CN117486996B

CN117486996B - 一种改构的重组人酸性成纤维细胞生长因子的制备及其在皮肤修复中的应用

Info

Publication number: CN117486996B
Application number: CN202311765167.2A
Authority: CN
Inventors: 谭雅超; 石俊芳; 付廷灵; 李丽丽; 梁庆; 余成基; 黄海清; 谢钰怡; 李丽婷
Original assignee: Long Peptide Biopharmaceutical Co ltd
Current assignee: Long Peptide Biopharmaceutical Co ltd
Priority date: 2023-12-21
Filing date: 2023-12-21
Publication date: 2024-03-19
Anticipated expiration: 2043-12-21
Also published as: CN117486996A

Abstract

本发明公开了一种改构的重组人酸性成纤维细胞生长因子的制备及其在皮肤修复中的应用，涉及生物技术领域。本发明提供了一种重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本申请发明人基于野生型aFGF，使用蛋白质工程技术精确地进行改构得到氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白。本发明的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白与野生型aFGF相比，（1）具有更好的稳定性，不易变性失活；（2）具有良好的透皮性、可促进表皮细胞再生，修复皮肤屏障受损；（3）具有较强的抗氧化性和自由基清除作用，可促进表皮细胞再生修复皮肤屏障，舒缓皮肤敏感泛红症状。

Description

一种改构的重组人酸性成纤维细胞生长因子的制备及其在皮肤修复中的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种改构的重组人酸性成纤维细胞生长因子的制备及其在皮肤修复中的应用。

背景技术

酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)是一种对来源于中胚层及神经外胚层的细胞，有广泛促分裂作用的活性物质。aFGF在调节成纤维细胞、内皮细胞和角质细胞中起关键作用，通过与细胞膜上的特异性受体（aFGFR）结合，使其磷酸化同时激活下游细胞内信号转导，促进组织胶原蛋白的局部表达，并增加转化生长因子和增殖细胞核抗原的水平，增加细胞的分裂增殖，在伤口修复和皮肤再生过程中，可直接作用于深层损伤组织，加速伤口愈合，迅速修复组织的各种创伤，从而促使皮肤创面愈合并减少皮肤疤痕和增生。另外，aFGF还可以调节炎症因子的分泌，提高肌体免疫力，在皮肤受到外界刺激时（紫外线灼伤、过敏、脱皮、发红等），自动激活人体免疫系统，使肌肤细胞维持正常状态，修复重建肌肤屏障。aFGF上述功能的实现是通过多个结构区域决定的，主要包括肝素结合域、受体结合域和核转位区域。其中，aFGF通过受体结合域与下游细胞膜表面aFGFR结合，再通过肝素结合域结合肝素来激活aFGFR，形成三级复合物，增加aFGF的稳定性，防止aFGF被温度、 pH 及蛋白酶水解影响，延长aFGF的半衰期。然而，aFGF蛋白的三个半胱氨酸若存储条件不当可能会形成二硫键，影响功能域的结合活性，从而影响蛋白的活性及稳定性。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种改构的重组人酸性成纤维细胞生长因子的制备及其在皮肤修复中的应用。本发明的改构蛋白将半胱氨酸替换为丝氨酸和甘氨酸，增加其稳定性，并新增一段肝素结合区将两个结合区串联，增加其活性，去除非核心区减少蛋白分子量透皮性好，且不影响活性，具有良好的生物护肤品市场前景。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

人aFGF含有3个半胱氨酸残基，具有生物活性的aFGF单体分子的2个高度保守的半胱氨酸不形成二硫键，但在细胞外aFGF活性蛋白中的半胱氨酸残基可能会形成分子间二硫键，导致aFGF的非变性失活。本申请发明人基于野生型aFGF，使用蛋白质工程技术精确地进行改构得到氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白。将野生型aFGF的半胱甘酸替换为丝氨酸和甘氨酸，并去除原非核心区的32个氨基酸（位点1-20和位点130-141），增加一段肝素结合区，用连接子GSG将两个结合区串联。通过将人aFGF中半胱氨酸改造成结构相似的丝氨酸残基，可避免形成分子间二硫键，改构后的aFGF与正常aFGF显示出同样的促有丝分裂活性和肝素依赖性。本申请发明人经大量的实验验证，本发明的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白比野生型aFGF蛋白的具有更好的稳定性、透皮性、可促进表皮细胞再生，修复皮肤屏障受损。

本发明还提供一种编码所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的核酸。

本发明还提供一种含有所述核酸的重组质粒。

本发明还提供一种转染所述重组质粒的宿主细胞。

本发明还提供所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的制备方法，所述方法通过构建培养所述的宿主细胞，从而表达重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白。

本发明还提供所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白、所述的核酸、所述的重组质粒或所述的宿主细胞在制备促进伤口愈合的产品中的应用。

本发明还提供所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白在制备护肤品或化妆品中的应用。本发明的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白具有较强的抗氧化性和自由基清除作用，可促进表皮细胞再生修复皮肤屏障受损，舒缓皮肤敏感泛红症状，能用于护肤品或化妆品的制备。

作为本发明所述应用的优选实施方式，所述护肤品包括面霜、精华液、面膜。

本发明还提供一种护肤组合物，所述组合物包括所述的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白。

作为本发明所述护肤组合物的优选实施方式，按护肤组合物的重量计，所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的含量为0.01~1%。更优选地，按护肤组合物的重量计，所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的含量为0.1%。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：一种改构的重组人酸性成纤维细胞生长因子的制备及其在皮肤修复中的应用。本发明的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白与野生型aFGF相比，具有更好的稳定性，不易变性失活；本发明的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白具有良好的透皮性、可促进表皮细胞再生，修复皮肤屏障受损；本发明的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白具有较强的抗氧化性和自由基清除作用，可促进表皮细胞再生修复皮肤屏障，舒缓皮肤敏感泛红症状。

附图说明

图1为野生型aFGF蛋白和重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的预测结构图。

图2为野生型aFGF蛋白和改构蛋白SDS-PAGE电泳图。

图3为不同浓度的aFGF、m-aFGF的细胞增值效果。

图4为不同浓度的aFGF、m-aFGF放置0~24个月的细胞增殖效果比较。

图5为各实验组创伤模型小鼠的伤口愈合情况。

图6为含改构蛋白面膜对皮肤表皮水分流失TEWL值的影响。

图7为含改构蛋白面膜对皮肤血红素（EI）值的影响。

具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方法，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

本发明中，所述野生型aFGF蛋白的氨基酸序列为MFNLPPGNYK KPKLLYCSNGGHFLRILPDGTVDGTRDRSDQHIQLQLSAESVGEVYIKSTETGQYLAMDTDGLLYGSQTPNEECLFLERLEENHYNTYISKKHAEKNWFVGLKKNGSCKR GPRTHYGQKA ILFLPLPVSS D（SEQ ID NO:1）。

所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的氨基酸序列为GHFLRILPDGTVDGTRDRSDQHIQLQLSAESVGEVYIKSTETGQYLAMDTDGLLYGSQTPNEESLFLERLEENHYNTYISKKHAEKNWFVGLKKNGSGKRGPRTHYGQKGSG KKHAEKNWFV GLKKNGSGKR GPRTHYGQK（SEQ ID NO:2）。

实施例1 重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白（m-aFGF蛋白）的制备

本实施例的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白是在野生型aFGF蛋白（序列如SEQ ID NO:1所示）的基础上进行结构的改进和优化，具体如下：将野生型aFGF的半胱氨酸替换为丝氨酸和甘氨酸，并去除原非核心区的32个氨基酸（位点1-20和位点130-141），增加一段肝素结合区，用连接子GSG将两个结合区串联，具体替换位点见表1。预测的蛋白结构如图1所示。

表1 aFGF改构蛋白具体内容

实施例2

本实施例提供实施例1所述的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的表达和纯化，具体包括以下步骤：

通过分子克隆技术合成具有实施例1所述的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白序列的pET-3a重组质粒：

目的基因序列如下：ggccacttcttaaggatccttccagatggcacagtggacggcaccagggacaggagtgaccagcacattcagctgcagctcagtgcggaaagcgtgggggaggtgtatataaagagcacc gagaccggccagtacttggcgatggacaccgacgggcttttatacggctcacagacacca aatgaggaaagtttgttcctggaaaggctggaggaaaaccattacaacacctacatatccaagaagcatgcagagaagaattggttcgttggtctcaagaagaatggaagcggcaaacgtggtcctcggactcactat ggccagaaa ggt agt ggc aagaagcatgcagagaagaattggttcgttggtctcaagaagaatggaagcggcaaacgt ggtcctcggactcactatggccagaaa；

所选质粒为：pET-3a；

酶切位点为：BamHI和NdeI酶切位点；

根据上述信息，由第三方公司完成重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白序列的pET-3a重组质粒的构建。

（2）发酵：将（1）中的pET-3a重组质粒转化至的大肠杆菌宿主细胞中，将其划线接种于含氨苄抗性的LB固体培养基，37℃培养过夜。次日挑取阳性菌落接种于5mL LB液体培养基中，培养16h，再取3mL菌液接种于97mL LB液体培养基中，于37℃，180rpm培养至OD约0.6。加入IPTG至终浓度为0.1mM，于37℃，250rpm诱导发酵3h。收集发酵培养液于4℃，12000rpm离心3min收获菌体，得菌体沉淀并称菌体重量，按1:10的重量比例加裂解缓冲液，重悬菌体，离心弃上清，缓冲液洗涤菌体2遍。

（2）菌体匀浆：将洗涤收集的菌体和裂解缓冲液1:10的重量比例混合，重悬菌体，用匀浆机破碎菌体，匀浆压力范围为800~850bar，在4℃收集管中收集匀浆液，重复匀浆3次，将匀浆液分装于离心瓶中，于4℃，15000rpm离心20min，新离心管收集上清液。

（3）纯化：将上清液加于平衡液A（20mM PB +5mM EDTA-2Na+0.1mol/l NaCl；pH7.0）中，于平衡过的离子交换柱进行上样，当280nm吸收值为零时，加入0%-100%洗脱液A（20mM PB +5mM EDTA-2Na+0.6mol/l NaCl；pH7.0）进行线性洗脱，收集具有280nm最大吸收峰值部分，得到中间纯化产物。

将中间纯化产物脱盐并加于平衡液B（20mM PB +5mM EDTA-2Na+0.6mol/l NaCl；pH7.0）中，于平衡过的肝素亲和层析柱进行上样，当280nm吸收值为零时，加入洗脱液B（20mM PB +5mM EDTA-2Na+1.3mol/l NaCl；pH7.0）进行洗脱，收集具有280nm最大吸收峰值部分，得到aFGF改构蛋白，经SDS-PAGE检测纯度达95%以上（如图2），分子量为16kDa，于-80℃保存。

实施例3

本实施例提供一种含重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的面膜，包括以下重量份的组分：0.05%EDTA、0.08份分子量为8000的透明质酸钠、0.05%分子量为20000透明质酸钠、5%1，3-丁二醇、3%甘油、0.4%对羟基苯乙酮、0.6%1，2-己二醇、15%卡波姆、1.5%泛醇、0.12%三乙醇胺和0.1%重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白，余量为水（74.1%）。

本实施例的含重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的面膜的制备方法，包括以下步骤：

（1）将含0.05%EDTA、0.08%透明质酸钠（分子量为8000）、0.05%透明质酸钠（分子量为20000）、3%1，3-丁二醇、3%甘油准确称量到烧杯中，搅拌分散，得混合液A；

（2）称取0.4%对羟基苯乙酮、0.6%1，2-己二醇、2%1，3-丁二醇混合，升温至75-80℃，溶解得混合液B；

（3）准确称取71.1%去离子水加入到混合液A中，开启搅拌，搅拌分散5min，加入15%卡波姆（U20），升温至75-80℃，保温5min；加入混合液B，混匀得混合液C，开始降温；

（4）当步骤（3）的混合液C降温至55-60℃后，加入1.5%泛醇和0.12%三乙醇胺和3%纯水，混合均匀得混合液D；

（5）当步骤（4）的混合液D降温至45℃以下，加入0.1份实施例2的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白，搅拌5分钟；

（6）检测PH为5.5-6.5、粘度为500-1200Pa.s，合格后可出锅。

实施例4

本实施例提供一种含重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的面膜，所述面膜与实施例3的差别仅在于重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的含量不同，本实施例的含重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的面膜中重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的重量份为1%。

实施例5

本实施例提供一种含重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的面膜，所述面膜与实施例3的差别仅在于重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的含量不同，本实施例的含重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的面膜中重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的重量份为0.01%。

对比例1

本对比例提供一种含重组人酸性成纤维细胞生长因子野生型蛋白的面膜，所述面膜与实施例3的差别在于不含重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白，本对比例的含重组人酸性成纤维细胞生长因子野生型蛋白的面膜中重组人酸性成纤维细胞生长因子野生型蛋白的重量份为0.1%。

试验例

1、重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的活性及稳定性

本试验例检测实施例2制备得到的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的活性及稳定性，具体试验方法如下：

（1）铺板：将处于对数生长期的HSF（人皮肤成纤维细胞）接种到96孔细胞培养板中，使得细胞培养板内的细胞数为8000个/100uL/孔，置于二氧化碳培养箱中孵24h；

（2）加样：弃去完全培养基（含0.4%FBS+1%双抗的1640培养基），将-80℃放置0天、6个月、12个月、18个月、24个月的野生型aFGF和重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白（m-aFGF）用维持培养基（含0.4%FBS+1%双抗的1640培养基）分别稀释为100ng/mL、50ng/mL、10ng/mL（实验组）、0ng/mL（对照组）、无细胞培养基（空白组），每个组做3个重复孔，100μL/孔加至细胞培养板，培养箱中孵育46h；

（3）吸光度的测定：取出上述细胞培养板，加入MTT 20μL/孔孵育4h，取出细胞板弃去MTT，加入二甲基亚砜100μL，振荡混匀5min，以630nm为参比波长，在波长570nm测定吸光度，记录测定结果。

细胞存活率计算公式如下：

实验结果用软件GraphPad Prism 8.3.0处理并分析数据，用One-way ANOVA进行方差分析，采用Tukey’s Multiple-Comparison Test分析不同组之间的差异，*表示P<0.05、**表示P<0. 01、***表示P<0. 001具有显著性差异。

实验结果如图3和图4所示。由图3可知，与aFGF相比，m-aFGF的细胞增值效果显著增加；由图4可知，两种蛋白同时于-80℃放置12个月、24个月后，与aFGF相比，m-aFGF可显著促进HSF细胞的增殖，说明m-aFGF蛋白的活性及稳定性优于aFGF。

2、重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白对伤口愈合的影响

具体实验步骤：

（1）挑选15只体重为30~35g的雄性Balb/c小鼠，随机分为2个实验组并麻醉，以10%硫化钠脱去背部体毛，用生理盐水清洗干净，干燥后在小白鼠背中部左右各划一1.0cm×10 cm的正方形，消毒后切除正形范围内的全层皮肤。

（2）止血后加样，第1组小鼠：右侧创口滴加野生型aFGF 20 μl，左侧创口滴加生理盐水20 μl；第2组小鼠：右侧创口滴加m-aFGF 20 μl，左侧伤口滴加生理盐水20 μl。敷料包扎。

（3）常规饲养动物，每天打开敷料，按步骤（2）方法滴加蛋白或生理盐水。连续滴加4 d。术后第7 d将小鼠拉颈处死。

（4）小鼠处死后，立即测量伤口未愈合面积，计算新生上皮面积，公式如下：新生上皮面积=原创口面积-未愈合面积

各实验组创伤模型小鼠的伤口愈合情况如图5所示。由图5可以看出，滴加生理盐水的阴性对照组的新生上皮面积平均为0.2164cm²；加入aFGF的伤口新生上皮面积与阴性对照组相比显著增加，平均为0.3566cm²(P＜0.001)；加入m-aFGF的创口愈合快新生上皮面与阴性对照组相比显著增加，平均为0.4760 cm²(P<0.001)，同时与aFGF组相比也明显增加(P<0.001)。表明m-aFGF具有明显的促进伤口愈合的活性，且活性效果优于野生型aFGF。

3、含重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的面膜的自由基清除能力

具体实验方法如下：

（1）配制0.1mM的DPPH溶液：配两次，每次取0.002g DPPH溶于50mL乙醇，避光保存；

（2）配制10%样品溶液：分别取0.2mL实施例3~5的样品溶液溶于1.8mL去离子水，混匀；

（3）加样：每组设3个复孔，每孔加入量如下：实验组：样品溶液100uL+ DPPH 醇溶液100uL；空白组：样品溶液100uL+无水乙醇100uL；对照组：去离子水100uL+DPPH 醇溶液100uL；

（5）检测并计算清除率：测定517nm处的吸光度，取平均值，计算每个样品的DPPH清除率，公式如下：

结果如表2所示。由表2可知，实施例3~5的含重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的面膜以及对比例1的含重组人酸性成纤维细胞生长因子野生型蛋白的面膜具有清除自由基的效果，且实施例3的效果最佳。

表2 改构蛋白面膜的自由基清除率

4、本试验例检测实施例3制备得到的含重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的面膜对皮肤经表皮水分流失的影响，具体实验如下：

试验过程中，33例受试者入组，0脱落，最终33例受试者符合方案，为有效案例。30例受试者为女性，3例受试者为男性，最小年龄18岁，最大年龄50岁，平均年龄为39.42+7.73岁，本研究以此人群做统计分析。

受试者洁面后，取出1片面膜敷在面部，敷用10-15min后揭开，轻轻按摩至剩余面膜液完全吸收，再使用后续护肤乳或护肤霜类产品。每周使用4次。在试验期间，受试者禁止使用修护、舒缓、保湿的制剂；受试者禁止点滴、注射、口服或其他形式摄入影响修护、舒缓、保湿测试的制剂；受试者以室内活动为主，避免长期暴露在室外光照下。

采用Tewameter TM300测得的TEWL值越大，代表单位时间、单位横截面积的经表皮水分流失量越多，反之越少。因此TEWL值降低的趋势代表了屏障受损皮肤的经表皮水分流失的恢复过程。通过比较使用前后的皮肤TEWL平均值变化，可反映产品的减少皮肤水分流失的效果。TEWL平均值在不同回访时间点的数值与使用前基线值 (DO)相比下降越多，提示产品的修护效果越好。

受试者使用前的皮肤TEWL平均值基线值(DO)与回访时间点(D28)的描述性统计结果如表3所示，并采用秩和检验分析或秩和检验分析方法对TEWL平均值基线值(D0)和回访时间点数值(D28)之间进行差异分析，结果见表4。TEWL平均值下降率公式如下：

TEWL值下降率=（使用产品前TEWL值-使用产品后TEWL值）/使用产品前TEWL值×100%，

用软件GraphPad Prism 8.3.0处理并分析数据，用One-way ANOVA进行方差分析，采用Tukey’s Multiple-Comparison Test分析不同组之间的差异，数据以平均数±标准差（x± s）表示，P<0. 05、P<0. 01、P<0. 001表示具有显著性差异。

表3皮肤TEWL值描述性统计(g/(h•m²),n=33)

表4皮肤TEWL平均值差异性分析(g/(h•m²),x±s，n=33)

如图6所示，与使用前基线值(DO)相比，皮肤 TEWL 平均值在使用产品 28 天后(D28)下降了 36.51%，两者具有显著性差异(p<0.01)，使用产品后皮肤经表皮水分流失速率明显下降。

4、本试验例检测实施例3制备得到的含重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的面膜对皮肤血红素值的影响，具体实验如下：

血红素EI值表征皮肤中血红素含量，由Mexameter MX18 测得的数值越低皮肤提示该位置皮肤血红素含量越低。通过比较使用前后的皮肤血红素值变化，可反映产品的舒缓效果。血红素值在不同回访时间点的数值与使用前基线值 (DO)相比下降越多，皮肤泛红的改善效果越好，提示产品的缓解泛红效果越好。受试者使用前的血红素值基线值 (DO)与回访时间点(D28)的描述性统计结果如表5所示，并采用t 检验分析或秩和检验分析方法对血红素值基线值(DO)和回访时间点数值(D28)之间进行差异分析，结果见表6。血红素值下降率计算公式如下：血红素下降率=（使用产品前的血红素值-使用产品后的血红素值）/使用产品前的血红素值*100%。

表5 皮肤血红素值描述性统计（n=33）

表6 皮肤血红素值差异性分析（x±s，n=33）

如图7所示，与使用前基线值(D0)相比，皮肤血红素值在使用产品后下降了14.23%,两者具有显著性差异(P<0.01)，使用产品后皮肤血红素含量有明显下降。

本试验例检测实施例3制备得到的含重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的面膜的评价，评分结果如下:

在使用 28 天后受试者对自身皮肤改善度及产品满意度的自评分值中，按照评分标准中定义评 1~3 分为不满意，4 分为一般,5 分及以上为满意在33 位受试者中，使用28天后有 81.82%的受试者认可使用后肌肤变得水润不干燥了，66.67%的受试者认可使用后可以减少皮肤敏感度，皮肤更耐受了;另有81.82%的受试者认可使用产品后对皮肤泛红、干痒程度有改善。并且在满意度调查中，81.82%的受试者选择了 5 分及以上。

最后应当说明的是，上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所述技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims

1.一种重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQID NO:2所示。

2.一种编码权利要求1所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的核酸。

3.一种含有权利要求2所述核酸的重组质粒。

4.一种转染权利要求3所述重组质粒的宿主细胞。

5.权利要求1所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的制备方法，其特征在于，所述方法通过构建培养权利要求4所述的宿主细胞，从而表达重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白。

6.权利要求1所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白、权利要求2所述的核酸、权利要求3所述的重组质粒或权利要求4所述的宿主细胞在制备促进伤口愈合的产品中的应用。

7.权利要求1所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白在制备护肤品或化妆品中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述护肤品包括面霜、精华液、面膜。

9.一种护肤组合物，其特征在于，所述组合物包括权利要求1所述的重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白。

10.根据权利要求9所述的护肤组合物，其特征在于，按护肤组合物的重量计，所述重组人酸性成纤维细胞生长因子改构蛋白的含量为0.01~1%。