CN109097303B - 多粘类芽孢杆菌及其芽孢悬浮液、微生物育苗基质及其制备方法 - Google Patents

多粘类芽孢杆菌及其芽孢悬浮液、微生物育苗基质及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种多粘类芽孢杆菌，它为多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa Pp‑HG15‑7，保藏号为CGMCC No.14470。本发明提供了一种多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，它包括无菌硫酸镁溶液和均匀分散在该无菌硫酸镁溶液中的上述多粘类芽孢杆菌的芽孢。本发明还提供一种含有上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液的微生物育苗基质及其制备方法。上述多粘类芽孢杆菌及其芽孢悬浮液可以防止疫霉菌，并防止病原菌侵入，因此，上述微生物育苗基质可以提高蔬菜的免疫能力、防治疫病的发生，促进植株生长，并显著提高根系活力，有利于提高产量。

Description

多粘类芽孢杆菌及其芽孢悬浮液、微生物育苗基质及其制备 方法
技术领域
本发明属于微生物领域，具体涉及一种多粘类芽孢杆菌及其芽孢悬浮液、微生物育苗基质及其制备方法。
背景技术
植物根际促生细菌（Plant Growth Promoting Rhizobacteria，简称PGPR）是指存在于植物根际环境中，通过产生植物激素、溶解无机磷等直接作用和竞争生态位、诱导植物系统抗性等间接作用促进植物生长的一类有益细菌。近年来大量研究表明，PGPR菌株能在植物根系及根际土壤有效定殖，具有显著的促生、防病和增产效果、同时调节植物根际土壤微生态环境、缓解生态污染等特性，成为有机生态农业可持续发展的有效途径之一，应用前景十分广阔。
疫病是由假菌界卵菌门疫霉属菌物引起的危害严重的土传病害。辣椒疫病是由Phytophthora capsici引起的一种毁灭性土传病害。该病自1918年首次在美国发现以来，现已在世界各辣椒种植区普遍发生。目前每年因辣椒疫病造成损失20%～30%，严重时高达70%～80%，甚至全田绝收，是辣椒生产上严重的病害之一。因其病原菌在土壤中存活时间长，并且随着作物连作病菌数逐年增加，危害越来越严重。目前在生产上尚缺乏有效的辣椒疫病抗病品种，辣椒疫病的防治主要依赖于化学防治，但病原菌对绝大多数化学农药已产生抗药性，因而目前生产上还缺乏有效的防治措施。有鉴于此，近年来利用拮抗微生物来防治辣椒疫病的研究比较活跃。利用有益PGPR菌株防治植物疫病，提高产量和品质，提高植物免疫能力，并调节土壤微生态是农业可持续发展的新途径。
育苗基质具有省时、省工、缓苗快等优点被广泛应用于蔬菜作物栽培。由于育苗基质会在移栽时随植株一起移栽至大田，因此在育苗基质中添加具有促生防病效果的微生物可以使微生物提早定殖在植物根际，并发挥促生防病的功效。
发明内容
有鉴于此，本发明确有必要提供一种多粘类芽孢杆菌及其芽孢悬浮液、微生物育苗基质及其制备方法，以克服上述问题。
为此，本发明提供一种多粘类芽孢杆菌，它为多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa Pp-HG15-7，已于2017年07月27日，保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No.14470。菌株的分类命名为多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa Pp-HG15-7。其中，该多粘类芽孢杆菌Pp-HG15-7菌株是从小麦根际分离、筛选出来的，并且可以采用TSA培养基进行培养。
本发明提供一种多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，它包括无菌硫酸镁溶液和均匀分散在该无菌硫酸镁溶液中的上述的多粘类芽孢杆菌的芽孢。
基于上述，在所述的多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液中，所述多粘类芽孢杆菌的芽孢的浓度为（1～2）×108 CFU/mL。
基于上述，所述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液主要是通过以下步骤制得：将多粘类芽孢杆菌菌种接种到发酵培养基上，并在28℃～32℃发酵培养78～90 h，得到多粘类芽孢杆菌发酵液；对所述多粘类芽孢杆菌发酵液进行离心处理，得到多粘类芽孢杆菌的芽孢；采用0.05~0.1mol/L的无菌硫酸镁溶液稀释所述多粘类芽孢杆菌的芽孢，获得所述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液。
基于上述，所述多粘类芽孢杆菌菌种是由从小麦根际分离、筛选出来的多粘类芽孢杆菌菌株经过TSA培养基培养得到的。
基于上述，所述发酵培养基的配方包括：豆渣22～28 g、NaCl 0.4～0.6 g、0.25mol/L KCl 8～12 mL、2mol/L MgCl2 4～6mL、1mol/L 葡萄糖18～22 mL和蒸馏水1000mL，且所述发酵培养基的pH值为6.8～7.2。
本发明还提供一种微生物育苗基质，它包括均匀混合的蔬菜育苗基质和上述的多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，所述蔬菜育苗基质和所述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液的质量比为（8～12） : 1。
基于上述，所述蔬菜育苗基质包括以下质量份的组分：草炭土1～3份、蛭石0.5～1.5份、珍珠岩0.5～1.5份和营养液0.5~1.5份。该蔬菜育苗基质中包含营养液，且该营养液的组分与所述发酵培养基的组分基本相同，不仅可以为后续培育的蔬菜苗提供养分，还为该蔬菜育苗基质中的多粘类芽孢杆菌的芽孢的存活和繁殖提供条件。
基于上述，所述营养液包括以下组分：豆渣22～28 g、NaCl 0.4～0.6 g、0.25mol/L KCl 8～12 mL、2mol/L MgCl2 4～6mL和水1000 mL。
本发明还提供一种上述微生物育苗基质的制备方法，其包括以下步骤：
从小麦根际分离、筛选出来的多粘类芽孢杆菌菌株经过TSA培养基培养得到的多粘类芽孢杆菌菌种；
将所述多粘类芽孢杆菌菌种接种到发酵培养基上，并在28℃～32℃发酵培养78～90 h，得到多粘类芽孢杆菌发酵液；对所述多粘类芽孢杆菌发酵液进行离心处理，得到多粘类芽孢杆菌的芽孢；采用0.05~0.1mol/L的无菌硫酸镁溶液稀释所述多粘类芽孢杆菌的芽孢，获得所述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，其中，所述发酵培养基的配方包括：豆渣22～28g、NaCl 0.4～0.6 g、0.25mol/L KCl 8～12 mL、2mol/L MgCl2 4～6mL、1mol/L 葡萄糖18～22 mL和蒸馏水1000 mL，且所述发酵培养基的pH值为6.8～7.2；
将所述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液与所述蔬菜育苗基质按照为1 : （8～10）的质量比均匀混合，制得所述微生物育苗基质。
本发明提供的多粘类芽孢杆菌Pp-HG15-7能强烈抑制疫霉菌的菌丝生长，抑制游动孢子囊和游动孢子的形成，抑制游动孢子囊和休止孢子的萌发；在辣椒、黄瓜、番茄等蔬菜生长过程中在植物根际具有良好的定殖能力，抑制根际土壤中的疫霉菌的浓度并防止病原菌侵入，因此，本发明提供的多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液具有良好的抑制蔬菜根际土壤中的疫霉菌的浓度并防止病原菌侵入的作用，从而使得本发明提供的含有该多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液的微生物育苗基质进行蔬菜育苗可以提高蔬菜的免疫能力、防治蔬菜疫病的发生，调节试验田中蔬菜根际土壤微生态以促进植株生长，并显著提高根系活力，有利于提高产量。
另外，上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液在制备过程中，所述多粘类芽孢杆菌Pp-HG15-7的菌种采用所述发酵培养基中在28℃～32℃发酵培养78～90 h，即可获得大量的多粘类芽孢杆菌Pp-HG15-7的芽孢，所以，含有多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液的蔬菜育苗基质的制备方法简单，易于操作。
附图说明
图1是本发明实施例1提供的多粘类芽孢杆菌Pp-HG15-7菌体的形态图。
图2是根据16Sr DNA测序结果构建的系统发育树，分支上的数字代表置信度。
图3是在试验条件（1）的辣椒苗培育过程中，育苗基质对辣椒苗的影响对比照片图。
图4是在试验条件（1）的辣椒苗培育过程中，育苗基质对辣椒苗期根系发育的对比照片图。
图5是在试验条件（1）的辣椒苗培育过程中，育苗基质对辣椒疫病的防治效果对比照片图。
图6是在试验条件（2）的栽培管理过程中，试验田在辣椒生育期的辣椒根际土壤中脲酶活性的对比图。
图7是在试验条件（2）的栽培管理过程中，试验田在辣椒生育期的辣椒根际土壤中磷酸酶活性的对比图。
图8是在试验条件（2）的栽培管理过程中，试验田在辣椒生育期的辣椒根际土壤中蔗糖酶活性的对比图。
图9是在试验条件（2）的栽培管理过程中，试验田在辣椒生育期的辣椒根际土壤中过氧化氢酶活性的对比图。
图10是在试验条件（2）的栽培管理过程中，试验田在辣椒生育期的中辣椒根际土壤速效氮含量的对比图。
图11是在试验条件（2）的栽培管理过程中，试验田在辣椒生育期的中辣椒根际土壤速效磷含量的对比图。
图12是在试验条件（2）的栽培管理过程中，试验田在辣椒生育期的中辣椒根际土壤有机质含量的对比图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
实施例1
本发明提供一种多粘类芽孢杆菌，它为多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxaPp-HG15-7，已于2017年07月27日，保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No.14470。菌株的分类命名为多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa。该多粘类芽孢杆菌是从小麦根际分离、筛选出来的，并且可以采用TSA培养基进行培养。具体如下：
菌株筛选 采集健康生长优越的小麦带土根部剪取1 g，用研钵研碎，并用无菌水稀释至10000倍，将稀释好得到的混合液均匀地涂在1/10 TSA培养基平板上，倒置放于30℃恒温培养箱中培养48 h，待菌株长出后，用无菌牙签挑取大小、颜色和形态不同的细菌菌落，在TSA培养基平板上划线分离纯化，纯化后的多粘类芽孢杆菌Pp-HG15-7菌株放-80℃超低温冰箱里保存。
菌株的鉴定 采用TSA培养基在28～32℃对上述纯化后的Pp-HG15-7菌株，该菌株在TSA培养基上菌落呈米白色，不规则形，表面湿润不透明，边缘不整齐。Pp-HG15-7是从小麦根际分离的革兰式阳性菌，利用电子显微镜观察Pp-HG15-7菌体直杆状，进行培养3～5天形成如图1所示的菌体，由图1可知：上述多粘类芽孢杆菌Pp-HG15-7是从小麦根际分离的革兰式阳性菌，菌体直杆状。该多粘类芽孢杆菌Pp-HG15-7在TSA培养基上菌落呈米白色，不规则形，表面湿润不透明，边缘不整齐。
生理生化特性 所述多粘类芽孢杆菌Pp-HG15-7的生长温度范围为4～50℃，最适生长温度为30℃，最适宜的pH值为6.5～7.5；耐盐浓度≤5%，可以利用蔗糖、葡萄糖、山梨醇作为其培养基的碳源，不能利用果糖和半乳糖作为其培养基的碳源；硝酸盐反应、淀粉水解和过氧化氢酶反应呈阳性，不产生硫化氢，明胶液化呈阴性。
16S rDNA鉴定 利用16S rDNA序列分析对本实施例1提供的菌株的种属进行鉴定，根据16S rDNA测序结果构建的系统发育树参见图2。所述16S rDNA序列全长为1461bp，与多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）的16S rDNA序列同源性达到99%，所以该菌株为多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa Pp-HG15-7。
实施例2
本实施例提供一种多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，它包括无菌硫酸镁溶液和均匀分散在该无菌硫酸镁溶液中的上述的多粘类芽孢杆菌Pp-HG15-7的芽孢。其中，在所述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液中，实施例1提供的所述多粘类芽孢杆菌Pp-HG15-7的芽孢的浓度为2×108 CFU/mL。
本实施例还提供一种上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液的制备方法，其包括以下步骤：从小麦根际分离、筛选出来的多粘类芽孢杆菌菌株经过TSA培养基培养得到的多粘类芽孢杆菌Pp-HG15-7菌种；将所述多粘类芽孢杆菌Pp-HG15-7菌种接种到发酵培养基上，并在32℃发酵培养78 h，得到多粘类芽孢杆菌发酵液，其中，所述发酵培养基的配方包括豆渣25g、NaCl 0.5 g、0.25mol/L KCl 10 mL、2mol/L MgCl2 5 mL、1mol/L 葡萄糖20 mL和蒸馏水1000 mL，且所述发酵培养基的pH值为7.0；对所述多粘类芽孢杆菌发酵液进行离心处理，得到多粘类芽孢杆菌Pp-HG15-7的芽孢；采用0.1 mol/L的无菌硫酸镁溶液稀释所述多粘类芽孢杆菌Pp-HG15-7的芽孢，获得上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液。
本实施例还提供一种包含上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液的微生物育苗基质，其包括均匀混合的蔬菜育苗基质和上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，所述蔬菜育苗基质和所述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液的质量比为8 : 1。其中，所述蔬菜育苗基质包括以下质量份的组分：草炭土3份、蛭石1.5份、珍珠岩1.5份和营养液1.5份。该营养液包括豆渣25 g、NaCl0.5 g、0.25mol/L KCl 10 mL、2mol/L MgCl2 5mL和水1000 mL。
本实施例还提供一种上述微生物育苗基质的制备方法，其主要是先制备上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，再将上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液与上述蔬菜育苗基质按照为1 : 8的质量比均匀混合即可。
实施例3
本实施例提供一种多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，该多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液与实施例2提供的多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液基本相同，不同之处在于：在本实施例提供的多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液中，实施例1提供的所述多粘类芽孢杆菌Pp-HG15-7的芽孢的浓度为1.5×108 CFU/mL。
本实施例还提供一种上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液的制备方法，其与实施例2提供的制备方法基本相同，不同之处在于：本实施例中采用的发酵培养基的配方包括豆渣22 g、NaCl 0.6 g、0.25mol/L KCl 12 mL、2mol/L MgCl2 6 mL、1mol/L 葡萄糖18 mL和蒸馏水1000 mL，且该发酵培养基的pH值为6.8；所述多粘类芽孢杆菌菌种的发酵温度为30℃，发酵时间为84 h；所述无菌硫酸镁溶液的浓度为0.08 mol/L。
本实施例还提供一种包含上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液的微生物育苗基质，其包括均匀混合的蔬菜育苗基质和上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，所述蔬菜育苗基质和所述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液的质量比为12 : 1。其中，所述蔬菜育苗基质包括以下质量份的组分：草炭土2.5份、蛭石1份、珍珠岩1份和营养液1份。该营养液包括22 g、NaCl 0.6g、0.25mol/L KCl 12 mL、2mol/L MgCl2 6 mL和水1000 mL。
本实施例还提供一种上述微生物育苗基质的制备方法，其主要是先制备上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，再将上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液与上述蔬菜育苗基质按照为1 : 9的质量比均匀混合制得的。
实施例4
本实施例提供一种多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，该多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液与实施例2提供的多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液基本相同，不同之处在于：在本实施例提供的多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液中，实施例1提供的所述多粘类芽孢杆菌Pp-HG15-7的芽孢的浓度为1×108 CFU/mL。
本实施例还提供一种上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液的制备方法，其与实施例2提供的制备方法基本相同，不同之处在于：本实施例中，所述多粘类芽孢杆菌菌种的发酵温度为30℃，发酵时间为84 h。
本实施例还提供一种包含上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液的微生物育苗基质，其包括均匀混合的蔬菜育苗基质和上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，所述蔬菜育苗基质和所述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液的质量比为10 : 1；其中，所述蔬菜育苗基质包括以下质量份的组分：草炭土2份、蛭石1份、珍珠岩1份、营养液0.5份；所述营养液的组分与实施例2中采用的营养液的组分相同。
本实施例还提供一种上述微生物育苗基质的制备方法，其主要是先制备上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，再将上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液与上述蔬菜育苗基质按照为1 : 10的质量比均匀混合制得的。
实施例5
本实施例提供一种多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，该多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液与实施例2提供的多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液基本相同，不同之处在于：在本实施例提供的多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液中，实施例1提供的所述多粘类芽孢杆菌Pp-HG15-7的芽孢的浓度为1.5×108 CFU/mL。
本实施例还提供一种上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液的制备方法，其与实施例2提供的制备方法基本相同，不同之处在于：本实施例中采用的发酵培养基的配方包括豆渣28 g、NaCl 0.6 g、0.25mol/L KCl 8 mL、2mol/L MgCl2 4 mL、1mol/L 葡萄糖22 mL和蒸馏水1000 mL，且所述发酵培养基的pH值为7.2；所述多粘类芽孢杆菌菌种的发酵温度为28℃，发酵时间为90 h。
本实施例还提供一种包含上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液的微生物育苗基质，其包括均匀混合的蔬菜育苗基质和上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，所述蔬菜育苗基质和所述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液的质量比为12 : 1。其中，所述蔬菜育苗基质包括以下质量份的组分：草炭土2.5份、蛭石1.2份、珍珠岩1.2份和营养液1份。该营养液包括豆渣28 g、NaCl 0.6 g、0.25mol/L KCl 8 mL、2mol/L MgCl2 4 mL和蒸馏水1000 mL。
本实施例还提供一种上述微生物育苗基质的制备方法，其主要是先制备上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，再将上述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液与上述蔬菜育苗基质按照为1 : 12的质量比均匀混合制得的。
性能试验
下面以实施例4提供的微生物育苗基质为例，利用两种不同的育苗基质培育辣椒来试验微生物育苗基质的性能。
育苗基质 待测样品：实施例4提供的微生物育苗基质；
对比样品：蔬菜育苗基质，其包括以下质量份的组分：草炭土2份、蛭石1份、珍珠岩1份和营养液0.5份。
试验条件（1）辣椒苗的培育：培育条件为常规育苗条件，将辣椒种子分别播种在上述两种育苗基质中，然后在25℃～28℃自然光周期的温室内培育60 d，得到两种辣椒苗；在此期间，对辣椒出苗、苗期生长状况、辣椒苗叶绿素含量、根系活力等情况进行测试，并在人工接种条件下测定辣椒苗对疫病的抗病程度。
试验条件（2）栽培管理：将（1）得到的两种辣椒苗进行移栽定植，然后按常规方法进行管理，试验田土壤的全氮为0.171 g•kg-1、全磷为38.85 g•kg-1、全钾为8.01 g•kg-1、有机质为19.88 g•kg-1、移栽后共施3次追肥，追肥施腐殖酸水溶肥；在此期间，对辣椒现蕾期地上部生长状况、辣椒果实产量及品质、试验田辣椒根际土壤中的各种酶的活性及微生物数量、试验田根际土壤中的速效氮磷含量和有机质含量进行测试。
（一）在采用上述试验条件（1）的过程中，测试上述两种育苗基质对辣椒出苗的影响，测试结果如下表1所示；从下表1中可以看出：利用本发明实施例提供的微生物育苗基质培育的辣椒的出苗势和出苗指数明显高于现有的蔬菜育苗基质，而且出苗更加整齐。
表1 育苗基质对辣椒出苗的影响
Figure 704724DEST_PATH_IMAGE001
（二）在采用上述试验条件（1）的过程中，测试上述两种育苗基质对辣椒苗期生长、叶绿素含量及根系活力的影响，测试结果如表2、表3、图3和图4所示。
表2 育苗基质对辣椒苗期生长的影响
Figure DEST_PATH_IMAGE003A
表3 辣椒苗叶绿素含量和根系活力
Figure 497230DEST_PATH_IMAGE004
从表2和图3中可以看出：在其他条件相同的条件下，利用本发明实施例提供的微生物育苗基质培育的辣椒苗的株高、茎粗、地上鲜重、地上部干重、地下鲜重、地下部干重以及壮苗指数都明显高于采用对比样品现有的蔬菜培养基培育的辣椒苗的，由此可见利用本发明实施例提供的微生物育苗基质能够显著促进辣椒苗生长。从表3和图4中可以看出：利用本发明实施例提供的微生物育苗基质培育的辣椒苗的叶绿素含量和根系活力明显高于利用对比样品的培育的辣椒苗的，所以，利用本发明实施例提供的微生物育苗基质能够明显提高辣椒苗的叶绿素含量和增强辣椒苗的根系活力。
（三）在采用上述试验条件（1）的过程中，人工接菌的条件下测试上述两种育苗基质上培育的辣椒苗对疫病的抗病效果，测试结果如下表4和图5所示。
表4 育苗基质对辣椒疫病的防治效果
Figure 339284DEST_PATH_IMAGE005
从上表4和图5中可以看出：利用本发明实施例提供的微生物育苗基质培育的辣椒苗的发病率远低于利用对比样品培育的辣椒苗的发病率，所以，本发明实施例提供的微生物育苗基质对辣椒疫病有非常好的抗病效果。
（四）在采用上述试验条件（2）的过程中，测试上述两种育苗基质对辣椒现蕾期地上部生长的影响，测试结果如下表5所示。
表5 育苗基质对辣椒现蕾期地上部生长的影响
Figure 295346DEST_PATH_IMAGE006
从上表5可知：利用待测样品培育的辣椒苗在移栽后，其在现蕾期的地上株高、茎粗以及分枝数明显比采用对比样品培育的辣椒苗移栽后的高，由此可见，本发明提供的微生物育苗基质能够显著提高辣椒在现蕾期的生长。
（五）在采用上述试验条件（2）的过程中，测试上述两种育苗基质对辣椒现蕾期地上部生长的影响，测试结果如下表6和表7所示。
表6 育苗基质对辣椒果实产量的影响
Figure 109718DEST_PATH_IMAGE007
表7 育苗基质对辣椒果实品质相关指标的影响
Figure 994497DEST_PATH_IMAGE008
从表6和表7可知：以待测样品培育的辣椒苗比对比样品培育的辣椒苗作为移栽定植植株获得的辣椒果实产量提高19.50%，而且辣椒果实中的蛋白质含量、可溶性糖含量以及维生素C含量也增加非常明显，所以，本发明提供的微生物育苗基质能够显著提高辣椒果实的产量和品质。
（六）在采用上述试验条件（2）的过程中，测试上述两种育苗基质对所述试验田在辣椒各生育期的根际土壤中的脲酶、磷酸酶、蔗糖酶和过氧化氢酶的活性，细菌、放线菌和真菌数量，速效氮含量，速效磷含量及有机质含量。测试结果分别如图6至图12和表8所示。
表8 育苗基质对试验田在辣椒各生育期根际土壤微生物的影响
Figure 261530DEST_PATH_IMAGE009
由图6至图12和表8可知：本发明实施例提供的微生物育苗基质能够显著提高试验田在辣椒各生育期的根际土壤中的脲酶、磷酸酶、蔗糖酶和过氧化氢酶活性；增加根际土壤细菌和放线菌的数量，减少真菌数量，如减少根际土壤疫霉菌和腐霉菌的数量；增加根际土壤中速效氮、磷及有机质的含量；从而提高辣椒的免疫能力、防治辣椒病疫，调节试验田在辣椒各生育期根际土壤微生态。
从上面的各个试验可以看出：本发明实施例提供的微生物育苗基质进行蔬菜育苗可以提高蔬菜的免疫能力、防治蔬菜疫病的发生，调节试验田中蔬菜根际土壤微生态以促进植株生长，并显著提高根系活力，有利于提高产量；由此可以证明：本发明实施例提供的多粘类芽孢杆菌及其芽孢悬浮液有良好的抑制蔬菜根基土壤中的疫霉菌的浓度并防止病原菌侵入的作用。
最后应当说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制；尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者对部分技术特征进行等同替换；而不脱离本发明技术方案的精神，其均应涵盖在本发明请求保护的技术方案范围当中。

Claims (10)

1.一种多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa），其特征在于，其为多粘类芽孢杆菌Pp-HG15-7，保藏号为CGMCC No.14470。
2.一种多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，其特征在于，它包括无菌硫酸镁溶液和均匀分散在该无菌硫酸镁溶液中的权利要求1所述的多粘类芽孢杆菌的芽孢。
3.根据权利要求2所述的多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，其特征在于，所述多粘类芽孢杆菌的芽孢的浓度为（1～2）×108 CFU/mL。
4.根据权利要求2或3所述的多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，其特征在于，它由以下步骤制得：将多粘类芽孢杆菌菌种接种到发酵培养基上，并在28℃～32℃发酵培养78～90 h，得到多粘类芽孢杆菌发酵液；对所述多粘类芽孢杆菌发酵液进行离心处理，得到多粘类芽孢杆菌的芽孢；采用0.05~0.1mol/L的无菌硫酸镁溶液稀释所述多粘类芽孢杆菌的芽孢，获得所述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液。
5.根据权利要求4所述的多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，其特征在于，所述多粘类芽孢杆菌菌种是由多粘类芽孢杆菌菌株经过TSA培养基培养得到的。
6.根据权利要求4所述的多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，其特征在于，所述发酵培养基的配方包括：豆渣22～28 g、NaCl 0.4～0.6 g、0.25mol/L KCl 8～12 mL、2mol/L MgCl2 4～6mL、1mol/L 葡萄糖18～22 mL和蒸馏水1000 mL，且所述发酵培养基的pH值为6.8～7.2。
7.一种微生物育苗基质，其特征在于，它包括均匀混合的蔬菜育苗基质和权利要求2～6任一项所述的多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，所述蔬菜育苗基质和所述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液的质量比为（8～12） : 1。
8.根据权利要求7所述的微生物育苗基质，其特征在于，所述蔬菜育苗基质包括以下质量份的组分：草炭土1～3份、蛭石0.5～1.5份、珍珠岩0.5～1.5份和营养液0.5~1.5份。
9.根据权利要求8所述的微生物育苗基质，其特征在于，所述营养液包括以下组分：豆渣22～28 g、NaCl 0.4～0.6 g、0.25mol/L KCl 8～12 mL、2mol/L MgCl2 4～6mL和水1000mL。
10.一种权利要求7～9任一项所述的微生物育苗基质的制备方法，其特征在于，它包括以下步骤：
多粘类芽孢杆菌菌株经过TSA培养基培养得到的多粘类芽孢杆菌菌种；
将所述多粘类芽孢杆菌菌种接种到发酵培养基上，并在28℃～32℃发酵培养78～90h，得到多粘类芽孢杆菌发酵液；对所述多粘类芽孢杆菌发酵液进行离心处理，得到多粘类芽孢杆菌的芽孢；采用0.05~0.1mol/L的无菌硫酸镁溶液稀释所述多粘类芽孢杆菌的芽孢，获得所述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液，其中，所述发酵培养基的配方包括：豆渣22～28 g、NaCl 0.4～0.6 g、0.25mol/L KCl 8～12 mL、2mol/L MgCl2 4～6mL、1mol/L葡萄糖18～22mL和蒸馏水1000 mL，且所述发酵培养基的pH值为6.8～7.2；
将所述多粘类芽孢杆菌芽孢悬浮液与所述蔬菜育苗基质按照为1 : （8～10）的质量比均匀混合，制得所述微生物育苗基质。
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