CN106561634A - 一种红细胞保存液及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种红细胞保存液及其制备方法，所述保存液包括缓冲体系、营养体系、渗透压体系和防腐体系；所述防腐体系按质量浓度含有以下组分：氯霉素0.2‑1g/L、硫酸新霉素0.1‑0.6g/L和庆大霉素0.1‑0.5g/L。本发明红细胞保存液的缓冲体系、营养体系、防腐体系和渗透压体系相互协同作用确保了本发明红细胞保存液保存周期长，在保存的第6个月末，检测红细胞悬液游离血红蛋白浓度仍符合国家标准，储存期末溶血率小于红细胞总量的0.8％；本发明红细胞保存液能够保证红细胞较强的抗原活性和稳定性。

Description

一种红细胞保存液及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物医学领域，具体涉及输血检验技术领域，尤其涉及一种红细胞保存液及其制备方法。
背景技术
随着医疗技术即人们安全意识的逐渐增高，在输血前保存血液对一些大型疾病的治疗中的应用越来越多。输血前准确的血型检测在医疗上是输血安全的前提，输血作为治疗手段医治了无数人的生命，但是输血也可能会导致严重的输血不良反应，甚至危及生命危险。速发性溶血性输血反应常见于ABO血型不相容输血，因此ABO血型的准确定型至关重要。ABO血型正定型试验时特别易于导致假阳性或假阴性反应，还需要ABO反定型试验验证。现代血型及输血技术已将输血的疗效提高了一个层次，血液的配合型输注概念不仅仅是ABO系统的血型配合，还有Rh等多种稀有血型系统的配合。为避免出现溶血性输血反应，应为需输血患者提供同型血液且要求作交叉配血试验和不规则抗体筛选试验。多次反复大量输血及妊娠可产生免疫性抗体，引起交叉配血不合，或出现溶血性输血反应，致血红蛋白下降，血红蛋白尿，肾功能衰竭，严重者造成死亡。输血前不规则抗体检测有效预防溶血反应的发生，对保证临床输血的安全有效具有重要意义。此时试剂红细胞的质量是试验、治疗结果准确的保证，但是普通红细胞易溶血，难储存，试剂盒中红细胞在应用中常出现溶血弱凝集假阴性结果，严重干扰血型鉴定结果。目前，红细胞都是从人体血液中获得，暂时没有其他物质代替，这使得红细胞的保存需要更加长久有效的方法。
最早将新鲜采集的红细胞溶于生理盐水，但这种方法只能让红细胞保存1～2天即发生明显溶血，从而失去其功能。
后来国内外都是应用ACD保存液(抗凝剂和葡萄糖)、CPD保存液(抗凝剂、葡萄糖和磷酸盐)，但是这些保存液对红细胞的保存有所延长，但在一个月后就出现的红细胞的褐化及溶血。接着Nihon IshikaiZasshi提出加入腺嘌呤和肌苷来防止红细胞的恶化，起到一定作用；日本专利Kokai提出加入山梨糖醇、木糖醇、白蛋白；美国专利提出加入胆固醇，他们这些方法使得红细胞恶化都有显著的抑制。后来日本的Kokai专利又公开了加入一些水溶性聚合物能够增长保存时间。然而即使用这些方法红细胞最多保存1-3个月。
目前国内没有形成统一的保养体系，红细胞处理技术也不相应完善，从而导致体外红细胞保存很难得到保障。而国外都是选用PH值6.8±0.2的阿氏液作为红细胞保存液，也较为正规标准化，但考虑到产品保存时间短，只有3个月，加上运输周期长及过程中对红细胞膜上抗原稳定性活性的影响，使用有效期减短，成本增加。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种红细胞保存液及其制备方法，本申请的红细胞保存液延长了红细胞的保存时间，降低的红细胞的溶血率，为红细胞的长期保存提供了有效的保障。
为达此目的，本发明采用了以下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种红细胞保存液，其特征在于，所述保存液包括缓冲体系、营养体系、渗透压体系和防腐体系；
所述防腐体系按质量浓度含有以下组分：氯霉素0.2-1g/L、硫酸新霉素0.1-0.6g/L和庆大霉素0.1-0.5g/L。
本发明中通过利用氯霉素、硫酸新霉素和庆大霉素进行防腐，使氯霉素、硫酸新霉素和庆大霉素之间相互促进，三者发挥了协同增效作用，大大增强了防腐效果，相较于其他保存液的双抗更加有效的抑制了杂菌的繁殖生长，保护了红细胞的正常代谢使得保存期限得到进一步延长。
所述氯霉素为0.2-1g/L，例如可以是0.2g/L、0.3g/L、0.4g/L、0.5g/L、0.6g/L、0.7g/L、0.8g/L、0.9g/L或1g/L，优选为0.4-0.6g/L，进一步优选为0.5g/L，以及上述数值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
所述硫酸新霉素为0.1-0.6g/L，例如可以是0.1g/L、0.2g/L、0.3g/L、0.4g/L、0.5g/L或0.6g/L，优选为0.2-0.4g/L，进一步优选为0.3g/L，以及上述数值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
所述庆大霉素为0.1-0.5g/L，例如可以是0.1g/L、0.2g/L、0.3g/L、0.4g/L或0.5g/L，优选为0.1-0.3g/L，进一步优选为0.2g/L，以及上述数值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
本发明红细胞保存液中，所述渗透压体系只要能够有效稳定红细胞膜内外渗透压的体系都可行，优选的营养体系按质量浓度含有以下组分：NaCl 2-5g/L和柠檬酸钠5-15g/L；
上述渗透压体系可以有效稳定红细胞膜内外渗透压，防止红细胞的溶血。
所述NaCl为2-5g/L，例如可以是2g/L、2.1g/L、2.3g/L、2.5g/L、2.6g/L、2.8g/L、3g/L、3.1g/L、3.3g/L、3.5g/L、3.8g/L、4g/L、4.2g/L、4.5g/L、4.8g/L或5g/L，优选为2.5-3.5g/L，进一步优选为3.1g/L，以及上述数值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
所述柠檬酸钠为5-15g/L，例如可以是5g/L、5.1g/L、5.2g/L、5.3g/L、5.5g/L、5.8g/L、6g/L、6.2g/L、6.5g/L、6.8g/L、7g/L、7.2g/L、7.5g/L、7.8g/L、8g/L、8.2g/L、8.5g/L、9g/L、9.2g/L、9.5g/L、9.8g/L、10g/L、10.2g/L、10.5g/L、10.8g/L、11g/L、11.2g/L、11.5g/L、11.8g/L、12g/L、12.5g/L、12.8g/L、13g/L、13.5g/L、13.8g/L、14g/L、14.5g/L、14.8g/L或15g/L，优选为6-10g/L，进一步优选为8g/L，以及上述数值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
本发明红细胞保存液中，所述营养体系能够给红细胞供应能量的都是可行的，优选的营养体系按质量浓度含有以下组分：D-葡萄糖10-25g/L、腺嘌呤盐酸盐0.1-1g/L和肌苷1-10g/L，本申请的营养体系能够模拟人体微环境，能够更好的保存红细胞；
本发明红细胞保存液以D-葡萄糖、腺嘌呤盐酸盐、肌苷等作为营养体系，维持红细胞在长期保存过程中的新陈代谢，以肌苷、腺嘌呤盐酸盐、D-葡萄糖这个顺序构成了生物体内的糖酵解过程，从肌苷、腺嘌呤盐酸盐合成腺嘌呤，腺嘌呤合成ATP，结合D-葡萄糖进行能量代谢，不仅保证了红细胞的新陈代谢还避免了红细胞保存过程中的聚集粘合。
所述D-葡萄糖10-25g/L，例如可以是10g/L、10.2g/L、10.5g/L、10.8g/L、11g/L、11.2g/L、11.5g/L、11.8g/L、12g/L、12.5g/L、12.8g/L、13g/L、13.5g/L、13.8g/L、14g/L、14.5g/L、14.8g/L、15g/L、15.5g/L、16g/L、16.5g/L、17g/L、17.5g/L、18g/L、18.5g/L、19g/L、19.5g/L、20g/L、20.5g/L、21g/L、21.5g/L、22g/L、22.5g/L、23g/L、23.5g/L、24g/L、24.5g/L或25g/L，优选为15-20g/L，进一步优选为18.66g/L，以及上述数值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
所述腺嘌呤盐酸盐0.1-1g/L，例如可以是0.1g/L、0.2g/L、0.3g/L、0.4g/L、0.5g/L、0.6g/L、0.7g/L、0.8g/L、0.9g/L或1g/L、，优选为0.5-0.7g/L，进一步优选为0.676g/L，以及上述数值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
所述肌苷1-10g/L，例如可以是1g/L、1.1g/L、1.2g/L、1.3g/L、1.5g/L、1.8g/L、2g/L、2.1g/L、2.5g/L、2.8g/L、3g/L、3.5g/L、3.8g/L、4g/L、4.1g/L、4.2g/L、4.3g/L、4.5g/L、4.8g/L、5g/L、5.1g/L、5.3g/L、5.5g/L、5.8g/L、6g/L、6.1g/L、6.3g/L、6.5g/L、6.8g/L、7g/L、7.1g/L、7.3g/L、7.5g/L、7.8g/L、8g/L、8.1g/L、8.3g/L、8.5g/L、9g/L、9.1g/L、9.3g/L、9.5g/L、9.8g/L或10g/L，优选为2-3g/L，进一步优选为2.68g/L，以及上述数值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
本发明红细胞保存液中，所述缓冲体系为HEPES缓冲液、磷酸盐缓冲液或柠檬酸缓冲液中的任意一种或至少两种的组合，优选为HEPES缓冲液。
优选地，所述HEPES缓冲液中HEPES的质量浓度为10-35g/L，例如可以是10g/L、11g/L、12g/L、13g/L、14g/L、15g/L、16g/L、17g/L、18g/L、19g/L、20g/L、21g/L、22g/L、23g/L、24g/L、25g/L、26g/L、27g/L、28g/L、29g/L、30g/L、31g/L、32g/L、33g/L、34g/L或35g/L，优选为18-20g/L，进一步优选为19.04g/L，以及上述数值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
本发明红细胞保存液的常规的缓冲体系都可行，而以HEPES缓冲液作为缓冲体系，将pH值保持在7.2-7.4之间，相比目前其他保存液的6.8±0.2的pH值体系以及磷酸盐缓冲体系，更符合红细胞的生存环境，能够较长时间的维持整个体系的离子强度，保证稳定的pH值环境。
优选地，所述保存液还包括超氧化物歧化酶(SOD)；
所述SOD能快速消除自由基，抵抗自由基对细胞膜的攻击，增强细胞膜的抗氧化能力，使细胞维持自我恒定的状态，防止细胞变异，快速修复细胞，激活细胞，增进细胞的活力；还能消除生物体内因新陈代谢产生的有害物质，保证了红细胞的活性。
优选地，所述SOD的浓度为200-750U/L，例如可以是200U/L、201U/L、202U/L、203U/L、205U/L、208U/L、210U/L、220U/L、230U/L、240U/L、250U/L、260U/L、270U/L、280U/L、290U/L、300U/L、310U/L、320U/L、330U/L、340U/L、350U/L、360U/L、370U/L、380U/L、390U/L、400U/L、410U/L、420U/L、430U/L、440U/L、450U/L、460U/L、470U/L、480U/L、490U/L、500U/L、510U/L、520U/L、530U/L、540U/L、550U/L、560U/L、570U/L、580U/L、590U/L、600U/L、610U/L、620U/L、630U/L、640U/L、650U/L、680U/L、700U/L、720U/L、730U/L、740U/L或750U/L，优选为242-620U/L，进一步优选为500U/L，以及上述数值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
作为本发明的优选技术方案，所述红细胞保存液按质量浓度含有以下组分：
优选地，所述保存液按质量浓度含有以下组分：
作为本发明红细胞保存液最优技术方案，所述保存液按质量浓度含有以下组分：
第二方面，本发明提供一种红细胞保存液的制备方法，所述方法包括以下步骤：按配方量加入HEPES和NaCl，调节pH，再加入其余组分，溶解后调节pH。
具体的调节pH的方法可以包括酸碱试剂调节，但并非仅限于此，本领域技术人员可以根据实际需要采用本领域公知的技术进行调节pH。
优选地，所述调节pH为7-7.5，优选为7.2-7.4。
与现有技术相比，本发明至少具有以下有益效果：
(1)本发明的红细胞保存液使传统保存液容易让红细胞溶血和褐化的缺点得到了改变，降低了红细胞保存过程中自身的凝集性，延长了红细胞的保存时间，能够在很长一段时间内维护血红细胞膜上的抗原活性，能够使保存液较稳定的保持在适宜的pH值7.2-7.4之间；
(2)本发明缓冲体系维持红细胞外环境的离子强度及稳定适宜的pH值环境，营养体系保证红细胞的正常新陈代谢及能量供应，防腐体系为红细胞提供了安全无杂菌的优良储存环境，渗透压体系确保了红细胞膜内外压力平衡，减小了溶血发生的可能，SOD的增加使得红细胞避免了自由基的迫害和代谢物的影响；
(3)本发明红细胞保存液的缓冲体系、营养体系、防腐体系和渗透压体系相互协同作用确保了：本发明红细胞保存液保存周期长，在保存的第6个月末，检测红细胞悬液游离血红蛋白浓度仍符合国家标准，储存期末溶血率小于红细胞总量的0.8％；本发明红细胞保存液能够保证红细胞较强的抗原活性和稳定性。
具体实施方式
为便于理解本发明，本发明列举实施例如下。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
所述红细胞保存液按质量浓度含有以下组分：
红细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
按配方量加入HEPES和NaCl，调节pH到7.3，再加入其余组分，溶解后调节pH 7.3。
实施例2
所述红细胞保存液按质量浓度含有以下组分：
红细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
按配方量加入HEPES和NaCl，调节pH到7，再加入其余组分，溶解后调节pH 7。
实施例3
所述红细胞保存液按质量浓度含有以下组分：
红细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
按配方量加入HEPES和NaCl，调节pH到7.5，再加入其余组分，溶解后调节pH 7.5。
实施例4
所述红细胞保存液按质量浓度含有以下组分：
红细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
按配方量加入HEPES和NaCl，调节pH到7.2，再加入其余组分，溶解后调节pH 7.2。
实施例5
所述红细胞保存液按质量浓度含有以下组分：
红细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
按配方量加入HEPES和NaCl，调节pH到7.4，再加入其余组分，溶解后调节pH 7.4。
实施例6
所述红细胞保存液按质量浓度含有以下组分：
红细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
按配方量加入HEPES和NaCl，调节pH到7.4，再加入其余组分，溶解后调节pH 7.4。
实施例7
所述红细胞保存液按质量浓度含有以下组分：
红细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
按配方量加入HEPES和NaCl，调节pH到7.1，再加入其余组分，溶解后调节pH7.1。
实施例8
所述红细胞保存液按质量浓度含有以下组分：
红细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
按配方量加入HEPES和NaCl，调节pH到7.3，再加入其余组分，溶解后调节pH 7.3。
对比例1
与实施例1相比，除没有氯霉素之外，其它与实施例1相同。
对比例2
与实施例1相比，除没有硫酸新霉素之外，其它与实施例1相同。
对比例3
与实施例1相比，除没有庆大素之外，其它与实施例1相同。
对比例4
与实施例1相比，除氯霉素替换为青霉素之外，其它与实施例1相同。
对比例5
与实施例1相比，除氯霉素1.2g/L、硫酸新霉素0.8g/L和庆大霉素0.7g/L之外，其它与实施例1相同。
对比例6
与实施例1相比，除氯霉素0.1g/L、硫酸新霉素0.05g/L和庆大霉素0.05g/L之外，其它与实施例1相同。
对比例7
与实施例1相比，除将缓冲体系HEPES替换为磷酸盐缓冲体系，即枸橼酸三钠·2H2O 25mM、磷酸二氢钾1.5mM、磷酸氢二钠1mM，pH调节为6.8-6.9之外，其它与实施例1相同。
对比例8
与实施例1相比，除缓冲体系HEPES的质量浓度为5g/L之外，其它与实施例1相同。
对比例9
与实施例1相比，除缓冲体系HEPES的质量浓度为40g/L之外，其它与实施例1相同。
对比例10
与实施例1相比，除不含有SOD之外，其它与实施例1相同。
对比例11
与实施例1相比，除SOD的质量浓度为180U/L之外，其它与实施例1相同。
对比例12
与实施例1相比，除SOD的质量浓度为780U/L之外，其它与实施例1相同。
将实施例1-8和对比例1-12进行红细胞悬液pH值、游离的血红蛋白含量和细菌培养检测，结果如表1、表2和表3所示；
(1)红细胞悬液pH值检测：血液的正常pH值是7.35-7.45，平均值是7.4，如果小于7.35，称为酸中毒，大于7.45称为碱中毒，所以对于红细胞的体外保存，更应该避免pH值得变化对红细胞保存的影响。
表1
从表1可以看出，本发明HEPES的pH稳定性最高，可以保持7个月以上pH值恒定，从对比例7-9可以看出，磷酸盐缓冲体系的pH值不稳定，HEPES的浓度过高或过低也不利于保持pH稳定，而从对比例1-6可以看出，防腐体系的替换也会对pH值产生一些影响，可见HEPES缓冲体系更适合红细胞的生存环境，能够较长时间的维持整个体系的离子强度，保证稳定的PH值环境。
(2)血红蛋白含量的测定：红细胞的主要组成成分有血红蛋白，当红细胞溶血后即细胞膜破裂血红蛋白从细胞中逸出。
血红蛋白可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与氰离子结合，生成稳定的氰化高铁血红蛋白，而氰化高铁血红蛋白在波长为540nm处有一个较宽的吸收峰，它在540nm处吸光度同在溶液中的浓度成正比。测定血红蛋白浓度时可通过测定其吸光度，从标准曲线上按吸光度读取。
用50倍稀释后的文奇氏液做空白管，在540nm处用分光光度计进行测定，调节吸光度值为0再测定标准管，每管测定3次吸光值，按照纵坐标为吸光度，横坐标为Hb克数绘制标准曲线。吸取20μL待测液，在盛有5mL文奇氏液中吸洗三次，5min后在分光光度计上测定吸光值，对应标准曲线读取相应血红蛋白含量。
血红蛋白(g/L)＝测定吸光度值×64458/44000×251.
表2
根据2012年发布的全血和成分血质量要求的国家标准GB18469-2012文件，规定洗涤红细胞效期末溶血率小于红细胞总量的0.8％，即游离血红蛋白浓度小于88g/L，从表2可以看出，实施例1-8红细胞在第7个月仍然符合国家标准，而对比例1-12可以看出，将防腐体系进行替换导致红细胞只能保存3-4个月，将缓冲体系进行替换，导致红细胞只能保存5个月，少了SOD或是改变SOD的浓度，导致红细胞只能保存4-5个月。
(3)细菌培养检测：将红细胞保存液用固体培养基在培养皿中对其抗菌能力进行检测；
表3
由表3可以看出，相比对比例1-6，实施例1-8通过设定氯霉素、新霉素和庆大霉素的质量浓度，其具有更强的防腐能力，而且不影响红细胞本身的抗原性和准确性，通过对比例1-6可以看出，三种抗生素互相作用，相互促进，提高了红细胞保存液的防腐能力，而从对比例7-12可以看出，改变缓冲液或是改变SOD都使得红细胞的保存时间下降。
综上所述，本发明红细胞保存液的缓冲体系、营养体系、防腐体系和渗透压体系相互协同作用确保了：本发明红细胞保存液保存周期长，在保存的第6个月末，检测红细胞悬液游离血红蛋白浓度仍符合国家标准，储存期末溶血率小于红细胞总量的0.8％；本发明红细胞保存液能够保证红细胞较强的抗原活性和稳定性。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细工艺设备和工艺流程，但本发明并不局限于上述详细工艺设备和工艺流程，即不意味着本发明必须依赖上述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种红细胞保存液，其特征在于，所述保存液包括缓冲体系、营养体系、渗透压体系和防腐体系；
所述防腐体系按质量浓度含有以下组分：氯霉素0.2-1g/L、硫酸新霉素0.1-0.6g/L和庆大霉素0.1-0.5g/L。
2.如权利要求1所述的红细胞保存液，其特征在于，所述防腐体系按质量浓度含有以下组分：氯霉素0.4-0.6g/L、硫酸新霉素0.2-0.4g/L和庆大霉素0.1-0.3g/L；
优选地，所述防腐体系按质量浓度含有以下组分：氯霉素0.5g/L、硫酸新霉素0.3g/L和庆大霉素0.2g/L。
3.如权利要求1或2所述的红细胞保存液，其特征在于，所述渗透压体系按质量浓度含有以下组分：NaCl 2-5g/L和柠檬酸钠5-15g/L；
优选地，所述渗透压体系按质量浓度含有以下组分：NaCl 2.5-3.5g/L和柠檬酸钠6-10g/L；
优选地，所述渗透压体系按质量浓度含有以下组分：NaCl 3.1g/L和柠檬酸钠8g/L。
4.如权利要求1-3之一所述的红细胞保存液，其特征在于，所述营养体系按质量浓度含有以下组分：D-葡萄糖10-25g/L、腺嘌呤盐酸盐0.1-1g/L和肌苷1-10g/L；
优选地，所述营养体系按质量浓度含有以下组分：D-葡萄糖15-20g/L、腺嘌呤盐酸盐0.5-0.7g/L和肌苷2-3g/L；
优选地，所述营养体系按质量浓度含有以下组分：D-葡萄糖18.66g/L、腺嘌呤盐酸盐0.676g/L和肌苷2.68g/L。
5.如权利要求1-4之一所述的红细胞保存液，其特征在于，所述缓冲体系为HEPES缓冲液、磷酸盐缓冲液或柠檬酸缓冲液中的任意一种或至少两种的组合，优选为HEPES缓冲液；
优选地，所述HEPES缓冲液中HEPES的质量浓度为10-35g/L，优选为18-20g/L，进一步优选为19.04g/L。
6.如权利要求1-5之一所述的红细胞保存液，其特征在于，所述保存液还包括超氧化物歧化酶；
优选地，所述超氧化物歧化酶的浓度为200-750U/L，优选为242-620U/L，进一步优选为500U/L。
7.如权利要求1-6之一所述的红细胞保存液，其特征在于，所述保存液按质量浓度含有以下组分：
优选地，所述保存液按质量浓度含有以下组分：
8.如权利要求1-7之一所述的红细胞保存液，其特征在于，所述保存液按质量浓度含有以下组分：
9.如权利要求1-8之一所述的红细胞保存液的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：按配方量加入HEPES和NaCl，调节pH，再加入其余组分，溶解后调节pH。
10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述调节pH为7-7.5，优选为7.2-7.4。
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