CN114948788B - 一种舒缓修护三重蛋白组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种舒缓修护三重蛋白组合物及其应用，涉及化妆品技术领域。该舒缓修护三重蛋白组合物，按质量百分数计，包含以下组份：重组Ⅲ型胶原蛋白80～99.5％；纤连蛋白0.35～10％；类贻贝粘蛋白0.15～10％。本发明还提供了舒缓修护三重蛋白组合物在具有舒缓修护功效的化妆品中的应用。本发明摒弃多样结构的胶原蛋白，使用起主要修复作用的Ⅲ型胶原蛋白，将Ⅲ型胶原蛋白、纤连蛋白和类贻贝粘蛋白进行复配，三者协同配合，应用在化妆品中，不仅降低了三重蛋白的添加量，且能达到增强舒缓修护的功效，节约成本，产生一定的经济效益。

Description

一种舒缓修护三重蛋白组合物及其应用
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，尤其涉及一种舒缓修护三重蛋白组合物及其应用。
背景技术
近年来受敏感肌困扰的人越来越多，敏感性皮肤的耐受性差，处于脆弱状态，盲目使用护肤品易爆发过敏反应，造成皮肤屏障损害，进而引发皮肤免疫炎症反应。因而必须修复受损的皮肤屏障，同时减少皮肤炎症细胞因子的释放。
目前，在化妆品领域修复皮肤屏障的手段主要是通过加入外源性的补充保湿因子、添加结构性脂质；而对于皮肤免疫炎症反应，主要是通过抑制早期炎症因子的释放，避免引起炎症因子mRNA的表达和炎症细胞的浸润。市面上舒缓修复类化妆品主要分为两种，一种是以天然植物油和中草药为活性物质修复肌肤，一种是以生物相容性原料作为活性物质修复肌肤。天然植物油和中草药的成分物质复杂，甚至会存在一些致敏成分，存在一定的安全隐患。
对于生物相容性原料，如透明质酸和胶原蛋白。有研究表明，使用透明质酸后形成的大分子聚合物透明质酸钠为主的保护膜，能够抵御外界不良环境、细菌、致敏源的伤害，保持局部湿润环境、保护微创面，减轻炎性反应，促进恢复皮肤屏障功能，提高皮肤的耐受性，但目前的文献资料显示，实现透明质酸钠舒缓修复作用的起效浓度较大，成本较高。有学者研究发现，真皮内的透明质酸为胶原蛋白和弹性纤维提供了空间及营养，是维持皮肤组织稳定、融合、弹性的重要细胞外基质，具有抗炎作用，可以调控胶原蛋白的合成，促进创伤愈合，为敏感性皮肤屏障的修复和创面愈合提供一个有利于修复环境，但通过添加透明质酸钠为胶原蛋白和弹性纤维提供营养，还存在有效利用率的问题。
胶原蛋白作为一种生物材料，具有生物相容性、生物活性和低免疫原性，非常适用于组织工程和再生医学，近几年在化妆品中的应用也逐渐增多。胶原蛋白是细胞外基质的主要组成成分，作为人体的内源性物质，生物相容性良好, 常用作伤口止血敷料、促进皮肤的愈合与再生，已广泛应用于医药、化妆品行业中。
目前使用的胶原蛋白大多来自动物提取，不仅存在一定的病毒隐患，而且其亲水性和生物相容性也不好。其次，胶原蛋白结构多种，功能不一，应用在化妆品领域未进行有效区分，使得修复没有针对性，降低修复效率，延长修复时间。此类化妆品，要么使用单一的胶原蛋白作为活性物质，用量大，成本高；要么将胶原蛋白添加在全配方中，含有过多的原料容易给皮肤带来的二次受损。因而不能有效针对皮肤受损早期的炎症因子及后续的免疫反应进行及时修复。
发明内容
本发明针对背景技术中提到的不足提供一种具有舒缓修护作用的三重蛋白组合物及其在具有舒缓修护功效的化妆品中的应用。
具体地，本发明提出以下技术方案：
一方面，本发明提供一种舒缓修护三重蛋白组合物，按质量百分数计，包含以下组份：
重组Ⅲ型胶原蛋白80～99.5％；纤连蛋白0.3～10％；类贻贝粘蛋白0.15～10％。
进一步的，所述重组Ⅲ型胶原蛋白、纤连蛋白、类贻贝粘蛋白均是通过微生物发酵法获得；具体地，是利用基因重组技术，通过微生物发酵法获得重组Ⅲ型胶原蛋白、纤连蛋白以及类贻贝粘蛋白。
进一步的，所述重组Ⅲ型胶原蛋白：纤连蛋白：类贻贝粘蛋白的质量比为10～500：0.1～3：1，优选200～500：0.15～2：1。
胶原蛋白能够吸附和支持上皮细胞，促进细胞的增殖，诱导细胞因子产生，从而修复受损的组织。此外，由于胶原蛋白与人皮肤胶原的结构相似，相容性好，可以扩散到皮肤的深层，对人的皮肤有很好的营养作用，且胶原蛋白分子外侧存在大量的羧基和羟基，同时存在大量的甘氨酸等天然保湿因子，能提高组织细胞的贮水能力，使皮肤保湿。
纤连蛋白是一种粘附性的高分子糖蛋白，作为细胞活动过程的调节因子，参与了细胞的迁移、黏附、增殖、止血及组织修复，具有生长因子的作用，可促进细胞增殖，促进表皮下基底膜的再建和正常角化。纤连蛋白的细胞间粘附作用使其在伤口愈合中发挥重要作用，主要是通过沉积在受损胶原蛋白和纤维蛋白上，增强血小板附着、吞噬细胞和成纤维细胞迁移以及细胞增殖。此外，纤连蛋白还能促进皮肤正常的生理代谢。
本发明所选用的类贻贝粘蛋白具有和天然提取的贻贝粘蛋白相同的氨基酸序列，具有良好的生物相容性、有效性以及安全性，类贻贝粘蛋白具有高强度、高韧性和高防水性,它最重要和独特的特点是含有非常丰富的3,4-二羟基苯丙氨酸(DOPA，多巴),主要是因为DOPA中带有的邻苯二酚官能团，赋予其粘附多样性和化学多功能性，以及持续抗氧化活性。此外，类贻贝粘蛋白含有疏水基团，可实现隔水附着，因此具有创面保护、镇痛止痒和促进愈合的疗效。
另一方面，本发明还提供所述的舒缓修护三重蛋白组合物在具有舒缓修护功效的化妆品中的应用。
进一步的，在具有舒缓修护功效的化妆品中，按质量百分数计，所述舒缓修护三重蛋白组合物在化妆品中的添加量为0.005～0.15％。
进一步的，在具有舒缓修护功效的化妆品中，按质量百分数计，所述舒缓修护三重蛋白组合物在化妆品中的添加量为0.01～0.08％。
再一方面，本发明提供一种含有所述的舒缓修护三重蛋白组合物的水剂型化妆品，按质量百分比计，包括：舒缓修护三重蛋白组合物0.005～0.15％，保湿剂3～10.0％，皮肤调理剂0.5～8％，pH调节剂0～0.2％，防腐剂0.1％～1.0％，余量为水。
进一步的，所述保湿剂为甘油、丙二醇、1，3-丙二醇、丁二醇、1,2-戊二醇、异戊二醇、双丙甘醇、聚甘油-10、甘油聚醚-26、甲基丙二醇、1，2-己二醇、乙基己基甘油、辛甘醇中的一种或一种以上以任意比例混合；
所述皮肤调理剂为泛醇、芦荟提取物、马齿苋提取物、银耳子实体提取物、红没药醇、依克多因、羟苯基丙酰胺苯甲酸、4-叔丁基环己醇、卡瓦胡椒提取物、甘油葡糖苷、锁水磁石、木糖醇、普鲁兰多糖、海藻糖、PCA钠、乳酸铵、甜菜碱中的一种或一种以上以任意比例混合；
所述pH调节剂为柠檬酸、乳酸、柠檬酸钠、柠檬酸钾中的一种或两种；
所述防腐剂为苯氧乙醇、辛酰羟肟酸中的一种或两种；
所述三重蛋白组合物的添加量优选0.01～0.08％；
所述保湿剂的添加量优选2～8％；
所述皮肤调理剂添加量优选0.5～5％。
又一方面，本发明还提供所述的水剂型化妆品的制备方法，包括如下步骤：
(1)将水加入搅拌锅中，将配方量皮肤调理剂加入，搅拌均匀；
(2)再将重组Ⅲ型胶原蛋白加入，搅拌均匀后，再加入配方量纤连蛋白，搅拌至料体混合均匀，温度控制在40～45℃；
(3)预先将保湿剂与类贻贝粘蛋白搅拌分散均匀，得预混液，将该预混液边搅拌边加入步骤(2)所得料液中，搅拌速度200～300r/min，搅拌10～25min；
(4)加入配方量防腐剂和pH调节剂，搅拌10～25min，过滤即得含有权利要求7所述的舒缓修护三重蛋白组合物的水剂型化妆品。
可以理解的是，本发明提供的水剂型化妆品，可以是面部护理液、面膜液、精华等水剂型化妆品。
发明人在实验中发现，所述舒缓修护三重蛋白组合物若同时加入溶液中，存在溶解非常缓慢的问题，溶解时间达2h以上，这是因为不同蛋白之间的亲、疏水性和溶解度有一定差异，在溶液环境下，舒缓修护三重蛋白组合物中亲水性好、溶解度高的蛋白先溶解、而与其竞争溶解的其他蛋白得不到及时溶解，再加之在溶液体系下几种蛋白的相互间氢键作用，导致舒缓修护三重蛋白组合物在溶液中的溶解时间非常长，延长了产品制备时间，增加能耗，生产效率低；因此，本发明通过调整三重蛋白组合物的添加顺序，降低蛋白之间在溶解过程中的溶解竞争和氢键结合，加速其溶解，搅拌溶解时间可缩短至5～10min，提高了生产效率；另一方面，由于类贻贝粘蛋白携带大量正电荷，采用将类贻贝粘蛋白预先分散再加入体系中的方式，使得类贻贝粘蛋白的电荷集中情况得以分散，有效避免了其与溶液中带负电荷的组分如皮肤调理剂的瞬间结合团聚，在降低溶解时间的同时避免了体系团聚，提高体系稳定性。
又再一方面，本发明提供含有所述舒缓修护三重蛋白组合物的乳霜剂化妆品，其特征在于，按质量百分比计，包括：舒缓修护三重蛋白组合物0.005～0.15％，保湿剂0.5～15.0％，皮肤调理剂0.5～7％，油脂3～10％，乳化剂0～4％，增稠剂 0.1％～0.5％，pH调节剂0.01～0.4％，防腐剂0.2％～0.5％，余量为水；
所述舒缓修护三重蛋白组合物的添加量优选0.01～0.08％；
所述保湿剂的添加量优选2～8％；
所述皮肤调理剂添加量优选0.5～5％；
所述皮肤调理剂为泛醇、芦荟提取物、马齿苋提取物、银耳子实体提取物、红没药醇、依克多因、羟苯基丙酰胺苯甲酸、4-叔丁基环己醇、卡瓦胡椒提取物、甘油葡糖苷、锁水磁石、木糖醇、普鲁兰多糖、海藻糖、PCA钠、乳酸铵、甜菜碱中的一种或一种以上以任意比例混合；
所述保湿剂为甘油、丙二醇、1，3-丙二醇、丁二醇、1,2-戊二醇、异戊二醇、双丙甘醇、聚甘油-10、甘油聚醚-26、甲基丙二醇、1，2-己二醇、乙基己基甘油、辛甘醇中的一种或一种以上以任意比例混合；
所述油脂为辛酸/癸酸甘油三酯、角鲨烷、霍霍巴籽油、澳洲坚果籽油、白池花籽油、月见草油、异十六烷、聚二甲基硅氧烷、鲸蜡基-PG羟乙基棕榈酰胺中的两种或两种以上以任意比例混合；
所述乳化剂为鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯、山梨坦橄榄油酸酯、鲸蜡硬酯醇、鲸蜡硬脂基葡糖苷、C12-20烷基葡糖苷、C14-22醇、花生醇、山嵛醇、蔗糖多硬脂酸酯、鲸蜡醇棕榈酸酯、聚甘油-10五硬脂酸酯、硬脂酰乳酰乳酸钠等中的两种或两种以上；
所述增稠剂为聚丙烯酸酯交联聚合物-6、丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物或聚丙烯酰基二甲基牛磺酸铵、黄原胶、水解小核菌胶、卡波姆中的一种或两种；
所述pH调节剂为氢氧化钠、氢氧化钾、精氨酸、碳酸氢钠、三乙醇胺或氨丁三醇中的一种；
所述防腐剂为苯氧乙醇、辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮中的一种或两种以任意比例混合；
所述油脂至少包含鲸蜡基-PG羟乙基棕榈酰胺。
进一步地，不添加乳化剂时，所述油脂的添加量为1～5％，所述油脂和增稠剂的质量比为1:1～30:1，优选3:1～20:1。
又一方面，本发明还提供一种所述的乳霜剂型化妆品的制备方法，包括如下步骤：
(1)将部分保湿剂和部分增稠剂混合均匀备用；用剩余保湿剂预先分散类贻贝粘蛋白；
(2)将配方量水加入搅拌锅中，加热搅拌至80～85℃，把步骤(1)所得物料加入，搅拌均匀，之后边搅拌边加入剩余增稠剂，搅拌至完全溶解；
(3)将0-1/3乳化剂与鲸蜡基-PG羟乙基棕榈酰胺混合并加热至80～85℃后，加入步骤(2)所得物料，进行第一次均质乳化，均质速度1300～1500r/min，均质3～5min，降温至75～80℃；
(4)将剩余乳化剂与剩余油脂混合并加热至75～80℃后，加入(3)所得物料中，进行第二次均质乳化，设置均质速度1000～1200r/min，均质2～4min，加入预先溶解的pH调节剂，均质至料体混合均匀；
需要说明的是，若化妆品配方体系无乳化剂时，在步骤(2)溶解完全后即添加pH调节剂。
(5)降温至50～55℃，加入预分散的类贻贝粘蛋白，进行第三次均质，设置均质速度1000～1200r/min，均质1～2min；
(6)降温至40～45℃，在步骤(5)所得物料中加入皮肤调理剂、预先溶解的重组Ⅲ型胶原蛋白和纤连蛋白、防腐剂，搅拌混合均匀后，即得含所述舒缓修护三重蛋白组合物的乳霜剂化妆品。
需要说明的是，将鲸蜡基-PG羟乙基棕榈酰胺与其他油酯分开乳化，一方面是因为其对温度的要求比较高，温度较低会发生明显的析出现象；另一方面，分开乳化的方式也避免了与所有油脂混合后，部分鲸蜡基-PG羟乙基棕榈酰胺未及时被均质，导致析出，从而保证最终产品品质。
与现有技术相比，本发明所能达到的技术效果包括：
本发明提供的舒缓修护三重蛋白组合物，摒弃多样结构的胶原蛋白，使用起主要修复作用的Ⅲ型胶原蛋白，另一方面，本发明采用的Ⅲ型胶原蛋白、纤连蛋白和类贻贝粘蛋白均为微生物发酵法获得的重组蛋白，不仅解决了传统提取方法中动物来源存在的病毒隐患，同时也提高了蛋白的亲水性和生物相容性，减轻皮肤负担。
本发明将Ⅲ型胶原蛋白、纤连蛋白和类贻贝粘蛋白进行科学复配，一方面通过外源性补充Ⅲ型胶原蛋白和纤连蛋白，使其共同沉积在细胞间质中，加快修复过程；另一方面，引入类贻贝粘蛋白，不仅可补充营养物质，镇痛、止痒，类贻贝粘蛋白极强的粘附特性也促进了其他两种蛋白在细胞间质中的沉积，促进细胞迁移和增殖，同时其可在皮肤表面形成防水透气膜，阻止了其他物质如细菌、灰尘进入皮肤，抵御外界对皮肤的损伤，三者协同配合，抑制炎症因子的表达，达到协同增强舒缓修护的目的；第三方面，本发明通过Ⅲ型胶原蛋白、纤连蛋白和类贻贝粘蛋白的科学配比，将该组合物应用在化妆品中，产品稳定性优异，且较单独使用上述蛋白具有更为显著的舒缓修护效果，三种蛋白在发挥各自功效的同时，促进了整体组合物尤其是该组合物应用在化妆品中的舒缓修护功效；三重蛋白组合物的少量添加即可实现比常规舒缓原料大量添加更好的舒缓功效，添加量少且效果显著，节约成本，产生一定的经济效益。
本发明提供的含有舒缓修护三重蛋白组合物的化妆品，以三重蛋白组合物起主要修护功效，三种蛋白可同步作用达到皮肤修复和皮肤隔离的目的，解决现有化妆品使用全配方才能达到修复效果的问题，不需要额外添加其他舒缓修护类成分，降低全配方中过多原料对皮肤造成的额外负担和危害。
附图说明
图1为本发明实验二的舒缓修护三重蛋白组合物的斑马鱼修护测试结果。
图2为本发明实验三的舒缓修护三重蛋白组合物细胞划痕实验结果。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，以下将描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
需要说明的是，本发明所采用的重组III型胶原蛋白对来源不做特殊限定，可以是基因重组的重组人源化III型胶原蛋白，也可以是基因重组的III型类人胶原蛋白。
斑马鱼舒缓、修护测试实验过程：
根据标准《化妆品舒缓功效评价斑马鱼幼鱼中性粒细胞抑制法》中的检测方法，以下斑马鱼测试结果由第三方检测完成。
体系及样本量：试验体系：野生型AB品系斑马鱼，修护斑马鱼鱼龄：受精后3天；舒缓斑马鱼鱼龄：受精后2天，每组实验样本量15尾，有效数10尾。成鱼饲养及繁殖方法：按照第三方实验室标准饲养和繁殖方法，符合国际 AAALAC认证(认证编号：001458)的要求。
样品制备：分别称取各实施例及对比例中的组合物0.05g和0.025g，用标准稀释水定容到10ml，制备浓度为0.5％和0.25％的受试组合物样品，进行斑马鱼舒缓、修护测试。
斑马鱼舒缓测试方法：将受测试斑马鱼分成三组，分别是正常组、模型组和供试品组。正常组不做处理，模型组仅用SLS处理，供试品组在用SLS的同时添加受试组合物。孵育一段时间后，将斑马鱼整体放到荧光显微镜下拍照，统计皮肤表面中性粒细胞数量。
斑马鱼修护测试方法：将斑马鱼分成三组，分别是正常组、模型组和供试品组。正常组不做处理，模型组和供试品组均采用手术方法定量切断尾鳍，从而完成造模处理，供试品组中添加制备好的受试组合物。避光孵育一段时间后，将各组斑马鱼在体视显微镜下拍照并保存图片，用高级图像分析软件对斑马鱼尾鳍面积进行定量分析。
实验一、重组Ⅲ型胶原蛋白的修护效果测试
实施例1：称取微生物发酵来源的重组人源化Ⅲ型胶原蛋白0.05g，用标准稀释水定容到10ml，制备浓度为0.5％的胶原蛋白溶液样品，进行斑马鱼舒缓、修护测试。对比例1：称取商品化的Ⅰ型胶原蛋白0.05g，用标准稀释水定容到 10ml，制备浓度为0.5％的胶原蛋白溶液样品，进行斑马鱼舒缓、修护测试。
实验结果见表1、表2。
表1重组人源化Ⅲ型胶原蛋白与商品化的Ⅰ胶原蛋白的舒缓测试结果
评价指标(mean) 正常组 模型组 实施例1 对比例1
斑马鱼中性粒细胞数量(个) 30 67.7 49.2 55.4
SE 1.03 2.01 2.60 3.31
舒缓功效(％) / / 32 22
p <0.001 <0.001 <0.001 <0.01
表2重组人源化Ⅲ型胶原蛋白与商品化的Ⅰ胶原蛋白的修护测试结果
评价指标(mean) 正常组 模型组 实施例1 对比例1
斑马鱼尾鳍面积(像素) 72581 35749 42747 39432
SE 875 715 635 890
修护功效(％) / / 19 10
P <0.001 <0.001 <0.001 <0.001
表1和表2的结果可知，本发明选用的重组人源化Ⅲ型胶原蛋白的舒缓、修护功效分别为32％和19％，是使用商品化的I型胶原蛋白的1.45倍和1.9倍，其功效显著大于商品化的I型胶原蛋白。这说明，使用重组人源化Ⅲ型胶原蛋白可针对性的修护皮肤，能增加舒缓、修护功效。
实验二、舒缓修护三重蛋白组合物的协同舒缓修护效果测试
按表3所示的用量进行配制，称取蛋白组合物0.05g(商品名：Bio-Tripro TM)，用标准稀释水定容到10ml，制备浓度为0.5％的蛋白组合物溶液样品，进行斑马鱼舒缓、修护测试。
本实验中实施例1-6、对比例1-4的舒缓测试结果见表4、表5，修护测试结果见表6、表7及图1。
表3不同实施例及对比例的组成(wt％)
表4实施例1-6的斑马鱼舒缓测试结果
表5对比例1-4的斑马鱼舒缓测试结果
表6实施例1-6的斑马鱼修护测试结果
表7对比例1-4的斑马鱼修护测试结果
从图1的结果中可以看到，实施例组的斑马鱼尾鳍面积与模型对照组相比，明显增加，而对比例组的斑马鱼尾鳍面积与模型对照组相比，变化较小，表明修护功效不明显。
从表4～表5的结果可以看到，实施例的中性粒细胞数量与模型组相比，均明显减少，表明实施例中的三重蛋白组合物具有明显的舒缓功效，其中实施例1 和实施例3的舒缓效果较好，其舒缓功效分别是60％和55％，而对比例1、对比例2的舒缓功效分别为29％、32％，比实施例1的舒缓功效降低50％左右；在修护效果方面，本发明提供的舒缓修护三重蛋白组合物，修护效果可达30％以上，相当于对比例组修护效果的2倍。综合图1及表4～表7，说明本发明通过对舒缓修护三重蛋白组合物中三种蛋白及其含量的筛选，三重蛋白组合物的舒缓、修护功效明显，当三重蛋白组合物中的一种或两种蛋白的含量、或者三重蛋白组合物中三种蛋白的比例发生变化时，其舒缓修护功效会受到明显影响、甚至降低，这进一步说明了，采用本发明提供的三种蛋白、其含量范围及优选比例，实现了不同种蛋白间舒缓、修护的功效协同，三重蛋白组合物具有显著的舒缓修护效果。
另一方面，发明人还验证了本发明技术方案与马齿苋提取物或红没药醇的舒缓作用对比，从表4和表5中的数据可以看出，采用本发明提供的舒缓修护三重蛋白组合物，其舒缓效果明显好于已明确具有舒缓作用的马齿苋提取物或红没药醇，舒缓、修护的效果相当于其2倍甚至以上，这进一步说明了本发明技术方案提供的舒缓修护三重蛋白组合物具有优异的舒缓协同增效作用。
实验三、舒缓修护三重蛋白组合物的细胞划痕实验
实验方法：
细胞培养：使用含15％FBS的DMEM培养基培养HFF-1细胞密度达到80％时，进行消化并计数。铺板：收集对数生长期，按照细胞密度为2×10^5细胞数接入6孔板中，每孔含培养液2mL。在培养箱(37℃，5％CO2)中培养24h后更换含1％FBS培养基培养24h，使细胞同步化。
划线：使用1000μL枪头进行划线，除去培养基并在板背面标记画线，随后用PBS冲洗三遍。加样：样品组下表中不同比例的样品以相同稀释浓度加入 6孔板中，同时加入空白对照、阳性对照，每孔2mL。
分析计算：在显微镜下拍照记录(0h)，稀释液为含1％FBS培养基，在培养箱(37℃，5％CO2)中继续培养24h、48h、72h后，于倒置显微镜下观察划痕区细胞的愈合情况并照相记录，使用Image-Pro Plus 6.0计算划痕区面积的平均值，计算细胞迁移率(表8)。
实验结果见图2和表8。
表8细胞迁移率实验结果
24h 48h 72h
空白对照 7.7 13.06 15.81
实施例1 12.96 19.26 22.19
实施例2 14.56 20.62 24.32
实施例3 16.98 25.53 28.63
实施例4 12.95 19.64 23.25
实施例5 17.83 24.85 29.13
实施例6 13.17 19.47 22.61
对比例1 9.92 14.48 17.08
对比例2 9.36 14.36 17.38
对比例3 9.27 14.88 16.27
由图2及表8可知，实施例组的细胞迁移速率均极显著增加(P＜0.05，具有统计学意义)，说明本发明提供的舒缓修护三重蛋白组合物具有优异的组织修复能力，而对比例组的促进细胞迁移的作用十分微弱，几乎与空白对照组相当(P＞0.05，不具有统计学意义)。
实验四、本发明提供的舒缓修护三重蛋白组合物应用在不同剂型(水剂/乳霜膏剂)的化妆品中的舒缓修护功效
按照下表9所示，配制含有舒缓修护三重蛋白组合物的水剂/乳膏剂。
表9不同实施例和对比例的全配方中各组分所占比例(wt％)
本实验的各实施例的制备方法如下：
实施例1：
(1)按上表称取三重蛋白组合物(商品名：Bio-Tripro TM)及其他原料；
(2)将配方量皮肤调理剂(PCA钠0.5g)加入去离子水中，400rpm搅拌 10min至均匀；再将三重蛋白修复组合物中的重组人源化Ⅲ型胶原蛋白加入，搅拌均匀后，再加入配方量纤连蛋白，搅拌至料体混合均匀，温度控制在40-45℃；
(3)预先将配方量保湿剂(甘油3.0g)与贻贝粘蛋白搅拌分散均匀，边搅拌边加入步骤(2)所得中，设置搅拌速度200r/min，搅拌10使料体混合均匀；
(4)加入配方量防腐剂(苯氧乙醇/乙基己基甘油0.3g)，余量纯化水，保持搅拌速度不变，搅拌10min后，过滤即得舒缓修护的三重蛋白面部护理喷雾。
实施例2：
(1)按上表称取三重蛋白组合物(商品名：Bio-Tripro TM)及其他原料；
(2)将配方量皮肤调理剂(透明质酸钠0.1g，甜菜碱2.0g，海藻糖0.6g) 加入去离子水中，600rpm搅拌10min至均匀；再将三重蛋白修复组合物中的重组人源化Ⅲ型胶原蛋白加入，搅拌均匀后，再加入配方量纤连蛋白，搅拌至料体混合均匀，温度控制在40～45℃；
(3)预先将配方量保湿剂(丁二醇3g、双丙甘醇3g)与贻贝粘蛋白搅拌分散均匀，边搅拌边加入步骤(2)所得中，设置搅拌速度300r/min，搅拌15min 使料体混合均匀；
(4)加入配方量防腐剂(苯氧乙醇/乙基己基甘油)、pH调节剂(乳酸0.001g) 保持搅拌速度不变，搅拌10～15min后，余量纯化水，过滤即得舒缓修护的三重蛋白面部护理水。
实施例3：
(1)按上表称取三重蛋白组合物(商品名：NovTripro TM)及其他原料；
(2)将1/4保湿剂(1,2-戊二醇2g，甘油6g)和1/4增稠剂(丙烯酸(酯) 类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.3g，黄原胶0.05g，)混合均匀备用；用剩余保湿剂预先分散配方量类贻贝粘蛋白；
(3)将去离子水加入搅拌锅中，加热搅拌至80～85℃，把步骤(2)所分散的增稠剂加入搅拌锅中，边搅拌边加入剩余增稠剂，搅拌30～60min至完全溶解，加入预先溶解的pH调节剂(精氨酸0.25g)；
(4)将鲸蜡基-PG羟乙基棕榈酰胺0.5g加热至85℃后，加入步骤(3)所得物料，进行第一步均质乳化，设置均质速度为1300rpm，均质5min至料体均一细腻，降温至75℃；
(5)将辛酸/癸酸甘油三酯3.5g加热至75℃后，加入(4)所得物料中，进行第二步均质乳化，设置均质速度1200r/min，均质2min至料体均匀细腻；
(6)降温50℃，加入步骤(2)预分散的类贻贝粘蛋白，进行第三次均质，设置均质速度1000r/min，均质2min。
(7)降温40℃，在步骤(6)所得物料中加入皮肤调理剂(依克多因0.5g，红没药醇0.3g，泛醇4.37g，锁水磁石0.5g)，预先溶解的人源化重组Ⅲ型胶原蛋白和纤连蛋白，防腐剂(1,2-己二醇/丁二醇/辛酰羟肟酸0.5g)，余量纯化水，搅拌20min混合均匀后，即得舒缓修护三重蛋白面部护理乳。
本实施例中，在步骤(3)预先加pH调节剂能够中和后使聚合物的分子链完全展开，以便在后面的均质过程中，油酯能更好的被聚合物中的疏水结构包裹，形成更加稳定的体系。
实施例4：
(1)按上表称取三重蛋白组合物(商品名：BioTripro TM)及其他原料；
(2)将1/2保湿剂(丁二醇6g，1,2-戊二醇2g)和1/4增稠剂(小核菌胶 0.1g，丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.3g)混合均匀备用；用剩余保湿剂预先分散配方量类贻贝粘蛋白；
(3)将去离子水加入搅拌锅中，加热搅拌至80～85℃，把步骤(2)所分散的增稠剂加入搅拌锅中，边搅拌边加入剩余增稠剂，搅拌30～60min至完全溶解，加入预先溶解的pH调节剂(氨丁三醇0.3g)；
(4)将1/3乳化剂(鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯/山梨坦橄榄油酸酯1g)与鲸蜡基-PG羟乙基棕榈酰胺(1g)混合并加热至80～85℃后，加热至85℃后，加入步骤(3)所得物料，进行第一步均质乳化，设置均质速度为1500rpm，均质5min 至料体均一细腻，降温至75℃；
(5)将剩余乳化剂与剩余油脂(角鲨烷3g，聚二甲基硅氧烷1g)混合加热至75℃后，加入(4)所得物料中，进行第二步均质乳化，设置均质速度1200r/min，均质2min至料体均匀细腻；
(6)降温50℃，加入步骤(2)预分散的类贻贝粘蛋白，进行第三次均质，设置均质速度1000r/min，均质2min。
(7)降温40℃，在步骤(6)所得物料中加入皮肤调理剂(透明质酸钠0.2g，依克多因0.5g，甘油葡糖苷3g，红没药醇0.2g，4-叔丁基环己醇1.0g，甜菜碱 2.1g)，预先溶解的人源化重组Ⅲ型胶原蛋白和纤连蛋白，防腐剂(苯氧乙醇/ 乙基己基甘油0.5g)，余量纯化水，搅拌20min混合均匀后，即得舒缓修护三重蛋白面部护理霜。
实施例5：
(1)按上表称取三重蛋白组合物(商品名：Bio-Tripro TM)及其他原料；
(2)将1/2保湿剂(甘油6g，丁二醇4g)和1/4增稠剂(丙烯酸(酯)类 /C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.35g，卡波姆0.15g)混合均匀备用；用剩余保湿剂预先分散配方量类贻贝粘蛋白；
(3)将去离子水加入搅拌锅中，加热搅拌至80～85℃，把步骤(2)所分散的增稠剂加入搅拌锅中，边搅拌边加入剩余增稠剂，搅拌30～60min至完全溶解，加入预先溶解的pH调节剂(三乙醇胺0.35g)；
(4)将1/3乳化剂(蔗糖多硬脂酸酯/鲸蜡醇棕榈酸酯2g)与鲸蜡基-PG羟乙基棕榈酰胺2g混合并加热至80～85℃后，加热至85℃后，加入步骤(3)所得物料，进行第一步均质乳化，设置均质速度为1500rpm，均质5min至料体均一细腻，降温至75℃；
(5)将剩余乳化剂与剩余油脂(白池花籽油1g，聚二甲基硅氧烷2g，霍霍巴籽油3g，乳木果油4g)混合加热至75℃后，加入(4)所得物料中，进行第二步均质乳化，设置均质速度1200r/min，均质2min至料体均匀细腻；
(6)降温50℃，加入预分散的类贻贝粘蛋白，进行第三次均质，设置均质速度1000r/min，均质2min。
(7)降温40℃，在步骤(6)所得物料中加入皮肤调理剂(泛醇3.5g，锁水磁石0.5g))，预先溶解的人源化重组Ⅲ型胶原蛋白和纤连蛋白，防腐剂(苯氧乙醇/乙基己基甘油0.5g)，余量纯化水，搅拌20min混合均匀后，即得舒缓修护三重蛋白面部护理膏。
对比例1：
(1)按上表称取物料；
(2)将配方量皮肤调理剂(PCA钠0.5g)加入去离子水中，600rpm搅拌 10min至均匀；再将三重蛋白修复组合物中的重组人源化Ⅲ型胶原蛋白加入，搅拌均匀后，再加入配方量纤连蛋白，搅拌至料体混合均匀，温度控制在40～45℃；
(3)预先将配方量保湿剂(甘油3g)与贻贝粘蛋白搅拌分散均匀，边搅拌边加入步骤(2)所得中，设置搅拌速度300r/min，搅拌15min使料体混合均匀；
(4)加入配方量防腐剂(苯氧乙醇/乙基己基甘油0.3g)，保持搅拌速度不变，搅拌10～15min后，余量纯化水，过滤即得舒缓修护的三重蛋白面部护理喷雾。
对比例2：
(1)按上表称取物料；
(2)将1/2保湿剂(1,2-戊二醇2g，甘油6g)和1/4增稠剂(丙烯酸(酯) 类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.3g，黄原胶0.05g)混合均匀备用；用剩余保湿剂预先分散配方量的类贻贝粘蛋白；
(3)将去离子水加入搅拌锅中，加热搅拌至80～85℃，把步骤(2)所分散的增稠剂加入搅拌锅中，边搅拌边加入剩余增稠剂，搅拌30～60min至完全溶解，加入预先溶解的pH调节剂(精氨酸0.25g)；
(4)将鲸蜡基-PG羟乙基棕榈酰胺(0.5g)混合并加热至80～85℃后，加热至85℃后，加入步骤(3)所得物料，进行第一步均质乳化，设置均质速度为 1500rpm，均质5min至料体均一细腻，降温至75℃；
(5)将辛酸/癸酸甘油三酯3.5g混合加热至75℃后，加入(4)所得物料中，进行第二步均质乳化，设置均质速度1200r/min，均质2min至料体均匀细腻；
(6)降温50℃，加入步骤(2)预分散的类贻贝粘蛋白，进行第三次均质，设置均质速度1000r/min，均质2min。
(7)降温40℃，在步骤(6)所得物料中加入皮肤调理剂(依克多因0.5g，红没药醇0.3g，泛醇4.2g，锁水磁石2g)，预先溶解的人源化重组Ⅲ型胶原蛋白和纤连蛋白，防腐剂(1,2-己二醇/丁二醇/辛酰羟肟酸0.5g)，余量纯化水，搅拌20min混合均匀后，即得舒缓修护三重蛋白面部护理乳。
对比例3：
(1)按上表称取所有原料；
(2)将1/4保湿剂(1,2-戊二醇2g，甘油6g)和1/4增稠剂(丙烯酸(酯) 类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.3g，黄原胶0.05g，)混合均匀备用；用水溶解马齿苋提取物0.5g。
(3)将去离子水加入搅拌锅中，加热搅拌至80～85℃，把步骤(2)所分散的增稠剂加入搅拌锅中，边搅拌边加入剩余增稠剂，搅拌30～60min至完全溶解，加入预先溶解的pH调节剂(精氨酸0.25g)；
(4)将鲸蜡基-PG羟乙基棕榈酰胺0.5g加热至85℃后，加入步骤(3)所得物料，进行第一步均质乳化，设置均质速度为1300rpm，均质5min至料体均一细腻，降温至75℃；
(5)将辛酸/癸酸甘油三酯3.5g加热至75℃后，加入(4)所得物料中，进行第二步均质乳化，设置均质速度1200r/min，均质2min至料体均匀细腻；
(6)降温50℃，进行第三次均质，设置均质速度1000r/min，均质2min。
(7)降温40℃，在步骤(6)所得物料中加入皮肤调理剂(依克多因0.5g，红没药醇0.3g，泛醇4.37g，锁水磁石0.5g)，预先溶解的马齿苋提取物，防腐剂(1,2-己二醇/丁二醇/辛酰羟肟酸0.5g)，余量纯化水，搅拌20min混合均匀后，即得舒缓修护三重蛋白面部护理乳。
对比例4：
(1)按上表称取物料；
(2)将1/2保湿剂(甘油6g，丁二醇4g)和1/4增稠剂(丙烯酸(酯)类 /C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.35g，卡波姆0.15g)混合均匀备用；用剩余保湿剂预先分散配方量类贻贝粘蛋白；
(3)将去离子水加入搅拌锅中，加热搅拌至80～85℃，把步骤(2)所分散的增稠剂加入搅拌锅中，边搅拌边加入剩余增稠剂，搅拌30～60min至完全溶解，加入预先溶解的pH调节剂(三乙醇胺0.35g)；
(4)将1/3乳化剂(蔗糖多硬脂酸酯/鲸蜡醇棕榈酸酯2g)与鲸蜡基-PG羟乙基棕榈酰胺(2g)混合并加热至80～85℃后，加热至85℃后，加入步骤(3) 所得物料，进行第一步均质乳化，设置均质速度为1500rpm，均质5min至料体均一细腻，降温至75℃；
(5)将剩余乳化剂与剩余油脂(白池花籽油1g，聚二甲基硅氧烷2g，霍霍巴籽油3g，乳木果油4g)混合加热至80℃后，加入(4)所得物料中，进行第二步均质乳化，设置均质速度1200r/min，均质2min至料体均匀细腻；
(6)降温50℃，加入预分散的类贻贝粘蛋白，进行第三次均质，设置均质速度1000r/min，均质2min。
(7)降温40℃，在步骤(6)所得物料中加入皮肤调理剂(泛醇3.5g，锁水磁石0.5g))，预先溶解的人源化重组Ⅲ型胶原蛋白和纤连蛋白，防腐剂(苯氧乙醇/乙基己基甘油0.5g)，余量纯化水，搅拌20min混合均匀后，即得舒缓修护三重蛋白面部护理膏。
将上述实施例及对比例制得的化妆品，进行化妆品功效及性能检测。
1、化妆品中舒缓修护功效检测实验
1.1受试者的选择：
(1)选择18—60岁符合试验要求的志愿者作为受试对象；
(2)不能选择有下列情况者作为受试者：近一周使用抗组胺药或近一个月内使用免疫抑制剂者；近两个月内受试部位应用任何抗炎药物者；受试者患有炎症性皮肤病临床未愈者；胰岛素依赖性糖尿病患者；正在接受治疗的哮喘或其他慢性呼吸系统疾病患者；在近6个月内接受抗癌化疗者；免疫缺陷或自身免疫性疾病患者；哺乳期或妊娠妇女；双侧乳房切除及双侧腋下淋巴结切除者；在皮肤待试部位由于瘢痕、色素、萎缩、鲜红斑痣或其他瑕疵而影响试验结果的判定者；参加其他的临床试验研究者；体质高度敏感者；非志愿参加者或不能按试验要求完成规定内容者。
1.2、舒缓、修护测试方法：测试方法：志愿者清洁面部20min后，进行面部红区(VISIA 7)和TEWL(经皮水分流失)的测试，作为初始值。志愿者连续使用待测样品28d后，再次进行红区和TEWL的数据采集，采用IBM SPSS Statistics软件，利用t检验对数据进行分析，统计方法显著性水平P<0.05。注：在此期间受试者不能使用其他有舒缓修护作用的产品，不得在面部涂抹其他有刺激性的产品。
舒缓修护功效测试主要是用红区和TEWL表示，结果见表10-11。
表10实施例和对比例的TEWL值
D0 D7 D14 D28
实施例1 26.56 10.84 -0.19 -3.61
实施例2 26.09 9.98 -0.25 -3.97
实施例3 25.44 9.50 -0.24 -2.92
实施例4 25.34 12.73 -0.97 -3.12
实施例5 26.02 17.71 5.62 -3.02
对比例1 26.4 17.59 8.32 -0.51
对比例3 26.72 18.68 5.49 2.21
对比例4 26.35 22.68 15.49 9.21
表11实施例和对比例的红区值
从表10、表11的数据可以看出，实施例1和实施例4的TEWL数值在第 28d分别为-3.61和-3.12，而对比例1在第28d为-0.51，对比例4在第28d明显为正，实施例相比较对比例来说，第28天经皮水分流失情况普遍小于对比例；和实施例3相比，对比例3添加的舒缓功效成分马齿苋提取物的量相当于实施例3的17倍，但其经皮水分流失却明显较高，修护效果并没有明显提升。在红区值方面，实施例1-5的红区数值随时间延长，在逐渐下降，红区降低了17％以上，而对比例的红区数值并未明显变化。以上实验说明，通过在全配方化妆品中添加本发明提供的舒缓修护三重蛋白组合物，在较低添加量下即可实现显著的舒缓修护作用，舒缓修护效果甚至好于其他已知具有明确舒缓修护成分的大量添加，且三重蛋白组合物在化妆品中的添加量与其所达到的舒缓修护效果并不呈线性关系，添加大量的三重蛋白组合物，化妆品的舒缓修护效果并不会随之明显提升，反而导致成本增加、稳定性等其他问题，另一方面，当化妆品中三重蛋白组合物的添加量过少时，基本起不到舒缓修护的效果。
2、稳定性实验
采用透明留样瓶分装本发明实施例1～5和对比例1～2制备的化妆品，并分别置于不同温度设定的恒温箱中，恒温箱的温度分别设置为4℃、25℃、40℃和 45℃，相对湿度75％，于1、2、3个月末进行取样，观察化妆品的稳定性情况，结果表12所示：
表12实施例1-5和对比例1-2的稳定性实验结果
注：*表示絮凝，^表示析出针状物，＝表示析出点状物，—表示无析出或絮凝现象。
如上表12所示，实施例1～5制备化妆品在-18℃、4℃、25℃、40℃和45℃的条件下，稳定性较好，未出现絮凝、针状或点状析出现象，表明本发明采用科学的配比制备的化妆品质量稳定，有利于提高有效成分的稳定性。而对比例1 和对比例2的三重蛋白组合物中三种蛋白的比例虽与实施例2相当，但其添加量过大，制备的化妆品在放置1M就出现针状或点状析出现象，严重的甚至出现絮凝现象；从表格还可以看出，对比例1的析出现象较对比例2出现的早，且现象更为突出，这进一步说明了随着化妆品中三重蛋白组合物含量的增加，在各温度下出现析出或絮凝现象也会更明显，同时也加剧了产品的不稳定性，影响产品质量。
3、辣椒素刺激实验
实验方法：实验前，测试受试者前臂3cm*3cm的方框内皮肤的血红素值，记为E0。在室温下，选择受试者前臂部位进行试验，将0.1％辣椒素溶液50μL 滴在斑试器上，并将其贴于受试者前臂3cm*3cm的方框内，等待20min至受试者感觉到灼烧、刺痛、瘙痒等感受时，撕掉斑试器，立即涂抹产品，并于60min 测试血红素值，记为E1，并根据公式计算血红素变化率η＝E1-E0/E0×100％。
统计学方法：采用SPSS软件对数据进行录入、整合并进行统计学分析，数据表示用均数加减标准差。主要统计学方法为单因素方差分析和Spearmann相关分析，显著性检验水平P(P<0.05)
表13实施例1-5和对比例1-4辣椒素处理后的血红素变化率
实施例 η
实施例1 19.35％
实施例2 17.82％
实施例3 20.35％
实施例4 20.04％
实施例5 19.87％
对比例1 33.08％
对比例2 32.67％
对比例3 25.67％
对比例4 28.98％
从表13可以看出，实施例1-5中血红素的变化率明显低于对比例1-4，这说明本发明提供的含有舒缓修护三重蛋白组合物的化妆品对乳酸刺激后的皮肤有明显舒缓修护作用，其中实施例1和实施例2的效果最明显。
在上述实施例中，对各个实施例的描述都各有侧重，某个实施例中没有详细描述的部分，可以参见其他实施例的相关描述。
以上所述，为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到各种等效的修改或替换，这些修改或替换都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以权利要求的保护范围为准。

Claims (5)

1.一种舒缓修护三重蛋白组合物，其特征在于，按质量百分数计，由以下组份组成：
重组Ⅲ型胶原蛋白 80~99.5%，纤连蛋白 0.35~10%，类贻贝粘蛋白 0.15~10%；
且，所述重组Ⅲ型胶原蛋白：纤连蛋白：类贻贝粘蛋白的质量比为10~500：0.1~3：1；
所述舒缓修护三重蛋白组合物在化妆品中的添加量为0.005~0.15%。
2.如权利要求1所述的舒缓修护三重蛋白组合物，其特征在于，所述重组Ⅲ型胶原蛋白、纤连蛋白、类贻贝粘蛋白均是通过微生物发酵法获得。
3.如权利要求1-2任一项所述的舒缓修护三重蛋白组合物在制备具有舒缓修护功效的化妆品中的应用。
4.一种含有权利要求1-2任一项所述的舒缓修护三重蛋白组合物的水剂型化妆品，其特征在于，按质量百分比计，包括：舒缓修护三重蛋白组合物0.005~0.15%，保湿剂3~10.0％，皮肤调理剂0.5~8％，pH调节剂0~0.2%，防腐剂0.1％~1.0％，余量为水；其中，
所述保湿剂为甘油、丙二醇、1,3-丙二醇、丁二醇、1,2-戊二醇、异戊二醇、双丙甘醇、聚甘油-10、甘油聚醚-26、甲基丙二醇、1，2-己二醇、乙基己基甘油、辛甘醇中的一种或一种以上以任意比例混合；
所述皮肤调理剂为泛醇、芦荟提取物、马齿苋提取物、银耳子实体提取物、红没药醇、依克多因、羟苯基丙酰胺苯甲酸、4-叔丁基环己醇、卡瓦胡椒提取物、甘油葡糖苷、锁水磁石、木糖醇、普鲁兰多糖、海藻糖、PCA钠、乳酸铵、甜菜碱中的一种或一种以上以任意比例混合；
所述pH调节剂为柠檬酸、乳酸、柠檬酸钠、柠檬酸钾中的一种或两种；
所述防腐剂为苯氧乙醇、辛酰羟肟酸中的一种或两种；
所述的水剂型化妆品的制备方法，包括如下步骤：
（1）将水加入搅拌锅中，将配方量皮肤调理剂加入，搅拌均匀；
（2）再将重组Ⅲ型胶原蛋白加入，搅拌均匀后，再加入配方量纤连蛋白，搅拌至料体混合均匀，温度控制在40～45℃；
（3）预先将保湿剂与类贻贝粘蛋白搅拌分散均匀，得预混液，将该预混液边搅拌边加入步骤（2）所得料液中，搅拌速度200~300r/min，搅拌10~25min；
（4）加入配方量防腐剂和pH调节剂，搅拌10~25min，过滤即得含有舒缓修护三重蛋白组合物的水剂型化妆品。
5.一种含有权利要求1-2任一项所述的舒缓修护三重蛋白组合物的乳霜剂化妆品，其特征在于，按质量百分比计，包括：舒缓修护三重蛋白组合物0.005~0.15%，保湿剂0.5~15.0％，皮肤调理剂0.5~7％，油脂3~10%，乳化剂0~4%，增稠剂0.1％~0.5％，pH调节剂0.01~0.4%，防腐剂0.2％~0.5％，余量为水；
所述皮肤调理剂为泛醇、芦荟提取物、马齿苋提取物、银耳子实体提取物、红没药醇、依克多因、羟苯基丙酰胺苯甲酸、4-叔丁基环己醇、卡瓦胡椒提取物、甘油葡糖苷、锁水磁石、木糖醇、普鲁兰多糖、海藻糖、PCA钠、乳酸铵、甜菜碱中的一种或一种以上以任意比例混合；
所述保湿剂为甘油、丙二醇、1,3-丙二醇、丁二醇、1,2-戊二醇、异戊二醇、双丙甘醇、聚甘油-10、甘油聚醚-26、甲基丙二醇、1，2-己二醇、乙基己基甘油、辛甘醇中的一种或一种以上以任意比例混合；
所述油脂为鲸蜡基-PG羟乙基棕榈酰胺与辛酸/癸酸甘油三酯的组合，或者是鲸蜡基-PG羟乙基棕榈酰胺与角鲨烷、聚二甲基硅氧烷的组合，或者是鲸蜡基-PG羟乙基棕榈酰胺与白池花籽油、聚二甲基硅氧烷、霍霍巴籽油、乳木果油的组合；
所述乳化剂为鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯、山梨坦橄榄油酸酯、鲸蜡硬酯醇、鲸蜡硬脂基葡糖苷、C12-20 烷基葡糖苷、C14-22 醇、花生醇、山嵛醇、蔗糖多硬脂酸酯、鲸蜡醇棕榈酸酯、聚甘油-10 五硬脂酸酯、硬脂酰乳酰乳酸钠中的两种或两种以上；
所述增稠剂为聚丙烯酸酯交联聚合物-6、丙烯酸（酯）类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物或聚丙烯酰基二甲基牛磺酸铵、黄原胶、水解小核菌胶、卡波姆中的一种或两种；
所述pH调节剂为氢氧化钠、氢氧化钾、精氨酸、碳酸氢钠、三乙醇胺或氨丁三醇中的一种；
所述防腐剂为苯氧乙醇、辛酰羟肟酸、对羟基苯乙酮中的一种或两种以任意比例混合；
所述的乳霜剂化妆品的制备方法，包括如下步骤：
（1）将部分保湿剂和部分增稠剂混合均匀备用；用剩余保湿剂预先分散类贻贝粘蛋白；
（2）将配方量水加入搅拌锅中，加热搅拌至80~85℃，把步骤(1)所得物料加入，搅拌均匀，之后边搅拌边加入剩余增稠剂，搅拌至完全溶解；
（3）将0-1/3的乳化剂与油脂鲸蜡基-PG羟乙基棕榈酰胺混合并加热至80~85℃后，加入步骤（2）所得物料，进行第一次均质乳化，均质速度1300~1500r/min，均质3~5min，降温至75~80℃；
（4）将剩余乳化剂与剩余油脂混合并加热至75~80℃后，加入（3）所得物料中，进行第二次均质乳化，设置均质速度1000~1200r/min，均质2~4min，加入预先溶解的pH调节剂，均质至料体混合均匀；
（5）降温至50~55℃，加入预分散的类贻贝粘蛋白，进行第三次均质，设置均质速度1000~1200r/min，均质1~2min；
（6）降温至40~45℃，在步骤（5）所得物料中加入皮肤调理剂、预先溶解的重组Ⅲ型胶原蛋白和纤连蛋白、防腐剂，搅拌混合均匀后，即得含所述舒缓修护三重蛋白组合物的乳霜剂化妆品。
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