CN117426372A

CN117426372A - 一种保护红细胞的组合物、制备方法及应用

Info

Publication number: CN117426372A
Application number: CN202311753162.8A
Authority: CN
Inventors: 周虹; 赵莲; 李伟丹; 王瑛; 尤国兴; 陈玉芝; 盛铭; 靳慧琴
Original assignee: Academy of Military Medical Sciences AMMS of PLA
Current assignee: Academy of Military Medical Sciences AMMS of PLA
Priority date: 2023-12-20
Filing date: 2023-12-20
Publication date: 2024-01-23

Abstract

本发明公开了一种保护红细胞的组合物、制备方法及应用，本发明的目标是开发一种新型红细胞保存液，该保存液成分精简，却能够实现以下效果：在储存期末，可以在维持较低溶血率的前提下，使储存红细胞P50值保持在较高的水平，且保持能量代谢相关指标较为稳定，更好的维持储存红细胞的稳定性。

Description

一种保护红细胞的组合物、制备方法及应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种保护红细胞的组合物、制备方法及应用。

背景技术

输血作为临床治疗的重要手段之一，伴随而来的血液成分供应紧张也是医学界亟待解决的难题，如何最大限度的发挥血液各成分的功效，是科学领域一直关注的重要课题。临床为患者输注红细胞的主要目的是为改善患者缺氧状态，患者缺氧状态改善主要与红细胞的携氧/释氧能力有关。红细胞的携氧/释氧能力用血红蛋白氧亲和力表示，主要通过血红蛋白的氧饱和度为50%时的氧分压（P₅₀）表示，P₅₀越低氧亲和力越高，P₅₀越高则氧亲和力越低，储存红细胞的携氧/释氧能力维持对输血治疗效果具有重要影响。在输血治疗失血性休克过程中，P₅₀值较低可能会导致部分血红蛋白携带的氧在进入微循环之前就即被释放，导致机体出现缺血组织供血不足等问题。而储存期间红细胞的P₅₀值会出现较大下降为公知的技术问题，如何在红细胞储存期间保持较高的P₅₀及稳定的能量代谢成为一个技术难题。

当前，国内市售的红细胞保存液主要有MAP、CPDA等，国外市售的红细胞保存液主要包括SAGM、PAGGGSM、PAG3M、E-Sol5和AS-7等，但无论是国内还是国外，当前储存液对于红细胞储存期质量影响，都主要关注在维持红细胞的形态、生化指标以及代谢指标等方面。对储存红细胞携氧/放氧能力关注较少。如何在成分设计上达到平衡,使新型红细胞保存液在符合《全血及成分血质量要求》中规定的溶血不得大于0.8%情况下，能维持红细胞携氧/释氧能力及能量代谢稳定是当前研发的关键目标，这还需要从红细胞生理特性出发,优化保存液成分的组成比例,以期取得完美的配方效果。

发明内容

为了解决现有技术存在的技术问题，提供了以下技术方案：

本发明提供了一种组合物，所述组合物为磷酸二氢钠、葡萄糖、腺嘌呤，其中磷酸二氢钠：葡萄糖：腺嘌呤的质量之比为107：（80-160）：（1-3）。

在一些实施方案中，所述磷酸二氢钠：葡萄糖：腺嘌呤的质量之比包括107:80:1,107:90:1,107:100:1,107:110:1,107:120:1,107:130:1,107:140:1,107:150:1,107:160:1,107:80:2,107:90:2,107:100:2,107:110:2,107:120:2107:130:2,107:140:2,107:150:2,107:160:2,107:80:3,107:90:3,107:100:3,107:110:3,107:120:3,107:130:3,107:140:3,107:150:3,107:160:3。

进一步，所述磷酸二氢钠包括磷酸二氢钠一水合物，二水合磷酸二氢钠。

进一步，所述磷酸二氢钠为磷酸二氢钠一水合物。

进一步，所述葡萄糖包括D-葡萄糖，L-葡萄糖，一水合葡萄糖。

进一步，所述葡萄糖包括一水合葡萄糖。

进一步，所述一水合葡萄糖包括D-葡萄糖一水合物，L-葡萄糖一水合物。

在某些具体的实施方案中，所述磷酸二氢钠可被替换成磷酸盐，具体的磷酸盐种类包括三聚磷酸钠、六偏磷酸钠、焦磷酸钠、磷酸三钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、酸式焦磷酸钙、焦磷酸二氢二钠、磷酸钠、磷酸钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸铵、磷酸二氢铵、磷酸氢二铵。

术语“包括”以及诸如“包括了”和“包括的”之类的其他语法形式的使用不是限制性的。如本文所用，术语“包含”具有广泛的标准含义“包括”、“涵盖”或“含有”。它包括明确列举的一个或多个元素，并且还允许但不要求，存在其他或另一个未引用的一个或多个元素。除了本文所用的这种广泛含义之外，术语“包括”还涵盖限制性含义“由……组成”，根据该含义，仅存在明确列举的一个或多个元素，不存在其他一个或多个元素。此外，术语“包括”还包括“基本上由……组成”的含义，这意味着除了明确列举的那些之外，还可以存在额外一个或多个元素，前提是额外存在的一个或多个元素不会改变通过明确列举的一个或多个元素所实现的技术效果。

如本文所用，术语“组合物”涵盖并公开任何包含各自列举的物质(或由其组成或基本上由其组成)的物理实体，组合物的物理形式不受限制。例如，术语“组合物”涵盖并公开了一种粉末，其中所述列举的物质各自以粉末形式存在。作为另一示例，术语“组合物”还涵盖并公开了一种液体溶液，其中所述列举的物质各自以可溶性形式存在。作为另一示例，术语“组合物”还涵盖并公开了一种乳液，其中存在列举的物质。作为另一示例，术语“组合物”还涵盖并公开了一种悬浮液，其中存在列举的物质。作为另一示例，术语“组合物”还涵盖并公开了混合物。

本发明提供了一种保存液，所述保存液包含前面所述的组合物。

进一步，本发明的保存液含有以下浓度的原料：120 mM磷酸二氢钠一水合物、60-120 mM一水合葡萄糖，1-3 mM腺嘌呤。

在一些实施方案中，所述一水合葡萄糖的浓度包括60 mM、70 mM、80 mM、90 mM、100 mM、110 mM、120 mM。在一些实施方案中，所述腺嘌呤的浓度包括1 mM、1.5 mM、2 mM、2.5 mM、3 mM。

在一些实施方案中，所述保存液中磷酸二氢钠：葡萄糖：腺嘌呤的浓度比例为120:60:1，120:70:1，120:80:1，120:90:1，120:100:1，120:110:1，120:120:1，120:60:2，120:70:2，120:80:2，120:90:2，120:100:2，120:110:2，120:120:2，120:60:3，120:70:3，120:80:3，120:90:3，120:100:3，120:110:3，120:120:3。

进一步，所述保存液中磷酸二氢钠为磷酸二氢钠一水合物，葡萄糖为一水合葡萄糖，所述保存液包括浓度120 mM的磷酸二氢钠一水合物、60-120 mM的一水合葡萄糖、1-3mM的腺嘌呤，所述保存液的pH值为8.0-9.0。

在一些实施方案中，所述保存液的pH值包括8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0。

进一步，所述保存液为浓度120 mM的磷酸二氢钠一水合物、80 mM的一水合葡萄糖、2 mM的腺嘌呤，所述保存液的pH值为8.5。

进一步，所述保存液还包括溶剂，所述溶剂包括去离子水或超纯水。

术语“腺嘌呤”是指Adenine，简称A，是一种嘌呤，在生物化学上具有许多不同的功用。于细胞呼吸中，是以富有能量的腺苷三磷酸（ATP），以及辅因子烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）、黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）等形式发生作用。并且在蛋白质生物合成过程里作为DNA与RNA的组成物。

术语“保存液”是指能够保持细胞活性的维持溶液以及向组织或细胞传递细胞的运载溶液，在本发明的实施方案中，所述细胞为红细胞，所述保存液以维持细胞活性的功能与红细胞混合。

本发明提供了一种前面所述的保存液的制备方法，所述方法包括如下步骤：将前面所述的组合物溶解到溶剂中，调整溶液pH值，并灭菌处理，得到保存液。

进一步，所述溶剂包括去离子水或超纯水。

进一步，所述调整溶液pH值包括使用NaOH进行调节。

进一步，所述灭菌处理包括物理灭菌、化学灭菌。

进一步，所述物理灭菌包括湿热灭菌法、干热灭菌法、射线灭菌法、过滤灭菌法。

进一步，所述化学灭菌包括化学消毒剂灭菌法、抗生素抑菌法。

在一些实施方案中，所述保存液的制备方法如下所示：

将保存液的成分磷酸二氢钠一水合物，一水合葡萄糖，腺嘌呤按照120 mM、60-120mM、1-3 mM配比进行称量，优选地以磷酸二氢钠一水合物，一水合葡萄糖，腺嘌呤按照120mM、80 mM、2 mM配比进行称量，用去离子水或超纯水，优选地为去离子水进行溶解定容，定容到100 mL，超声混匀，用1 M的NaOH对保存液进行pH调节。将配制好的保存液在无菌条件下通过0.22微米滤膜，完成过滤后在保存于2-6℃代用。

本发明提供了磷酸二氢钠、葡萄糖、腺嘌呤在制备维持红细胞活性的产品中的应用。

进一步，所述产品包括红细胞保存液。

进一步，所述红细胞保存液与红细胞的体积比为1:1.5-4。

进一步，所述红细胞保存液与红细胞的体积比为1:4。

进一步，所述磷酸二氢钠、葡萄糖、腺嘌呤在应用中的使用质量比例包括107：（80-160）：（1-3）。

在一些实施方案中，所述维持红细胞活性的产品中磷酸二氢钠、葡萄糖、腺嘌呤的质量比为107:80:1,107:90:1,107:100:1,107:110:1,107:120:1,107:130:1，107:140:1,107:150:1,107:160:1,107:80:2,107:90:2,107:100:2,107:110:2,107:120:2107:130:2,107:140:2,107:150:2,107:160:2,107:80:3,107:90:3,107:100:3,107:110:3,107:120:3,107:130:3,107:140:3,107:150:3,107:160:3。

进一步，所述应用中的磷酸二氢钠盐为磷酸二氢钠一水合物，葡萄糖为一水合葡萄糖，所述磷酸二氢钠一水合物：一水合葡萄糖：腺嘌呤的浓度之比为120：（60-120）：（1-3）。

进一步，所述磷酸二氢钠一水合物：一水合葡萄糖：腺嘌呤的浓度之比为120:80:2。

进一步，所述维持红细胞活性包括维持红细胞携氧能力、维持红细胞释氧能力，维持红细胞能量代谢稳定。

进一步，所述维持红细胞能量代谢稳定包括维持红细胞ATP（三磷酸腺苷）代谢稳定、维持红细胞乳酸代谢稳定、维持红细胞葡萄糖代谢稳定、维持红细胞2,3-DPG（2,3-二磷酸甘油酸）代谢稳定。

术语“红细胞”是血液中数量最多的一种血细胞，其通过细胞内大量血红蛋白负责体内氧气的输送。红细胞在脊椎动物中广泛存在，也存在与少量无脊椎动物中。优选地，本文中红细胞指哺乳动物红细胞，包括大鼠、小鼠、猫、牛、马、猴红细胞，更优选人红细胞。术语“红细胞保存液”是指用于保存红细胞的混合溶液。当将采集的红细胞置于红细胞保存液中，可以较长时间地保持红细胞的形态、活性或膜成分等。

术语“维持红细胞活性”是指，相对于未经本发明的保存液处理的红细胞，使用根据本发明的保存液处理的红细胞，其红细胞的携氧能力、红细胞的释氧能力、红细胞能量代谢稳定均提升，这样的提升是极显著的。

术语“携氧能力”又称为“红细胞携氧能力”，是指红细胞携氧的能力。携氧能力包括当红细胞在本发明所提供的保存液中保存之后，将其应用到运输氧气的用途中时依旧能够较好的携带氧气运输到目的部位。

术语“释氧能力”又称为“红细胞释氧能力”，是指红细胞释放氧气的能力。释氧能力包括当红细胞在本发明所提供的保存液中保存之后，将其应用到运输氧气的用途中时依旧能够较好的将氧气释放到目的部位。

本发明提供了前面所述的组合物、前面所述的保存液、或前面所述的制备方法在体外保存红细胞中的应用。

进一步，所述保存液与红细胞的体积比例为1:1.5-4。

进一步，所述保存液与红细胞的体积比为1:4。

在一些实施方案中，所述保存液与红细胞的体积比为1:1.5,1:2,1:2.5,1:3,1:3.5,1:4。

本发明使用的术语“保存红细胞”表示红细胞在输血使用之前可以存活并保持较好的活性和状态，这种活性或状态能够维持一段时间。该时间段可以是1小时、2小时、5小时、10小时、15小时、20小时、24小时、2天、4天、5天、7天、9天、11天、13天、14天、15天、17天、19天、21天、23天、25天、27天、29天、31天、33天、35天、40天、50天、60天、3个月、4个月、6个月、8个月、10个月、1年、2年、4年、6年、8年、10年、12年、14年、16年、18年、20年、22年、24年、30年、35年、40年、45年或100年或在该范围内提供的任意时间之间的任何时间段。

相比已有的技术，本发明的组合物与保存液有以下优点和效果：

本发明目的是开发一种新型组合物以及使用该组合物制备的红细胞保存液，其成分精简，却能够实现以下效果：

在储存期末,可以在维持较低溶血率的前提下，使储存红细胞P₅₀值保持在较高的水平，且保持能量代谢相关指标较为稳定，更好的维持储存红细胞的稳定性。能够兼顾以下几个方面：

（1）维持稳定的携氧/释氧能力

实验表明，碱性保存液中的红细胞在35天时溶血在《全血及成分血质量要求》要求范围内，且溶血率最低。同时在储存期末可以保持较高的P₅₀水平和较高的ATP含量。可能原因为该保存液维持了8.5的高pH环境及减少保存液中氯离子的含量，通过影响红细胞内外的氢离子平衡及激活糖酵解途径中的关键调节酶PFK和PK影响糖酵解速率，从而能够使储存期间红细胞内的ATP和2,3-DPG水平维持在较高水平，使红细胞P₅₀维持在较高的水平，有利于红细胞输注后向微循环缺血部位及时供氧。

（2）碱性pH：该保存液通过添加磷酸二氢钠调节保存液pH为8.5左右，影响红细胞内外的氢离子平衡，使储存红细胞内pH较高，可在一定程度上激活糖酵解途径中的关键调节酶PFK和PK，使糖酵解活性增强，从而能够维持红细胞内较高的ATP和2,3-DPG水平，更有利于维持红细胞的稳定性及携氧/释氧的能力，改善红细胞储存质量。此外，不含氯化物的保存液也可以通过影响红细胞“氯离子转移”，使红细胞内pH值保持较高，有助于红细胞的携氧/释氧能力的维持及红细胞能力代谢稳定。

（3）成分精简

该保存液仅含红细胞存储的必要物质，仅通过添加磷酸盐缓冲物质和葡萄糖、腺嘌呤营养物质，无氯化物、无甘露醇、无柠檬酸盐，成分精简易于配制。

附图说明

图1是各组细胞溶血随储存时间变化曲线图；

图2是各组细胞P₅₀随储存时间的变化曲线图；

图3是各组细胞ATP含量随储存时间变化曲线图；

图4是各组细胞葡萄糖含量随储存时间变化曲线图；

图5是各组细胞乳酸含量随储存时间变化曲线图。

注：NS组为生理盐水组，5.8组为酸性-5.8组，8.5组为碱性-8.5组。

具体实施方式

为了使得本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合其实施例，对本发明进行进一步详细说明；应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于限定本发明。对于本领域技术人员而言，在查阅以下详细描述之后，本实施例的其它系统、方法和/或特征将变得显而易见。旨在所有此类附加的系统、方法、特征和优点都包括在本说明书内。包括在本发明的范围内，并且受所附权利要求书的保护。在以下详细描述描述了所公开的实施例的另外的特征，并且这些特征根据以下将详细描述将是显而易见的。

实施例1

1、实验材料

肝素钠采血管（22126002，河北鑫乐医疗器械科技股份有限公司）、离心机（ThermoFisherREF：75002425，Hart德国）、水平离心机（2-16PK，美国SIGMA公司）、白细胞滤器（FJ0742，美国Pall公司）、1.5ml灭菌EP管（K199272P，艾本德（eppendorf）公司）、电子天平（ES-200IP，长沙湘平科技发展有限公司）、超声波清洗机（GTSONIC）、顶盘式注射器过滤器（PN4612,PALLLifeSciences）。

磷酸二氢钠一水合物（M19H044，AlfaAesar）、一水合葡萄糖（20201208，中国医药集团有限公司）、腺嘌呤（20210415，中国医药集团有限公司）1M氢氧化钠。

2、实验方法

（1）保存液的配制

根据保存液的成分配比进行称量（表1），用去离子水定容至100 ml，超声混匀，用1M的NaOH对其进行pH调节。将配制好的保存液在超净工作台（紫外照射15 min）下通过0.22微米滤膜，后置于50ml离心管内保存于2-6℃待用。

表1碱性-8.5组保存液配方

同时还将对照组NS（生理盐水组），酸性-5.8组（pH=5.8）的保存液进行配比，具体酸性-5.8组的保存液配方如表2所示。

表2酸性-5.8组配方法

（2）红细胞获取

取人新鲜血液过白细胞滤器后进行离心（1000 g，5 min），吸除上清后获得浓缩红细胞，均按保存液：红细胞为1：1.5-4的相同比例加入保存液混合均匀即可。

3、实验结果

对NS组（生理盐水组）、酸性-5.8组（pH=5.8）、碱性-8.5组（pH=8.5）进行晶体渗透压检测，检测结果如表3所示，碱性-8.5组晶体渗透压最大，酸性-5.8组次之，NS组晶体渗透压最低。

表3保存液晶体渗透压

实施例2

1、实验材料

（1）实验仪器

P₅₀测定：携氧/释氧分析仪（Bloodox-2018，北京软隆生物技术有限公司）；

ATP含量测定：增强型ATP检测试剂盒（031523230713，碧云天生物技术有限公司）；

葡萄糖含量测定：血气分析仪（ABL90，雷度米特医疗设备(上海)有限公司）；

溶血：血气分析仪（ABL90，雷度米特医疗设备(上海)有限公司）、微量血红蛋白检测仪（DiaSpectS20L0043,德国）、微量血红蛋白检测杯（DiaSpect医疗有限公司）。

（2）溶液配制

P₅₀缓冲液：氯化钠7.89 g/L，N-tris(羟甲基)甲基-2-氨基乙烷磺酸6.8 g/L，氯化钾0.373 g/L；

消泡剂：400 μl消泡剂溶于3.6 ml P₅₀缓冲液；

牛血清白蛋白溶液（BSA溶液）：0.8 g BSA粉末溶于4 ml P₅₀缓冲液。

2、实验方法

根据表1与表2各组保存液的成分配比进行称量，用去离子水定容至100 ml，超声混匀，用1 M的NaOH对其进行pH调节。将配制好的保存液在超净工作台（紫外照射15 min）下通过0.22微米滤膜，后置于50 ml离心管内待用，使用时在与红细胞混合保存，保存于2-6℃。

取5名健康人新鲜血液约30 mL，过白细胞滤器后进行离心（1000 g，5 min），吸除上清后获得浓缩红细胞，按红细胞：保存液为4：1的比例混合分装，包好封口膜，标记不同时间点，待测。

（1）P₅₀测定

根据血气测得的血红蛋白浓度（HGB）计算上样量（满足3 mg血红蛋白），加入4 mLP₅₀缓冲液中，再加入BSA溶液和消泡剂各20 μL后混匀，最后上机检测。携氧/释氧分析仪在测定样品前需反复通气（空气/氮气）至少一小时，通气结束后加入样品再通空气20分钟，之后调节仪器面板参数后通氮气10分钟获得氧解离曲线。

（2）ATP含量测定

增强型ATP检测试剂盒（031523230713，碧云天生物技术有限公司）。

1）提前取出试剂盒于4℃下解冻；

2）样品离心洗涤后各取1 μL沉淀与600 μL红细胞裂解液混合离心（12000 g，5min）；

3）配制ATP检测液（小瓶：大瓶=1：4），先加100 μLATP检测液于酶标板中停留至少3min，再加20 μL标准品/上清液；

4）使用梯度稀释法配制标准品溶液，各取20 μL不等浓度标准品与100 μL ATP检测液混合；

5）标准品与样品于孔板中分别与ATP检测液混合，最终测定其RLU值。

（3）溶血测定

样品离心后取上清液20 μL于游离血红蛋白分析仪中测定游离血红蛋白浓度（FHb），根据血气分析仪检测获得红细胞压积（HCT）和血红蛋白浓度（HGB），根据公式计算各组红细胞的溶血率。

公式：溶血率(%)=(FHb×(1-HCT))/HGB×100%。

（4）葡萄糖及乳酸测定

混匀血样，打开管盖立即用血气分析仪进行检测。

3、实验结果

（1）储存红细胞溶血率

《全血及成分血质量要求》中规定，红细胞溶血不得大于0.8 %。

各组溶血率随储存时间延长均逐渐增加，结果如图1所示，结果显示其中NS组于21天时已超过标准限度最大值（0.8%），35天时溶血浓度过高，微量游离血红蛋白检测仪已无法检测出结果。酸性-5.8组和碱性-8.5组在35天时溶血率大概在0.5%和0.3%，碱性-8.5组在整个储存期间溶血率最低，在14天、21天、35天溶血率显著低于酸性-5.8组。

原因可能为ATP为维持红细胞稳定性及变形性的重要物质，NS组在储存期间由于缺少葡萄糖、腺嘌呤等营养成分，其产生的ATP含量较少，不足以维持红细胞的细胞膜及细胞骨架的稳定，而导致溶血率较高。而在碱性保存液中，红细胞的ATP含量维持较高，维持红细胞稳定的能力较好，因此溶血率较低。

（2）储存红细胞携氧/释氧能力

对储存红细胞的携氧/释氧能力进行检测，结果如图2所示，NS组和酸性-5.8组的P₅₀变化趋势均为先下降后基本不变；碱性-8.5组的P₅₀变化趋势先升高到21天，随后下降至与基础值比较接近的水平。酸性-5.8组在35天时比8.5组的结果稍低但比较接近，总体来看，碱性保存液对于红细胞释氧能力的维持更有利。

（3）储存红细胞能量代谢

对储存红细胞的能量代谢进行分析，结果包括ATP（图3）、葡萄糖（图4）、乳酸（图5）的代谢分析，结果显示，NS组因成分简单且无葡萄糖、腺嘌呤等营养成分，ATP呈逐渐下降趋势，在14天时基本已接近于0；酸性-5.8组和碱性-8.5组的ATP因洗涤去除机械损伤红细胞及营养物质补充的原因在0-7天时有上升趋势，之后细胞内ATP含量逐渐下降。在35天时，碱性-8.5组和酸性-5.8组ATP含量恢复至初始值附近，且碱性-8.5组>酸性-5.8组。葡萄糖整体变化趋势为逐渐下降，且始终酸性-5.8组>碱性-8.5组，NS组含量最低；各组乳酸含量均上升，且始终碱性-8.5组>酸性-5.8组>NS组。

上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims

1.一种组合物，其特征在于，所述组合物为磷酸二氢钠、葡萄糖、腺嘌呤，其中磷酸二氢钠：葡萄糖：腺嘌呤的质量之比为107：（80-160）：（1-3）。

2.一种保存液，其特征在于，所述保存液包含权利要求1所述的组合物。

3.根据权利要求2所述的保存液，其特征在于，所述保存液中磷酸二氢钠为磷酸二氢钠一水合物，葡萄糖为一水合葡萄糖，所述保存液包括浓度120 mM的磷酸二氢钠一水合物、60-120 mM的一水合葡萄糖、1-3 mM的腺嘌呤，所述保存液的pH值为8.0-9.0。

4.根据权利要求2所述的保存液，其特征在于，所述保存液为浓度120 mM的磷酸二氢钠一水合物、80 mM的一水合葡萄糖、2 mM的腺嘌呤，所述保存液的pH值为8.5。

5.一种权利要求2-4任一项所述的保存液的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：将权利要求1所述的组合物溶解到溶剂中，调整溶液pH值，并灭菌处理，得到保存液。

6.磷酸二氢钠、葡萄糖、腺嘌呤在制备维持红细胞活性的产品中的应用，其特征在于，所述磷酸二氢钠、葡萄糖、腺嘌呤在应用中的使用质量比例为107：（80-160）：（1-3）。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用中的磷酸二氢钠为磷酸二氢钠一水合物，葡萄糖为一水合葡萄糖，所述磷酸二氢钠一水合物：一水合葡萄糖：腺嘌呤的浓度之比为120：（60-120）：（1-3）。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述磷酸二氢钠一水合物：一水合葡萄糖：腺嘌呤的浓度之比为120:80:2。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述维持红细胞活性包括维持红细胞携氧能力、维持红细胞释氧能力，维持红细胞能量代谢稳定。

10.权利要求1所述的组合物、权利要求2-4所述的保存液、或权利要求5所述的制备方法在体外保存红细胞中的应用。