CN115501245A - 抗产道细胞损伤促弹性蛋白合成的组分及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于功能性活性成分组合物制备技术领域，公开了一种抗产道细胞损伤促弹性蛋白合成的组分及应用，虫草素和NMN组合物按照质量份数由β‑烟酰胺单核苷酸NMN 0.1％～15％、虫草素0.05％～5％、补水组合物1.5％～2％、保湿组合物10％～20％以及余量纯化去离子水组成。方法包括：将β‑烟酰胺单核苷酸、虫草素与蒸馏水混合搅拌均匀得到虫草素和NMN组合物。本发明发现虫草素和NMN组合物可以促进雌性动物产后阴道平滑肌细胞和腺细胞的存活、生长和功能恢复，对于产后生殖系统康复、阴道松弛症有应用前景。以上活性国内外没有报道，与单独使用虫草素导致高血压患者血管平滑肌细胞凋亡作用相反。本发明的新组合物比单体化合物活性明显不同，有统计学差异，具有明显创新性。

Description

抗产道细胞损伤促弹性蛋白合成的组分及应用
技术领域
本发明属于功能性活性成分及其组合物制备技术领域，尤其涉及一种促产后阴道平滑肌细胞和子宫腺细胞活力并促平滑肌合成弹性蛋白的组合物、制备方法及应用。
背景技术
目前，虫草素是冬虫夏草和蛹虫草中特征性主要活性成分。虫草素单体具有扩张支气管、显著增强肾上腺素的作用、免疫调节以及抗肿瘤、抗真菌、抗疟疾、抗衰老、抗癌等药理作用。
Figure BDA0003887658590000011
β-烟酰胺单核苷酸(Nicotinamide Mononucleotide，NMN)是NAD+(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)的直接前体，NAD+存在每一个细胞中，不仅可以提供抗氧化保护作用，还参与细胞的氧化还原等生理反应过程。NMN已被证明可以增强NAD+生物合成，增强供氢离子和抗氧化能力，因此NMN对神经系统疾病，特别是心脑血管疾病、老年退行性疾病、神经退行性疾病等自由基损伤和氧化损伤相关疾病内毒素具有治疗作用。NMN还可以促进DNA损伤修复，因此可以抗癌抗衰老。NMN可以通过提供还原物质直接清除自由基、调节细胞代谢抗细胞衰老、通过细胞保护作用预防组织细胞癌变等活性。同时NMN通过促进组织细胞的敏感性加快血糖下降，其核心原理为促进血液葡萄糖转换为糖原储存。
Figure BDA0003887658590000021
通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有技术资料尚没有发现虫草素、NMN单体及其二者的组合物促进子宫和阴道平滑肌细胞损伤后的存活和功能恢复，未解决促进产后阴道平滑肌和弹性纤维的修复，患者产后导致的阴道平滑肌损伤、产道松弛症仍属于临床难题，临床尚缺乏满意的手段，导致严重影响生活质量，本发明筛选发现的物质新活性具有明显的创新性，极具应用价值。
发明内容
针对针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种促产后阴道平滑肌细胞和子宫腺细胞活力并促平滑肌合成弹性蛋白的组合物、制备方法及应用。
本发明是这样实现的，一种抗生殖细胞损伤和促蛋白合成的组合物，其特征在于，包括β-烟酰胺单核苷酸NMN 0.1％～15％、虫草素0.05％～5％。
进一步，所述组合物按照质量份数由β-烟酰胺单核苷酸NMN 0.1％～15％、虫草素0.05％～5％、补水组合物1.5％～2％及余量纯化去离子水组成。
进一步，所述补水组合物由透明质酸和胶原蛋白组成。
进一步，所述组合物按照质量份数由β-烟酰胺单核苷酸NMN 0.1％～15％、虫草素0.05％～5％、保湿组合物10％～20％及余量纯化去离子水组成。
进一步，所述保湿组合物质量份数在10％～20％，组合物成分可由蔗糖、山梨糖醇、甘油、丙二醇、硫酸软骨素、透明质酸、硫酸粘多糖、卡洛宁酸、去端肽胶原蛋白任意两种及以上组成。
进一步，所述虫草素结构式为：
Figure BDA0003887658590000031
本发明还提供了一种抗阴道平滑肌细胞和腺细胞损伤并促弹性蛋白合成的组合物的制备方法，其特征在于，包括：
将β-烟酰胺单核苷酸、虫草素与蒸馏水混合搅拌均匀得到所述虫草素和NMN组合物。
进一步，所述制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，按比例称取β-烟酰胺单核苷酸、虫草素、补水组合物、保湿组合物；
步骤二，将β-烟酰胺单核苷酸、虫草素溶解于补水组合物、保湿组合物溶液中，搅拌得到均相溶液；
步骤三，向所述均相溶液中加入纯化的离子水至全量，进行定容，得到所述虫草素和NMN组合物。
本发明还提供了一种抗阴道平滑肌细胞和腺细胞损伤并促弹性蛋白合成的组合物在制备用于修复产后阴道和子宫平滑肌细胞并促弹性蛋白合成的产品、修复产后生殖系统腺细胞活性的产品中的应用。
本发明还提供了一种促产后阴道平滑肌细胞存活并促收缩能力促弹性蛋白合成的化合物，其特征在于，包括β-烟酰胺单核苷酸NMN 0.1％～15％，其余成分为纯水或者可以接受的辅料。
结合上述的技术方案和解决的技术问题，本发明所要保护的技术方案所具备的优点及积极效果为：
本发明的虫草素和NMN组合物能够保护平滑肌细胞、腺细胞、增强平滑肌和腺细胞存活和机能。
本发明的虫草素和NMN组合物能够促进产后动物阴道平滑肌细胞、腺体细胞恢复形态和机能。
本发明发现虫草素和NMN组合物可以促进雌性动物阴道平滑肌细胞和腺细胞的生长和形态功能恢复、增强两种细胞的存活和机能，提高平滑肌和腺细胞活力。以上活性国内外没有报道，与单独使用虫草素血管平滑肌活性相反。本发明的新组合物活性比以往报道活性不同，具有明显创新性。
本发明的技术方案填补了国内外业内技术空白：本发明的技术方案填补了虫草素单体和NMN组合物促进子宫和阴道平滑肌存活和促进恢复期收缩活性的活性和应用的技术空白。
本发明的技术方案是否解决了人们一直渴望解决、但始终未能获得成功的技术难题：本发明技术方案解决了临床对患者产后导致的阴道平滑肌损伤、松弛问题，以及对子宫平滑肌损伤修复的手段。
附图说明
图1是本发明实施例提供的制备虫草素和NMN组合物的方法流程图；
图2是本发明实施例提供的产后SD大鼠和给药组前后的体重对比图；
图3是本发明实施例提供的产后C57小鼠和给药组前后的体重对比图；
图4(a)是本发明实施例提供的产后SD大鼠解剖图；
图4(b)是本发明实施例提供的SD大鼠产后组解剖图；
图4(c)是本发明实施例提供的SD大鼠组合物给药组解剖图；
图4(d)是本发明实施例提供的SD大鼠NMN给药组解剖图；
图4(e)是本发明实施例提供的SD大鼠虫草素给药组解剖图；
图5(a)是本发明实施例提供的产后C57小鼠解剖图；
图5(b)是本发明实施例提供的C57小鼠产后组解剖图；
图5(c)是本发明实施例提供的C57小鼠组合物给药组解剖图；
图5(d)是本发明实施例提供的C57小鼠NMN给药组解剖图；
图5(e)是本发明实施例提供的C57小鼠虫草素给药组解剖图；
图6是本发明实施例提供的SD大鼠生殖系统质量对比图；
图7是本发明实施例提供的C57小鼠生殖系统质量对比图；
图8是本发明实施例提供的产后SD大鼠子宫收缩张力对比图；
图9是本发明实施例提供的产后C57小鼠子宫收缩张力对比图；
图10是本发明实施例提供的产后SD大鼠平滑肌细胞损伤占比图；
图11是本发明实施例提供的C57小鼠平滑肌细胞损伤占比图；
图12是本发明实施例提供的产后SD大鼠血清sm-troponin含量示意图；
图13是本发明实施例提供的产后SD大鼠血清ET-1含量示意图；
图14是本发明实施例提供的产后C57小鼠血清sm-troponin含量示意图；
图15是本发明实施例提供的产后C57小鼠血清ET-1含量示意图；
图16是本发明实施例提供的CCK-8法检测体外培养的大鼠阴道平滑肌的细胞的活力情况示意图；
图17是本发明实施例提供的大鼠阴道平滑肌细胞胞内弹性蛋白前体相对辉度占比图；
图18是本发明实施例提供的CCK-8法检测体外培养的大鼠子宫内膜腺细胞的活力情况示意图；
图19是本发明实施例提供的SD大鼠和小鼠血清性激素水平对比图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
为了使本领域技术人员充分了解本发明如何具体实现，该部分是对权利要求技术方案进行展开说明的解释说明实施例。
本发明实施例提供的组合物制备的产品，所述组合物按照质量份数由β-烟酰胺单核苷酸NMN 0.1％～15％、虫草素0.05％～5％、补水组合物1.5％～2％及余量纯化去离子水组成。
本发明实施例提供的组合物制备的产品，补水组合物由透明质酸和胶原蛋白组成。
透明质酸的平均分子量为50万-200万，是大量存在于生物体内的众多组织的多糖类物质。其生理功能是能使水分进入细胞间隙，并与蛋白质结合而形成蛋白凝胶，将细胞粘在一起，发挥正常的细胞代谢作用，起到保持细胞水分，保护细胞不受病原菌的侵害，增强免疫力等作用。
胶原蛋白是真皮层的主要成分，胶原蛋白可以改善细胞膜的通透性。胶原蛋白和透明质酸在皮肤表面的吸收可以相互促进，能够使更多透明质酸的营养成分被皮肤吸收。
本发明实施例提供的组合物制备的产品，组合物制备的产品，其特征在于，所述组合物按照质量份数由β-烟酰胺单核苷酸NMN 0.1％～15％、虫草素0.05％～5％、保湿组合物10％～20％及余量纯化去离子水组成。
本发明实施例提供的组合物制备的药物组合物，所述保湿组合物质量份数在10％～20％，组合物成分可由蔗糖、山梨糖醇、甘油、丙二醇、硫酸软骨素、透明质酸、硫酸粘多糖、卡洛宁酸、去端肽胶原蛋白等任意两种及以上组成。
所述保湿组合物成分，能够具有浓厚感和水润的感触，并且能够抑制组合物水溶液黏腻、发涩，给使用者优异的使用感。
如图1所示，本发明实施例提供的制备虫草素和NMN组合物的方法包括以下步骤：
水溶液制备法：按比例称取β-烟酰胺单核苷酸、虫草素制备成水溶液即可获得组合物水溶液。
进一步，含保湿成分和功能的样品制备法：
S101，也可以在两种化合物之外继续加入补水组合物、保湿组合物；将β-烟酰胺单核苷酸、虫草素溶解于补水组合物、保湿组合物溶液中，搅拌得到均相溶液；
S102，向所述均相溶液中加入纯化的离子水至全量，进行定容，得到所述虫草素和NMN组合物。
本发明实施例提供了一种虫草素与NMN的组合物按照重量份数由NMN(β-烟酰胺单核苷酸)0.5％、虫草素0.1％、补水组合物1.5％、保湿组合物17％以及余量纯化的去离子水组成，重量份数相加为100％。
本发明实施例提供的虫草素与NMN的组合物的制备方法包括：将NMN(β-烟酰胺单核苷酸)、虫草素溶于无菌蒸馏水即可得到。
本发明实施例提供的虫草素与NMN的组合物的组合物的制备方法还包括：
步骤一，按重量份数准备原料：NMN(β-烟酰胺单核苷酸)0.5％、虫草素0.1％、补水组合物1.5％、保湿组合物17％、余量为纯化的去离子水组成，去离子水补足；
步骤二，将NMN(β-烟酰胺单核苷酸)、虫草素溶解于补水组合物、保湿组合物溶液中，搅拌得到均相溶液；
步骤三，加入纯化的离子水至全量，进行定容，得到虫草素与NMN的组合物；
步骤四，灌装封盖，将溶解后得到的混合物采用灌装机配合包装袋进行灌装，采用自动塑料薄膜连续封口机对灌装后的包装袋进行封口；
步骤五，对所得的中间产品进行检验，若合格，检漏喷码，采用喷码机对产品进行依次喷码；
步骤六，包装入库，对成品进行外包装及检验，合格品入成品库存放。
为了证明本发明的技术方案的创造性和技术价值，该部分是对权利要求技术方案进行具体产品上或相关技术上的应用实施例。
本发明实施例提供的补水组合物可由透明质酸和胶原蛋白组成。
本发明实施例提供的保湿组合物的使用能够抑制组合物水溶液黏腻、发涩，并具有浓厚感和水润的感触，使用感优异。
所述保湿剂可以是蔗糖、山梨糖醇、甘油、丙二醇、硫酸软骨素、透明质酸、硫酸粘多糖、卡洛宁酸、去端肽胶原蛋白等
本发明实施例提供的虫草素与NMN的组合物应用于产后动物的治疗中，具体应用方法包括：将制备得到的虫草素与NMN的组合物直接在产后动物生殖系统局部给药。
本发明实施例在研发或者使用过程中取得了一些积极效果和相反的效果，和现有技术相比的确具备很大的优势，下面内容结合试验过程的数据、图表等进行描述。
本发明实施例提供的一种虫草素和NMN组合物、制备方法及应用。虫草素单体具有促进慢性肺病患者支气管平滑肌舒张、促高血压患者心血管平滑肌舒张和凋亡作用，其机制是在病灶微环境的作用下，虫草素调节气管平滑肌和血管平滑肌紧张性，产生松弛效果，与本发明特定环境下，虫草素和NMN组合情况下出现与以上报道完全相反作用。通过高通量筛选技术和虚拟筛选技术，本发明发现虫草素单体与NMN组合后作用与已有报道高血压患者血管平滑肌影响完全不同，具有促进产后子宫平滑肌、阴道平滑肌细胞存活、修复、收缩活性增加，属于新的认知。
本发明实施例提供的一种虫草素和NMN组合物，所述虫草素和NMN组合物可以制备成水溶液、或组合物可以制备成可以接受的辅料、溶媒、剂型或产品。组合物按照质量份数由β-烟酰胺单核苷酸NMN 0.1％～15％、虫草素0.05-5％、补水组合物1.5％～2％、保湿组合物10％～20％以及余量纯化去离子水组成。
本发明实施例提供的一种制备所述虫草素和NMN组合物的方法，所述制备虫草素和NMN组合物的方法包括：
将β-烟酰胺单核苷酸、虫草素与蒸馏水混合搅拌均匀得到所述虫草素和NMN组合物。
本发明实施例提供的制备虫草素和NMN组合物的方法包括以下步骤：
步骤一，按比例称取β-烟酰胺单核苷酸、虫草素、补水组合物、保湿组合物；
步骤二，将β-烟酰胺单核苷酸、虫草素溶解于补水组合物、保湿组合物溶液中，搅拌得到均相溶液；
步骤三，向所述均相溶液中加入纯化的离子水至全量，进行定容，得到所述虫草素和NMN组合物。
本发明实施例提供的一种虫草素和NMN组合物在制备用于修复平滑肌细胞及促弹性蛋白合成的活性成分中的应用。
本发明实施例提供的一种虫草素和NMN组合物在制备用于修复腺细胞的活性成分中的应用。
本发明实施例提供的一种虫草素和NMN组合物在制备用于修复产后子宫的活性成分中的应用。
本发明实施例提供的一种虫草素和NMN组合物在制备用于修复腺体细胞的活性成分中的应用。
本发明实施例提供的一种虫草素和NMN组合物在制备用于保护产后生殖系统的活性成分中的应用。
本发明实施例提供的一种虫草素和NMN组合物在制备用于增强平滑肌、腺细胞活力的活性成分中的应用。
本本发明实施例提供的一种虫草素和NMN组合物在制备用于提高平滑肌、腺细胞活性的活性成分中的应用。
本发明实施例提供的一种虫草素在制备用于提高平滑肌、腺细胞活性的活性成分中的应用。
本发明实施例提供的一种NMN在制备用于提高平滑肌、腺细胞活性的活性成分中的应用。
下面结合实验对本发明的技术效果作进一步说明。
样品配制，采用常规技术配制NMN、虫草素及组合物的溶液，质量浓度均为5％，其中组合物溶液含两种单体质量浓度各2.5％。
统计方法，采用SPSS软件进行统计分析，全部数据进行正态检验、方差齐性检验，并根据结果采用相应的数据转换、Independent-Samples Test或单因素方差分析技术。
实验1：利用动物模型研究样品的活性
1)动物水平分别研究虫草素与β-烟酰胺单核苷酸(NMN)组合物促进产后大鼠和小鼠子宫及卵巢平滑肌存活，减少大鼠和小鼠子宫及卵巢平滑肌细胞损伤。
分娩后第1天的产后SPF级SD老龄大鼠40只，体重182～184g，SPF级老龄小鼠40只，体重19～20g，由北京大学医学部提供，实验动物生产许可证号SCXK(京)2021-0013。饲养于实验动物独立通风系统，室温(23±2)℃，湿度50％±5％，正常昼夜交替，自由饮食。动物实验遵循动物伦理委员会规定。将40只老龄SD大鼠随机分为产后组(模型组)、虫草素与β-烟酰胺单核苷酸(NMN)组合物给药组、β-烟酰胺单核苷酸(NMN)给药组与虫草素给药组，每组10只。将40只产后小鼠随机分为产后组(模型组)、虫草素与β-烟酰胺单核苷酸(NMN)组合物给药组、β-烟酰胺单核苷酸(NMN)给药组与虫草素给药组，每组10只。给药组用灌胃器经阴道给药0.1ml，每天一次，共给药2周。
记录给药前后大鼠、小鼠的体重。图2为SD大鼠产后组和给药组前后的体重对比图，图3是C57小鼠产后组和给药组前后的体重对比图。统计学结果显示，在实验进行两周后，产后组与给药组体重均有所上升，但两组间体重不存在统计学显著差异(P>0.05)。该实验结果说明随机分组得到的各组大鼠和小鼠体重无差异，对实验结果无不良影响。
10％水合氯醛腹腔注射法麻醉大鼠、小鼠后剖取生殖系统组织(阴道、子宫、卵巢)并记录组织形态、颜色、重量。图4图5为产后大鼠和小鼠解剖图及生殖系统颜色、形态对比图，图片显示大鼠和小鼠组合物给药组生殖系统(阴道、子宫和卵巢)形态和功能明显优于产后组(模型组)。图6图7对大鼠和小鼠生殖系统质量进行了统计，结果显示，组合物给药组生殖系统质量显著大于产后组(P<0.05)，NMN给药组与虫草素给药组对阴道、子宫和卵巢的总质量有增加的趋势，但无统计学显著性差异(P>0.05)，说明两个单体的作用弱，组合物效果明显增强。该实验结果说明组合物给药组与单体给药效果明显不同，组合物明显给药后改善了大鼠和小鼠生殖系统形态及质量。局部用于雌性动物分娩后生殖道平滑肌细胞的增大和活细胞数量增加，其机制与生育导致的抗平滑肌细胞牵拉损伤、死亡、促进其生长有关。
2)样品对平滑肌收缩功能的影响。
利用成都泰盟BL-420F生物信号采集处理系统测量并计算5min内离体子宫收缩张力。图8图9是产后大鼠和小鼠子宫收缩张力对比图，统计学结果显示，组合物给药组大鼠和小鼠子宫最大收缩张力与平均收缩张力显著大于产后未给药组大鼠和小鼠，有统计学显著性(P<0.05)。该实验结果说明组合物给药组改善了大鼠和小鼠生殖系统收缩功能。同时提高阴道平滑肌的机能，减轻阴道和子宫松弛问题。
3)样品对平滑肌细胞的病理学实验
常规病理技术和免疫组化法对阴道壁平滑肌细胞进行计数。图10和图11是大鼠和小鼠平滑肌细胞损伤、萎缩、凋亡细胞占比统计结果，统计分析结果显示，组合物给药组大鼠和小鼠损伤平滑肌细胞占比显著低于产后组(P<0.05)，NMN给药组与虫草素给药组有改善的趋势但无显著性差异。该实验结果说明产后大鼠和小鼠阴道平滑肌细胞损伤严重，活力下降，数量减少，二组合物给药组明显改善了大鼠和小鼠阴道平滑肌细胞活力，有助于抗损伤。
4)样品对血清中肌肉损伤标志蛋白的影响
ELISA试剂盒检测血清标志物平滑肌肌钙蛋白(sm-troponin)以衡量平滑肌受损情况，检测内皮素(ET-1)以衡量平滑肌存活情况。图12图14为肌钙蛋白(sm-troponin)含量，统计学结果显示，组合物给药组大鼠和小鼠肌钙蛋白(sm-troponin)含量显著低于产后组(P<0.05)，NMN给药组与虫草素给药组有降低的趋势但无显著性差异。图13图15为内皮素(ET-1)含量，SPSS软件统计结果显示，组合物给药组大鼠和小鼠内皮素(ET-1)含量显著高于产后组(P<0.05)，NMN给药组与虫草素给药组有升高的趋势但无显著性差异，证明组合物样品的活性与单体活性有本质性不同。该实验结果说明产后大鼠和小鼠生殖道平滑肌存在损伤，组合物给药组促进了大鼠和小鼠生殖道平滑肌细胞增长和存活，导致重量增加。
实验2在细胞水平研究样品对大鼠阴道平滑肌活细胞数量和弹性蛋白合成的影响
1)大鼠阴道平滑肌细胞分离自阴道壁肌层组织，采用常规原代培养技术获得，采用内毒素终浓度70uL/mL培养基，5％CO2培养4小时诱导阴道平滑肌细胞损伤。分为正常组、模型组、组合物给药组、NMN给药组与虫草素给药组。采用CCK-8法检测细胞活力与生长情况。酶标仪检测波长λ460处吸光度(A)，细胞活力计算公式如下：细胞活力(％)＝[A(给药孔X)-A(空白孔B)]/[A(正常组)-A(空白孔B)]×100％。图16为大鼠阴道平滑肌细胞活力统计图，统计分析结果显示，模型组平滑肌细胞活力显著低于正常组(P<0.05)，说明内毒素诱导阴道平滑肌细胞损伤模型成功。组合物给药组活细胞数量和活力显著高于模型组(P<0.05)，而NMN给药组与虫草素给药组有升高的趋势但无显著性差异，P>0.05，证明组合物样品的活性与单体活性有本质性不同。以上现象与组合物给药对抗老龄分娩后大鼠阴道平滑肌细胞减少、萎缩有关，证明组合物样品对大鼠阴道平滑肌细胞损伤修复的效果。
2)为研究样品对平滑肌细胞合成弹性蛋白的影响，在12孔板培养原代阴道平滑肌细胞，培养方法和细胞给药分组同上。给药后各组平滑肌细胞在孵箱中静置培养72小时，轻轻吸弃上清，采用弹性蛋白一抗标记平滑肌细胞合成的弹性蛋白，荧光二抗孵育等常规步骤，采用Molecular Device公司筛选工作站Flexstation3读取荧光，观察平滑肌细胞内弹性蛋白前体的辉度。计算方法为以给药孔荧光辉度和对照孔辉度比值计算平滑肌细胞体内外合成的弹性蛋白含量，给药组均与模型对照组(不给药，只给溶媒)相比。计算公式：胞内外弹性蛋白及前体相对含量(％)＝[辉度(给药孔X)-辉度(空白孔B)]/[辉度(正常组)-辉度(空白孔B)]×100％。图17为大鼠阴道原代平滑肌细胞合成的弹性蛋白及前体相对辉度统计图，统计分析发现组合物给药组荧光辉度明显增加，有统计学显著性(P<0.05)，而NMN给药组和虫草素给药组的相对辉度有提供，但无统计学显著性，说明组合物促平滑肌细胞合成弹性蛋白的能力高于单体的活性，有显著提高。产后患者阴道平滑肌细胞和成纤维细胞合成的弹性蛋白与阴道松弛症明显相关，有应用前景。
实验3：在细胞水平研究组合物样品对子宫腺细胞的的影响。
采用常规原代培养法制备子宫内膜腺细胞。将原代子宫内膜腺细胞接种于含10％胎牛血清的DMEM-F12培养基(加双抗和组合物)，置于湿润的含相对体积分数为5％CO2的37℃培养箱中,24h后换液。分为正常组、组合物给药组、NMN给药组、虫草素给药组。采用CCK-8法检测细胞活力。酶标仪检测波长λ460处吸光度。图18为大鼠子宫内膜腺细胞活力统计图，统计结果显示，组合物给药组活细胞数量和活力显著高于正常组(P<0.05)，NMN给药组与虫草素给药组有升高的趋势但无显著性差异。两个化合物组合后明显促进大鼠腺细胞的存活和生长，与两个单体的活性相比，活性明显提高，有统计学差异(P<0.05)。
实验4在动物水平研究样品促进产后大鼠子宫及卵巢腺细胞存活。
SPF级SD大鼠，体重182～184g，购于北京大学医学部提供，实验动物生产许可证号SCXK(京)2021-0013。饲养于实验动物独立通风系统，室温(23±2)℃，湿度50％±5％，正常昼夜交替，自由饮食。动物实验遵循动物伦理委员会规定。将40只老龄分娩后的SD大鼠随机分为正常组(对照，不给药)、虫草素与β-烟酰胺单核苷酸(NMN)组合物给药组、β-烟酰胺单核苷酸(NMN)给药组与虫草素给药组，每组10只。各给药组用灌胃器经阴道给药0.1ml，正常组用蒸馏水代替，每天1次，共给药2周。
给药结束后，空腹14小时、10％水合氯醛麻醉、腹主动脉采血、血清3000rpm离心10分钟后，按雌激素(E)ELISA试剂盒说明书检测大鼠给药前后血清性激素水平，并进行雌激素水平数据对比分析。图19为大鼠两组雌激素水平对比图，统计学结果显示，组合物给药组的睾酮水平和雌二醇水平显著大于正常组(P<0.05)，NMN给药组与虫草素给药组有改善的趋势，但无统计学显著性，P>0.05。该实验结果说明组合物的活性明显提高，也明显优于单体化合物。
上述实验证明，本发明提供了一种促产后生殖系统平滑肌细胞和腺细胞存活、增强平滑肌细胞弹性蛋白合成的新组方成分，并且能够对抗产后阴道平滑肌损伤并促进功能修复等作用。阴道平滑肌细胞合成的弹性蛋白是阴道弹性的重要成分，弹性蛋白是弹性纤维(elastic fibers)的主要成分，对于阴道松弛症有重要影响，弹性蛋白也有利于抗生殖系统附件松弛。实验证明了虫草素和β-烟酰胺单核苷酸的新用途，在生殖系统阴道平滑肌和腺细胞损伤后的存活方面均有良好效果，具有良好的抗损伤，增强其存活和功能修复。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种促产后阴道平滑肌细胞和子宫腺细胞活力并促平滑肌合成弹性蛋白的组合物，其特征在于，包括β-烟酰胺单核苷酸NMN 0.1％～15％、虫草素0.05％～5％。
2.如权利要求1所述的促产后阴道平滑肌细胞和子宫腺细胞活力并促平滑肌合成弹性蛋白的组合物，其特征在于，所述组合物按照质量份数由β-烟酰胺单核苷酸NMN 0.1％～15％、虫草素0.05％～5％、补水组合物1.5％～2％及余量纯化去离子水组成。
3.如权利要求2所述的促产后阴道平滑肌细胞和子宫腺细胞活力并促平滑肌合成弹性蛋白的组合物，其特征在于，所述补水组合物由透明质酸和胶原蛋白组成。
4.如权利要求1所述的促产后阴道平滑肌细胞和子宫腺细胞活力并促平滑肌合成弹性蛋白的组合物，其特征在于，所述组合物按照质量份数由β-烟酰胺单核苷酸NMN 0.1％～15％、虫草素0.05％～5％、保湿组合物10％～20％及余量纯化去离子水组成。
5.如权利要求4所述的促产后阴道平滑肌细胞和子宫腺细胞活力并促平滑肌合成弹性蛋白的组合物，其特征在于，所述保湿组合物质量份数在10％～20％，组合物成分可由蔗糖、山梨糖醇、甘油、丙二醇、硫酸软骨素、透明质酸、硫酸粘多糖、卡洛宁酸、去端肽胶原蛋白任意两种及以上组成。
6.如权利要求1所述的促产后阴道平滑肌细胞和子宫腺细胞活力并促平滑肌合成弹性蛋白的组合物，其特征在于，所述虫草素结构式为：
Figure FDA0003887658580000011
7.一种制备如权利要求1所的促产后阴道平滑肌细胞和子宫腺细胞活力并促平滑肌合成弹性蛋白的组合物的方法，其特征在于，包括：
将β-烟酰胺单核苷酸、虫草素与蒸馏水混合搅拌均匀得到所述虫草素和NMN组合物。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，按比例称取β-烟酰胺单核苷酸、虫草素、补水组合物、保湿组合物；
步骤二，将β-烟酰胺单核苷酸、虫草素溶解于补水组合物、保湿组合物溶液中，搅拌得到均相溶液；
步骤三，向所述均相溶液中加入纯化的离子水至全量，进行定容，得到所述虫草素和NMN组合物。
9.一种如权利要求1所述的促产后阴道平滑肌细胞和子宫腺细胞活力并促平滑肌合成弹性蛋白的组合物在制备用于修复产后阴道和子宫平滑肌细胞并促平滑肌细胞合成弹性蛋白的产品、修复产后生殖系统腺细胞活性的产品中的应用。
10.一种促产后阴道平滑肌细胞存活并促收缩机能并促弹性蛋白合成的化合物，其特征在于，包括虫草素0.05％-15％，其余成分为纯水或者可以接受的辅料。
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