JPH01199158A

JPH01199158A - 赤血球保存液

Info

Publication number: JPH01199158A
Application number: JP16628488A
Authority: JP
Inventors: Hirosuke Fukuda; 福田　博介; Masao Kawamura; 河村　昌男; Seiichi Akutsu; 安久津　成一; Koichi Saga; 嵯峨　孝一; Shigeru Morimoto; 茂森本; Shigetaka Matsuzawa; 松沢　茂隆; Taiko Seo; 瀬尾　たい子; Yasuto Okubo; 大久保　康人
Original assignee: Seitetsu Kagaku Co Ltd
Current assignee: Sumitomo Seika Chemicals Co Ltd
Priority date: 1987-10-20
Filing date: 1988-07-04
Publication date: 1989-08-10

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は赤血球保存液、さらに詳しくは赤血球を長期間
安定に保存できる赤血球保存液に関する。

従来の技術ＡＢＯ式血液型の検査は、被験赤血球の型抗原を標準血
清を用いて検出する「オモテ試験」と、被験血清中の抗
Ａ１−抗Ｂ凝集素を既知のＡおよびＢ型赤血球を用いて
検出するいわゆる「ウラ試験」の両方を用いて判定する
のが常法である。しかしながら、かかる「ウラ試験」に
必要なＡ型およびＢ型の赤血球は生きた赤血球を用いて
いるため、有効期間が３〜４週間と極めて短期間である
こと、また、新鮮面を入手し難い病院等では、高価な標
準血球を購入しなければならない等、問題点が多く、こ
のようなことが「ウラ試験」の完全な実施を妨げる原因
にもなっている。

また、輸血前検査の必須項目とされている抗体スクリー
ニングでは、Ｒｈ、Ｌｅｗｉｓ、ＭＮＳｓｌＰ。

Ｋｅｌｌ等の多くの抗原が確認されているＯ型血球を必
要とするが、ここで用いられている血球についても前記
「ウラ試験」用赤血球と同様に保存安定性に問題があり
、この抗体スクリーニング検査の完全実施の妨げとなっ
ている。

さらに、細菌、ウィルス、リケッチア等の感染症診断法
においては、これらの抗原で人やヒツジの赤血球を感作
し、これを被験血清と混ぜ合せて凝集性により診断する
という方法があるが、この場合にも生きた赤血球を用い
ているために有効期間が短く、価格も高いという問題が
存在する。

発明が解決しようとする課題前記の如く、天然赤血球は有効期間が短く、保存安定性
に問題があり、このため天然赤血球の利用は充分になさ
れていないのが現状である。

ところで、赤血球の保存期間を延ばすには赤血球自体に
何らかの加工を施す方法と保存液の保存能力を向上させ
る方法の２つの方法が考えられる。

前者の例としては、天然赤血球に固定化処理を施した固
定化加工赤血球が知られている。

すなわち、赤血球をホルマリンやグルタルアルデヒド等
を用いて固定化した加工赤血球は溶血を起こさず、長期
保存が可能であり、間接凝集反応の担体とすることがで
きる。例えば、人やヒツジの赤血球を固定化した加工赤
血球は、その表面に細菌やウィルスの抗原または抗体を
感作させ、対応する抗体または抗原を感作血球の凝集反
応によって検出することにより、感染症やりウマチなど
の診断薬として用いられてきた。

しかしながら、このような担体を得る目的で行なわれて
きた固定化処理は、例えば、ｌｏｏｍＭのグルタルアル
デヒド水溶液を用いて１時間処理するといったかなり強
い処理を行うため、赤血球本来の抗原活性（抗原性）を
著しく低下させてしまう。それ故、かかる固定化赤血球
は対応する血液型の抗体を検出するための標準血球とし
て用いることができない。

従って、保存安定性を有し、さらに本来の抗原活性を維
持する赤血球の出現のみならず、優れた保存能を有する
保存液の出現が望まれている。

二　を　決するための手段発明者らは前記事情に鑑み鋭意研究した結果、従来の保
存液、オールシーバー液に特定の免疫的に不活性な成分
を加えることにより意外にも赤血球の被凝集性の低下を
防ぐことができ、優れた保存能が得られるという知見に
到達し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、従来のオールシーバー液成分とゼ
ラチン、可溶性デンプン、デキストラン、アラビアゴム
、フィコール、ポリビニルピロリドン（ｐｖｐ）、ポリ
ビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリエチレングリコール
（ＰＥＧ）、メチルセルロース（Ｍ　Ｃ）、カルボキシ
メチルセルロース（ＣＭＣ）およびアルギン酸ナトリウ
ムよりなる群から選択される１種または２種以上の水溶
性高分子物質とよりなることを特徴とする赤血球保存液
を提供するものである。

従来のオールシーバー液の成分および組成は：成分　　
　　量（９／１２）グルコース　　　　　　　　　　　１８．６６食塩　　
　　　　　　　　　　　　４．１８クエン酸ソーダ　　
　　　　　　　　８．０アデニン塩酸塩　　　　　　　
　　０．６７６イノシン　　　　　　　　　　　　２．
６８カナマイシン　　　　　　　　　　０．２８６より
なるものである。本発明の保存液は従来のオールシーバ
ー液成分の所定量と前記１種または２種以上の水溶性高
分子物質の所定量とを水に溶解して所望の濃度とするこ
とにより、あるいはオールシーバー液そのものに１種ま
た（杢２種以上の水溶性高分子物質の所定量を加えて溶
解することにより、容易に調製できる。いずれの場合に
おＬｌても、水溶性高分子物質の量は赤血球保存液の全
量に基づいて、ゼラチンの場合、０．２〜５重量／容量
％、可溶性デンプンの場合、０．１〜５重量／容量％、
デキストランの場合、０．１〜５重量／容量％、アラビ
アゴムの場合、０．１〜５重量／容量％、フィコールの
場合、１〜１０重量／容量％、ポリビニルピロリドンの
場合、０．１〜２重量／容最％、ポリビニルアルコール
の場合、０゜１〜２重量／容量％、ポリエチレングリコ
ールの場合、１−１０重量／容量％、メチルセルロース
の場合、０．０５〜０．５重量／容量％、カルボキシメ
チルセルロースの場合、０．０５〜０．５重量／容量％
、アルギン酸ナトリウムの場合、　０゜０２〜０．２重
量／容量％含有させる。オールシーバー液成分は従来の
通常範囲とする。

かくして、得られた本発明の赤血球保存液は優れた°赤
血球保存能を有し、従来天然赤血球の保存期間が通常ｉ
〜２ケ月であったのを、３〜６ケ月まで延長する。保存
は通常、２〜８℃で行う。

発明者らは、今回、有用な赤血球保存液を得ると共に、
優れた保存安定性を有する加工赤血球も得るに至った。

本発明の保存液はかかる加工赤血球を保存することによ
り、さらに長期間安定した保存赤血球を供給することが
できる。

以下に、参考として、該加工赤血球の製法を記載する。

すなわち、天然赤血球を低濃度の固定化剤で温和処理す
ることにより、またはさらに還元剤で処理することによ
り、本来の抗原性を保持しつつ安定性が付与された加工
赤血球が得られる。あるいは、前記画処理の順序を逆に
して、天然赤血球を還元剤で処理することにより、また
はさらに低濃度の固定化剤で温和処理することにより、
本来の抗原性を保持しつつ安定性が付与された加工赤血
球が得られる。

用いることができる低濃度の固定化剤としては０．００
１−１％のグルタルアルデヒド、０．０１〜５％のホル
ムアルデヒド、０．０１〜５％のパラホルムアルデヒド
、ｏ、ｏｏｔ−ｔ％のジメチルスベロイミデイト、ｏ、
ｏｏｔ〜１％のジメチルアジボイミデイト、ｏ、ｏｏｔ
〜１％のジメチル３．３゛−ジチオビスプロピオイミデ
イト、０゜００１〜１％のＮ、Ｎ’−ビス（２−カルボ
キシイミドエチル）タータルイミドジメチルエステル、
ｏ、ｏｏｔ〜菫％の２−イミノチオラン、０．００１−
１％のメチルブチロイミゾイト、０．０１〜１％のトリ
レン−２，４−ジイソシアネイト、０゜０１−１％のジ
イソシアン酸ｍ−キシリレン、０゜０１−１％のフェニ
ルエチルイソシアネイト、０゜０１〜１％のフェニルエ
チルイソチオシアネイト、０．０１−１％のへキサメチ
レンジイソシアネイ）、０．０１−１％のジフェニルメ
タンジイソシアネイト、０．０００１〜０．１％のタン
ニン酸、０．００１〜０．１％のオスミウム酸、ｏ、ｏ
　ｏ　ｔ〜０．１％の塩化クロム、または０．００１−
１％の過酸化水素などが挙げられる。一般に、４〜４０
℃、好ましくは２０〜３０℃にて約１−１０分間、固定
化処理を行う。

また、用いることができる還元剤としては、亜硫酸ナト
リウム、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウ
ム、水素化アルミニウムリチウム、ヒドラジンなどが挙
げられる。一般に、４〜４０℃、好ましくは２０〜３７
℃にて、濃度５０〜２５０ＩＩＩＭの還元剤を用いて、
約５〜６０分間処理を行う。この還元剤処理により赤血
球の被凝集性を向上（先に固定化処理を行ったときは、
稀にではあるが被凝集性が低下することがあるので、そ
の場合は回復）させることができる。なお、現時点にお
いては、この還元剤による被凝集性の向上（回復）の作
用機序は詳らかでない。

発明の効果本発明の赤血球保存液は優れた保存能を有し、従来の通
常の保存期間ｌ〜２ケ月を３〜６ケ月まで延長するもの
であり、特に前記加工赤血球と組み合わせることにより
、１年以上の安定な保存が達成できる。かくして、特に
「ウラ試験」などにおける血球保存液として有用である
。

以下に加工赤血球の調製例および本発明の実施例を挙げ
てさらに具体的に説明する。

調製例１　温和固定化処理人Ａ、Ｂ、Ｏ型天然赤血球を生理食塩水またはＰＢＳ（
リン酸緩衝生理食塩水）で充分洗浄し、ＰＢＳに分散し
て２５％分散液５−とし、これに１０ｍＭＧＡを含む５
０ｍＭ　　Ｐ、ＢＳ（ｐＨ７，３１）５ｍｆ２を加え、
２５℃にて１分間充分撹拌して固定化反応を行う。つい
で、ｐＨ７，３１の　５０ｍＭ　　ＰＢＳ５０Ｑ−を加
えて反応を停止し、直ちに３０００　ｒｐｍにて１０分
間遠心し、沈降物を回収する。ｐＨ７，３１の５０ｍＭ
　　ＰＢＳを用いてこの回収物を３回遠心洗浄し、沈降
物を回収して加工ＡＳＢ、Ｏ型赤血球を得た。

調製例２　還元剤処理人ＡＳＢ、Ｏ型天然赤血球をｐＨ７，３の５０ｍＭ　　
ＰＢＳに分散させて２５％分散液とし、この分散液１ｍ
１２に２５０ｍＭ亜硫酸ナトリウムを含む５０ｍＭ　　
ＰＢＳ（ｐＨ９）１０ｎ（２を加え、３７°Ｃにて３０
分間被凝集性回復処理を行い、次いで処理赤血球を５０
ｍＭ　　ＰＢＳで充分洗浄して加工Ａ１Ｂ、Ｏ型赤血球
を得た。

調製例３　温和固定化処理−還元剤処理調製例１で得た
加工赤血球を、次いで調製例２と同様の還元剤処理に付
して加工赤血球を得た。

調製例４　還元剤処理−温和固定化処理調製例２で得た
加工赤血球を、次いで調製例１と同様の温和な固定化処
理に付して加工赤血球を得た。

実施例１　ゼラチン型保存液の調製以下の成分を水に溶かし、全容量をＩｆｆとして本発明
のゼラチン型保存液を得た。ゼラチンとしてはシグマ社
製、牛皮由来タイプＢを用いた。

成分　　　　量（９）ゼラチン　　　　　　　　　　　ｌＯグルコース　　　　　　　　　　　１８．６６食塩　　
　　　　　　　　　　　　４．１８クエン酸ソーダ　　
　　　　　　　　８．０アデニン塩酸塩　　　　　　　
　　０．６７６イノシン　　　　　　　　　　　　２．
６８カナマイシン　　　　　　　　　　０．２８６人天
然赤血球を従来のオールシーバー液およびこのゼラチン
型保存液にて保存した場合について、凝集を示す最大希
釈倍数でその凝集能を表わして、以下の第１表にその経
時変化を比較した。第１表から明らかなように、人天然
赤血球を本発明のゼラチン型保存液に保存した場合、従
来のオールシーバー液よりも長期間安定に保存すること
ができた。

第１表　　凝集能の経時変化実施例２次に、実施例１で用いた人赤血球の代わりに調製例１で
得た加工赤血球をこのゼラチン型保存液中に４℃保存し
、同じ加工赤血球を従来のオールシーバー液中に４℃保
存した場合について、前記と同様に最大希釈倍数による
凝集能の経時変化を比較した。その結果を第２表に示し
た。第２表から、加工赤血球を本発明のゼラチン型保存
液に保存した場合、同一保存期間では従来のオールシー
バー液よりも凝集能の経時変化が少ないことが明らかと
なった。

実施例３〜１２　各種型の保存液の調製ゼラチンの代わ
りに第３表に示す成分および量を用いる以外は実施例１
と同様の成分、成分量および方法により本発明の各種型
保存液を得た。また、第３表に示す各種赤血球を用いて
、本発明の保存液中における安定性、凝集能の経時変化
を調べた。

第３表＊ｌ　可溶性デンプン、和光純薬製＊２　分子量１７万〜２０万のもの、半井化学薬品製＊３　和光純薬製＊４　　＃４００、ファルマシア社製＊５　　Ｋ−９０、石津製薬製＊６　重合度的２０００、和光純薬製＊７　　＃６０００、石津製薬製＊８　メトローズ５Ｈ−４０００，信越化学製＊９　４
１２１０、ダイセル化学製＊ｌＯ関東化学制一方、従来のオールシーバー液中に、実施例３〜１１で
用いたのと同じ赤血球を保存して、両者の保存安定性、
凝集能の経時変化を比較したところ、第１表、第２表と
ほぼ同様の傾向がみられた。

このことによって、本発明の赤血球保存液は従来のオー
ルシーバー液に比べて優れた赤血球保存能を有している
ことが明らかとなった。

特許出願人製鉄化学工業株式会社

Claims

【特許請求の範囲】

（１）オールシーバー液成分とゼラチン、可溶性デンプ
ン、デキストラン、アラビアゴム、フィコール、ポリビ
ニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリエチレン
グリコール、メチルセルロース、カルボキシメチルセル
ロースおよびアルギン酸ナトリウムよりなる群から選択
される１種または２種以上の水溶性高分子物質とよりな
ることを特徴とする赤血球保存液。
（２）赤血球保存液の全重量に基づいて０．２〜５重量
／容量％のゼラチンを含有する前記第（１）項の赤血球
保存液。
（３）赤血球保存液の全重量に基づいて０．１〜５重量
／容量％の可溶性デンプンを含有する前記第（１）項の
赤血球保存液。
（４）赤血球保存液の全重量に基づいて０．１〜５重量
／容量％のデキストランを含有する前記第（１）項の赤
血球保存液。
（５）赤血球保存液の全重量に基づいて０．１〜５重量
／容量％のアラビアゴムを含有する前記第（１）項の赤
血球保存液。
（６）赤血球保存液の全重量に基づいて１〜１０重量／
容量％のフィコールを含有する前記第（１）項の赤血球
保存液。
（７）赤血球保存液の全重量に基づいて０．１〜２重量
／容量％のポリビニルピロリドンを含有する前記第（１
）項の赤血球保存液。
（８）赤血球保存液の全重量に基づいて０．１〜２重量
／容量％のポリビニルアルコールを含有する前記第（１
）項の赤血球保存液。
（９）赤血球保存液の全重量に基づいて１〜１０重量／
容量％のポリエチレングリコールを含有する前記第（１
）項の赤血球保存液。
（１０）赤血球保存液の全重量に基づいて０．０５〜０
．５重量／容量％のメチルセルロースを含有する前記第
（１）項の赤血球保存液。
（１１）赤血球保存液の全重量に基づいて０．０５〜０
．５重量／容量％のカルボキシメチルセルロースを含有
する前記第（１）項の赤血球保存液。
（１２）赤血球保存液の全重量に基づいて０．０２〜０
．２重量／容量％のアルギン酸ナトリウムを含有する前
記第（１）項の赤血球保存液。