CN117122527A - 一种护肤组合物、含护肤组合物的抗衰化妆品及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种护肤组合物、含护肤组合物的抗衰化妆品及其应用，属于化妆品技术领域。本发明通过将玻色因和重组III型人源化胶原蛋白以特定比例复配形成护肤组合物，能够解决现有技术中缺少以XVII型胶原蛋白为靶点并且实现协同护肤效果产品的问题。本发明提供的护肤组合物具有协同修复皮肤XVII型胶原蛋白表达的效果，能够促进XVII型胶原蛋白和弹性蛋白基因的表达，进而维持基底膜的结构稳定，延缓皮肤衰老。将本发明的护肤组合物进一步制备成抗衰化妆品，能促进I型、III型和XVII型胶原蛋白基因的表达，克服UVA照射对胶原蛋白合成的抑制作用，发挥抗衰效果。
Description
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，尤其涉及一种护肤组合物、含护肤组合物的抗衰化妆品及其应用。
背景技术
皮肤中基底膜是真皮与表皮之间的重要连接结构，将表皮基底细胞和位于其下层相连接的组织分隔开，向细胞提供结构支撑，并通过表皮-真皮间细胞因子调节，维持表皮-真皮间的动态平衡。随着年龄增长和紫外线照射可引起皮肤基底膜的重叠与断裂，导致基底膜与表皮、真皮之间的连接、信号传导受到阻碍，可引发多种皮肤问题，甚至皮肤病变。因此，针对基底膜的特性，开发适合作用于基底膜的活性功能成分，是未来延缓皮肤衰老研究的一个重要关注点。
XVII型胶原蛋白是皮肤基底膜的主要成分之一，是表皮锚复合物中的一个重要的跨膜成分。XVII型胶原蛋白作为细胞间质的粘合分子，通过配体与基底膜中的重要成分-层粘连蛋白5和IV型胶原蛋白结合，促进表皮和真皮间的稳固结合。最近研究表明，XVII型胶原蛋白能够促进表皮干细胞竞争，淘汰竞争力弱的老化细胞，从而抵抗皮肤衰老。并且，已经确定XVII型胶原蛋白是控制皮肤表皮细胞分裂的关键分子。因此，XVII型胶原蛋白作为表皮最深层形成的蛋白质，是未来延缓皮肤衰老研究的一个有潜力的靶标分子。
目前尚未见到能够以XVII型胶原蛋白为靶点，实现显著护肤效果的产品。
发明内容
本发明的目的在于提供一种护肤组合物，能够以XVII型胶原蛋白为靶点，实现显著护肤效果。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种护肤组合物，包括玻色因和重组III型人源胶原蛋白，所述护肤组合物中玻色因和重组III型人源胶原蛋白的重量比为1:0.001～0.2。
优选的，所述护肤组合物中玻色因和重组III型人源胶原蛋白的重量比为1:0.004～0.192。
优选的，所述护肤组合物中玻色因的质量百分浓度为0.5％～1.2％。
优选的，所述护肤组合物中重组III型人源胶原蛋白的质量百分浓度为0.002％～0.15％。
本发明还提供了上述护肤组合物在制备皮肤修复产品中的应用。
本发明还提供了上述护护肤组合物在制备皮肤抗衰产品中的应用。
本发明还提供了一种抗衰化妆品，由包含如下质量份数的原料制备得到：
上述护肤组合物5～10份、保湿剂80～150份、柔润剂20～60份、增稠剂20～60份和水500～1000份。
优选的，所述保湿剂选自甘油、海藻糖、生育酚、乙酰壳糖胺、己二醇、双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷和葡聚糖中的一种或几种。
优选的，所述柔润剂选自环五聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷醇和植物甾醇低芥酸菜子油甘油酯类中的一种或几种。
优选的，所述增稠剂选自丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物和烷醇丙烯酸酯交联聚合物中的一种或两种。
本发明的技术效果和优点：
本发明提供的护肤组合物由玻色因和重组III型人源化胶原蛋白以特定比例复配形成，具有协同修复皮肤XVII型胶原蛋白表达的效果，能够促进XVII型胶原蛋白和弹性蛋白基因的表达，进而维持基底膜的结构稳定，延缓皮肤衰老。
本发明提供的抗衰化妆品中包含上述护肤组合物，能促进I型、III型和XVII型胶原蛋白基因的表达，克服UVA照射对胶原蛋白合成的抑制作用，发挥抗衰效果。
附图说明
图1为基因表达量检测结果对比图。
具体实施方式
本发明提供了一种护肤组合物，包括玻色因和重组III型人源胶原蛋白，所述护肤组合物中玻色因和重组III型人源胶原蛋白的重量比为1:0.001～0.2，优选为1:0.004～0.192，进一步优选为1:0.01～0.12；所述护肤组合物中玻色因的质量百分浓度优选为0.5％～1.2％，进一步优选为0.8％～1.0％，本发明所述玻色因优选由玻色因粉剂溶解至溶剂中得到，本发明对所述溶剂的种类没有特殊要求，选用化妆品常用溶剂且不影响玻色因活性即可；所述护肤组合物中重组III型人源胶原蛋白的质量百分浓度优选为0.002％～0.15％，进一步优选为0.01％～0.1％，本发明所述重组III型人源胶原蛋白优选由重组III型人源胶原蛋白粉剂溶解至溶剂中得到，本发明对所述溶剂的种类没有特殊要求，选用化妆品常用溶剂且不影响重组III型人源胶原蛋白活性即可。
本发明还提供了上述护肤组合物在制备皮肤修复产品或皮肤抗衰产品中的应用，所述皮肤修复包括对物理因素、化学因素、皮肤疾病或内环境失调导致的皮肤屏障受损进行修复，所述皮肤抗衰包括对光照、自然衰老等原因导致的皮肤老化进行抵抗；所述皮肤修复产品或皮肤抗衰产品优选为化妆品或日化用品，应用方式为外用；所述皮肤修复产品或皮肤抗衰产品的剂型优选为化妆水、乳液、膏霜、面膜、精华、凝胶等，所述护肤组合物在保湿和/或修护产品中的添加重量比优选为0.1％～10％，进一步优选为0.4％～1.5％；在本发明中，所述皮肤修复产品或皮肤抗衰产品还包括化妆品所能够接受的辅料，所述辅料包括保湿剂、乳化剂、增稠剂、皮肤调理剂、pH调节剂、防腐剂和水等；所述乳化剂优选为月桂酰谷氨酸钠、月桂酰胺丙基甜菜碱、肉豆蔻酸异丙酯或椰油基葡糖苷；所述保湿剂优选为透明质酸钠、甘油、丙二醇、丁二醇、双丙甘醇、山梨醇、肌醇、β-葡聚糖或海藻糖；所述增稠剂优选为EDTA二钠、卡波姆、黄原胶、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物或聚丙烯酸钠接枝淀粉；所述皮肤调理剂优选为辛酰羟肟酸、尿囊素、神经酰胺、烟酰胺、维生素C衍生物、熊果苷、传明酸、酵母/水解酵母；所述pH调节剂优选为精氨酸、柠檬酸钠、柠檬酸、磷酸、酒石酸、磷酸二氢钠、三乙醇胺，所述防腐剂优选为羟苯甲酯、羟苯丁酯、羟苯乙酯、羟苯异丁酯、羟苯丙酯、山梨酸钾、苯甲酸钠，所述防腐剂的添加量符合相关国家标准，且不影响本发明护肤组合物的功效即可。
本发明还提供了一种抗衰化妆品，由包含如下质量份数的原料制备得到：上述护肤组合物5～10份、保湿剂80～150份、柔润剂20～60份、增稠剂20～60份和水500～1000份；在本发明中，所述抗衰化妆品的原料中包括上述护肤组合物5～10份，进一步优选为7～9份，所述抗衰化妆品的原料中包括保湿剂80～150份，进一步优选为90～120份，所述保湿剂优选为甘油、海藻糖、生育酚、乙酰壳糖胺、己二醇、双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷和葡聚糖中的一种或几种；所述抗衰化妆品的原料中包括柔润剂20～60份，进一步优选为30～40份，所述柔润剂优选为环五聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷醇和植物甾醇低芥酸菜子油甘油酯类中的一种或几种；所述抗衰化妆品的原料中包括增稠剂20～60份，进一步优选为40～50份，所述增稠剂优选为丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物和烷醇丙烯酸酯交联聚合物中的一种或两种，所述抗衰化妆品的原料中包括水500～1000份，进一步优选为700～800份；所述抗衰化妆品的原料中还优选包括防腐剂，所述防腐剂优选为羟苯甲酯、羟苯丁酯、羟苯乙酯、羟苯异丁酯、羟苯丙酯、山梨酸钾、苯甲酸钠，所述防腐剂的添加量符合相关国家标准，且不影响本发明抗衰化妆品中护肤组合物的功效即可；所述抗衰化妆品的原料中还优选包括其他具有保湿、修复、抗氧化或抗衰功效的皮肤调理剂，所述皮肤调理剂优选为植物精油、尿囊素、甘草酸二钾和精氨酸等，所述皮肤调理剂并不影响本发明抗衰化妆品中护肤组合物的功效。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例中用到的试剂来源：
细胞培养液：S2Fibroblast Medium Complete Kit中的细胞培养液，购自美国Lifeline Cell Technology公司，货号：LL-0011；
DEME培养液，购自Gibo公司；
玻色因：购自上海克琴科技有限公司；
重组III型人源胶原蛋白：购自南京诺唯赞健康科技有限公司。
实施例1
配制护肤组合物：将玻色因和重组III型人源胶原蛋白混合，玻色因和重组III型人源胶原蛋白的重量比为0.625:0.0025。
实施例2
配制护肤组合物：将玻色因和重组III型人源胶原蛋白混合，玻色因和重组III型人源胶原蛋白的重量比为1:0.12。
实施例3
配制护肤组合物：将玻色因和重组III型人源胶原蛋白混合，玻色因和重组III型人源胶原蛋白的重量比为0.625:0.12。
实施例4
溶解实施例1中的护肤组合物，溶解后护肤组合物中玻色因的质量百分浓度为0.625％，护肤组合物中III型重组人源胶原蛋白的质量百分浓度为0.0025％。
实施例5
用细胞培养液溶解实施例1中的护肤组合物，溶解后护肤组合物中玻色因的质量百分浓度为1％，护肤组合物中III型重组人源胶原蛋白的质量百分浓度为0.12％。
实施例6
用细胞培养液溶解实施例1中的护肤组合物，溶解后护肤组合物中玻色因的质量百分浓度为0.625％，护肤组合物中III型重组人源胶原蛋白的质量百分浓度为0.12％。
实施例7
将实施例1制备的组合物添加到精华液中，精华液的制备方法如下：
称取30g霍霍巴籽油、30g环五聚二甲基硅氧烷、10g环五聚二甲基硅氧烷/聚二甲基硅氧烷醇、7g植物甾醇低芥酸菜子油甘油酯类和1g生育酚分散混合均匀，制得A相；
称取10g海藻糖、1g尿囊素、1g甘草酸二钾、10g聚乙二醇-75、0.2g EDTA二钠、5g鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯/山梨坦橄榄油酸酯、50g甘油、9.1g实施例1制备的护肤组合物、10g乙酰壳糖胺、5g双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷、50g丁二醇、1.7g精氨酸、4g丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物和566g水，在70℃搅拌溶解后，加入A相混合均匀，得到B相；
待B相搅拌溶解完全降温至45℃后，加入195g水、2g丙烯酸(酯)类/C10 30烷醇丙烯酸酯交联聚合物和2g葡聚糖，搅拌混合均匀，搅拌降温至35℃出料，即得精华液，精华液中实施例1制备的护肤组合物质量百分浓度为0.91％。
对比例1
用细胞培养液稀释玻色因至质量百分浓度为0.625％。
对比例2
用细胞培养液稀释III型重组人源胶原蛋白至质量百分浓度为0.0025％。
实验例1qPCR检测
人原代真皮成纤维细胞(购自Cell Technology公司)在37℃、含5％CO2、饱和湿度的培养箱中培养。待细胞生长至80％以上融合后消化接种于12孔板，并继续培养48h用于测试。分别使用细胞培养液(空白组)、实施例4-6和对比例1-2制备的溶液处理细胞24h，弃去上清液，用预冷的磷酸缓冲液(PBS)每孔1mL清洗2次，随即用RNA抽提试剂制备细胞裂解液。集齐裂解液样本后统一提取细胞总RNA，反转录为cDNA后利用实时荧光定量PCR检测17型胶原蛋白(COL17A1)和弹性蛋白(ELN)基因表达水平，所得结果以2-ΔΔCt法进行分析定量，得到各组细胞的基因表达量。PCR测试的引物序列如表1所示：
表1PCR测试引物序列①
所有结果以Mean±SD表示，计量资料差异比较采用unpaired t检验，P<0.05视为差异有统计学意义，结果如下表2和图1所示。
表2基因表达量检测结果
标记“*”的，与空白组相比，差异具有统计学意义，P＜0.05。
结果显示，本发明制备的护肤组合物均能够促进XVII型胶原蛋白和弹性蛋白基因的表达，差异具有统计学意义(P＜0.05)。且实施例1-2的促进XVII型胶原蛋白和弹性蛋白表达的效果显著优于实施例3的效果(P＜0.05)。虽然对比例1制备的组合物能够促进XVII型胶原蛋白基因的表达，但是不具有统计学意义(P＞0.05)，且不能促进弹性蛋白基因的表达。虽然对比例2制备的组合物能够促进XVII型胶原蛋白和弹性蛋白基因的表达，但是均不具有统计学意义(P＞0.05)。
实验例2抗衰效果检测
紫外照射会导致皮肤内产生大量的自由基，进一步诱发基质金属蛋白酶的大量生成，从而促进胶原蛋白的降解，大量胶原降解后导致皮肤出现萎缩皱纹。因此，采用30J/cm2UVA刺激成纤维细胞，通过检测I、III和XVII型胶原蛋白基因表达的变化，评价精华液促进皮肤胶原蛋白合成的效果。
试验分为阴性对照组、模型对照组、阳性对照组和精华液组，每组设置3个重复孔。收集对数生长期的成纤维细胞(批号：Fb19052002，购自广东博溪生物科技有限公司)，按照细胞密度为2×105个/孔接种至6孔板，在培养箱(37℃，5％CO2)中孵育过夜。待6孔板中细胞铺板率达到30％～50％时，进行分组给药。阳性对照组加入100ng/mL的TGF-β1，精华液组加入0.625％的实施例7制备的精华液(取实施例7制备的精华液，用DEME培养液稀释至体积浓度0.625％)，模型对照组和阴性对照组不做任何处理，每孔给药量为2mL。在培养箱(37℃、5％CO2)中孵育24h后，对模型对照组、阳性对照组和实验组组进行30J/cm2的UVA辐照，阴性对照组不做任何处理。在培养箱培养24h后，吸弃旧液，PBS清洗2次，每孔加入1mL RNAisoPlus，吹打裂解细胞后，提取RNA，反转录至cDNA后，进行荧光定量PCR检测，采用2-△△CT方法进行结果计算。结果表示为Mean±SD，各组间比较采用t-test统计分析，P＜0.05认为具有显著差异。I、III和XVII型胶原蛋白基因表达量检测针对的检测基因和所用引物序列如下表3所示：
表3PCR测试引物序列②
实验结果如表4所示。
表4各组基因表达量检测结果
由表4可知，与阴性对照组相比，经UVA照射后，模型对照组的I型、III型和XVII型胶原蛋白的基因表达均显著下调；与模型对照组相比，阳性对照组的I型、III型和XVII型胶原蛋白的基因表达均显著上调，说明模型构建成功，可用于进行功效检测验证。与模型对照组相比，精华液组的I型、III型和XVII型胶原蛋白的基因表达量均显著上调，表明实施例1制备的组合物应用在精华液里能促进I型、III型和XVII型胶原蛋白基因的表达，能够克服UVA照射对胶原蛋白合成的抑制作用，发挥抗衰效果。
由以上实施例可知，本发明提供的护肤组合物均能够促进XVII型胶原蛋白和弹性蛋白基因的表达。进一步制备得到的精华液能够克服UVA照射对胶原蛋白合成的抑制作用，具有显著抗衰功效。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种护肤组合物，其特征在于，包括玻色因和重组III型人源胶原蛋白，所述护肤组合物中玻色因和重组III型人源胶原蛋白的重量比为1:0.001～0.2。
2.根据权利要求1所述的护肤组合物，其特征在于，所述护肤组合物中玻色因和重组III型人源胶原蛋白的重量比为1:0.004～0.192。
3.根据权利要求1或2所述的护肤组合物，其特征在于，所述护肤组合物中玻色因的质量百分浓度为0.5％～1.2％。
4.根据权利要求1或2所述的护肤组合物，其特征在于，所述护肤组合物中重组III型人源胶原蛋白的质量百分浓度为0.002％～0.15％。
5.权利要求1～4任一项所述的护肤组合物在制备皮肤修复产品中的应用。
6.权利要求1～4任一项所述的护肤组合物在制备皮肤抗衰产品中的应用。
7.一种抗衰化妆品，其特征在于，由包含如下质量份数的原料制备得到：
权利要求1～4任一项所述的护肤组合物5～10份、保湿剂80～150份、柔润剂20～60份、增稠剂20～60份和水500～1000份。
8.根据权利要求7所述的抗衰化妆品，其特征在于，所述保湿剂选自甘油、海藻糖、生育酚、乙酰壳糖胺、己二醇、双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷和葡聚糖中的一种或几种。
9.根据权利要求7所述的抗衰化妆品，其特征在于，所述柔润剂选自环五聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷醇和植物甾醇低芥酸菜子油甘油酯类中的一种或几种。
10.根据权利要求7所述的抗衰化妆品，其特征在于，所述增稠剂选自丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物和烷醇丙烯酸酯交联聚合物中的一种或两种。
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