CN115479995A - 一种升陷汤提取工艺的优选方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及中药提取技术领域,具体是一种升陷汤提取工艺的优选方法。本发明通过对黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、芒果苷、知母皂苷B II转移率权重进行赋值得到综合评分,进而采用SPSS一般线性模型方法对最佳权重系数所评估分数进行方差分析,按照正交试验优选升陷汤最佳醇提工艺,为升陷汤的进一步开发研究提供了参考依据。
Description
技术领域
本发明涉及中药提取工艺领域,具体地说,是一种升陷汤提取工艺的优选方法。
背景技术
升陷汤源自近代中医学家张锡纯所著的《医学衷中参西录》,方剂主要有黄芪、知母、柴胡、桔梗、升麻五味药组成,临床常用于治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病、心力衰竭、心律失常等疾病。方剂君药黄芪、佐药知母中主要包含黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷毛、芒果苷和知母皂苷B II等成分,具有抗炎,减轻心肌缺血、心血管病保护作用的作用。
但是关于一种采用正交试验直观分析和一般线性模型(SPSS中的General LinearModel,GLM)分析方法对升陷汤提取工艺进行优选的方法目前还未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种升陷汤提取工艺的优选方法,通过对黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、芒果苷、知母皂苷B II转移率权重进行赋值得到综合评分,进而采用SPSS一般线性模型(SPSS中的General Linear Model,GLM)方法对最佳权重系数所评估分数进行方差分析,按照正交试验优选升陷汤最佳醇提工艺,为升陷汤的进一步开发研究提供参考依据。
按照2018年中医药管理局公布的《古代经典名方目录(第一批)》,升陷汤的制备方法应该是水煎服。但本发明的前期研究表明,升陷汤的乙醇提取物对大鼠慢性心力衰竭的治疗功效优于其水提取物,二者在化学成分上有一定的差异,有效成分黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、芒果苷、知母皂苷B II的含量在乙醇提物中的含量大于水提物中的含量,并且尚未有任何公开文献对升陷汤的乙醇提取工艺开展研究。
现有技术中的工艺考察结果都是直接设计各参数的不同水平值进行正交试验,基于正交试验直观分析获得有显著性差异的因素(P小于0.05),但如果只做这样的分析,得不到有显著性差异的因素,这说明实验设计从统计学上来说是有问题的;但事实上,如果想要使得结果具有统计学差异,各因素的水平差异性就要很大,但这样选择的参数是不符合实际生产工艺的。而本发明则是通过单因素试验,先排除了一些不合适水平值后再开展正交试验。采用了正交试验直观分析+SPSS一般线性模型分析方法,前者或者最佳组合,即使没有得到有显著差异性的结果;但结合后者,能够获得有对综合评分有显著差异性的参数。
本发明的第一方面,提供一种升陷汤提取工艺的优选方法,通过对升陷汤中的黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、芒果苷、知母皂苷B II转移率权重进行赋值得到综合评分,进而采用SPSS一般线性模型方法对最佳权重系数所评估分数进行方差分析,按照正交试验优选升陷汤的最佳醇提工艺。
进一步的,所述的优选方法中,首先采用单因素考察醇提工艺中的3个关键因素乙醇浓度、加醇量和提取时间,获得优选的各因素的3个候选的优选参数,进而再对升陷汤的醇提工艺中的3个关键参数乙醇浓度、加醇量和提取时间3个因素进行考察,获得最优工艺。
进一步的,所述的优选方法包括以下步骤:
A、单因素试验,考察不同提取溶剂(水及40%、50%、60%、70%、80%的乙醇),不同溶剂倍数(4、6、8、10、12倍体积),不同回流提取时间(0.5h、1.0h、1.5h、2h、2.5h)对芒果苷、毛蕊异黄酮苷、知母皂苷B II和黄芪甲苷提取率的影响;
B、结合醇提的实际生产,确定提取次数为一次,最终设置因素水平为:乙醇浓度(60%、70%、80%)、加醇倍量(6、8、10倍),提取时间(1.5h、2.0h、2.5h)、按L9(3)4正交设计实验表;
C、结合各化合物对慢性心力衰竭的影响及各自对应药材在处方中的用量,加权评分法设定确定黄芪甲苷转移率(A)、毛蕊异黄酮苷转移率(B)、知母皂苷B II转移率(C)芒果苷转移率(D)以及干膏率(E)的权重系数;直观分析结果表明最佳因素水平组合;
D、采用SPSS分析软件的一般线性模型进行方差分析,将得到的实验结果作为因变量,并把乙醇浓度、提取时间、加醇倍数这三个条件设为固定因子,再在选择模型的构建项中把以上三个条件都以主效应放入模型,最后进行分析,结合正交分析的结果,可得最佳因素水平组合。
进一步的,所述的优选方法中,还包括对4个指标性成分的前处理和定量分析方法,通过HPLC-DAD-ELSD方法同时测定芒果苷、毛蕊异黄酮苷及知母皂苷B II的含量,通过HPLC-ELSD方法测定黄芪甲苷的含量。
由于黄芪甲苷的HPLC检测需要采用适当比例的氨试液处理提取液,而这样的处理方法会破坏知母皂苷B II的结构从而导致其峰形异常,不能进行定量分析。因此,本发明针对上述4个指标性成分的结构特点,建立了2种不同的HPLC检测方法,从而才能完成定量分析的要求。
更进一步的,所述的HPLC-DAD-ELSD方法同时测定芒果苷、毛蕊异黄酮苷及知母皂苷B II的含量的色谱条件为:
色谱柱:waters-sunfire-C18柱(4.6×250mm,5μm);流动相A-乙腈、B-0.2%甲酸溶液,柱温:30℃;流速:1.0mL/min进样量:10μL;检测器条件:DAD设置:λ=260nm,ELSD漂移管温度为70℃,载气流速为1.5mL/min,梯度洗脱程序为0~5min 10%~15%A,5~12min15%~15%A,20~40min 20~40%A,40~45min 40~95%A。
更进一步的,所述的通过HPLC-ELSD方法测定黄芪甲苷的含量色谱条件为:
色谱柱:waters-sunfire-C18柱(4.6×250mm,5μm)柱温:30℃;流速:1.0mL/min;进样量:10μL,DAD,λ=260nm,ELSD,漂移管温度70℃,载气流速1.5mL/min,流动相:A(乙腈)-B(0.2%FA)溶液,梯度洗脱0~5min 10~32%A,5~15min 32%~48%A,15~20min 48%~48%A,20~25min 48~95%A。
本发明的第二方面,提供一种基于上述优选方法得到的升陷汤最佳醇提工艺,所述的升陷汤最佳醇提工艺为黄芪、知母、桔梗、柴胡和升麻加10倍量的70%乙醇回流2.5h。
本发明优点在于:
1、本发明建立HPLC-DAD-ELSD方法同时测定芒果苷、毛蕊异黄酮苷及知母皂苷BII,建立HPLC-ELSD方法测定黄芪甲苷的含量。对上述两种分析方法均进行了方法学考察。
2、本发明以芒果苷、毛蕊异黄酮苷、知母皂苷B II、黄芪甲苷的转移率及干膏得率为指标,采用SPSS一般线性模型分析方法考察乙醇浓度、加醇量和提取时间3个因素,采用正交试验法对升陷汤的制备工艺进行优化。工艺筛选结果表明,升陷汤最佳醇提工艺为黄芪、知母、桔梗、柴胡和升麻加10倍量的70%乙醇回流2.5h。
3、本发明通过对黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、芒果苷、知母皂苷B II转移率权重进行赋值得到综合评分,进而采用SPSS一般线性模型方法对最佳权重系数所评估分数进行方差分析,按照正交试验优选升陷汤最佳醇提工艺,为升陷汤的进一步开发研究提供参考依据。本发明优选的工艺稳定、合理,为升陷汤的后续制备工艺及药理研究提供了科学依据。
附图说明
图1知母皂苷B II对照品、供试品溶液、及阴性对照品溶液;
图2芒果苷、毛蕊异黄酮苷对照品、供试品溶液、及阴性对照品溶液;
图3黄芪甲苷对照品、供试品溶液、及阴性对照品溶液。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例:
1仪器和材料
1.1仪器
美国Agilent 1260高效液相色谱仪(包括自动进样器,DAD紫外检测器,Chemstation色谱工作站,waters-sunfire-C18柱(4.6×250mm,5μm),四元梯度泵,在线过滤器,柱温箱),XS105DU电子分析天平(梅特勒-托利多国际贸易(上海)有限公司),HSW-24电热恒温四孔水浴锅(上海诚献仪器设备有限公司),SK7200H型超声仪(上海科导超声仪器有限公司)。
1.2试剂与材料
黄芪Astragali Radix(批号200417110)、桔梗Platycodonis Radix(批号19090601)、升麻Cimicifugae Rhizoma(批号19070415)、知母Anemarrhenae Rhizoma(20062212)、柴胡Bupleuri Radix(批号19110509)饮片均购自吴江上海蔡同德堂中药饮片有限公司,以、上样品经上海中医药大学中药学院孙连娜副教授鉴定。
对照品:黄芪甲苷(批号:MB1954)、毛蕊异黄酮苷(批号:MB6779)、芒果苷(批号:MB6776)、知母皂苷B II(批号:MB7070)均购自大连美仑生物科技有限公司,纯度≥98%。
乙腈(色谱纯,Fisher公司);甲酸(色谱纯,MackLin公司);纯净水,其余试剂均为分析纯。
2方法和结果
2.1芒果苷、毛蕊异黄酮苷、知母皂苷B II含量测定
2.1.1色谱条件及系统适用性试验-芒果苷、毛蕊异黄酮苷、知母皂苷B II
色谱柱:waters-sunfire-C18柱(4.6×250mm,5μm);流动相A-乙腈、B-0.2%甲酸溶液,柱温:30℃;流速:1.0mL/min进样量:10μL;检测器条件:DAD设置:λ=260nm,ELSD漂移管温度为70℃,载气流速为1.5mL/min,梯度洗脱程序为0~5min 10%~15%A,5~12min15%~15%A,20~40min 20~40%A,40~45min 40~95%A。
2.1.2色谱条件及系统适用性试验-黄芪甲苷
色谱柱:waters-sunfire-C18柱(4.6×250mm,5μm)柱温:30℃;流速:1.0mL/min。
进样量:10μL,DAD,λ=260nm,ELSD,漂移管温度70℃,载气流速
1.5mL/min,流动相:A(乙腈)-B(0.2%FA)溶液,梯度洗脱0~5min 10~32%A,5~15min 32%~48%A,15~20min 48%~48%A,20~25min 48~95%A。
2.2对照品溶液的制备
精密称取芒果苷、毛蕊异黄酮苷、知母皂苷B II、黄芪甲苷对照品适量至于棕色容量瓶中分别加50%甲醇、甲醇、30%丙酮定容,制得1.02mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL的储备液,精密吸取用甲醇稀释质量浓度分别为0.21mg/mL、0.24mg/mL、0.22mg/mL、0.21mg/mL混合对照品溶液。
2.3供试品溶液制备
2.3.1.1供试品溶液制备-芒果苷、毛蕊异黄酮苷、知母皂苷B II
按处方比例称取黄芪、知母、桔梗、柴胡共26g,浓缩至60~70mL用水定容至100mL,从中精密量取5mL,置于25mL容量瓶中,加丙酮-水(30:70)溶液适量稀释定容至刻度,摇匀,过滤,取续滤液,作为供试品溶液。
2.3.1.2供试品溶液制备-黄芪甲苷
精密量取“2.3.1.1”项下浓缩液2mL,置5mL容量瓶中,加10%浓氨试液的甲醇溶液稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液,作为供试品溶液。
2.3.2阴性供试液的制备
按处方比例称取除黄芪以外其它的药材,按照“2.3.1.1”项下方法制备黄芪阴性供试液
按处方比例称取除知母以外其它的药材,按照“2.3.1.1”项下方法制备知母阴性供试液。
按处方比例称取除黄芪以外其它的药材,按照“2.3.1.2”项下方法制备黄芪阴性供试液
2.3.3专属性试验
吸取上述对照品、供试品溶液、及阴性对照品溶液,分别注入液相色谱仪,依法测定HPLC结果见图1-3,结果表明黄芪知母的阴性对照对测定方法无干扰。
2.3.4精密度实验
精密吸取对照品溶液,连续进样6次,测得各成分峰面积积分值。结果显示,以峰面积计算毛蕊异黄酮苷RSD%=0.23%,知母皂苷B II RSD%=0.74%,黄芪甲苷RSD%=1.18%,RSD%均小于2%,说明仪器精密度良好。
2.3.5线性关系考察
精密量取“2.3.2”项下对照品混合储备液适量,依次逐级稀释定容,制得7个浓度梯度的对照品混合溶液,芒果苷、毛蕊异黄酮苷,以进样质量为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y)进行回归方程。知母皂苷B II以对照品浓度对数lnX为横坐标,以对照品峰面积的对数lnY为纵坐标。精密称取黄芪甲苷适量,用甲醇溶解制得质量标准浓度为1.03mg/mL依次逐级稀释定容,制得6个浓度梯度的对照品溶液。以对照品浓度对数lnX为横坐标,以对照品峰面积的对数lnY为纵坐标进行回归方程。
芒果苷y=56.96X+228.36r=0.9997,毛蕊异黄酮苷y=35.174-11.483r=0.9998,知母皂苷B II y=1.5005x-0.6127r=0.9991,黄芪甲苷y=1.602x-0.3011r=0.9991芒果苷质量浓度在0.0102mg/mL~0.408mg/mL,毛蕊异黄酮苷质量浓度在0.002mg/mL~0..080mg/mL范围内,知母皂苷B II质量浓度在0.010mg/mL~0.404mg/mL,黄芪甲苷质量浓度在0.010mg/mL~0.412mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。
2.3.6重复性考察
取70%8倍量的乙醇回流2.5h的样品6份,按“2.3.1.1”、“2.3.1.2”、”方法制备溶液,按“2.1.1”“2.1.2”进样测定,测定峰面积。结果6份样品中芒果苷、毛蕊异黄酮苷、知母皂苷B II、黄芪甲苷RSD分别为1.19%、0.92%、1.36%、2.62%,表明本方法的重复性良好。
2.3.7稳定性考察
取70%8倍量的乙醇回流2.5h的样品3份按“2.3.3”、“2.4.3”方法制备溶液,按“2.3.1”、“2.4.1”分别于0h、6h、12h、18h、24h、36h,进行分析,测定峰面积。
结果:芒果苷、毛蕊异黄酮苷、知母皂苷B II、黄芪甲苷峰面积的RSD分别为0.95%、2.85%、2.04%、2.29%,表明供试品溶液在36h内基本稳定。
2.3.9加样回收率
精密量取已知含量的升陷汤方剂6份,每份2.5mL置于25mL的容量瓶中,根据汤剂中毛蕊异黄酮苷、芒果苷、知母皂苷B II含量,按1:1的比例分别加入,精密量取已知含量的升陷汤方剂6份,每份1ml置于5ml的容量瓶中,根据汤剂中黄芪甲苷含量按1:1的比例分别加入按“2.3.1.1”、“2.3.1.2”方法制备溶液,按“2.1.1”“2.1.2”方法制备溶液,按“2.3.1.1”、“2.3.1.2”进样测定,测定峰面积。
表1芒果苷、毛蕊异黄酮苷、知母皂苷B II、黄芪甲苷的加样回收率试验表
2.4正交实验法优选提取工艺
2.4.1提取工艺的优选
本实验前期进行了单因素试验,考察了不同提取溶剂(水及40%、50%、60%、70%、80%的乙醇),不同溶剂倍数(4、6、8、10、12倍体积),不同回流提取时间(0.5h、1.0h、1.5h、2h、2.5h)对芒果苷、毛蕊异黄酮苷、知母皂苷B II和黄芪甲苷提取率的影响。结合醇提的实际生产,确定提取次数为一次,最终设置因素水平为:乙醇浓度(60%、70%、80%)、加醇倍量(6、8、10倍),提取时间(1.5h、2.0h、2.5h)、按L9(3)4正交设计实验表。
表2提取工艺正交实验设计表
结合各化合物对慢性心力衰竭的影响及各自对应药材在处方中的用量,确定黄芪甲苷转移率(A)、毛蕊异黄酮苷转移率(B)、知母皂苷B II转移率(C)芒果苷转移率(D)以及干膏率(E)的权重系数分别为0.3、0.1、0.2、0.2、0.2。
表3醇提工艺正交试验结果表
直观分析结果表明最佳因素水平组合为A2B3C3,即加10倍量的70%乙醇回流2.5h。影响因素排序为乙醇浓度(A)>加醇倍量(B)>提取时间(C)。由方差分析得出,各因素水平无显著性差异。
2.5.1.4SPSS一般线性
采用SPSS分析软件的一般线性模型进行方差分析,将得到的27个实验结果作为因变量,并把乙醇浓度、提取时间、甲醇倍数这三个条件设为固定因子,再在选择模型的构建项中把以上三个条件都以主效应放入模型,最后进行分析,即得到实验结果。如表4所得,结果显示乙醇倍数在主体间效应检验具有显著性差异。
表4主体间效应检验
a.R方=0.511(调整后R方=0.447);*p<0.01
结合正交分析的结果,可得最佳因素水平组合为A2B2C3,即加10倍量的70%乙醇回流2.5h。影响因素排序为乙醇浓度(A)>加醇倍量(B)>提取时间(C),其中乙醇倍数和乙醇浓度对提取结果的影响具有显著性差异。
2.7提取工艺验证
为了验证提取工艺的稳定性与合理性[Xie YP,Zhao Y,Wang YJ,etal.Extraction process of effective parts of Salvia miltiorrhiza forosteoporosis[J].Central South Pharmacy(中南药学),2019,17(03):389-393.],所开展的验证试验按照处方比例称取3份药材10倍量的70%乙醇加热回流2.5h,按“2.1.1”“2.1.2”方法制备溶液,按“2.3.1.1”、“2.3.1.2”进样测定,测定峰面积。进样测定,黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、芒果苷、知母皂苷B II、干膏率经过赋值之后的得到的综合评分为89.74%±6.3%,综合评分较为稳定,说明该工艺合理稳定可行。
3.讨论
由于文献报道的所有正交试验优选生产工艺的方法基本上不考虑成本因素,这样优选出的最优工艺很可能从成本-效益的角度上缺乏合理性和可行性[张玉军,莫志江.文献中正交试验的常见问题分析和解决方法[J].中国现代应用药学,2013,30(6):696-700.],因此本发明在进行正交试验设计法时首先采用单因素考察醇提工艺中的3个关键因素乙醇浓度、加醇量和提取时间,获得优选的各因素的3个候选的优选参数,进而再对升陷汤的醇提工艺中的3个关键参数乙醇浓度、加醇量和提取时间3个因素进行考察,获得最优工艺。
诸多的临床研究和基础实验已经证实了黄芪甲苷对心脏的保护作用,以及知母皂苷BII的心血管保护功效,而上述两种化合物在含乙醇量较高的溶剂中的提取率远远大于以水为溶剂的提取率[Xie YP,Zhao Y,Wang YJ,et al.Extraction process ofeffective parts of Salvia miltiorrhiza for osteoporosis[J].Central SouthPharmacy(中南药学),2019,17(03):389-393.],因此本发明考察了升陷汤的醇提工艺。在化合物检测方法中,我们尝试采用一种前处理方法和一种HPLC检测分析方法完成对4个指标性成分的前处理和定量分析,但由于黄芪甲苷的HPLC检测需要采用适当比例的氨试液处理提取液[国家药典委员会.《中国药典》[S].2020年版一部.北京:中国医药科技出版社,2020,315-316.],而这样的处理方法会破坏知母皂苷B II的结构从而导致其峰形异常,不能进行定量分析。因此,本发明针对上述4个指标性成分的结构特点,建立了2种不同的HPLC检测方法,从而才能完成定量分析的要求。
多指标综合评分法是目前中药提取工艺多指标评价的常用方法,根据指标成分在药理及提取的过程中贡献度的大小给予不同的权重系数,此方法具有更加科学全面的分析结果,故本发明采用多指标综合评分法对评价指标进行综合评分,并采用正交试验主观及SPSS一般线性模型两个方法加以综合考虑,使得综合评分的结果更为科学、合理,从而获得最优提取工艺。综上,本发明最终选择为黄芪、知母、桔梗、柴胡和升麻加10倍量的70%乙醇回流2.5h作为升陷汤最佳醇提工艺。
以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明,但本发明创造并不限于所述实施例,熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可做出种种的等同的变型或替换,这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。
Claims (7)
1.一种升陷汤提取工艺的优选方法,其特征在于,通过对升陷汤中的黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、芒果苷、知母皂苷B II转移率权重进行赋值得到综合评分,进而采用SPSS一般线性模型方法对最佳权重系数所评估分数进行方差分析,按照正交试验优选升陷汤的最佳醇提工艺。
2.根据权利要求1所述的升陷汤提取工艺的优选方法,其特征在于,所述的优选方法中,首先采用单因素考察醇提工艺中的3个关键因素乙醇浓度、加醇量和提取时间,获得优选的各因素的3个候选的优选参数,进而再对升陷汤的醇提工艺中的3个关键参数乙醇浓度、加醇量和提取时间3个因素进行考察,获得最优工艺。
3.根据权利要求1所述的升陷汤提取工艺的优选方法,其特征在于,所述的优选方法包括以下步骤:
A、单因素试验,考察不同提取溶剂:水及40%、50%、60%、70%、80%的乙醇,不同溶剂倍数:4、6、8、10、12倍体积,不同回流提取时间:0.5h、1.0h、1.5h、2h、2.5h,对芒果苷、毛蕊异黄酮苷、知母皂苷B II和黄芪甲苷提取率的影响;
B、结合醇提的实际生产,确定提取次数为一次,最终设置因素水平为:乙醇浓度60%、70%、80%,加醇倍量6、8、10倍,提取时间1.5h、2.0h、2.5h、按L9(3)4正交设计实验表;
C、结合各化合物对慢性心力衰竭的影响及各自对应药材在处方中的用量,加权评分法设定确定黄芪甲苷转移率、毛蕊异黄酮苷转移率、知母皂苷B II转移率、芒果苷转移率以及干膏率的权重系数;直观分析结果表明最佳因素水平组合;
D、采用SPSS分析软件的一般线性模型进行方差分析,将得到的实验结果作为因变量,并把乙醇浓度、提取时间、甲醇倍数这三个条件设为固定因子,再在选择模型的构建项中把以上三个条件都以主效应放入模型,最后进行分析,结合正交分析的结果,可得最佳因素水平组合。
4.根据权利要求1所述的升陷汤提取工艺的优选方法,其特征在于,所述的优选方法中,还包括对4个指标性成分的前处理和定量分析方法,通过HPLC-DAD-ELSD方法同时测定芒果苷、毛蕊异黄酮苷及知母皂苷B II的含量,通过HPLC-ELSD方法测定黄芪甲苷的含量。
5.根据权利要求4所述的升陷汤提取工艺的优选方法,其特征在于,所述的HPLC-DAD-ELSD方法同时测定芒果苷、毛蕊异黄酮苷及知母皂苷B II的含量的色谱条件为:
色谱柱:waters-sunfire-C18柱,4.6×250mm,5μm;流动相A-乙腈、B-0.2%甲酸溶液,柱温:30℃;流速:1.0mL/min进样量:10μL;检测器条件:DAD设置:λ=260nm,ELSD漂移管温度为70℃,载气流速为1.5mL/min,梯度洗脱程序为0~5min 10%~15%A,5~12min 15%~15%A,20~40min 20~40%A,40~45min 40~95%A。
6.根据权利要求4所述的升陷汤提取工艺的优选方法,其特征在于,所述的通过HPLC-ELSD方法测定黄芪甲苷的含量色谱条件为:
色谱柱:waters-sunfire-C18柱,4.6×250mm,5μm;柱温:30℃;流速:1.0mL/min;进样量:10μL,DAD,λ=260nm,ELSD,漂移管温度70℃,载气流速1.5mL/min,流动相:A(乙腈)-B(0.2%FA)溶液,梯度洗脱0~5min 10~32%A,5~15min 32%~48%A,15~20min 48%~48%A,20~25min 48~95%A。
7.一种基于如权利要求1-6任一所述优选方法得到的升陷汤最佳醇提工艺,其特征在于,所述的升陷汤最佳醇提工艺为黄芪、知母、桔梗、柴胡和升麻加10倍量的70%乙醇回流2.5h。
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