热;S3:然后再各加30%过氧化氢溶液1ml,放置30分钟,精取上述溶液2ml置25ml容量瓶中,加水稀释至刻度;S4:分别取10μl注入氨基酸分析仪进行测定,记录色谱图,按外标法以峰面积计算。本发明检测方法高效、精准,快速,目前已彻底解决17AA中N‑乙酰‑L‑半胱氨酸峰拖尾、峰分叉、峰面积异常的问题。
Description
技术领域
本发明涉及药物分析检测技术领域,尤其涉及一种N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法。
背景技术
N-乙酰-L-半胱氨酸的常规检测方法在《西药部颁》第6册,采用照高效液相色谱法测定,其中,(1)色谱条件与系统适应性试验:用阳离子交换树脂为填充剂;以水(用0.05mol/L的硫酸溶液调节pH值约为3.0)为流动相;检测波长为210nm。N-乙酰-L-半胱氨酸分离度应符合要求,拖尾因子应在0.90~1.10之间。(2)对照品溶液的制备:取N-乙酰-L-半胱氨酸对照品约20mg,精密称定,置100ml量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取5ml置50ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。(3)供试品溶液的制备:精密量取本品2ml,置50ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。(4)测定法:精密量取对照品溶液及供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算。
但是N-乙酰-L-半胱氨酸应用于复方氨基酸注射液(17AA)中时,采用上述方法对N-乙酰-L-半胱氨酸检测易出现峰拖尾、峰分叉、含量测定不准等情况。通过重新调节PH可以改善N-乙酰-L-半胱氨酸峰的峰形,减小拖尾因子,避免峰分叉,但需要反复调节PH、大量试针,浪费时间且目前实验室不允许试针。多次更换色谱柱测定以改善塔板数较低的情况,但经过试验,许多色谱柱都不适用此方法,而且液相方法的流动相为经过稀硫酸调PH的水,每次重新做样时调PH的差异会导致出峰时间、拖尾因子、峰形变化较大。而且每次做完样品时记录此次流动相调节的PH,以方便下次做样时直接调至上次做样时的PH值,大多数情况可以直接上机做好,但依然会出现峰拖尾、峰形不好的情况,
发明内容
为解决现有技术中复方氨基酸注射液(17AA)中N-乙酰-L-半胱氨酸检测易出现峰拖尾、峰分叉、含量测定不准的技术问题,本发明提供了如下技术方案。
本发明一种N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法,包括如下步骤:
S1:精密量取空白溶液2ml、对照品溶液2ml和供试品溶液2ml,分别置于50ml碘量瓶中;
S2:上述碘量瓶中各加45%(w/w)的氢氧化钠溶液3ml,置70℃水浴上加热1h,再各加甲酸2ml轻轻摇晃放热;
S3:然后再各加30%过氧化氢溶液1ml,放置30分钟,精取上述溶液2ml置25ml容量瓶中,加水稀释至刻度;
S4:分别取10μl注入氨基酸分析仪进行测定,记录色谱图,按外标法以峰面积计算。
作为进一步的技术方案,所述空白溶液为纯水。
作为进一步的技术方案,所述对照品溶液的制备方法为:精密称取N-乙酰-L-半胱氨酸对照品25mg,置50ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液,平行制备两份对照品溶液,其中一份作为对照品溶液,一份作为核对对照品溶液。
作为进一步的技术方案,所述供试品溶液为直接取用复方氨基酸注射液(17AA)溶液。
作为进一步的技术方案,所述氨基酸分析仪的色谱条件为分离柱温度57℃,反应柱温度135℃。
作为进一步的技术方案,所述色谱条件还包括流动相B1、B2、B3、B4、B5、B6和反应相R1、R2、R3的配制。
作为进一步的技术方案,所述流动相至少采用蒸馏水、柠檬酸钠、氢氧化钠、氯化钠、柠檬酸、乙醇和纯水中的一种制得。
作为进一步的技术方案,还包括系统适应性试验:精密量取对照品溶液10μl注入氨基酸分析仪,记录色谱图,N-乙酰-L-半胱氨酸与相邻溶剂峰的分离度应不低于1.2。
作为进一步的技术方案,所述系统适应性试验还包括:精密量取空白溶液、两份对照品溶液、两份供试品溶液,每份10μl,注入氨基酸分析仪,记录色谱图,其中,空白溶液进二针、对照品溶液进五针、核对对照品一针,每份供试品溶液进一针,先计算核对对照品的回收率和对照品的RSD值,若对照品溶液的五针RSD值不大于2.0%,且核对对照回收率在98.0%~102.0%,则所测结果有效;若有一项不符合要求,则表明色谱系统不稳定,在进行相应影响因素排查处理后需重新测定。
本发明的有益效果,本发明的检测方法通过完成专属性、重复性、中间精密度、准确度、线性、以及针式过滤器对溶液的影响,完成了17AA中N-乙酰-L-半胱氨酸脱乙酰基再柱后衍生的方法学验证,本发明的检测方法高效、精准,快速,目前已彻底解决17AA中N-乙酰-L-半胱氨酸峰拖尾、峰分叉、峰面积异常的问题。
附图说明
图1是本发明N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法的流动相配制示意图;
图2是本发明N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法的反应相配制示意图;
图3是本发明N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法流速和流动相比例示意图一;
图4是本发明N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法流速和流动相比例示意图二;
图5是本发明N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法的重复性试验结果图;
图6是本发明N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法的准确性试验结果图;
图7是本发明N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法的线性试验结果图;
图8是本发明N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法的稳定性试验结果图;
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合附图及实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
本发明一种N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法,应用于复方氨基酸注射液(17AA)中N-乙酰-L-半胱氨酸的检测,采用氨基酸分析仪测定。本检测方法使用的主要仪器及玻璃器具:氨基酸分析仪、十万分之一电子天平、电子天平、超声波清洗器、酸度计、真空泵、溶剂过滤器、1000ml量筒、100ml量筒50ml碘量瓶、25ml容量瓶、50ml容量瓶、2ml移液管。
本发明所使用的试剂及溶液:乙醇(色谱纯)、柠檬酸钠(优级纯)、氢氧化钠(优级纯)、氯化钠(优级纯)、柠檬酸(优级纯)、乙二醇单甲基醚、茚三酮、硼氢化钠(优级纯)、无水醋酸钠、冰醋酸、甲酸、30%过氧化氢溶液、45%(w/w)的氢氧化钠溶液(临用新制)。
本发明首先对氨基酸分析仪的色谱条件进行设置,其分离柱温度57℃,反应柱温度135℃,对其所用的流动相和反应相进行配制,流动相所用溶液包括蒸馏水、柠檬酸钠、氢氧化钠、氯化钠、柠檬酸、乙醇和纯水,反应相所用溶液包括茚三酮、无水醋酸钠、乙二醇单甲基醚、冰醋酸、水、硼氢化钠,所述流动相B1、B2、B3、B4、B5、B6和反应相R1、R2、R3的具体配制方法如图1和图2所示,其中B6采用超纯水,因此图中未示出。流速及流动相比例如图3和图4所示,在此不做详细描述。
本发明的系统适用性试验包括如下步骤:①精密量取对照品溶液10μl注入氨基酸分析仪,记录色谱图,N-乙酰-L-半胱氨酸与相邻溶剂峰的分离度应不低于1.2。②精密量取空白溶液、两份对照品溶液、两份供试品溶液,每份10μl,注入氨基酸分析仪,记录色谱图。其中,空白溶液进二针、对照品溶液进五针、核对对照品一针,每份供试品溶液进一针,先计算核对对照品的回收率和对照品的RSD值,若对照品溶液的五针RSD值不大于2.0%,且核对对照回收率在98.0%~102.0%,则所测结果有效;若有一项不符合要求,则表明色谱系统不稳定,在进行相应影响因素排查处理后需重新测定。
在本发明的检测方法中,对供试品溶液、对照品溶液、空白溶液的配制较为重要,其中对照品溶液的制备:精密称取N-乙酰-L-半胱氨酸对照品25mg,置50ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液,平行制备两份对照品溶液,其中一份作为对照品溶液,一份作为核对对照品溶液。供试品溶液的制备:直接取用检测品溶液。空白溶液的制备:纯水作为空白溶液。
本发明的N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法在测定时的步骤:S1:精密量取空白溶液2ml、对照品溶液2ml和供试品溶液2ml,分别置50ml碘量瓶中;S2:各加45%(w/w)的氢氧化钠溶液3ml,置70℃水浴上加热1h,再各加甲酸2ml轻轻摇晃放热;S3:然后各加30%过氧化氢溶液1ml,放置30分钟,精取上述溶液2ml置25ml容量瓶中,加水稀释至刻度;S4:分别取10μl注入氨基酸分析仪进行测定,记录色谱图,按外标法以峰面积计算。
本发明的检测方法经过多次试验,其重复性、准确度、线性、稳定性均符合规定,如图5所示,本发明同时制备6份供试品溶液,每份进1针,计算6针供试品峰面积RSD%,试验结果符合规定;如图6所示,分别对3个浓度级别进行3次测定,试验结果符合规定;如图7所示,分别对5个浓度级别进行3次测定线性,试验结果符合规定;如图8所示,考察不同人不同时间乙酰半胱氨酸峰保留时间的稳定性,改善前乙酰半胱氨酸峰保留时间受流动相PH影响较大,且易拖尾分叉,改善后不同时间不同人员保留时间基本无变化,无拖尾及分叉。
上面结合附图对本发明优选的具体实施方式和实施例作了详细说明,但是本发明并不限于上述实施方式和实施例,在本领域技术人员所具备的知识范围内,还可以在不脱离本发明构思的前提下做出各种变化或等效替换,因此,本发明不受此处所公开的具体实施例的限制,所有落入本申请的权利要求范围内的实施例都属于本发明所保护的范围内。
Claims (9)
1.一种N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1:精密量取空白溶液2ml、对照品溶液2ml和供试品溶液2ml,分别置于50ml碘量瓶中;
S2:上述碘量瓶中各加45%(w/w)的氢氧化钠溶液3ml,置70℃水浴上加热1h,再各加甲酸2ml轻轻摇晃放热;
S3:然后再各加30%过氧化氢溶液1ml,放置30分钟,精取上述溶液2ml置25ml容量瓶中,加水稀释至刻度;
S4:分别取10μl注入氨基酸分析仪进行测定,记录色谱图,按外标法以峰面积计算。
2.根据权利要求1所述的N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法,其特征在于:所述空白溶液为纯水。
3.根据权利要求1所述的N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法,其特征在于:所述对照品溶液的制备方法为:精密称取N-乙酰-L-半胱氨酸对照品25mg,置50ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液,平行制备两份对照品溶液,其中一份作为对照品溶液,一份作为核对对照品溶液。
4.根据权利要求1所述的N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法,其特征在于:所述供试品溶液为直接取用复方氨基酸注射液(17AA)溶液。
5.根据权利要求1所述的N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法,其特征在于:所述氨基酸分析仪的色谱条件为分离柱温度57℃,反应柱温度135℃。
6.根据权利要求5所述的N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法,其特征在于:所述色谱条件还包括流动相B1、B2、B3、B4、B5、B6和反应相R1、R2、R3的配制。
7.根据权利要求6所述的N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法,其特征在于:所述流动相至少采用蒸馏水、柠檬酸钠、氢氧化钠、氯化钠、柠檬酸、乙醇和纯水中的一种制得。
8.根据权利要求1所述的N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法,其特征在于:还包括系统适应性试验:精密量取对照品溶液10μl注入氨基酸分析仪,记录色谱图,N-乙酰-L-半胱氨酸与相邻溶剂峰的分离度应不低于1.2。
9.根据权利要求8所述的N-乙酰-L-半胱氨酸的检测方法,其特征在于:所述系统适应性试验还包括:精密量取空白溶液、两份对照品溶液、两份供试品溶液,每份10μl,注入氨基酸分析仪,记录色谱图,其中,空白溶液进二针、对照品溶液进五针、核对对照品一针,每份供试品溶液进一针,先计算核对对照品的回收率和对照品的RSD值,若对照品溶液的五针RSD值不大于2.0%,且核对对照回收率在98.0%~102.0%,则所测结果有效;若有一项不符合要求,则表明色谱系统不稳定,在进行相应影响因素排查处理后需重新测定。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211385761.4A CN115754043A (zh) | 2022-11-07 | 2022-11-07 | 一种n-乙酰-l-半胱氨酸的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211385761.4A CN115754043A (zh) | 2022-11-07 | 2022-11-07 | 一种n-乙酰-l-半胱氨酸的检测方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115754043A true CN115754043A (zh) | 2023-03-07 |
Family
ID=85357076
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202211385761.4A Pending CN115754043A (zh) | 2022-11-07 | 2022-11-07 | 一种n-乙酰-l-半胱氨酸的检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115754043A (zh) |
-
2022
- 2022-11-07 CN CN202211385761.4A patent/CN115754043A/zh active Pending
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN110031557A (zh) | 一种盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯、5-异喹啉磺酸乙酯的检测方法 | |
CN111579689A (zh) | 一种测定硫酸氢氯吡格雷中硫酸二甲酯含量的方法 | |
CN106841408B (zh) | 一种氨基酸注射液中蛋氨酸亚砜的快速检测方法 | |
CN113295805B (zh) | 一种药物中水合肼的检测方法 | |
CN109932455A (zh) | 检测24h尿液中儿茶酚胺代谢物含量的液质分析方法 | |
CN110687223B (zh) | 一种丙戊酸钠原料乙酰乙酸甲酯的含量测定方法 | |
CN116359401A (zh) | 高效液相色谱法同时测定左卡尼汀中五种杂质的方法 | |
CN115754043A (zh) | 一种n-乙酰-l-半胱氨酸的检测方法 | |
CN113607842B (zh) | 一种乳酸左氧氟沙星中乳酸的鉴别与含量测定方法 | |
CN112697934A (zh) | 一种复方氨基酸注射液中焦谷氨酸含量的检测方法 | |
WO2021179535A1 (zh) | 复方氨基酸注射液含量测定方法 | |
CN110187021B (zh) | 一种同时测定氯氰碘柳胺钠伊维菌素注射液中两种主药含量的方法 | |
CN114518413A (zh) | 一种卡托普利原料药中脯氨酸的含量测定方法 | |
CN112710762A (zh) | 硫酸二甲酯残留量的测定方法 | |
CN110749666A (zh) | 检测血浆中白消安的液相色谱串联质谱方法 | |
CN111044640A (zh) | 一种利用GC法测定饲料添加剂中γ-氨基丁酸含量的方法 | |
CN112578044B (zh) | 一种高效液相检测Fmoc-AEEA含量的方法 | |
CN112305138B (zh) | 一种同时测定赖氨酸和甘氨酸含量的方法 | |
CN115372489B (zh) | 一种盐酸替扎尼定有关物质的检测方法 | |
CN111579663B (zh) | 一种无标样情况下测定甲氧基甲醇中甲醇相对校正因子的方法及应用 | |
CN114002356B (zh) | 高效液相色谱法检测安定剂含量的方法 | |
CN117074578B (zh) | 一种2-(甲氨基)-乙醇的lc-ms/ms定量检测方法 | |
CN112730707B (zh) | 采用高效液相色谱法测定神经酸含量的方法 | |
CN112684045A (zh) | 一种乌苯美司固体制剂中主药含量的测定分析方法 | |
CN112034069A (zh) | 一种检测乳酸钠溶液中甲醇残留的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
CB02 | Change of applicant information |
Address after: 441000 No.99, Hanjiang North Road, Xiangyang City, Hubei Province Applicant after: Hubei Jinyao Pharmaceutical Co.,Ltd. Address before: 441000 No.99, Hanjiang North Road, Xiangyang City, Hubei Province Applicant before: TIANJIN JINYAO GROUP HUBEI TIANYAO PHARMACEUTICAL CO.,LTD. |
|
CB02 | Change of applicant information | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |