CN1155572C

CN1155572C - 吲哚类衍生物及其抗肿瘤用途

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Publication number: CN1155572C
Application number: CNB01101654XA
Authority: CN
Inventors: 松李; 李松; 郑志兵; 沈倍奋; 林晨; 张学敏
Original assignee: Institute of Pharmacology and Toxicology of AMMS
Current assignee: Beijing Muolike Science and Technology Co., Ltd.
Priority date: 2001-01-19
Filing date: 2001-01-19
Publication date: 2004-06-30
Anticipated expiration: 2021-01-19
Also published as: CN1365972A

Abstract

本发明涉及式I的吲哚类衍生物：其中各基团的定义详见说明书。这些化合物及其立体异构体，药用盐或它们的水合物或它们的溶剂化物药物组合物可用于治疗与BCL-2高表达有关的疾病或症状中的用途，或用于治疗肿瘤、肿瘤新生血管形成或肿瘤转移药物中的用途。还涉及式I的一种化合物或含至少一个成盐基团的此类化合物的一种盐的制备方法。

Description

吲哚类衍生物及其抗肿瘤用途

本发明涉及吲哚类衍生物，涉及它的制备方法和涉及其在制备用于诱导细胞凋亡或广谱抗肿瘤药物组合物中的用途，特别是在通过拮抗BCL-2蛋白介导的细胞凋亡功能，诱导肿瘤细胞凋亡；抗新生血管形成，阻止肿瘤细胞恶性转移等药物组合物中的用途。

近年来的研究表明，细胞凋亡与肿瘤发生，发展与消退有密切的关系，认为肿瘤是细胞增殖和细胞凋亡失衡所致。目前一致公认bcl-2基因(B淋巴细胞瘤基因2)及其相关蛋白抑制细胞凋亡是肿瘤发生和产生耐药的重要原因之一。bcl-2基因最初被分离和发现在B-淋巴癌细胞染色体t(14；18)异位断点处^[1]。它在许多肿瘤细胞系上都高表达，主要包括：结肠-直肠癌、鼻咽癌、骨髓癌、乳腺癌、非何杰金氏淋巴癌、胃癌、前列腺癌、神经母细胞瘤和肺癌(ScLc)等^[2]，表明这些肿瘤与bcl-2基因异常表达有关。生物学实验已经证实BCL-2蛋白对细胞凋亡的调节能力受其它蛋白家族成员的影响。如：凋亡拮抗蛋白(BCL-X_L，BCL-w，BfL-1，BRAG-1，MCI-1等)和凋亡激动蛋白(BAX，BAK，BCL-X_s，BAD，BID，BIK，HRK等)^[3]，其中特别重要的是BAX蛋白。BCL-2蛋白和BAX蛋白通过形成异二聚体或同二聚体来调节两者之间的平衡，这一平衡是细胞接受死亡信号后是否进行凋亡的一个检查点(Checkpoint)^[4]。

BCL-2蛋白包括4个保守的功能区BH1、BH2、BH3和BH4^[5]。在BCL-2的BH1和BH2上进行定点致突变结果表明，这两个区域对BCL-2与BAX结合是重要的。BH1上的单个氨基酸，如145位的甘氨酸被丙氨酸或者谷氨酸取代和BH2上188位的色氨酸被丙氨酸或者谷氨酸取代后将完全破坏BCL-2与BAX结合而使其失去凋亡抑制作用^[6]。当BCL-2超量表达时，它与BAX杂二聚，死亡得到抑制^[7]。因此，BCL-2与BAX的比例决定了BCL-2/BAX杂二聚与BAX/BAX同二聚的数量，同时决定细胞死亡的敏感性。可见，通过调节这些成员之间的比率可以恢复肿瘤细胞的正常凋亡途径和对化疗药物治疗的敏感性。

肿瘤细胞的生长和转移取决于新血管的生成^[8]。一方面肿瘤通过其血管从宿主获得营养和氧气，另一方面又通过肿瘤血管源源不断地向宿主转移肿瘤细胞，并在机体的其它部位继续生长和诱导血管形成，导致肿瘤转移。由于新生血管在正常成年人中基本停止，因此，抗肿瘤血管生成药物具有良好特异性。另外，内皮细胞基因表达相对稳定，不易产生耐药性，可以长期服用^[9]，特别是小分子抗肿瘤血管生成的抑制剂，如：烟曲霉素(Fumagillins)，沙利度胺(Thalidomide)和抗炎药物(Anti-Inflammatory Agents)等^[9]。

目前还没有关于用小分子化合物通过抑制BCL-2蛋白功能来诱导肿瘤细胞凋亡的报道；同时也未见本发明中的有关化合物在抗肿瘤血管生成方面的应用。

本发明的目的在于提供能够选择性地阻止或打开BCL-2/BAX异二聚体，通过调节BCL-2/BAX异二聚与BAX/BAX二聚之间的比率，能恢复肿瘤细胞的正常凋亡途径及对化疗药物治疗的敏感性和通过抑制肿瘤新生血管的形成，阻止肿瘤转移抗肿瘤化合物。

本发明第一方面涉及式I的吲哚类衍生物，其药用盐，其立体异构体，其水合物或溶剂化合物，

其中：

R₁是氢原子，卤素，氰基，亚砜基，砜基，硝基，羧基，醚化的低级烃氧基，未取代氨基或低级烷氨基，巯基或低级烃硫基，低级酰基，低级酯基，低级酰胺基，

R₂是氢原子、低级烃基、低级酰基，或-COCH₂R₅(II)基团，或-CH₂R₆(III)基团，

其中R₅，R₆各自独立的为氢，C₁～C₅直连或支链烷基，优选甲基，芳香烃基，含氮杂原子的五元或六元杂环，如，四氢吡咯，哌啶，吗啉，哌嗪或氮甲基哌嗪，

R₃，R₄基团中的一种或两种各自为氢原子，氰基，硝基，C₁～C₅烷基，优选甲基；取代或未取代五～六元芳香烃基，优选取代或未取代呋喃基，取代或未取代噻吩基；取代或未取代吡咯基；取代或未取代吡唑基，取代或未取代咪唑基；取代或未取代苯基；取代或未取代吡啶基；单环或稠环芳香烃基，优选萘基，吲哚基，嘌呤基，或式IV所示的基团：

-C(＝Z)-R₇ (IV)

其中，Z是O，S或NH；R₇是氢原子，C₁～C₅直链烷基，特别是甲基或乙基，未取代或取代的氨基(包括单或两个C₁～C₃直链烃基取代的氨基，或5～6元环胺基)，优选甲胺基，二甲胺基，哌啶基，或式V

所示的基团：

其中R₈，R₉可以相同或不同，为氢原子，卤素，氰基，亚砜基，砜基，硝基，羧基，C₁～C₃烃氧基，优选甲氧基或乙氧基，未取代氨基或取代的氨基(包括单个或两个C₁～C₃直链烃基取代的氨基，或5～6元环胺基)，优选甲胺基，二甲胺基，哌啶基，C₁～C₃直链烃酰基，C₁～C₃直链烃酯基，优选甲酰基，乙酰基；M是位于环上的氮原子或碳原子。

X、Y为碳原子或氮原子。

本发明第二方面涉及药物组合物，其中包括至少一种通式I中的吲哚类化合物，其立体异构体，其药用盐或它们的水合物或它们的溶剂化物，及药用载体或赋型剂。

本发明第三方面涉及至少一种通式I中的吲哚化合物，其立体异构体，其药用盐或它们的水合物或它们的溶剂化物药物组合物在用于治疗与BCL-2高表达有关的疾病或症状中的用途，或用于治疗肿瘤、肿瘤新生血管形成或肿瘤细胞转移药物中的用途。

根据本发明，R₁中：低级烃氧基是C₁～C₅的直链或支链饱和脂肪烃或不饱和脂肪烃基，优选甲基；C₃～C₆环烷烃基，优选环戊基或环己基；取代或未取代的苯基，优选苯基；含1～3个杂原子(如N、O、S等)的取代或未取代五～六元杂环芳香烃基，优选吡啶基；低级烷胺基是一取代或二取代含C₁～C₃的直链或支链饱和脂肪烃胺基，优选甲胺基或二甲胺基；取代或未取代的五～六元环烷胺基，优选哌啶基；低级烃硫基为C₁～C₅的直链或支链饱和脂肪烃硫基或不饱和脂肪烃硫基，优选优选甲硫基；C₃～C₅的环烷烃硫基或杂环烃硫基，优选环戊硫基、环己硫基；含五～六元环芳香烃硫基或杂环芳香烃硫基，优选硫吩；低级酰基，低级酯基，低级酰胺基是含C₁～C₅的直链或支链饱和脂肪烃或不饱和脂肪烃基的低级烃酰基，低级烃酯基，低级烃酰胺基，分别优选甲酰基、乙酰基、甲酯基、乙酯基、甲酰胺基、乙酰胺基，含五～六元环的芳香烃酰(酯，酰胺)基或杂环芳香烃酰(酯，酰胺)基，分别优选苯甲酰基，苯甲酯基，苯甲酰胺基。

根据本发明，R₂中：低级烷基是C₁～C₅的直链或支链饱和脂肪烃或不饱和脂肪烃基，优选甲基，或C₄～C₆的取代或未取代的芳香烃基，优选苯基，苄基；低级酰基是C₁～C₅的直链或支链饱和脂肪烃或不饱和脂肪烃酰基，优选甲酰基，乙酰基，或含五～六元环的取代或未取代的芳香烃酰基或杂环芳香烃酰基，优选苯甲酰基。

根据本发明，R₁，R₂，R₃，R₄特别优选如下基团，但这些优选基团并不意味着对本发明的任何限制。

根据本发明，含有取代基的基团中取代基可是卤素，羟基，氰基，硝基，C_1-6烷基，C_1-6烷氧基，C_1-6烷硫基，卤代C_1-6烷基等。

根据本发明，术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。

根据本发明，R₁基团优选氢原子，氟原子，氯原子，溴原子，硝基，羧酸基，甲氧基，乙酰基，乙酯基。

根据本发明，R₂基团优选氢原子，甲基、乙酰基，苯甲酰基，N-吗啉亚甲基，二甲胺基亚甲基。

根据本发明，R₃、R₄基团中的一种或两种各自优选氢原子，甲基，乙基，呋喃基，2-甲基-4-溴-噻吩基，吡咯基，2，4-甲基吡咯基，1-甲基吡咯基，3-哌啶亚甲基-3-吡咯基，3，5-二甲基-1-苯基-吡唑基，苯基，2，4-二取代苯基，单取代吡啶基，吲哚基，或式IV所示的基团：

-C(＝Z)-R₇ (IV)

其中，Z是O原子；

R₇是式V所示的基团：

其中R₈，R₉可以相同或不同，为氢原子，氟原子，氯原子，溴原子，甲氧基，乙酰基；吲哚甲烯基时，M是碳原子；R₈，R₉为氢原子时，M是氮原子

根据本发明，特别优选表1中的式I化合物，但这些化合物并不意味着对本发明的任何限制。

表1 式(I)中特别优选的化合物结构

化合物 R₁ R₂ R₃ R₄ X Y

编号

1 H H H

C C

2 H H H

C C

3 H H H

C C

4 H H H

C C

5 H H H C C

6 H H H C C

7 H H H C C

8 H H H

C C

9 H H H

C C

10 H H H

C C

11 H H H C C

12 H

H C C

13 F H H C C

14 F H H

C C

15 Cl H H C C

16 Cl H H

C C

17 Br H H

C C

18 Br H H C C

19 -CO₂Et H H

C C

20 -CO₂Et H H C C

21 -CO₂Na H H

C C

22 -OMe H H C C

23 -NO₂ H H

C C

24 -CN H H C C

25 CH₃SO₁- H H C C

26 -ONa H H C C

27 CH₃CO- H H

C C

28 CH₃CO₂- H H

C C

29 H -CH₃ H

C C

30 H -CH₃ H C C

31 H -CH₃ H C C

32 H CH₂NMe₂ H C C

33 H -COCH₃ H

C C

34 H H H N C

35 H H H N C

36 H H H

N C

37 H H H

N C

38 H H H

N C

39 H H -CH₃

C C

40 H H -CH₃

C C

41 H H -Et

C C

42 H H H

N N

43 H H H N N

44 H H H

C C

45 H H H

C C

46 H H H C C

47 H H H C C

48 H H H

C C

49 H H H C C

50 H H H C C

51 H H H C C

52 H H H

C C

53 H H H

C C

54 F H H

C C

55 F H H

C C

56 F H H C C

57 H H -CH₃

C C

58 Cl H H

C C

59 Br H H C C

60 -CO₂Et H H C C

61 -CO₂Et -CH₃ H C C

62 -CO₂Na H H C C

63 -OMe H H C C

64 -NO₂ H H

C C

65 CH₃SO₂- H H C C

66 -ONa H H

C C

67 CH₃CO- H H

C C

68 CH₃CO₂ H H C C

69 H CH₃ H C C

70 H CH₃ H C C

71 H CH₃ H

C C

72 H CH₃ CH₃ C C

73 H CH₃ CH₃

C C

74 H H H N C

75 H H H N C

76 H H H N N

77 H H H N N

根据本发明，本发明中术语“药用盐”可以是药用无机或有机盐。举例讲，本发明式I中具有碱性基团的化合物可以形成无机酸药用盐，如硫酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐；有机酸药用盐，如醋酸盐、草酸盐、柠檬酸盐、葡萄糖酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、马来酸盐等。本发明式I中具有酸性基团〔如R₁中的一个游离羧基)的化合物可以形成碱金属或碱土金属药用盐，如钠盐、钾盐，镁盐或钙盐。

根据本发明，本发明中术语“立体异构体”意指通式I化合物存在的各种立体异构体形式，如顺反异构体、外消旋异构体、差向异构体、光学异构体等。

根据本发明，本发明中的药物组合可按本领域已知方法制备，如将式I中的化合物、其立体异构体、其药用盐或它们的水合物或溶剂化物与药用载体或赋形剂混合。

本发明涉及提供对式I中的化合物进行物细胞学功能评价方法，抗肿瘤活性的测试结果，诱导肿瘤细胞凋亡的活性测试结果。

根据本发明，本发明中的化合物可以单独或药物组合物形式给药。给药途径可以是口服、非肠道或局部给药。药物组合物可根据给药途径配成各种适宜的剂型。

本发明第四方面涉及制备式I化合物的方法，其包括

a.式VI的化合物

和式VII化合物或其盐反应

其中R₁，R₂，R₄，X，Y如上所定义，或

b.式VIII的化合物

和式IX化合物或其盐反应

其中R₁，R₂，R₃，R₄，X，Y如上所定义，但R₃，R₄不能同时为氢或烷基，或

c.如需要，将a或b步骤所得式I化合物与药用酸形成式I化合物的药用盐，或

d.如需要，将a或b步骤所得式I化合物通过分离方法如色谱、分馏或重结晶等拆分成其纯光学异构体。

上述方法各方案详细解释如下：

方法a.

这个反应在一种合适的溶剂或分散剂，例如，一种合适的醇(如甲醇)中，于10℃到50℃的温度下进行，加入加入碱，如无机碱(如碳酸钠)，或有机碱〔如二乙胺或哌啶〕，或通入酸性气体，如氯化氢，催化反应的进行。

式VI，VII的化合物购自商品试剂，或按文献已知的方法合成。

方法b.

这个反应在一种合适的溶剂或分散剂，例如，一种合适的醇(如甲醇)中，于10℃到50℃的温度下进行，加入无机碱，如碳酸钠，或有机碱，如哌啶，催化反应的进行。所得中间产物溶于一种合适的溶剂或分散剂，例如，一种合适的醇(如乙醇)中，加入酸，如盐酸，作催化剂，于10℃到80℃的温度下进行脱水反应，得到式I中的化合物。

式VIII，IX的化合物购自商品试剂，或按文献已知的方法合成。

根据本发明，式(I)化合物可以立体异构体形式存在。式(I)化合物中存在的不对称中心可具有S构型或R构型。本发明包括所有可能的立体异构体如对映体或非对映体，以及两种或多种立体异构体的混合物，例如对映体和/或非对映体的任何所需比例的混合物。因此，本发明涉及对映体，例如以对映体纯形式存在的左旋-和右旋-对映体，和不同比例存在的两种对映体的混合物或外消旋物。如果存在顺/反异构体，本发明涉及顺式形式和反式形式以及这些形式的混合物。如果需要，单一立体异构体的制备可根据常规方法拆分混合物，或通过例如立体选择合成制备。如果存在机动的氢原子，本发明也涉及式(I)化合物的互变异构形式。

根据本发明，式(I)化合物及其立体异构体在选择性地阻止或打开BCL-2/BAX异二聚体，调节BCL-2/BAX异二聚与BAX/BAX二聚之间的比率，恢复肿瘤细胞的正常凋亡途径及对化疗药物治疗的敏感性和抑制肿瘤新生血管的形成中显示出优良效果，因此可作为抗肿瘤疾病或症状药用于动物，优选用于哺乳动物，特别是人。

本发明因此还涉及含有作为活性成份的有效剂量的至少一种式(I)化合物和/或其立体异构体以及常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明药物组合物含有0.1-90重量％的式(I)化合物和/或其生理上可接受的盐。药物组合物可根据本领域已知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将式(I)化合物和/或立体异构体与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人用的适当的施用形式或剂量形式。

本发明的式(I)化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊，将有效成分式(I)化合物或其立体异构体与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明明胶囊或软胶囊中。也可将有效成分式(I)化合物或其立体异构体制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。为了将给药单元制成注射用制剂，如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂，可以使用本领域常用的所有稀释剂，例如，水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。

本发明式(I)化合物或其立体异构体的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应，所用的具体化合物，给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药。

实施例

本发明可以通过下面的实施例得到说明，但这些实施例不意味着对本发明有任何限制。

实施例1：3-(4’-吡啶亚苄基)-2-吲哚酮

取等摩尔的原料2-吲哚酮(1.33g，0.01mol，购自ACROS公司)和原料4-吡啶甲醛(1.07g，0.01mol，购自ACROS公司)置于圆底烧瓶中，加入20.0ml甲醇，0.20ml哌啶，于室温，氮气保护下搅拌反应24小时，抽滤，用甲醇洗涤，得粗品，用无水乙醇结晶得标题物纯品，黄色固体，产率80.9％，mp96～8℃。IRvcm^-1(KBr)：3064.37，1729.85，1595.52，1461.19.¹HNMRδppm(DMSO-d₃)：0.71(s，1H)，8.74(s，2R)，7.71(d，2H)，7.56(s，1H)，7.36～7.41(d，1H)，7.34～7.24(t，1H)，6.89～6.86(t，1H)，6.84～6.82(d，1H)。MS(m/e)：223[M+1]

盐酸盐的制备：将游离碱溶于三氯甲烷中，加入无水乙醚-氯化氢溶液至强酸性，过滤，用无水乙醚洗涤，得粗品，无水乙醇结晶得纯品，mp218～220℃。

实施例2：3-(3’，5’-二甲基-2’-吡咯亚苄基)-5-溴-2-吲哚酮

按实施例1方法，由原料5-溴-2-吲哚酮^[11]和原料3，5-二甲基-2-吡咯醛^[12](两原料按照文献方法合成)反应制备标题化合物粗品，用三氯甲烷重结晶，得标题化合物纯品，红色固体，mp 317～8℃，收率90.5％。IRvcm^-1：(KBr)：3101.01，3041.23，2906.24，2815.60，1668.14 ¹HNMRδppm(DMSO-d₆)：13.38(宽单峰，1H)，10.88(宽单峰，1H)，8.02～8.01(d，1H)，7.69(s，1H)，7.23～7.20(q，1H)，6.82～6.80(d，1H)， 6.03(s，1H)，2.50(s，3H)，2.30(s，3H)。MS(m/e)：317(95)，319(100)，238，133，112，85，69。

实施例3：3-(3’-吲哚亚苄基)-2-吲哚酮

按实施例1方法，由原料2-吲哚酮和原料3-吲哚醛(两原料购自ACROS公司)反应，得标题化合物。黄色固体，mp 233～4℃，收率95.％。IRvcm^-1(KBr)：3145.37，3037.37，1672.00，1600.55。¹H NMRδppm(DMSO-d₆)：12.01(宽单峰，1H)，10.84(宽单峰，1H，)，8.22(s，1H)，7.87(s，1H)，7.75～7.73(d，1H)，7.65～7.64(d，1H)，7.50～7.52(d，1H)，7.27～7.23(t，1H)，7.20～7.17(t，2H)，6.95～6.91(t，1H)，6.89～6.87(d，1H)。Ms(m/e)：261 [M⁺100]，232，204.0，117

实施例4：3-(3’，5’-二甲基-2’-吡咯甲烯基)-5-甲酸乙酯-2-吲哚酮

按实施例1方法，由原料3，5-二甲基-2-吡咯甲醛^[12]和原料2-吲哚酮-5-甲酸乙酯^[13](两原料按文献方法合成)反应，得标题化合物。黄色固体，mp269～70℃，产率86.7％。IRvcm^-1(KBr)：3039.55，2985.82，2972.39，1702.99，1669.40，1575.37。¹HNMRδppm(CDCl₃)：13.04(宽单峰，1H)，8.38(宽单峰，1H)，8.15(s，1H)，7.86～7.84(t，1H)，7.48(s，1H)，6.92～6.90(d，1H)，6.00(s，1H)，4.41～4.36(q，2H)，2.37～2.30(2xs，6H)，1.42～1.39(t，3H)。Ms(m/e)：311[M+1，100]，296.3，282.2，265.2，108.1，96.0

实施例5：1-甲基-3-(3’，5’-二甲基-2’-吡咯甲烯基)-2-吲哚酮

按实施例1方法，由原料3，5-二甲基-2-吡咯甲醛^[12]和原料1-甲基-2-吲哚酮^[13](两原料按文献方法合成)反应，得标题化合物，黄色固体，产率94％，mp 160～1℃。IRvcm^-1(KBr)：3009.71，2922.33，2825.24，1660.61，1573.33，1466.67。1H NMRδppm(CDCl₃)：7.50～7.48(d，1H)，7.43(s，1H)，7.24(t，1H)，7.219～7.216(t，1H)，6.88～6.86(d，1H)，5.96(s，1H)，3.36(s，3H)，2.38，2.30(2，6H)。Ms(m/e)：253[M+1，100]，238，198，108，95。

实施例6：1-甲基-3-(3’-吡啶甲烯基)-2-吲哚酮

按实施例1方法，由原料1-甲基-2-吲哚酮^[13](按文献方法合成)和3-吡啶醛(购自ACROS公司)于14℃反应48小时，得标题化合物粗品。

按如下纯化方法：将固体溶于水中，用CHCl₃提取两次，合并有机相，用饱和NaCl水溶液洗涤，无水Na₂SO₄干燥，旋去溶剂后得一油状物。将油状用柱层析分离(洗脱剂为石油醚∶乙酸乙酯＝100∶82)。得标题化合物产品，红色固，体收率88.7％。盐酸盐的制法为：将游离碱溶于无水乙醇中，加入HCl-乙醇溶液至强酸性，旋去溶剂，再用无水乙醇带走残余HCl两次，用无水乙醇-水结晶，得0.63g标题化合物纯品，红棕色固体，mp 252～4℃，收率90％。IRvcm^-1(KBr)：3046.27，2932.09，2871.64，1689.55，1608.96，1474.63。¹H NMRδppm(DMSO-d6)：9.85(S，1H)，9.15～9.13(d，1H)，8.86～8.84(d，1H)，8.02～8.00(t，1H)，7.99(S，1H)，7.78～7.76(d，1H)，7.40～7.36(t，1H)，7.13～7.09(t，1H)，7.06～7.04(d，1H)，3.40(s，3H)。Ms(m/s)：237(M+1，100)，122。

实施例7：3-[4’-(1’-苯基-3’，5’-二甲基-4’-吡啶甲烯基)]-2-吲哚酮

按实施例1方法，由原料1-苯基-3，5-二甲基-4-醛和2-吲哚酮(两原料购自ACROS公司)于16℃反应46小时，得标题化合物。黄色固体，mp 248～250℃，收率93.4％。IRv(cm^-1)(KBr)：3153.73，3120.75，3066.42，3005.97，2885.07，2881.19，1723.13，1642.54，1461.19。¹HNMRδppm(DMSO-d₆)：10.57(宽单峰，1H)，7.62～7.60(d，2H)，7.56～7.52(d，2H)，7.46～7.45(m，2H)，7.23～7.19(t，1H)，7.08～7.06(d，1H)，6.95～6.91(t，1H)，6.87～6.85(d，1H)，2.19(d，6H).MS(m/e)：316.1(M+1,100)，298.1，235.1，77.0。

实施例8：5-硝基-3-(3’-吡啶甲烯基)-2-吲哚酮

按实施例1方法，由原料5-硝基-2-吲哚酮^[14](按文献方法合成)和3-吡啶甲醛〔购自ACROS公司)于25℃反应35小时，得标题化合物。黄色固体，mp 315～7℃，产率93.8％。IRvcm^-1(KBr)：3100.00，3039.55，1702.99，1622.39，1326.87，749.85.¹HNMRδppm(DMSO-d₆)：10.42(宽单峰，2H)，9.25(s，1H)，8.92(s，1H)，8.95(d，1H，C₆，-H)，8.72(d，1H)，8.65～8.64(d，1H)，8.27(s，1H)，8.23～8.19(m，4H)，7.87(s，1H)，7.63～7.53(tx2，2H)，7.10～7.02(dx2，2H)。MS(m/e)：268.1(M，100)，97.1。

实施例9：3-(3’-吡啶亚苄基)-4-氮杂-2-吲哚酮

按实施例1方法，由2-吲哚酮和3-吡啶醛反应〔两原料购自ACROS公司)。得标题化合物，黄色固体，mp96～8℃，产率80.9％。MS(m/e)：222.0(M)，195.1。

实施例10：1-[(1’-哌啶亚甲基)-3-[2’-吡咯甲烯基]-2-吲哚酮。

取多聚甲醛(0.42g，0.002mol)，哌啶(0.18g，0.0021mol)，置于25ml圆底烧瓶中，加入乙醇6.0ml，加热回流使之溶解。加入3-(2-吡咯甲烯基)-2-吲哚(0.42g，0.002mol，按实施例1方法，由2-吲哚酮和2-吡咯甲醛反应制备)，回流反应8小时，冷却后抽滤，用无水乙醇3×4ml洗涤，干燥，用10ml无水乙醇结晶，得标题化合物，黄色固体，mp 131～2℃，收率90.2％。将游离碱用15ml氯仿溶解，加入HCl-乙醚至酸性(pH 1～2)，抽滤，用2×5ml无水乙醚洗涤得标题化合物盐酸盐，mp 131～2℃。

IRvcm^-1(KBr)：3106.72，3039.55，2925.37，2804.48，1669.40，1595.52，1461.19。¹HNMRδppm(DMSO-d₆)：13.21(br1H)，7.81(s，1H)，7.69～7.67(d，1H)，7.38(s，1H)，7.24～7.17(m，2H)，7.08～7.05(t，1H)，6.88(s，1H)，6.38～6.37(d，1H)，4.57(s，2H)，2.54～2.50(t，4H)，1.46～1.32(br，4H)，1.06(br，2H)。MS(m/e)：308.2(M+1)，98.1(100).

实施例11：3-(3’-吡啶亚甲基)-2-吲哚酮

取3-(3’-吡啶亚甲基)-2-吲哚酮(按实施例1方法，由2-吲哚酮和3-吡啶醛反应制备)0.36g(0.00162mol)，置于50ml圆底烧瓶中，加入无水乙醇(20ml)和0.03g 10％Pd-C，于常温(Rt＝26℃)常压下氢化7.5小时。过滤除去Pd-C，滤液旋干后用柱层析分离，洗脱剂为氯仿∶甲醇＝60∶1，得标题化合物，白色固体，mp 162～3℃。IRvcm^-1(KBr)：3126.21，3048.54，2893.20，2844.66，1699.39，1471.52.¹HNMRδppm(DMSO-d₆)：10.31(s，1H)，8.35～8.34(d，1H)，8.29～8.28(d，1H)，7.52～7.49(m，1H)，7.23～7.20(m，1H)，7.13～7.08(t，1H)，7.05～7.03(d，1H)，6.91～6.87(t，1H)，6.72～6.70(d，1H)，3.87～3.84(t，1H)，3.10～3.05(m，1H)。MS(m/e)：225.2(M+1，100)，133，94，80。

实施例12：3-(2’-吡咯甲烯基)-4-氮杂-2-吲哚酮

按实施例1方法，由原料2-吡咯甲醛(购自ACROS公司)和4-氮杂-2-吲哚酮(按文献方法制备^[15])于25℃反应16小时，得标题化合物。黄色固体，mp 236～8℃，收率84.4％。IRvcm^-1(KBr)：3126.87，3066.42，3012.69，1689.55，1595.52，1561.94，1441.04。¹HNMRδppm(DMSO-d₆)：14.29(br，1H)，10.88(br，1H，)，8.25～8.24(s，1H)，7.60(s，1H)，7.54(s，1H)，7.30～7.20(m，2H)，7.14～7.12(m，1H)，6.45～6.42(d，1H)。MS(m/e)：210.1[M⁺]，182.0，143.1，129.0，78.0.

实施例13：3-[1-(4-吡啶基)乙烯基]-2-吲哚酮

取2-吲哚酮0.53g(0.004mol)，2-乙酰基-吡啶(2.00g，0.0075mol，购自ALDRICH公司)置于圆底烧瓶中，加入HCl-乙醇8.0ml，于室温下搅拌反应8天。旋去溶剂，加水溶解，用3×20ml乙醚提取，水相用Na₂CO₃中和至碱性，用乙醚3×30ml提取，合并后用水2×5ml洗涤，Na₂SO₄干燥，旋干，得0.82g粘状物。粗品用柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1。柱层析物用乙酸乙酯-石油醚结晶，得标题化合物，黄色固体，mp 179～181℃。IRvcm^-1(KBr)：3147.30，3102.94，3012.30，2873.45，1720.21，1610.19。¹HNMRδppm(DMSO-d₆)：10.60(s，1H)，8.73～8.72(d，1H)，7.97～7.93(m，1H)，7.51～7.48(m，2H)，7.09～7.05(t，1H)，6.79～6.77(d，1H)，6.58～6.54(t，1H，)，5.77～5.76(d，1H)，2.68(s，3H)。MS(m/e)：473.1(M×2)，237.0(M+1，100)，194.0。

实施例14：3-苯甲酰甲烯基-2-吲哚酮

方法A 取5.88g(0.040mol)原料吲哚满二酮〔购自东京化成公司〕，5.28g(0.044mol)苯乙酮原料(购自北京化学试剂公司)置于250ml圆底烧瓶中，加入二乙胺14滴，无水乙醇110ml，于室温(26℃)搅拌反应23小时。抽滤，用无水乙醇洗涤(10ml×3)，干燥，得粗品，用80ml无水乙醇结晶，得中间体3-羟基-3-苯甲酰亚甲基-2-吲哚酮纯品。取5.00g(0.0166mole)上步合成的3-羟基-3-苯甲酰亚甲基-2-吲哚酮悬浮于20.0ml无水乙醇和31.2ml浓盐酸中，于室温搅拌反应26小时，然后加热回流30分钟，放置过夜，抽滤，用3×20ml水洗涤，用120ml无水乙醇结晶，得标题化合物，红色固体，mp194～6℃，产率84.5％。

方法B：将2.94g(0.020mol)吲哚满酮原料和0.30g(0.0075mol)碾细的氢氧化钾，0.30g四丁基溴化铵等试剂，置于三口瓶中，加入22.0ml四氢呋喃和2.40g(0.020mol)苯乙酮原料(购自北京化学试剂公司)，于40℃搅拌反应45分钟。抽滤，用2×10ml四氢呋喃、2×10ml水分别洗涤。将固体溶于Na₂CO₃的溶液中(pH～9.0)，搅拌，过滤，得中间体3-羟基-3-苯甲酰亚甲基-2-吲哚酮粗品。将该粗品置于25ml单口反应瓶中，加入无水乙醇25ml、1滴浓硫酸，加热回流6小时。旋去溶剂，经柱层析，得标题化合物，红色固体，，mp195～6，产率21.2％。

实施例15：3-(4’-氯-苯甲酰甲烯基)-吲哚酮

按实施例14中的A合成方法，由原料4-氯-苯基甲酮(购自ACROS公司)和原料2-吲哚酮反应。反应温度为Rt＝26℃，反应时间为24小时。得中间体3-羟基-3-(4’-氯-苯甲酰亚甲基)-2-吲哚酮，mp 178～180℃[文献值175～176℃]^[16]，产率94.8％。将3-羟基-3-(4’-氯-苯甲酰甲烯基)-2-吲哚酮于室温反应28小时后，回流20分钟，得标题化合物，红色固体，mp 211～3℃[文献值209～10℃]^[16]，收率91.9％。

实施例16：3-(3’，4’-二氯-苯甲酰甲烯基)-2-吲哚酮

按实施例14中A方法，由原料3，4-二氯-苯基甲酮〔购自ACROS公司〕和原料2-吲哚酮反应。反应温度为Rt＝28℃，反应时间为3天。得中间体3-羟基-3-(3’，4’-二氯-苯甲酰亚甲基)-2-吲哚酮，白色固体，mp 200～202℃，产率97.3％。IRvcm^-1(KBr)：3376.79，3195.51，3093.30，3060.52，3035.45，1689.36。¹H NMRδppm：10.30(s，1H)，7.85～7.83(s，1H)，7.85～7.83(d，1H)，7.78～7.76(d，1H)，7.28～7.26(d，1H)，7.18～7.14(t，1H)，6.88～6.84(t，1H)，6.80～6.79(d，1H)，6.20(宽单峰，1H)， 4.08～4.04(d，1H)，3.57～3.52(d，1H)。MS(m/e)：335.0[M]，319.0，188.0，173.0(100)，147.0。将3-羟基-3-(3’，4’-二氯-苯甲酰亚甲基)-2-吲哚酮于室温(Rt＝27℃)反应29小时后，再回流1小时，得标题化合物，暗红色固体，mp 236～7℃，产率97.7％。IRvcm^-1(KBr)：3184.47，3077.67，1709.09，1660.61，1597.58，1461.82。¹HNMRδppm(DMSO-d₆)：10.83(宽单峰，1H)，8.24(s，1H)，8.13～8.11(d，1H)，8.05～8.03(d×2，1H)，7.88～7.86(d，1H)，7.68(s，1H)，7.39～7.35(t，1H)，7.00～6.96(t，1H)，6.90～6.88(d，1H)。Ms(m/e)：319(67％)，317(100％，M)，291，289，263，261，173，146，144。

实施例17：3-(3’-吡啶甲酰甲烯基)-2-吲哚酮

按实施例14中A合成方法，由原料3-吡啶基甲酮(购自ACRO公司)与吲哚满酮于28℃反应3天，得中间体3-羟基-3-(3’-吡啶甲酰亚甲基)-2-吲哚酮。白色固体，mp81～3℃，产率86.2％.IRvcm^-1(KBr)：3172.37，3095.23，3031.59，1727.93，1474.63。1H NMRδppm：10.30(s，1H)，9.07(s，1H)，8.79～8.78(m，1H)，8.27～8.25(m，1H)，7.56～7.55(m，1H)，7.29～7.27(d，1H)，7.18～7.14(t，1H)，6.88～6.84(t，1H)，6.81～6.80(d，1H)，4.11～4.07(d，1H)，3.62～3.58(d，1H)。MS(m/e)：351.1，322.1，146.1，106.1，78.1.将中间体于室温(Rt＝27℃)反应6小时，得标题化合物，红色固体，mp224～5℃，收率39.8％。IRvcm^-1(KBr)：3135.92，3067.96，3000.00，1709.09，1660.61，1592.73，1461.82。

¹HNMRδppm(DMSO-d₆)：10.84(宽单峰，1H)，9.22～9.21(d，1H)，8.87～8.85(q，1H)，8.45～8.42(m，1H)，8.17～8.15(d，1H)，7.72(s，1H)，7.65～7.62(m，1H)，7.40～7.36(t，1H)，7.00～6.96(t，1H)，6.90～6.88(d，1H)。Ms(m/e)：250.1(M)，222.1(100)，106.1，78.0。

实施例18：3-(4’-氟-苯甲酰甲烯基)-2-吲哚酮

按实施例14中A合成方法，由原料吲哚满酮和4-氟-苯甲酮〔购自ACROS公司〕于21℃反应4天，得中间体3-羟基-3-(4’-氟-苯甲酰亚甲基)-2-吲哚酮.白色固体，mp204～℃，产率90.45％.IRvcm^-1(KBr)：3359.22，1723.64，1456.97。¹H NMRδppm：10.29(s，1H)，7.99～7.96(m，2H)，7.34～7.26(m，3H)，7.18～7.14(t，1H)，6.87～6.84(t，1H)，6.82～6.80(t，1H)，6.09(s，1H)，4.09～4.04(d，1H)，3.59～3.55(d，1H).MS(m/e)：285.1(M)，267.0，240.1，162.0，147.0，138.0，123.0(100，95.0. 将中间体于20℃搅拌72小时，然后回流1小时，得标题化合物，红色固体，mp 195～7，收率81.2％.IRvcm^-1(KBr)：3165.05，3000.00，1704.24，1655.76，1607.27，1461.82。¹HNMRδppm(DMSO-d₆)：10.81(宽单峰，1H)，8.18～8.15(m，2H)，8.02～7.00(d，1H)，7.70(s，1H)，7.45～7.41(m，2H)，7.37～7.33(t，1H)，6.98～6.94(t，1H)，6.90～6.88(d，1H)。MS(m/e)：267.1(M)，239.1，144.0，123.0，95.0。

实施例19：5-氟-3-苯甲酰甲烯基-2-吲哚酮

按实施例14中A合成方法，由原料5-氟-吲哚满酮〔按文献方法制备^[17]〕和苯乙酮(购自北京化学试剂公司)于16℃反应4天，得中间体3-羟基-5-氟-3-苯甲酰亚甲基-2-吲哚酮。白色固体，mp213～4℃，产率82.5％。IRvcm^-1(KBr)：3359.22，3067.96，2912.62，1709.09，1684.85，1350.30。¹H NMRδppm：10.30(s，1H)，7.90～7.88(d，2H)，7.65～7.61(t，1H)，7.52～7.48(t，2H)，7.23～7.20(d×2，1H)，7.02～6.96(t，1H)，6.81～6.77(d×2，1H)，6.20(宽单峰，1H)，4.13～4.09(d，1H)，3.64～3.60(d，1H)。MS(m/e)：285.1[M]，267.1，240.1，165.0，120.1(100)，105.1(100)，91.1，77.1。将中间体于室温搅拌46小时后，再回流55分钟，得标题化合物，红色针状晶体，mp203～5℃，收率26.2％。IRvcm^-1(KBr)：3155.34，3097.09，1704.24，1660.61，1607.27，1466.67。¹HNMRδppm(DMSO-d₆)：10.85(宽单峰，1H)，8.10～8.08(d，2H)，7.91～7.88(2×d，1H)，7.80(s，1H)，7.76～7.72(t，1H)，7.64～7.72(t，2H)，7.26～7.21(m，1H)，6.90～6.87(q，1H)。MS(m/e)：268.1(M，100)，240.1，190.1，164.1，150.1，105.1，77.1。

实施例20：5-氟-3-(4’-甲基-苯甲酰甲烯基)-2-吲哚酮

按实施例14中A合成方法，由原料5-氟-吲哚满酮和原料4-甲基-苯甲酮(购自ACROS公司)于15℃反应3天，得中间体3-羟基-5-氟-3-(4’-甲基-苯甲酰亚甲基)-2-吲哚酮。白色固体，mp212～4℃，产率57.5％。IRvcm^-1(KBr)：3178.15，3147.30(vN-H)，3089.44，2885.02，1716.36，1606.43，1473.37。¹H NMRδppm：10.28(s，1H)，7.79～7.77(d，2H)，7.31～7.29(d，2H)，7.22～7.18(d×2，1H)，7.01～6.96(m，1H)，6.79～6.76(m，1H)，4.08～4.04(d，1H)，3.59～3.55(d，1H)。MS(m/e)：299.1[M]，281.1，165.1，134.1，119.1.将中间体于室温搅拌48小时后，再加热回流1小时，得标题化合物。红色固体，mp 204～6℃，收率95.4％。IRvcm^-1(KBr)：3178.15，3089.04，1716.36，1664.29，1473.37.¹HNMRδppm(DMSO-d₆)：10.83(宽单峰，1H)，7.99～7.97(d，2H)，7.88～7.85(d，1H)，7.77(s，1H)，7.41～7.40(d，2H)，7.24～7.19(m，1H)，6.89～6.86(t，1H)，2.41(s，3H).MS(m/e)：282.1(M+1，100)，266.1，190.1，164.1，119.1，91.1。

实施例21：3-苯甲酰亚甲基-2-吲哚酮

取1.25g〔0.005mol)3-苯甲酰甲烯基-2-吲哚酮原料〔合成见实施例14〕置于50ml三口瓶中，加入15.0ml无水乙醇使其溶解。将1.00g(0.0057mol)保险粉溶于5.0ml水中，然后将其加入反应瓶中，回流7分钟，放置，抽滤，用水洗涤三次，用无水乙醇重结晶后得标题化合物纯品，白色针状结晶，mp175～7℃，产率88.1％.IRvcm^-1(KBr)：3165.05，3067.96，3029.13，2902.91，1684.85，1612.12，1471.52。¹HNMRδppm(DMSO-d₆)：10.05(br，1H)，8.00～7.98(d，2H)，7.67～7.64(t，1H)，7.55～7.51(t，2H)，7.17～7.13(m，2H)，6.88～6.83(m，2H)，3.88～3.82(m，2H)，3.62～3.55(m，1H)。MS(m/e)：251.2(M)，146.1(100)，117.1，105.1，91.1，77.1。

实施例22：二[3-(2-吲哚酮甲烯基)]-甲酮

按实施例14中A合成方法，由两分子吲哚满酮原料和一分子丙酮原料(购自北京化学试剂公司)于室温反应5天，得中间体a，a’-二羟基-二[3-(2-吲哚酮亚甲基)]-酮。白色固体，mp 225～7℃，产率31.8％。IRvcm^-1(KBr)：3282.29，3059.70，1708.64，1625.72，1475.30。¹HNMRδppm(DMSO-d₆)：10.14(br，2H)，7.14～7.10(m，2H)，6.89～6.87(d，2H)，6.80 6.77(t，2H)，6.69 6.67(d，2H)，5.97 (s，2H)，3.27～3.23(d，2H)，2.85～2.81(d，2H)。MS(m/e)：352.1[M]，318.1，92.0。将中间体于室温(18℃)反应72小时，然后回流45分钟，得标题化合物，mp＞265℃，收率40.0％。IRvcm^-1(KBr)：3189.72，3083.66，1720.21，1664.29，1618.00，1459.87，1326.89。¹HNMRδppm(DMSO-d₆)：10.82(br，2H)，8.62～8.60(d，2H)，7.44～7.42(t，2H)，7.40(s，2H)，7.09～7.04(t，2H)，6.91～6.89(d，2H)。MS(m/e)：317.1(M+1)，172.1(100)，133.0。

实施例23：5-氟-3-(4’-溴-苯甲酰甲烯基)-2-吲哚酮

按实施例14中A合成方法，由5-氟-吲哚满酮和4-溴-苯甲酮于16℃反应4天，得中间体3-羟基-5-氟-3-(4-溴-苯甲酰亚甲基)-2-吲哚酮。白色固体，mp199～201℃，产率84.2％。IRvcm^-1(KBr)：3294.78，3060.52，2902.38，1731.79，1689.55，1494.78。¹H NMRδppm：10.31(s，1H)，7.83～7.81(d，2H)，7.73～7.71(d，2H)，7.22～7.19(d×2，1H)，7.02～6.97(m，1H)，6.80～6.77(m，1H)，6.21(br，1H)，4.10～4.06(d，1H)，3.61～3.57(d，1H)。MS(m/e)：365.1，363.1[M+1]，345.1，347.1，200.1，198.1，185.1[100]，183.1(100)，157.0，155.0。将中间体于室温(16℃)搅拌反应40小时后，回流1小时。得标题化合物，mp250～1℃，产率95％。IRvcm^-1(KBr)：3185.87，3077.87，1718.29，1666.22，1473.37，1311.37。¹HNMRδppm(DMSO)：10.86(br，1H)，8.04～8.01(d，2H)，7.95～7.92(q，1H)，7.83～7.81(d，2H)，7.77(s，1H)，7.28～7.22(m，1H)，6.90～6.87(m，1H)。MS(m/e)：348，346(M)，284.3，282.0，246，190.1，149.1。

实施例24：本发明化合物对HeLa和SiHa肿瘤细胞生长的抑制作用

活性评价按标准的体外MTT试验方法进行。受试化合物用DMSO助溶，配成10^-5mol/L溶液，受试细胞与该溶液作用48小时后，在490nm波长下运用酶标定量仪测定出治疗组与对照组的光密度(OD)值，依据下式计算肿瘤细胞在药物作用后的存活率。

表2 本发明化合物对HeLa和SiHa肿瘤细胞的抑制活性

化合物编号抑制率(％)

HeLa HeLa-BCL-2 SiHa^* SiHa-BCL-2

1 53.6 51.9 39.2 27.9

2 40.8 39.8 2.7 29.2

3 21.4 46.8 4.6 23.0

9 39.5 27.0 25.0

32 45.4 46.7 28.2 36.4

注：HeLa，SiHa与HeLa-BCL-2，SiHa-BCL-2分别为两组低表达与高表达BCL-2的肿瘤细胞株；药品浓度为10×10^-6mol/L

表2给出了在低表达和高表达BCL-2蛋白的HeLa和SiHa肿瘤细胞上本发明目标化合物的肿瘤细胞生长抑制作用。从表中结果可以看到本发明的化合物对高表达BCL-2的HeLa和SiHa肿瘤细胞具有明显的抑制活性。

实施例25：本发明编号32化合物在克隆形成实验中的效价

采用实施例24中的试验方法测试HeLa和SiHa肿瘤细胞的克隆形成，受试化合物浓度分别为1、2、5、10、20μmol/L，受试化合物与肿瘤细胞作用24小时。

表3 本发明编号32化合物在克隆形成实验中的效价

细胞类型 BeLa HeLa-BCL-2 SiHa SiHa-BCL-2

IC₅₀(μmoFL) 3.21 4.10 4.83 4.62

注：HeLa-BCL-2，SiHa-BCL2代表高表达BCL-2蛋白的肿瘤细胞

表3示出了编号32化合物在克隆形成实验中的效价。

实施例26：本发明化合物对肿瘤细胞的生长抑制

采用实施例24中的试验方法，作用时间为4天。分别测出受试化合物浓度为1、5、10、50、100μmol/L时的细胞存活率。然后以同一受试化合物的不同浓度对细胞存活率作图，得到剂量反应曲线，从中求出受试化合物的对数有效浓度。

表4本发明部分化合物对六种肿瘤细胞的抑制效价

IC₅₀(μmol/L)

化合物编号

HCT SPC-A-1 SiHa SiHa-B2 HeLa BeLa-B2

1 9.5 12.5 14.3 14.4 15.8 27.5

2 9.5 - 7.5 25.4 10.0 11.8

2C 8.0 27.0 - 16.2 11.9 28.8

9 27 25 39.5

32 6.3 8.3 10.6 ＞10 3.0 14.5

注：SiHa-B2，HeLa-B2代表高表达BCL-2蛋白的肿瘤细胞，2C为化合物2的另外一种构型。

表4示出了本发明部分化合物对六种肿瘤细胞的抑制效价。

实施例27：本发明化合物对M-07e肿瘤细胞生长的抑制作用

本实施例采用台盼蓝染色的实验方法，受试化合物用DMSO配成0.1mol/L原液贮藏，再分别稀释成所需浓度受试化合物的溶液。以100、10、1、0 nmol/L溶液孵育细胞，作用时间为24小时，测定细胞的存活率。

表5 本发明化合物对M-07e细胞系的作用

化合物编号台盼蓝蓝染率(％)

0 nmol/ml 1 nmnol/ml 10 nmol/ml 100 nmol/ml

44 14.6 22.2 80.9 87.8

47 18.0 19.2 26.8 79.5

48 18.0 21.9 77.1 93.3

49 14.5 11.8 22.9 60.9

50 14.5 14.0 28.2 86.6

52 16.0 25.1 64.6 82.3

55 14.6 18.8 52.1 89.6

57 16.0 16.0 20.4 81.5

表5给出了在高表达BCL-2的M-07e细胞株上，本发明中部分化合物的肿瘤细胞生长抑制作用。

实施例28：本发明化合物对BCL-2高表达肿瘤细胞作用的特异性试验

表6A受试化合物对高表达BCL-2的M-07e细胞系的作用

化合物编号抑制率(％)

1 nmnol/ml 10 nmol/ml 100 nmol/ml

44 93.9 51.1 26.8

47 93.1 77.5 30.0

48 101.2 73.6 31.4

52 85.6 37.7 23.4

55 90.2 27.5 23.8

表6B 受试化合物对低表达BCL2的TF-1细胞系的作用

化合物编号抑制率(％)

1 nmnol/ml 10 nmol/ml 100 nmol/ml

44 99.0 101.7 67.9

47 90.7 87.0 84.5

48 86.0 86.2 66.7

52 89.7 82.6 34.9

55 88.4 82.5 24.4

表6A和表6B分别示出了本发明化合物对BCL-2低表达的TF-1细胞系和BCL-2高表达的M-07e细胞系作用24小时后的细胞存活率，测试方法同实施例24。10nmol/ml时，化合物52、55对BCL-2高表达的M-07e细胞具有明显杀伤作用(存活率＜50％)，对BCL-2低表达的TF-1细胞作用较弱，两者有显著性差异。

实施例29：利用流式细胞仪检测受试化合物诱发肿瘤细胞凋亡的作用

选择在肿瘤细胞生长抑制实验中分别表现敏感和不敏感的8个受试化合物进行FACS实验PI染色，测试样品浓度依次为1nmol/ml，10mol/ml，100mol/ml。结果表明：a)台盼蓝染色实验中作用敏感的受试化合物44，48，52，55，在其浓度为10nmol/ml时，出现较明显凋亡亚二倍体峰。b)台盼蓝染色实验中作用不敏感的受试化合物47、49、50、57，在其浓度为10nmol/ml时，无明显凋亡峰出现。

实施例30：利用Westernblot分析检测受试化合物诱发肿瘤细胞凋亡的作用

为了便于观察比较，分别选择诱导细胞凋亡能力强的受试化合物44，48和诱导细胞凋亡能力弱的受试化合物47，49进行Westernblot分析，检测在不同凋亡情况下bcl-2基因的表达。结果显示，受试化合物44，48在测试浓度升高时，BCL-2表达量显著降低；目标化合物47，49在测试浓度升高时，BCL-2表达量没有显著变化。

实施例29和30的试验结果还证实：受试化合物是通过诱导细胞凋亡而不是坏死来抑制肿瘤细胞生长。

实施例31 受试化合物对BCE内皮细胞的生长抑制作用

采用实施例24中的实验方法。受试化合物浓度为1×10^-5，5×10^-5，8×10^-5，10×10^-5mol/L，作用时间为72小时。

表7 受试化合物对BCE内皮细胞的生长抑制作用

化合物编号抑制率(％)

1×10^-5mol/L 5×10^-5mol/L 8×10^-5mol/L 10×10^-5mol/L

12 38.1 73.8 99.2 87.7

21 14.2 65.0 95.1 89.1

46 48.1 63.9 100.0 82.0

表7示出了部分受试化合物对BEC内皮细胞的生长抑制作用，结果表明：受试化合物12、21、46对BEC内皮细胞具有较强的生长抑制作用，在低浓度时存在抑制强度与浓度的相关性。受试化合物能有效地抑制BEC内皮细胞生长作用，提示该类化合物具有抗肿瘤新生血管生成的作用。

参考文献：

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Claims

1.式I的吲哚类衍生物，其药用盐，其立体异构体，其水合物或其溶剂化物，

其中

R₁是氢原子，卤素，氰基，亚砜基，砜基，硝基，羧基，C₁～C₃烷氧基，C₁～C₃烷酰基，C₁～C₃烷酯基，C₁～C₃烷酰胺基，

R₂是氢原子、甲基、C₁～C₃烷酰基，或-COCH₂R₅(II)基团，或-CH₂R₆(III)基团，其中R₅，R₆各自独立的为氢，C₁～C₅直连或支链烷基，四氢吡咯，哌啶，吗啉，哌嗪或氮甲基哌嗪基，

R₃，R₄基团各自独立为氢原子，C₁～C₅烷基，取代或未取代五～六元单环芳香烃基，或稠环芳香烃基，取代基选自卤素，羟基，氰基，硝基，C_1-6烷基，C_1-6烷氧基，C_1-6烷硫基或卤代C_1-6烷基，或式IV所示的基团：

-C(＝Z)-R₇ (IV)

其中，Z是O，S或NH；R₇是氢原子，C₁～C₅直链烷基，未取代的氨基或由1个或两个C₁～C₃直链烃基取代的氨基，或5～6元环胺基，或式V所示的基团：

其中R₈，R₉相同或不同，为氢原子，卤素，氰基，亚砜基，砜基，硝基，羧基，C₁～C₃烃氧基，未取代氨基或由1个或两个C₁～C₃直链烃基取代的氨基，或5～6元环胺基，C₁～C₃直链烃酰基，C₁～C₃直链烃酯基；M是位于环上的氮原子或碳原子，

X、Y各自为碳原子或氮原子。

2.权利要求1的式I化合物，其中R₁是氢原子，卤素，氰基，亚砜基，砜基，硝基，羧基，烷氧基，乙酰基，乙酯基，乙酰胺基；

R₁是氢原子、甲基、或-COCH₂R₅(II)基团，或-CH₂R₆(III)基团，其中R₅，R₆各自独立的为氢，甲基，四氢吡咯，哌啶，吗啉，氮甲基哌嗪基；

R₃，R₄基团各自独立为氢原子，C₁～C₅烷基，取代或未取代五～六元单环芳香烃基，或稠环芳香烃基，取代基如权利要求1中定义，或式IV所示的基团：

-C(＝Z)-R₇ (IV)

其中，Z是O；R₇是C₁～C₅直链烷基，氨基，甲氨基，二甲氨基，或式V所示的基团：

其中R₈，R₉相同或不同，为氢原子，卤素，氰基，亚砜基，砜基，硝基，羧基，甲氧基，氨基，甲氨基，二甲氨基，甲酰基，乙酰基；M是位于环上的氮原子或碳原子，

X、Y各自为碳原子或氮原子。

3.权利要求1的式I化合物，其中R₁是氢原子，卤素，氰基，亚砜基，砜基，硝基，羧基，烷氧基，乙酰基，乙酯基，乙酰胺基；

R₁是氢原子、甲基、或-COCH₂R₅(II)基团，或-CH₂R₆(III)基团，其中R₅，R₆各自独立的为甲基，四氢吡咯，哌啶，吗啉，氮甲基哌基；

R₃，R₄基团各自独立为氢原子，C₁～C₅烷基，取代或未取代五～六元芳香烃基，取代基如权利要求1中定义，萘基，吲哚基，嘌呤基，或式IV所示的基团：

-C(＝Z)-R₇ (IV)

X、Y各自为碳原子或氮原子。

4.权利要求1的式I化合物，其中

R₁是氢原子，卤素，氰基，亚砜基，砜基，硝基，羧基，烷氧基，乙酰基，乙酯基，乙酰胺基，

R₂是氢原子、甲基，

R₃是氢原子，甲基，

R₄是C₁～C₅烷基，取代或未取代五～六元单环芳香烃基，或稠环芳香烃基，取代基如权利要求1中定义，或式IV所示的基团：

-C(＝Z)-R₇ (IV)

X、Y各自为碳原子或氮原子。

5.权利要求4的化合物，其中R₈，R₉相同或不同且分别为甲酰基或乙酰基。

6.权利要求1的化合物，其中所述式I化合物选自如下化合物：

1〕3-(4’-吡啶亚苄基)-2-吲哚酮

2〕3-(3’-吡啶亚苄基)-2-吲哚酮

3〕3-(3’，5’-二甲基-2’-吡咯亚苄基)-5-溴-2-吲哚酮

4〕3-(3’，5’-二甲基-2’-吡咯甲烯基)-5-甲酸乙酯-2-吲哚酮

5〕1-甲基-3-(3’，5’-二甲基-2’-吡咯甲烯基)-2-吲哚酮

6〕1-甲基-3-(3’-吡啶甲烯基)-2-吲哚酮

7〕3-[4’-(1’-苯基-3’，5’-二甲基-4’-吡啶甲烯基)]-2-吲哚酮

8〕1-(1’-哌啶亚甲基)3-[-2’-吡咯甲烯基]-2-吲哚酮

9〕3-(3’-吡啶亚甲基)-2-吲哚酮

10〕3-(2’-吡咯甲烯基)-4-氮杂-2-吲哚酮

11〕3-[10-甲基-10-(2’-吡啶基)]甲烯基-2-吲哚酮

12〕3-(3’-吡啶亚苄基)-4-氮杂-2-吲哚酮

13〕3-(4’-氯-苯甲酰甲烯基)-吲哚酮

14〕3-苯甲酰甲烯基-吲哚酮

15〕3-(3’，4’-二氯-苯甲酰甲烯基)-2-吲哚酮

16〕3-(3’-吡啶甲酰甲烯基)-2-吲哚酮

17〕3-(4’-氟-苯甲酰甲烯基)-2-吲哚酮

18〕3-苯甲酰亚甲基-2-吲哚酮

19〕二[3-(2-吲哚酮甲烯基)-甲酮

20〕5-氟-3-(4’-溴-苯甲酰甲烯基)-2-吲哚酮

21〕5-氟-3-苯甲酰甲烯基-2-吲哚酮

22〕5-氟-3-(4’-甲基-苯甲酰甲烯基)-2-吲哚酮

23〕3-[1-(4-吡啶基)乙烯基]-2-吲哚酮。

7.药物组合物，它包括至少一种权利要求1～6任一的式I化合物或其药用盐，立体异构体，水合物或溶剂化物及药用赋型剂或药用载体。

8.至少一种通式I中的吲哚化合物，其立体异构体，其药用盐或它们的水合物或它们的溶剂化物在制备用于治疗与BCL-2高表达有关的疾病或症状，或用于治疗肿瘤、肿瘤新生血管形成或肿瘤细胞转移药物中的用途。

9.制备式I化合物，其药用盐，其立体异构体，其水合物或其溶剂化物的方法，它包括：

a.式VI的化合物

和式VII化合物或其盐反应

其中R₁，R₁，R₄，X，Y如上所定义，或

b.式VIII的化合物

和式IX化合物或其盐反应

其中R₁，R₂，R₃，R₄，X，Y如权利要求1中定义，但R₃，R₄不能同时为氢或烷基，或

c.如需要，将a或b步骤中所得式I化合物与药用酸形成式I化合物的药用盐，或

d.如需要，将a或b步骤中所得式I化合物按选自分馏、重结晶或色谱的立体化学分离方法拆分成式I化合物的纯光学异构体。