CN102389402B - 外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子冻干制剂 - Google Patents
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Abstract
一种外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子的冻干制剂。该外用冻干剂的组分及用量为：重组牛碱性成纤维细胞生长因子20000-50000IU、蛋白保护剂5-10mg和稀释剂50-100mg；其中，所述的蛋白保护剂选自人血白蛋白、甘露醇和聚乙二醇，优选人血白蛋白；稀释剂选自甘露醇、乳糖醇或葡萄糖；本品具有稳定性好，复溶后不含不溶物的特点。
Description
技术领域
本发明涉及生物制品领域。特别是涉及一种外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子的冻干制剂及其制备方法。
背景技术
皮肤是机体避免遭受感染和脱水的重要屏障，严重创伤、烧烫伤以及某些疾病例如糖尿病引起的皮肤溃疡会给患者带来身体和精神上的巨大影响。因此，对皮肤创面的修复是医药领域十分关注的问题。
自上世纪末开始，已对创伤后的组织修复过程、发生机制和治疗等进行了多种研究，其中，分子生物学的迅速发展以及各学科之间的相互交叉影响，使创伤修复与组织再生等水平得到不断提升。目前，已构建了多种促进肉芽组织生长、血管化和再上皮化的基因，例如表皮细胞因子、碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子等。
已发现碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growth factor，简写为bFGF)在体内可参与多种组织的创伤修复过程，是重要的创伤愈合因子之一，它能诱导微血管的形成、发育和分化，同时直接刺激成纤维细胞和细胞外基质的蛋白合成，以形成胶原纤维，增加创面的抗张力强度，并促进真皮细胞的移行、分裂、分化，以完成皮肤的修复过程，并能促进皮肤软骨组织、骨组织和神经组织损伤修复和肢体再生。大量基础研究和临床试验证实，bFGF对烧伤、外伤及各种慢性难愈合创面具有显著的促修复作用，并且安全、有效、无不良反应。
重组牛碱性成纤维细胞生长因子(Recombinant bovine basic fibroblast growth factor，简写为rb-bFGF)是由含有高效表达牛碱性成纤维细胞生长因子基因的大肠杆菌，经发酵、分离和高度纯化后得到的活性因子。rb-bFGF可促进创面愈合，用于烧伤创面(包括浅II度、深II度、肉芽创面)、慢性创面(包括体表慢性溃疡等)和新鲜创面(包括外伤、供皮区创面、手术伤等)。
现有技术中尚未公开重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用冻干制剂的配方和制备工艺。
发明内容
本发明的目的是提供一种安全有效、稳定性好的外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子冻干制剂及其制备方法。
本发明的发明目的通过以下的实施方式来实现。
一种外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子冻干制剂，其特征在于所述外用冻干剂的组分及用量为：：重组牛碱性成纤维细胞生长因子20000-50000IU、蛋白保护剂5-10mg和稀释剂50-100mg；其中，所述的蛋白保护剂选自人血白蛋白、甘露醇和聚乙二醇，优选人血白蛋白；稀释剂选自甘露醇、乳糖醇或葡萄糖；该冻干粉末的制备工艺为：将重组牛碱性成纤维细胞生长因子、蛋白保护剂和稀释剂用注射用水溶解后，用0.22μm的滤膜无菌过滤，分装于西林瓶中，装盘后送入冻干机中，先将样品在-20℃--40℃预冻2-5小时，然后开启冷凝器，开启真空系统，开始升温升华，完毕后在15℃-40℃干燥4-8小时，即得。
本发明具有以下的优点和效果：
①本品安全有效，可用于治疗各种烧伤创面(包括浅II度、深II度、肉芽创面)、慢性创面(包括体表慢性溃疡等)和新鲜创面(包括外伤、供皮区创面、手术伤等)。
②本品制备工艺简单、稳定性好，适合工业化生产的应用。
③使用方便，增强了病人的顺应性。
具体实施方式
下面结合本发明的实施例和试验例做进一步的说明。
实施例1：
冻干前溶液处方：
重组牛碱性成纤维细胞生长因子350000IU；
人血白蛋白75mg；
葡萄糖1000mg；
注射用水适量
共制 1000支
具体制备方法为：将重组牛碱性成纤维细胞生长因子、人血白蛋白和葡萄糖用注射用水溶解后，用0.22μm的滤膜无菌过滤，分装于西林瓶中，装盘后送入冻干机中，先将样品在-20℃预冻2小时，然后开启冷凝器，开启真空系统，开始升温升华，完毕后在15℃干燥4小时，即得。
实施例2：
冻干前溶液处方：
重组牛碱性成纤维细胞生长因子250000IU；
聚乙二醇50mg；
甘露醇800mg；
注射用水适量
共制 1000支
具体制备方法为：将重组牛碱性成纤维细胞生长因子、聚乙二醇和甘露醇用注射用水溶解后，用0.22μm的滤膜无菌过滤，分装于西林瓶中，装盘后送入冻干机中，先将样品在-40℃预冻5小时，然后开启冷凝器，开启真空系统，开始升温升华，完毕后在40℃干燥8小时，即得。
实施例3：
冻干前溶液处方：
重组牛碱性成纤维细胞生长因子450000IU；
人血白蛋白75mg；
乳糖醇500mg；
注射用水适量
共制 1000支
具体制备方法为：将重组牛碱性成纤维细胞生长因子、人血白蛋白和乳糖醇用注射用水溶解后，用0.22μm的滤膜无菌过滤，分装于西林瓶中，装盘后送入冻干机中，先将样品在-30℃预冻4小时，然后开启冷凝器，开启真空系统，开始升温升华，完毕后在30℃干燥6小时，即得。
试验例1：rb-bFGF外用冻干粉末促进表皮细胞生长及烧伤创面愈合的实验研究
1、试剂及仪器：rb-bFGF；细胞培养箱；流式细胞仪；电脑图象分析系统。
2、动物烧伤创面模型：选20-25kg白色小猪5只，在实验的前一天用刀片给动物的背部去毛。制成直径为2.5厘米的圆形深II°度烧伤创面18个(烧伤深度由病理切片和免疫组化分析证实)。每3个创面为一平行组，以不含rb-bFGF的生理盐水用于创面作为阴性对照组，直接在创面涂1％的磺胺嘧啶银霜作为阳性对照组。
3、给药方式：阳性对照组是向清创后的创面直接涂1％的磺胺嘧啶银；阴性对照组是向清创后的创面直接涂抹不含rb-bFGF的生理盐水；本发明组是向清创后的创面涂抹实施例1的外用冻干剂溶于8ml生理盐水后的溶液；三组样品每天换药一次，共用药10天。
4、创面愈合指标：在每次换药时照相，照片经电脑图象分析系统灰度积分来比较分析创面愈合的程度，创面面积越小，表明愈合效果越好。
5、结果：
从表1可以看出，当分别本发明组、阳性对照组和阴性对照组样品48小时后，在倒置显微镜下可观察到，含rb-bFGF的本发明组的平均创面面积小于阳性对照组和阴性对照组，表明本发明组的创面愈合较快。
表1、各组样品涂抹前和涂抹48小时后的平均创面面积(cm2)
| 本发明组 | 阳性对照组 | 阴性对照组 | |
| 涂抹前 | 4.91 | 4.93 | 4.92 |
| 涂抹后 | 4.20 | 4.51 | 4.81 |
表2、涂抹各组样品后不同时间的平均创面面积(cm2)
| 实施例2 | 阳性对照组 | 阴性对照组 | |
| 第0天 | 4.91 | 4.93 | 4.92 |
| 第2天 | 4.20 | 4.51 | 4.81 |
| 第4天 | 3.55 | 3.94 | 4.55 |
| 第6天 | 2.83 | 3.39 | 4.20 |
| 第9天 | 0.23 | 2.12 | 2.53 |
| 第13天 | 0.07 | 0.91 | 1.78 |
从表2可以看出，将本发明的外用冻干剂用生理盐水溶解后连续应用于猪的深II°烧伤创面4天后，其结果与对照组之间有较明显的区别。用电脑图象分析技术分别计算伤后第0、2、4、6、9、13天时的创面面积，实验结果显示在创面愈合过程中应用本发明组的烧伤创面的愈合速率明显大于对照组。
试验例2：稳定性研究
1、高温高湿试验：
将实施例2的外用冻干剂置于60℃、相对湿度75％条件下进行加速实验，分别于0、5、10天检测冻干粉末的含量、外观和复溶后外观。结果如下表：
表3、高温高湿试验结果
| 0天 | 5天 | 10天 |
| 含量 | 100.01％ | 99.96％ | 99.88％ |
| 外观 | 白色疏松体 | 白色疏松体 | 白色疏松体 |
| 复溶后外观 | 无色澄清 | 无色澄清 | 无色澄清 |
结果表明，本发明的外用冻干剂在高温高湿试验中质量稳定。
2、低温试验：
将实施例1的外用冻干剂置于4℃下进行实验，分别于0、1、3、6月检测冻干粉末的含量、外观和复溶后外观。结果如下表：
表4、低温试验结果
| 0个月 | 1个月 | 3个月 | 6个月 | |
| 含量 | 100.02％ | 99.99％ | 99.97％ | 99.98％ |
| 外观 | 白色疏松体 | 白色疏松体 | 白色疏松体 | 白色疏松体 |
| 复溶后外观 | 无色澄清 | 无色澄清 | 无色澄清 | 无色澄清 |
结果表明，本发明的外用冻干剂在低温试验中质量稳定。
3、光照加速试验：
将实施例3的外用冻干剂置于光线强度为3000Lx光下照射0、3、5、10天，检测冻干粉末的含量、外观和复溶后外观。结果如下表：
表4、光照加速试验结果
| 0天 | 3天 | 5天 | 10天 | |
| 含量 | 100.01％ | 99.99％ | 100.00％ | 99.97％ |
| 外观 | 白色疏松体 | 白色疏松体 | 白色疏松体 | 白色疏松体 |
| 复溶后外观 | 无色澄清 | 无色澄清 | 无色澄清 | 无色澄清 |
结果表明，本发明的外用冻干剂在光照加速试验中质量稳定。
Claims (2)
1.一种外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子的冻干制剂，其特征在于其组分及用量为：重组牛碱性成纤维细胞生长因子20000-50000IU、蛋白保护剂5-10mg和稀释剂50-100mg；其中，蛋白保护剂为聚乙二醇；稀释剂选自甘露醇、乳糖醇或葡萄糖；
该冻干制剂的制备工艺为：将重组牛碱性成纤维细胞生长因子、蛋白保护剂和稀释剂用注射用水溶解后，用0.22μm的滤膜无菌过滤，分装于西林瓶中，装盘后送入冻干机中，先将样品在-20℃-40℃预冻2-5小时，然后开启冷凝器，开启真空系统，开始升温升华，完毕后在15℃-40℃干燥4-8小时，即得。
2.如权利要求1所述的冻干制剂，其特征在于，所述的稀释剂为甘露醇。
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