CN115475110B - 具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开的具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物，按照质量百分比，由以下组分组成：内水相复合多肽缓冲液组分10％‑30％、中间相组分8％‑20％、外水相组分50％‑82％，上述组分质量百分比之和为100％。本发明还公开了该组合物的制备方法，首先将中间油相加热至80‑90℃，物料搅拌均匀，降温至45℃后在高速搅拌状态下缓慢倒入内水相，高速分散后形成W/O初乳，控制高速分散时的分散速度、压强、时间与循坏次数；将溶解后的外水相加入均质2‑5分钟，降温搅拌均匀后即得到本发明组合物。本发明组合物通过多重活性肽的组合，将其负载于W/O/W的内腔室中，解决了现有晒后修复类产品起效时间长，效果慢的问题。
Description
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物，本发明还涉及该组合物的制备方法。
背景技术
复乳结构，是将W/O或O/W型的乳状液(即初乳或一级乳化)进一步乳化在另外一种连续相中得到的复合型结构，具有独特的“两膜三相”的多隔室结构，可以将一些性质不同的物质分别溶解在不同的相中，从而实现包埋、保护、隔离、缓释、控释等多重功能，目前，多重乳化结构在医药、制剂、食品、化妆品等各领域受到广泛的关注。
炎炎夏日，不仅要做好晒前防护，晒后如何修复也是不可忽视的一大护肤重点问题，因为即使保护的再好，也不可能百分百地隔绝紫外线的伤害，太阳辐射到地面的紫外线有波段长为290nm-320nm的UVB和320nm-400nm的UVA，其中UVB直达表皮，UVA则直达真皮层，前者导致皮肤晒伤，而后者导致皮肤晒黑，增加了皮肤癌发生的可能性。
生物活性多肽是指对生物机体的生命活动有益或者具有生理作用的肽类化合物，因其功效多样，安全性高，被认为是现今化妆品行业最热门的原料之一，在抗衰、美白、修复等领域有着广泛应用，化妆品行业中常见的多肽原料种类繁多，不同的肽类，其生理学作用差异很大，例如六胜肽，主要是抑制神经信号传递，松弛肌肉，达到淡化动态皱纹的效果；寡肽主要作用是创伤愈合和修复等，对于某些多肽类原料来说，由于其稳定性差，半衰期较短，如何将其活性与功效发挥到最大化一直都是研究的热题与难点。
针对晒后修复，目前市场上产品多以凝胶为主，少数为乳霜，凝胶剂型修复的原理主要为通过增稠剂固定水份，涂抹于皮肤后使得肌肤表皮起到物理降温的作用来缓解晒后引起的即时性表皮皮肤炎症，而皮肤深层的炎症并未得到解决，治标不治本，同时由于凝胶是以增稠剂搭建起的体系，涂抹多且厚重后会有粘腻感，有需要洗去的弊端。而乳霜剂型大多为O/W型，其即时舒缓镇静效果微乎其微，且透皮吸收率较低，长期使用后活性物的活性含量损失较大，其含油脂量多后会使膏体厚重，不适于晒后脆弱皮肤涂抹。所以市售产品整体存在起效时间长，最终效果也很微弱、且肤感不理想的特点。
由于目前市面上存在的晒后修复类产品起效时间长，效果慢，且剂型多以凝胶与霜为主，使皮肤得不到更好的吸收，仅在肌肤表皮起到物理降低温度的作用来缓解晒后引起的皮肤炎症，不足以达到真正修复皮肤的目的。针对以上问题，故发明一种有效且涂布性良好的晒后修复的产品是急需解决的问题。
发明内容
本发明的第一个目的是提供具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物，通过使用W/O/W型基质及对具有活性的多肽进行包覆缓释，解决了现有晒后修复类产品起效时间长，效果慢的问题。
本发明的第二个目的是提供该组合物的制备方法。
本发明所采用的第一个技术方案是，具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物，按照质量百分比，由以下组分组成：内水相复合多肽缓冲液组分10％-30％、中间相组分8％-20％、外水相组分50％-82％，上述组分质量百分比之和为100％。
本发明的特征还在于，优选的，内水相复合多肽缓冲液组分，按照质量百分比，由以下组分组成：水53％-87.6％、甘油10％-30％、氯化钠0.4％-2.0％、复合多肽2％-15％，上述组分质量百分比之和为100％。
优选的，复合多肽为超氧化物歧化酶、基因重组人胶原蛋白、肌肽、寡肽-1、五肽-3、五肽-1、乙酰基四肽-11、棕榈酰四肽-7、乙酰基四肽-9、棕榈酰三肽-5、纤连蛋白、棕榈酰三肽-8、九肽-1、肉豆蔻酰六肽-5、谷胱甘肽、精氨酸/赖氨酸多肽中的其中一种或一种以上组成的混合物。
优选的，中间相组分，按照质量百分比，由以下组分组成：亲油乳化剂5％-20％、润肤油80％-95％，上述组分质量百分比之和为100％。
优选的，亲油乳化剂为鲸蜡基PEG/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷、山梨坦倍半油酸酯、PEG-10聚二甲基硅氧烷、山梨坦硬脂酸酯、聚甘油-10五羟基硬脂酸酯、聚甘油-4异硬脂酸酯、聚甘油-4二异硬脂酸酯、聚甘油-10十油酸酯、聚甘油-5异硬脂酸酯、聚甘油-3油酸酯、二异硬脂酰基聚甘油-3二聚亚油酸酯的一种或一种以上组成的混合物。
优选的，润肤油为角鲨烷、橄榄果油、野大豆油、植物甾醇油酸脂、植物甾醇类、蜂蜡、C10-18脂酸甘油三酯类、霍霍巴油、月桂酸异戊酯、聚二甲基硅氧烷、环五聚二甲基硅氧烷、乙烯基聚二甲基硅氧烷交联聚合物、环己硅氧烷、辛酸/癸酸甘油三酯、碳酸二辛酯、异壬酸异壬酯、异十六烷、C12-15醇苯甲酸酯、氢化聚异丁烯、季戊四醇四异硬脂酸酯、硬脂醇庚酸酯、亚油酸、亚麻酸、青刺果油、山茶籽油、亚麻籽油、硬脂醇甘草亭酸酯、艾地苯的一种或一种以上组成的混合物。
优选的，外水相组分，按照质量百分比，由以下组分组成：水62.5％-89.25％、保湿剂10％-30％、亲水乳化剂0.05％-5％、防腐剂0.2％-1.0％、增稠剂0.5％-1.5％，上述组分质量百分比之和为100％。
优选的，亲水乳化剂为鲸蜡硬脂基葡糖苷、单硬脂酸甘油酯、山梨坦橄榄油酸酯、鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯、鲸蜡硬脂醇聚醚-6橄榄油酸酯、蔗糖椰油酸酯、菊粉月桂基氨基甲酸、鲸蜡硬脂醇、椰油基葡糖苷、PEG-40硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-80中的一种或一种以上组成的混合物。
优选的，保湿剂为D-泛醇、甘油、丁二醇、甜菜碱、1,3-丙二醇、生物糖胶类、透明质酸钠、赤藓醇、乙酰壳糖胺、曲克芦丁、烟酰胺、银耳多糖、海藻糖、小核菌胶、葡聚糖中的一种或一种以上组成的混合物，优选的，的防腐剂为苯氧乙醇、乙基己基甘油的混合物；优选的，增稠剂为卡波姆。
本发明所采用的第二个技术方案是，具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物的制备方法，具体按以下步骤实施：
步骤1、将中间相组分加热至80-90℃，物料搅拌均匀，降温至45℃后在高速搅拌状态下缓慢倒入内水相，高速分散后形成W/O初乳，高均质速度控制在10000-25000r/min以下进行，均质时间2-10分钟，循环3次且压强控制在20MPa-50MPa，得到W/O的初乳；
步骤2、将溶解后的外水相加入均质2-5分钟，降温搅拌均匀后即得。
本发明的有益效果是：
本发明具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物通过多重活性肽的组合，将其负载于W/O/W的内腔室中，既有效的发挥了活性肽的功效，使其具有靶向性，又将其易失活的缺点弥补，且此剂型从各相搭配辅助成分来配合，通过对皮肤的层层修护，从而修复了由于晒后引起的红斑、疼痛、干痒以及晒后皮肤变黑肤色暗沉的症状。
附图说明
图1是本发明实施例1所得的具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物的偏振光显微镜照片图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明。
本发明具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物通过多重活性肽的组合，将其负载于W/O/W的内腔室中，既有效的发挥了活性肽的功效，使其具有靶向性，又将其易失活的缺点弥补，具体按照质量百分比由以下组分组成：内水相复合多肽缓冲液组分10％-30％、中间相组分8％-20％、外水相组分50％-82％，上述组分质量百分比之和为100％。
优选的，内水相复合多肽缓冲液组分，按照质量百分比，由以下组分组成：水55％-79％、甘油15％-28％、氯化钠1％-2％、复合多肽5％-15％，上述组分质量百分比之和为100％。
优选的，复合多肽为超氧化物歧化酶、基因重组人胶原蛋白、肌肽、寡肽-1、五肽-3、五肽-1、乙酰基四肽-11、棕榈酰四肽-7、乙酰基四肽-9、棕榈酰三肽-5、纤连蛋白、棕榈酰三肽-8、九肽-1、肉豆蔻酰六肽-5、谷胱甘肽、精氨酸/赖氨酸多肽中的一种或一种以上组成的混合物。
优选的，中间相组分，按照质量百分比由以下组分组成：亲油乳化剂5％-20％、润肤油80％-95％，上述组分质量百分比之和为100％。
优选的，亲油乳化剂为鲸蜡基PEG/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷、山梨坦倍半油酸酯、PEG-10聚二甲基硅氧烷、山梨坦硬脂酸酯、聚甘油-10五羟基硬脂酸酯、聚甘油-4异硬脂酸酯、聚甘油-4二异硬脂酸酯、聚甘油-10十油酸酯、聚甘油-5异硬脂酸酯、聚甘油-3油酸酯、二异硬脂酰基聚甘油-3二聚亚油酸酯的一种或一种以上组成的混合物。
优选的，润肤油为角鲨烷、橄榄果油、野大豆油、植物甾醇油酸脂、植物甾醇类、蜂蜡、C10-18脂酸甘油三酯类、霍霍巴油、月桂酸异戊酯、聚二甲基硅氧烷、环五聚二甲基硅氧烷、乙烯基聚二甲基硅氧烷交联聚合物、环己硅氧烷、辛酸/癸酸甘油三酯、亚油酸、亚麻酸、青刺果油、山茶籽油、亚麻籽油、硬脂醇甘草亭酸酯、艾地苯的一种或一种以上组成的混合物。
优选的，外水相组分按照质量百分比由以下组分组成：水62.5％-89.25％、保湿剂10％-30％、亲水乳化剂0.05％-5％、防腐剂0.2％-1.0％、增稠剂0.5％-1.5％，上述组分质量百分比之和为100％。
优选的，亲水乳化剂为鲸蜡硬脂基葡糖苷、单硬脂酸甘油酯、山梨坦橄榄油酸酯、鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯、鲸蜡硬脂醇聚醚-6橄榄油酸酯、蔗糖椰油酸酯、菊粉月桂基氨基甲酸、鲸蜡硬脂醇、椰油基葡糖苷、PEG-40硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-80中的一种或一种以上组成的混合物。
优选的，保湿剂为D-泛醇、甘油、丁二醇、甜菜碱、1,3-丙二醇、生物糖胶类、透明质酸钠、赤藓醇、乙酰壳糖胺、曲克芦丁、烟酰胺、银耳多糖、海藻糖、小核菌胶、葡聚糖中的一种或一种以上组成的混合物，防腐剂为苯氧乙醇、乙基己基甘油的混合物；增稠剂为卡波姆。
上述组合物的制备方法，具体按以下步骤实施：
步骤1、将中间相组分加热至80-90℃，物料搅拌均匀，降温至45℃后在高速搅拌状态下缓慢倒入内水相，高速分散后形成W/O初乳，高均质速度控制在10000-25000r/min以下进行，均质时间2-10分钟，循环3次且压强控制在20MPa-50MPa，得到W/O的初乳；
步骤2、将溶解后的外水相加入低速均质2-5分钟，降温搅拌均匀后即得到组合物。
本发明通过W/O/W形式将复合多肽进行包覆达到缓释、控释、靶向的作用，且协同不同相别所含的不同物质共同对皮肤进行层层修护，外层水相组分中保湿剂成分主要功效为保湿舒缓皮肤表皮层，由于晒后皮肤角质出现红斑、瘙痒等表征性症状，其需要即时舒缓镇静来暂时压制不适感。中间相组分润肤剂主要添加了类似皮肤脂质成分的油脂及修复型硅油成分，主要功效为修复皮肤由于晒后所带来的脂质的破坏，外源性补充类皮脂膜，有效抵制因皮肤受损出现水分快速流失而引发的干燥脱皮现象。内水相为复合多肽缓冲液相，通过对其活性保护剂，靶向性输送，使其在真皮层发挥内在的晒后修复美白的功效。通过上述所制备的组合物的层层修护作用使其晒后修护功效发挥至最大。
下面结合实施例和对比例对本发明的有益效果进行实验验证。
实施例1
具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物由以下组分组成：
1、内水相复合多肽缓冲液组分为18％，其中水68.4％、甘油25％、氯化钠1.6％、复合多肽5％；
2、中间相组分12％，其中亲油乳化剂10％，润肤油90％。亲油乳化剂为鲸蜡基PEG/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷、PEG-10聚二甲基硅氧烷的组合物，且添加比例为2:1；
3、外水相组分70％，其中水76.2％，保湿剂21％，亲水乳化剂1％、防腐剂0.8％、增稠剂1％；亲水乳化剂为聚山梨醇酯-60，防腐剂为苯氧乙醇、乙基己基甘油9:1的混合物，增稠剂为卡波姆。
具体的整合配方如下：
水65.652％、甘油4.5％、氯化钠0.288％、复合多肽组合物0.9％、润肤油10.8％、鲸蜡基PEG/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷0.8％、PEG-10聚二甲基硅氧烷0.4％、保湿剂14.7％、0.7％聚山梨醇酯-60、苯氧乙醇0.504％、乙基己基甘油0.056％、卡波姆0.7％，其中复合多肽为超氧化物歧化酶、基因重组人胶原蛋白、肌肽、寡肽-1、纤连蛋白、棕榈酰三肽-8、九肽-1、谷胱甘肽的组合物，且添加量分别为0.06％、0.12％、0.18％、0.06％、0.12％、0.12％、0.12％、0.12％，其中保湿剂为D-泛醇、甘油、透明质酸钠、赤藓醇、曲克芦丁、烟酰胺、葡聚糖的混合物，且添加量分别为1％、7％、0.1％、0.8％、0.2％、5％、0.6％，其中润肤油为角鲨烷、植物甾醇类、聚二甲基硅氧烷、青刺果油、亚麻籽油、硬脂醇甘草亭酸酯组成的混合物，且添加量分别为4％、0.2％、4.4％、1％、1％、0.2％。
制备步骤如下：
首先将中间油相加热至85℃物料搅拌均匀，降温至45℃后在高速搅拌状态下缓慢倒入内水相，高速分散后形成W/O初乳，控制高速均质时分散速度23000r/min以下，压强50MPa，均质时间5分钟，循环3次，将溶解好后的外水相加入低速均质3分钟，降温搅拌均匀后即得到W/O/W型霜；
所得的具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物采用Agilent1100高效液相色谱仪测定其包封率，所测结果为95％，在4℃储存3个月后，再次采用Agilent1100高效液相色谱仪测定所得组合物，所测结果为94％。
所得组合物经过稳定性考察:45℃三个月，37℃三个月，4℃三个月，-18℃三个月。观察后，最终所得样品稳定性良好。
实施例2
具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物由以下组分组成：
1、内水相复合多肽缓冲液组分为10％，其中水53％、甘油30％、氯化钠2％、复合多肽15％；
2、中间相组分8％，其中亲油乳化剂20％，润肤油80％。亲油乳化剂为鲸蜡基PEG/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷、PEG-10聚二甲基硅氧烷的组合物，且添加比例为2:1；
3、外水相组分82％，其中水62.5％，保湿剂30％，亲水乳化剂5％、防腐剂1％、增稠剂1.5％；亲水乳化剂为聚山梨醇酯-60，防腐剂为苯氧乙醇、乙基己基甘油9:1的混合物，增稠剂为卡波姆。
具体的整合配方如下：
水56.55％、甘油3.0％、氯化钠0.2％、复合多肽组合物1.5％、润肤油6.4％、鲸蜡基PEG/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷1.07％、PEG-10聚二甲基硅氧烷0.53％、保湿剂24.6％、聚山梨醇酯-60 4.1％、苯氧乙醇0.738％、乙基己基甘油0.082％、卡波姆1.23％。其中复合多肽为超氧化物歧化酶、基因重组人胶原蛋白、肌肽、寡肽-1、纤连蛋白、棕榈酰三肽-8、九肽-1、谷胱甘肽的组合物，且添加量分别为0.1％、0.2％、0.3％、0.1％、0.2％、0.2％、0.2％、0.2％，其中保湿剂为D-泛醇、甘油、透明质酸钠、赤藓醇、曲克芦丁、烟酰胺、葡聚糖的混合物，且添加量分别为1.67％、11.72％、0.17％、1.34％、0.33％、8.37％、1.0％，其中润肤油为角鲨烷、植物甾醇类、聚二甲基硅氧烷、青刺果油、亚麻籽油、硬脂醇甘草亭酸酯组成的混合物，且添加量分别为2.37％、0.12％、2.61％、0.59％、0.59％、0.12％。
制备步骤如下：
首先将中间油相加热至80℃物料搅拌均匀，降温至45℃后在高速搅拌状态下缓慢倒入内水相，高速剪切后形成W/O初乳，控制高速分散时分散速度10000r/min以下，压强20MPa，均质时间2分钟，循环3次。将溶解好后的外水相加入均质3分钟，降温搅拌均匀后即得到W/O/W型霜；
实施例3
具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物由以下组成：
1、内水相复合多肽缓冲液组分为30％，其中水87.6％、甘油10％、氯化钠0.4％、复合多肽2％；
2、中间相组分20％，其中亲油乳化剂5％，润肤油95％。亲油乳化剂为鲸蜡基PEG/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷、PEG-10聚二甲基硅氧烷的组合物，且添加比例为2:1；
3、外水相组分50％，其中水89.25％，保湿剂10％，亲水乳化剂0.05％、防腐剂0.2％、增稠剂0.5％；亲水乳化剂为聚山梨醇酯-60，防腐剂为苯氧乙醇、乙基己基甘油9:1的混合物，增稠剂为卡波姆。
具体的整合配方如下：
水70.905％、甘油3.0％、氯化钠0.12％、多肽组合物0.6％、油脂19％、鲸蜡基PEG/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷0.66％、PEG-10聚二甲基硅氧烷0.34％、保湿剂5％、TWEEN 600.025％、苯氧乙醇0.09％、乙基己基甘油0.01％、卡波姆0.25％。其中复合多肽为超氧化物歧化酶、基因重组人胶原蛋白、肌肽、寡肽-1、纤连蛋白、棕榈酰三肽-8、九肽-1、谷胱甘肽的组合物，且添加量分别为0.04％、0.08％、0.12％、0.04％、0.08％、0.08％、0.08％、0.08％，其中保湿剂为D-泛醇、甘油、透明质酸钠、赤藓醇、曲克芦丁、烟酰胺、葡聚糖的混合物，且添加量分别为0.34％、2.38％、0.03％、0.27％、0.07％、1.70％、0.21％，其中润肤油为角鲨烷、植物甾醇类、聚二甲基硅氧烷、青刺果油、亚麻籽油、硬脂醇甘草亭酸酯组成的混合物，且添加量分别为7.04％、0.35％、7.74％、1.76％、1.76％、0.35％。
制备步骤如下：
首先将中间油相加热至90℃物料搅拌均匀，降温至45℃后在高速搅拌状态下缓慢倒入内水相，高速剪切后形成W/O初乳，控制高速分散时分散速度25000r/min以下，压强40MPa，均质时间10分钟，循环3次。将溶解好后的外水相加入均质3分钟，降温搅拌均匀后即得到W/O/W型霜；
实施例4
具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物，其与实施例1的区别在于：制备工艺中高速分散时分散速度为1500r/min，制备工艺中高速剪切循坏压强为30MPa。
实施例5
具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物，其与实施例1的区别在于：制备工艺中高速剪切循坏搅拌时间为3、6、8min。
对本发明实施例1进行实验验证结果如下：
活性实验测定：
所得的实施例1稳定的一种具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物与复合多肽缓冲液水溶液活性实验如下：
将实施例1制得的组合物作为样品；
用0.1％的TFA水溶液溶解为2mg/ml的溶液备用；准备15ml样品，分别用1.5ml的无菌离心管分装，分装在超净工作台完成，用0.22μm的除菌膜过滤，每管1ml，共计11管，过滤后的样品放入37℃恒温箱、4℃冰箱备用，每次取出一支样品与对照品进行对比检测。
对照品的准备：
每次测试前按照样品的配制步骤进行对照品的现配现用(对照品为对应复合多肽的水溶液)，对照品视为未降解，与样品进行对比检测。
样品测试：
按照复合多肽标样专属程序分析，对比分析样品与对照品。
第1个月，每周一次进行测样，观察色谱图谱有无变化；
第2个月，每两周分析一次，观察色谱图谱有无变化；
3个月后分析一次，观察色谱图谱有无变化，并将最终实验记录总结为报告。
结果判定：
通过对样品与对照品的测试图谱的峰面积积分(S)，通过峰面积计算降解率，公式如下：
降解率＝[S(标样)-S(原始样品)]/S(标样) (1)
测试结果：
此次样品的测试周期3个月，放置温度分别为4℃、常温、37℃，通过计算，将样品与对照品最终在三种温度条件下放置的降解率及报告呈现，结果显示水包油包水的霜包覆复合多肽有助于其活性的保存。
表1为包覆复合多肽的组合物样品与复合多肽缓冲液对照品在三种温度条件下放置的降解率结果。
表1降解率表
实验结果可以得出样品在不同条件下均有明显的活性降解且时间越长降解率越高，温度为37℃时降解速率尤为明显；对照品经过包覆后其降解速率在各种环境中的降解率均低于样品，由此可以得出此发明的复合多肽进行包覆后有助于其活性的保护利用。
人体封闭性斑贴实验
30名志愿者进行皮肤封闭型斑贴试验，选用面积不超过50mm2、深度约1mm的合格斑试器材，将受试物放入斑试器小室内，用量约为0.020g—0.025g(固体或半固体)或0.020mL—0.025mL(液体)，受试物为化妆品产品原物时，对照孔为空白对照(不置任何物质)，受试物为稀释后的化妆品时，对照孔内使用该化妆品的稀释剂，将加有受试物的斑试器用低致敏胶带贴敷于受试者的背部或前臂曲侧，用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上，持续24h。
分别于去除受试物斑试器后30min(待压痕消失后)、24h和48h按表2标准观察皮肤反应，并记录观察结果。
表2皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应分级标准
表3斑贴实验结果
| 样品 | 30min | 24h | 48h | |
| 1 | 实施例1 | 0 | 0 | 0 |
| 2 | 实施例2 | 0 | 0 | 0 |
| 3 | 实施例3 | 0 | 0 | 0 |
| 4 | 实施例4 | 0 | 0 | 0 |
| 5 | 实施例5 | 0 | 0 | 0 |
结果显示实施例1-5均为0级，均为阴性反应，说明无刺激现象发生，说明本发明组合物对皮肤是安全无刺激的，满足了对肌肤最基础的条件，也对后续的功效测试提供了前提。
功效测试
多肽原料筛选实验
1、晒后修复多肽复合筛选实验，超氧化物歧化酶、重组类人源胶原、肌肽、寡肽-1、五肽-3、五肽-1、乙酰基四肽-11、棕榈酰四肽-7、乙酰基四肽-9、棕榈酰三肽-5、纤连蛋白、棕榈酰三肽-8、九肽-1、肉豆蔻酰六肽-5、谷胱甘肽、精氨酸/赖氨酸多肽(由于实验的多肽原料较多，本实验仅列举如下几种组合，且组合配比为等组分比)：
(1)超氧化物歧化酶+基因重组人胶原蛋白+肌肽+寡肽-1+纤连蛋白+棕榈酰三肽-8+九肽-1+谷胱甘肽；
(2)超氧化物歧化酶+基因重组人胶原蛋白+肌肽+寡肽-1+纤连蛋白+棕榈酰三肽-8+九肽-1；
(3)超氧化物歧化酶+基因重组人胶原蛋白+肌肽+寡肽-1+纤连蛋白+棕榈酰三肽-8；
(4)超氧化物歧化酶+基因重组人胶原蛋白+肌肽+寡肽-1+纤连蛋白；
(5)超氧化物歧化酶+基因重组人胶原蛋白+肌肽+寡肽-1；
(6)超氧化物歧化酶+基因重组人胶原蛋白+肌肽；
(7)超氧化物歧化酶+基因重组人胶原蛋白；
(8)超氧化物歧化酶；
(9)超氧化物歧化酶+基因重组人胶原蛋白+肌肽+寡肽-1+纤连蛋白+棕榈酰三肽-8+五肽-3+五肽-1；
(10)乙酰基四肽-11、棕榈酰四肽-7、乙酰基四肽-9、棕榈酰三肽-5、九肽-1+谷胱甘肽；
实验方法：采集成熟斑马鱼雌雄分缸饲养，实验前一天将雌雄体自然交配产卵，挑选健康的斑马鱼胚胎用于实验研究，置于多孔细胞培养板，一枚一空，每孔加入NOEC浓度下的实验溶液，实验另设空白对照组、模型对照组，每组设2个复孔，其中，空白对照组为健康的斑马鱼(鱼胚)，模型组为加入养殖水后直接接受紫外线辐照，在2.5h内，每半小时辐射30s，辐射完后吸进样品液，换成养殖水，置于培养箱中。
实验前及实验后的24h和48h时，在体式显微镜下观察斑马鱼胚体鱼鳍的损伤修复情况以及尾鳍生长面积的变化，并拍照记录计算面积变化数值。
实验结果：经过观察发现，空白对照组中斑马鱼(鱼胚)在未受紫外辐射时，尾鳍生长完整光滑，经照射后尾鳍粗糙、皱缩。在以质量浓度1ug/ml的样品作用后，尾鳍损伤情况以尾鳍的生长面积(紫外辐射前100为单位计)记录数据如表4。
表4斑马鱼尾鳍生长面积数据表
通过对斑马鱼鱼胚实验筛选出处理组(1)为最优的复合方式。
通过对处理组(1)进行UVB辐照角质形成细胞后的炎症因子分泌的抑制试验(ELISA法)可知此组合有抑脂炎症因子IL-1α、炎症因子IL-8的作用。
实验结果说明处理组(1)对晒后炎症有很好的修复作用，并对经过UVB辐照后的炎症因子有很好的抑脂作用。
通过对实施例1人体试用功效测试结果如下：
选择男女1:1的比例，年龄20～35岁的愿者，分为30人/组，共60组(对照组为空白对照)；将不透光锡箔长方形硬纸，尺寸为5cm*10cm大小钻孔直径1.5cm，在纸板上钻2排，6个孔；将钻孔纸板贴于手臂内侧，手臂其余暴露部位遮盖严实，置于紫外灯箱中照射，紫外线只能照射于孔洞暴露的手臂肌肤；照射20分钟，再间隔5分钟后继续照射20分钟，循环，约照射时间为1小时；此照射过程实验为获得6个紫外线损伤圆形区域；1小时后，暴露的圆形区域应有灼热等异常反应，记录炎症反应的人数；设置空白对照组、对比组1为复合多肽缓冲稀释液、对比组2为W/O/W空囊的霜、应用实施例1、对比组3为某市售晒后修复凝胶、对比组4为某市售O/W型晒后修复霜，各组产品涂抹于紫外线损伤区域一日三次涂抹；实验的前3天观察记录皮肤炎症、脱皮、恢复速度等情况；再以28天为一个周期，观察并记录；1个月后ANTSCI VISIA皮肤图像分析仪检测系统检测皮肤的色素沉着改善情况；2个月后ANTSCIVISIA皮肤图像分析仪检测系统检测皮肤的色素沉着改善情况恢复效果与改善程度与对照组相比，改善程度50％以上即记录一人。
临床测试结果如下：
表5人体试用功效临床数据
由表5可见本发明实施例1在此次实验中有针对前期验证舒缓有效率为92％，长期1个月晒斑、皮肤色素沉着有效率为86％，长期2个月晒斑、皮肤色素沉着有效率为98％，均远高于空白组、对比组。而对比组3、4均为市售晒后修复类产品，可以看出其临床数据显示出起效时间长且长期效果也不理想。
体外透皮实验研究结果发现：复合多肽晒后修复功能的包覆5％复合肽的组合物比5％的复合肽组合物的凝胶制剂透皮吸收率高，且其表观透皮系数为普通凝胶制剂的5.2倍。
临床实验与透皮实验数据说明本发明组合物在晒后修复方面功效强，且吸收快，效果显著。
综上所述，通过对斑马鱼尾鳍损伤情况及尾鳍的生长面积和人体功效测试皮肤色素沉着有效率结果均表明本发明的复合肽组合物具有晒后修复功能，且该种W/O/W形式使得释放更完全，效果更强更明显。
Claims (5)
1.具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物，其特征在于，按照质量百分比，由以下组分组成：内水相复合多肽缓冲液组分10%-30%、中间相组分8%-20%、外水相组分50%-82%，上述组分质量百分比之和为100%；
所述中间相组分，按照质量百分比，由以下组分组成：亲油乳化剂5%-20%、润肤油80%-95%，上述组分质量百分比之和为100%；
所述亲油乳化剂为鲸蜡基 PEG/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷、山梨坦倍半油酸酯、PEG-10聚二甲基硅氧烷、山梨坦硬脂酸酯、聚甘油-10五羟基硬脂酸酯、聚甘油-4异硬脂酸酯、聚甘油-4二异硬脂酸酯、聚甘油-10十油酸酯、聚甘油-5异硬脂酸酯、聚甘油-3油酸酯、二异硬脂酰基聚甘油-3二聚亚油酸酯中的一种以上组成的混合物；
所述外水相组分，按照质量百分比，由以下组分组成：水62.5%-89.25%、保湿剂10%-30%、亲水乳化剂0.05%-5%、防腐剂0.2%-1.0%、增稠剂0.5%-1.5%，上述组分质量百分比之和为100%；
所述亲水乳化剂为鲸蜡硬脂基葡糖苷、单硬脂酸甘油酯、山梨坦橄榄油酸酯、鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯、鲸蜡硬脂醇聚醚-6橄榄油酸酯、蔗糖椰油酸酯、菊粉月桂基氨基甲酸、鲸蜡硬脂醇、椰油基葡糖苷、PEG-40硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-80中的一种以上组成的混合物；
所述复合多肽为超氧化物歧化酶、基因重组人胶原蛋白、肌肽、寡肽-1、纤连蛋白、棕榈酰三肽-8、九肽-1、谷胱甘肽中的一种以上组成的混合物。
2.根据权利要求1所述的具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物，其特征在于，所述内水相复合多肽缓冲液组分，按照质量百分比，由以下组分组成：水53%-87.6%、甘油10%-30%、氯化钠0.4%-2.0%、复合多肽2%-15%，上述组分质量百分比之和为100%。
3.根据权利要求1所述的具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物，其特征在于，所述润肤油为角鲨烷、橄榄果油、野大豆油、植物甾醇油酸脂、植物甾醇类、蜂蜡、C10-18脂酸甘油三酯类、霍霍巴油、月桂酸异戊酯、聚二甲基硅氧烷、环五聚二甲基硅氧烷、乙烯基聚二甲基硅氧烷交联聚合物、环己硅氧烷、辛酸/癸酸甘油三酯、碳酸二辛酯、异壬酸异壬酯、异十六烷、C12-15醇苯甲酸酯、氢化聚异丁烯、季戊四醇四异硬脂酸酯、硬脂醇庚酸酯、亚油酸、亚麻酸、青刺果油、山茶籽油、亚麻籽油、硬脂醇甘草亭酸酯、艾地苯中的一种以上组成的混合物。
4.根据权利要求1所述的具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物，其特征在于，所述保湿剂为D-泛醇、甘油、丁二醇、甜菜碱、1,3-丙二醇、生物糖胶类、透明质酸钠、赤藓醇、乙酰壳糖胺、曲克芦丁、烟酰胺、银耳多糖、海藻糖、小核菌胶、葡聚糖中的一种以上组成的混合物，所述的防腐剂为苯氧乙醇、乙基己基甘油的混合物；所述的增稠剂为卡波姆。
5.根据权利要求1-4任一种所述的具有晒后修复功效且包覆复合肽的组合物的制备方法，其特征在于，具体按以下步骤实施：
步骤1、将中间相组分加热至80-90℃，物料搅拌均匀，降温至45℃后在高速搅拌状态下缓慢倒入内水相，高速分散后形成W/O初乳，高均质速度控制在10000-25000r/min以下进行，均质时间2-10分钟，循环3次且压强控制在20MPa-50MPa，得到W/O的初乳；
步骤2、将溶解后的外水相加入均质2-5分钟，降温搅拌均匀后即得。
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