CN111110581A - 具有提高美白功能的新琼寡糖组合物及其应用 - Google Patents

具有提高美白功能的新琼寡糖组合物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种具有提高美白功能的新琼寡糖组合物及其应用。本发明提供的一种具有提高美白功能的新琼寡糖组合物，包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，其中，以新琼寡糖组合物的总重量计，所述新琼二糖的含量为5‑30％，所述新琼四糖的含量为20‑40％和所述新琼六糖的含量为40‑70％。本发明所述的新琼寡糖组合物不仅能够增强美白功效成分的美白效果，而且能消除和/或缓解美白功效成分的不良副作用，所述的新琼寡糖组合物可以在较低浓度的添加量下获得良好的美白效果，并且缓解或消除由于角质层过度剥落导致的不适和异常。

Description

具有提高美白功能的新琼寡糖组合物及其应用
技术领域
本发明属于人体护理技术领域，具体涉及一种具有提高美白功能的新琼寡糖组合物及其应用。
背景技术
琼胶寡糖是一种从海洋红藻的石花菜属(Gelidium sp.)、江蓠藻属(Gracilariasp.)和鸡毛菜属(Pterocladia sp.)等红藻中提取出的一种低聚糖，其是由1,3-连接的β-D-半乳吡喃糖和1,4-连接的3,6-内醚-α-L-吡哺半乳糖残基重复交替连接的链状中性糖。
近年来研究表明，琼胶寡糖具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等多种生物活性，并且与寡糖的聚合度(DP)密切相关，然而关于新琼寡糖的活性报道相对较少。日本Kobayashi等人发现低分子量的中性新琼二糖具有良好的吸湿和美白双重功效，为开发琼胶寡糖在人体护理产品中的应用提供了有力参考。然而在国内的这一技术领域仍有大量的空白，亟需相关技术提供支持。
白是许多消费者对“美”的追求，这也是美白产品在众多化妆品类中长盛不衰的原因。然而由于以前商家对于产品功效的不当宣传，使得消费者无从对市面上的美白产品进行合理有效的选择，而在流通的产品质量也因此参差不全。
与美白直接相关的是人体黑色素的合成与代谢通路。黑色素主要由酪氨酸、酪氨酸酶和氧3种基本物质合成，其中的酪氨酸决定了黑色素的基本结构框架。目前公认的黑色素合成途径为：酪氨酸→多巴酸→多巴醌→多巴色素(或二羟基吲哚酸)→黑色素低聚体→黑色素。常见的美白功效成分的作用机制有五个方面：(1)抑制黑色素颗粒的形成，这一过程包括抑制酪氨酸酶活性、抑制多巴色素异构酶活性、抑制氧化反应；(2)抑制黑色素颗粒转移至角质细胞；(3)加速角质细胞中黑色素向角质层转移并促进角质层脱落；(4)阻止黑色素生成过程中的信号转导通路，如内皮素拮抗剂、抑制α-促黑素(α-MSH)肾上腺皮质激素(ACTH)与黑素细胞黑素皮质素受体1(MC1R)结合；(5)减少外源性因素如紫外线等对黑色素形成过程的负面影响。
随着近年来我国食药监部门对包括美白类产品在内等多种特殊功效的化妆品的日益重视，专业、系统的特殊用途化妆品评价认证体系业已在正式运作。受益于此，许多品牌方在开发美白类产品时会不能仅通过宣传，而必须更加侧重产品实际功效的研发。但与此同时，品牌方也面临着从海量的化妆品原料中分辨具有美白功效的成分这一巨大挑战。一个低成本的解决方案是选择被广泛认可的美白功效的成分添加进配方。这带来的另一个问题是市售产品核心成分的趋同，消费者的选择面并没有变宽，并且一些常见美白成分，如烟酰胺、曲酸、熊果酸类，在美白功效之外还有促进角质层代谢，导致角质层过度剥落的副作用，用户体验并不好。长此以往对我国美白类化妆品这一领域的市场发展必将带来不利。
文献1(傅晓妍.新琼寡糖的酶法制备和化妆品功效的初步评价.中国海洋大学，2006)公开了一种新琼寡糖的酶法制备和化妆品功效的初步评价，其实海洋假别单胞菌CY24中克隆重组得到两个高特异性的胞外β-琼胶酶AgaA和AgaB，并对两种琼胶酶AgaA和AgaB进行了纯化，酶解得到混合物A系列和B系列，A系列主要为新琼四糖和新琼六糖，极少量新琼二糖，其中四糖占54.65％，六糖占41.64％，二糖占3.71％。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的目的是提出一种具有增强美白功效成分的新琼寡糖组合物及其应用，本发明的所述的新琼寡糖组合物不仅具有增强美白的效果，而且还具有缓解常规美白成分由于皮肤角质层过度脱落而导致的副作用。
本发明的具体技术方案如下：
本发明提供了一种具有提高美白功能的新琼寡糖组合物，包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，其中，以新琼寡糖组合物的总重量计，所述新琼二糖的含量为5-30％，所述新琼四糖的含量为20-40％和所述新琼六糖的含量为40-70％。
优选的，对于上述所述的新琼寡糖组合物，其中，所述新琼二糖的含量为10-30％，优选为10-15％；所述新琼四糖的含量为30-40％，优选为35-40％；以及所述新琼六糖的含量为40-60％，优选为50-60％。
本发明提供了一种用于人体护理美白的组合物，其包括上述所述的新琼寡糖组合物、美白功效成分、保湿剂和水。
优选的，对于上述所述的组合物，其中，以重量份计，所述新琼寡糖组合物为2-15份，优选为8-15份，较优选为8-12份；所述美白功效成分为1-8份，优选为3-8份，较优选为5-8份；所述保湿剂为5-20份，优选为10-20份，较优选为10-15份；以及所述水为10-25份，优选为10-24份，较优选为15-24份。
优选的，对于上述所述的组合物，其中，所述美白功效成分选自于烟酰胺、曲酸、熊果提取物、甘草提取物、羟基乙酸、壬二酸和植物黄酮中的一种或两种以上。
优选的，对于上述所述的组合物，其中，所述植物黄酮选自于马齿苋提取物、佛手柑提取物、柠檬提取物、豌豆提取物、金缕梅提取物、侧柏提取物、竹叶提取物、银杏叶提取物和刺梨提取物中的一种或两种以上。
优选的，对于上述所述的组合物，其中，所述保湿剂选自于甘油、丙二醇、戊二醇、神经酰胺和透明质酸中的一种或两种以上。
本发明提供了上述所述组合物的制备方法，其包括下述步骤：
(1)将所述新琼寡糖组合物加入水中得到A相；
(2)将所述美白功效成分加入到保湿剂中得到B相；以及
(3)将所述A相与所述B相混合得到所述的组合物。
优选的，对于上述所述的制备方法，其中，在步骤(1)中，将所述新琼寡糖组合物分批次加入水中，优选为分3次加入水中；优选的，在步骤(2)中，将所述美白功效成分分批次加入到保湿剂中，优选为分3次加入到保湿剂中。
本发明提供了一种人体护理品组合物，其包含上述所述的组合物或者上述所述的制备方法制备得到的组合物和生理学上可接受的辅料。
优选的，对于上述所述的人体护理品组合物，其中，所述生理学上可接受的辅料选自于小分子多元醇和/或表面活性剂。
优选的，对于上述所述的人体护理品组合物，其中，以人体护理品组合物的总重量计，所述新琼寡糖组合物的含量为0.01-2％，优选为0.01-1.5％，较优选为0.0125-1％。
优选的，对于上述所述的人体护理品组合物，其中，以人体护理品组合物的总重量计，所述组合物的含量为0.5-20％，优选为6-20％，较优选为8-15％。
本发明提供了上述所述的新琼寡糖组合物或者上述所述的用于人体护理美白的组合物或者上述所述的制备方法所得到的用于人体护理美白的组合物或者上述所述的人体护理品组合物在人体护理领域中的应用，优选在提高美白功能的人体护理领域中的应用。
发明的效果
本发明提供的新琼寡糖组合物，其不仅能够增强美白功效成分的美白效果，而且能消除和/或缓解美白功效成分的不良副作用，所述的新琼寡糖组合物可以在较低浓度的添加量下获得良好的美白效果，并且缓解或消除由于角质层过度剥落导致的不适和异常。
附图说明
图1-1是使用H&E染色的3D黑素皮肤模型的示意图。
图1-2是使用F&M染色的3D黑素皮肤模型的示意图。
图2-1是实验例1中黑素皮肤模型在使用给药组成为BC时在第0天的表观结果示意图。
图2-2是实验例1中黑素皮肤模型在使用给药组成为BC时在第3天的表观结果示意图。
图2-3是实验例1中黑素皮肤模型在使用给药组成为BC时在第7天的表观结果示意图。
图3-1是实验例1中黑素皮肤模型在使用给药组成为NC时在第3天的表观结果示意图。
图3-2是实验例1中黑素皮肤模型在使用给药组成为NC时在第7天的表观结果示意图。
图4是实验例1中黑素皮肤模型在使用给药组成为A时在第7天的表观结果示意图。
图5是实验例1中黑素皮肤模型在使用给药组成为B时在第7天的表观结果示意图。
图6是实验例1中黑素皮肤模型在不同给药组成后L*值的检测结果示意图。
图7是实验例1中黑素皮肤模型在不同给药组成后的黑素分布检测结果示意图。
图8是实验例2中黑素皮肤模型在不同给药组成后的水通道蛋白染色结果示意图，其从上到下分别是三个孔的染色。
图9是实验例2中黑素皮肤模型在不同给药组成后的丝聚蛋白变化趋势示意图。
具体实施方式
下面将对本发明做以详细说明。
本发明提供的具有提高美白功能的新琼寡糖组合物，包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，其中，以新琼寡糖组合物的总重量计，所述新琼二糖的含量为5-30％，所述新琼四糖的含量为20-40％和所述新琼四糖的含量为40-70％。
优选的，所述新琼二糖的含量可以为5％、10％、15％、20％、25％、30％或其之间的任何范围；所述新琼四糖的含量可以为20％、25％、30％、35％、40％或其之间的任何范围；所述新琼四糖的含量可以为40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或其之间的任何范围。
在本发明优选的一种具体实施方式中，所述新琼二糖的含量为10-30％，优选为10-15％；所述新琼四糖的含量为30-40％，优选为35-40％；以及所述新琼六糖的含量为40-60％，优选为50-60％。
本发明提供了一种用于人体护理美白的组合物，其包括上述所述的新琼寡糖组合物、美白功效成分、保湿剂和水。
由于现有常见的美白功效成分多有加速角质细胞中黑色素向角质层转移并促进角质层脱落的相关机制，虽然这一机制在减少皮肤的黑色素总量上具有非常重要的意义，但角质层的高频剥落，对于健康皮肤的角质层“砖墙”结构是不利的，其副作用体现在，脸部皮肤发干、刺激性接触性皮炎、脱屑或瘙痒。而新琼寡糖组合物与美白功效成分联用时，对于所述副作用具有非常明显的改善作用。这一新用途的作用机理为抑制黑色素细胞的形成，以及促进皮肤细胞中水通道蛋白(Aquaporin3，AQP3)的表达。AQP3是AQPs家族表达最丰富的水通道蛋白亚型。其在表皮的表达量具有空间层次，主要表达于人表皮基底层，棘细胞层、颗粒层，到角质层逐渐消失。这种空间性分布与皮肤的含水量分布一致。其次，AQP3自身是pH敏感的水通道蛋白，表皮的pH值与AQP3的空间分布也存在关联性。已有研究成果表明，AQP3在基底膜的高表达，可以促使水、甘油及尿素的转运，使得基底层的细胞外环境更接近于中性的平衡状态，而越接近角质层，AQP3的表达也越少，水分含量下降明显，皮肤内环境逐渐呈现酸性。因此提高角质层皮肤的AQP3表达，对于缓解由于皮肤角质层过薄而引起的验证反应有重要意义。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，以重量份计，所述新琼寡糖组合物为2-15份，优选为8-15份，较优选为8-12份；所述美白功效成分为1-8份，优选为3-8份，较优选为5-8份；所述保湿剂为5-20份，优选为10-20份，较优选为10-15份；以及所述水为10-25份，优选为10-24份，较优选为15-24份。
具体地，所述新琼寡糖组合物可以为2份、3份、4份、5份、6份、7份、8份、9份、10份、11份、12份、13份、14份、15份或其之间的任何范围；所述美白功效成分可以为1份、2份、3份、4份、5份、6份、7份、8份或其之间的任何范围；所述保湿剂可以为5份、6份、7份、8份、9份、10份、11份、12份、13份、14份、15份、16份、17份、18份、19份、20份或其之间的任何范围；所述水可以为10份、11份、12份、13份、14份、15份、16份、17份、18份、19份、20份、21份、22份、23份、24份、25份或其之间的任何范围。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述美白功效成分选自于烟酰胺、熊果提取物、甘草提取物、羟基乙酸、壬二酸和植物黄酮中的一种或两种以上。
熊果提取物是从熊果中提取得到的提取物，其主要成分为熊果苷。
甘草提取物是从甘草中提取的有药用价值的成份，甘草提取物一般包含：甘草甜素、甘草酸、甘草甙、甘草类黄酮、后幕比檀素、刺芒柄花素、槲皮素等，其美白作用机理是通过分散黑色素、分别抑制黑色素以及环加氧酶的合成，从而起到改善色素过度沉着，减少自由基生产的作用。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述植物黄酮选自于马齿苋提取物、佛手柑提取物、柠檬提取物、豌豆提取物、金缕梅提取物、侧柏提取物、竹叶提取物、银杏叶提取物和刺梨提取物中的一种或两种以上。
本发明提供了一种上述所述的用于人体护理美白的组合物的制备方法，其包括下述步骤：
(1)将所述新琼寡糖组合物加入水中得到A相；
(2)将所述美白功效成分加入到保湿剂中得到B相；以及
(3)将所述A相与所述B相混合得到所述的组合物。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，在步骤(1)中，将所述新琼寡糖组合物分批次加入水中，优选为分3次加入水中；优选的，在步骤(2)中，将所述美白功效成分分批次加入到保湿剂中，优选为分3次加入到保湿剂中。
在本发明较优选的一种具体实施方式中，其中，所述组合物的制备方法包括下述步骤：
(1)将所述新琼寡糖组合物分三次加入水中，搅拌至溶解制成A相；
(2)将所述美白功效成分分三次加入保湿剂中，搅拌均匀制成B相；
(3)将所述A相与所述B相混合后，搅拌混匀，得到所述组合物。
本发明提供了一种人体护理品组合物，其包括上述所述的组合物或者上述所述的制备方法制备得到的组合物和生理学上可接受的辅料。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述生理学上可接受的辅料选自于小分子多元醇和/或表面活性剂；优选的，所述小分子多元醇选自于丙二醇、甘油、丁二醇或戊二醇，所述表面活性剂为非离子型表面活性剂，优选选自于氢化蓖麻油、烷基糖苷、氨基酸类表面活性剂、甜菜碱类表面活性剂或PEG类表面活性剂。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，以人体护理品组合物的总重量计，所述新琼寡糖组合物的含量为0.01-2％，优选为0.01-1.5％，较优选为0.0125-1％。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，以人体护理品组合物的总重量计，所述组合物的含量为0.5-20％，优选为6-20％，较优选为8-15％。
本发明提供了上述所述的新琼寡糖组合物或者上述所述的用于人体护理美白的组合物或者上述所述的制备方法所得到的用于人体护理美白的组合物或者上述所述的人体护理品组合物在人体护理领域中的应用，优选在提高美白功能的人体护理领域中的应用
以下通过具体实施例来详细阐述和说明本发明的实施方式，但以下内容不应理解为对本发明作任何限制。
实施例
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明作进一步的详细说明。
实施例中的材料和试剂，如未特殊标明，均为市售，所述的新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖均购于蓝脑科技(厦门)有限公司，新琼二糖的纯度95％，新琼四糖的纯度为92％，新琼六糖的纯度为90％。
实施例1具有提高美白功能的新琼寡糖组合物
实施例1.1
所述的新琼寡糖组合物包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，所述新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖的质量比例为1:3:6。
实施例1.2
所述的新琼寡糖组合物包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，所述新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖的质量比例为1:4:5。
实施例1.3
所述的新琼寡糖组合物包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，所述新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖的质量比例为1.5:3.5:5。
实施例1.4
所述的新琼寡糖组合物包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，所述新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖的质量比例为3:3:4。
实施例1.5
所述的新琼寡糖组合物包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，所述新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖的质量比例为0.5:2.5:7。
实施例1.6
所述的新琼寡糖组合物包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，所述新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖的质量比例为3:2:5。
对比例1
所述的新琼寡糖组合物包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，所述新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖的质量比例为1:5:4。
对比例2
所述的新琼寡糖组合物包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，所述新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖的质量比例为1:1.5:7.5。
实施例2用于人体护理美白的组合物的制备
(1)将实施例1.1所述的新琼寡糖组合物8g分三次加入24ml水中得到A相；
(2)将所述烟酰胺8g分三次加入到10ml丙二醇中得到B相；以及
(3)将所述A相与所述B相混合，在60rpm下搅拌混匀得到所述的组合物。
实施例3用于人体护理美白的组合物的制备
(1)将实施例1.1所述的新琼寡糖组合物8g分三次加入24ml水中得到A相；
(2)将所述曲酸8g分三次加入到10ml丙二醇中得到B相；以及
(3)将所述A相与所述B相混合，在60rpm下搅拌混匀得到所述的组合物。
实施例4用于人体护理美白的组合物的制备
(1)将实施例1.2所述的新琼寡糖组合物8g分三次加入24ml水中得到A相；
(2)将所述烟酰胺8g分三次加入到10ml丙二醇中得到B相；以及
(3)将所述A相与所述B相混合，在60rpm下搅拌混匀得到所述的组合物。
实施例5用于人体护理美白的组合物的制备
(1)将实施例1.3所述的新琼寡糖组合物8g分三次加入24ml水中得到A相；
(2)将所述烟酰胺8g分三次加入到10ml丙二醇中得到B相；以及
(3)将所述A相与所述B相混合，在60rpm下搅拌混匀得到所述的组合物。
实施例6用于人体护理美白的组合物的制备
(1)将实施例1.4所述的新琼寡糖组合物8g分三次加入24ml水中得到A相；
(2)将所述烟酰胺8g分三次加入到10ml丙二醇中得到B相；以及
(3)将所述A相与所述B相混合，在60rpm下搅拌混匀得到所述的组合物。
实施例7用于人体护理美白的组合物的制备
(1)将实施例1.5所述的新琼寡糖组合物8g分三次加入24ml水中得到A相；
(2)将所述烟酰胺8g分三次加入到10ml丙二醇中得到B相；以及
(3)将所述A相与所述B相混合，在60rpm下搅拌混匀得到所述的组合物。
实施例8用于人体护理美白的组合物的制备
(1)将实施例1.6所述的新琼寡糖组合物8g分三次加入24ml水中得到A相；
(2)将所述烟酰胺8g分三次加入到10ml丙二醇中得到B相；以及
(3)将所述A相与所述B相混合，在60rpm下搅拌混匀得到所述的组合物。
对比例3用于人体护理美白的组合物的制备
(1)将对比例1所述的新琼寡糖组合物8g分三次加入24ml水中得到A相；
(2)将所述烟酰胺8g分三次加入到10ml丙二醇中得到B相；以及
(3)将所述A相与所述B相混合，在60rpm下搅拌混匀得到所述的组合物。
对比例4用于人体护理美白的组合物的制备
(1)将对比例2所述的新琼寡糖组合物8g分三次加入24ml水中得到A相；
(2)将所述烟酰胺8g分三次加入到10ml丙二醇中得到B相；以及
(3)将所述A相与所述B相混合，在60rpm下搅拌混匀得到所述的组合物。
实施例9-11用于人体护理美白的组合物的制备
实施例9-11是按照实施例2所述的方法制备，其所用的组分及各组分的重量如下表所示。
表1实施例9-11使用的组分以及各组分的重量
Figure BDA0002351716320000111
Figure BDA0002351716320000121
实验例
实验例1实施例2的促美容功效试验
本实验例以3D黑素皮肤模型
Figure BDA0002351716320000122
为测试工具，采用表面给药的方式，将样品模拟人体使用过程，均匀涂布于3D黑素皮肤模型表面，通过给药后模型表观照片、皮肤模型的亮度(L*值)以及黑素分布三个维度指标，评估不同受试组的体外美白效果。
本实验例所述3D黑素皮肤模型是由黑素细胞和表皮细胞在体外共培养形成的，该模型的组织结构与人体皮肤的表皮结构相似，具有明显的复层化结构，如图1所示。
从图1可以看出，3D黑素皮肤包括：基底层、棘层、颗粒层以及角质层，并且黑素细胞位于基底层，具有均匀的黑素颗粒分布，模型表观颜色与人正常皮肤相似。
本实验例的具体试验步骤如下：
(1)按表2中的实验分组。模型出厂(记为第0天)后，除BC组外，NC组、A组和B组每天进行UVB辐照。所设置的辐照剂量为50mJ/cm2，UVB灯管的辐照强度为1.316mW/cm2，辐照时间为38秒；连续刺激3天后将A组受试物及B组受试物均匀涂布于黑素模型表面，隔天再次表面给药，给药体积10μL/每次，总作用时长为4天。
表2不同的给药组成
组别 BC NC A B
内容物 - - 烟酰胺 实施例2所述的组合物
溶剂 丙二醇/水 丙二醇/水 丙二醇/水 水
浓度 - - 125ppm 125ppm
其中，“-”表示不含有相应的组分。
本实施例中的分组确保各组中含有的成分在终溶液中的当量保持一致，其中BC组为空白对照，NC组为阴性对照。
(2)模型表观拍照观察
给药处理结束后，对不同实验组的模型进行表观拍照观察。拍照在光线强度固定的摄影棚内进行。具体拍照标准操作如下：(1)相机模式：手动；拍照参数设置：焦距＝5.8mm，孔径＝f/8，光圈F22，快门速度＝1/80s，ISO＝3200。(2)将黑素皮肤模型放于比色卡的中心位置进行拍照。
(3)L*值检测
皮肤色度的变化是美白化妆品功效中主要的评价指标之一，常用的色度检测仪主要基于三色分析法原理，三色分析法是通过检测皮肤表层结构上的紫外可见反射光，进行三色分析，并将其转化为L*，a*，b*值，其中L*值代表明暗度(黑白)，a*代表红绿色，b*代表黄蓝色，L*值主要受黑色素含量影响，黑色素含量越高，L*值越小。
给药处理结束后，对不同实验组的模型进行L*值检测。具体检测标准操作如下：①用手术刀片将黑素皮肤模型沿小室边缘环切取下；②将黑素皮肤模型置于一个平整坚硬的白色平面上，按照色差仪使用说明，将色差仪(购于日本柯尼卡美能达公司，CM-700D)检测孔垂直对准模型表面进行检测，每个模型重复读数三次，并记录数据。
(4)模型黑素分布检测
给药处理结束后，对不同实验组的模型进行黑素分布检测，黑素分布检测使用的模型为L*值检测后相应分组的模型。检测方法如下：待测模型采用10％甲醛固定模型，组织包埋，切片后进行Fontana–Masson染色，回收切片结果，使用显微镜拍照。
(5)统计分析
应用Graph Pad Prism作图，结果表示为平均值±SD。各组间比较采用T test统计分析。所有的统计分析均为双尾。p<0.05被认为具有差异显著性，其中*p<0.05，0.005<**p<0.01，***p<0.001，p值越小越显著。
(6)试验结果
①黑素模型表观评价
根据本实施例试验所述给药方式，模型在出厂后培养第0、3、7天时取样进行表观拍照，其中，给药组成为BC的结果如图2-1至2-3所示，给药组成为NC的结果如图3-1至3-2所示，给药组成为A的结果如图4所示，给药组成为B的结果如图5所示。
②根据本实施例试验所述给药方式，模型在出厂后培养第7天时取样检测模型L*值，结果参见表3及图6。
表3不同受试物组的黑素模型L*值检测结果
Figure BDA0002351716320000141
③黑素分布检测结果
根据本实验例所述给药方式，不同模型出厂后培养第7天时取样检测模型黑素分布结果如图7所示。
基于本实验例所述3D黑素模型表观、L*值和黑素分布检测结果显示：3D黑素模型UVB刺激组(NC)在50mJ/cm2的处理下，模型的表观明显变黑，且L*值的检测结果与空白组(BC)相比均有显著性差异(*p<0.05)，说明本实验中黑素模型对UVB能够正常响应；烟酰胺组(A)与UVB刺激组相比，模型的表观明显变白，L*值的检测结果也存在显著性差异，说明美白功效检测质控体系正常；组合物样品组(B)在组合物作用于黑素模型后，表观和L*值检测的结果与UVB对照组相比均具有显著性差异，各组的黑素分布结果与表观和L*检测结果相符，且较烟酰胺组有显著美白功效提升，说明本实验例中所述组合物具有更好的美白效果，即新琼寡糖组合物能够增强美白功能成分的美白效果。
实验例2实施例4-11以及对比例3和4的促美容功效实验
按照实验例1所述的方法对实施例4-11以及对比例3和4进行实验，其黑素模型L*值检测结果如表4所示。
表4实施例4-11以及对比例3和4的黑素模型L*值检测结果
Figure BDA0002351716320000142
Figure BDA0002351716320000151
由上述表4可以看出，实施例2以及实施例4-11的黑素模型L*值均高于对比例3和对比例4，说明本发明所述新琼寡糖组合物的新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖的含量在特定的范围内具有较好的美白效果。
实施例和对比例3以及对比例4的区别仅在于新琼四糖和新琼六糖的含量不同，实施例的新琼四糖的含量在20-40％之内，新琼六糖的含量在40-70％之内，而对比例3中的新琼四糖的含量为50％，新琼六糖的含量为40％，对比例4中的新琼四糖的含量为15％，新琼六糖的含量为75％，即对比例3和对比例4所述的新琼四糖和新琼六糖的含量均在本发明所述新琼寡糖组合物的新琼四糖和新琼六糖的含量范围之外，从表4中所得到的结果可知，所得到的黑素模型L*值有显著的不同，实施例的黑素模型L*值在45.12-58.67之间，而对比例3的黑素模型L*值为42.31，对比例4的黑素模型L*值为43.45说明新琼寡糖组合物中的新琼四糖和新琼六糖的含量在本发明所述的范围之内时黑素模型L*值较高，而黑色素含量越低，L*值较高，说明本发明所述的新琼寡糖组合物能够增强美白功效成分的美白效果。
实验例3提高水通道蛋白表达试验
以人角质形成细胞为对象，使用细胞免疫荧光检测，检测细胞中的水通道蛋白表达量，目的是以此评估本发明所述的新琼寡糖组合物缓解美白功能物质对皮肤角质细胞的损伤作用。
本实施例的具体试验步骤如下：
(1)细胞接种与孵育
以2×104个/孔的细胞接种密度将角质形成细胞(购于中国细胞资源库)接种至含有盖玻片的24孔板中，37℃下5％CO2培养箱孵育过夜。
(2)给药
采用表4进行给药，待24孔板中细胞铺板率达到30-40％时，进行分组给药，每组设三个平行孔，37℃下5％CO2培养箱继续培养24h。
表4给药组成
Figure BDA0002351716320000161
其中，“-”表示不含有相应的成分，曲酸和十二烷基苯磺酸钠均为分析纯，均购于Sigma-Aldrich。
该分组确保各组中含有的成分在终溶液中的当量保持一致，其中BC组为空白对照，NC组为阴性对照，阴性对照设置的内容物为十二烷基苯磺酸钠，该成分对角质层有较强的剥落作用，并且会由此带来明显的刺激反应
(3)收样
孵育培养结束后，弃掉24孔板中培养液，采用PBS清洗爬片三次，用4％多聚甲醛室温固定细胞30min，4℃冰箱保存。
(4)细胞免疫荧光检测
对细胞进行通透处理，山羊血清封闭液37℃封闭30min，一抗工作液4℃孵育过夜，二抗工作液(Goat Anti-Rabbit IgG抗体按照1:200，Goat Ant-Mouse IgG FITC抗体按照1:200稀释)在37℃下孵育2h。
(5)衬染
Hochest染液对细胞进行核衬染(被染上的核区可用紫外激发出蓝色荧光)。
(6)拍照
正置荧光显微镜下拍照，在同一视野下用蓝光通道激发目的蛋白的绿色荧光，用紫外激发细胞核区的蓝色荧光，分别拍照。将两张图片组合即为merge图。
(7)处理分析
利用Image-pro Plus(IPP)软件分析细胞在蓝光下激发出绿色荧光的照片中绿色荧光强度，计算单位面积下的荧光强度，用T-Test方法对结果进行统计分析。
(8)试验结果
依本实施例试验步骤处理，得到的不同给药组成的水通道蛋白染色结果如图8所示，荧光强度分析结果如表5所示，丝聚蛋白变化趋势如图9所示。
表5不同给药组成的荧光强度分析结果
Figure BDA0002351716320000171
Figure BDA0002351716320000181
从图8和图9以及表5可以看出，与BC组(空白对照)相比，NC组(阴性对照)的水通道蛋白含量明显降低，说明本实验例设计的处理有效；而与BC组相比，B组(曲酸)的水通道蛋白也有显著降低，但降低幅度小于NC组，说明曲酸对皮肤细胞有一定的刺激，但刺激程度小于十二烷基苯磺酸钠；A组(新琼寡糖组合物)的水通道蛋白表达提升最为显著，C组次之，说明新琼寡糖组合物对于皮肤细胞有显著的促水通道蛋白表达的作用，而与曲酸联用后，不仅消除了曲酸对皮肤水通道蛋白表达的负面影响，而且一定程度上提高了水通道蛋白的表达。
因此，本发明所述新琼寡糖组合物在实验例3中具有显著的促水通道蛋白表达的作用。
其他实施例也具有类似的结果。
综上所述，本发明所述的新琼寡糖组合物不仅能够增强美白增效成分的美白效果，并消除和/或缓解了美白功效成分的不良副作用。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (10)

1.一种具有提高美白功能的新琼寡糖组合物，包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，其中，以新琼寡糖组合物的总重量计，所述新琼二糖的含量为5-30％，所述新琼四糖的含量为20-40％和所述新琼六糖的含量为40-70％。
2.根据权利要求1所述的新琼寡糖组合物，其中，所述新琼二糖的含量为10-30％，优选为10-15％；所述新琼四糖的含量为30-40％，优选为35-40％；以及所述新琼六糖的含量为40-60％，优选为50-60％。
3.一种用于人体护理美白的组合物，其包括权利要求1或2所述的新琼寡糖组合物、美白功效成分、保湿剂和水。
4.根据权利要求3所述的组合物，其中，以重量份计，所述新琼寡糖组合物为2-15份，优选为8-15份，较优选为8-12份；所述美白功效成分为1-8份，优选为3-8份，较优选为5-8份；所述保湿剂为5-20份，优选为10-20份，较优选为10-15份；以及所述水为10-25份，优选为10-24份，较优选为15-24份。
5.根据权利要求3或4所述的组合物，其中，所述美白功效成分选自于烟酰胺、曲酸、熊果提取物、甘草提取物、羟基乙酸、壬二酸和植物黄酮中的一种或两种以上。
6.权利要求3-5任一项所述的组合物的制备方法，其包括下述步骤：
(1)将所述新琼寡糖组合物加入水中得到A相；
(2)将所述美白功效成分加入到保湿剂中得到B相；以及
(3)将所述A相与所述B相混合得到所述的组合物。
7.一种人体护理品组合物，其包含权利要求3-5任一项所述的组合物或者权利要求6所述的制备方法制备得到的组合物和生理学上可接受的辅料。
8.根据权利要求7所述的人体护理品组合物，其中，以人体护理品组合物的总重量计，所述新琼寡糖组合物的含量为0.01-2％，优选为0.01-1.5％，较优选为0.0125-1％。
9.根据权利要求7-8中任一项所述的人体护理品组合物，其中，以人体护理品组合物的总重量计，所述组合物的含量为0.5-20％，优选为6-20％，较优选为8-15％。
10.权利要求1-2任一项所述的新琼寡糖组合物或者权利要求3-5任一项所述的组合物或者权利要求6所述的制备方法所得到的组合物或者权利要求7-9任一项所述的人体护理品组合物在人体护理领域中的应用，优选在提高美白功能的人体护理领域中的应用。
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