CN115340528A - 一种具有抗肿瘤活性的化合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种具有抗肿瘤活性的化合物及其用途。作为PRMT5抑制剂，本发明的化合物具有式(I)所示结构。实验证实，这些化合物对PRMT5酶活性以及肿瘤细胞生长都具有较强的抑制作用，可作为治疗由PRMT5抑制剂介导的疾病的前景化合物。此外，本发明研究了特定的合成方法，该合成方法工艺简单，操作便捷，利于规模化工业生产和应用。

Description

一种具有抗肿瘤活性的化合物及其用途
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及作为PRMT5抑制剂的化合物，以及该化合物的制备方法及用途。
背景技术
PRMT5是蛋白质精氨酸甲基转移酶(PRMTs)中的一种，是英文名字Proteinarginine N-methyltransferase 5的缩写，是表观遗传(epigenetic)修饰相关的新型抗肿瘤靶标。它有好几个别名，分别是Hsl7、Jbp1、Skb1、Capsuleen或Dart5。PRMT5是精氨酸单甲基化、对称二甲基化的主要酶。越来越多的文献证明蛋白质精氨酸甲基转移酶在不同的生物过程中起关键作用，如细胞生长增殖、凋亡、转移等。
蛋白质精氨酸甲基转移酶的作用是从S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine，或AdoMet或SAM)中转移一个甲基到组蛋白或其他蛋白质中的精氨酸残基上，形成甲基精氨酸和S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine，或SAH)。目前，已经鉴定出9种该家族的成员(PRMT1～9)，根据其催化精氨酸甲基化方式的不同，PRMTs可分为三种类型：I型PRMTs包括PRMT1、PRMI2、PRMT3、PRMT4、PRMT6和PRM8，催化单甲基精氨酸(MMA)和不对称二甲基精氨酸(aDMA)；II型PRMTs包括PRMT5和PRMT9，催化MMA和对称二甲基精氨酸(sDMA)；III型PRMTs为PRMT7，只能催化MMA。PRMT5作为一种表观遗传酶，能对称性地甲基化组蛋白或者非组蛋白底物的精氨酸残基，影响多个靶基因及多条信号通路途径，在蛋白质的甲基化中起着重要的作用，如参与可变剪切、转录后调节、RNA的加工、细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡和肿瘤形成等。选择性抑制PRMT5的物质可作为一个潜在的、强有力的抗癌新药。以PRMT5为靶点的新药开发对解决未满足的临床需求有积极的填补空白的作用。
在过去几年内，有不少有关PRMT5抑制剂的报道，此类报道可参见WO2014100719A、WO2019102494A、WO2015200677A、WO2015200680A、WO2014100764A、WO2014100730A、WO2014100716A、WO2014100695A、WO2019173804A、CN108570059 A、WO2018167269A等。并且，已经有两例化合物JNJ-64619178和GSK-3326595用于临床治疗实体瘤和套细胞淋巴瘤。
Figure BDA0003640361420000011
JNJ-64619178是强生公司研发的一种具有选择性的PRMT5抑制剂，在体外对多种肿瘤细胞的生长具有抑制作用。强生公司选择了大量的异种移植(Xenograft)动物模型来证明其有效的抗肿瘤作用，例如，选择了小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、急性髓系白血病(AML)和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma)的Xenograft模型进行抗肿瘤实验。在模型中观察到高达99％的显著的肿瘤生长抑制，停药后数周内肿瘤生长持续受到抑制。JNJ-64619178可抑制SMD1/3蛋白，肿瘤剪接体的核心成分的Sym-Arg二甲基化以及血清蛋白的Sym-Arg二甲基化。这些可以作为在Xenograft模型中PRMT5抑制肿瘤生长的药效学标记物。在SCLC模型中，在给药期间和给药后都观察到PRMT5对SMD1/3二甲基化的有效和长期抑制作用。基于这些高选择性和高效性、良好的药代动力学和安全性、明显的临床前疗效和药效结果，JNJ-64619178于2018年开始进行一期临床试验。
GSK-3326595是由EPZ015666(结构如下)优化而来，是一种高选择性、可口服的小分子，是第一代PRMT5抑制剂。EPZ015666在套细胞淋巴瘤方面表现出显著的体内外活性，葛兰素史克公司(GSK)通过两年的优化和临床前研究，于2016年9月宣布GSK-3326595首次率先进入了临床。在2019年的ESMO大会上，葛兰素史克公司公布了GSK-3326595的临床一期数据。GSK-3326595的I期临床选择的是成年实体瘤病人，主要目的是进行安全性，耐受性以及PK/PD测试，并收集药效数据(ORR和DCR)。数据显示，GSK3326595的PK在血浆中呈剂量依赖性。
Figure BDA0003640361420000021
尽管已公开了一些PRMT5抑制剂小分子，但目前还没有PRMT5抑制剂开发上市，因此开发新的，具有上市潜力的，具有更好药效、药代结果的化合物仍是迫切需要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种作为PRMT5抑制剂的具有全新结构的化合物，该化合物的制备方法，及其治疗由PRMT5抑制剂介导的疾病方面的用途。
本发明的第一方面，提供了一种如下式(I)所示的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，
Figure BDA0003640361420000022
其中，L1和L2各自独立地选自-C(R1)(R2)-、-C(R1)(R2)C(R1)(R2)-、-C(R1)(R2)C(R1)(R2)C(R1)(R2)-其中的一种；其中，R1、R2每次出现时独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、-OR3、-NHR3、-NR3R4其中的一种；R3、R4每次出现独立地选自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基；
X选自C(R5)或N；其中，R5每次出现时独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基其中的一种；
Y选自-(化学键)、-H、-OH、-NH2、卤素、-O-、-S-、-CO-、-C(R6)F-、-CF2-、-SO-、-SO2-、-(CH2)pN(R6)-、-N(R6)(CH2)p-、-S(O)N(R6)-、-S(O)2N(R6)-、-N(R6)SO-、-N(R6)S(O)2-、-C(O)N(R6)-、-N(R6)C(O)-、-CH(R6)-其中的一种；其中，p＝0，1，2或3；R6可选自氢、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C3-6环烷基、任选取代的4-6元杂环基其中的一种；所述任选取代是指被取代基团上的氢未被取代或被取代基团的一个或多个可取代位点独立地被选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基所取代；当Y选自-H、-OH、-NH2、卤素其中的一种时，G4不存在；
Z选自-(化学键)、-O-、-S-、-CO-、-N(R7)-、-S(O)N(R7)-、-S(O)2N(R7)-、-N(R7)SO-、-N(R7)S(O)2-、-C(O)N(R7)-、-N(R7)C(O)-、-N(R7)C(O)N(R7)-、-CH(R7)-、-CH(OH)-、-CH(CF3)-、-CH(NHR7)-、-C＝N(R7)-、-SO-、-SO2-、-CF(R7)-、CF2、
Figure BDA0003640361420000023
其中的一种；其中R7每次出现时独立地选自氢、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C3-6环烷基、任选取代的C1-6烷氧基、任选取代的4-6元杂环基其中的一种；所述任选取代是指被取代基团上的氢未被取代或被取代基团的一个或多个可取代位点独立地被选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基所取代；
G1每次出现时独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、C1-5直链烷基或支链烷基其中的一种；
G2选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、任选取代的R8、任选取代的-O(R8)、任选取代的-S(R8)、任选取代的-NH(R8)、任选取代的-N(R8)(R8)其中的一种；其中R8每次出现时独立地选自C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环基其中的一种；所述任选取代是指被取代基团上的氢未被取代或被取代基团的一个或多个可取代位点独立地被选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基所取代；
G3选自任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的C3-7环烷基、任选取代的4-10元杂环基中的一种；所述任选取代是指被取代基团上的氢未被取代或被取代基团的一个或多个可取代位点独立地被R16所取代，其中，R16每次出现独立地选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氨基、硝基、氰基、-R9、-OR9、-OR9-N(R9)(R10)、-OR9-OR10、-SR9、SO(R9)、-SO2(R9)、-COOR9、-NH(R9)、-N(R9)(R10)、-N(R9)(R10)-N(R9)(R10)、-CONHR9、-CON(R9)(R10)、-SONH(R9)、-SON(R9)(R10)、SO2NH(R9)、-SO2N(R9)(R10)；其中，R9、R10每次出现独立地选自氢，或可被氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、硝基、甲氧基、-COOCH3、-COCH3、-COOC(CH3)3、-CH2-N(CH3)(CH3)、-N(CH3)(CH3)、-NH(CH3)、C1-6烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基中的一个或多个任意取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10环烷基、4-10元杂环基、芳基、5-10元杂芳基；
G4选自以下基团：-SO2(CH3)、任选取代的C1-12烷基、任选取代的C2-12烯基、任选取代的C2-12炔基、任选取代的C3-12环烷基、任选取代的4-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基中的一种；所述任选取代是指被取代基团上的氢未被取代或被取代基团的一个或多个可取代位点独立地被R17取代，R17每次出现独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、羧基、氧代基、亚砜基、-R11、-OR11、-SR11、-NH(R11)、-N(R11)(R11)、
Figure BDA0003640361420000031
其中，R11每次出现独立地选自可被氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、氧代基、C1-6烷基、三氟甲基、C3-6环烷基、4-6元杂环烷基、芳基、5-6元杂芳基中的一个或多个任意取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C3-6环烷氧基、4-10元杂环基、芳基、5-6元杂芳基；D每次出现独立地选自键、-CH2-、-C(＝O)-、-NH-、-N(CH3)-、-O-、-S-其中的一种，f每次出现独立地选自0，1，2，3，4，5，6，7或8。
m＝0或1，当m＝1时，A可选自-N(R12)-、-CH(R12)-或-CH(NHR12)-，其中，R12可选自氢、羟基、卤素、C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环基其中的一种；当m＝0时，A不存在；
B可选自N或CH；
n＝0或1，当n＝1时，E可选自-NR13-或-C(R13)R13-，R13每次出现独立地选自氢、羟基、卤素、C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环基其中的一种；当n＝0时，E不存在；
A，B，E中至少有一个为符合各自定义的N原子；
o＝0，1，2或3；
K可选自-CH2-、-C(＝O)-、-CHF-、-CH(-OH)-、-CF2-、-CHD-、-CD(-OH)-、-CDF-、-CD2-或-CH(R18)-；R18每次出现独立地选自卤素、巯基、硝基、氰基、氨基、C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环基其中的一种；
H环选自C6-10芳基环、5-10元杂芳基环其中的一种；所述芳基环或杂芳基环可被一个或多个R15独立取代，其中R15每次出现独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、任选取代的-R14、任选取代的-OR14、任选取代的-NHR14、任选取代的-N(R14)(R14)；其中，R14每次出现独立地选自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基；所述任选取代是指被取代基团上的氢未被取代或被取代基团的一个或多个可取代位点独立地被选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基所取代。
在本发明的一个优选实施方案中，式(I)所示的化合物进一步为式(II)B所示结构：
Figure BDA0003640361420000041
其中，式(II)B中各取代基定义如式(I)所述。
在进一步优选实施方案中，R1、R2每次出现时独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、-OR3、-NH(R3)、-N(R3)(R4)其中的一种；R3、R4每次出现独立地选自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基。更进一步优选R1、R2每次出现时独立地为氢、卤素、羟基、氨基、甲基、甲基氨基、二甲基氨基其中的一种；最优选为氢。
在本发明的一些优选实施方案中，X优选自CH、C(OH)、N其中的一种；最优选为N。
优选的，Y选自-(化学键)、-H、-OH、-NH2、卤素、-O-、-S-、-CO-、-C(R6)F-、-CF2-、-SO-、-SO2-、-(CH2)pN(R6)-、-N(R6)(CH2)p-、-S(O)N(R6)-、-S(O)2N(R6)-、-N(R6)SO-、-N(R6)S(O)2-、-C(O)N(R6)-、-N(R6)C(O)-、-CH(R6)-其中的一种，其中，p＝0，1，2或3；R6可选自氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环基其中的一种，当Y选自-H、-OH、-NH2、卤素其中的一种时，G4不存在。
更优选的，Y选自-(化学键)、-H、-OH、-NH2、-NH-、-O-、-S-、-CO-、-CHF-、-CF2-、-SO-、-SO2-、-(CH2)pNH-、-N(CH3)-、-S(O)NH-、-S(O)2NH-、-NHSO-、-NHS(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-CH2-其中的一种，其中，p＝1，2或3。
进一步优选的，Y选自-(化学键)、-H、-OH、-NH2、-NH-、-CH2NH-、-(CH2)2NH-、-N(CH3)-、-O-、-S-其中的一种。
进一步优选的，Y选自-(化学键)、-OH、-NH2、-NH-、-O-、-S-。
最优选的，Y选自-(化学键)、-NH-。
在本发明的一些优选实施方案中，Z选自-(化学键)、-O-、-S-、-CO-、-N(R7)-、-S(O)N(R7)-、-S(O)2N(R7)-、-N(R7)SO-、-N(R7)S(O)2-、-C(O)N(R7)-、-N(R7)C(O)-、-N(R7)C(O)N(R7)-、-CH(R7)-、-CH(OH)-、-CH(CF3)-、-CH(NHR7)-、-C＝N(R7)-、-SO-、-SO2-、-CF(R7)-、CF2、
Figure BDA0003640361420000042
其中的一种，其中R7每次出现时独立地选自氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、4-6元杂环基其中的一种。
更优选的，Z选自-(化学键)、-O-、-S-、-CO-、-NH-、-S(O)2NH-、-NHS(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、-CH2-、-CH(OH)-、-CH(CF3)-、-CH(NH2)-、-C＝N(CH3)-、-C＝N(OCH3)-、-SO-、-SO2-、-CHF-、CF2、
Figure BDA0003640361420000043
中的一种。
最优选的，Z选自-(化学键)、-O-、-CO-、-NH-、-C(O)NH-、-CH2-、-CH(OH)-、-CH(CF3)-、-CH(NH2)-、-C＝N(CH3)-、-C＝N(OCH3)-、-SO2-、-CHF-、CF2、
Figure BDA0003640361420000044
中的一种。
进一步优选的，Z选自-CO-、-SO2-；最优选的，Z选自-CO-。
在本发明的一些优选实施方案中，G1每次出现时独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、甲基其中的一种；更优选的，G1选自氢。
在本发明的一些优选实施方案中，G2选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、-R8、-O(R8)、-S(R8)、-NH(R8)、-N(R8)(R8)其中的一种，其中R8每次出现时独立地选自C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环基其中的一种；更优选的，G2选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、-CH3、环丙基、-OCH3、-SCH3、-NHCH3、-N(CH3)(CH3)、-NH(CH3)其中的一种；更优选的，G2选自氟、羟基、氨基；最优选的，G2选自羟基、氨基。
在本发明的一些优选实施方案中，G3选自任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的4-10元杂环基中的一种，其中5-10元杂芳基中杂原子为N、O、S，杂原子数为1，2，3或4个，所述任选取代是指被取代基团上的氢未被取代或被取代基团的一个或多个可取代位点独立地被R16所取代。
在本发明的更进一步优选实施方案中，G3为任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的4-10元杂环基中的一种，所述C6-10芳基、5-10元杂芳基或4-10元杂环基选自：
Figure BDA0003640361420000051
Figure BDA0003640361420000052
其中的一种，所述任选取代是指被取代基团上的氢未被取代或被取代基团的一个或多个可取代位点独立地被R16所取代。R16每次出现独立地选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、-R9、-OR9、-SR9、SO(R9)、-SO2(R9)、-COOR9、-NH(R9)、-N(R9)(R10)、-CONHR9、-CON(R9)(R10)、-SONH(R9)、-SON(R9)(R10)、SO2NH(R9)、-SO2N(R9)(R10)；进一步优选地，R16每次出现独立地选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、-R9、-OR9、-SR9、SO(R9)、-COOR9、-NH(R9)、-N(R9)(R10)、-CON(R9)(R10)；最优选，R16每次出现独立地选自氢、氘、卤素、氰基、-R9、-OR9、-SR9、SO(R9)、-N(R9)(R10)。
进一步优选地，R9、R10每次出现独立地选自可被氢、卤素、羟基、巯基、氨基、甲氨基、二甲氨基、甲氧基、-C(O)CH3、-COOC(CH3)3、-COOCH3、氰基、C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基中的一个或多个任意取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-10元杂环基、芳基、5-10元杂芳基；最优选，R9、R10每次出现独立地选自可被氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-3烷基、C3-6环烷基、4-5元杂环基、甲氨基、二甲氨基、甲氧基、-C(O)CH3、-COOC(CH3)3、-COOCH3中的一个或多个任意取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-10元杂环基、苯基、5-10元杂芳基。
在本发明的更进一步优选实施方案中，G3为
Figure BDA0003640361420000061
在本发明的更进一步优选实施方案中，R16每次出现独立地选自氢、氘、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3、-SCH2CH3、-S-C(CH3)3、-O-C(CH3)3、-O-CH(CH3)2、-O-CH2CH(CH3)2、-O-CH(CH2CH3)2、-S-CH(CH3)2、-S-CH2CH(CH3)2、-S-CH(CH2CH3)2。
在本发明的一些优选实施方案中，G4选自以下基团：-SO2(CH3)、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C3-12环烷基、任选取代的4-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基中的一种，所述任选取代是指被取代基团上的氢未被取代或被取代基团的一个或多个可取代位点独立地被R17取代，R17每次出现独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、羧基、氧代基、-R11、-OR11、-SR11、-NH(R11)、-N(R11)(R11)、
Figure BDA0003640361420000062
其中，R11每次出现独立地选自可被氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、氧代基、C1-6烷基、三氟甲基、C3-6环烷基、4-6元杂环烷基、芳基、5-6元杂芳基中的一个或多个任意取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-10元杂环基、芳基、5-6元杂芳基；D每次出现独立地选自键、-CH2-、-C(＝O)-、-NH-、-N(CH3)-、-O-、-S-其中的一种，f每次出现时独立地选自0，1或2。
在本发明的更进一步优选实施方案中，G4选自：
Figure BDA0003640361420000063
Figure BDA0003640361420000071
Figure BDA0003640361420000072
其中的一种；最优选的，G4选自：
Figure BDA0003640361420000073
其中，上述基团存在一个或多个R17取代，位于基团任意可取代位点。
优选地，R17每次出现独立选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、羧基、氧代基、亚砜基、砜基、-R11、-OR11、-SR11、-NH(R11)、-N(R11)(R11)、
Figure BDA0003640361420000074
Figure BDA0003640361420000081
优选地，R11每次出现独立地选自氢、羟基、氰基、氨基、三氟甲基、二氟甲基、三氟乙基、二氟乙基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、环丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、C6-8芳基、5-6元杂芳基其中的一种。
最优选的，R17选自
Figure BDA0003640361420000082
其中，R11选自氢、甲基、乙基、环丙基、环丁基、苯基中的一种。
在本发明的一些优选实施方案中，A不存在。
在本发明的一些优选实施方案中，B选自N。
在本发明的一些优选实施方案中，n＝1，E选自-CH(R13)-或-N(R13)-，R13选自氢、羟基、卤素、甲基其中的一种；更优选的，n＝1，E选自-CH2-或-NH-；最优选的，n＝1，E选自-CH2-。
在本发明的一些优选实施方案中，o＝0，1或2，更优选的，o＝1。
在本发明的一些优选实施方案中，K可选自-CH2-、-C(＝O)-、-CHF-、-CH(-OH)-、-CF2-、-CHD-、-CD(-OH)-、-CDF-、-CD2-；更优选的，K可选自-CH2-、-C(＝O)-、-CF2-、-CHD-、-CHF-、-CD2-；最优选的，K可选自-CH2-、-C(＝O)-、-CF2-、-CD2-、-CHD-；最优选的，K可选自-CD2-。
在本发明的一些优选实施方案中，H环选自苯环、5-6元杂芳基环、5元并6元杂芳环、6元并5元杂芳环其中的一种，所述苯环、5-6元杂芳基环、5元并6元杂芳环、6元并5元杂芳环可被一个或多个R15独立取代，其中，R15选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基。
作为其中一种优选方案，H环为苯环，所述苯环可独立地被一个或多个R15取代。
作为其中一种优选方案，H环为5-6元杂芳基环，选自：
Figure BDA0003640361420000083
Figure BDA0003640361420000084
所述5-6元杂芳基环可独立地被一个或多个R15取代。
作为其中一种优选方案，H环为5元并6元杂芳环，选自：
Figure BDA0003640361420000085
Figure BDA0003640361420000086
所述5元并6元杂芳环可独立地被一个或多个R15取代。
作为一种优选方案，H环为6元并5元杂芳环，选自：
Figure BDA0003640361420000091
所述6元并5元杂芳环可独立地被一个或多个R15取代。
进一步优选地，R15选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基。
在本发明的一些优选实施方案中，式(I)中的
Figure BDA0003640361420000092
为
Figure BDA0003640361420000093
在本发明的一些优选实施方案中，式(II)B中的
Figure BDA0003640361420000094
为
Figure BDA0003640361420000095
在本发明的一些优选实施方案中，式(I)或式(II)B中的G3为
Figure BDA0003640361420000096
其中R16如式(I)中所定义；
优选地，R16选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、-R9、-OR9、-SR9、-NH(R9)和-N(R9)(R10)；
每次出现时，R9、R10各自独立地选自C1-6烷基和C3-6环烷基，或者R9和R10与其所连接的N原子共同形成4-6元杂环基。
在本发明的一些优选实施方案中，式(I)或式(II)B中的G4为
Figure BDA0003640361420000097
其中R11如式(I)中所定义；
优选地，R11选自C6-8芳基和5-6元杂芳基，所述芳基或杂芳基任选地被卤素、C1-6烷基、三氟甲基中的一个或多个取代；
所述杂环基或杂芳基包含1、2或3个杂原子，所述杂原子各自独立地选自N、O和S。
在本发明的一些优选实施方案中，式(I)所示的化合物进一步为式(III)所示结构：
Figure BDA0003640361420000101
其中，
R16选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、-R9、-OR9、-SR9、-NH(R9)和-N(R9)(R10)；
每次出现时，R9、R10各自独立地选自C1-6烷基和C3-6环烷基，或者R9和R10与其所连接的N原子共同形成4-6元杂环基；
R11选自C6-8芳基和5-6元杂芳基，所述芳基或杂芳基任选地被卤素、C1-6烷基、三氟甲基中的一个或多个取代；
所述杂环基或杂芳基包含1、2或3个杂原子，所述杂原子各自独立地选自N、O和S。
在本发明的一些更优选实施方案中，R16选自氢、氘、-R9、-OR9、-SR9和-N(R9)(R10)，其中R9和R10如式(III)中所定义。
在本发明的一些进一步优选实施方案中，R16选自氢、氘、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2、-OCH2CH(CH3)2、-OC(CH3)3、-OCH(CH2CH3)2、-O-环丙基、-O-环丁基、-O-环戊基、-O-环己基、-SCH3、-SCH2CH3、-SCH(CH3)2、-SCH2CH(CH3)2、-SC(CH3)3、-SCH(CH2CH3)2、-S-环丙基、-S-环丁基、-S-环戊基、-S-环己基、吖丁啶-1-基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基和3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基。
在本发明的一些更优选实施方案中，R11选自苯基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基和吡嗪基，所述苯基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基或吡嗪基任选地被氟、甲基、三氟甲基中的一个或多个取代。
在本发明的一些进一步优选实施方案中，R11选自苯基、2-氟苯基、3-氟苯基、4-氟苯基、2-甲基苯基、3-甲基苯基、4-甲基苯基、2-(三氟甲基)苯基、3-(三氟甲基)苯基、4-(三氟甲基)苯基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、1-甲基-1H-吡唑-3-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基、1-甲基-1H-吡唑-5-基、异噁唑-3-基、异噁唑-4-基、异噁唑-5-基、噻唑-2-基、噻唑-4-基、噻唑-5-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、嘧啶-2-基、嘧啶-4-基和嘧啶-5-基。
在本发明的一些更优选实施方案中，式(I)所示的化合物进一步为式(III)A或式(III)B所示结构：
Figure BDA0003640361420000102
其中，R11和R16如式(III)中所定义。
本发明所述化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，选自如下化合物：
Figure BDA0003640361420000111
Figure BDA0003640361420000121
Figure BDA0003640361420000131
Figure BDA0003640361420000141
Figure BDA0003640361420000151
Figure BDA0003640361420000161
Figure BDA0003640361420000171
Figure BDA0003640361420000181
Figure BDA0003640361420000191
Figure BDA0003640361420000201
Figure BDA0003640361420000211
Figure BDA0003640361420000221
Figure BDA0003640361420000231
Figure BDA0003640361420000241
Figure BDA0003640361420000251
Figure BDA0003640361420000261
Figure BDA0003640361420000271
Figure BDA0003640361420000281
Figure BDA0003640361420000291
本发明目的还包括提供制备通式(I)所示化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物的方法。
所述方法例如可以使用方案1中示出的方法来制备，可以通过先将G3-Z结构的左侧链的LGa(离去基团a)与G4-YH连接，再将环状结构的LGc(离去基团c)与G3-Z结构的右侧链LGb(离去基团b)进行连接，合成得到目标化合物。方案1如下：
Figure BDA0003640361420000292
所述方法例如可以使用方案2中示出的方法来制备，可以通过先将环状结构的LGc(离去基团c)与G3-Z结构的右侧链LGb(离去基团b)进行连接，再将先将G3-Z结构的左侧链的LGa(离去基团a)与G4-YH连接，合成得到目标化合物。方案2如下：
Figure BDA0003640361420000301
其中，上述制备方法中，所示化合物中各取代基定义如前所述。
本发明还提供一种药用组合物，其包含本发明所述化合物，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，以及药学上可接受的辅料。
本发明的目的还包括提供本发明所述化合物，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物在制备预防和/或治疗由PRMT5抑制剂介导的疾病的药物中的用途。
在一些实施例中，所述由PRMT5抑制剂介导的疾病为癌症或肿瘤相关疾病。
本发明的目的还包括提供一种预防和/或治疗由PRMT5抑制剂介导的疾病的方法，其包括向患者施用治疗有效剂量的本发明所述化合物，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记的类似物或本发明所述药物组合物。
在一些实施例中，所述由PRMT5抑制剂介导的疾病为癌症或者肿瘤相关疾病。
在一些实施例中，所述癌症或者肿瘤相关疾病优选淋巴瘤。
当将本发明所述化合物或其可药用盐与另外的用于治疗癌症或肿瘤的抗癌剂或免疫检查点抑制剂组合施用时，本发明所述化合物或其可药用盐可提供增强的抗癌作用。
本发明的有益效果：
本发明设计了一类结构新颖的化合物，为PRMT5抑制剂类的药物的发展提供了一个新的方向。体外酶活抑制活性研究显示，这些化合物对PRMT5酶都具有较强的抑制作用，且对于人源B细胞非霍奇金淋巴瘤Z-138细胞株皮下异种移植NOD/SCID雌性小鼠试验显示具有优异的肿瘤抑制效果，小鼠体内药代动力学试验显示其具有优异的代谢特性，因此其可作为治疗PRMT5抑制剂介导的疾病的前景化合物。此外，本发明研究了特定的合成方法，该合成方法工艺简单，操作便捷，利于规模化工业生产和应用。
具体实施方式
[术语定义]
除另有规定外，术语“烷基”指一价饱和脂肪族烃基团，包含1-20个碳原子的直链或支链基团，优选包含1-10个碳原子(即C1-10烷基)，进一步优选包含1-8个碳原子(C1-8烷基)，更优选包含1-6个碳原子(即C1-6烷基)，例如“C1-6烷基”指的是该基团为烷基，且碳链上的碳原子数量在1-6之间(具体地为1个、2个、3个、4个、5个或6个)。实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、新戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、正庚基、正辛基等。
除另有规定外，术语“环烷基”指的是具有特定碳原子数的单环饱和脂烃基，优选地包含3-12个碳原子(即C3-12环烷基)，更优选包含3-10个碳原子(C3-10环烷基)，进一步优选3-6个碳原子(C3-6环烷基)、4-6个碳原子(C4-6环烷基)、5-6个碳原子(C5-6环烷基)。实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、甲基环丙基、2-乙基-环戊基、二甲基环丁基等。
除另有规定外，术语“烷氧基”指-O-烷基，所述烷基的定义同上，即包含1-20个碳原子，优选地，包含1-10个碳原子，较佳地1-8个碳原子，更佳地1-6个碳原子(具体地为1个、2个、3个、4个、5个或6个)。代表的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、1-甲基丙氧基、2-甲基丙氧基、叔丁氧基、戊氧基、1-甲基丁氧基、2-甲基丁氧基、3-甲基丁氧基、1,1-二甲基丙氧基、1,2-二甲基丙氧基、2,2-二甲基丙氧基、1-乙基丙氧基等。
除另有规定外，术语“卤素”或“卤代”是指F、Cl、Br、I。术语“卤代烷基”是指如上所定义的烷基中一个、两个或多个氢原子或全部氢原子被卤素取代。卤代烷基的代表性例子包括CCl3、CF3、CHCl2、CH2Cl、CH2Br、CH2I、CH2CF3、CF2CF3等。
除另有规定外，术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环、双环或多环环状烃取代基，为非芳香结构，包含3-20个环原子，其中1个、2个、3个或更多个环原子选自N、O或S，其余环原子为C。优选包含3-12个环原子，进一步优选包含3-10个环原子，或3-8个环原子，或3-6个环原子，或4-6个环原子，或5-6个环原子。杂原子优选1-4个，更优选1-3个(即1个、2个或3个)。单环杂环基的实例包括吡咯烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吡喃基等。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。
除另有规定外，术语“碳环基”或“碳环”是指具有从3到14个环碳原子的一种非芳香族环状烃基(“C3-14碳环基”)并且在该非芳香族环系统中不具有杂原子。在一些实施例中，碳环基基团具有3-12个环碳原子(“C3-12碳环基”)、或4-12个环碳原子(“C4-12碳环基”)、或3到10个环碳原子(“C3-10碳环基”)。在一些实施例中，碳环基基团具有3到8个环碳原子(“C3-8碳环基”)。在一些实施例中，碳环基基团具有3到7个环碳原子(“C3-7碳环基”)。在一些实施例中，碳环基基团具有4到6个环碳原子(“C4-6碳环基”)。在一些实施例中，碳环基基团具有5到10个环碳原子(“C5-10碳环基”)、或5到7个环碳原子(“C5-7碳环基”)。示例性C3-6碳环基基团包括，但不限于环丙基(C3)、环丙烯基(C3)、环丁基(C4)、环丁烯基(C4)、环戊基(C5)、环戊烯基(C5)、环己基(C6)、环己烯基(C6)、环己二烯基(C6)等。示例性C3-8碳环基基团包括，但不限于前面提到的C3-6碳环基基团以及环庚基(C7)、环庚烯基(C7)、环庚二烯基(C7)、环庚三烯基(C7)、环辛基(C8)、环辛烯基(C8)、二环[2.2.1]庚烷基(C7)、二环[2.2.2]辛烷基(C8)等。示例性C3-10碳环基基团包括，但不限于前面提到的C3-8碳环基基团以及环壬基(C9)、环壬烯基(C9)、环癸基(C10)、环癸烯基(C10)、八氢-1H-茚基(C9)、十氢萘基(C10)、螺[4.5]癸烷基(C10)等。如上述实例说明，在某些实施例中，该碳环基基团是单环的(“单环碳环基”)或是一种稠合的(稠环基)、桥接的(桥环基)或螺接-稠合(螺环基)的环系统，如一个双环系统(“双环碳环基”)并且可以是饱和的或可以是部分不饱和的。“碳环基”还包括其中如上所定义的该碳环基环被一个或多个芳基或杂芳基基团稠合的环系统，其中附接点是在该碳环基环上，并且在此类情况下，碳的数目继续指示该碳环系统中的碳的数目。在某些实施例中，碳环基基团的每个例子独立地是可任选取代的，例如，未取代的(一种“未取代的碳环基”)或被一个或多个取代基取代的(一种“取代的碳环基”)。在某些实施例中，该碳环基基团是未取代的C3-10碳环基。在某些实施例中，该碳环基基团是一种取代的C3-10碳环基。
除另有规定外，术语“芳基”表示含有6-16个碳原子，或6-14个碳原子，或6-12个碳原子，或6-10个碳原子的单环、双环和三环的芳香碳环体系，优选6-10个碳原子，术语“芳基”可以和术语“芳香环”交换使用。芳基基团的实例可以包括但不限于苯基、萘基、蒽基、菲基或芘基等。
除另有规定外，术语“杂芳基”表示含有5-12元结构，或优选5-10元结构，5-8元结构，更优选5-6元结构的芳香单环或者多环环状系统，其中1个、2个、3个或更多个环原子为杂原子且其余原子为碳，杂原子独立地选自O、N或S，杂原子数量优选为1个、2个或3个。杂芳基的实例包括但不限于呋喃基、噻吩基、噁唑基、噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、硫代二唑基、三嗪基、酞嗪基、喹啉基、异喹啉基、喋啶基、嘌呤基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并吡啶基、苯并嘧啶基、苯并吡嗪基、苯并咪唑基、苯并酞嗪基、吡咯并[2,3-b]吡啶基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、[1,2,4]三唑并[4,3-b]哒嗪基、[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶基、[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基等。
除另有规定外，术语“药物上可接受的盐”、“药用盐”或“可药用盐”是指在合理医学判断范围内适用于与哺乳动物特别是人的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应等并与合理的效益/风险比相称的盐，比如胺、羧酸和其他类型化合物的医学上可接受的盐在所属领域中是被熟知的。可以在本发明化合物的最终分离和纯化期间原位制备所述盐，或单独通过将游离碱或游离酸与合适的试剂反应制备所述盐，如下概述。例如，游离碱功能可以与合适的酸反应。
除另有规定外，术语“溶剂合物”意指本发明化合物与一个或多个溶剂分子(无论有机的还是无机的)的物理缔合。该物理缔合包括氢键。在某些情形中，例如当一个或多个溶剂分子纳入结晶固体的晶格中时，溶剂化物将能够被分离。溶剂化物中的溶剂分子可按规则排列和/或无序排列存在。溶剂合物可包含化学计量或非化学计量的溶剂分子。“溶剂合物”涵盖溶液相和可分离的溶剂合物。示例性溶剂合物包括但不限于水合物、乙醇合物、甲醇合物和异丙醇合物。溶剂化方法是本领域公知的。
除另有规定外，术语“同位素标记的类似物”是指式I至式II化合物中被同位素标记的分子，从而提供可能具有改善的药理活性的同位素标记的类似物。通常用作同位素标记的同位素是：氢同位素，2H和3H；碳同位素：11C,13C和14C；氯同位素：35Cl和37Cl；氟同位素：18F；碘同位素：123I和125I；氮同位素：13N和15N；氧同位素：15O,17O和18O和硫同位素35S。这些同位素标记化合物可以用来研究药用分子在组织中的分布情况。尤其是氘3H和碳13C，由于它们容易标记且方便检测，运用更为广泛。某些重同位素，比如重氢(2H)，的取代能增强代谢的稳定性，延长半衰期从而达到减少剂量的目而提供疗效优势的。同位素标记的化合物一般从已被标记的起始物开始，用已知的合成技术象合成非同位素标记的化合物一样来完成其合成。
除另有规定外，术语“前药”是指在体内转化为母体药物的药物。前药通常是有用的，因为在某些情况下，它们可能比母体药物更容易给药。例如，它们可以通过口服而被生物利用，而母体则不能。与母体药物相比，前药在药物组合物中的溶解度也有所提高。前药的一个例子，但不限于此，可以是任何式(I)的化合物，其作为酯(“前药”)给药，以促进穿过细胞膜的传递，其中水溶性对迁移性有害，但一旦进入细胞内水溶性是有益的，其随后被代谢水解成羧酸，即活性实体。前药的另一个例子可以是与酸基团结合的短肽(聚氨基酸)，其中肽被代谢以显示活性部分。
除另有规定外，术语“立体异构体”是指具有相同化学构造，但原子或基团在空间上排列方式不同的化合物。立体异构体包括对映异构体、非对映异构体、构象异构体(旋转异构体)、几何异构体(顺/反)异构体、阻转异构体等。所得的任何立体异构体的混合物可以依据组分物理化学性质上的差异被分离成纯的或基本纯的几何异构体，对映异构体，非对映异构体，例如，通过色谱法和/或分步结晶法。
除另有规定外，术语“互变异构体”是指具有不同能量的可通过低能垒(lowenergy barrier)互相转化的结构异构体。若互变异构是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(protontautomer)(也称为质子转移互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体(valence tautomer)包括通过一些成键电子的重组来进行的互相转化。
除非其他方面表明，本发明所描述的结构式包括所有的同分异构形式(如对映异构，非对映异构，和几何异构(或构象异构))：例如含有不对称中心的R、S构型，双键的(Z)、(E)异构体，和(Z)、(E)的构象异构体。因此，本发明的化合物的单个立体化学异构体或其对映异构体，非对映异构体，或几何异构体(或构象异构体)的混合物都属于本发明的范围。
除另有规定外，术语“任选取代”指所述基团的可取代位点的氢未被取代，或被一个或多个取代基所取代，所述取代基优先选自下组的取代基：卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、氨基、叠氮基、氧代基、羧基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-10环烷基、C3-10环烷基磺酰基、3-10元杂环烷基、C6-14芳基或5-10元杂芳环基，其中，所述C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-10环烷基、C3-10环烷基磺酰基、3-10元杂环烷基、C6-14芳基或5-10元杂芳环基可任选地被选自卤素、羟基、氨基、氰基、C1-6烷基或C1-6烷氧基中的一个或多个所取代，所述氧代基是指相同取代位的两个H被同一个O替代形成双键。
下面结合具体实施例来进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或者按照制造厂商所建议的条件。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域专业人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法之中。文中所示的较佳实施方法与材料仅做示范之用。
本发明的化合物结构是通过核磁共振(NMR)或/和液质联用色谱(LC-MS)或/和液相色谱(HPLC)来确定的。NMR的测定使用的仪器是Bruker AVANCE NEO 400MHz，LC-MS使用的仪器是LC-MS WATERS ACQUITY UPLC H-Class PLUS或/和SQD2；HPLC使用的仪器是WATERS ACQUITYUPLC或/和Agilent 1260。
本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。
[中间体的制备]
制备例1：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000331
将2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(6g，28.98mmol)，1-乙酰基哌啶-4-胺盐酸盐(5.7g，31.88mmol)和DIPEA(14.98g，115.94mmol)溶于乙腈(50mL)中。室温(25-30℃)搅拌2h。乙酸乙酯萃取三次，每次100mL，合并乙酸乙酯相，50mL水洗一次，50mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥10分钟，过滤，粗产物用DCM:MeOH＝100:1过柱分离纯化，得到产品(5.8g，产率：64％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝313.2。
制备例2：反式-(6-氯嘧啶-4-基)(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮(本中间体例如可以作为实施例1化合物的中间体)的制备
第一步：6-氯嘧啶-4-甲酰氯的制备
Figure BDA0003640361420000332
将4,6-二氯嘧啶(570mg，3.83mmol，1.0eq)溶于EA(18mL)中，加入草酰氯(2.43g，19.13mmol，5.0eq)和N,N-二甲基甲酰胺(1.8mL)。反应在85℃下反应2小时。TLC板和LC-MS监测反应完毕后，反应液用旋转蒸发仪迅速旋干，密封并直接用于下一步。
第二步：反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420000333
将7-氧杂-3-氮杂双环[4.1.0]庚烷-3-甲酸叔丁酯(2.50g，12.56mmol，1.0eq)溶于i-PrOH(异丙醇，63mL)中，加入1,2,3,4-四氢异喹啉(1.67g，12.56mmol，1.0eq)，反应在氮气保护下85℃反应18h。TLC板和LC-MS监测反应完毕后，旋干反应溶剂，加入水(200mL)，二氯甲烷萃取(共3次，每次200mL)，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干。本步存在区域异构，包括反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯和反式-3-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯，混合物粗品(3.40g，产率：81.5％)用色谱法(硅胶，乙酸乙酯:石油醚＝15:85)分离2-3次，纯化，得到标题化合物(1.7g，产率：为41％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝333.3；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.20-7.08(m,3H),7.05-6.98(m,1H),4.59-4.17(m,2H),3.94(d,J＝14.6Hz,1H),3.68(d,J＝14.5Hz,2H),3.54(td,J＝10.0,5.0Hz,1H),3.03(dt,J＝10.9,5.3Hz,1H),2.91(t,J＝5.6Hz,2H),2.80-2.47(m,4H),1.82(dd,J＝12.7,2.5Hz,1H),1.59-1.38(m,10H)。
第三步：反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇的制备
Figure BDA0003640361420000341
将反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.00g，3.01mmol，1.0eq)溶于DCM(二氯甲烷)(15mL)和TFA(三氟乙酸)(3.75mL)中。反应在室温(20-25℃)下搅拌反应2小时。TLC板和LC-MS监测反应完毕后，将反应液用旋转蒸发仪旋干，并加入1,2二氯乙烷反复3次带走多余的TFA。待旋干之后密封，并直接用于第三步。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝233.2。
第四步：反式-(6-氯嘧啶-4-基)(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420000342
将反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(570mg，3.23mmol，1.0eq)溶于DCM(二氯甲烷)(8ml)和TEA(三乙胺)(653mg，6.46mmol，2.0eq)，将6-氯嘧啶-4-甲酰氯溶于二氯甲烷(8mL)中，氮气保护条件，缓慢加入反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇的反应液中。将反应液在冰浴条件下反应2小时，缓慢升到室温(20-25℃)反应1小时。TLC板和LC-MS监测反应完毕后，反应液加入100ml水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥。有机相浓缩，反相HPLC分离纯化(C18，0.08％NH4HCO3水溶液/乙腈)，得到标题化合物(900mg，产率：56.3％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝373。
制备例3：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(苯并[d]噻唑-5-基)嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例9化合物的中间体)的制备
Figure BDA0003640361420000343
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(90mg，0.29mmol，1.0equiv.)，苯并噻唑-5-硼酸频哪醇酯(113mg，0.43mmol，1.5equiv.)，1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(21mg，0.03mmol，0.1equiv.)和磷酸钾(183mg，0.86mmol，3.0equiv.)溶于二氧六环(2mL)和水(0.5mL)中，氮气置换三次。120℃反应16小时。LC-MS检测反应完成后，用二氯甲烷(5mL)萃取3次，水相浓缩，旋干除去溶剂，得到粗品标题化合物(80mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝398.20。
制备例4：2-苯基-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例10化合物的中间体)的制备
第一步：2-氯-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000344
将2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(500mg，2.41mmol，1.01equiv.)和四氢-2H-吡喃-4-胺(240mg，2.37mmol，1equiv.)溶于乙腈(12mL)中，加入DIPEA(920mg，7.12mmol，3equiv.)。反应在80℃下搅拌3个小时。LC-MS监测反应完成。向反应液中加入水淬灭，接着用乙酸乙酯萃取，有机相合并后用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，接着过滤，浓缩后，得到粗品，用快速色谱法分离纯化(硅胶，石油醚:乙酸乙酯＝0-15％)，得到标题化合物(500mg，产率：82％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝272.1。
第二步：2-苯基-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000351
将2-氯-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(200mg，0.737mmol，1.0equiv.)、苯硼酸(140mg，1.106mmol，1.5equiv.)溶于1,4-二氧六环(2.5mL)和水(0.5mL)中，加入Pd(dppf)Cl2(270mg，0.369mmol，0.5equiv.)以及磷酸钾(470mg，2.211mmol，3equiv.)。反应在100℃下搅拌8个小时。LC-MS监测反应完成。向反应液中加入水淬灭，接着垫上硅藻土过滤，除去不溶性固体杂质。滤液用乙酸乙酯进行萃取，水相直接浓缩，得到的固体加入二氯甲烷和甲醇溶解，过滤，收集滤液，滤液浓缩后，得到的标题化合物粗品(98mg)，直接用于下一步。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝300.2。
制备例5：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(苯并[d]噁唑-7-基)嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例13化合物的中间体)的制备
第一步：7-溴苯并[d]噁唑的制备
Figure BDA0003640361420000352
将2-氨基-6-溴苯酚(1.0g，5.319mmol，1equiv.)溶于原甲酸三甲酯(10mL)，加入对甲苯磺酸(100mg，0.581mmol，0.11equiv.)。反应于氮气下80℃搅拌2小时。TLC监测反应完成。将反应液减压旋干，粗产品经快速色谱法分离纯化(硅胶，EA:PE＝1:20)，得到标题化合物(1.12g，产率：98.9％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝180.0。
第二步：7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噁唑的制备
Figure BDA0003640361420000353
称量7-溴苯并[d]噁唑(210mg，1.060mmol，1equiv.)，联硼酸频那醇酯(645mg，2.540mmol，2.4equiv.)，Pd(dppf)Cl2(74mg，0.102mmol，0.1equiv.)和醋酸钾(200mg，2.038mmol，1.92equiv.)于微波管中，封盖并置换为氮气条件。加入1,4-二氧六环(5mL)。氮气保护下加热100℃反应2小时。LC-MS监测反应完成。将反应液过滤，旋干，粗品经快速色谱法分离纯化(硅胶，EA:PE＝1:20)，得到标题化合物(252mg，产率：97％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝246.2,341.0；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(s,1H),7.90(d,J＝7.9Hz,1H),7.83(d,J＝7.4Hz,1H),7.39(t,J＝7.6Hz,1H),1.42(s,12H)。
第三步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(苯并[d]噁唑-7-基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000361
称量7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噁唑(100mg，0.408mmol，1equiv.)，6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(127mg，0.406mmol，1equiv.)，Pd(dppf)Cl2(30mg，0.0410mmol，0.1equiv.)和碳酸钠(80mg，0.755mmol，1.86equiv.)于50mL单口烧瓶中，加入1,4-二氧六环(2ml)和水(0.5ml)，并将体系置换为氮气。90℃加热反应1小时。LC-MS监测反应完成。向反应液加入乙酸乙酯和水，分液，水相用乙酸乙酯萃取(2x15 mL)。合并有机相，加入无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。粗品经快速色谱法分离纯化(硅胶，MeOH:DCM＝1:25)，得到标题化合物(66mg，产率：41.1％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝396.20。
第四步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(苯并[d]噁唑-7-基)嘧啶-4-甲酸(中间体3)的制备
Figure BDA0003640361420000362
将三丁基氧化锡(180mg，0.302mmol，1.99equiv.)加入到6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(苯并[d]噁唑-7-基)嘧啶-4-甲酸甲酯(60mg，0.152mmol，1equiv.)的甲苯(5mL)悬浊液中，氮气保护，110℃下加热回流4小时。TLC监测反应完成。将甲苯旋干，加入石油醚打浆。过滤，滤饼用石油醚淋洗，油泵上抽干残余溶剂，得到标题化合物粗品(75mg)，直接用于下一步。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝382.0。
制备例6：4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-苯基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(本中间体例如可以作为实施例20化合物的中间体)的制备
第一步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000363
将2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(1.086g，5.24mmol，1.05equiv.)和4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(1g，4.99mmol，1.05equiv.)溶于乙腈(40mL)中，加入DIPEA(1.94g，14.97mmol，3equiv.)。反应在80℃下搅拌3个小时。LC-MS监测反应完成。向反应液中加入水淬灭，接着用乙酸乙酯萃取，有机相合并后用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，接着过滤，浓缩后，得到粗品，用快速色谱法分离纯化(硅胶，石油醚:乙酸乙酯＝1:5)，得到标题化合物(1.5g，产率：80％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝371.0。
第二步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-苯基嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000364
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(300mg，0.809mmol，1.0equiv.)，苯硼酸(148mg，1.213mmol，1.5equiv.)溶于1,4-二氧六环(8mL)和水(2mL)中，加入Pd(dppf)Cl2(118mg，0.162mmol，0.2equiv.)以及磷酸钾(859mg，4.045mmol，5equiv.)。反应在100℃下搅拌18个小时。LC-MS监测反应完成。反应液过滤，除去不溶性固体杂质。滤液用乙酸乙酯进行萃取，接着将水相直接进行浓缩，得到的固体加入二氯甲烷和甲醇溶解，然后过滤，收集滤液，滤液浓缩后，得到标题化合物(340mg，粗品)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝399.2。
第三步：4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-苯基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420000371
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-苯基嘧啶-4-甲酸(340mg粗品)，(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(200mg，0.861mmol，1equiv.)，EDCI(198mg，1.033mmol，1.2equiv.)和HOAt(140mg，1.033mmol,1.2equiv.)溶于DMF(2mL)，反应液在25℃下搅拌一个小时。LC-MS显示反应完毕，向反应液中加入水淬灭，接着用二氯甲烷和甲醇进行萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到标题化合物(1g)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝613.4。
制备例7：反式-(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(6-((2,4-二甲氧基苄基)(4-甲氧基丁基)氨基)-2-苯基嘧啶-4-基)甲酮(本中间体例如可以作为实施例45化合物的中间体)的制备
第一步：N-(2,4-二甲氧基苄基)-4-甲氧基丁-1-胺的制备
Figure BDA0003640361420000372
将4-氯丁基甲基醚(300mg，2.45mmol，1equiv.)和2,4-二甲氧基苄胺(1.64g，9.81mmol，4.01equiv.)溶于乙腈(9ml)中，加入碳酸钾(676mg，4.89mmol，2equiv.)和碘化钾(812mg，4.89mmol，2equiv.)，并于80℃搅拌过夜(16小时)。LC-MS监测有产物生成。将反应液过滤，滤液旋干。粗品用快速色谱法分离纯化(硅胶，MeOH:EA＝1:50)，得到标题化合物(90mg，产率：11.8％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝254.2。
第二步：2-氯-6-((2,4-二甲氧基苄基)(4-甲氧基丁基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000373
将N-(2,4-二甲氧基苄基)-4-甲氧基丁-1-胺(90mg，0.356mmol，1equiv.)和2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(220mg，1.063mmol，3equiv.)溶于乙腈(3ml)中，加入DIPEA(250mg，1.934mmol，5.4equiv.)，并于室温(25℃)搅拌2小时。TLC监测反应完成后，将溶剂旋干，粗品用快速色谱法分离纯化(硅胶，EA:PE＝1:5)，得到标题化合物(134mg，产率：75.5％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝424.2。
第三步：6-((2,4-二甲氧基苄基)(4-甲氧基丁基)氨基)-2-苯基嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000381
称量2-氯-6-((2,4-二甲氧基苄基)(4-甲氧基丁基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(134mg，0.316mmol，1equiv.)，苯硼酸(77mg，0.632mmol，2equiv.)，四(三苯基膦)钯(36mg，0.0312mmol，0.1equiv.)和碳酸钠(70mg，0.660mmol，2.09equiv.)于微波管中，封盖并置换为氮气条件。加入二氧六环(1.6mL)和水(0.4mL)。在氮气条件下微波120℃反应1小时，LC-MS监测反应完成。加入1M(摩尔浓度)盐酸水溶液调节pH至4-5。过滤并将溶剂旋干，得到标题化合物粗品，并直接用于下一步。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝452.2。
第四步：反式-(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(6-((2,4-二甲氧基苄基)(4-甲氧基丁基)氨基)-2-苯基嘧啶-4-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420000382
将6-((2,4-二甲氧基苄基)(4-甲氧基丁基)氨基)-2-苯基嘧啶-4-甲酸(180mg，0.315mmol，1equiv.)，EDCI(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)(91mg，0.475mmol，1.51equiv.)和HOAt(N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑)(65mg，0.478mmol，1.52equiv.)溶于DMF(1mL)中，搅拌5分钟后，加入反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(88mg，0.379mmol，1.2equiv.)的DMF(0.6mL)溶液。反应于室温搅拌2小时。将溶剂旋干，粗品经快速色谱法分离纯化(硅胶，MeOH:DCM＝1:20)，得到标题化合物(51mg，产率：24.4％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝666.4。
制备例8：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-乙烯基嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例46化合物的中间体)的制备
第一步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-乙烯基嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000383
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(0.90g，2.9mmol，1equiv.)、乙烯基三氟硼酸钾(0.46g，3.5mmol,1.2equiv.)、碳酸钾(0.99g，7.2mmol，2.5equiv.)及[1,1-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(90mg，0.1equiv.)溶于1,4-二氧六环(30mL)中，置换氮气2分钟，加热110℃反应8小时。LC-MS检测反应完成后，过滤，滤饼用混合溶剂(DCM:MeOH＝10:1)(15mL)洗两遍，滤液浓缩，粗产物先用反相柱混合溶剂(DCM:MeOH＝10:1)分离，浓缩，得标题化合物(0.85g，产率：97％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝305.2。
第二步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-乙烯基嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000384
将三丁基氧化锡(0.47g，0.79mmol，1.2equiv.)加入到6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-乙烯基嘧啶-4-甲酸甲酯(0.2g，0.66mmol，1equiv.)、乙腈(4mL,20％)和甲苯(16mL,80％)的混合溶液中，110℃反应4小时。LC-MS检测反应完成后，粗产物用2mL KF水溶液淬灭，浓缩，粗产物用乙醚打浆抽干，得到标题化合物(0.15g，产率：78％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝291.1。
制备例9：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(噻唑并[4,5-c]吡啶-7-基)嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例63化合物的中间体)的制备
第一步：3-溴-5-硝基吡啶-4-硫酚的制备
Figure BDA0003640361420000391
将3-溴-4-氯-5-硝基吡啶(10g，42.12mmol，1.0equiv.)，溶于甲醇中(80mL)，加入硫氢化钠(4.72g，84.23mmol，2.0equiv.，纯度70％)，25℃搅拌16小时。LC-MS检测反应完成后，加入氢氧化钠溶液(100mL,20％)后过滤，滤液用HCl酸化至pH＝4后过滤，滤饼干燥，得到标题化合物(9g，产率：90.9％)。
LC-MS(ESI)[M-H]-＝232.8。
第二步：3-氨基-5-溴吡啶-4-硫酚的制备
Figure BDA0003640361420000392
将3-溴-5-硝基吡啶-4-硫酚(10g，42.5mmol，1.0equiv.)溶于水(60mL)和HCl(12M，25mL)中，加入氯化亚锡(16.13g，85.1mmol，2.0equiv.)，并搅拌4小时。LC-MS检测反应完成后，过滤，滤液浓缩，得到标题化合物粗品(12g)，直接用于下一步。
LC-MS(ESI)[M-H]-＝202.8。
第三步：7-溴噻唑并[4,5-c]吡啶的制备
Figure BDA0003640361420000393
将3-氨基-5-溴吡啶-4-硫酚(10g，48.76mmol，1.0equiv.)溶于甲酸(50mL)中，加入锌粉(1.59g，24.38mmol，0.5equiv.)。100℃反应1小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，粗产物用快速色谱法分离纯化(硅胶，50％EA的PE溶液)，得到标题产物(2.7g，产率：25.7％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝215.8。
第四步：噻唑并[4,5-c]吡啶-7-基硼酸的制备
Figure BDA0003640361420000394
将7-溴噻唑并[4,5-c]吡啶(300mg，1.39mmol，1.0equiv.)，联硼酸频那醇酯(885mg，3.49mmol，2.5equiv.)，1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(102mg，0.14mmol，0.1equiv.)和醋酸钾(274mg，2.79mmol，2.0equiv.)溶于二氧六环(7mL)中，氮气置换三次。120℃反应16小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，得到标题化合物粗品(350mg)，直接用于下一步。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝180.92。
第五步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(噻唑并[4,5-c]吡啶-7-基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000401
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(300mg，0.96mmol，1.0equiv.)，噻唑并[4,5-c]吡啶-7-基硼酸(259mg，1.44mmol，1.5equiv.)，1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(76mg，0.09mmol，0.1equiv.)和磷酸钾(1.02g，4.80mmol，5.0equiv.)溶于二氧六环(6mL)和水(1.5mL)中，氮气置换三次。100℃反应2小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，粗产物用快速色谱法分离纯化(硅胶，5％MeOH的DCM溶液)，得到标题化合物(390mg，产率：98.6％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝412.85。
第六步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(噻唑并[4,5-c]吡啶-7-基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000402
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(噻唑并[4,5-c]吡啶-7-基)嘧啶-4-甲酸甲酯(350mg，0.85mmol，1.0equiv.)，溶于四氢呋喃(5mL)，加入氢氧化锂水溶液(2M)(24mg，1.02mmol，1.2equiv.)。25℃搅拌1小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，得到标题化合物粗品(370mg)，可直接用于下一步。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝399.0。
制备例10：4-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-6-苯基-1,3,5-三嗪-2-甲酸(本中间体例如可以作为实施例70化合物的中间体)的制备
第一步：1-(4-((4,6-二氯-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420000403
将三聚氯氰(4.0g，0.0217mol，1equiv.)，1-(4-氨基哌啶-1-基)乙烷-1-酮(3.08g，0.0217mol，1equiv.)加入到四氢呋喃(110mL)中，再加入N,N-二异丙基乙胺(5.61g，0.0434mol，2equiv.)。在16℃下搅拌16h，TLC检测原料反应完全。将溶剂旋干，粗产物柱色谱纯化(DCM:MeOH＝99:1)，得标题化合物(3.98g，产率：63.2％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝290.0。
第二步：1-(4-((4-氯-6-苯基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420000404
将1-(4-((4,6-二氯-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮(2g，6.893mmol，1equiv.)，苯硼酸(0.84g，6.893mmol，1equiv.)，碳酸钾(2.86g，20.68mmol，3equiv.)加入到1,4-二氧六环/水(45mL，4:1)中，再加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(252mg，0.345mmol，0.05equiv.)。在氮气和80℃下搅拌0.75h，TLC检测原料反应完全。向反应体系加入水，用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，将溶剂旋干，粗产物柱色谱纯化(DCM:MeOH＝99:1)，得标题化合物(0.498g，产率：21.8％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝332.0。
第三步：4-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-6-苯基-1,3,5-三嗪-2-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000411
将1-(4-((4-氯-6-苯基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮(0.44g，1.33mmol，1equiv.)，三乙胺(0.671g，6.63mmol，5equiv.)加入到甲醇(30mL)中，再加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(97mg，0.133mmol，0.1equiv.)。在一氧化碳、100℃和2MPa下搅拌20h，TLC检测原料反应完全。将溶剂旋干，粗产物柱色谱纯化(DCM:MeOH＝98:2)，得标题化合物(0.21g，产率：44.6％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝356.2。
第四步：4-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-6-苯基-1,3,5-三嗪-2-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000412
将4-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-6-苯基-1,3,5-三嗪-2-甲酸甲酯(150mg，0.422mmol，1equiv.)溶于四氢呋喃/水(5mL，4:1)，加入氢氧化锂(20mg，0.844mmol，2equiv.)，在16℃下搅拌2h，TLC检测原料反应完全。向反应体系加入水，用乙酸乙酯(15mL)萃取三次，水相用1M HCl溶液调节pH＝4-5，冻干后得标题化合物粗品(0.13g，产率：90.2％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝342.2。
制备例11：6-((3-(N-甲基乙酰氨基)丙基)氨基)-2-苯基嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例74化合物的中间体)的制备
第一步：(3-(N-甲基乙酰胺基)丙基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420000413
将(3-(甲氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(980mg，5.3mmol)，DMAP(68mg，0.06mmol)和Et3N(1.07g，1.06mmol)溶于DCM(10mL)。冷却到0℃后滴加乙酰氯(540mg，6.9mmol)。反应液在室温(25～30℃)下搅拌2h。TLC监控反应，原料消失。乙酸乙酯萃取三次，每次20mL，合并乙酸乙酯相，10mL水洗一次，10mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥10分钟，过滤，浓缩旋干，得到粗产品，然后过柱纯化，得到标题化合物(1.328g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.39(s,1H),3.50-3.27(m,2H),3.20-3.03(m,2H),3.01-2.87(m,3H),2.09(s,3H),1.84-1.61(m,2H),1.44(d,J＝4.6Hz,9H)。
第二步：N-(3-氨基丙基)-N-甲基乙酰胺三氟乙酸盐的制备
Figure BDA0003640361420000414
将(3-(N-甲基乙酰胺基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(700mg，3mmol)溶于DCM(5mL)，加入三氟乙酸(2mL)。反应液在室温下搅拌3h。LC-MS监控反应，原料消失。浓缩旋干，得到标题化合物粗品(1.42g)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝131.2。
第三步：2-氯-6-((3-(N-甲基乙酰氨基)丙基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000415
将2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(300mg，1.46mmol)，N-(3-氨基丙基)-N-甲基乙酰胺三氟乙酸盐粗品(600mg，1.46mmol)和N,N-二异丙基乙胺(930mg，7.3mmol)溶于乙腈(6mL)中。25℃搅拌2h。乙酸乙酯(50mL*3)萃取，合并乙酸乙酯相，水(20mL)洗，饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥10分钟，过滤，粗产物用DCM:MeOH＝100:2过柱分离纯化，得到标题化合物(0.5g，产率：85％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝295.2。
第四步：6-((3-(N-甲基乙酰氨基)丙基)氨基)-2-苯基嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000421
将2-氯-6-((3-(N-甲基乙酰氨基)丙基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(500mg，1.67mmol)，苯硼酸(244mg，2.0mmol)，K2CO3(460mg，3.34mmol)和Pd(PPh3)4(190mg，0.167mmol)溶于1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)中。120℃下微波加热搅拌1.5h。LC-MS监控反应，原料消失。乙酸乙酯萃取三次，每次20mL，产品在水相。浓缩旋干，然后用DCM:MeOH＝10:1的混合溶剂(100mL)洗涤，浓缩滤液，得到标题化合物粗品(500mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝343.2。
制备例12：4-氨基-1-甲基环己烷-1-醇(本中间体例如可以作为实施例86化合物的中间体)的制备
第一步：8-甲基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-醇的制备
Figure BDA0003640361420000422
0℃下，将1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-酮(2.0g，12.8mmol,1equiv.)加入到无水四氢呋喃(40mL)中，然后加入溴化甲基镁(3.0M 2-甲基四氢呋喃溶液)(5.6mL,16.64mmol，1.3equiv)，28℃搅拌2h。TLC检测反应完成后，加入饱和氯化铵水溶液(15mL)，乙酸乙酯(15mL×3)萃取三次，合并有机相，过滤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品，用快速色谱法分离纯化(硅胶，二氯甲烷:甲醇(V/V＝10/1)，得标题化合物(1g，产率：45％)。
1H NMR(400MHz,CDCL3)δ3.99-3.94(m,4H),1.91-1.87(m,2H),1.73-1.68(m,4H),1.64-1.59(m,2H),1.28(m,3H)。
第二步：4-羟基-4-甲基环己烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420000423
0℃下，将8-甲基-1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-醇(1.0g，5.8mmol，1.0equiv.)加入到水(5mL)和四氢呋喃(20.0mL)中，加入2M HCl(10mL)室温搅拌4h，TLC检测反应(二氯甲烷:甲醇(V/V＝10/1))完成后，将反应液浓缩至10mL，用饱和碳酸氢钠溶液(30mL)洗涤，乙酸乙酯(30mL×3)萃取三次，合并有机相，过滤，浓缩，浓缩，得标题化合物(526mg，产率：70％)。
1H NMR(400MHz,CDCL3)δ2.77-2.69(m,4H),2.28-2.22(m,2H),2.02-1.96(m,4H),1.90-1.82(m,2H),1.38(m,3H)。
第三步：(S)-N-(4-羟基-4-甲基亚环己基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
Figure BDA0003640361420000424
将4-羟基-4-甲基环己烷-1-酮(350mg，2.73mmol，1.0equiv)加入到THF(15mL)中，然后加入(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(496mg，4.1mmol，1.5equiv)、Ti(OEt)4(钛酸乙酯)(1.56g，6.83mmol，2.5equiv)，氮气保护下，80℃搅拌3h，LC-MS检测反应完成后，加入水中(100mL)，搅拌15分钟，乙酸乙酯(50mL×3)萃取三次，合并有机相，过滤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品，用快速色谱法分离纯化(硅胶，石油醚:乙酸乙酯(V/V＝1/1)，得标题化合物(155mg，产率：45％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝232.1。
第四步：(S)-N-(4-羟基-4-甲基环己基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺的制备
Figure BDA0003640361420000431
将(S)-N-(4-羟基-4-甲基亚环己基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(150mg，0.86mmol，1.0equiv)加入到甲醇中(10mL)中，然后加入NaBH4(66mg，1.73mmol，2.0equiv)、28℃搅拌10h，LC-MS检测反应完成后，浓缩得粗品，用快速色谱法分离纯化(硅胶，石油醚:乙酸乙酯(V/V＝1/1)，得标题化合物(155mg，产率：45％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝234.2。
第五步：4-氨基-1-甲基环己烷-1-醇的制备
Figure BDA0003640361420000432
(S)-N-(4-羟基-4-甲基环己基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(200mg，0.86mmol，1.0equiv)加入到甲醇中(10mL)中，然后加入4M HCl/二氧六环(4mL)，28℃搅拌2h，TLC检测反应完成后，浓缩得标题化合物粗品(120mg)。
制备例13：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(环丙基乙炔基)嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例92化合物的中间体)的制备
第一步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(环丙基乙炔基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000433
28℃、氮气保护下，将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(180mg，1.31mmol，1.0equiv.)加入到DMF(2mL)中，然后加入乙炔基环丙烷(433mg，6.59mmol，5.0equiv.)，碘化亚铜(51mg，0.26mmol，0.2equiv.)，四(三苯基膦)钯(151mg，0.131mmol，0.1equiv.)，室温搅拌十分钟。140℃微波加热搅拌1小时。LC-MS检测反应完成后，冷却至室温，过滤，粗产物用Prep-HPLC分离纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液，MeCN)，得标题化合物(170mg，产率：82.98％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝343.3。
第二步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(环丙基乙炔基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000434
28℃下，将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(环丙基乙炔基)嘧啶-4-甲酸甲酯(170mg，0.5mmol，1.0equiv.)加入到水(1mL)、甲醇(1.0mL)和四氢呋喃(1.0mL)中，加入氢氧化锂(36mg，1.5mmol，3.0equiv.)，室温搅拌2h，TLC检测反应(二氯甲烷:甲醇(V/V＝10/1))完成后，将反应液浓缩至1mL，用1M盐酸调节pH＝1～2，水相冻干，得标题化合物(200mg，产率：90％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝330.2。
制备例14：6-((2-乙酰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基)-2-(戊-3-基氧基)嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例197化合物的中间体)的制备
第一步：6-((2-(苄氧羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000441
将6-((2-氯-6-(甲氧羰基)嘧啶-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸苄酯(220mg，0.53mmol，1.0equiv.)及TMSOK(74mg，0.58mmol，1.1equiv.)溶于MeCN(8mL)中，20℃反应1小时。反应液浓缩，得到目标化合物粗品(240mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝402.8。
第二步：6-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基)-2-(戊-3-基氧基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000442
将6-((2-(苄氧羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸(210mg，0.52mmol，1.0equiv.)及叔丁醇钠(200mg，2.09mmol，4.0equiv.)溶于3-戊醇(10mL)中，120℃氮气保护下反应18小时。反应液浓缩，粗产物用反相HPLC制备纯化(C18，10mmol/LNH4HCO3水溶液/乙腈)，得到目标化合物粗品(12mg，产率：7.2％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝321.0。
第三步：6-((2-乙酰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基)-2-(戊-3-基氧基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000443
将6-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基)-2-(戊-3-基氧基)嘧啶-4-甲酸(12mg，0.04mmol，1.0equiv.)、乙酸酐(4mg，0.04mmol，1.1equiv.)及TEA(6mg，0.06mmol，1.5equiv.)溶于DMF(1mL)中，20℃反应0.5小时。反应液浓缩，得到目标化合物粗品(14mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝363.1。
制备例15：反式-(1-(6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-羰基)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(本中间体例如可以作为实施例151化合物的中间体)的制备
第一步：反式-(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420000444
将反式-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-甲酸苄酯(68mg，0.186mmol，1equiv.)溶于甲醇(色谱级，5mL)中，加入Pd/C(10％,70mg)。氢气条件下搅拌2小时。TLC监测反应完成。将反应液过滤，旋干，得到标题化合物粗品(45mg)。直接用于下一步。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝332.20。
第二步：反式-(1-(6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-羰基)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420000451
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸(36mg，0.136mmol，1equiv.)，EDCI(39mg，0.203mmol，1.49equiv.)和HOAt(28mg，0.206mmol，1.51equiv.)溶于DMF(2mL)中，室温(15-20℃)搅拌5分钟后，加入反式-(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(45mg，0.174mmol，1.7equiv.)的DMF溶液(1mL)。于室温搅拌1.5小时。将溶剂旋干，粗品用经快速色谱法分离纯化(硅胶，0-7％MeOH的DCM溶液)，得到反式-(1-(6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-羰基)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(53mg，产率：67.3％)。
制备例16：2-(1-乙酰基哌啶-4-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸(本中间体例如可以作为实施例155化合物的中间体)的制备
第一步：4-(1-乙酰基哌啶-4-甲酰胺基)-3-氨基苯甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000452
将3,4-二氨基苯甲酸甲酯(200mg，1.20mmol，1equiv.)、1-乙酰基-4-哌啶甲酸(206mg，1.20mmol，1.0equiv.)、EDCI(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)(277mg，1.44mmol，1.2equiv.)及HOAt(N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑)(196mg，1.44mmol，1.2equiv.)溶于DCM(6mL)中，25℃反应16小时。过滤收集沉淀物，并将滤饼干燥，得到标题化合物粗品(300mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝320.2。
第二步：2-(1-乙酰基哌啶-4-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000453
将4-(1-乙酰基哌啶-4-甲酰胺基)-3-氨基苯甲酸甲酯(250mg，0.78mmol，1equiv.)溶于乙酸(6mL)中，65℃反应5小时。反应混合物用饱和NaHCO3水溶液中和至pH＝6-7，并用二氯甲烷(3*10mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，并用Na2SO4干燥，浓缩，得到标题化合物(170mg，产率：72.1％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝302.2。
第三步：2-(1-乙酰基哌啶-4-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000454
将2-(1-乙酰基哌啶-4-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸甲酯(80mg，0.27mmol，1.0equiv.)，溶于四氢呋喃中(1mL)，加入氢氧化锂水溶液(2M)(13mg，0.53mmol，2.0equiv.)，60℃搅拌1小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，得到标题化合物粗品(90mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝288.2。
制备例17：6-((1-(四氢-2H-吡喃-4-羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例157化合物的中间体)的制备
第一步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000461
将6-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(4g，23.17mmol，1equiv.)和4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(4.9g，24.33mmol，1.05equiv.)溶于乙腈(40ml)中，加入DIPEA(8.99g，69.51mmol，3equiv.)。反应在80℃下搅拌3个小时。LC-MS监测反应完成。向反应液中加入水淬灭，接着用乙酸乙酯萃取，有机相合并后用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，接着过滤，浓缩后，得到粗品，用快速色谱法分离纯化(硅胶，石油醚:乙酸乙酯＝1:5)，得到标题化合物(5.56g，产率：71％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝337.2。
第二步：6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000462
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(5.46g,16.2mmol，1equiv.)溶于二氯甲烷(40mL)中，加入三氟乙酸(10mL)。反应在20℃下搅拌2个小时。LC-MS监测反应完成。向反应液中加入水，接着用碳酸氢钠饱和溶液调节PH至8-9，接着用乙酸乙酯进行萃取。将水相进行浓缩后，得到标题化合物粗品(11g)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝237.1。
第三步：6-((1-(四氢-2H-吡喃-4-羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000463
将6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(923mg，粗品)溶于二氯甲烷(5mL)中，接着加入三乙胺(195mg，1.907mmol，1.5equiv.)，将反应降温至-10℃左右，接着向反应液中缓慢加入四氢吡喃-4-甲酰氯(190mg，1.271mmol，1equiv.)，并保持反应体系的温度不超过0℃，加毕，反应逐渐升至室温(20℃)，搅拌一个小时后LC-MS显示反应完毕，向反应液中加入水淬灭，接着用二氯甲烷进行萃取，有机相合并后用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，接着过滤，浓缩，得到标题化合物粗品(340mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝349.2。
第四步：6-((1-(四氢-2H-吡喃-4-羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000464
将6-((1-(四氢-2H-吡喃-4-羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(340mg，粗品)溶于二氯甲烷(15mL)和甲醇(3mL)中，加入TMSOK(三甲基硅醇钾)(340mg，1.172mmol，1.2equiv.)。室温(20℃)下搅拌1小时。TLC监测反应完成。将反应液进行浓缩，得到固体，加水溶解后，加入1N盐酸调节pH至5-6，用二氯甲烷进行萃取，然后将水相浓缩，得到的固体加入二氯甲烷和甲醇溶解，过滤除去固体杂质，滤液浓缩，得到标题化合物粗品(300mg)，可直接用于下一步。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝335.2。
制备例18：6-((1-(噻唑-5-羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例167化合物的中间体)的制备
第一步：6-((1-(噻唑-5-羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000471
将6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(100mg，0.42mmol，1.0equiv.)，噻唑-5-甲酸(67mg，0.42mmol，1.0equiv.)，EDCI(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)(60mg，0.32mmol，1.5equiv.)及HOAt(N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑)(43mg，0.32mmol，1.5equiv.)溶于DMF(N,N-二甲基甲酰胺)(1mL)中，25℃反应1小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，粗产物用快速色谱法分离纯化(硅胶，5％MeOH的DCM溶液)，得到标题产物(90mg，产率：61.2％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝348.2。
第二步：6-((1-(噻唑-5-羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000472
将6-((1-(噻唑-5-羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(90mg，0.26mmol，1.0equiv.)溶于四氢呋喃(1mL)中，加入氢氧化锂水溶液(2M)(12mg，0.52mmol，2.0equiv.)，25℃搅拌1小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，得到标题化合物粗品(90mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝334.0。
制备例19：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(环戊硫基)嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例198化合物的中间体)的制备
Figure BDA0003640361420000473
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(100mg，0.32mmol，1.0equiv.)、环戊硫醇(163mg，1.60mmol，5.0equiv.)及Cs2CO3(208mg，0.64mmol，2.0equiv.)溶于EtOH(0.7mL)中，70℃反应16小时。反应液抽滤，滤液加稀盐酸调节成酸性，浓缩，得到目标化合物粗品(340mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝365.2。
制备例20：6-((2-乙酰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基)-2-异丙氧基嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例200化合物的中间体)的制备
第一步：2-异丙氧基-6-((2-(异丙氧基羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000474
将6-((2-氯-6-(甲氧羰基)嘧啶-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸苄酯(150mg，0.36mmol，1.0equiv.)及叔丁醇钠(138mg，1.44mmol，4.0equiv.)溶于i-PrOH(15mL)中，100℃氮气保护下反应3小时。稀盐酸调反应液呈酸性，浓缩，得到目标化合物粗品(270mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝379.2。
第二步：6-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-异丙氧基嘧啶-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸异丙酯的制备
Figure BDA0003640361420000481
将2-异丙氧基-6-((2-(异丙氧基羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基)嘧啶-4-甲酸(250mg，0.33mmol，1.0equiv.)、(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(77mg，0.33mmol，1.0equiv.)、EDCI(95mg，0.50mmol，1.5equiv.)及HOAt(67mg，0.50mmol，1.5equiv.)溶于DMF(3.7mL)中，20℃反应1小时。反应液用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相浓缩，粗产物用快速色谱法分离纯化(硅胶，DCM:MeOH＝30:1)，得到目标化合物(70mg，产率：35.8％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝593.3。
第三步：6-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基)-2-异丙氧基嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000482
将6-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-异丙氧基嘧啶-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸异丙酯(55mg，0.09mmol，1.0equiv.)溶于MeOH(3mL)和氢氧化钾水溶液(2M)(3mL)中，80℃反应20小时。反应液调酸，抽滤，滤液浓缩，得到目标化合物粗品(170mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝293.1。
第四步：6-((2-乙酰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基)-2-异丙氧基嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000483
将6-((2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基)-2-异丙氧基嘧啶-4-甲酸(140mg，0.09mmol，1.0equiv.)、乙酸酐(10mg，0.09mmol，1.0equiv.)及TEA(15mg，0.14mmol，1.5equiv.)溶于MeOH(5mL)中，20℃反应0.5小时。反应液浓缩，得到目标化合物粗品(32mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝335.2。
制备例21：2-异丙氧基-6-((1-(嘧啶-4-基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例204化合物的中间体)的制备
第一步：2-异丙氧基-6-((1-(嘧啶-4-基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000484
将叔丁醇钠(0.33g，3.44mmol，6equiv.)加入到2-氯-6-((1-(嘧啶-4-基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(0.20g，0.57mmol，1equiv.)的异丙醇(8ml,100％)溶液中，置换氮气两次，100℃反应20小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，粗产物用1M盐酸调pH＝5，抽干，得到标题化合物(0.1g，产率：48.7％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝359.1。
制备例22：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-甲氧基嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例220化合物的中间体)的制备
第一步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000491
将2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(1.086g，5.24mmol，1.05equiv.)和4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(1g，4.99mmol，1.05equiv.)溶于乙腈(40mL)中，加入DIPEA(1.94g，14.97mmol，3equiv.)。反应在80℃下搅拌3个小时。LC-MS监测反应完成。向反应液中加入水淬灭，接着用乙酸乙酯萃取，有机相合并后用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，接着过滤，浓缩后，得到粗品，用快速色谱法分离纯化(硅胶，石油醚:乙酸乙酯＝0-20％)，得到标题化合物(1.5g，产率：80％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝371.0。
第二步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-甲氧基嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000492
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(500mg，1.348mmol，1.0equiv.)和甲醇钠(110mg，2.022mmol，2equiv.)溶于甲醇(10mL)中，反应在80℃下搅拌16个小时。LC-MS监测反应完成。向反应液中加入水淬灭，用二氯甲烷进行萃取，有机相合并后用饱和氯化钠溶液进行洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后，得到的标题化合物粗品(400mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝367.2。
第三步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-甲氧基嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000493
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-甲氧基嘧啶-4-甲酸甲酯(400mg)溶于乙腈(20mL)中，加入TMSOK(三甲基硅醇钾)(169mg，1.307mmol，1.2equiv.)。室温(20℃)下搅拌1小时。TLC监测反应完成。将反应液进行浓缩，得到固体，加水溶解后，加入1N盐酸调节pH至5-6，用二氯甲烷进行萃取，然后将水相浓缩，向得到的固体中加入二氯甲烷和甲醇溶解，过滤除去固体杂质，滤液浓缩，得到标题化合物粗品(350mg)，可直接用于下一步。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝353.2。
制备例23：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(三氟甲氧基)嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例222化合物的中间体)的制备
第一步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-羟基嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000494
将6-[(1-乙酰基哌啶-4-基)氨基]-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(1g，3.2mmol，1equiv.)溶解到甲酸(10mL，100％)中，加热100℃反应12小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，粗产物用(C18，5mmol/L NH3的水溶液/乙腈)，得标题化合物(200mg，21.3％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝295.1。
第二步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(三氟甲氧基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000501
室温条件下，将3,3-二甲基-1-(三氟甲基)-1,2-苯并碘氧杂戊环(0.22g，0.68mmol，1equiv.)加入到6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-羟基嘧啶-4-甲酸甲酯(200.13mg，0.68mmol，1equiv.)的硝基甲烷(3mL,100％)溶液中。置换氮气后，加热100℃反应12小时，补加3,3-二甲基-1-(三氟甲基)-1,2-苯并碘氧杂戊环(0.011g，0.034mmol，0.5equiv.)，继续加热100℃反应12小时，LC-MS检测反应完成后，浓缩干用10％的DCM/MeOH过柱纯化，得到6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(三氟甲氧基)嘧啶-4-甲酸甲酯(35mg，14.2％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝363.1。
第三步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(三氟甲氧基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000502
将三丁基氧化锡(0.069g，0.12mmol，1.2equiv.)加入到6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(三氟甲氧基)嘧啶-4-甲酸甲酯(25mg，0.07mmol，1equiv.)、乙腈(1mL，20％)和甲苯(4mL，80％)的混合溶液中。110℃反应12小时，LC-MS检测反应完成后，粗产物用1mL氟化钾水溶液淬灭，浓缩，粗产物用乙醚打浆，抽干，得到6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(三氟甲氧基)嘧啶-4-甲酸(25mg，产率：74.3％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝349.0。
制备例24：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-乙氧基嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例235化合物的中间体)的制备
Figure BDA0003640361420000503
在20℃下，将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(100mg，0.06mmol，1.0equiv.)溶于乙醇(3mL)，加入乙醇钠，80℃搅拌10h，LC-MS检测反应完成后，浓缩产品，粗产物用Prep-HPLC分离纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液/乙腈)，冻干，得标题化合物(60mg，产率：61％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝309.3。
制备例25：2-(戊-3-基氧基)-6-(((1-(噻唑-2-基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例251化合物的中间体)的制备
第一步：(1-(噻唑-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420000504
将哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(1g，4.993mmol，1.0equiv.)，溶于DMF(10mL)中，加入2-溴噻唑(0.82g，4.993mmol，1.0equiv)和碳酸钾(3.45g，24.997mmol，5.0equiv)。120℃搅拌16小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，并用层析柱分离纯化(MeOH:DCM＝50％)，得到标题化合物(670mg，产率：47.4％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝284.0。
第二步：1-(噻唑-2-基)哌啶-4-胺的制备
Figure BDA0003640361420000511
将(1-(噻唑-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(660mg，2.329mmol，1.0equiv.)溶于二氧六环(10mL)中，加入盐酸二氧六环溶液(4mL)，25℃搅拌2小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，得到标题化合物粗品(569mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝183.9。
第三步：2-氯-6-((1-(噻唑-2-基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000512
0℃条件下，将2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(632mg，3.056mmol，1.0equiv.)加入到乙腈(10mL)中，加入1-(噻唑-2-基)哌啶-4-胺(560mg，3.056mmol，1.0equiv.)和DIPEA(0.39g，6.111mmol，2.0equiv.)，0℃搅拌16h，LC-MS检测反应完成后，浓缩，得到标题化合物(150mg，产率：13.9％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝353.9。
第四步：2-(戊-3-基氧基)-6-(((1-(噻唑-2-基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000513
将2-氯-6-((1-(噻唑-2-基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(135mg，0.381mmol，1.0equiv.)溶于3-戊醇(2mL)中，加入叔丁醇钠(220mg，2.289mmol，6.0equiv)。110℃搅拌1小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，得到标题化合物(50mg，产率：33.5％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝392.2。
制备例26：2-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-6-(环戊氧基)异尼古丁酸(本中间体例如可以作为实施例283化合物的中间体)的制备
第一步：2,6-二氯异尼古丁酸的制备
Figure BDA0003640361420000514
将2,6-二氯异烟酸甲酯(1.5g，7.28mmol，1.0equiv.)溶于四氢呋喃(10mL)中，加入氢氧化锂水溶液(2M)(209mg，8.73mmol，1.2equiv.)，25℃搅拌1小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，得到标题化合物粗品(1.7g)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝191.9。
第二步：2-氯-6-(环戊氧基)异尼古丁酸的制备
Figure BDA0003640361420000515
将氢化钠(1.5g，37.5mmol，4.0equiv.，纯度60％)溶于二氧六环(40mL)中，室温滴加环戊醇(1.21g，14.1mmol，1.5equiv.)，并搅拌15分钟。然后加入2,6-二氯异尼古丁酸(1.8g，9.38mmol，1.0equiv.)，氮气置换三次。80℃反应16小时。LC-MS检测反应完成后，加入乙酸乙酯(50mL)稀释，并用1M盐酸和饱和食盐水(50mL)洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到标题化合物粗品(2.5g)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝242.0。
第三步：2-氯-6-(环戊氧基)异尼古丁酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000521
将2-氯-6-(环戊氧基)异尼古丁酸(2.3g，9.52mmol，1.0equiv.)，碘甲烷(1.62g，11.42mmol，1.2equiv.)和碳酸钾(5.26g，38.07mmol，4.0equiv.)溶于DMF(40mL)中。25℃反应2小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，粗产物用快速色谱法分离纯化(硅胶，5％EA的PE溶液)，得到标题化合物(2g，产率：84.9％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝256.0。
第四步：2-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-6-(环戊氧基)异尼古丁酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000522
将2-氯-6-(环戊氧基)异尼古丁酸甲酯(1.4g，5.48mmol，1.0equiv.)，1-乙酰基哌啶-4-胺(1.17g，8.21mmol，1.5equiv.)，1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(1.37g，2.19mmol，0.4equiv.)，醋酸钯(246mg，1.10mmol，0.2equiv.)和碳酸铯(5.38g，16.42mmol，3.0equiv.)溶于二氧六环(30mL)中，氮气置换三次。100℃反应4小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，粗产物反相HPLC分离纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液/乙腈)，得标题化合物(170mg，产率：8.6％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝362.0。
第五步：2-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-6-(环戊氧基)异尼古丁酸的制备
Figure BDA0003640361420000523
将2-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-6-(环戊氧基)异尼古丁酸甲酯(150mg，0.42mmol，1.0equiv.)溶于四氢呋喃(1mL)中，加入氢氧化锂水溶液(2M)(12mg，0.50mmol，1.2equiv.)，25℃搅拌1小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，得到标题化合物粗品(150mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝348.0。
制备例27：((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-异丙氧基-6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-基)甲酮(本中间体例如可以作为实施例293化合物的中间体)的制备
第一步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000524
将2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(1.0g，4.85mmol，1.0equiv.)溶于乙腈(10mL)中，加入4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(873.79mg，4.37mmol，0.9equiv.)和N,N-二异丙基乙胺(1.88g，14.55mmol，3.0equiv)，25℃搅拌2小时。用TLC和LC-MS检测反应完成，将溶剂旋干，并用Prep-TLC分离纯化(EA:PE＝20％)，得到标题化合物(1.5g，产率：83.7％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝371.3。
第二步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000531
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(500mg，1.347mmol，1.0equiv.)溶于乙腈(5mL)中，加入三甲基硅醇钾(0.1729g，1.347mmol，1.0equiv.)，25℃搅拌2小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，用10％的二氯甲烷，甲醇溶液溶解，过滤，滤液浓缩，得到标题化合物粗品(480mg，产率：99.8％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝357.2。
第三步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-异丙氧基嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000532
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸(480mg，1.35mmol，1.0equiv.)溶于异丙醇(5mL)中，加入叔丁醇钾(628.8mg，5.4mmol,4.0equiv)，90℃搅拌16小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，并用Prep-TLC分离纯化(MeOH:DCM＝10％)，得到标题化合物(529mg，产率：99.3％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝381.3。
第四步：4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-异丙氧基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420000533
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-异丙氧基嘧啶-4-甲酸(200mg，0.526mmol，1.0equiv.)，溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(146.6mg，0.631mmol，1.2equiv)，HATU(299.8mg，0.789mmol，1.5equiv)和N,N-二异丙基乙胺(203.8mg，1.577mmol，3.0equiv)，室温搅拌2小时。LC-MS检测反应完成后，萃取浓缩，反相制备，得到标题化合物(80mg，产率：25.6％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝595.4。
第五步：((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-异丙氧基-6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420000534
将4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-异丙氧基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(80mg，0.134mmol，1.0equiv.)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(0.5mL)，25℃搅拌2小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，得到标题化合物粗品(70mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝495.3。
制备例28：6-((1-(环丁烷羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例304化合物的中间体)的制备
第一步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000541
将2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(1000mg，4.85mmol，1.0equiv.)溶于乙腈(10mL)中，加入4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(873.79mg，4.37mmol，0.9equiv.)和N,N-二异丙基乙胺(1876.95mg，14.55mmol，3.0equiv)，25℃搅拌2小时。用TLC和LC-MS检测反应完成，将溶剂旋干，并用Prep-TLC分离纯化(EA:PE＝20％)，得到标题化合物(1500mg，产率：83.7％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝371.3。
第二步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000542
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(500mg，1.35mmol，1.0equiv.)溶于乙腈(5mL)中，加入四氢吡咯(105.72mg，1.49mmol，1.1equiv)和N,N-二异丙基乙胺(348.3mg，2.7mmol，2.0equiv)，90℃搅拌16小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，并用Prep-TLC分离纯化(EA:PE＝30％)，得到标题化合物(373mg，产率：68.2％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝406.4。
第三步：6-(哌啶-4-基氨基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000543
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-甲酸甲酯(50mg，0.123mmol，1.0equiv.)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入三氟乙酸(0.25mL)，25℃搅拌2小时。LC-MS检测反应完成后，萃取，浓缩，得到粗品标题化合物(50mg，产率：100％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝306.4。
第四步：6-((1-(环丁烷羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000544
将6-(哌啶-4-基氨基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-甲酸甲酯(50mg，0.164mmol，1.0equiv.)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(63.44mg,0.49mmol,3.0equiv)，0℃搅拌15min。在冰浴条件下，滴加环丁烷甲酰氯(21.29mg，0.18mmol，1.1equiv)，搅拌1小时。LC-MS检测反应完成后，萃取浓缩，得到标题化合物粗品(62mg，产率：97.79％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝388.3。
第五步：6-((1-(环丁烷羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000545
将6-((1-(环丁烷羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-甲酸甲酯(62mg，0.16mmol，1.0equiv.)溶于乙腈(1mL)中，加入三甲基硅醇钾(24.8mg,0.24mmol,1.5equiv)，25℃搅拌2小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，用稀盐酸溶液调pH呈弱酸性，得到标题化合物粗品(62mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝374.3。
制备例29：2-(哌啶-1-基)-6-((1-(嘧啶-4-基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例318化合物的中间体)的制备
第一步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000551
将2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(1g，4.85mmol，1.0equiv.)溶于乙腈(10mL)中，加入4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(873.79mg，4.37mmol，0.9equiv.)和N,N-二异丙基乙胺(1.88g，14.55mmol，3.0equiv)，25℃搅拌2小时。用TLC和LC-MS检测反应完成，将溶剂旋干，并用快速硅胶柱分离纯化(EA:PE＝1:5)，得到标题化合物(1.5g，产率：83.7％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝371.3。
第二步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-(哌啶-1-基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000552
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(500mg，1.35mmol，1.0equiv.)溶于乙腈(5mL)中，加入六氢吡啶(126.3mg，1.48mmol，1.1equiv)和N,N-二异丙基乙胺(348.3mg，2.7mmol，2.0equiv)，90℃搅拌16小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，并用快速硅胶柱分离纯化(EA:PE＝1:3)，得到标题化合物(300mg，产率：53％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝420.2。
第三步：2-(哌啶-1-基)-6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000553
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-(哌啶-1-基)嘧啶-4-甲酸甲酯(150mg，0.358mmol，1.0equiv.)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(0.25mL)，25℃搅拌2小时。LC-MS检测反应完成后，加水用二氯甲烷萃取，浓缩，得到标题化合物粗品(140mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝320.2。
第四步：2-(哌啶-1-基)-6-((1-(嘧啶-4-基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000554
将2-(哌啶-1-基)-6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(100mg，0.31mmol，1.0equiv.)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入DIPEA(121.40mg,0.94mmol,3.0equiv)，0℃搅拌15min。在冰浴条件下，滴加4-氯嘧啶(39.40mg，0.34mmol，1.1equiv)，搅拌1小时。LC-MS检测反应完成后，加水二氯甲烷萃取浓缩，得到标题化合物粗品(112mg，产率：90％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝398.2。
第五步：2-(哌啶-1-基)-6-((1-(嘧啶-4-基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000561
将2-(哌啶-1-基)-6-((1-(嘧啶-4-基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(112mg，0.28mmol，1.0equiv.)溶于乙腈(1mL)中，加入三甲基硅醇钾(53.76mg,0.42mmol，1.5equiv)，25℃搅拌2小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，用稀盐酸溶液调pH呈弱酸性，得到标题化合物粗品(62mg，产率：57.4％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝385.1。
制备例30：6-((2-(甲磺酰基)乙基)氨基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例322化合物的中间体)的制备
第一步：2-(甲磺酰基)乙烷-1-胺的制备
Figure BDA0003640361420000562
将2-(甲硫基)乙胺(500mg，5.48mmol，1.0equiv.)溶于二氯甲烷中(30mL)中，加入间氯过氧苯甲酸(2.08g，12.06mmol，2.2equiv.)，混合物室温(25℃)搅拌3小时，用饱和亚硫酸钠溶液淬灭，将溶剂旋干，得到标题化合物粗品(500mg)。
第二步：2-氯-6-((2-(甲磺酰基)乙基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000563
将2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(1.2g，5.79mmol，1.0equiv.)溶于乙腈中(25mL)中，0℃加入2-(甲磺酰基)乙烷-1-胺(714mg，5.79mmol，1.0equiv.)和N,N-二异丙基乙胺(2.25g，17.39mmol，3.0equiv.)。混合物在氮气下，0℃搅拌1小时。用TLC检测反应完成，将溶剂旋干，并用乙酸乙酯打浆，过滤收集固体，得到标题化合物(500mg，产率：29.4％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝294.0。
第三步：6-((2-(甲磺酰基)乙基)氨基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000564
将2-氯-6-((2-(甲磺酰基)乙基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(250mg，0.85mmol，1.0equiv.)，四氢吡咯(67mg，0.94mmol，1.1equiv.)溶于乙腈(5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(165mg，1.28mmol，1.5equiv.)，90℃搅拌2小时。LC-MS检测反应完成后，用乙酸乙酯(5mL)萃取3次，并用快速色谱法分离纯化(硅胶，DCM:MeOH＝100:6)，得到标题化合物(140mg，产率：50.1％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝329.2。
第四步：6-((2-(甲磺酰基)乙基)氨基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000571
将6-((2-(甲磺酰基)乙基)氨基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-甲酸甲酯(150mg，0.46mmol，1.0equiv.)溶于四氢呋喃中(2mL)，加入氢氧化锂水溶液(2M)(21mg，0.91mmol，2.0equiv.)，25℃搅拌2小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，得到标题化合物粗品(170mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝315.2。
制备例31：6-((2-(苄氧羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例327化合物的中间体)的制备
第一步：6-((叔丁氧羰基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸苄酯的制备
Figure BDA0003640361420000572
将(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基甲酸叔丁酯(550mg，2.59mmol，1.0equiv.)、CbzCl(486mg，2.85mmol，1.1equiv.)及DIPEA(670mg，5.18mmol，2.0equiv.)溶于DCM(13mL)中，20℃反应3小时。反应液浓缩，粗产物用快速色谱法分离纯化(硅胶，DCM:MeOH＝49:1)，得到目标化合物(658mg，产率：73.3％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝347.2。
第二步：6-氨基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸苄酯的制备
Figure BDA0003640361420000573
将6-((叔丁氧羰基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸苄酯(658mg，1.90mmol，1.0equiv.)及TFA(2.5mL)溶于二氯甲烷(10mL)中，20℃反应1小时。反应液用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，二氯甲烷萃取，有机相浓缩，得到目标化合物粗品(468mg，产率：100％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝247.2。
第三步：6-((2-氯-6-(甲氧羰基)嘧啶-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸苄酯的制备
Figure BDA0003640361420000574
将6-氨基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸苄酯(468mg，1.90mmol，1.0equiv.)、2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(393mg，1.90mmol，1.0equiv.)及DIPEA(491mg，3.80mmol，2.0equiv.)溶于乙腈(20mL)中，0℃反应1小时。反应液浓缩，粗产物用快速色谱法分离纯化(硅胶，DCM:MeOH＝49:1)，得到标题化合物(754mg，产率：95.3％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝417.2。
第四步：6-((6-(甲氧羰基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸苄酯的制备
Figure BDA0003640361420000575
将6-((2-氯-6-(甲氧羰基)嘧啶-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸苄酯(120mg，0.29mmol，1.0equiv.)、四氢吡咯(23mg，0.32mmol，1.1equiv.)及DIPEA(74mg，0.58mmol，2.0equiv.)溶于乙腈(4mL)中，90℃反应24小时。反应液浓缩，粗产物用快速色谱法分离纯化(硅胶，DCM:MeOH＝49:1)，得到标题化合物(120mg，产率：92.3％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝452.2。
第五步：6-((2-(苄氧羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000581
将6-((6-(甲氧羰基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸苄酯(120mg，0.27mmol，1.0equiv.)及LiOH(13mg，0.53mmol，2.0equiv.)溶于THF(4mL)和水(0.4mL)中，20℃反应1.5小时。反应液用稀盐酸调酸，浓缩，得到目标化合物粗品(197mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝438.2。
制备例32：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-(三氟甲基)嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例356化合物的中间体)的制备
第一步：4-((6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420000582
将4,6-二氯-2-(三氟甲基)嘧啶(2g，9.2mmol)，4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.846g，9.2mmol)和DIPEA(1.78g，13.82mmol)溶于乙腈(20mL)中，室温(25-30℃)搅拌2h。LC-MS监控反应，原料消失。乙酸乙酯萃取三次，每次40mL，合并乙酸乙酯相，40mL水洗一次，40mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥10分钟，过滤，粗产物用DCM:MeOH＝50:1过柱分离纯化，得到产品(3.47g，产率：96.9％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝381.2。
第二步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-(三氟甲基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000583
将4-((6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(3.47g，9.1mmol)，Et3N(2.76g，27.3mmol)和Pd(dppf)Cl2(0.66g，0.91mmol)溶于甲醇(50mL)和DMF(50mL)的混合溶液中，反应在4个大气压的CO氛围中100℃加热72h。LC-MS检测全部转化为产品。将反应溶剂旋干，乙酸乙酯萃取三次，每次40mL，合并乙酸乙酯相，40mL水洗一次，40mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥10分钟，过滤，粗产物用DCM:MeOH＝30:1过柱分离纯化，得到粗产品(3g，产率：81.6％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝405.2。
第三步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-(三氟甲基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000584
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-(三氟甲基)嘧啶-4-甲酸甲酯(2g，4.95mmol)溶于THF(10mL)和甲醇(10mL)中，然后加入氢氧化锂的水溶液(5mL，10mmol，2M)。反应液在室温下搅拌1h。LC-MS显示反应完毕。乙酸乙酯萃取三次，每次10mL。保留水相，加入1M(摩尔浓度)的盐酸调节pH＝6-7，直接旋干，得到标题化合物粗品(2.18g)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝391.2。
制备例33：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-环己基嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例357化合物的中间体)的制备
第一步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(环己-1-烯-1-基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000591
称量6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(300mg，0.959mmol，1equiv.)，环己-1-烯-1-基硼酸(241.6mg，1.918mmol，2.0equiv.)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(70.24mg，0.096mmol，0.1equiv.)和碳酸钾(397.7mg，2.978mmol，3equiv.)，混合于二氧六环(80mL)和水(20mL，提前通氮气除氧)中，油浴加热100℃反应1小时。LC-MS监测原料消耗完全。反应液过滤，旋干，得到标题化合物粗品(343mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝359.2。
第二步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(环己-1-烯-1-基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000592
室温(25℃)下，将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(环己-1-烯-1-基)嘧啶-4-甲酸甲酯(343mg，0.957mmol，1.0equiv.)加入到水(1mL)和四氢呋喃(4.0mL)中，加入氢氧化锂(45.8mg，1.914mmol，2.0equiv.)，室温搅拌1h，LC-MS检测反应完成后，将反应液浓缩，去除有机溶剂，用1M盐酸调节pH＝3，体系用二氯甲烷:甲醇(V/V＝10/1)(30mL×5)萃取，合并有机相，干燥，过滤，浓缩，得到标题化合物粗品(1.1g)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝345.2。
第三步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-环己基嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000593
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(环己-1-烯-1-基)嘧啶-4-甲酸(1.05g，3.049mmol，1.0equiv.)加入到甲醇(10mL)中，然后加入钯碳(324mg，0.305mmol，0.1equiv，10％.)。氢气条件下，室温搅拌2h。LC-MS检测反应完成后，体系过滤，浓缩，得到粗产品，粗产物用Prep-HPLC分离纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液，MeCN)，冻干，得到标题化合物(148mg，产率：14％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝347.3。
制备例34：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-乙基嘧啶-4-甲酸(本中间体例如可以作为实施例365化合物的中间体)的制备
第一步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000594
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(999.86mg，3.2mmol，1equiv.)、乙炔基三甲基硅烷(1.88g，0.019mol,6equiv.)、碘化亚铜(0.091g，0.48mmol，0.15equiv.)、三乙胺(0.97g，9.6mmol，3equiv.)及四(三苯基膦)钯(0.55g，0.48mmol，0.15equiv.)溶于DMF(N,N-二甲基甲酰胺)(8mL)中，置换氮气2分钟，100℃微波加热反应2小时。TLC检测反应完成后，过滤，滤饼用混合溶剂(DCM:MeOH＝10:1)15mL洗两遍，滤液浓缩，粗产物先用柱层析(DCM:MeOH＝10:1)分离，浓缩得标题化合物(0.5g，产率：41.8％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.95(d,J＝7.4Hz,1H),7.06(s,1H),4.17(d,J＝14.0Hz,2H),3.84(s,3H),3.75(s,1H),3.22(t,J＝11.7Hz,1H),2.86(t,J＝10.9Hz,1H),2.01(s,3H),1.87(dd,J＝23.0Hz,12.0Hz,2H),1.42-1.33(m,1H),1.33-1.25(m,1H),0.26(s,9H)。
第二步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-乙炔基嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000601
将四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(0.21ml,0.80mmol，1.5equiv.)加入到6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)嘧啶-4-甲酸甲酯(0.2g，0.53mmol，1equiv.)的四氢呋喃(10mL)溶液中，25℃反应半小时，LC-MS检测反应完成后，浓缩，得到粗产品(161.44mg，0.534mmol)，不用纯化，直接用于下一步反应中。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝303.1。
第三步：甲基6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-乙基嘧啶-4-甲酸酯的制备
Figure BDA0003640361420000602
在氮气环境下，将Pd/C(0.0227g，0.11mmol，0.2equiv.)加入到6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-乙炔基嘧啶-4-甲酸甲酯(161.44mg，0.53mmol，1equiv.)的甲醇(10mL)溶液中。用氢气置换4次，25℃反应8小时，LC-MS检测反应完成后，过滤，滤饼用甲醇(10mL)洗三遍，滤液浓缩，得到粗产品，用反相(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液/乙腈)纯化，得标题化合物(60mg，产率：；36.7％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝307.2。
第四步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-乙基嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000603
将氢氧化锂(20.54mg，0.49mmol，2.5equiv.)的水溶液(3mL,33.33％)加入到6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-乙基嘧啶-4-甲酸甲酯(60mg，0.20mmol，1equiv.)的四氢呋喃(3mL,33.33％)和甲醇(3mL,33.33％)的混合溶液中。25℃反应1小时，LC-MS检测反应完成后，浓缩，粗产物用2mL乙腈溶解，用1M HCl水溶液调pH值到5，冻干，得到标题化合物(50mg，产率：87.3％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝293.2。
制备例35：反式-(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-基)甲酮的制备
第一步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000604
将6-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(1g，5.80mmol，1.0equiv.)、4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯盐酸盐(1.65g，6.95mmol，1.2equiv.)及DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)(3.00g，23.18mmol，4.0equiv.)溶于MeCN(乙腈)(30mL)中，90℃反应15小时。反应液浓缩，粗产物用快速色谱法分离纯化(硅胶，PE:EA＝3:2)，得到目标化合物(1.82g，93.4％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝337.3。
第二步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000611
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(1.8g，5.35mmol，1.0equiv.)及LiOH(氢氧化锂)(0.26g，10.70mmol，2.0equiv.)溶于THF(四氢呋喃)(27mL)和H2O(水)(9mL)中，20℃反应1小时。反应液浓缩，用二氯甲烷/甲醇(3:1)稀释，抽滤，滤液浓缩，得到目标化合物粗品(2.14g，产率：未计)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝323.2。
第三步：反式-4-((6-(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420000612
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸(2.1g，6.51mmol，1.0equiv.)、反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(2.09g，8.99mmol，1.38equiv.)、T3P(1-正丙基磷酸酐)的乙酸乙酯溶液(质量分数50％)(8.29g，13.03mmol，2.0equiv.)及TEA(三乙胺)(3.30g，32.57mmol，5.0equiv.)溶于DMF(N,N-二甲基甲酰胺)(30mL)中，20℃反应17小时。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩，粗产物用快速色谱法分离纯化(硅胶，DCM:MeOH＝20:1)，得到标题化合物粗品(0.98g，28.0％)。取30mg目标化合物粗品，用Prep-HPLC分离纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液/乙腈)，得到目标化合物(19.4mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝537.6；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.57-8.51(m,1H),7.19-7.08(m,3H),7.06-6.99
(m,1H),6.63-6.54(m,1H),5.17-4.66(m,2H),4.32-3.84(m,6H),3.77-3.62(m,2H),3.17-2.80(m,7H),2.79-2.54(m,2H),2.08-1.81(m,3H),1.76-1.65(m,1H),1.47(s,9H),1.44-1.35(m,2H)。
第四步：反式-(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420000613
将反式-4-((6-(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(30mg，0.06mmol，1.0equiv.)溶于DCM(二氯甲烷)(0.4mL)中，随后加入TFA(三氟乙酸)(0.1mL)，20℃反应0.5小时。反应液用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，浓缩，粗产物用制备HPLC分离纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液/乙腈)，得到标题化合物(17.42mg，71.4％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝437.5；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.46-8.32(m,1H),7.61(t,J＝7.7Hz,1H),
7.13-7.01(m,4H),6.51(s,1H),4.79(dd,J＝35.1,3.9Hz,1H),4.40(dd,J＝56.4,12.7Hz,1H),3.93(m,1H),3.87-3.56(m,5H),2.98(d,J＝12.5Hz,2H),2.93-2.87(m,1H),2.85-2.75(m,4H),2.69-2.53(m,4H),1.92-1.69(m,3H),1.57-1.43(m,1H),1.41-1.27(m,2H)。
制备例36：(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基-4,4-d2)哌啶-3-醇的制备
第一步：(3R,4R)-3-((叔丁氧羰基)氧基)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420000614
将(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(1g，4.3mmol，1.0equiv.)，TEA(1.3g，12.9mmol，3.0equiv.)和DMAP(105mg，0.86mmol，0.2equiv.)溶解于THF(20mL)中，在搅拌下加入Boc2O(1.88g，8.6mmol，2.0equiv.)，20℃反应1小时。反应液浓缩，粗产物用柱层析法分离纯化(硅胶，PE:EA＝20:1)，得到目标化合物(1.12g，产率：60％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝433.3。
第二步：(3R,4R)-3-((叔丁氧羰基)氧基)-4-(4-氧代-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420000621
将(3R,4R)-3-((叔丁氧羰基)氧基)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.49mmol，1.0equiv.)溶于CHCl3(10mL)中，加入甲酸(451mg，9.8mmol，20.0equiv.)和DDQ(473mg，2.08mmol，3.0equiv.)，20℃反应16小时。反应液加入饱和碳酸钠水溶液(5mL)，用水和DCM萃取，有机相浓缩，粗产物用柱层析法分离纯化(硅胶，DCM:MeOH＝50:1)，得到目标化合物(46mg，产率：18％)。
LC-MS(ESI)[M+Na]+＝469.3。
第三步：2-((3R,4R)-3-羟基哌啶-4-基)-2,3-二氢异喹啉-4(1H)-酮的制备
Figure BDA0003640361420000622
将(3R,4R)-3-((叔丁氧羰基)氧基)-4-(4-氧代-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(46mg，0.1mmol，1.0equiv.)溶于EA(0.5mL)中，加入乙酸乙酯-盐酸气(5mL,4M)，20℃反应1小时。反应液浓缩，粗产物用MeOH:H2O(1mL:1mL)溶解，加入氢氧化锂(7mg，0.3mmol，3.0equiv.)，20℃反应1小时。反应液浓缩，用pre-TL纯化(硅胶，DCM:MeOH＝5:1)，得到目标化合物(12mg，产率：48％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝247.3。
第四步：(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基-4,4-d2)哌啶-3-醇的制备
Figure BDA0003640361420000623
将2-((3R,4R)-3-羟基哌啶-4-基)-2,3-二氢异喹啉-4(1H)-酮(4mg，0.016mmol，1.0equiv.)溶于干燥THF(1mL)中，加入LiAlD4(1.3mg，0.032mmol，2.0equiv.)，0℃反应2小时。反应液用重水淬灭，浓缩，得到目标化合物(6mg，粗品)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝235.1。
制备例37：2-((3R,4R)-3-羟基哌啶-4-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-4-醇的制备
第一步：(3R,4R)-3-((叔丁氧羰基)氧基)-4-(4-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420000631
将(3R,4R)-3-((叔丁氧羰基)氧基)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(500mg，1.16mmol，1.0equiv.)溶解于THF：H2O(10mL:10mL)混合溶液中，在搅拌下加入Oxone(1.42g，2.31mmol，2.0equiv.)，20℃反应16小时。反应液加入水(20mL)，用乙酸乙酯(20mL*3)萃取，合并有机相，干燥浓缩，粗产物用柱层析法分离纯化(硅胶，DCM:MeOH＝50:1)，得到标题化合物(120mg，产率：23％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝449.3。
第二步：2-((3R,4R)-3-羟基哌啶-4-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉-4-醇的制备
Figure BDA0003640361420000632
将(3R,4R)-3-((叔丁氧羰基)氧基)-4-(4-羟基-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.223mmol，1.0equiv.)溶于EA(0.5mL)中，加入乙酸乙酯盐酸气(5mL，4M)，20℃反应1小时。反应液浓缩，粗产物用MeOH:H2O(1mL:1mL)溶解，加入一水氢氧化锂(29mg，0.669mmol，3.0equiv.)，20℃反应1小时。反应液浓缩，用pre-TL纯化(硅胶，DCM:MeOH＝5:1)，得到目标化合物(35mg，产率：64％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝249.2。
制备例38：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(叔丁硫基)嘧啶-4-甲酸的制备
第一步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(叔丁硫基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000633
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(1g，3.20mmol，1equiv.)，碳酸钾(0.884g，6.40mmol，2equiv.)加入到N,N-二甲基甲酰胺(16mL)中，再加入叔丁基硫醇(1.45g，16.0mmol，5equiv.)。在80℃下搅拌6h，TLC检测原料反应完全。向反应体系加入水(160mL)，用乙酸乙酯萃取三次(3×50mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，抽滤，将溶剂浓缩，粗产物柱色谱纯化(DCM:MeOH＝98:2)，得到标题化合物(0.49g，产率：41.8％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝367.2。
第二步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(叔丁硫基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000634
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(叔丁硫基)嘧啶-4-甲酸甲酯(0.29g，0.791mmol，1equiv.)溶于四氢呋喃/水(25mL，4:1)中，加入氢氧化锂(38mg，1.582mmol，2equiv.)，在16℃下搅拌2h，TLC检测原料反应完全。向反应体系加入水，用乙酸乙酯萃取三次，水相用1M HCl溶液调节pH＝4-5，冻干后得到标题化合物粗品(0.25g，产率：89.7％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝353.2。
制备例39：6-(((1-乙酰基氮杂环丁烷-3-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
第一步：6-(((1-乙酰基氮杂环丁烷-3-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000641
将2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(500mg，2.42mmol，1.2equiv.)，1-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)乙烷-1-酮(230mg，2.02mmol，1.0equiv.)溶于乙腈(5mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(521mg，4.04mmol，2.0equiv.)，室温反应2小时。LC-MS检测反应完成后，旋干溶剂，粗产物用快速色谱法分离纯化(硅胶，DCM:MeOH＝5％)，得到标题化合物(530mg，产率：92％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝285.1。
实施例1：反式-1-(4-((6-(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氧基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420000642
将1-(4-羟基哌啶-1-基)乙烷-1-酮(77mg，0.536mmol，2.0equiv.)加入到NaH(质量分数60％)(35.7mg，0.536mmol，2.0equiv.)的THF(1.4mL)溶液中，0℃、氮气保护下搅拌0.5h。然后加入反式-1-(6-氯嘧啶-4-基)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(100mg，0.268mmol，1.0equiv.)，在16℃条件下继续0.5小时。LC-MS监测反应完成。在0℃下滴加氯化铵饱和溶液10mL，用EA(20mL)萃取一次，有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，抽滤，将母液浓缩，粗产物用反相分离纯化(C18，10mmol/L碳酸氢铵水溶液/乙腈)，得标题化合物(2.32mg，产率：1.5％)。
LC-MS(ESI):m/z＝480.5；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.76-8.74(m,1H),7.21-7.10(m,3H),7.06-7.01(m,1H),7.00-6.93(m,1H),5.49-5.37(m,1H),5.09-4.76(m,1H),4.18-4.06(m,1H),4.03-3.92(m,2H),3.79-3.68(m,3H),3.56-3.39(m,2H),3.13-2.92(m,4H),2.83-2.72(m,2H),2.14(s,3H),2.10-2.02(m,2H),1.86-1.67(m,6H)。
实施例2和实施例3：(Z)-2-(4-((6-(反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-羰基)-3-(二甲氨基)丙烯腈(实施例2化合物)和(3-(4-((6-(反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙腈(实施例3化合物)的制备
第一步：(Z)-2-氰基-3-(二甲氨基)丙烯酰氯和2-氰基乙酰氯的制备
Figure BDA0003640361420000643
将氰乙酸(1g，11.8mmol，1.0equiv.)溶于DCM中(100mL)中，0℃加入(COCl)2(1.64g，12.9mmol，1.1equiv.)和DMF(8mg，0.1mmol，0.01equiv.)。氮气下，25℃搅拌1小时，TLC检测反应完成，旋干，得到(Z)-2-氰基-3-(二甲氨基)丙烯酰氯和2-氰基乙酰氯的混合物(1.1g，粗品)。
第二步：(Z)-2-(4-((6-(反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-羰基)-3-(二甲氨基)丙烯腈(实施例2)和3-(4-((6-(反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙腈(实施例3)的制备
Figure BDA0003640361420000651
将(Z)-2-氰基-3-(二甲氨基)丙烯酰氯和2-氰基乙酰氯的混合物(5mg，0.046mmol，1.0equiv.)溶于DCM(2mL)，0℃时滴加到(反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-基)甲酮(20mg，0.046mmol，1.0equiv.)的DCM溶液(1.5mL)中，加入三乙胺(9mg，0.09mmol，2.0equiv.)，0℃搅拌1小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，粗产物用反相分离纯化(C18，10mmol/L碳酸氢铵水溶液/乙腈)，得两个标题化合物：
实施例2的化合物(14.5mg，产率：56.7％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝559.56；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.60-8.48(m,1H),7.54(s,1H),7.19-7.09(m,3H),7.08-6.98(m,1H),6.67-6.55(m,1H),5.47-5.27(m,1H),5.07-4.63(m,1H),4.31-4.23(m,2H),4.22-4.12(m,1H),4.04-3.91(m,2H),3.79-3.68(m,2H),3.35(s,3H),3.17(s,3H),3.12-2.98(m,4H),2.97-2.83(m,3H),2.76-2.65(m,2H),2.13-2.05(m,2H),2.03-1.89(m,1H),1.71-1.64(m,1H),1.60-1.43(m,2H)。
实施例3的化合物(5.8mg，产率：25.4％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝504.56；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.60-8.45(m,1H),7.20-7.09(m,3H),7.08-6.99(m,1H),6.71-6.58(m,1H),6.02-5.60(m,1H),5.07-4.65(m,1H),4.47(d,J＝13.3Hz,1H),4.23-4.10(m,2H),4.01-3.93(m,1H),3.79-3.69(m,3H),3.63-3.46(m,2H),3.37-3.26(m,1H),3.11-2.99(m,2H),2.97-2.88(m,3H),2.80-2.66(m,2H),2.20-2.04(m,2H),2.01-1.78(m,3H),1.76-1.63(m,1H),1.61-1.41(m,2H)。
实施例4：反式-1-(6-((6-(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)乙烷-1-酮的制备
第一步：(2-乙酰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420000652
将(2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，1.41mmol，1.0equiv.)及DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)(365mg，2.83mmol，2.0equiv.)溶于DCM(二氯甲烷)(7mL)中，随后0℃下加入乙酸酐(159mg，1.55mmol，1.1equiv.)，20℃反应0.5小时。反应液浓缩，粗产物用快速色谱法分离纯化(硅胶，DCM:MeOH＝30:1)，得到目标化合物(336mg，产率：93.5％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝255.2。
第二步：1-(6-氨基-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420000653
将(2-乙酰基-2-氮杂螺[3.3]庚-6-基)氨基甲酸叔丁酯(310mg，1.22mmol，1.0equiv.)溶于MeOH(甲醇)(1mL)中，随后加入盐酸的1,4-二氧六环溶液(3mL,4M)，20℃反应1小时。反应液浓缩，得到目标化合物粗品(290mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝155.1。
第三步：反式-1-(6-((6-(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420000661
将(6-氯嘧啶-4-基)(反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮(60mg，0.16mmol，1.0equiv.)、1-(6-氨基-2-氮杂螺[3.3]庚-2-基)乙烷-1-酮(50mg，0.32mmol，2.0equiv.)、Pd(OAc)2(醋酸钯)(7mg，0.03mmol，0.2equiv.)、BINAP(1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦)(40mg，0.06mmol，0.4equiv.)及Cs2CO3(碳酸铯)(262mg，0.80mmol，5.0equiv.)溶于1,4-dioxane(1,4-二氧六环)(1mL)中，80℃氮气保护下反应16小时。反应液过滤，滤液浓缩，粗产物用Prep-HPLC分离纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液，MeCN)，得到标题化合物(2.04mg，产率：2.6％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝491.5；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.57-8.51(m,1H),7.20-7.09(m,3H),7.07-7.00(m,1H),6.61-6.50(m,1H),5.52-5.32(m,1H),5.07-4.66(m,1H),4.26-4.05(m,5H),4.04-3.95(m,2H),3.81-3.67(m,2H),3.16-2.58(m,10H),2.22-2.09(m,2H),2.05-1.98(m,1H),1.92-1.83(m,4H)。
实施例5：1-(4-((2-(苯并[d]噻唑-7-基)-6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
第一步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(苯并[d]噻唑-7-基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000662
将7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯并[d]噻唑(190mg，0.728mmol，1.0equiv.)，6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(249mg，0.8mmol，1.1equiv.)，Pd(dppf)Cl2(53mg，0.0728mmol，0.1equiv.)及碳酸钾(301mg，2.18mmol，3.0equiv.)溶于二氧六环(3mL)和水(1mL)中，100℃反应1小时。LC-MS检测反应完成，加水稀释，EA萃取，水相用1M盐酸调节pH为4，冻干水相，得到粗品(300mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝398.3。
第二步：1-(4-((2-(苯并[d]噻唑-7-基)-6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420000663
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(苯并[d]噻唑-7-基)嘧啶-4-甲酸(85mg，0.215mmol，1.0equiv.)、(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(50mg，0.215mmol，1.0equiv.)、EDCI(62mg，0.32mmol，1.5equiv.)、HOAt(44mg，0.32mmol，1.5equiv.)溶于DMF(2mL)中，25℃反应1小时。LC-MS检测反应完成，浓缩，反相HPLC分离(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液/乙腈)，得标题化合物(26.28mg，产率：20％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝612.2；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.10(s,1H),8.72-8.57(m,1H),8.28-8.25(m,1H),7.68-7.63(m,1H),7.20-7.10(m,3H),7.08-7.02(m,1H),6.66-6.55(m,1H),5.49-5.30(m,1H),5.11-4.86(m,1H),4.68-4.26(m,3H),4.07-4.04(m,1H),3.80-3.85(m,3H),3.34-3.32(m,1H),3.20-2.70(m,8H),2.32-2.03(m,6H),1.88-1.75(m,1H),1.55-1.50(m,2H)。
实施例6：1-(3-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)氨基)吖丁啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
第一步：6-((1-乙酰基吖丁啶-3-基)氨基)-2-(噻唑-5-基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000671
室温(25℃)下，将6-((1-乙酰基吖丁啶-3-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(50mg，0.176mmol，1.0equiv.)加入到DMF(2.0mL)中，在氮气保护下加入5-(三丁基锡烷基)噻唑(1.503g，0.351mmol，2.0equiv.)和四(三苯基膦)钯(20.3mg，0.018mmol，0.1equiv.)，微波140℃搅拌1小时，LC-MS检测反应完成，过滤，浓缩母液，粗产物用层析柱分离纯化(DCM:MeOH＝0-10％)，得到标题化合物(35mg，产率：59.7％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝334.1。
第二步：6-((1-乙酰基吖丁啶-3-基)氨基)-2-(噻唑-5-基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000672
室温下，将6-((1-乙酰基吖丁啶-3-基)氨基)-2-(噻唑-5-基)嘧啶-4-甲酸甲酯(30mg，0.09mmol，1.0equiv.)加入水(1mL)和四氢呋喃(2.0mL)中，加入氢氧化锂(4.3mg，0.18mmol，2.0equiv.)，室温搅拌1小时，LC-MS检测反应完成，浓缩去除有机溶剂，用1M盐酸调节pH＝3，体系用二氯甲烷:甲醇(V/V＝10/1)(30mL×5)萃取三次，合并有机相，干燥，过滤，浓缩，得到标题化合物(20mg，粗产品)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝320.3。
第三步：1-(3-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-(噻唑-5-基)嘧啶-4-基)氨基)吖丁啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420000673
利用实施例5中第二步的方法，合成得到标题化合物(4.96mg，产率：14.8％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝534.4；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.06(d,J＝6.0Hz,1H),8.59(d,J＝11.2Hz,1H),7.10-7.06(m,4H),6.58(d,J＝8.0Hz,1H),4.76-3.68(m,9H),3.07-2.70(m,10H),1.92(s,3H)。
实施例7：反式-1-(4-((6-(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-(噻唑-2-基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
第一步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(噻唑-2-基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000674
称量6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(4.50g，1.44mmol，1equiv.)和Pd(PPh3)4(1.68g，0.144mmol，0.1equiv.)，放入反应瓶中，加入二氧六环(72mL)和2-(三丁基锡烷基)噻唑(9mL，2.88mmol，1.99equiv.)，氮气保护下，110℃搅拌14小时。LC-MS监测产物生成。浓缩除溶剂，粗品用快速色谱法分离纯化(硅胶,MeOH:EA＝0-5％)，得到标题化合物(1.11g，产率：21.3％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝362.2。
第二步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(噻唑-2-基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000681
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(噻唑-2-基)嘧啶-4-甲酸甲酯(1.11g，3.06mmol，1equiv.)溶于THF(24mL)中，加入水(6mL)和LiOH(180mg，7.5mmol，2.45equiv.)，室温搅拌1小时。TLC监测反应完成。加1M(摩尔浓度)HCl调节pH至3-4，水溶液冻干，得到粗产品(1.0g)，直接用于下一步。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝348.0。
第三步：反式-1-(4-((6-(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-(噻唑-2-基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420000682
利用实施例5中第二步的方法，合成得到标题化合物(555mg，产率：32％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝562.5；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.04-7.95(m,1H),7.52-7.46(m,1H),7.20-7.10(m,3H),7.07-7.01(m,1H),6.75-6.62(m,1H),5.81-5.54(m,1H),5.13-4.66(m,1H),4.49(d,J＝13.6Hz,1H),4.43-4.25(m,1H),4.05-3.96(m,1H),3.94-3.70(m,4H),3.33-3.21(m,1H),3.17-2.55(m,8H),2.23-1.99(m,6H),1.98-1.82(m,1H),1.54-1.41(m,2H)。
实施例8-138
利用实施例5、6和7相同的方法，合成了实施例8-138的化合物，化合物结构及具体表征数据(LC-MS和1H NMR)如下：
Figure BDA0003640361420000683
Figure BDA0003640361420000691
Figure BDA0003640361420000701
Figure BDA0003640361420000711
Figure BDA0003640361420000721
Figure BDA0003640361420000731
Figure BDA0003640361420000741
Figure BDA0003640361420000751
Figure BDA0003640361420000761
Figure BDA0003640361420000771
Figure BDA0003640361420000781
Figure BDA0003640361420000791
Figure BDA0003640361420000801
Figure BDA0003640361420000811
Figure BDA0003640361420000821
Figure BDA0003640361420000831
Figure BDA0003640361420000841
Figure BDA0003640361420000851
实施例139：反式-1-(3-((6-((3S,4S)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吡咯烷-2-酮的制备
第一步：1-(3-硝基苯基)吡咯烷-2-酮的制备
Figure BDA0003640361420000852
将(3-硝基苯基)硼酸(2.0g，18.6mmol，1.0equiv)加入到二甲基亚砜(20mL)中，然后加入2-吡咯烷酮(4.74g，55.8mmol，3equiv)、碘化亚铜(178mg，0.93mmol，0.05equiv)，室温搅拌十分钟，然后加入70％的叔丁基过氧化氢水溶液(2.63g，20.46mmol，1.1equiv)，室温搅拌十分钟后，该反应液60℃搅拌4小时。LC-MS检测反应完成后，冷却至室温28℃，加入水(100mL)，乙酸乙酯(40mL×3)萃取三次，合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥十分钟，过滤，浓缩，粗品用快速色谱法分离纯化(硅胶，石油醚/乙酸乙酯(V/V＝4/1)，得标题化合物(800mg，产率：20.87％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝207.1；1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.72(t,J＝2.4Hz,1H),7.97(t,J＝8.0Hz,2H),7.68(t,J＝8.0Hz,1H),3.92(t,J＝6.8Hz,2H),2.57(t,J＝8Hz,2H),2.12-2.08(m,2H)。
第二步：1-(3-氨基苯基)吡咯烷-2-酮的制备
Figure BDA0003640361420000861
28℃下，将1-(3-硝基苯基)吡咯烷-2-酮(600mg，2.91mmol，1.0equiv.)加入到甲醇(20mL)中，然后加入Pd/C(10％)(50mg)，室温氢气氛围中搅拌14h，LC-MS检测反应完成后，抽滤除去Pd-C，将反应液浓缩，得标题化合物(400mg，产率：78％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝177.1。
第三步：1-(3-((6-((3S,4S)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)吡咯烷-2-酮的制备
Figure BDA0003640361420000862
28℃、氮气保护下，将(6-氯嘧啶-4-基)((3S,4S)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮(67mg，0.18mmol，1.0equiv)溶于1,4-二氧六环(3mL)，加入1-(3-氨基苯基)吡咯烷-2-酮(38mg，0.22mmol，1.2equiv)，醋酸钯(6mg，0.027mmol，0.15equiv)，BINAP(1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦)(33mg，0.054mol,0.3equiv)，碳酸铯(146mg，0.45mmol，2.5equiv)，80℃微波加热搅拌1小时。LC-MS检测反应完成后，冷却至室温，过滤，粗产物用Prep-HPLC分离纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液，MeCN)，得标题化合物(20mg，纯度：95.44％，产率：21.65％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝513.5；1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ9.87(d,J＝8.0Hz,1H),8.65(d,J＝8.4Hz,1H),8.03(s,1H),7.58(t,J＝5.6Hz,1H),7.35(td,J＝8.0Hz,2.4Hz,1H),7.28-7.26(m,1H),7.11-7.03(m,4H),6.88(dd,J＝6.4Hz,0.8Hz,1H),4.85-4.74(m,1H),4.52-4.33(m,1H),3.87-3.81(m,4H),3.78-3.75(m,1H),3.69-3.62(m,1H),3.31-3.30(m,1H),3.07-3.01(m,0.5H),2.92-2.74(m,5H),2.69-2.60(m,1.5H),2.54-2.53(m,1H),2.11-2.04(m,2H),1.88-1.74(m,1H),1.58-1.50(m,1H)。
实施例140-190
利用实施例139的方法，合成了实施例140-190的化合物，化合物结构及具体表征数据(LC-MS和1H NMR)如下：
Figure BDA0003640361420000863
Figure BDA0003640361420000871
Figure BDA0003640361420000881
Figure BDA0003640361420000891
Figure BDA0003640361420000901
Figure BDA0003640361420000911
实施例183：(6-((1-苯甲酰基哌啶-4-基)氨基)-2-异丙氧基嘧啶-4-基)((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮的制备
第一步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000921
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(500mg，1.347mmol，1.0equiv.)溶于乙腈(5mL)中，加入三甲基硅醇钾(0.1729g，1.347mmol，1.0equiv.)，25℃搅拌2小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，用10％的二氯甲烷-甲醇溶液溶解，过滤，滤液浓缩，得标题化合物(480mg，产率：99.8％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝357.2。
第二步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-异丙氧基嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000922
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸(480mg，1.35mmol，1.0equiv.)溶于异丙醇(5mL)中，加入叔丁醇钾(628.8mg，5.4mmol,4.0equiv)。90℃搅拌3小时。LC-MS检测反应完成，浓缩，Prep-TLC分离纯化(MeOH:DCM＝10％)，得到标题化合物(529mg，产率：99.3％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝381.3。
第三步：4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-异丙氧基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420000923
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-异丙氧基嘧啶-4-甲酸(200mg，0.526mmol，1.0equiv.)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(146.6mg，0.631mmol，1.2equiv)，HATU(299.8mg，0.789mmol，1.5equiv)和N,N-二异丙基乙胺(203.8mg，1.577mmol，3.0equiv)，室温搅拌2小时。LC-MS检测反应完成后，萃取浓缩，反相制备，得到化合物(80mg，产率：25.6％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝595.4。
第四步：((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-异丙氧基-6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420000924
将4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-异丙氧基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(80mg，0.134mmol，1.0equiv.)溶于二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(0.5mL)，25℃搅拌1小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，得到标题化合物(70mg粗品)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝495.3。
第五步：(6-((1-苯甲酰基哌啶-4-基)氨基)-2-异丙氧基嘧啶-4-基)((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420000931
将((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-异丙氧基-6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-基)甲酮(70mg，0.142mmol，1.0equiv.)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(54.77mg，0.425mmol，3.0equiv)，冰浴搅拌15min，然后加入苯甲酰氯(21.96mg，0.156mmol，1.1equiv)，逐渐升到室温搅拌2h。LC-MS检测反应完成后，浓缩，得到粗产物，经反相制备，得到标题化合物(37mg，产率：43.7％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝599.3；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.49-7.36(m,5H),7.14(m,3H),7.07-6.95(m,1H),6.21(d,J＝22.4Hz,1H),5.32-5.12(m,1H),5.09-4.55(m,3H),4.29(m,1H),3.97(m,1H),3.85-3.59(m,3H),3.27-2.87(m,6H),2.85-2.53(m,3H),2.07-2.01(m,3H),1.77-1.51(m,3H),1.41-1.28(m,6H)。
实施例184：(2-氯-6-(环丁氨基)嘧啶-4-基)(反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮的制备
第一步：2-氯-6-(环丁氨基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000932
室温下，将2-氯-6-(环丁氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(1.5g，6.207mmol，1.0equiv.)加入到水(5mL)和THF(20mL)中，加入氢氧化锂(297.3mg，12.414mmol，2.0equiv.)，室温搅拌1小时，LC-MS检测反应完成后，将反应液浓缩去除有机溶剂，用1M(摩尔浓度)盐酸调节pH＝3，体系用二氯甲烷:甲醇(V/V＝10/1)(30mL×5)萃取三次，合并有机相，干燥，过滤，浓缩，得到标题化合物(1.5g，粗品)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝442.4。
第二步：(2-氯-6-(环丁氨基)嘧啶-4-基)(反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420000933
利用实施例5中第二步的方法，合成得标题化合物(1.14g，产率：39.7％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝442.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.58-8.35(m,1H),7.10-6.88(m,4H),6.52-6.45(m,1H),4.83-4.73(m,1H),4.42-4.03(m,2H),3.86-3.76(m,2H),3.70-3.53(m,2H),3.05-2.73(m,5H),2.69-2.57(m,1H),2.33-2.28(m,2H),2.03-1.82(m,3H),1.73-1.61(m,2H),1.56-1.40(m,1H),1.23-1.21(m,1H)。
实施例185：反式-(6-(环丁氨基)-2-(2-(二甲氨基)乙氧基)嘧啶-4-基)(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420000934
将实施例184的化合物(0.1g，0.226mmol，1.0equiv.)加入到正丁醇(2mL)中，然后加入2-(二甲氨基)乙烷-1-醇(201.7mg，2.263mmol，1.0equiv.)，微波140℃搅拌1小时，LC-MS检测反应完成，反相制备HPLC分离纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液，MeCN)，冻干，得标题化合物(27.36mg，产率：24.4％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝495.4；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.93-7.90(m,1H),7.10-7.02(m,4H),6.13(d,J＝5.2Hz,1H),4.81-4.71(m,1H),4.46-4.24(m,4H),3.95-3.86(m,4H),3.01-2.86(m,1H),2.84-2.75(m,4H),2.67-2.53(m,4H),2.36-2.25(m,2H),2.20(s,3H),2.18(s,3H),1.91-1.63(m,5H),1.52-1.43(m,1H)。
实施例186：反式-(6-(环丁氨基)-2-苯氧基嘧啶-4-基)(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420000941
将实施例184的化合物(0.1g，0.226mmol，1.0equiv.)加入到正丁醇(2mL)中，加入苯酚钾(89.7mg，0.679mmol，3.0equiv.)，微波140℃搅拌1小时。LC-MS检测反应完成，反相制备HPLC分离(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液,MeCN)，冻干，得标题化合物(4.21mg，产率：3.7％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝500.5；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.44-7.37(m,2H),7.25-7.10(m,6H),7.05-7.01(m,1H),6.27-6.24(m,1H),4.70-4.49(m,1H),4.29-4.23(m,1H),3.91-3.77(m,3H),3.71-3.61(m,1H),3.02-2.59(m,8H),2.23-1.71(m,7H)。
实施例187：1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-异丁氧基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
第一步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420000942
将2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(6g，28.98mmol)，1-乙酰基哌啶-4-胺盐酸盐(5.7g，31.88mmol)和DIPEA(14.98g，115.94mmol)溶于乙腈(50mL)中。室温(25-30℃)搅拌2h。乙酸乙酯萃取三次，每次100mL，合并乙酸乙酯相，50mL水洗一次，50mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥10分钟，过滤，粗产物用DCM:MeOH＝100:1过柱分离纯化，得到产品(5.8g，产率：64％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝313.2。
第二步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-异丁氧基嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420000943
在20℃下，将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(250mg，0.80mmol，1.0equiv.)溶入无水二氧六环(3mL)，加入2-甲基丙烷-1-醇(178mg，2.4mmol，1.1equiv.)，叔丁醇钾(180mg，1.6mmol，2equiv.)，80℃搅拌2h，LC-MS检测反应完成后，浓缩产品，粗产物用制备HPLC分离纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液/乙腈)，冻干，得标题化合物(35mg，产率：13％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝337.2。
第三步：1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-异丁氧基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420000944
在20℃下，将羧酸中间体(35mg，0.1mmol，1.0equiv.)加入到DMF(2mL)中，然后加1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(28mg，0.12mmol，1.2equiv.)，HOAt(N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑)(16mg，0.12mmol，2equiv.)，(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(23mg，0.22mmol，1.0equiv.)，室温20℃搅拌2h。LC-MS检测反应完成后，粗产物用制备HPLC分离纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液/乙腈)，冻干，得标题化合物(15mg，产率：27.3％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝551.4；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.13-7.05(m,4H),6.21(d,J＝7.6Hz,1H),4.72-4.55(m,1H),4.43(d,J＝13.2Hz,1H),4.20-4.11(m,3H),4.01-3.79(m,5H),3.28-3.06(m,2H),3.00-2.87(m,5H),2.82-2.68(m,2H),2.13-2.05(m,5H),2.02-1.89(m,2H),1.73-1.67(m,1H),1.53-1.43(m,2H),1.04(t,J＝6.4Hz,6H)。
实施例188：1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-(戊基-3-基氧基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
第一步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(戊基-3-基氧基)嘧啶-4-甲酸：
Figure BDA0003640361420000951
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(300mg，0.96mmol，1.0equiv.)，3-戊醇(845mg，9.6mmol，10equiv.)溶于无水叔丁醇(5mL)中，加入叔丁醇钠(369mg，3.84mmol，4.0equiv.)，在100℃反应16小时。LC-MS检测反应完成后，反应液用1M盐酸调节pH为4，旋干溶剂，得到粗产物(700mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝351.2。
第二步：1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-(戊基-3-基氧基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420000952
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(戊基-3-基氧基)嘧啶-4-甲酸(90mg，0.26mmol，1.0equiv.)、(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(60mg，0.26mmol，1.0equiv.)、EDCI(74mg，0.38mmol，1.5equiv.)及HOAt(52mg，0.38mmol，1.5equiv.)溶于DMF(N,N-二甲基甲酰胺)(2mL)中，25℃反应1小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，粗产物用反相HPLC分离纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液/乙腈)，得标题化合物(26.33mg，产率：18％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝565.4；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.17-7.10(m,3H),7.03-7.01(m,1H),6.22-6.17(m,1H),5.29-5.17(m,1H),5.00-4.90(m,1H),4.77-4.74(m,1H),4.51-4.47(m,1H),4.24-4.12(m,1H),3.96-3.92(m,1H),3.81-3.78(m,1H),3.72-3.62(m,2H),3.24-3.21(m,1H),3.06-2.64(m,9H),2.11-2.10(m,4H),2.02-1.94(m,2H),1.70-1.60(m,5H),1.41-1.38(m,2H),0.96-0.89(m,6H)。
实施例189：(6-((1-(环丁烷羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-异丙氧基嘧啶-4-基)((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420000953
将((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-异丙氧基-6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-基)甲酮(70mg，0.142mmol，1.0equiv.)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(54.77mg，0.425mmol，3.0equiv)，冰浴搅拌15min，然后加入环丁烷甲酰氯(21.96mg，0.156mmol，1.1equiv)，逐渐升到室温搅拌2h。LC-MS检测反应完成后，浓缩，得到粗产物，经反相制备，得到标题化合物(54mg，产率：66.2％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝577.4；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.17-7.11(m,3H),7.04-7.02(m,1H),6.23-6.17(m,1H),5.22-5.17(m,1H),5.02-4.74(m,2H),4.52-4.49(m,1H),4.30-4.27(m,1H),4.00-3.96(m,1H),3.76-3.68(m,3H),3.31-3.20(m,1H),3.19-2.78(m,5H),2.75-2.53(m,4H),2.37-2.33(m,2H),2.16-1.95(m,7H),1.66-1.65(m,1H),1.38-1.33(m,8H)。
实施例190-294
利用实施例183、185和186的方法，合成了实施例190-294的化合物，化合物结构及具体表征数据(LC-MS和1H NMR)如下：
Figure BDA0003640361420000961
Figure BDA0003640361420000971
Figure BDA0003640361420000981
Figure BDA0003640361420000991
Figure BDA0003640361420001001
Figure BDA0003640361420001011
Figure BDA0003640361420001021
Figure BDA0003640361420001031
Figure BDA0003640361420001041
Figure BDA0003640361420001051
Figure BDA0003640361420001061
Figure BDA0003640361420001071
Figure BDA0003640361420001081
实施例295：1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-异丙氧基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
第一步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-异丙氧基嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420001082
称量6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(3.25g，纯度50％(含50％DIPEA盐酸盐)，5.196mmol，1.0equiv.)和叔丁醇钠(4.0g，41.62mmol，8.01equiv.)于单口瓶中，加入无水异丙醇(104mL)。氮气保护下，于100℃反应2小时。LC-MS监测反应完成，调节pH至3-4，过滤，滤液将溶剂旋干，得到粗产品(110mg)，粗品经反向HPLC(C18，10mmol/LNH4HCO3水溶液/乙腈)纯化，得到标题化合物(755mg，产率：44.6％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝323.3。
第二步：1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-异丙氧基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420001083
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-异丙氧基嘧啶-4-甲酸(550mg，1.706mmol，1equiv.)，EDCI(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)(495mg，2.582mmol，1.51equiv.)和HOAt(N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑)(352mg，2.586mmol，1.52equiv.)溶于DMF(5.5mL)中，搅拌5分钟后加入(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(396mg，1.534mmol，0.9equiv.)的DMF溶液(3.5mL)。反应于室温搅拌1小时。将溶剂旋干，粗品经反向HPLC(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液/乙腈)纯化，得到目标化合物(536mg，产率：58.6％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝537.3；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.19-7.08(m,3H),7.07-6.99(m,1H),6.28-6.14
(m,1H),5.69-5.28(m,1H),5.26-5.14(m,1H),5.03-4.94(m,0.37H),4.80-4.70(m,0.64H),4.55-4.44(m,1H),4.30-4.13(m,1H),3.99-3.91(m,1H),3.90-3.61(m,4H),3.26-3.15(m,1H),3.10-2.56(m,8H),2.14-1.88(m,6H),1.72-1.58(m,1H),1.46-1.30(m,8H)。
实施例296：1-(4-((6-(反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
第一步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420001091
将2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(6g，28.98mmol)，1-乙酰基哌啶-4-胺盐酸盐(5.7g，31.88mmol)和DIPEA(14.98g，115.94mmol)溶于乙腈(50ml)中。室温(25-30℃)搅拌2h。乙酸乙酯萃取三次，每次100mL，合并乙酸乙酯相，50mL水洗一次，50mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥10分钟，过滤，粗产物用DCM:MeOH＝100:1过柱分离纯化，得到产品(5.8g，产率：64％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝313.2。
第二步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸盐酸盐的制备
Figure BDA0003640361420001092
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-甲基嘧啶-4-甲酸甲酯(5g，16.02mmol)溶于THF(36mL)和甲醇(36mL)，然后加入氢氧化锂的水溶液(16mL，32mmol，2M)。反应液在室温(25-30℃)下搅拌2h。TLC显示反应完毕。加入1M(摩尔浓度)的盐酸调节PH＝6-7，直接旋干，得到粗产品(5.8g)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝299.0。
第三步：1-(4-((2-氯-6-((反式)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420001093
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸盐酸盐(500mg，1.67mmol)，HATU(636.4mg，1.67mmol)，反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(388.8mg，1.67mmol)和DIPEA(1.08g，8.37mmol)溶于DMF(6.5mL)，反应液在室温(25-30℃)下搅拌2h。LC-MS显示反应完毕。乙酸乙酯萃取三次，每次20mL，合并乙酸乙酯相，10mL水洗一次，10mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥10分钟，过滤，粗产物用DCM:MeOH＝20:1过柱分离纯化，得到标题化合物(200mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝513.2。
第四步：1-(4-((6-(反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420001094
将1-(4-((2-氯-6-((反式)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮(133mg，0.195mmol)和四氢吡咯(55mg，0.78mmol)溶于1,4-二氧六环(2mL)，加入Et3N(0.3mL)，100℃下搅拌2h，LC-MS显示反应完毕。EA萃取(3*10mL)，合并EA相，10mL水、10mL饱和食盐水各洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，反相HPLC制备纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液/乙腈)，得标题化合物(77.47mg，产率：72％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝548.3；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.18-7.10(m,3H),7.04-7.02(m,1H),5.89-5.86
(m,1H),5.03(m,0.3H),4.67(s,1H),4.60-4.44(m,1.7H),4.42-4.27(m,1H),4.19(s,1H),4.04-3.64(m,5H),3.52(s,4H),3.19(t,J＝12.6Hz,1H),3.12-2.88(m,5H),2.88-2.51(m,3H),2.19-2.08(m,4H),2.08-1.90(m,6H),1.90-1.73(m,1H),1.48-1.31(m,2H)。
实施例297：1-(4-((6-((反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
第一步：1-(4-((6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420001101
将4,6-二氯-2-(三氟甲基)嘧啶(1.09g，5.02mmol)，1-乙酰基哌啶-4-胺盐酸盐(0.89g，5.02mmol)和DIPEA(1.95g，15.07mmol)溶于乙腈(10mL)中，室温搅拌2小时。LC-MS监控反应完成，EA萃取(3*20mL)，合并EA相，20mL水、20mL饱和食盐水各洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，粗品用DCM:MeOH＝50:1过柱分离纯化，得标题化合物(1.174g，产率：54％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝323.1。
第二步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(三氟甲基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420001102
将1-(4-((6-氯-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮(0.3g，0.93mmol)，Et3N(282mg，2.79mmol)和Pd(dppf)Cl2(68mg，0.093mmol)溶于甲醇(15mL)和DMF(15mL)的混合溶液中，反应在2个大气压的CO氛围中100℃加热30h。LC-MS检测部分原料转化为产品，旋干溶剂，EA萃取(3*20mL)，合并EA相，20mL水、20mL饱和食盐水各洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，粗品用DCM:MeOH＝50:1过柱分离纯化，得标题化合物(100mg，产率：31％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝347.2。
第三步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(三氟甲基)嘧啶-4-甲酸盐酸盐的制备
Figure BDA0003640361420001103
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(三氟甲基)嘧啶-4-甲酸甲酯(100mg，0.289mmol)溶于THF(4mL)，然后加入氢氧化锂水溶液(0.43mL，0.87mmol，2M)。室温搅拌1h，LC-MS显示反应完毕。EA萃取(3*10mL)，保留水相，加入1M(摩尔浓度)的盐酸调节pH＝6-7，直接旋干，得到粗品(120mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝333.2。
第四步：1-(4-((6-((反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420001104
按实施例5中第二步的方法，利用6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(三氟甲基)嘧啶-4-甲酸盐酸盐(100mg，0.27mmol，1.0equiv.)与反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(66mg，0.28mmol，1.04equiv.)进行缩合反应，粗品用反相HPLC制备分离纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液/乙腈)，得到标题化合物(104.56mg，产率：70％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝547.2；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.19-7.11(m,3H),7.05-7.03(m,1H),6.82-6.72(m,1H),5.90-5.66(m,1H),5.00-4.71(m,1H),4.57(d,J＝13.0Hz,1H),4.35-3.94(m,3H),3.90-3.65(m,4H),3.24(t,J＝13.2Hz,1H),3.16-3.00(m,2H),3.00-2.92(m,2H),2.92-2.59(m,4H),2.12(d,J＝2.4Hz,4H),2.08-1.97(m,2H),1.94-1.76(m,1H),1.53-1.31(m,2H)。
实施例298：反式-1-(4-((6-(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-(1H-咪唑-1-基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
第一步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(1H-咪唑-1-基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420001111
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸(400mg,1.339mmol，1equiv.)和咪唑(182mg，2.678mmol，2equiv.)溶于DMA(20ml)中，然后加入碳酸铯(1.31g，4.017mmol，3equiv.)，100℃搅拌四小时。LC-MS监测反应完成，向反应液中加10mL水淬灭，DCM多次进行萃取，有机相进行干燥，浓缩后，得到标题化合物(3.0g，粗品)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝331.2。
第二步：反式-1-(4-((6-(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-(1H-咪唑-1-基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420001112
按实施例5中第二步的方法，利用6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-(1H-咪唑-1-基)嘧啶-4-甲酸(粗品420mg，1.272mmol，1equiv.))和反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(325mg，1.399mmol，1.1equiv.)进行缩合反应，粗品用反相HPLC制备(C18，NH4HCO3水溶液/乙腈)，得到标题化合物(75.42mg，产率：10.9％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝545.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53-8.40(m,1H),8.09(t,J＝8.1Hz,1H),7.87-7.80(m,1H),7.17-7.03(m,5H),6.74-8.47(m,1H),4.84-4.74(m,1H),4.56-4.14(m,3H),3.84-3.79(m,4H),3.69-3.65(m,1H),3.08-3.02(m,1H),2.97-2.76(m,6H),2.71-2.57(m,2H),2.02(s,3H),1.94-1.79(m,2H),1.79-1.48(m,2H),1.43-1.29(m,2H)。
实施例299：1-(4-((6-(反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-吗啉基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
第一步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420001113
将2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(2g，9.66mmol)，1-乙酰基哌啶-4-胺盐酸盐(1.9g，10.63mmol)和N,N-二异丙基乙胺(4.99g，38.65mmol)溶于乙腈(50ml)中。25℃搅拌2h。乙酸乙酯萃取三次，每次50mL，合并乙酸乙酯相，20mL水洗一次，20mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥10分钟，过滤，粗产物用DCM:MeOH＝100:1过柱分离纯化，得到6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(2.8g，产率：92％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝313.2。
第二步：6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420001121
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-甲基嘧啶-4-甲酸甲酯(200mg，0.639mmol)溶于THF(4mL)，然后加入2M(摩尔浓度)氢氧化锂的水溶液(0.64mL，1.28mmol，2equiv.)。反应液在室温25℃下搅拌2h。TLC显示反应完毕。加入1M(摩尔浓度)的盐酸调节PH＝6-7，直接旋干，得到粗产品(400mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝299.2。
第三步：1-(4-((2-((3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)氧基)-6-(反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420001122
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸(380mg，1.27mmol)，HATU(2-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐)(725.5mg，1.91mmol)，反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(265mg，1.14mmol)和DIPEA(N,N-二异丙基乙胺)(0.822g，6.36mmol)溶于DMF(N,N-二甲基甲酰胺)(5mL)，反应液在室温25度下搅拌2h。LC-MS显示反应完毕，乙酸乙酯萃取三次，每次20mL，合并乙酸乙酯相，10mL水洗一次，10mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥10分钟，过滤，粗产物用DCM:MeOH＝20:1过柱分离纯化，得到标题化合物(200mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝613.3。
第四步：1-(4-((6-(反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-吗啉基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420001123
将1-(4-((2-((3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)氧基)-6-(反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮(40mg，0.64mmol)溶于1,4-二氧六环(1.5mL)，加Et3N(19.2mg，0.192mmol)和吗啉(16mg，0.192mmol)。100℃搅拌1h，LC-MS显示反应完毕。EA萃取三次，每次10mL，合并乙酸乙酯相，10mL水、10mL饱和食盐水各洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，反相HPLC制备纯化粗品(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液/乙腈)，得到标题化合物(25.59mg，产率：69％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝564.4；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.25(s,1H),7.13-6.99(m,4H),5.86(s,1H),4.83-4.63(m,1H),4.52-4.28(m,1H),4.19(d,J＝12.6Hz,1H),4.02(s,1H),3.89-3.70(m,4H),3.70-3.51(m,9H),3.17(t,J＝12.4Hz,1H),3.02-2.87(m,1.5H),2.87-2.69(m,5H),2.69-2.53(m,1.5H),2.05-1.97(m,3H),1.97-1.69(m,3H),1.56-1.44(m,1H),1.44-1.32(m,1H),1.32-1.18(m,1H)。
实施例300：(反式-1-(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-吗啉基-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)嘧啶-4-基)甲酮的制备
第一步：2-氯-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420001124
将2,6-二氯嘧啶-4-甲酸甲酯(500mg,2.414mmol，1equiv.)和四氢-2H-吡喃-4-胺(240mg，2.373mmol，3equiv.)溶于乙腈(12mL)中，加DIPEA(920mg，7.116mmol，3equiv.)。25℃下搅拌2小时。LC-MS监测反应完成。向反应液中加入水淬灭，EA萃取，有机相合并后用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到粗品，快速色谱法分离(硅胶，PE:EA＝1:10)，得到标题化合物(720mg，粗品)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝272.1。
第二步：2-吗啉基-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420001131
将2-氯-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(720mg,2.582mmol，1equiv.)和吗啉(247mg，2.840mmol，1.1equiv.)溶于乙腈(12mL)，加入DIPEA(1g，7.746mmol，3equiv.)，100℃搅拌6小时。LC-MS监测反应完成，向反应液中加入水淬灭，EA萃取，有机相合并后用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，接着过滤，浓缩后，得到标题化合物(900g，粗品)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝323.3。
第三步：2-吗啉基-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420001132
将2-吗啉基-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(900mg，2.792mmol,1equiv.)溶于乙腈(30mL)中，加入TMSOK(三甲基硅醇钾)(394mg，3.071mmol，1.1equiv.)。室温搅拌1小时。TLC监测反应完成。将反应液进行过滤，收集滤饼，滤饼加水溶解，加入1M(摩尔浓度)盐酸调节pH至5-6，将溶液旋干后，加入二氯甲烷和甲醇溶解，过滤除去固体杂质，滤液浓缩，得到标题化合物(1g，粗品)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝309.2。
第四步：(反式-1-(4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-吗啉基-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)嘧啶-4-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420001133
利用实施例5中第二步的方法，将2-吗啉基-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸(200mg，0.649mmol,1equiv.)与反式-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(180mg，0.778mmol，1.2equiv.)进行缩合反应，粗品用反相HPLC分离纯化(C18，NH4HCO3水溶液/乙腈)，得到标题化合物(106.9mg，产率：31.5％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝523.6；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.25(s,1H),7.11-7.01(m,4H),5.86(s,1H),4.74(dd,J＝36.0,3.8Hz,1H),4.51-4.25(m,1H),3.98(s,1H),3.91-3.72(m,5H),3.67-3.52(m,9H),3.46-3.35(m,2H),3.03-2.55(m,7H),1.92-1.69(m,3H),1.61-1.34(m,3H)。
实施例301：1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-(吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
利用实施例297相同的方法，合成了实施例301的化合物(2.0mg，产率：1.2％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝610.4。
实施例302-351
利用实施例297相同的方法，合成了实施例302-351的化合物，化合物结构及具体表征数据(LC-MS和1H NMR)如下：
Figure BDA0003640361420001141
Figure BDA0003640361420001151
Figure BDA0003640361420001161
Figure BDA0003640361420001171
Figure BDA0003640361420001181
Figure BDA0003640361420001191
实施例352-374
利用实施例297的方法，合成了实施例352-374的化合物，化合物结构及具体表征数据(LC-MS和1H NMR)如下：
Figure BDA0003640361420001201
Figure BDA0003640361420001211
Figure BDA0003640361420001221
实施例375：4-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-2-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420001222
将1,1-双(二苯基膦)二茂铁氯化钯(104.4mg，0.14mmol，0.1equiv.)加入到1-(4-((2-氯-6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮(700mg，1.36mmol，1equiv.)的甲醇(15mL,100％)溶液中，置换一氧化碳气体三次，75℃反应12小时，LC-MS检测反应完成后，过滤，滤饼用DCM:MeOH＝10:1(20mL)洗两遍，滤液浓缩干，粗产物过柱(DCM:MeOH＝10:1)，得到标题化合物(500mg)粗品。将部分产物(400mg)用反相HPLC制备(C18，10mmol/L FA水溶液/乙腈)，得标题化合物(202.2mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝537.3；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.42(s,1H),7.25-7.11(m,4H),6.68(d,J＝5.4Hz,1H),4.80-4.56(m,2H),4.48-4.32(m,2H),4.31-4.18(m,2H),4.06-3.97(m,1H),3.95(d,J＝9.2Hz,3H),3.93-3.77(m,2H),3.43-3.33(m,1H),3.27-3.12(m,2H),3.11-2.70(m,5H),2.16(s,1H),2.12(d,J＝1.2Hz,3H),2.10-1.94(m,2H),1.94-1.77(m,1H),1.59-1.35(m,2H)。
实施例376：(3S,4S)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-1-(苯磺酰基)哌啶-3-醇的制备
Figure BDA0003640361420001231
将(3S,4S)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇)-(168mg，0.724mmol，1.0equiv.)溶于二氯甲烷(10ml)中，加入三乙胺(83mg，0.826mmol，1.2equiv.)。冰盐浴降温至零下十度左右，接着将苯磺酰氯(CAS:98-09-9)(128mg，0.724mmol，1.0equiv.)的二氯甲烷(2ml)溶液缓慢加入到反应液中，加毕，升至室温(20℃)搅拌半个小时，LC-MS检测原料消失。向反应液中加入水淬灭，接着用二氯甲烷萃取，有机相合并后用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后，得到粗品，用反相HPLC分离纯化(C18，NH4HCO3水溶液/乙腈)，得到标题化合物(48.5mg，产率：18.03％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝373.2；1H NMR(400MHz,(CD3)2SO)δ7.82-7.71(m,3H),7.67(t,J＝7.3Hz,2H),7.10-7.02(m,3H),7.01-6.96(m,1H),4.80(d,J＝3.9Hz,1H),3.80-3.57(m,5H),2.89-2.79(m,1H),2.78-2.65(m,3H),2.40-2.25(m,2H),2.09-1.98(m,1H),1.82-1.71(m,1H),1.65-1.49(m,1H)。
实施例377：(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-1-(苯磺酰基)哌啶-3-醇的制备
Figure BDA0003640361420001232
将(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇)-(200mg，0.861mmol，1.0equiv.)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三乙胺(105mg，1.033mmol，1.2equiv.)。冰盐浴降温至零下十度左右，接着将苯磺酰氯(160mg，0.904mmol，1.05equiv.)的二氯甲烷(5ml)溶液缓慢加入到反应液中，加毕，升至室温(20℃)搅拌半个小时，LC-MS检测原料消失。向反应液中加入水淬灭，接着用二氯甲烷萃取，有机相合并后用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，得到粗品，用反相HPLC分离纯化(C18，NH4HCO3水溶液/乙腈)，得到标题化合物(49.83mg，产率：15.6％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝373.2；1H NMR(400MHz,(CD3)2SO)δ7.81-7.59(m,5H),7.13-6.93(m,4H),4.80(d,J＝4.1Hz,1H),3.81-3.57(m,5H),2.87-2.64(m,4H),2.41-2.21(m,2H),2.04(t,J＝11.9Hz,1H),1.81-1.72(m,1H),1.63-1.48(m,1H)。
实施例378：1-(4-((6-((3R,4r,5S)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3,5-二羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
第一步：(3aR,5R,6R,6aR)-5-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊-4-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]二氧杂环戊-6-基三氟甲磺酸酯的制备
Figure BDA0003640361420001233
将(3aR,5S,6R,6aR)-5-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊-4-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]二氧杂环戊-6-醇(10g，3.842mmol，1.0equiv.)和吡啶(11.55g，14.6mmol，3.8equiv.)溶解到二氯甲烷(600mL)中，将该体系降温至-17℃。将三氟甲磺酸酐(13g，4.61mmol，1.2equiv.)加入到100mL的常压滴液漏斗中，在-20℃下，向该体系中滴加。滴加完后，在-20℃下，继续反应2小时。反应结束后，反应液倒入冰的饱和NaHCO3(100mL)中，进行萃取操作，分液，水相再用二氯甲烷洗两次(50mL/次)。合并有机相，用Na2SO4进行干燥，抽滤。滤液进行浓缩，在残留液中加入甲苯(150mL)，进行浓缩。此操作进行2次。残留物再加正己烷(160mL)。正己烷溶液进行过滤。滤液再一次进行浓缩，得到标题化合物(14.72g，产率：97.7％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.84(d,J＝3.8Hz,1H),4.92-4.89(m,1H),4.78-4.76(m,1H),4.23-4.10(m,3H),3.93-3.89(m,1H),1.59(s,3H),1.45(s,3H),1.39(s,3H),1.35(s,3H)。
第二步：(3aR,5S,6S,6aR)-6-叠氮基-5-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊-4-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]二氧杂环戊烯的制备
Figure BDA0003640361420001241
将(3aR,5R,6R,6aR)-5-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊-4-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]二氧杂环戊-6-基三氟甲磺酸酯(14.7g，37.47mmol，1.0equiv.)溶解到DMF(100mL)中，将叠氮钠(4.87g，74.94mmol，2.0equiv.)加入到该体系。反应液在90℃下，反应16小时，用TLC(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)来确定反应终点。反应液浓缩大部分，将100mL乙酸乙酯加入到该溶液中。乙酸乙酯溶液用水来进行萃取操作(用水洗3次，50mL/次)。有机相用饱和食盐水(100mL)洗一次。有机相由Na2SO4进行干燥，抽滤。有机相浓缩，得到粗品。粗品进行硅胶柱层析(正相)(PE:EA＝10:1)，得到标题化合物(8.45g，产率：79.1％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.86(d,J＝3.6Hz,1H),4.62(d,J＝3.6Hz,1H),4.28-4.21(m,1H),4.17-4.07(m,3H),4.00-3.97(m,1H),1.51(s,3H),1.44(s,3H),1.37(s,3H),1.33(s,3H)。
第三步：(3aR,5S,6S,6aR)-5-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊-4-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]二氧杂环戊-6-胺的制备
Figure BDA0003640361420001242
将(3aR,5S,6S,6aR)-6-叠氮基-5-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊-4-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]二氧杂环戊烯(200mg，0.701mol,1equiv.)溶于甲醇(5mL)中，加入50mg 10％Pd/C。将反应液在氢气下，16℃搅拌3小时。TLC和LC-MS检测反应完成，过滤Pd/C，将滤液中溶剂旋干，用柱色谱纯化(DCM:MeOH＝98:2)，得标题化合物(160mg，产率：88％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝260.2；1H NMR(400MHz,)δ5.89(d,J＝3.6Hz,1H),4.40(d,J＝3.6Hz,1H),4.23-4.18(m,1H),4.18-4.14(m,1H),4.06-4.01(m,1H),4.00-3.96(m,1H),3.56(d,J＝3.4Hz,1H),1.51(s,3H),1.42(s,3H),1.35(s,3H),1.31(s,3H)。
第四步：2-((3aR,5S,6S,6aR)-5-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊-4-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]二氧杂环戊-6-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉的制备
Figure BDA0003640361420001243
将(3aR,5S,6S,6aR)-5-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊-4-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]二氧杂环戊-6-胺(60mg，0.232mmol，1.0equiv.)溶于甲醇(1mL)中，加入2-(2-溴乙基)苯甲醛(54mg，0.255mmol，1.1equiv)。在16℃和N2保护下搅拌1小时。LC-MS检测中间态生成，在0℃再加入氰基硼氢化钠(41mg，0.696mmol，3.0equiv.)，16℃继续搅拌1h。TLC和LC-MS检测反应完成。向反应液加入适量的水和二氯甲烷，有机相用水和饱和NaCl溶液各洗一次并用无水硫酸钠干燥。将溶剂旋干，用柱色谱纯化(PE:EA＝2:1)，得标题化合物(18mg，产率：20.7％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝376.2；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.08-6.99(m,3H),6.97-6.89(m,1H),5.78(d,J＝3.8Hz,1H),4.79(d,J＝3.7Hz,1H),4.33-4.25(m,1H),4.14-4.07(m,1H),4.06-3.95(m,2H),3.88(d,J＝14.8Hz,1H),3.70(d,J＝14.8Hz,1H),3.34(d,J＝4.7Hz,1H),3.01-2.91(m,1H),2.88-2.79(m,1H),2.78-2.61(m,2H),1.46(s,3H),1.35(s,3H),1.26(s,3H),1.25(s,3H)。
第五步：(R)-1-((3aR,5S,6S,6aR)-6-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]二氧杂环戊-5-基)乙烷-1,2-二醇的制备
Figure BDA0003640361420001251
将2-((3aR,5S,6S,6aR)-5-((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环戊-4-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]二氧杂环戊-6-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉(180mg，0.48mmol，1.0equiv.)溶于甲醇(1mL)中，加入1％H2SO4(1mL)。在40℃搅拌16h，LC-MS检测有目标产物生成，反应液用饱和NaHCO3溶液调节pH＝8，将溶剂旋干，用柱色谱纯化(DCM:MeOH＝98:2)，得标题化合物(82mg，产率：51％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝336.2；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.12-7.05(m,3H),7.05-7.00(m,1H),5.92(d,J＝3.8Hz,1H),5.01(d,J＝3.8Hz,1H),4.23-4.12(m,1H),4.01-3.90(m,2H),3.83-3.73(m,2H),3.65-3.56(m,1H),3.45(d,J＝5.0Hz,1H),3.21-3.09(m,1H),2.99-2.87(m,1H),2.86-2.71(m,2H),1.48(s,3H),1.32(s,3H)。
第六步：(3aR,5S,6S,6aR)-6-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]二氧杂环戊-5-甲醛的制备
Figure BDA0003640361420001252
将(R)-1-((3aR,5S,6S,6aR)-6-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]二氧杂环戊-5-基)乙烷-1,2-二醇(60mg，0.15mmol，1.0equiv.)溶于丙酮/水(1.2mL,5:1)中，在0℃加入NaIO4(48mg,0.224mmol，1.5equiv)，在16℃继续搅拌1h，在冰浴条件下滴加环丁烷甲酰氯(21.29mg，0.18mmol，1.1equiv)，搅拌1小时。TLC(PE:EA＝2:1,Rf＝0.5，H2SO4/EtOH做显色剂)检测反应完成后，将溶剂旋干，滤渣用二氯甲烷溶解，抽滤得到滤液，将溶剂旋干，得到粗品，直接进行下一步。
第七步：((3aR,5S,6S,6aR)-6-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]二氧杂环戊-5-基)甲醇的制备
Figure BDA0003640361420001253
将粗品(3aR,5S,6S,6aR)-6-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]二氧杂环戊-5-甲醛(50mg，0.165mmol，1.0equiv.)溶于甲醇/水(1mL，4:1)中，在0℃加入NaBH4(10mg，0.248mmol，1.5equiv)，16℃继续搅拌0.5小时。TLC(DCM:MeOH＝20:1，H2SO4/EtOH做显色剂)检测反应完成，向反应液中加入饱和氯化铵溶液(1mL)，加入DCM萃取。有机相用水和饱和NaCl溶液各洗一次，并用无水硫酸钠干燥。将溶剂旋干，用柱色谱纯化(DCM:MeOH＝98:2)，得目标化合物(32mg，产率：63.5％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝306.1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.13(dt,J＝8.5,4.7Hz,3H),7.06-7.00(m,1H),5.97(d,J＝4.0Hz,1H),4.91(d,J＝3.3Hz,1H),4.49(q,J＝5.7Hz,1H),4.00(dd,J＝12.1,6.0Hz,2H),3.88(dd,J＝12.2,5.8Hz,1H),3.75(d,J＝14.3Hz,1H),3.43(d,J＝4.1Hz,1H),3.16(s,2H),2.93(d,J＝7.2Hz,1H),2.88-2.68(m,2H),1.54(s,3H),1.36(s,3H)。
第八步：((3aR,5S,6S,6aR)-6-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]二氧杂环戊-5-基)甲基4-甲基苯磺酸酯的制备
Figure BDA0003640361420001261
将((3aR,5S,6S,6aR)-6-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]二氧杂环戊-5-基)甲醇(250mg，0.819mmol，1.0equiv.)溶于二氯甲烷(4mL)中，加入对甲基苯磺酰氯(312.2mg，1.64mmol，2.0equiv)和吡啶(0.5mL)，在16℃下搅拌16h。将溶剂旋干，用柱色谱纯化(PE:EA＝93:7)，得标题化合物(125mg，产率：33.2％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝460.4；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.77-7.71(m,2H),7.18-7.12(m,4H),7.08-7.04(m,1H),7.01-6.94(m,1H),5.85(d,J＝3.7Hz,1H),4.87-4.78(m,1H),4.54-4.47(m,1H),4.37-4.28(m,1H),4.26-4.18(m,1H),3.93-3.81(m,1H),3.74-3.54(m,1H),3.45-3.28(m,1H),3.00-2.85(m,1H),2.75-2.49(m,3H),2.35(s,3H),1.50(s,3H),1.32(s,3H)。
第九步：2-((3aR,5R,6S,6aR)-5-(叠氮甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]二氧杂环戊-6-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉的制备
Figure BDA0003640361420001262
将((3aR,5S,6S,6aR)-6-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]二氧杂环戊-5-基)甲基4-甲基苯磺酸酯(126mg，0.274mmol，1.0equiv.)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)中，加入叠氮化钠(54mg，0.822mmol，3.0equiv)，在90℃和氮气下搅拌16h。TLC和LC-MS监测反应完成。向反应体系加入水和乙酸乙酯，有机相用水和饱和NaCl溶液各洗一次，并用无水硫酸钠干燥。将溶剂旋干，用柱色谱纯化(PE:EA＝2:1)，得标题化合物(62mg，产率：68.4％)。LC-MS(ESI)[M+H]+＝331.1。
第十步：(2S,3R,4R,5R)-5-(叠氮甲基)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)四氢呋喃-2,3-二醇的制备
Figure BDA0003640361420001263
向2-((3aR,5R,6S,6aR)-5-(叠氮甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[2,3-d][1,3]二氧杂环戊-6-基)-1,2,3,4-四氢异喹啉(100mg，0.302mmol，1.0equiv.)中加入三氟乙酸/水(0.5mL,3:2)，反应液在16℃搅拌24h。TLC和LC-MS监测反应完成。向体系中加入甲苯并旋干溶剂，粗品直接进行下一步反应。
第十一步：(3S,4r,5R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3,5-二醇的制备
Figure BDA0003640361420001264
向(2S,3R,4R,5R)-5-(叠氮甲基)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)四氢呋喃-2,3-二醇(85mg，0.292mmol，1.0equiv.)中加入甲醇(10mL)和10％Pd/C(30mg)，反应液在氢气和16℃搅拌8h。TLC和LC-MS监测反应完成。过滤后将溶剂旋干，粗产物用Prep-HPLC分离纯化(C18，10mmol/L水溶液,MeCN)，得目标产物(67mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝249.1；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.18-7.09(m,3H),7.06-6.98(m,1H),4.10(s,2H),3.79-3.65(m,2H),3.28(dd,J＝11.5,4.6Hz,2H),3.21-3.11(m,2H),2.96-2.87(m,2H),2.62-2.47(m,4H),2.43(t,J＝9.9Hz,1H)。
第十二步：1-(4-((6-((3R,4r,5S)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3,5-二羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420001271
将(3S,4r,5R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3,5-二醇(50mg，0.2mmol，1.0equiv.)，6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸(58mg，0.22mmol，1.1equiv.)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(114mg，0.3mmol，1.5equiv.)加入到N,N-二甲基甲酰胺(0.6mL)，再加入N,N-二异丙基乙胺(78mg，0.6mmol，3.0equiv.)，在16℃下搅拌0.5h，TLC检测原料反应完全。向反应体系加入水(15mL)，用乙酸乙酯萃取三次(3×15mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，抽滤，将溶剂浓缩，用Prep-HPLC分离纯化(C18，10mmol/L水溶液,MeCN)，得目标产物(18.29mg，产率：18.6％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝495.3；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.53(s,1H),7.19-7.09(m,3H),7.04-6.98(m,1H),6.69(s,1H),5.48(s,1H),4.63-4.49(m,2H),4.23-3.95(m,5H),3.92-3.77(m,2H),3.30-3.08(m,4H),3.05-2.88(m,3H),2.86-2.67(m,2H),2.17-2.12(m,1H),2.11(s,3H),2.06-1.98(m,1H),1.45(m,2H)。
实施例379：反式-1-(4-((6-(4-氨基-3-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
第一步：4-氨基-3-羟基哌啶-1-甲酸苄酯和3-氨基-4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯的制备
Figure BDA0003640361420001272
将7-氧杂-3-氮杂双环[4.1.0]庚烷-3-甲酸苄酯(2.5g，10.72mmol，1equiv.)溶于乙醇(5mL)中，加入浓氨水(15mL,25-28％,210mmol，19.6equiv.)，反应于70℃搅拌过夜(16h)。TLC监测反应完成(PE:EA＝2:1)，将反应液旋干，得到粗品(2.8g)，并直接用于下一步。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝251.2。
第二步：4-((叔丁氧羰基)氨基)-3-羟基哌啶-1-甲酸苄酯和3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-羟基哌啶-1-甲酸苄酯的制备
Figure BDA0003640361420001273
将上一步的粗品(2.8g,10.72mmol，1equiv.)溶于二氯甲烷(25mL)中，加入三乙胺(1.63g，16.11mmol，1.5equiv.)和二碳酸二叔丁酯(2.8g，12.83mmol，1.2equiv.)，室温搅拌1小时。LC-MS监测反应完成，反应液不经纯化，直接用于下一步。
LC-MS(ESI)[(M-100)+1]+＝251.20,[(M-56)+1]+＝295.20。
第三步：4-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(对甲苯磺酰氧基)哌啶-1-甲酸苄酯和3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-(对甲苯磺酰基)哌啶-1-甲酸苄酯的制备
Figure BDA0003640361420001274
向上一步的反应液(10.72mmol原料)中依次加入三乙胺(2.17g，21.44mmol，2equiv.)，4-甲苯磺酰氯(4.09g，21.45mmol，2equiv.)和4-二甲氨基吡啶(131mg，1.072mmol，0.1equiv.)，室温搅拌16小时。TLC监测反应完成，将溶剂旋干，粗品经快速色谱法分离纯化(硅胶，0-27％EA的PE溶液)，得到产品(3.317g，三步总产率：61.4％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝348.0；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.88-7.66(m,2H),7.43-7.17(m,7H),5.16-5.04(m,2H),4.73-4.44(m,1H),4.32-4.08(m,1H),4.04-3.76(m,1H),3.74-3.54(m,1H),3.43-2.75(m,2H),2.49-2.34(m,3H),2.16-2.07(m,0.7H),1.96-1.85(m,0.3H),1.51-1.35(m,10H)。
第四步：3-苄基7-叔丁基3,7-二氮杂双环[4.1.0]庚烷-3,7-二甲酸酯的制备
Figure BDA0003640361420001281
将第三步的产物(3.317g，6.574mmol，1equiv.)溶于DMF(28mL)中，加入氢氧化钠水溶液(526mg/7mL,13.15mmol，2equiv.)，50℃加热搅拌1小时。LC-MS监测反应完成，将反应液加乙酸乙酯稀释，水洗，分液，有机相用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，旋干，粗产品经快速色谱法分离纯化(硅胶，0-20％EA的PE溶液)，得到标题化合物(2.0g，产率：91.5％)，为无色油状物。
LC-MS(ESI)[(M-100)+1]+＝233.20,[(M-56)+1]+＝277.20。
第五步：反式-4-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-甲酸苄酯的制备
Figure BDA0003640361420001282
将3-苄基7-叔丁基3,7-二氮杂双环[4.1.0]庚烷-3,7-二甲酸酯(200mg，0.602mmol，1equiv.)和1,2,3,4-四氢异喹啉(120mg，0.901mmol，1.5equiv.)溶于甲苯(3mL)中，加入三丁基膦(13mg，0.0643mmol，0.11equiv.)。反应于氮气条件下回流过夜(16h)。LC-MS监测有原料剩余。补加四氢异喹啉(96mg，0.722mmol，1.2equiv.)和三丁基膦(24mg，0.120mmol，0.2equiv.)，继续于110℃反应1天(24h)。将溶剂旋干，粗产品经快速色谱法分离纯化(硅胶，0-15％EA的PE溶液)，得到反式-4-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-甲酸苄酯粗品(166mg)，反相柱纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶,30％-90％MeCN)，得到标题化合物(97mg，产率：34.7％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝466.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.44-7.26(m,5H),7.11-6.93(m,4H),6.61(d,J＝8.8Hz,1H),5.09(s,2H),4.18-4.04(m,1H),3.97-3.82(m,2H),3.80-3.63(m,2H),3.11-3.00(m,1H),2.97-2.57(m,5H),2.54-2.46(m,1H),1.86-1.76(m,1H),1.45-1.25(m,10H)。
第六步：反式-(3-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420001283
将反式-4-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-甲酸苄酯(87mg，0.187mmol，1equiv.)溶于甲醇(色谱级，5mL)中，加入Pd/C(10％,90mg)，H2条件下搅拌1.5小时。TLC监测反应完成，将反应液过滤，旋干，得到粗产品(60mg，产率：96.9％)。粗品直接用于下一步。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝332.25。
第七步：反式-(1-(6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-羰基)-3-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420001284
将6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸(48mg，0.182mmol，1equiv.)，EDCI(53mg，0.276mmol，1.52equiv.)和HOAt(37mg，0.271839mmol，1.5equiv.)溶于DMF(2mL)中，搅拌5分钟后，加入反式-(3-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(45mg，0.174mmol，1.7equiv.)的DMF溶液(1mL)。反应于室温搅拌1.5小时。将溶剂旋干，粗品用经快速色谱法分离纯化(硅胶，0-5％MeOH的DCM溶液)，得到标题化合物(115mg，纯度：80％，产率：91.6％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝578.2。
第八步：反式-1-(4-((6-(4-氨基-3-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420001291
将反式-(1-(6-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-羰基)-3-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(115mg，80％,0.159mmol，1equiv.)溶于二氯甲烷(4mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温搅拌1小时。LC-MS监测反应完成，将二氯甲烷与三氟乙酸旋干，粗产品溶于甲醇，加入强碱性阴离子交换树脂调节pH至8-9，过滤，旋干，反相柱制备纯化(C18，10mmol/L NH4OH水溶液/乙腈)，得标题化合物(19.46mg,产率：25.1％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝478.4；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.58-8.51(m,1H),7.18-6.95(m,4H),6.68-6.56(m,1H),5.34-5.13(m,1H),4.93-4.66(m,1H),4.61-4.50(m,1H),4.27-4.20(m,0.4H),4.13-4.08(m,0.6H),4.05-3.97(m,0.6H),3.91-3.70(m,2.4H),3.28-3.03(m,3H),3.03-2.88(m,2H),2.87-2.61(m,4.4H),2.55-2.46(m,0.6H),2.19-1.95(m,6H),1.58-1.35(m,3H)。
实施例380：1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-(异丙基亚磺酰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420001292
将1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-(异丙硫基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮(40mg，0.072368mmol，1equiv.)和m-CPBA(13.7374mg，0.079605mmol，1.1equiv.)溶解到二氯甲烷(2mL)中，反应液在室温下搅拌2小时。将反应液用旋转蒸发仪旋干，得到粗品，粗品进行反相HPLC分离纯化(C18，NH4HCO3水溶液/乙腈)，得到标题化合物(15mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝569.0；1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.48-7.45(m,1H),7.17-6.99(m,4H),6.81-6.56(m,1H),4.85-4.69(m,1H),4.46-4.09(m,3H),3.86-3.76(m,3H),3.69-3.59(m,2H),3.26-3.13(m,2H),3.08-2.73(m,6H),2.70-2.59(m,2H),2.07-1.66(m,6H),1.55-1.25(m,6H),1.11-0.96(m,2H)。
实施例381-384
利用实施例378的方法，合成了实施例381-384的化合物，化合物结构及具体表征数据(LC-MS和1H NMR)如下：
Figure BDA0003640361420001293
Figure BDA0003640361420001301
实施例385和实施例386：(E)-1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)-2-(甲氧基亚氨基)丙烷-1-酮(实施例385的化合物)和(Z)-1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)-2-(甲氧基亚氨基)丙烷-1-酮(实施例386的化合物)的制备
第一步：(1-(2-氧代丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420001302
将哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(1g，5mmol，1equiv.)，EDCI(1.15g，6mmol，1.2equiv.)、HOAt(0.815g，6mmol，1.2equiv.)溶于DMF(10mL)中，加入2-氧代丙酸(0.44g，5mmol，1.0equiv.)反应在室温(20℃)搅拌1小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，加水20mL，用乙酸乙酯萃取3次，每次20mL。合并有机相旋干，得到粗产物。粗产物过柱纯化(PE:EA＝1:1)，得标题化合物(1.1g，产率：81.5％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝215.0。
第二步：(1-(2-(甲氧基亚氨基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420001303
将(1-(2-氧代丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(600mg，2.2mmol，1equiv.)，甲氧基胺盐酸盐(407.8mg，4.8mmol，2.2equiv.)溶于乙醇(6mL)和水(1.5mL)中，加入醋酸钾(958mg，9.6mmol，4.4equiv.)。反应在室温80℃搅拌16小时，LC-MS检测反应完成后，浓缩，加水20mL，用乙酸乙酯萃取3次，每次20mL。合并有机相旋干，得到粗产物，过柱纯化，得到化合物(E)-(1-(2-(甲氧基亚氨基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(290mg)和(Z)-(1-(2-(甲氧基亚氨基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(337mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝244.0。
第三步：1-(4-氨基哌啶-1-基)-2-(甲氧基亚氨基)丙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420001304
将(E)-(1-(2-(甲氧基亚氨基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯和(Z)-(1-(2-(甲氧基亚氨基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(600mg，2mmol，1equiv.)溶于1,4-二氧六环(5mL)中，加入盐酸的1,4-二氧六环(2.5mL,10mmol，4M)。反应在室温50℃搅拌1小时，LC-MS检测反应完成后，浓缩，旋干，得到粗产物(584mg)，直接用于下一步。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝200.2。
第四步：6-((1-(2-(甲氧基亚氨基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420001311
将1-(4-氨基哌啶-1-基)-2-(甲氧基亚氨基)丙烷-1-酮(550mg，1.96mmol，1equiv.)，6-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(338mg，1.96mmol，1.0equiv.)溶于乙腈(6mL)中，加入DIPEA(1.01g，7.84mmol，4.0equiv.)。反应在室温90℃搅拌2小时，LC-MS检测反应完成后，浓缩，加水20mL，用乙酸乙酯萃取3次，每次20mL。合并有机相旋干，得到粗产物，过柱纯化，得到目标化合物(438mg，产率：66％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝336.2。
第五步：6-((1-(2-(甲氧基亚氨基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420001312
将6-((1-(2-(甲氧基亚氨基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(470mg，1.4mmol，1equiv.)溶于THF(4mL)和H2O(4mL)中，加入氢氧化锂(2.8mL,2.8mmol，2.0equiv.,2M)，反应在室温25℃搅拌1小时，LC-MS检测反应完成后，加入1M的盐酸水溶液调节PH＝5～6，浓缩，旋干，得到粗产物(450mg)，直接用于下一步。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝322.2。
第六步：(E)-1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)-2-(甲氧基亚氨基)丙烷-1-酮(实施例385的化合物)和(Z)-1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)-2-(甲氧基亚氨基)丙烷-1-酮(实施例386的化合物)的制备
Figure BDA0003640361420001313
将6-((1-(2-(甲氧基亚氨基)丙酰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-甲酸(420mg，1.3mmol，1equiv.)，EDCI(325mg，1.7mmol，1.3equiv.)、HOAt(231mg，1.7mmol，1.3equiv.)溶于DMF(5mL)中，加入(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(334mg，1.4mmol，1.1equiv.)，反应在室温(20℃)搅拌1小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，粗产物用反相HPLC分离纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液/乙腈)，得两化合物：
标题化合物(实施例385的化合物)(184mg)。LC-MS(ESI)[M+H]+＝536.0；1H NMR(400MHz,(CD3)2SO)δ8.45-8.43(m,1H),7.69-7.63(m,1H),7.09-7.02(m,4H),6.53(s,1H),4.81-4.72(m,1H),4.49-4.31(m,1H),4.18-4.13(m,2H),3.85-3.58(m,7H),3.47-3.40(m,1H),3.20-3.14(m,1H),3.02-2.55(m,8H),1.95-1.93(m,5H),1.85-1.71(m,1H),1.52-1.30(m,3H)。
标题化合物(实施例386的化合物)(301.72mg)。LC-MS(ESI)[M+H]+＝536.0；1H NMR(400MHz,(CD3)2SO)δ8.45-8.43(m,1H),7.68-7.64(m,1H),7.09-7.02(m,4H),6.52(s,1H),4.81-4.72(m,1H),4.49-4.31(m,1H),4.25-4.17(m,2H),3.88-3.59(m,8H),3.25-3.19(m,1H),3.02-2.76(m,6.5H),2.67-2.55(m,1.5H),1.93-1.93(m,5H),1.84-1.71(m,1H),1.51-1.32(m,3H)。
实施例387和实施例388：(E)-1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)-2-(甲氧基亚氨基)丙烷-1-酮(实施例387的化合物)和(Z)-1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)-2-(甲氧基亚氨基)丙烷-1-酮(实施例388的化合物)的制备
第一步：(3-(2-氧代丙酰基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚-6-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420001314
将(3-氮杂双环[3.1.1]庚-6-基)氨基甲酸叔丁酯(460mg，2.17mmol，1equiv.)，EDCI(498mg，2.6mmol，1.2equiv.)和HOAt(354mg，2.6mmol，1.2equiv.)溶于DMF(5mL)中，加入2-氧代丙酸(209.9mg，2.38mmol，1.1equiv.)，反应在室温(20℃)搅拌1小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，加水20mL，用乙酸乙酯萃取3次，每次20mL。合并有机相旋干，得到粗产物。粗产物过柱纯化(PE：EA＝1：1)，得标题化合物(412mg，产率：67％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝227.0。
第二步：(3-(2-(甲氧基亚氨基)丙酰基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚-6-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420001321
将(3-(2-氧代丙酰基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚-6-基)氨基甲酸叔丁酯(400mg，1.4mmol，1equiv.)，甲氧基胺盐酸盐(260mg，3.1mmol，2.2equiv.)溶于乙醇(4mL)和水(1mL)中，加入醋酸钾(611.8mg，6.2mmol，4.4equiv.)。反应在室温80℃搅拌16小时，LC-MS检测反应完成后，浓缩，加水20mL，用乙酸乙酯萃取3次，每次20mL。合并有机相旋干，得到粗产物，过柱纯化，得到目标化合物(440mg)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝256.1。
第三步：1-(6-氨基-3-氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)-2-(甲氧基亚氨基)丙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420001322
将(3-(2-(甲氧基亚氨基)丙酰基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚-6-基)氨基甲酸叔丁酯(400mg，1.28mmol，1equiv.)溶于1,4-二氧六环(5mL)中，加入盐酸的1,4-二氧六环(2.5mL,10mmol，4M)。反应在室温50℃搅拌1小时，LC-MS检测反应完成后，浓缩，旋干，得到粗产物(360mg)，直接用于下一步。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝212.0。
第四步：6-((3-(2-(甲氧基亚氨基)丙酰基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚-6-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420001323
将1-(6-氨基-3-氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)-2-(甲氧基亚氨基)丙烷-1-酮(320mg，1.5mmol，1equiv.)，6-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(287mg，1.6mmol，1.1equiv.)溶于乙腈(5mL)中，加入DIPEA(783mg，6.0mmol，4.0equiv.)。反应在室温90℃搅拌2小时，LC-MS检测反应完成后，浓缩，加水20mL，用乙酸乙酯萃取3次，每次20mL。合并有机相旋干得到粗产物，过柱纯化，得到目标化合物(266mg，产率：51％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝348.2。
第五步：6-((3-(2-(甲氧基亚氨基)丙酰基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚-6-基)氨基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420001324
将6-((3-(2-(甲氧基亚氨基)丙酰基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚-6-基)氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(240mg，0.69mmol，1equiv.)溶于THF(4mL)和H2O(4mL)中，加入氢氧化锂(0.34mL,1.38mmol，2.0equiv.,2M)。反应在室温25℃搅拌1小时，LC-MS检测反应完成后，加入1M的盐酸水溶液调节PH＝5～6，浓缩，旋干，得到粗产物(250mg)，直接用于下一步。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝334.20。
第六步：(E)-1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)-2-(甲氧基亚氨基)丙烷-1-酮(实施例387的化合物)和(Z)-1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)-2-(甲氧基亚氨基)丙烷-1-酮(实施例388的化合物)的制备
Figure BDA0003640361420001331
将6-((3-(2-(甲氧基亚氨基)丙酰基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚-6-基)氨基)嘧啶-4-甲酸(220mg，0.66mmol，1equiv.)，EDCI(164.5mg，0.86mmol，1.3equiv.)和HOAt(117mg，0.86mmol，1.3equiv.)溶于DMF(3mL)中，加入(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(169mg，0.72mmol，1.1equiv.)，反应在室温(20℃)搅拌1小时。LC-MS检测反应完成后，浓缩，粗产物用反相HPLC分离纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液/乙腈)，得2个化合物：
标题化合物(实施例387的化合物)(63.15mg)。LC-MS(ESI)[M+H]+＝548.0；1H NMR(400MHz,(CD3)2SO)δ8.47-8.45(m,1H),7.63-7.59(m,1H),7.09-7.01(m,4H),6.71(s,1H),4.82-4.70(m,1H),4.48-4.07(m,2H),3.85-3.70(m,5H),3.62-3.40(m,6H),3.03-2.85(m,2H),2.81-2.51(m,7H),1.93-1.93(m,4H),1.85-1.70(m,1H),1.53-1.32(m,2H)。
标题化合物(实施例388的化合物)(206.44mg)。LC-MS(ESI)[M+H]+＝548.0；1H NMR(400MHz,(CD3)2SO)δ8.47-8.45(m,1H),7.67(s,1H),7.09-7.02(m,4H),6.75(s,1H),4.82-4.71(m,1H),4.49-4.26(m,2H),3.85-3.79(m,6H),3.75-3.57(m,4H),3.53-3.50(m,1H),3.03-2.86(m,2H),2.82-2.59(m,7H),1.94-1.91(m,4H),1.85-1.71(m,1H),1.51-1.45(m,1H),1.40-1.37(m,1H)。
实施例389：1-(4-((4-苄基-5-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)噻唑-2-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
第一步：N-((1-乙酰基哌啶-4-基)硫代氨基甲酰基)苯甲酰胺的制备
Figure BDA0003640361420001332
将1-(4-氨基哌啶-1-基)乙烷-1-酮(100mg，0.56mmol，1.0equiv.)和苯甲酰基异硫氰酸酯(91mg，0.56mmol，1.0equiv.)加入二氯甲烷(2.6mL)中，在氮气、16℃下搅拌48h，TLC检测原料反应完全。向反应体系加入水(15mL)，用乙酸乙酯萃取三次(3×15mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，抽滤，将溶剂浓缩，柱色谱纯化(DCM:MeOH＝98:2)，得目标产物(70mg，产率：32.6％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝306.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.35(s,1H),10.91(d,J＝7.6Hz,1H),7.95-7.89(m,2H),7.64(t,J＝7.4Hz,1H),7.51(t,J＝7.7Hz,2H),4.49-4.35(m,1H),4.23-4.12(m,1H),3.82-3.70(m,1H),3.27-3.16(m,1H),2.91-2.79(m,1H),2.10-2.03(m,1H),2.02(s,3H),2.01-1.95(m,1H),1.65-1.51(m,1H),1.49-1.35(m,1H)。
第二步：1-(1-乙酰基哌啶-4-基)硫代脲的制备
Figure BDA0003640361420001333
将N-((1-乙酰基哌啶-4-基)硫代氨基甲酰基)苯甲酰胺(402mg，1.32mmol，1.0equiv.)加入甲醇(6.6mL)中，加入氢氧化钠(63mg，1.58mmol，1.2equiv.1.5M)溶液，80℃下搅拌2h，TLC检测原料反应完全。将溶剂浓缩，得标题化合物粗品(410mg)，直接下一步反应。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝202.1。
第三步：2-氯-3-氧代-4-苯基丁酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420001341
将3-氧代-4-苯基丁酸甲酯(100mg，0.521mmol，1.0equiv.)加入到二氯甲烷(2.6mL)中，然后滴加磺酰氯(85mg，0.625mmol，1.2equiv.)/二氯甲烷(1.0mL)的混合溶液，在16℃下搅拌2h，TLC检测原料反应完全。向反应体系加入水(15mL)，用乙酸乙酯萃取三次(3×15mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，抽滤，将溶剂浓缩，柱色谱纯化(PE:EA＝90:10)，得目标产物(100mg，产率：84.8％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.36-7.30(m,2H),7.29-7.26(m,1H),7.23-7.17(m,2H),5.76(s,1H),4.07(s,2H),3.75(s,3H)。
第四步：2-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-4-苄基噻唑-5-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003640361420001342
将2-氯-3-氧代-4-苯基丁酸甲酯(200mg，1.0mmol，1.0equiv.)和1-(1-乙酰基哌啶-4-基)硫代脲(226mg，1.0mmol，1.0equiv.)加入乙醇(5.0mL)中，在氮气、85℃下搅拌1h，TLC检测原料反应完全。向反应体系加入水(15mL)，用乙酸乙酯萃取三次(3×15mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，抽滤，将溶剂浓缩，柱色谱纯化(DCM:MeOH＝98:2)，得目标产物(140mg，产率：37.5％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝374.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.56(d,J＝7.4Hz,1H),7.33-7.28(m,4H),7.26-7.20(m,1H),4.27(s,2H),4.25-4.18(m,1H),3.85-3.79(m,1H),3.77(s,3H),3.75-3.63(m,1H),3.26-3.20(m,1H),2.91-2.80(m,1H),2.04(s,3H),2.02-1.89(m,2H),1.49-1.37(m,1H),1.37-1.26(m,1H)。
第五步：2-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-4-苄基噻唑-5-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420001343
向2-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-4-苄基噻唑-5-甲酸甲酯(22mg，0.059mmol，1.0equiv.)的甲醇(0.3mL)溶液中加入NaOH溶液(9.5mg，0.236mmol，4.0equiv.,1M)，16℃下搅拌16h。TLC检测原料反应完全，用稀盐酸溶液调节pH＝3，向反应体系加入水(15mL)，用乙酸乙酯萃取三次(3×15mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，抽滤，将溶剂浓缩，得到标题化合物(20mg，粗品)，直接进行下一步反应。
第六步：1-(4-((4-苄基-5-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)噻唑-2-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420001344
将2-((1-乙酰基哌啶-4-基)氨基)-4-苄基噻唑-5-甲酸(20mg，0.056mmol，1.0equiv.)，(3R,4R)-3-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-4-醇(13mg，0.056mmol，1.0equiv.)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(32mg，0.084mmol，1.5equiv.)加入到N,N-二甲基甲酰胺(0.2mL)中，再加入N,N-二异丙基乙胺(22mg，0.168mmol，3.0equiv.)，在16℃下搅拌0.5h，TLC检测原料反应完全。向反应体系加入水(15mL)，用乙酸乙酯萃取三次(3×15mL)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，抽滤，将溶剂浓缩，粗产物用Prep-HPLC分离纯化(C18，10mmol/L水溶液/乙腈)，得目标产物(2.06mg，产率：6.4％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝574.5；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.31-7.14(m,5H),7.12-7.05(m,3H),7.04-7.00(m,1H),4.39-4.32(m,1H),4.32-4.10(m,2H),3.95(s,2H),3.92-3.74(m,4H),3.53-3.45(m,1H),3.28-3.21(m,1H),2.95-2.84(m,5H),2.80-2.62(m,3H),2.17-2.11(m,1H),2.10(s,3H),2.07-1.99(m,1H),1.88-1.78(m,1H),1.54-1.29(m,3H)。
实施例390：(4-溴苯基)((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420001351
将(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(500mg，2.152mmol，1.0equiv.)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入三乙胺(330mg，3.229mmol，1.5equiv.)。冰盐浴降温至-10℃左右，接着将对溴苯甲酰氯(520mg，2.368mmol，1.1equiv.)的二氯甲烷(5mL)溶液缓慢加入到反应液中，加毕，升至室温(20℃)搅拌半个小时，LC-MS检测原料消失。向反应液中加入水淬灭，接着用二氯甲烷萃取，有机相合并后用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，得到粗品，用反相HPLC分离纯化(C18，NH4HCO3水溶液/乙腈)，得到标题化合物(697.22mg，产率：77.9％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝416.0；1H NMR(400MHz,(CD3)2SO)δ7.58-7.49(m,2H),7.34-7.28(m,2H),7.19-7.09(m,3H),7.07-6.98(m,1H),5.20-4.73(m,1H),4.18-3.80(m,2H),3.78-3.39(m,3H),3.17-3.01(m,1H),2.99-2.56(m,6H),2.05-1.35(m,2H)。
实施例391：((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-异丁氧基-6-((1-(噻唑-2-基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-基)甲酮盐酸盐的制备
第一步：((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-异丁氧基-6-((1-(噻唑-2-基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420001352
将((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-异丁氧基-6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-基)甲酮(1g，1.97mmol，1.0equiv.)、2-溴噻唑(387mg，2.36mmol，1.2equiv.)、CuI(37.44mg，0.2mmol，0.1equiv.)、L-proline(45.27mg，0.4mmol，0.2equiv.)及K2CO3(543mg，3.93mmol，2.0equiv.)溶于DMSO(10mL)中，100℃反应16小时。反应液用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，有机相浓缩，将溶剂旋干，粗品经prep-HPLC(C18，10mmol/L NH4OH水溶液/乙腈)纯化，得到目标化合物(310mg，产率：26.6％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝592.2。
第二步：((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-异丁氧基-6-((1-(噻唑-2-基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-基)甲酮盐酸盐的制备
Figure BDA0003640361420001353
将((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-异丁氧基-6-((1-(噻唑-2-基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-基)甲酮(310mg，0.524mmol，1.0equiv.)及盐酸(1M)(0.55mL,0.55mmol，1.05equiv.)溶于MeOH(10mL)中，20℃反应0.5小时。反应液浓缩，得到目标化合物(310.18mg，产率：95％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝592.2；1H NMR(400MHz,(CD3)2SO)δ10.56-10.37(m,1H),8.18(s,1H),7.28-7.18(m,5H),6.89-6.88(m,1H),6.47-6.09(m,2H),4.74-4.41(m,3H),4.13(s,1H),4.03-3.89(m,6H),3.78-3.55(m,3H),3.35-3.26(m,3H),3.14-2.98(m,2H),2.86-2.65(m,1H),2.26-2.15(m,1H),2.03-1.98(m,3H),1.84-1.75(m,1H),1.62-1.50(m,2H),1.61-1.53(m,6H)。
实施例392：((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-甲氧基-6-((1-(4-甲基苯甲酰)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-基)甲酮盐酸盐的制备
第一步：6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-甲氧基嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420001361
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-甲酸甲酯(2.0g，5.4mmol，1.0equiv.)和甲醇钠(1.16g，21.6mmol，4.0equiv.)溶于甲醇(20mL)中，反应在80℃下搅拌16小时。LC-MS监测反应完成。反应液用稀盐酸调节pH为5，旋干溶剂，粗产品用甲醇溶解，过滤，滤液旋干，得到标题化合物粗品(2.5g)，直接用于下一步反应。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝353.2。
第二步：4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420001362
将6-((1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-甲氧基嘧啶-4-甲酸(2.2g，6.77mmol，1.0equiv.)，(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(1.7g，7.45mmol，1.1equiv.)，HATU(3.86g，10.1mmol，1.5equiv.)和DIPEA(2.62g，20.3mmol，3.0equiv.)溶于DMF(20mL)，反应液在25℃下搅拌1小时。LC-MS显示反应完毕，向反应液中加入水淬灭，接着用乙酸乙酯进行萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，粗产品用快速色谱柱纯化，得到标题化合物(3.0g，产率：84％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝567.2。
第三步：((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-甲氧基-6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420001363
将4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.5g，4.41mmol，1.0equiv.)溶于甲醇(10mL)中，加入HCl/1,4-二氧六环(5mL)。反应在20℃下搅拌1小时。LC-MS监测反应完成，旋干溶剂，得到标题化合物粗品(2.2g)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝467.3。
第四步：((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-甲氧基-6-((1-(4-甲基苯甲酰)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420001371
将((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-甲氧基-6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-基)甲酮(1.0g，2.14mmol，1.0equiv.)溶于二氯甲烷(10mL)中，接着加入三乙胺(1.7g，17.1mmol，8.0equiv.)，将反应降温至0℃左右，接着向反应液中缓慢加入4-甲基苯甲酰氯(329mg，2.14mmol，1.0equiv.)，搅拌1小时后LC-MS显示反应完毕，向反应液中加入水淬灭，接着用二氯甲烷进行萃取，有机相合并后，用无水硫酸钠干燥，接着过滤，浓缩，粗产物用反相HPLC分离纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液/乙腈)，得标题化合物(820mg，产率：65.5％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝585.2。
第五步：((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-甲氧基-6-((1-(4-甲基苯甲酰)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-基)甲酮盐酸盐的制备
Figure BDA0003640361420001372
将((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-甲氧基-6-((1-(4-甲基苯甲酰)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-基)甲酮(820mg，1.40mmol，1.0equiv.)溶于甲醇(10mL)，接着加入HCl(1mol/L)(1.47mL，1.47mmol，1.05equiv.)。反应液在25℃下搅拌1小时。将反应液进行浓缩，接着加入纯水溶解，冻干，得到标题化合物(747.47mg，产率：86％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝585.2；1H NMR(400MHz,(CD3)2SO)δ10.58-10.47(m,1H),8.10(s,1H),7.29-7.20(m,8H),6.49-6.14(m,2H),4.70-4.32(m,4H),4.13-3.98(m,3H),3.84-3.75(m,4H),3.56-2.65(m,9H),2.39-2.17(m,4H),1.92-1.81(m,3H),1.43-1.42(m,2H)。
实施例393：((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-甲氧基-6-((1-(1-甲基-1H-吡唑-4-羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-基)甲酮盐酸盐的制备
第一步：((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-甲氧基-6-((1-(1-甲基-1H-吡唑-4-羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420001373
将((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-甲氧基-6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-基)甲酮(1.0g，2.14mmol，1.0equiv.)、1-甲基吡唑-4-甲酸(297mg，2.36mmol，1.1equiv.)、HATU(1.22g，3.21mmol，1.5equiv.)及DIPEA(831mg，6.43mmol，3.0equiv.)溶于DMF(10mL)中，20℃反应1小时。反应液浓缩，粗产物用反相HPLC分离纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液/乙腈)，得标题化合物(709mg，产率：57.7％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝575.2。
第二步：((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-甲氧基-6-((1-(1-甲基-1H-吡唑-4-羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-基)甲酮盐酸盐的制备
Figure BDA0003640361420001374
将((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(2-甲氧基-6-((1-(1-甲基-1H-吡唑-4-羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-基)甲酮(709mg，1.23mmol，1.0equiv.)溶于甲醇(10mL)，接着加入HCl(1mol/L)(1.29mL，1.29mmol，1.05equiv.)。反应液在25℃下搅拌1小时，将反应液进行浓缩，接着加入纯水溶解，冻干，得到标题化合物(694.42mg，产率：92.4％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝575.2；1H NMR(400MHz,(CD3)2SO)δ10.75-10.34(m,1H),8.35-8.05(m,2H),7.64(s,1H),7.27-7.20(m,4H),6.37-6.11(m,2H),4.68-4.46(m,3H),4.13-3.96(m,5H),3.85-3.81(m,6H),3.55-2.64(m,9H),2.33-2.13(m,1H),1.96-1.80(m,3H),1.42-1.39(m,2H)。
实施例394：((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(6-((1-(5-甲基噻唑-2-基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-基)甲酮盐酸盐的制备
第一步：((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(6-((1-(5-甲基噻唑-2-基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420001381
将((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-基)甲酮(0.52g，0.87mmol，1.0equiv.)、2-氯-5-甲基噻唑(139mg，1.04mmol，1.2equiv.)及叔丁醇钠(418mg，4.35mmol，5.0equiv.)溶于DMF(5mL)中，90℃氮气保护下反应40小时。反应液浓缩，粗产物用反相HPLC制备纯化(C18，10mmol/L NH4HCO3水溶液/乙腈)，得到目标化合物(92mg，产率：19.8％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝534.2。
第二步：((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(6-((1-(5-甲基噻唑-2-基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-基)甲酮盐酸盐的制备
Figure BDA0003640361420001382
将((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(6-((1-(5-甲基噻唑-2-基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-基)甲酮(92mg，0.17mmol，1.0equiv.)及盐酸(0.1M)(1.9mL,0.19mmol，1.1equiv.)溶于MeOH(3mL)中，20℃反应0.5小时。反应液浓缩，得到目标化合物(83.06mg，产率：85.7％)。
LC-MS(ESI)[M-Cl]+＝534.2；1H NMR(400MHz,(CD3)2SO)δ9.11-8.85(m,2H),8.54-8.31(m,1H),8.07-7.82(m,1H),7.30-6.96(m,4H),6.92-6.57(m,2H),5.22-5.01(m,1H),4.81-4.36(m,1H),4.25-3.96(m,2H),3.89-3.61(m,2H),3.32-3.25(m,3H),3.20-2.87(m,6H),2.82-2.59(m,2H),2.28-2.19(m,3H),2.09-1.65(m,6H)。
实施例395：((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(6-((1-(苯磺酰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420001383
将((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)(6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-基)甲酮(150mg，0.343mmol，1.0equiv.)溶于二氯甲烷(5mL)中，接着加入三乙胺(42mg，0.412mmol，1.2equiv.)，将反应降温至-10℃左右，接着向反应液中缓慢加入苯磺酰氯(67mg，0.378mmol，1.1equiv.)，并保持反应体系的温度不超过0℃，加毕，反应逐渐升至室温(20℃)，搅拌1小时后LC-MS显示反应完毕，向反应液中加入水淬灭，接着将反应液进行浓缩，得到粗品，用反相HPLC分离纯化(C18，NH4HCO3水溶液/乙腈)，得到标题化合物(42mg，产率：21.2％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝577.2。
实施例396：(6-((1-(环己基羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-(环戊硫基)嘧啶-4-基)((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420001391
将(2-(环戊硫基)-6-(哌啶-4-基氨基)嘧啶-4-基)((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮(150mg，0.280mmol，1.0equiv.)溶于二氯甲烷(5mL)中，接着加入三乙胺(86mg，0.839mmol，3.0equiv.)，将反应降温至-10℃左右，接着向反应液中缓慢加入环己基甲酰氯(45mg，0.308mmol，1.1equiv.)，并保持反应体系的温度不超过0℃，加毕，反应逐渐升至室温(20℃)，搅拌1小时后LC-MS显示反应完毕，向反应液中加入水淬灭，接着将反应液进行浓缩，得到粗品，用反相HPLC分离纯化(C18，NH4HCO3水溶液/乙腈)，得到标题化合物(50mg，产率：27.8％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝647.0。
实施例397：(6-(环丁氨基)-2-((1-(二甲氨基)丙烷-2-基)氧基)嘧啶-4-基)((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮的制备
第一步：6-(环丁氨基)-2-((1-(二甲氨基)丙烷-2-基)氧基)嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420001392
将2-氯-6-(环丁氨基)嘧啶-4-甲酸甲酯(60mg，0.25mmol)溶于1-(二甲氨基)丙烷-2-醇(770mg，7.50mmol)中，室温下加入对甲苯磺酸(43mg，0.25mmol)，反应液加热至110℃，反应16小时，TLC检测反应完成。将反应液进行中压制备，得到标题化合物(30mg，产率：38.9％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝295.2。
第二步：(6-(环丁氨基)-2-((1-(二甲氨基)丙烷-2-基)氧基)嘧啶-4-基)((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420001393
将6-(环丁氨基)-2-((1-(二甲氨基)丙烷-2-基)氧基)嘧啶-4-甲酸(30mg，0.102mmol)和三乙胺(31mg，0.306mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，室温下加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(46mg，0.122mmol)。室温搅拌10分钟，加入(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(35.5mg，0.153mmol)，添加完毕后，室温搅拌16小时。TLC显示原料反应完全，向反应体系加入20mL的水和20mL的二氯甲烷，萃取，静置后分离有机相，有机相用饱和食盐水溶液洗涤三次，再用无水硫酸钠干燥，得到粗品，由中压制备得到标题化合物(4.11mg，产率：8.1％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝509.3。
实施例398：1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基-4,4-二氘)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-异丁氧基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
第一步：(3R,4R)-3-((叔丁氧羰基)氧基)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420001394
将(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(1g，4.3mmol，1.0equiv.)，三乙胺(1.3g，12.9mmol，3.0equiv.)和DMAP(105mg，0.86mmol，0.2equiv.)溶解于THF(20mL)中，在搅拌下加入Boc2O(1.88g，8.6mmol，2.0equiv.)，20℃反应1小时。反应液浓缩，用柱层析法分离纯化(硅胶，PE:EA＝20:1)，得到目标化合物(1.12g，产率：60％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝433.3。
第二步：(3R,4R)-3-((叔丁氧羰基)氧基)-4-(4-氧代-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
Figure BDA0003640361420001401
将(3R,4R)-3-((叔丁氧羰基)氧基)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.49mmol，1.0equiv.)溶于CHCl3(10mL)中，加入甲酸(451mg，9.8mmol，20.0equiv.)和DDQ(473mg，2.08mmol，3.0equiv.)，20℃反应16小时。反应液加入饱和碳酸钠水溶液(5mL)，用水和DCM萃取，有机相浓缩，粗产物用柱层析法分离纯化(硅胶，DCM:MeOH＝50:1)，得到目标化合物(46mg，产率：18％)。
LC-MS(ESI)[M+Na]+＝469.3。
第三步：2-((3R,4R)-3-羟基哌啶-4-基)-2,3-二氢异喹啉-4(1H)-酮的制备
Figure BDA0003640361420001402
将(3R,4R)-3-((叔丁氧羰基)氧基)-4-(4-氧代-3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(46mg，0.1mmol，1.0equiv.)溶于EA(0.5mL)中，加入乙酸乙酯-盐酸气(5mL,4M)。20℃反应1小时。反应液浓缩，粗产物用MeOH:H2O(1mL:1mL)溶解，加入氢氧化锂(7mg，0.3mmol，3.0equiv.)，20℃反应1小时。反应液浓缩，用pre-TL纯化(硅胶，DCM:MeOH＝5:1)，得到目标化合物(12mg，产率：48％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝247.3。
第四步：(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基-4,4-二氘)哌啶-3-醇的制备
Figure BDA0003640361420001403
将2-((3R,4R)-3-羟基哌啶-4-基)-2,3-二氢异喹啉-4(1H)-酮(4mg，0.016mmol，1.0equiv.)溶于干燥THF(1mL)中，加入LiAlD4(1.3mg，0.032mmol，2.0equiv.)，20℃反应2小时。反应液用重水淬灭，浓缩，得到标题化合物(6mg，粗品)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝235.1。
第五步：1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基-4,4-二氘)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-异丁氧基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420001404
利用实施例187中第三步的方法，合成了标题化合物。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝553.3。
实施例399：1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基-4,4-二氘)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-(戊烷-3-氧基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420001411
利用实施例188中第二步的中间体和方法，合成得到标题化合物。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝567.4。
实施例400：(6-((1-(环丁基羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-异丙氧基嘧啶-4-基)((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基-4,4-d2)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420001412
将中间体(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇替换为(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基-4,4-d2)哌啶-3-醇，使用实施例189相同的方法，合成得到标题化合物。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝579.4。
实施例401：(6-((1-(苯甲酰基)哌啶-4-基)氨基)-2-异丙氧基嘧啶-4-基)((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基-4,4-d2)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420001413
将中间体(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇替换为(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基-4,4-d2)哌啶-3-醇，使用实施例183相同的方法，使用合成得到标题化合物。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝601.3。
实施例402：(1-(4-((2-(叔丁硫基)-6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基-4,4-d2)-3-羟基哌啶-1-羰基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙烷-1-酮的制备
Figure BDA0003640361420001414
利用实施例187中第三步的方法，使用制备例38的中间体，合成得到标题化合物。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝569.3。
对照例1：按照WO2020182018A1的实施例13中的制备方法获得对照例1化合物(1.67g，产率：50.0％)。
Figure BDA0003640361420001415
LC-MS(ESI)[M+H]+＝477.4；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.12(dd,J＝7.9,4.6Hz,3H),7.02(d,J＝5.7Hz,1H),6.36(s,1H),5.19(d,J＝7.7Hz,1H),4.72(d,J＝13.4Hz,1H),4.51(d,J＝13.3Hz,1H),3.99(d,J＝13.5Hz,1H),3.84(s,2H),3.79(s,1H),3.21(t,J＝11.8Hz,1H),3.10(t,J＝12.1Hz,1H),2.91(d,J＝4.1Hz,3H),2.80(d,J＝10.8Hz,3H),2.50(s,3H),2.11(s,3H),2.05(d,J＝13.7Hz,3H),2.00(s,1H),1.93(d,J＝11.9Hz,1H),1.70(dd,J＝23.6,11.7Hz,2H),1.39(d,J＝11.3Hz,2H)。
对照例2(实施例403)：1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-甲基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙酮的制备
第一步：6-羟基-2-甲基嘧啶-4-甲酸的制备
Figure BDA0003640361420001421
将(Z)-1,4-二乙氧基-1,4-二氧代丁-2-烯-2-醇钠(30g，142.75mmol，1equiv.)溶于水(50ml)中，室温滴加氢氧化钠水溶液(23.6ml，6mol/L)，25℃搅拌1h，将阿西替米胺(18.2g，314.05mmol，2.2equiv.)溶于水(40ml)中后加至反应体系，冰浴下用氢氧化钠水溶液(6mol/L)调节Ph＝11，该温度下继续搅拌40min，盐酸水溶液(12mol/L)调节Ph＝1，减压抽滤，盐酸水溶液(2×50ml，0.1mol/L)洗涤滤饼，干燥，得到目标化合物(9.5g，产率：43.2％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝155.2。
第二步：6-氯-2-甲基嘧啶-4-甲酰氯的制备
Figure BDA0003640361420001422
将6-羟基-2-甲基嘧啶-4-甲酸(1.5g，9.73mmol，1.0equiv.)加至三氯氧磷(20ml)中，升温至110℃反应1小时，直至固体全部溶解。LC-MS检测反应完全，冷至室温，将反应液减压浓缩，得到粗品，直接用于下一步反应。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝183.1。
第三步：(6-氯-2-甲基嘧啶-4-基)((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮的制备
Figure BDA0003640361420001423
将(3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)哌啶-3-醇(2.19g，9.42mmol，1.2equiv.)和DIEA(8.12g，62.8mmol，8equiv.)溶于二氯甲烷(30mL)，冰浴下缓慢加入6-氯-2-甲基嘧啶-4-甲酰氯(1.5g，7.85mmol，1equiv.)(预先溶于二氯甲烷中)，25℃搅拌2h，将水(50mL)加至反应体系中，萃取，分液，浓缩有机相，残留物用柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，得到目标化合物(230mg，产率：7.5％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝387.2。
第四步：1-(4-((6-((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-羰基)-2-甲基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)乙酮的制备
Figure BDA0003640361420001424
将(6-氯-2-甲基嘧啶-4-基)((3R,4R)-4-(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-羟基哌啶-1-基)甲酮(230mg，0.59mmol，1.0equiv.)、(4-氨基哌啶-1-基)乙烷-1-酮(170mg，1.196mmol，2.0equiv.)和三乙胺(421.1mg，4.16mmol，7.0equiv.)溶于异丙醇(10mL)中，然后加热至90℃反应2h，LC-MS监测反应完全，将反应液用乙酸乙酯和水萃取，有机相合并、干燥、浓缩，通过制备纯化，得到目标化合物(83.7mg，产率：28.6％)。
LC-MS(ESI)[M+H]+＝493.4；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.44(s,1H),7.11(d,J＝18.3Hz,5H),6.36(s,1H),4.57(d,J＝12.5Hz,1H),4.40(d,J＝12.3Hz,1H),4.09(d,J＝14.8Hz,2H),3.94-3.70(m,4H),3.24(s,1H),3.15-3.05(m,2H),2.98(s,4H),2.93-2.84(m,2H),2.76-2.64(m,1H),2.44(d,J＝8.4Hz,3H),2.10(s,3H),1.98(dd,J＝35.5,21.9Hz,3H),1.79-1.69(m,1H),1.43(dd,J＝30.9,12.2Hz,2H)。
生物学测试评价
以下结合测试例进一步描述本发明，但这些实施例并非意味着限制本发明的范围。
测试例1：PRMT5酶活抑制活性评价
1.试验方法：
配制1倍酶反应缓冲液(10mM Tris 8.0(Sigma,Cat.No.T2694-1L)，0.01％Tween-20(Sigma,Cat.No.P2287-100ML)，1mM DTT(Sigma,Cat.No.D0632-10G)。将PRMT5(ActiveMotif,Cat.No.31921)和[3H]-SAM(PerkinElmer,Cat.No.NET155V001MC)加入到1倍酶反应缓冲液中，配制成25/15倍混合溶液(PRMT5终浓度为5nM，[3H]-SAM终浓度为0.3μM)，转移15μL该溶液至含有不同浓度化合物(DMSO终浓度1％)的384孔微孔板(Corning384-wellPolypropylene Storage Microplates,Cat.No.3657)中，室温孵育60分钟。将多肽底物GL-27(Ac-SGRGKGGKGLGKGGAKRHRKVGG-K)(Biotin)(GL Biochem,Cat.No.342095)加入到1倍酶反应缓冲液中，配制成25/10倍底物溶液，然后加入10μL多肽底物溶液(多肽底物终浓度100nM)，室温反应120分钟后，加入5μL 6倍冰冷的SAM(Sigma,Cat.No.A7007-100MG)溶液终止反应(SAM终浓度：0.125mM)。转移25μL反应体系至FlashPlate(StreptavidinFlashPlate HTS PLUS,High Capacity,384-well,Perkin Elmer,Cat.No.SMP410A001PK)，室温孵育1小时，用含有0.1％Tween-20的蒸馏水洗板三次后，微孔板在MicroBeta仪器上读取CPM数据(Counts Per Minute，每分钟计数)。得到化合物不同浓度的CPM原始数据后，按照如下公式：Inh％＝(Max-Sample)/(Max-Min)*100％，对数据进行标准化处理，得到每个浓度点的酶活性抑制率Inh％(其中Max为含酶阳性孔的CPM值，Min为不含酶阴性孔的CPM值，Sample为化合物处理样品孔的CPM值)，然后在EXCEL中输入每个浓度(X)对应的抑制率Inh％(Y)，用XLfit插件根据内置四参数拟合公式Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+(IC50/X)*HillSlope)计算出每个化合物的半数抑制浓度IC50值。
2.试验结果：
本发明所示实施例化合物在PRMT5酶活抑制试验中显示出如下表1的生物活性。
表1.化合物对PRMT5酶活抑制的IC50值
Figure BDA0003640361420001441
Figure BDA0003640361420001451
注：A代表IC50≤20nΜ；B代表20nΜ<IC50≤50nΜ；C代表50nΜ<IC50≤100nΜ；D代表IC50>100nΜ。
3.试验结论：
如上表所示，本发明的化合物表现出不同的PRMT5酶活抑制活性，部分化合物的酶抑制IC50实测值可以达到D级(例如，实施例37的化合物为99.80nM，实施例59的化合物为107.00nM，实施例73的化合物为110.00nM)，部分化合物的酶抑制IC50实测值可以达到C级(例如，实施例1的化合物为65.00nM，实施例70的化合物为66.40nM，实施例173的化合物为51.25nM)，部分化合物的酶抑制IC50实测值可以达到B级(例如，实施例12的化合物为35.20nM，实施例46的化合物为29.15nM，实施例172的化合物为20.54nM)，部分化合物的酶抑制IC50实测值甚至可以达到A级(例如，实施例153的化合物为6.97nM，实施例183的化合物为6.40nM，实施例193的化合物为6.40nM，实施例194的化合物为4.50nM，实施例202的化合物为5.20nM，实施例207的化合物为3.90nM，实施例213的化合物为4.50nM，实施例315的化合物为4.70nM，实施例392的化合物为2.80nM，实施例401的化合物为7.90nM)，均显著优于或相当于达到D级的对照例1化合物(即WO2020182018A1的化合物13，其IC50实测值为115.00nM)。
另外，与对照例1化合物相比，对照例2化合物的酶抑制IC50实测值可以达到B级(其IC50实测值为36.00nM)，说明哌啶环在其特定位点上存在羟基取代以及具有3,4-位反式二取代构型是本发明化合物表现出优异的酶活抑制活性的关键。
测试例2：人源B细胞非霍奇金淋巴瘤Z-138细胞生长抑制活性评价
1.实验材料及仪器
1)细胞系及培养方法
细胞系 供货商 货号 肿瘤类型 生长特点 培养方法
Z-138 ATCC CRL-3001 套细胞淋巴(B细胞非霍奇金淋巴瘤) 悬浮 IMDM+10％FBS
2)培养基及试剂
培养基及试剂 生产商 货号
IMDM GIBCO 31980048
FBS Hyclone SH30084.03
penicillin streptomycin Thermo SV30010
DMSO SIGMA D2650
Promega CellTiter-Glo发光法细胞活性检测试剂盒 Promega Promega-G7573
3)384孔板
Figure BDA0003640361420001452
384孔透明平底白色聚苯乙烯微孔板(带盖，无菌)，Corning，货号：3765。
4)仪器
2104EnVision读板器，PerkinElmer；
Vi-Cell XR细胞计数仪，beckmancoulter。
2.实验方法及步骤
1)细胞培养
复苏细胞，按上表所示的培养条件在37℃，5％CO2的培养箱中进行培养。定期传代，传两代左右选择生长状态良好的细胞株用于铺板。
2)细胞铺板
I.从培养箱中取出细胞，转移细胞悬液至50mL离心管中，800-1000rpm离心3-5分钟后，弃上清。向离心管中加入适当体积的培养基，轻柔吹打使细胞重悬均匀。使用Vi-CellXR细胞计数仪计数。
II.根据测得的细胞密度，将细胞悬液调至合适浓度。
III.将细胞悬液加入384孔板中，40μL/孔，含细胞700个/孔，并在空白对照孔中加入不含细胞的等体积培养液。
3)化合物配制及加药
I.化合物以100％的DMSO溶解，配制成10mM浓度的储备液。
II.取10mM浓度的储备液，用DMSO稀释稀释成2mM溶液，并以此为起始浓度用DMSO进行4×梯度稀释9个点。
III.分别取上述化合物的梯度浓度溶液200nL，加入到每孔中。空白对照孔及DMSO对照孔分别加入200nL的DMSO，DMSO终浓度为0.5％。
IV.细胞板在二氧化碳培养箱中孵育5天(120H)。
4)试剂准备及检测
按照Promega CellTiter-Glo发光法细胞活性检测试剂盒(Promega-G7573)操作说明书进行检测：
I.将CellTiter-Glo缓冲液融化并放置至室温。
II.将冻干CellTiter-Glo底物放置至室温。
III.在一瓶CellTiter-Glo底物中加入CellTiter-Glo缓冲液以溶解底物，从而配制CellTiter-Glo工作液。
IV.缓慢涡旋震荡使充分溶解。
V.取出细胞培养板放置使其平衡至室温。
VI.每孔中加入混匀后的CellTiter Glo试剂25微升，避光振荡10分钟，孵育10分钟。
VII.在2104EnVision读板器上检测发光信号。
3.数据分析
用下列公式来计算检测化合物的抑制率(IR)：
IR(％)＝(1–(RLU化合物–RLU空白对照)/(RLUDMSO–RLU空白对照))*100％；
利用XLFit绘制药效抑制率曲线，并计算IC50值，采用如下4参数模型：[fit＝(A+((B-A)/(1+((C/x)^D))))]。
4.实验结果：
本发明所示实施例化合物在Z-138细胞生长抑制试验中显示出如下表2的生物活性。
表2.化合物对Z-138细胞生长抑制的IC50值
Figure BDA0003640361420001471
Figure BDA0003640361420001481
注：A代表IC50≤20nΜ；B代表20nΜ<IC50≤50nΜ；C代表50nΜ<IC50≤100nΜ；D代表100nΜ<IC50≤1000nΜ；E代表IC50>1000nΜ；\代表未检测。
5.实验结论：
如上表所示，本发明的化合物表现出不同的Z-138细胞生长抑制活性，部分化合物的细胞生长抑制IC50实测值可以达到E级(例如，实施例45的化合物为1325.00nM，实施例66的化合物为1358.00nM，实施例259的化合物为1190.00nM)，部分化合物的细胞生长抑制IC50实测值可以达到D级(例如，实施例39的化合物为134.70nM，实施例215的化合物为157.00nM，实施例276的化合物为111.00nM)，部分化合物的细胞生长抑制IC50实测值可以达到C级(例如，实施例170的化合物为62.80nM，实施例217的化合物为60.50nM，实施例339的化合物为65.30nM)，部分化合物的细胞生长抑制IC50实测值可以达到B级(例如，实施例165的化合物为33.70nM，实施例183的化合物为46.60nM，实施例212的化合物为22.22nM)，部分化合物的细胞生长抑制IC50实测值甚至可以达到A级(例如，实施例153的化合物为13.75nM，实施例158的化合物为19.00nM，实施例171的化合物为11.50nM，实施例194的化合物为11.00nM，实施例202的化合物为8.00nM，实施例207的化合物为12.00nM，实施例243的化合物为5.80nM，实施例253的化合物为7.40nM，实施例392的化合物为12.30nM，实施例401的化合物为16.00nM)，均显著优于或相当于达到E级的对照例1化合物(即WO2020182018A1的化合物13，其IC50实测值为2709.60nM)。

Claims (25)

1.一种式(I)所示的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物：
Figure FDA0003640361410000011
其中，L1和L2各自独立地选自-C(R1)(R2)-、-C(R1)(R2)C(R1)(R2)-、-C(R1)(R2)C(R1)(R2)C(R1)(R2)-其中的一种；其中，R1、R2每次出现时独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、-OR3、-NHR3、-NR3R4其中的一种；R3、R4每次出现独立地选自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基；
X选自C(R5)或N；其中，R5每次出现时独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基其中的一种；
Y选自-(化学键)、-H、-OH、-NH2、卤素、-O-、-S-、-CO-、-C(R6)F-、-CF2-、-SO-、-SO2-、-(CH2)pN(R6)-、-N(R6)(CH2)p-、-S(O)N(R6)-、-S(O)2N(R6)-、-N(R6)SO-、-N(R6)S(O)2-、-C(O)N(R6)-、-N(R6)C(O)-、-CH(R6)-其中的一种；其中，p＝0，1，2或3；R6可选自氢、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C3-6环烷基、任选取代的4-6元杂环基其中的一种；所述任选取代是指被取代基团上的氢未被取代或被取代基团的一个或多个可取代位点独立地被选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基所取代；当Y选自-H、-OH、-NH2、卤素其中的一种时，G4不存在；
Z选自-(化学键)、-O-、-S-、-CO-、-N(R7)-、-S(O)N(R7)-、-S(O)2N(R7)-、-N(R7)SO-、-N(R7)S(O)2-、-C(O)N(R7)-、-N(R7)C(O)-、-N(R7)C(O)N(R7)-、-CH(R7)-、-CH(OH)-、-CH(CF3)-、-CH(NHR7)-、-C＝N(R7)-、-SO-、-SO2-、-CF(R7)-、CF2、
Figure FDA0003640361410000012
其中的一种；其中R7每次出现时独立地选自氢、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C3-6环烷基、任选取代的C1-6烷氧基、任选取代的4-6元杂环基其中的一种；所述任选取代是指被取代基团上的氢未被取代或被取代基团的一个或多个可取代位点独立地被选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基所取代；
G1每次出现时独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、C1-5直链烷基或支链烷基其中的一种；
G2选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、任选取代的R8、任选取代的-O(R8)、任选取代的-S(R8)、任选取代的-NH(R8)、任选取代的-N(R8)(R8)其中的一种；其中R8每次出现时独立地选自C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环基其中的一种；所述任选取代是指被取代基团上的氢未被取代或被取代基团的一个或多个可取代位点独立地被选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基所取代；
G3选自任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的C3-7环烷基、任选取代的4-10元杂环基中的一种；所述任选取代是指被取代基团上的氢未被取代或被取代基团的一个或多个可取代位点独立地被R16所取代，其中，R16每次出现独立地选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氨基、硝基、氰基、-R9、-OR9、-OR9-N(R9)(R10)、-OR9-OR10、-SR9、SO(R9)、-SO2(R9)、-COOR9、-NH(R9)、-N(R9)(R10)、-N(R9)(R10)-N(R9)(R10)、-CONHR9、-CON(R9)(R10)、-SONH(R9)、-SON(R9)(R10)、SO2NH(R9)、-SO2N(R9)(R10)；其中，R9、R10每次出现独立地选自氢，或可被氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、硝基、甲氧基、-COOCH3、-COCH3、-COOC(CH3)3、-CH2-N(CH3)(CH3)、-N(CH3)(CH3)、-NH(CH3)、C1-6烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基中的一个或多个任意取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10环烷基、4-10元杂环基、芳基、5-10元杂芳基；
G4选自以下基团：-SO2(CH3)、任选取代的C1-12烷基、任选取代的C2-12烯基、任选取代的C2-12炔基、任选取代的C3-12环烷基、任选取代的4-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基中的一种；所述任选取代是指被取代基团上的氢未被取代或被取代基团的一个或多个可取代位点独立地被R17取代，R17每次出现独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、羧基、氧代基、亚砜基、-R11、-OR11、-SR11、-NH(R11)、-N(R11)(R11)、
Figure FDA0003640361410000021
其中，R11每次出现独立地选自可被氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、氧代基、C1-6烷基、三氟甲基、C3-6环烷基、4-6元杂环烷基、芳基、5-6元杂芳基中的一个或多个任意取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-10元杂环基、芳基、5-6元杂芳基；D每次出现独立地选自键、-CH2-、-C(＝O)-、-NH-、-N(CH3)-、-O-、-S-其中的一种，f每次出现独立地选自0，1，2，3，4，5，6，7或8；
m＝0或1，当m＝1时，A可选自-N(R12)-、-CH(R12)-或-CH(NHR12)-，其中，R12可选自氢、羟基、卤素、C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环基其中的一种；当m＝0时，A不存在；
B可选自-N-或-CH-；
n＝0或1，当n＝1时，E可选自-NR13-或-C(R13)R13-，R13每次出现独立地选自氢、羟基、卤素、C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环基其中的一种；当n＝0时，E不存在；
A，B，E中至少有一个为符合各自定义的N原子；
o＝0，1，2或3；
K可选自-CH2-、-C(＝O)-、-CHF-、-CH(-OH)-、-CF2-、-CHD-、-CD(-OH)-、-CDF-、-CD2-或-CH(R18)-；
R18每次出现独立地选自卤素、巯基、硝基、氰基、氨基、C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环基其中的一种；
H环选自C6-10芳基环、5-10元杂芳基环其中的一种；所述芳基环或杂芳基环可被一个或多个R15独立取代，其中R15每次出现独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、任选取代的-R14、任选取代的-OR14、任选取代的-NHR14、任选取代的-N(R14)(R14)；其中，R14每次出现独立地选自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基；所述任选取代是指被取代基团上的氢未被取代或被取代基团的一个或多个可取代位点独立地被选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基所取代。
2.根据权利要求1所述的式(I)所示的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，式(I)所示的化合物具有式(II)B所示结构：
Figure FDA0003640361410000022
其中，各取代基定义如权利要求1所述。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，R1、R2每次出现时独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、-OR3、-NH(R3)、-N(R3)(R4)其中的一种；R3、R4每次出现独立地选自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基；更进一步优选R1、R2每次出现时独立地为氢、卤素、羟基、氨基、甲基、甲基氨基、二甲基氨基其中的一种；最优选为氢。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，X优选自CH、C(OH)、N其中的一种；最优选为N。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，Y选自-(化学键)、-H、-OH、-NH2、卤素、-O-、-S-、-CO-、-C(R6)F-、-CF2-、-SO-、-SO2-、-(CH2)pN(R6)-、-N(R6)(CH2)p-、-S(O)N(R6)-、-S(O)2N(R6)-、-N(R6)SO-、-N(R6)S(O)2-、-C(O)N(R6)-、-N(R6)C(O)-、-CH(R6)-其中的一种，其中，p＝0，1，2或3；R6可选自氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环基其中的一种，当Y选自-H、-OH、-NH2、卤素其中的一种时，G4不存在；
更优选的，Y选自-(化学键)、-H、-OH、-NH2、-NH-、-O-、-S-、-CO-、-CHF-、-CF2-、-SO-、-SO2-、-(CH2)pNH-、-N(CH3)-、-S(O)NH-、-S(O)2NH-、-NHSO-、-NHS(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-CH2-其中的一种，其中，p＝1，2或3；
进一步优选的，Y选自-(化学键)、-H、-OH、-NH2、-NH-、-CH2NH-、-(CH2)2NH-、-N(CH3)-、-O-、-S-其中的一种；
更进一步优选的，Y选自-(化学键)、-OH、-NH2、-NH-、-O-、-S-；
最优选的，Y选自-(化学键)、-NH-。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，Z选自-(化学键)、-O-、-S-、-CO-、-N(R7)-、-S(O)N(R7)-、-S(O)2N(R7)-、-N(R7)SO-、-N(R7)S(O)2-、-C(O)N(R7)-、-N(R7)C(O)-、-N(R7)C(O)N(R7)-、-CH(R7)-、-CH(OH)-、-CH(CF3)-、-CH(NHR7)-、-C＝N(R7)-、-SO-、-SO2-、-CF(R7)-、CF2、
Figure FDA0003640361410000031
其中的一种，其中R7每次出现时独立地选自氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、4-6元杂环基其中的一种；
更优选的，Z选自-(化学键)、-O-、-S-、-CO-、-NH-、-S(O)2NH-、-NHS(O)2-、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-、-CH2-、-CH(OH)-、-CH(CF3)-、-CH(NH2)-、-C＝N(CH3)-、-C＝N(OCH3)-、-SO-、-SO2-、-CHF-、CF2、
Figure FDA0003640361410000032
中的一种；
最优选的，Z选自-(化学键)、-O-、-CO-、-NH-、-C(O)NH-、-CH2-、-CH(OH)-、-CH(CF3)-、-CH(NH2)-、-C＝N(CH3)-、-C＝N(OCH3)-、-SO2-、-CHF-、CF2、
Figure FDA0003640361410000033
中的一种；
进一步优选的，Z选自-CO-、-SO2-；最优选的，Z选自-CO-。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，G1每次出现时独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、甲基其中的一种；更优选的，G1选自氢。
8.根据权利要求1～7中任一项所述的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，G2选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、-R8、-O(R8)、-S(R8)、-NH(R8)、-N(R8)(R8)其中的一种，其中R8每次出现时独立地选自C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环基其中的一种；更优选的，G2选自卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、-CH3、环丙基、-OCH3、-SCH3、-NHCH3、-N(CH3)(CH3)、-NH(CH3)其中的一种；更优选的，G2选自氟、羟基、氨基；最优选的，G2选自羟基、氨基。
9.根据权利要求1～8中任一项所述的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，G3选自任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的4-10元杂环基中的一种，其中5-10元杂芳基中杂原子为N、O、S，杂原子数为1，2，3或4个，所述任选取代是指被取代基团上的氢未被取代或被取代基团的一个或多个可取代位点独立地被R16所取代；
优选地，G3为任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的4-10元杂环基中的一种，所述C6-10芳基、5-10元杂芳基或4-10元杂环基选自：
Figure FDA0003640361410000041
Figure FDA0003640361410000042
其中的一种，所述任选取代是指被取代基团上的氢未被取代或被取代基团的一个或多个可取代位点独立地被R16所取代；R16每次出现独立地选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、-R9、-OR9、-SR9、SO(R9)、-SO2(R9)、-COOR9、-NH(R9)、-N(R9)(R10)、-CONHR9、-CON(R9)(R10)、-SONH(R9)、-SON(R9)(R10)、SO2NH(R9)、-SO2N(R9)(R10)；进一步优选地，R16每次出现独立地选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、-R9、-OR9、-SR9、SO(R9)、-COOR9、-NH(R9)、-N(R9)(R10)、-CON(R9)(R10)；最优选，R16每次出现独立地选自氢、氘、卤素、氰基、-R9、-OR9、-SR9、SO(R9)、-N(R9)(R10)；
进一步优选地，R9、R10每次出现独立地选自可被氢、卤素、羟基、巯基、氨基、甲氨基、二甲氨基、甲氧基、-C(O)CH3、-COOC(CH3)3、-COOCH3、氰基、C1-6烷基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基中的一个或多个任意取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-10元杂环基、芳基、5-10元杂芳基；最优选，R9、R10每次出现独立地选自可被氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-3烷基、C3-6环烷基、4-5元杂环基、甲氨基、二甲氨基、甲氧基、-C(O)CH3、-COOC(CH3)3、-COOCH3中的一个或多个任意取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-10元杂环基、苯基、5-10元杂芳基。
10.根据权利要求9所述的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，G3为
Figure FDA0003640361410000051
R16每次出现独立地选自氢、氘、-OCH3、-OCH2CH3、-SCH3、-SCH2CH3、-S-C(CH3)3、-O-C(CH3)3、-O-CH(CH3)2、-O-CH2CH(CH3)2、-O-CH(CH2CH3)2、-S-CH(CH3)2、-S-CH2CH(CH3)2、-S-CH(CH2CH3)2。
11.根据权利要求1～10中任一项所述的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，G4选自以下基团：-SO2(CH3)、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C3-12环烷基、任选取代的4-10元杂环基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的5-10元杂芳基中的一种，所述任选取代是指被取代基团上的氢未被取代或被取代基团的一个或多个可取代位点独立地被R17取代，R17每次出现独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、羧基、氧代基、-R11、-OR11、-SR11、-NH(R11)、-N(R11)(R11)、
Figure FDA0003640361410000052
其中，R11每次出现独立地选自可被氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、氧代基、C1-6烷基、三氟甲基、C3-6环烷基、4-6元杂环烷基、芳基、5-6元杂芳基中的一个或多个任意取代的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-10元杂环基、芳基、5-6元杂芳基；D每次出现独立地选自键、-CH2-、-C(＝O)-、-NH-、-N(CH3)-、-O-、-S-其中的一种，f每次出现时独立地选自0，1或2；
优选地，G4选自：
Figure FDA0003640361410000053
Figure FDA0003640361410000061
Figure FDA0003640361410000062
其中的一种；最优选的，G4选自：
Figure FDA0003640361410000063
其中，上述基团存在一个或多个R17取代，位于基团任意可取代位点；
优选地，R17每次出现独立选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、羧基、氧代基、亚砜基、砜基、-R11、-OR11、-SR11、-NH(R11)、-N(R11)(R11)、
Figure FDA0003640361410000071
Figure FDA0003640361410000072
优选地，R11每次出现独立地选自氢、羟基、氰基、氨基、三氟甲基、二氟甲基、三氟乙基、二氟乙基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、环丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、C6-8芳基、5-6元杂芳基其中的一种；
最优选的，R17选自
Figure FDA0003640361410000073
其中，R11选自氢、甲基、乙基、环丙基、环丁基、苯基中的一种。
12.根据权利要求1～11中任一项所述的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，A不存在；
优选地，B选自N；
优选地，n＝1，E选自-CH(R13)-或-N(R13)-，R13选自氢、羟基、卤素、甲基其中的一种；更优选的，n＝1，E选自-CH2-或-NH-；最优选的，n＝1，E选自-CH2-；
优选地，o＝0，1或2，更优选的，o＝1；
优选地，K可选自-CH2-、-C(＝O)-、-CHF-、-CH(-OH)-、-CF2-、-CHD-、-CD(-OH)-、-CDF-、-CD2-；更优选的，K可选自-CH2-、-C(＝O)-、-CF2-、-CHD-、-CHF-、-CD2-；最优选的，K可选自-CH2-、-C(＝O)-、-CF2-、-CD2-、-CHD-；最优选的，K可选自-CD2-。
13.根据权利要求1～12任一项所述的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，H环选自苯环、5-6元杂芳基环、5元并6元杂芳环、6元并5元杂芳环其中的一种，所述苯环、5-6元杂芳基环、5元并6元杂芳环、6元并5元杂芳环可被一个或多个R15独立取代，其中，R15选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、4-6元杂环基、芳基、5-6元杂芳基。
14.根据权利要求1所述的式(I)所示的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，
Figure FDA0003640361410000074
为
Figure FDA0003640361410000075
15.根据权利要求2所述的式(I)所示的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，
Figure FDA0003640361410000081
为
Figure FDA0003640361410000082
16.根据权利要求1或2所述的式(I)所示的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，
G3为
Figure FDA0003640361410000083
R16选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、-R9、-OR9、-SR9、-NH(R9)和-N(R9)(R10)；
每次出现时，R9、R10各自独立地选自C1-6烷基和C3-6环烷基，或者R9和R10与其所连接的N原子共同形成4-6元杂环基。
17.根据权利要求1或2所述的式(I)所示的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，
G4为
Figure FDA0003640361410000084
R11选自C6-8芳基和5-6元杂芳基，所述芳基或杂芳基任选地被卤素、C1-6烷基、三氟甲基中的一个或多个取代；
所述杂环基或杂芳基包含1、2或3个杂原子，所述杂原子各自独立地选自N、O和S。
18.根据权利要求1所述的式(I)所示的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，式(I)所示的化合物具有式(III)所示结构：
Figure FDA0003640361410000085
其中，
R16选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氨基、氰基、-R9、-OR9、-SR9、-NH(R9)和-N(R9)(R10)；
每次出现时，R9、R10各自独立地选自C1-6烷基和C3-6环烷基，或者R9和R10与其所连接的N原子共同形成4-6元杂环基；
R11选自C6-8芳基和5-6元杂芳基，所述芳基或杂芳基任选地被卤素、C1-6烷基、三氟甲基中的一个或多个取代；
所述杂环基或杂芳基包含1、2或3个杂原子，所述杂原子各自独立地选自N、O和S。
19.根据权利要求18所述的式(I)所示的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，
R16选自氢、氘、-R9、-OR9、-SR9和-N(R9)(R10)，其中R9和R10如权利要求18中所定义；
优选地，R16选自氢、氘、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2、-OCH2CH(CH3)2、-OC(CH3)3、-OCH(CH2CH3)2、-O-环丙基、-O-环丁基、-O-环戊基、-O-环己基、-SCH3、-SCH2CH3、-SCH(CH3)2、-SCH2CH(CH3)2、-SC(CH3)3、-SCH(CH2CH3)2、-S-环丙基、-S-环丁基、-S-环戊基、-S-环己基、吖丁啶-1-基、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基和3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基。
20.根据权利要求18所述的式(I)所示的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，
R11选自苯基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基和吡嗪基，所述苯基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基或吡嗪基任选地被氟、甲基、三氟甲基中的一个或多个取代；
优选地，R11选自苯基、2-氟苯基、3-氟苯基、4-氟苯基、2-甲基苯基、3-甲基苯基、4-甲基苯基、2-(三氟甲基)苯基、3-(三氟甲基)苯基、4-(三氟甲基)苯基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、1-甲基-1H-吡唑-3-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基、1-甲基-1H-吡唑-5-基、异噁唑-3-基、异噁唑-4-基、异噁唑-5-基、噻唑-2-基、噻唑-4-基、噻唑-5-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、嘧啶-2-基、嘧啶-4-基和嘧啶-5-基。
21.根据权利要求18所述的式(I)所示的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物，其中，式(III)所示的化合物具有式(III)A或式(III)B所示结构：
Figure FDA0003640361410000091
其中，R11和R16如权利要求18中所定义。
22.如下化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物：
Figure FDA0003640361410000092
Figure FDA0003640361410000101
Figure FDA0003640361410000111
Figure FDA0003640361410000121
Figure FDA0003640361410000131
Figure FDA0003640361410000141
Figure FDA0003640361410000151
Figure FDA0003640361410000161
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Figure FDA0003640361410000181
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Figure FDA0003640361410000201
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Figure FDA0003640361410000221
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Figure FDA0003640361410000241
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Figure FDA0003640361410000271
Figure FDA0003640361410000281
23.一种药用组合物，其包含权利要求1～22中任一项所述的化合物，及其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物。
24.根据权利要求1～22中任一项所述化合物，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物或权利要求23的药用组合物在制备预防和/或治疗由PRMT5抑制剂介导的疾病的药物中的用途；
优选地，所述由PRMT5抑制剂介导的疾病为癌症或肿瘤相关疾病；
更优选地，所述由PRMT5抑制剂介导的疾病为淋巴瘤。
25.一种药物联用组合物，其包含根据权利要求1～22中任一项所述化合物，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、药用盐、前药、水合物、溶剂合物或同位素标记的类似物或权利要求23的药用组合物，以及另外的抗癌剂或免疫检查点抑制剂。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115745765A (zh) * 2022-11-22 2023-03-07 浙大宁波理工学院 一种对溴烷基环己酮类化合物的制备方法

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000000472A1 (en) * 1998-06-30 2000-01-06 Du Pont Pharmaceuticals Company 5-ht7 receptor antagonists
EP2935243B1 (en) 2012-12-21 2018-03-14 Epizyme, Inc. Prmt5 inhibitors containing a dihydro- or tetrahydroisoquinoline and uses thereof
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US9611257B2 (en) 2012-12-21 2017-04-04 Epizyme, Inc. PRMT5 inhibitors and uses thereof
WO2014100695A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Epizyme, Inc. Prmt5 inhibitors and uses thereof
AP2016009303A0 (en) * 2013-12-19 2016-06-30 Bayer Pharma AG Substituted piperidinyl-tetrahydroquinolines
US20170198006A1 (en) 2014-06-25 2017-07-13 Epizyme, Inc. Prmt5 inhibitors and uses thereof
EP3160466A4 (en) 2014-06-25 2017-12-27 Epizyme, Inc. Prmt5 inhibitors and uses thereof
WO2018161922A1 (zh) 2017-03-09 2018-09-13 中国科学院上海药物研究所 一种具有prmt5抑制活性的化合物及其制备和应用
GB201704327D0 (en) 2017-03-17 2017-05-03 Argonaut Therapeutics Ltd Compounds
WO2019002074A1 (en) * 2017-06-29 2019-01-03 Bayer Aktiengesellschaft THIAZOLE COMPOUNDS USEFUL AS INHIBITORS OF PRMT5
EP3704120B1 (en) 2017-11-24 2024-03-06 Jubilant Episcribe LLC Heterocyclic compounds as prmt5 inhibitors
EP3761978A4 (en) 2018-03-09 2021-10-27 Pharmablock Sciences (Nanjing), Inc. INHIBITORS OF PROTEIN-ARGININE-METHYL TRANSFERASE 5 (PRMT5), PHARMACEUTICAL PRODUCTS THEREOF AND METHODS FOR THEREOF
CN113330009B (zh) 2019-03-12 2024-02-09 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 氮杂环化合物、其制备方法及用途
WO2021126728A1 (en) * 2019-12-17 2021-06-24 Merck Sharp & Dohme Corp. Prmt5 inhibitors
WO2021126731A1 (en) * 2019-12-17 2021-06-24 Merck Sharp & Dohme Corp. Prmt5 inhibitors
CN111592522B (zh) * 2020-06-17 2022-09-09 郑州大学 一种精氨酸甲基化转移酶5小分子抑制剂及其制备方法和用途
KR20230047458A (ko) * 2020-09-04 2023-04-07 이노웨이스톤 테라퓨틱스 리미티드 항종양 활성을 갖는 화합물 및 이의 용도

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115745765A (zh) * 2022-11-22 2023-03-07 浙大宁波理工学院 一种对溴烷基环己酮类化合物的制备方法

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