CN115590014A

CN115590014A - 一种红细胞保存液及其制备方法

Info

Publication number: CN115590014A
Application number: CN202211161972.XA
Authority: CN
Inventors: 向东; 王君平; 徐涛
Original assignee: Wuxi Toma Natural Biotechnology Co ltd
Current assignee: Wuxi Toma Natural Biotechnology Co ltd
Priority date: 2022-09-23
Filing date: 2022-09-23
Publication date: 2023-01-13

Abstract

本发明涉及一种红细胞保存液，采用甘氨酸‑组氨酸缓冲体系，包括组分：海藻糖、蔗糖、牛血清白蛋白BSA、SOD、氯化钠、硫酸卡那霉素、甘油、生物防腐剂。本发明一种红细胞保存液，其制备方法简单、原料易得，成本低，各组分相互牵制、协同作用，稳定性好。

Description

一种红细胞保存液及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种红细胞保存液及其制备方法，属于生物技术材料领域。

背景技术

红细胞膜表面有很多种抗原，如ABH抗原、Rh抗原等。这些抗原能够特异性地与抗体结合，所以红细胞被广泛地应用于血型血清学试验。目前，红细胞都是从人血细胞中获得，无法用其他来源的物质代替，这使得红细胞的获得和保存受到极大的限制。若是将新鲜的红细胞放入生理盐水中，1～2天便会发生溶血，无法使用。因而红细胞的保存方法一直是相关研究者关注的问题。尤其是一些稀有血型，由于来源稀少、保存时间不长，极大的阻碍了血型血清学试验的顺利进行。

CN114732008A提供了一种红细胞保存液及其制备方法、红细胞悬液。所述红细胞保存液包括溶剂、葡萄糖、腺嘌呤、肌苷、柠檬酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、羟乙基淀粉、甘露醇、氯化钠、氯化铵、氯化钙、氯霉素、维生素E及还原型谷胱甘肽。采用本发明的红细胞保存液，各组分相互牵制、协同作用，不仅延长红细胞的保存期限，且增强红细胞的性能稳定性。

CN115039759A提供了一种红细胞保存液及其应用。所述红细胞保存液包括红细胞保存基液和抗氧化剂，所述抗氧化剂包括尿酸。所述红细胞保存液能够用于体外长期保存红细胞，通过在红细胞保存基液中引入尿酸作为抗氧化剂，可以进一步活化红细胞，极其显著地增强红细胞抗溶血凋亡的能力，体外保存时间明显延长，这对于输血用红细胞的超长期体外低温保存，具有重大应用价值。

CN113812395A提供一种红细胞保存液，采用磷酸盐、碳酸盐混合缓冲体系，包括组分及含量如下：水葡萄糖30-40mg/mL、腺嘌呤0.3-0.5mg/mL、甘露醇8-12mg/mL、磷酸氢二钠0.03-0.05mg/mL、碳酸氢钠0.05-0.15mg/mL、枸橼酸钠5-15mg/mL、氯霉素0.3-0.7mg/mL、氯化钠2-4mg/mL。本发明在红细胞保存液的在缓冲体系中加入碳酸盐，可以有效降低低温贮存损伤。

上述方法都需要用到腺嘌呤或尿酸作为抗氧剂，使得红细胞中的NO不会被高速氧化，细胞运送氧气能力得到提高，从而提高了红细胞存活时间。但是这些配方体系复杂，原料成本高。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述背景问题中提出的问题，提供一种红细胞保存液，它方法简单、原料易得，成本低，稳定性好。

本发明的目的是这样实现的：一种红细胞保存液，采用甘氨酸-组氨酸缓冲体系，包括组分：海藻糖、蔗糖、牛血清白蛋白BSA、SOD、氯化钠、硫酸卡那霉素、甘油、生物防腐剂。

组分及含量如下：海藻糖 0.10-0.30mol/L 、蔗糖 0.10-0.30mol/L、牛血清白蛋白BSA0.2-0.7%、超氧化物歧化酶SOD 0.2-0.8%、氯化钠 0.50-1.00%、硫酸卡那霉素 0.1-1.0%、甘油0.5-2%、生物防腐剂 0.01-0.1%，上述百分比为质量百分比。

优选的，组分及含量如下：海藻糖 0.20mol/L 、蔗糖 0.20mol/L、牛血清白蛋白BSA 0.5%、超氧化物歧化酶SOD 0.5%、氯化钠 0.85%、硫酸卡那霉素 0.5%、甘油（丙三醇）1%、生物防腐剂 0.02%，上述百分比为质量百分比。

所述甘氨酸-组氨酸缓冲体系，是由甘氨酸、组氨酸混合配置而成，二者质量比为1:1-5。优选1:2-3。

所述甘氨酸-组氨酸缓冲体系浓度为20-80 mmol／L。优选为50 mmol／L。

一种红细胞保存液的制备方法，包括如下步骤：配置甘氨酸-组氨酸缓冲体系；将海藻糖、蔗糖、牛血清白蛋白BSA、SOD、氯化钠、硫酸卡那霉素、甘油、生物防腐剂分别加入溶剂中，以得到混合溶液；调节所述混合溶液的pH值，然后分别用0.45μm和0.22μm的过滤膜过滤，得到保存液。

所述甘氨酸-组氨酸缓冲体系pH值为6.5。

相比于现有技术，本发明具有以下优点：

本发明的一种红细胞保存液，上述红细胞保存液，各组分相互牵制、协同作用，在基于通过海藻糖、蔗糖等营养体系维持细胞基本代谢活性的同时，氯化钠维持细胞基本代谢活性环境，通过牛血清白蛋白BSA维持体系稳定性，甘油也起到稳定保护作用，SOD起到抗氧化作用，硫酸卡那霉素和生物防腐剂均起到防腐抑菌作用，保护细胞的能量产生机构，使其维持正常结构和功能；减慢细胞代谢速度，减少能量消耗并供应能量物质，降低保存过程中的细胞损伤。

另外，配制后不采用高压灭菌，进通过过滤除菌即可，能源消耗低，使用便捷。

综上，本发明一种红细胞保存液，其制备方法简单、原料易得，成本低，稳定性好。

具体实施方式

实施例1-4

配置pH6.5，50 mmol／L甘氨酸-组氨酸缓冲体系；将海藻糖、蔗糖、牛血清白蛋白BSA、SOD、氯化钠、硫酸卡那霉素、甘油、生物防腐剂分别加入溶剂中，以得到混合溶液；调节所述混合溶液的pH值，然后分别用0.45μm和0.22μm的过滤膜过滤，得到红细胞保存液。

所述红细胞保存液组分及含量参见下表1

经试验，应用上述配比保存液保护红细胞，进行37度加速试验，连续4周，实施例1-4红细胞稳定，效价免疫下降效果良好。对比例1，加速实验第二周开始出现溶血现象；对比例2，加速实验第三周开始出现溶血现象。

对比例3，缓冲体系采用磷酸盐、碳酸盐混合缓冲体系，pH6.5，50 mmol／L，其余与实施例1相同；加速实验第三周开始出现溶血现象。

对比例4，不使用硫酸卡那霉素，其余与实施例1相同；加速实验第三周开始出现溶血现象。

综上本发明中，各组分相互牵制、协同作用，制得的红细胞保存液，稳定性好。

以上仅是本发明的具体应用范例，对本发明的保护范围不构成任何限制。凡采用等同变换或者等效替换而形成的技术方案，均落在本发明权利保护范围之内。

Claims

1.一种红细胞保存液，其特征在于：采用甘氨酸-组氨酸缓冲体系，包括组分：海藻糖、蔗糖、牛血清白蛋白BSA、SOD、氯化钠、硫酸卡那霉素、甘油、生物防腐剂。

2.根据权利要求1所述的一种红细胞保存液，其特征在于，组分及含量如下：海藻糖0.10-0.30mol/L 、蔗糖 0.10-0.30mol/L、牛血清白蛋白BSA0.2-0.7%、超氧化物歧化酶SOD0.2-0.8%、氯化钠 0.50-1.00%、硫酸卡那霉素 0.1-1.0%、甘油0.5-2%、生物防腐剂 0.01-0.1%，上述百分比为质量百分比。

3.根据权利要求2所述的一种红细胞保存液，其特征在于，组分及含量如下：海藻糖0.20mol/L 、蔗糖 0.20mol/L、牛血清白蛋白BSA 0.5%、超氧化物歧化酶SOD 0.5%、氯化钠0.85%、硫酸卡那霉素 0.5%、甘油（丙三醇）1%、生物防腐剂 0.02%，上述百分比为质量百分比。

4.根据权利要求1所述的一种红细胞保存液，其特征在于，所述甘氨酸-组氨酸缓冲体系，是由甘氨酸、组氨酸混合配置而成，二者质量比为1:1-5。

5.根据权利要求1所述的一种红细胞保存液，其特征在于，所述甘氨酸-组氨酸缓冲体系浓度为20-80 mmol／L。

6.根据权利要求5所述的一种红细胞保存液，其特征在于，所述甘氨酸-组氨酸缓冲体系浓度为50 mmol／L。

7.一种红细胞保存液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：配置甘氨酸-组氨酸缓冲体系；将海藻糖、蔗糖、牛血清白蛋白BSA、SOD、氯化钠、硫酸卡那霉素、甘油、生物防腐剂分别加入溶剂中，以得到混合溶液；调节所述混合溶液的pH值，然后分别用0.45μm和0.22μm的过滤膜过滤，得到保存液。

8.根据权利要求7所述的一种红细胞保存液的制备方法，其特征在于，所述甘氨酸-组氨酸缓冲体系的pH值为6.5。