CN115607506B - 含重组人碱性成纤维细胞生长因子无水膏剂制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了含重组人碱性成纤维细胞生长因子无水膏剂制备方法，包括以下步骤：将甘油添加到冻干粉中，并且混合/搅拌直到所有粉末颗粒都与甘油混合均匀，形成面团状糊剂；然后将丙二醇添加到上述糊剂中，并混合/搅拌，以形成最终的，可流动的膏剂；本发明涉及的无水膏剂较好的解决了在水溶液或水凝胶内无法长期维持稳定，容易失活，另外，溶液剂使用在创面上，不易长期留存，提高了使用频率，上述存在的问题，既方便使用，又便于储存，而且膏剂相较溶液，可以更长时间停留在创面处，提高治疗效果。

Description

含重组人碱性成纤维细胞生长因子无水膏剂制备方法
技术领域
本发明涉及生长因子膏剂技术领域，具体涉及含重组人碱性成纤维细胞生长因子无水膏剂制备方法。
背景技术
碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）是目前广泛应用于伤口愈合领域临床治疗的生物制品，现有产品多为冻干制剂、溶液剂或凝胶剂等。冻干制剂在使用前需溶解在生理盐水或注射用水里，较为耗费时间。溶液剂或凝胶剂虽然试用便利，但是因为含有大量水分，蛋白成分在其内保存稳定性存在问题，容易失活，对储存条件有较严格的要求。本发明的目的是提供一种用于制备具有治疗或药用价值的糊状可涂抹的bFGF组合物，其可以容易地运用于需要的部位。该制备方法得到的是一种不含水的膏剂，里面添加的是疏水性液体。疏水性液体可以提供bFGF的流动性，使保持bFGF在患处使用的功能。该膏剂易于使用、稳定且具有效的创面修复功能。
Rh-bFGF在水溶液或水凝胶内无法长期维持稳定，容易失活。另外，溶液剂使用在创面上，不易长期留存，提高了使用频率，降低了治疗效果，也提升了使用成本。
发明内容
针对现有技术的缺陷，本发明的目的是提供含重组人碱性成纤维细胞生长因子无水膏剂制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
本发明解决技术问题采用如下技术方案：
本发明提供了含重组人碱性成纤维细胞生长因子无水膏剂制备方法，包括以下步骤：
将甘油添加到冻干粉中，并且混合/搅拌直到所有粉末颗粒都与甘油混合均匀，形成面团状糊剂；然后将丙二醇添加到上述糊剂中，并混合/搅拌，以形成最终的，可流动的膏剂。
优选地，所述冻干粉包括以下重量份原料：
重组人碱性成纤维细胞生长因子 20000-50000IU、蛋白保护剂 5-10mg 和稀释剂50-100mg。
优选地，所述蛋白保护剂选自人血白蛋白、甘露醇和聚乙二醇，优选人血白蛋白。
优选地，所述稀释剂选自甘露醇、乳糖醇或葡萄糖。
优选地，所述冻干粉的制备工艺为：将重组人碱性成纤维细胞生长因子、蛋白保护剂和稀释剂用注射用水溶解后，用 0.22μm 的滤膜无菌过滤，分装于西林瓶中，装盘后送入冻干机中，先将样品在 -20℃--40℃预冻 2-5 小时，然后开启冷凝器，开启真空系统，开始升温升华，完毕后在 15℃-40℃干燥 4-8 小时，即得。
优选地，所述混合/搅拌的转速为550-1000r/min。
优选地，所述丙二醇添加到糊剂后还加入羟基磷灰石复合改性蒙脱土，加入量为丙二醇总量5-10%。
优选地，所述羟基磷灰石复合改性蒙脱土的制备方法为：
S01：将羟基磷灰石按照重量比1:6加入到十二烷基硫酸钠溶液中，然后加入羟基磷灰石总量5-10%的盐酸，搅拌均匀；
S02：随后加入羟基磷灰石2-5%的壳聚糖、羟基磷灰石1-5%的羟基乙酸，搅拌充分，得到羟基磷灰石复合液；
S03：将蒙脱土送入到350-400℃下热处理10-20min，随后以1-5℃/min的速率将至室温，然后送入到4-6倍的盐酸溶液中，搅拌均匀；
S04：随后加入蒙脱土总量5-10%的羟乙基纤维素、1-5%的氯化镧，搅拌充分，再水洗、干燥；
S05：将S04产物按照重量比1:5送入到S02中，继续反应充分，最后水洗、干燥，得到羟基磷灰石复合改性蒙脱土。
优选地，所述十二烷基硫酸钠溶液、盐酸溶液的质量分数分别为10-20%、5-10%。
优选地，所述甘油、冻干粉、丙二醇的物质质量比为1.2：1：0.5。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
本发明涉及的无水膏剂较好的解决了上述存在的问题，既方便使用，又便于储存，而且膏剂相较溶液，可以更长时间停留在创面处，提高治疗效果；涉及的无水膏剂包含重组人碱性成纤维细胞生长因子（rh-bFGF），一种或几种有机分散剂，如甘油、丙二醇、大豆油等。将上述活性成分和分散剂按一定比例混合制成均匀膏体即可。在本公开的任何方面的一些实施例中，疏水分散剂选自包含一种或多种的油：大豆油、橄榄油、胆固醇油酸酯、玉米油、三油酸甘油酯、红花油、角鲨烯、角鲨烷、矿物油和十二烷，以及它们的任何混合物；使用无水有分散剂，将rh-bFGF悬浮于分散剂中制成膏体。活性蛋白在无水环境下可以稳定保存较长时间，极大降低了储存和运输的成本，也保证了产品的药效。同时，膏剂可以在一段时间内留存于创面，并缓释期内的活性成分，降低了使用频率和成本。
附图说明
图1是3种处方制剂在25℃的活性稳定性示意图；
图2是各组豚鼠烫伤创面愈合结果比较图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
静态阶段粘度越高膏体越稳定
术语“疏水液体”、“疏水溶剂”、“疏水分散剂”、“疏水介质”、“油”、“油性液体”、“油性介质”、“非极性溶剂”、“非极性液体”或“疏水性液体”（也可称为“亲脂性液体”），其在本文中可互换使用，是在室温左右为液体且通常不可溶解的物质，或具有有限的溶于水溶液，溶于非极性有机溶剂。
油性液体具有油性构成并且包括例如天然和合成制备的油如橄榄油、其他植物和动物衍生的油，以及无机油如硅油和/或其他矿物油。
非限制性类型的疏水液体包括有机物质，例如烷烃，特别是长链烷烃、环烷烃，包括双环化合物、芳基(取代的和未取代的)和脂肪酸。
其他非限制性类型的疏水液体包括肉豆蔻酸胆固醇酯、月桂酸胆固醇酯、十二烷酸胆固醇酯、棕榈酸胆固醇酯、花生四烯酸胆固醇酯、山萮酸胆固醇酯、亚油酸胆固醇酯、亚麻酸胆固醇酯、油酸胆固醇酯、玉米油酸胆固醇酯、油酸胆固醇油、橄榄油油酸甘油酯/胆固醇油酸酯混合物、红花油、角鲨烯、角鲨烷、十二烷及其任何混合物，例如橄榄油和胆固醇油酸酯，以及甘油三油酸酯/胆固醇油酸酯混合物。
请参阅图1-2，本实施例的含重组人碱性成纤维细胞生长因子无水膏剂制备方法，包括以下步骤：
将甘油添加到冻干粉中，并且混合/搅拌直到所有粉末颗粒都与甘油混合均匀，形成面团状糊剂；然后将丙二醇添加到上述糊剂中，并混合/搅拌，以形成最终的，可流动的膏剂。
本实施例的冻干粉包括以下重量份原料：
重组人碱性成纤维细胞生长因子 20000-50000IU、蛋白保护剂 5-10mg 和稀释剂50-100mg。
本实施例的蛋白保护剂选自人血白蛋白、甘露醇和聚乙二醇，优选人血白蛋白。
本实施例的稀释剂选自甘露醇、乳糖醇或葡萄糖。
本实施例的冻干粉的制备工艺为：将重组人碱性成纤维细胞生长因子、蛋白保护剂和稀释剂用注射用水溶解后，用 0.22μm 的滤膜无菌过滤，分装于西林瓶中，装盘后送入冻干机中，先将样品在 -20℃--40℃预冻 2-5 小时，然后开启冷凝器，开启真空系统，开始升温升华，完毕后在 15℃-40℃干燥 4-8 小时，即得。
本实施例的混合/搅拌的转速为550-1000r/min。
本实施例的丙二醇添加到糊剂后还加入羟基磷灰石复合改性蒙脱土，加入量为丙二醇总量5-10%。
本实施例的羟基磷灰石复合改性蒙脱土的制备方法为：
S01：将羟基磷灰石按照重量比1:6加入到十二烷基硫酸钠溶液中，然后加入羟基磷灰石总量5-10%的盐酸，搅拌均匀；
S02：随后加入羟基磷灰石2-5%的壳聚糖、羟基磷灰石1-5%的羟基乙酸，搅拌充分，得到羟基磷灰石复合液；
S03：将蒙脱土送入到350-400℃下热处理10-20min，随后以1-5℃/min的速率将至室温，然后送入到4-6倍的盐酸溶液中，搅拌均匀；
S04：随后加入蒙脱土总量5-10%的羟乙基纤维素、1-5%的氯化镧，搅拌充分，再水洗、干燥；
S05：将S04产物按照重量比1:5送入到S02中，继续反应充分，最后水洗、干燥，得到羟基磷灰石复合改性蒙脱土。
本实施例的十二烷基硫酸钠溶液、盐酸溶液的质量分数分别为10-20%、5-10%。
rh-bFGF水溶液剂（用作效果比对）的配方及制备工艺
本发明所用的重组人碱性成纤维细胞生长因子水溶液剂，包括有重组人碱性成纤维细胞生长因子（rh-bFGF）原液0.1%-100%（W/W），可用药的辅料0.1%-100%（W/W）；
所述原液，其组成为：有效治疗量的重组人碱性成纤维细胞生长因子
共制100瓶；
所述可用药的辅料：可由以下物质的一种或几种构成：
右旋糖酐40、海藻糖（50g）
上述药液的制备方法为：将处方量的肝素钠（30g）、rh-bFGF（10g）混合，经0.22m滤膜无菌过滤；将处方量的甘露醇（25g）、海藻糖（50g）溶于注射用水加至1000ml，经0.22m滤膜无菌过滤。将上述两种无菌液混合均匀分装到无菌玻璃瓶内即得。
2、rh-bFGF普通凝胶剂（用作效果比对）的配方及制备工艺
本发明所用的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶，包括有重组人碱性成纤维细胞生长因子（rh-bFGF）原液0.1%-100%（W/W），可用药的辅料0.1%-100%（W/W），
所述原液，其组成为：
有效治疗量的重组人碱性成纤维细胞生长因子（rh-bFGF）0.01%-1%（g/g） 10g
NaCl            0.01%-20%
磷酸盐缓冲液    2mMol-200 mMol
注射用水适量   （加至1000ml）
所述可用药的辅料可选取以下得物质：卡波姆940NF、透明质酸钠、海藻糖、甘露醇、右旋糖酐40、肝素钠。
上述凝胶的制备方法为：
称卡波姆940NF 10g于1L烧杯中，加入250ml注射用水，使其自然溶胀，溶胀后加入4%氢氧化钠，边加边搅拌，调pH至7.0（约140ml），得到最大粘稠度基质（Ⅰ）。
称透明质酸钠2.5g于500ml烧杯中，加入400ml注射用水使其自然溶胀成胶溶液（Ⅱ）。
称右旋糖酐2.5g于500ml烧杯中，加入注射用水200ml，必要时加热使其溶解成右旋糖酐溶液，用0.22m滤膜无菌过滤（Ⅲ）。
把（Ⅱ）加入（Ⅰ）中，搅拌成凝胶基质（Ⅳ）。
把（Ⅳ）高压灭菌（121℃，15min，0.10Mpa），灭菌后自然放冷。
将bFGF、肝素钠按3:1比例混合，过滤除菌，并加入到（Ⅲ）中，成溶液（Ⅴ）。
把溶液（Ⅴ）加入到灭菌后得凝胶基质（Ⅳ）中，边加边搅拌，此过程温度不得超过37℃，并补加灭菌注射用水至1000ml成bFGF凝胶半成品。
使用药用铝管，无菌操作进行分装。
本实施例的甘油、冻干粉、丙二醇的物质质量比为1.2：1：0.5。
制剂效果试验验证
一、 rh-bFGF水溶液剂、rh-bFGF普通凝胶剂、rh-bFGF无水膏剂的质量控制及稳定性研究
1.长期试验
将rh-bFGF水溶液剂、rh-bFGF普通凝胶剂、rh-bFGF无水膏剂样品装于内涂层封口铝管中，25℃恒温室存放，分别于第0个月、3个月、6个月、9个月、12个月、15个月、18个月、21个月、24个月末抽样检测其相对活性（%）。
从长期试验来看，3种处方药剂在25℃存放的相对活性均随存放时间的延长呈降低的趋势，但不同的是，rh-bFGF无水膏剂的相对活性较rh-bFGF水溶液剂和rh-bFGF普通凝胶剂降低的更缓慢，在25℃存放24个月，其相对活性始终保持在90%以上的水平，而rh-bFGF水溶液剂和rh-bFGF普通凝胶剂在25℃存放24个月后，两者的相对活性则均低于60%。由此可见，rh-bFGF无水膏剂的稳定性更好（见图1），可用于工业化生产与应用。
形成这种差异的原因可能是，糖类、多元醇、氨基酸及其衍生物、无机盐、甘油、多聚物如聚乙二醇（PEG）等一般被称为蛋白质的共溶剂。生化学家常常使用高浓度（1-4mol）共溶剂来稳定蛋白质或细胞器。过去，其稳定机理一直被认为是在蛋白质分子表面形成一个保护壳。近几年来的研究表明，共溶剂对蛋白质的保护作用机制实际上是共溶剂的加入改变了溶液的热力学性质，使得天然蛋白质的稳定性得到增强，理论上称优先排阻作用。共溶剂从蛋白质表面的优先排阻并不是说共溶剂分子绝对不能渗透到蛋白质表面并与之结合，而是在蛋白质表面完全水化和共溶剂完全结合之间建立起一种平衡。
甘油则除了对蛋白质的非极性表面有很好的稳定作用外，还能诱导蛋白亚基的自我聚合并具有减轻器壁吸附和防冻的作用。
二、本发明含rh-bFGF无水膏剂促进表皮细胞生长及烫伤创面愈合的试验研究
1、试验材料
1.1试验动物：SD大鼠，雌雄各半，体重280-300g；
1.2试验药物：本发明实施例3制备的含重组人碱性成纤维细胞生长生长因子无水膏剂；不含 rb-b FGF 的生理盐水。
1.3试验组别：用药组：向清创后的创面直接涂抹含rh-bFGF无水膏剂；
对照组：向清创后的创面直接涂抹不含 rb-b FGF 的生理盐水。
2、试验方法
动物烫伤创面模型：豚鼠在试验期间均正常饮水，普通饮食，于试验前将豚鼠背部脱毛。
用80℃恒温水通过一玻璃圆筒分别烫伤豚鼠背部皮肤，造成Ⅱ度烫伤模型。豚鼠造模后
随机分为用药组和对照组，每组各10只。用药组和对照组每日分别给予相应药物4次，单独饲养，连续14天。观察创面愈合情况，通过对伤口面积的测定来记录皮肤结痴时间和创面愈合时间。
伤口愈合率=1-测试时间伤口面积/初始伤口面积
3、试验结果
图2结果表明：本发明含重组人碱性成纤维细胞生长因子无水膏剂可明显降低豚鼠背部烫伤皮肤结痴及愈合的时间，且愈合程度较对照组更明显，说明本发明含重组人碱性成纤维细胞生长因子无水膏剂对烫伤创面愈合有显著促进作用。
三、本发明含rh-bFGF无水膏剂治疗烧糖尿病创面的试验研究
1、试验材料
1.1试验动物：40只雄性C57BL/6J小鼠，SPF级，七八周龄，体质量约20 g，用于制备糖尿病创面模型；
1.2试验药物：本发明实施例3制备的含重组人碱性成纤维细胞生长生长因子无水膏剂；不含 rb-bFGF 的生理盐水。
2、试验组别：糖尿病创面bFGF无水制剂治疗组：向清创后的创面直接涂抹含rh-bFGF无水膏剂；
糖尿病创面空白对照组：向清创后的创面直接涂抹不含 rb-bFGF 的生理盐水。
3、试验方法
构建糖尿病小鼠模型：取七八周龄雄性C57BL/6J小鼠40只，禁食12 h后，腹腔注射链脲佐菌素(100 mg/kg)，连续注射2 d。2周后用全自动血糖监测仪测定血糖，当连续2 d的血糖水平>16.7 mmol/L定义为糖尿病小鼠造模成功。
构建糖尿病小鼠创面模型及给药：糖尿病造模成功后制作创面模型，以异氟烷呼吸麻醉小鼠，在其背部应用打孔器制造2个直径6 mm的对称创面。每只小鼠单笼饲养，便于长期创面观察。
创面大体形态及愈合率的观察：每天观察小鼠创面恢复情况，直到创面完全愈合为止。于第0,7,14天测量创面面积，用Image J软件计算创面愈合率。
4、试验结果
由表1可知:和空白对照组相比，使用本发明无水膏剂的小鼠创面愈合程度更好。
表1. bFGF无水制剂治疗组和空白对照组糖尿病模型创面愈合情况（%）
组别 n 0级 1级 2级 3级
糖尿病创面bFGF无水制剂治疗组 20 11 6 3 0
糖尿病创面空白对照组 20 2 3 7 8
无水膏剂较好的解决了上述存在的问题，既方便使用，又便于储存，而且膏剂相较溶液，可以更长时间停留在创面处，提高治疗效果；同时，膏剂可以在一段时间内留存于创面，并缓释期内的活性成分，降低了使用频率和成本。
本实施例的羟基磷灰石复合改性蒙脱土的制备方法为：
S01：将羟基磷灰石按照重量比1:6加入到十二烷基硫酸钠溶液中，然后加入羟基磷灰石总量5-10%的盐酸，搅拌均匀；
S02：随后加入羟基磷灰石2-5%的壳聚糖、羟基磷灰石1-5%的羟基乙酸，搅拌充分，得到羟基磷灰石复合液；
S03：将蒙脱土送入到350-400℃下热处理10-20min，随后以1-5℃/min的速率将至室温，然后送入到4-6倍的盐酸溶液中，搅拌均匀；
S04：随后加入蒙脱土总量5-10%的羟乙基纤维素、1-5%的氯化镧，搅拌充分，再水洗、干燥；
S05：将S04产物按照重量比1:5送入到S02中，继续反应充分，最后水洗、干燥，得到羟基磷灰石复合改性蒙脱土。
本实施例的十二烷基硫酸钠溶液、盐酸溶液的质量分数分别为10-20%、5-10%。
对比例1：
与羟基磷灰石复合改性蒙脱土制备方法不同是，未加入蒙脱土。
对比例2：
与羟基磷灰石复合改性蒙脱土制备方法不同是，未加入氯化镧。
对比例3：
与羟基磷灰石复合改性蒙脱土制备方法不同是，采用羟基磷灰石、蒙脱土按照制备方法的配比直接混合。
对比例4：
与羟基磷灰石复合改性蒙脱土制备方法不同是，未加入羟基乙酸。
从对比例1-4中可看出，羟基磷灰石复合改性蒙脱土制备方法不同，相对愈合率性能有变差趋势，同时加入本发明的方法制备的羟基磷灰石复合改性蒙脱土，性能有显著改进趋势，同时采用羟基磷灰石、蒙脱土按照制备方法的配比直接混合，性能改进不明显，只有采用本发明的方法制备的羟基磷灰石复合改性蒙脱土对产品的性能效果显著。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (2)

1.含重组人碱性成纤维细胞生长因子无水膏剂制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将甘油添加到冻干粉中，并且混合/搅拌直到所有粉末颗粒都与甘油混合均匀，形成面团状糊剂；然后将丙二醇添加到上述糊剂中，并混合/搅拌，以形成最终的，可流动的膏剂；
所述丙二醇添加到糊剂后还加入羟基磷灰石复合改性蒙脱土，加入量为丙二醇总量5-10%；
所述羟基磷灰石复合改性蒙脱土的制备方法为：
S01：将羟基磷灰石按照重量比1:6加入到十二烷基硫酸钠溶液中，然后加入羟基磷灰石总量5-10%的盐酸，搅拌均匀；
S02：随后加入羟基磷灰石2-5%的壳聚糖、羟基磷灰石1-5%的羟基乙酸，搅拌充分，得到羟基磷灰石复合液；
S03：将蒙脱土送入到350-400℃下热处理10-20min，随后以1-5℃/min的速率降至室温，然后送入到4-6倍的盐酸溶液中，搅拌均匀；
S04：随后加入蒙脱土总量5-10%的羟乙基纤维素、1-5%的氯化镧，搅拌充分，再水洗、干燥；
S05：将S04产物按照重量比1:5送入到S02中，继续反应充分，最后水洗、干燥，得到羟基磷灰石复合改性蒙脱土；
所述冻干粉包括以下重量份原料：
重组人碱性成纤维细胞生长因子 20000-50000IU、蛋白保护剂 5-10mg 和稀释剂50-100mg;
所述蛋白保护剂选自人血白蛋白;
所述稀释剂选自甘露醇、乳糖醇或葡萄糖;
所述冻干粉的制备工艺为：将重组人碱性成纤维细胞生长因子、蛋白保护剂和稀释剂用注射用水溶解后，用 0.22μm 的滤膜无菌过滤，分装于西林瓶中，装盘后送入冻干机中，先将样品在 -20℃--40℃预冻 2-5 小时，然后开启冷凝器，开启真空系统，开始升温升华，完毕后在 15℃-40℃干燥 4-8 小时，即得；
所述甘油、冻干粉、丙二醇的物质质量比为1.2：1：0.5。
2.根据权利要求1所述的含重组人碱性成纤维细胞生长因子无水膏剂制备方法，其特征在于，所述混合/搅拌的转速为550-1000r/min。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117486996B (zh) * 2023-12-21 2024-03-19 朗肽生物制药股份有限公司 一种改构的重组人酸性成纤维细胞生长因子的制备及其在皮肤修复中的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5053212A (en) * 1988-04-20 1991-10-01 Norian Corporation Intimate mixture of calcium and phosphate sources as precursor to hydroxyapatite
CN115177786A (zh) * 2022-07-14 2022-10-14 山东大学 一种原位负载蒙脱土/纳米羟基磷灰石的壳聚糖复合支架材料及其制备方法

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04224522A (ja) * 1990-04-27 1992-08-13 Merck & Co Inc 繊維芽細胞増殖因子含有組成物による禿頭症の治療又は予防方法
GR1002610B (el) * 1991-01-02 1997-02-20 Johnson & Johnson Consumer Products Inc. Θεραπευτικες συνθεσεις πληγων που περιεχουν παραγοντα αναπτυξης ινοβλαστων και ασκορβικον οξυ.
CN101172091B (zh) * 2007-09-25 2011-04-27 北京美福源生物医药科技有限公司 含人血清白蛋白与皮肤细胞生长因子的融合蛋白护肤产品制备工艺和用途
CN1548148A (zh) * 2003-05-16 2004-11-24 珠海亿胜生物制药有限公司 一种重组人碱性成纤维细胞生长因子胶囊剂及其制备方法
CN1733294A (zh) * 2005-08-10 2006-02-15 南海朗肽制药有限公司 一种重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂及其制备方法
US20100329995A1 (en) * 2006-02-21 2010-12-30 Ventria Bioscience Compositions containing lactoferrin, and methods of using same to promote growth of skin cells
CN101947309B (zh) * 2010-04-12 2012-09-19 南海朗肽制药有限公司 人碱性成纤维细胞生长因子滴眼液及其制备方法
CN102389402B (zh) * 2011-11-02 2012-12-19 珠海亿胜生物制药有限公司 外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子冻干制剂
CN102357242B (zh) * 2011-11-02 2012-12-19 珠海亿胜生物制药有限公司 重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶
CN102389392B (zh) * 2011-11-02 2012-10-24 珠海亿胜生物制药有限公司 重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶
CN104667262B (zh) * 2015-02-12 2016-03-23 珠海亿胜生物制药有限公司 重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用溶液
CN104586778B (zh) * 2015-02-12 2016-03-23 珠海亿胜生物制药有限公司 一种外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子冻干制剂
US10927055B2 (en) * 2016-02-17 2021-02-23 The Chancellor, Masters And Scholars Of The University Of Oxford Method of preparing a modified zeolite catalyst and preparing ethylbenzene using one cycle process
CN106732755B (zh) * 2016-12-23 2019-03-05 中节能万润股份有限公司 一种分子筛-多元氧化物复合整体挤出式脱硝催化剂的制备方法
CN109350735A (zh) * 2018-07-18 2019-02-19 吕向阳 一种用于疤痕修复的皮肤外用制剂及制备方法和应用
CN114805535A (zh) * 2022-04-21 2022-07-29 佛山市南海朗肽生物制药工程研究院有限公司 一种rh-bFGF冻干方法
CN115120784A (zh) * 2022-06-17 2022-09-30 朗肽生物制药股份有限公司 壳聚糖-氧化海藻酸钠水凝胶材料及其制备方法和应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5053212A (en) * 1988-04-20 1991-10-01 Norian Corporation Intimate mixture of calcium and phosphate sources as precursor to hydroxyapatite
CN115177786A (zh) * 2022-07-14 2022-10-14 山东大学 一种原位负载蒙脱土/纳米羟基磷灰石的壳聚糖复合支架材料及其制备方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
南开辉 ; 王迎军 ; .复合纳米生物医用材料的研究.材料科学与工程学报.2006,(01),第156-159页. *
杨洪存 ; 曲悦 ; 冯秀萍 ; .重组碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂的制备.中国生物制品学杂志.2009,(10),第64-66页. *
王世岭,周亮,马建丽,杨,潘强,高振梅,高远征,郭华.重组人表皮细胞生长因子凝胶对家兔烫伤创面修复作用的研究.解放军药学学报.2005,(05),第32-35页. *
石晶,李锐,马玉杰,李世君,连桂凤.冻干重组碱性成纤维细胞生长因子无人血清白蛋白保护剂的研究.中国生化药物杂志.2003,(05),第244-245页. *
陈钟,吴振宇.纳米材料在组织工程中的应用研究.国外医学.生物医学工程分册.2004,(05),第26-28页. *

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