CN115637241B - 一株大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明为一株大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03菌株及其应用，属于微生物菌株及其应用领域。大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03菌株于2022年09月01日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO：62754，分类命名为Pseudomonas chlororaphis，为革兰氏阴性菌，耐强酸弱碱及低营养胁迫，且具有一定抗盐胁迫能力。该菌株对5种大豆根腐病致病菌和8种常见植物病原菌拮抗效果显著，抑菌谱广，可应用范围广。与现有大豆根腐病生防资源相比，RH_Pc03菌株兼具抗病和促生作用，尤其可提高大豆固氮作用。

Description

一株大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03及其应用

技术领域

本发明为一株大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03及其应用，属于微生物菌株及其应用领域。

背景技术

大豆根腐病是大豆生产中的重要土传真菌病害，在我国各大豆产区均有发生，其危害范围广，防治困难，一般年份发病率为10～30％，严重时高达60％以上，严重影响大豆增产和品质提升。大豆根腐病的病原菌复杂，据国内外研究报道，该病可由多种镰刀菌Fusarium spp、疫霉菌Phytophthora sojae、腐霉菌Pythium spp.和立枯丝核菌Rhizoctonia solani等引起，在四川、重庆等西南大豆产区，大豆根腐病致病菌以镰刀菌为主，其中尖孢镰刀菌F.oxysporum是优势强致病菌。

目前，生产上防治大豆根腐病主要采用栽培方式、土壤处理、抗病品种利用、化学防治及生物防治等多种防治措施。抗病品种的选育能有效降低土传病害的发生和发展，但由于根腐病病原菌复杂、寄主范围广，防治困难，生产上可利用的抗(耐)病品种少。种衣剂包衣或拌种、苗期灌根等化学药剂防治可有效减少植物病害的发生，但常因使用不当带来农药残留、土壤污染等问题，此外，化学药剂使用在削弱了土传病菌侵染致病时，也杀灭了土壤有益微生物菌群，影响了植物根际微生物群落结构及多样性，削弱其抗病遇害和调节植物健康的能力。生物防治可通过微生物与土传病菌之间的相互作用与制衡，达到控制土传病害的目的。生物防治具有绿色、生态、环保、持效时间长、不易产生抗药性等特点，是当前农业有害生物绿色防控的重要手段。

筛选鉴定具有高抑菌活性，环境适应能力强的生防菌株，是大豆根腐病生物防治的前提。通过文献查阅及专利检索发现，迄今已报道的对大豆根腐病具有生防活性的有益微生物，包括木霉属Trichoderma的哈茨木霉T.harzianum、康氏木霉T.koningii、绿木霉T.viride等，毛壳属的毛壳菌Chaetomium spp，芽孢杆菌属的解淀粉芽孢杆菌B.amyloliquefaciens、贝斯芽孢杆菌Bacillus velezensis、地衣芽孢杆菌B.licheniformis等。此外，昆虫病原线虫共生菌Xenorhadus budapestensis HEB02对大豆疫霉根腐病抑菌效果显著。最近报道，一种寡雄腐霉Pyo34-3也被用于防治大豆疫霉、终极腐霉、尖孢镰刀菌和拟茎点霉等引起的植物根腐病。假单胞杆菌Pseudomonas属于荧光假单胞杆菌复合群P.fluorescens complex，是一类典型的根际促生菌(简称PGPR)。研究发现，假单胞杆菌能够提高番茄、黄瓜、莴苣等产量，并且有效抑制尖孢镰刀菌、立枯丝核菌、疫霉菌、腐霉菌等引起的枯萎病、根腐病、软腐病等。同时，假单胞杆菌能够通过提高磷酸盐和铁溶解、固氮作用，调控植物激素合成，促进植物生长。研究发现，接种金黄假单胞杆菌能够诱导大豆根系抗氧化物酶活性，提高异黄酮含量，从而显著提高对立枯丝核菌R.solani引起的大豆根腐立枯病防效。此外，利用大豆根际假单胞杆菌和芽孢杆菌混合菌剂能够有效防治大豆根腐病。根际促生细菌具有增殖速度快、定殖和环境适应能力强等特点，而根际促生菌能定殖在植物根际，通过分泌代谢物促进植物生长、提高土壤养分利用率、激活寄主免疫系统，以及直接拮抗病原物等等方式提高植物抗病能力，并不仅植物生长。因此，筛选鉴定作物根际促生菌资源，测定其生防效果，对于减少化学农药用量，土传病害绿色生态防控，以及生产低残留、高质量农产品具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于针对大豆根腐病发生范围广、危害严重，缺乏有效抗耐病品种，化学防治易造成土壤和农产品污染等问题，从生物防治角度出发，利用根际微生物拮抗原理，从大豆根际筛选鉴定一株根腐病生防菌株-绿针假单胞菌RH_Pc03，其抑菌效果好，促生作用明显，环境适应能力强，绿色环保，可有效提高大豆根腐病的防治效果，同时可用于其他类似土传病害的防治。

本发明的另外一个发明目的是提供以上所述大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03的应用；大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03对5种大豆根腐病致病菌和8种常见植物病原菌拮抗效果显著，抑菌谱广，可应用范围更广。与现有大豆根腐病生防资源相比，RH_Pc03兼具抗病和促生作用，尤其可提高大豆固氮作用。

为了实现本申请的发明目的，采用以下具体技术方案：

一株大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03，该大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03菌株于2022年09月01日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO：62754，分类命名为Pseudomonas chlororaphis。保藏单位地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省科学微生物研究所；邮政编码：510070。

作为本申请中一种较好的实施方式，大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03对大豆根腐病致病菌中的尖孢镰刀菌、禾谷镰刀菌、亚洲镰刀菌、腐皮镰刀菌和藤仓镰刀菌有较强的拮抗活性。

作为本申请中一种较好的实施方式，大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03对引起玉米大斑病菌的凸脐蠕孢菌、玉米小斑病的平脐蠕孢菌、柑橘炭疽病的胶孢炭疽菌、稻瘟病的灰梨孢菌、玉米纹枯病的立枯丝核菌、草莓灰霉病的灰葡萄孢菌、大豆白绢病的齐整小核菌、烟草赤星病的链格孢菌的病原菌均表现较强的拮抗活性。。

作为本申请中一种较好的实施方式，大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03有较强的环境适应力；其生长速度快；耐强酸弱碱；低营养胁迫；且具有一定抗盐胁迫能力；

作为本申请中一种较好的实施方式，大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03能显著促进大豆生长，对大豆根系促生作用显著。

作为本申请中一种较好的实施方式，大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03用于对大豆根腐病的防治。

作为本申请中一种较好的实施方式，大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03对大豆幼苗具有促生效果，具有根际促生菌(PGPR)的特点；RH_Pc03催芽处理大豆种子后，大豆幼苗的根长、地上部分干重、地下部分干重均显著增加；除了株高，接种RH_Pc03对大豆的茎粗和叶面积也有促生作用；RH_Pc03菌株能够促进大豆植株的根系生长发育及干物质的积累。

作为本申请中一种较好的实施方式，大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03用于大豆固氮；能显著提升大豆根系结瘤效能。

作为本申请中一种较好的实施方式，RH_Pc03生长速度快，在LB液体培养中6h内进入指数生长时期，在24h内能富集到较高浓度，且在72h后依然持续增长未衰亡；RH_Pc03具有较强的低营养胁迫耐受能力，在1/16NA营养条件下，菌株仍能生长，另外在1/4、1/2NA条件下，菌株仍能在短时间内富集到较高浓度；RH_Pc03具有一定的盐胁迫耐受能力，当盐浓度在6％以下，菌株能正常生长；RH_Pc03具有耐强酸弱碱的能力，当环境pH＝5～9时，菌株依然具有较高的生长活性。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

(一)与现有大豆根腐病生防资源相比，RH_Pc03被鉴定为Pseudomonaschlororaphis，是一种新鉴定的大豆根腐病生防菌株。

(二)该菌株除了对5种大豆根腐病致病菌具有拮抗作用外，对其他8种常见植物病原菌拮抗效果显著，抑菌谱广，可应用范围更广。与现有大豆根腐病生防资源相比，RH_Pc03兼具抗病和促生作用，尤其可提高大豆固氮作用。

附图说明

图1为RH_Pc03在NA培养基上的菌落形态

图2为基于16s rDNA构建的RH_Pc03系统发育树

图3为RH_Pc03环境胁迫耐受能力曲线图

图4为RH_Pc03与5种大豆根腐病菌和8种其他植物病菌的体外平板对峙效果图

图5为RH_Pc03盆栽促生和根腐病防治效果图

图6为RH_Pc03的固氮作用效果图

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1：

生防菌RH_Pc03的分离与鉴定

1.1试验方法

1.1.1样品采集

采样地点位于四川农业大学雅安校区的玉米-大豆带状套作试验田，采样时间为2021年8月，大豆进入盛花期(R2时期)，田间大豆根腐病爆发期。采集对象为套作健康大豆根际土，采集样品由40株大豆根际土构成。采集范围围绕在大豆根际1～5mm内。样品于4℃条件下运输，存放于-20℃条件下，48h内完成微生物的分离。

1.1.2土壤细菌分离与保存

细菌的分离采用平板稀释涂布法。将10g土壤悬浮在带90mL无菌水的烧瓶中(加入6颗钢珠以便于破碎土壤颗粒制成均匀的悬液)。28℃，160r/min振荡30min，制成悬浮液。随后，将悬液静置30s，收集上清液进行连续稀释，得到10^-1～10^-5的稀释液。吸取100μL的稀释液在营养琼脂(NA，牛肉膏3g，酵母膏1g，胰蛋白糖5g，无水葡萄糖10g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH 7.0)上涂布均匀，随后转至28℃培养箱中培养2～5d。根据形态、颜色和边缘对细菌菌落进行编号和计数。从低浓度到高浓度的稀释板中挑选具有代表性的菌落类型，在新的NA平板上重新划线培养，直至获得纯培养。挑取单菌落于Luria-Bertani液体培养基(LB，牛肉膏3.0g，蛋白胨10g，NaCl 10g；水1000mL)中富集，28℃，160r/min摇培1～2d富集菌体，使用移液枪吸取富集的菌液与50％的甘油1:1(v/v)混匀，经液氮速冻后，在-80℃条件下保存。

1.1.3形态与分子鉴定

取新鲜的菌株，分别在NA培养基上划线，封口膜封好后，置于28℃的培养箱中培养，1～2d后取出培养皿，观察菌落形态、颜色、质地等基本特征。

DNA的提取采用裂解法，即挑取经纯净的单菌落溶于10μL的无菌水中，98℃，裂解10min，获得DNA模板。使用引物27F

(5‘-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3’)和1426R

(5‘-GGTACCTTGTACGACTT-3’)对16S rDNA基因片段进行菌落聚合酶链式反应。聚合酶链式反应的总体积为25μL，包括DNA模板1.0μL，正反引物(10μM)各1.0μL，2×TaqMasterMix 12.5μL，ddH₂O 9.5μL。PCR扩增参数为：95℃预热5min，95℃变性1min，55℃退火30s，72℃延伸1min，34个循环，72℃保持。用1.2％琼脂糖凝胶电泳法对扩增产物进行分析，并对纯化的产物进行测序。所得序列在NCBI数据库中进行比对，下载参考菌株基因序列，并使用软件MEGA 7.0，以邻位法(Neighbor-Joining)对生防菌株进行系统发育树的构建。

1.2试验结果

供试菌株为革兰氏阴性细菌，无芽孢，其在NA培养基上呈淡黄色，圆形，边缘光滑无锯齿，表面光滑有光泽，不皱缩，不透明，菌体微湿，具体见图1，图1为RH_Pc03在NA培养基上的菌落形态。

分子鉴定结果确定RH_Pc03为绿针假单胞菌Pseudomonas chlororaphis，是一种新鉴定的大豆根腐病生防菌株，具体见图2，图2为基于16s rDNA构建的RH_Pc03系统发育树。

实施例2RH_Pc03的环境耐受性

2.1试验方法

挑保存的RH_Pc03单菌落于LB液体培养基中富集，调节OD₆₀₀值为0.2～0.3，备用。

生长特性：取10μL上述RH_Pc03菌液加入含150mL LB的锥形瓶中，150r/min，28℃振荡培养，于0～72h每间隔6h取菌液，以无菌LB液体培养基为对照，测定OD₆₀₀值，依据OD₆₀₀值绘制RH_Pc03生长曲线。

耐盐特性：取10μL上述RH_Pc03菌液分别加入含0％、1％、2％、4％、6％、8％和10％NaCl的NA液体培养基中，150r/min、28℃振荡培养36h，以未接菌的NA液体培养基为对照，24h后观察并测定不同NaCl处理下RH_Pc03菌液OD₆₀₀值。

酸碱度耐受特性：取10μL上述RH_Pc03菌液加入pH为4、5、6、7、8、9、10的LB液体培养液。于150r/min，28℃下振荡培养36h后，以对应未接菌LB液体培养基作对照，测定各处理菌液OD₆₀₀值。根据OD₆₀₀值划分菌株生长情况，OD₆₀₀值＜0.4时认为菌株不能正常生长，OD₆₀₀值＞0.4时认为菌株可生长。

低营养耐受特性：为了模拟营养不良的环境，取10μL上述RH_Pc03菌液分别加入1/2、1/4、1/8、1/16、0的NA液体培养基中，150r/min，28℃下振荡培养36h后，测不同NA营养水平下RH_Pc03菌液OD₆₀₀值。

2.2试验结果

结果见图3，图3为RH_Pc03环境胁迫耐受能力曲线图。如图3A所示，RH_Pc03生长速度快，在LB液体培养中6h内进入指数生长时期，在24h内能富集到较高浓度，且72h后依然持续增长未衰亡。RH_Pc03具有较强的低营养胁迫耐受能力，在1/16NA营养条件下，菌株仍能生长，在1/4、1/2NA条件下，菌株能在短时间内富集到较高浓度(图3B)。RH_Pc03具有一定的盐胁迫耐受能力，当盐浓度在6％以下，菌株能正常生长(图3C)。RH_Pc03具有耐强酸弱碱的能力，当培养基pH＝5～9时，菌株具有较高的生长活性，但当pH＝10时，菌株生长严重受阻(图3D)。结果表明RH_Pc03具有生长速度快，耐强酸弱碱及低营养胁迫，且具有一定抗盐胁迫能力等特点，环境适应能力强。

实施例3生防菌RH_PC03的抑菌特性

3.1试验方法

采用平板对峙培养法测定RH_Pc03对5种大豆根腐病致病菌尖孢镰刀菌、禾谷镰刀菌、亚洲镰刀菌、腐皮镰刀菌和藤仓镰刀菌，以及对8种植物常见病原菌，包括凸脐蠕孢菌、平脐蠕孢菌、胶孢炭疽菌、灰梨孢菌、立枯丝核菌、灰葡萄孢菌、齐整小核菌、链格孢菌的抑菌拮抗作用。将各病原菌在PDA平板上活化培养3～5d，用打孔器打菌饼(直径5mm)，并接种于1/2胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA，胰酶15g，蛋白胨5g，氯化钠5g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH 7.0)的中央；将在LB液体培养基中活化培养后的RH_Pc03悬浮液在TSA平板上病原菌菌饼的两侧平行划线，以仅接种病原菌的TSA平板作为阴性对照。每个病原菌3个重复，实验独立进行3次。所有的培养皿均在25℃的黑暗中培养。待对照平板上病原菌的菌丝完全长满平板时，用游标卡尺测量病原菌的菌丝生长半径。菌丝生长抑制率(PI)计算如下：

其中，R1为对照病原真菌的菌丝生长半径，R2为与RH_Pc03对峙培养的病原菌菌丝生长半径。

表1 13种供试植物病原真菌

3.2试验结果

通过使用大豆根腐病强致病菌尖孢镰刀菌对生防细菌进行初步筛选，RH_Pc03对尖孢镰刀菌的菌丝生长抑制率达到66.50％，表现较强的生防潜力。进一步测定RH_Pc03的抑菌广谱特性，选取另外4种根腐病菌和8种其他植物病原菌测定其抑菌效果，结果表明，RH_Pc03对其余真菌的抑菌率达到49.47％～91.09％，拮抗活性强，抑菌范围广，是一株极具生防潜力的细菌菌株，复筛结果见表2和图4，图4为RH_Pc03与5种大豆根腐病菌和8种其他植物病菌的体外平板对峙效果。

表2RH_Pc03对常见植物病原真菌的菌丝生长抑制情况

实施例4生防菌株RH_Pc03对大豆根腐病的盆栽防效

4.1试验方法

4.1.1根腐病病原菌病土的制备

采用高粱粒接种法扩繁大豆根腐病强致病尖孢镰刀菌，具体操作如下：将实验室保存的尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum菌株在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA，马铃薯200g，无水葡萄糖10g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH 7.0)平板上培养5d。用打孔器取直径5mm的菌饼6个接种到装有预先灭菌好的高粱粒的250mL锥形瓶中，在25℃的黑暗中培养7～10天，每天轻轻摇动，确保病菌在高粱粒上均匀定殖且充分扩繁。将高粱粒扩繁体取出，放入25℃烘箱中烘干6h，随后通过粉碎机制备成粉末扩繁体。将粉末扩繁体与无菌营养土充分混合制成带病土，使得病原物的最终接种浓度为1×10⁵ppg/g土壤，以未接种镰刀菌的高粱粒粉末与无菌土混合作为对照。

4.1.3RH_Pc03处理

取大豆种子南豆12，依次用10％H₂O₂(V/V)表面消毒菌10min，无菌水冲洗三次，随后埋于装有无菌蛭石的催芽盒中(120mm×50mm)，待RH_Pc03处理。

将菌株RH_Pc03在LB液体培养基活化培养，150rpm，28℃摇培12h，5000rpm，离心15min后，收集菌体，用ddH₂O冲洗两次，调整OD₆₀₀值为0.5。除第一天用无菌水浇灌外，第二天和第三天均使用RH_Pc03菌悬液浇灌无菌蛭石中催芽的大豆种子，每天每颗种子浇灌1mL液体，以始终用等量无菌水浇灌的常规大豆种子催芽作为对照。第4天时，将催芽后的大豆种子移栽到装有4.1.1制备的接菌培养基质的小花盆中(70mm×120mm)，以未接菌培养基质为对照，并对每株幼苗补充10mL OD₆₀₀值为0.5的RH_Pc03悬浮液，未接种RH_Pc03处理用ddH₂O进行灌溉。

4.1.3盆栽防效

盆栽试验共设置5个处理：①“对照组”，常规催芽大豆种子播种于健康培养基质中；②“RH_Pc03”，经RH_Pc03处理催芽大豆种子后，播种于健康对照土中，用于明确RH_Pc03对大豆幼苗的促生作用；③“F.o”，常规无菌水催芽大豆种子后，播种于接种F.o的病土中；④“RH_Pc03+F.o”，种子预先经过RH_Pc03催芽处理后，播种于接种F.o的病土中，以检测RH_Pc03对F.o侵染的保护作用；⑤“F.o+RH_Pc03”，常规无菌水催芽大豆种子，播种于F.o病土中，待播种1d后(病原物成功侵染植株)，每株幼苗浇灌10mL的RH_Pc03菌悬液(OD₆₀₀＝0.8)，以测定RH_Pc03菌株对患病植株的治疗作用。所有的盆栽试验采用完全随机区组设计排列，在人工气候箱中于28℃，16h光照/8h黑暗交替培养。每个处理种植10盆，每盆2株大豆幼苗。每个盆栽每隔3天浇灌50mL蒸馏水保湿。2周后，将幼苗从盆栽中取出，洗去根部泥土。测定幼苗的生长指标，观察大豆根腐病症状，并根据0～4级病情分级计算病情指数及防效。大豆根腐病分级标准：0级：没有发病，植株正常生长；1级：主根为发病或轻微变成褐色，须根生长点发病，植株正常生长；2级：主根发病变黑，能继续生长，须根根尖变黑，植株正常生长；3级：主根严重变黑，不能继续生长，须根减少或不长，植株生长不良；4级：根部腐烂，植株不能继续生长甚至死亡。病情指数以及防效计算公式如下：

4.2试验结果

4.2.1RH_Pc03对大豆根腐病的防治效果

如图5所示，不同处理大豆幼苗生长和根系发病情况存在差异。与仅接种尖孢镰刀菌(F.o)相比，无论接种前(RH_Pc03+F.o)还是接种后(F.o+RH_Pc03)施用RH_Pc03都能在很大程度上缓解大豆幼苗发病情况。单独接种尖孢镰刀菌时，大豆根腐病的平均病情指数高达83.83％，而在病原菌侵染前或侵染后施用RH_Pc03处理，根腐病的病情指数降低26.75～40.73％，RH_Pc03保护处理组(RH_Pc03+F.o)和RH_Pc03治疗处理组(F.o+RH_Pc03)的根腐病防效分别达48.36％和31.34％(表4)，表明RH_Pc03对大豆根腐病具有保护和治疗双重作用，且保护作用更佳。

4.2.2RH_Pc03对大豆幼苗的促生效果

在各处理后14天时，观察大豆幼苗生长情况发现，与对照组相比，RH_Pc03催芽处理大豆种子后，大豆幼苗的根长、地上部分干重、地下部分干重均显著增加，分别增加了16.45％、31.29％和46.98％(P>0.05)。除了株高，接种RH_Pc03对大豆的茎粗和叶面积也一定促生作用(表5)。因此，RH_Pc03菌株具有根际促生菌(PGPR)的特点，能够促进大豆植株的根系生长发育及干物质的积累。

表4菌株RH_Pc03对大豆根腐病的防治效果

注：RH_PC03+F.o发病前生防细菌预处理种子，保护作用；F.o+RH_PC03发病后施用生防细菌，治疗作用；F.o清水对照。

表5菌株RH_Pc03处理后大豆幼苗的生长指标

实施例5RH_Pc03的固氮能力

5.1试验方法

试验共设置2个处理，①“Con”，清水对照；②“RH_Pc03”，土壤中施用生防细菌RH_Pc03。每个处理种植15盆(29cm×26cm)，每盆包含3株大豆幼苗(南豆12)。于播种后第4天大豆出苗后，采用灌根法进行RH_Pc03处理(OD₆₀₀＝0.5)，每盆浇灌1L经无菌水重悬的菌液，以无菌水灌根作为对照。处理30d后，待大豆生长进入V5时期，观察大豆的生长情况和根部结瘤能力。

5.2试验结果

结果如图6，图6为RH_Pc03灌根处理30天后大豆根系生长及根瘤菌形成情况。结果显示，与室内盆栽促生效果一致，RH_Pc03处明显促进了田间大豆生长，且提高了大豆根系根瘤数量。与对照相比，RH_Pc03处理后，大豆平均每株的根瘤重量为721.86mg，其结瘤量显著增加，从而有利于大豆固氮(表6)。

表6RH_Pc03对大豆根系结瘤的影响

前述本发明基本例及其各进一步选择例可以自由组合以形成多个实施例，均为本发明可采用并要求保护的实施例。本发明方案中，各选择例，与其他任何基本例和选择例都可以进行任意组合。本领域技术人员可知有众多组合。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一株大豆根腐病防病促生细菌绿针假单孢菌（Pseudomonas chlororaphis）RH_Pc03，其特征在于：大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03菌株于2022年09月01日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO：62754，分类命名为Pseudomonas chlororaphis。

2.如权利要求1所述的大豆根腐病防病促生细菌绿针假单孢菌（Pseudomonas chlororaphis）RH_Pc03在对大豆根腐病致病菌的拮抗中的应用，其特征在于，所述的大豆根腐病致病菌为尖孢镰刀菌、禾谷镰刀菌、亚洲镰刀菌、腐皮镰刀菌和藤仓镰刀菌。

3.如权利要求1所述的大豆根腐病防病促生细菌绿针假单孢菌（Pseudomonas chlororaphis）RH_Pc03在对引起玉米大斑病菌的拮抗中的应用，其特征在于，所述引起玉米大斑病菌为凸脐蠕孢菌、玉米小斑病的平脐蠕孢菌、柑橘炭疽病的胶孢炭疽菌、稻瘟病的灰梨孢菌、玉米纹枯病的立枯丝核菌、草莓灰霉病的灰葡萄孢菌、大豆白绢病的齐整小核菌、烟草赤星病的链格孢菌的病原菌。

4. 如权利要求1所述的大豆根腐病防病促生细菌绿针假单孢菌（Pseudomonas chlororaphis）RH_Pc03在促进大豆生长的应用，其特征在于：大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03能显著促进大豆生长，对大豆根系促生作用显著。

5. 如权利要求1所述的大豆根腐病防病促生细菌绿针假单孢菌（Pseudomonas chlororaphis）RH_Pc03的应用，其特征在于：大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03用于对大豆根腐病的防治。

6. 如权利要求1所述的大豆根腐病防病促生细菌绿针假单孢菌（Pseudomonas chlororaphis）RH_Pc03在对大豆幼苗促生中的应用，其特征在于：大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03具有根际促生菌的特点；RH_Pc03催芽处理大豆种子后，能显著增加大豆幼苗的根长、地上部分干重、地下部分干重。

7. 如权利要求1所述的大豆根腐病防病促生细菌绿针假单孢菌（Pseudomonas chlororaphis）RH_Pc03在大豆固氮中的应用，其特征在于：大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03用于大豆固氮，能显著提升大豆根系的结瘤效能。