CN115316585A - 一种多肽纳米复合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种多肽纳米复合物及其制备方法,涉及食品添加剂技术领域。本发明以小麦麸皮为原料,进行真空处理,增加蛋白含量,有利于提高抗冻活性;然后进行酶解处理,提取出抗冻多肽;接着进行螯合处理,吸附钙离子,实现补钙效果,然后在碳酸钠的作用下,形成碳酸钙微球,在多肽表面形成疏水表面,增益多肽纳米复合物的抗冻性;然后2,3‑二羟基对苯二甲醛和丙酮反应,形成多酚化合物,具有自由基清除能力,接着多肽‑钙分别与多酚化合物、小麦麸皮多糖发生反应,提高自由基清除能力,提高抗氧化酶活性,增益抗氧化性。本发明制备的多肽纳米复合物具有抗氧化、抗冻效果。
Description
技术领域
本发明涉及食品添加剂技术领域,具体为一种多肽纳米复合物及其制备方法。
背景技术
汤圆因其丰富的内馅,深受人们喜爱,为了延长保质期,常存放于冰柜中,但由于在超冷环境下长期存放,使表面开裂,且回温后,绵软、弹性的口感变差,因此需加入抗冻添加剂,抑制冰晶生长。目前市面上的抗冻助剂主要为抗冻蛋白、抗冻多肽,来源于植物、海洋生物等,然后一些植物,例如小麦麸皮、燕麦,由于坚硬的外壳,难以提取,影响抗冻活性,从而限制其使用。
近年来研究发现,经过消化道的酶水解蛋白后,被吸收的形式主要是多肽,能够比起游离氨基酸的吸收和利用更易更快,消化、代谢以及内分泌调节等环节这些肽类的物质能直接参与,优于氨基酸和蛋白质的吸收机制,多肽的一些生理功能是氨基酸和蛋白质没有的。多种人体代谢和生理调节功能是这些活性肽所具有的生理功能,具有相当高的食用安全性,因此如何提高多肽抗冻性的同时,增加其抗氧化性,并运用于冷冻汤圆上,具有极好的发展前景。
发明内容
本发明的目的在于提供一种多肽纳米复合物及其制备方法,以解决现有技术中存在的问题。
为了解决上述技术问题,本发明提供如下技术方案:一种多肽纳米复合物及其制备方法,所述多肽纳米复合物由以下方法制得,将多肽、蒸馏水、无水氯化钙混合,再加入氢氧化钠调节pH,恒温反应一段时间后,冷却至室温,然后加入正己烷、去离子水、碳酸钠、吐温-8,得混合溶液A,然后向混合溶液A加入碳酸钠混合液,得混合溶液B,然后向混合溶液B加入氯化钙溶液,搅拌一段时间,得多肽-钙;将多肽-钙、蒸馏水、多酚化合物混合,再加入氢氧化钠调节pH,水浴加热一段时间后,迅速冷却至室温,冷冻得复合固体;将复合固体、多糖化合物、磷酸盐缓冲液混合,冷冻干燥后,粉碎过筛,进行美拉德反应,透析,得多肽纳米复合物。
进一步的,所述多肽由以下方法制得,将小麦麸皮和二氧化硅混合,加入液氮研磨过筛,得预处理小麦麸皮;将预处理小麦麸皮用去离子水冲洗,然后加入盐酸盐缓冲液,冷藏后,真空静置一段时间,取出,进行超声、离心,取上清液,加入饱和硫酸铵至沉淀出现,过滤,取沉淀物;将沉淀溶于蒸馏水中,透析,得蛋白提取物;将蛋白提取物和去离子水混合,加入木瓜蛋白酶,酶解、灭酶,冷却至室温,然后加入氢氧化钠调节溶液pH,加入碱性蛋白酶,酶解、灭酶、离心,取上清液,冷冻。
进一步的,所述多酚化合物由2,3-二羟基对苯二甲醛和丙酮制得。
进一步的,所述多糖化合物为小麦麸皮多糖。
进一步的,一种多肽纳米复合物的制备方法,包括以下制备步骤:
(1)将预处理小麦麸皮,用去离子水冲洗2~4次,每次10~15min,然后按料液比1:6~1:8加入盐酸盐缓冲液,0~5℃冷藏11~17h后,抽真空至30~35kPa,静置8~20min后,取出,室温下放置2~6min,超声8~10次,每次超声10s,两次超声的时间间隔为60s,20~25℃、10000~12000rpm离心7~16min,取上清液,加入饱和硫酸铵至沉淀出现,过滤,取沉淀物;将沉淀溶于沉淀质量2~5倍的蒸馏水中,2~5℃透析8~12h,得蛋白提取物;
(2)将蛋白提取物和去离子水按质量比1:17~1:20混合,40~45℃加入蛋白提取物质量0.005~0.02倍的木瓜蛋白酶,反应1~3h后,置于90~100℃的水浴中10~17min,冷却至室温,然后加入氢氧化钠至溶液pH为8.5~9.5,45~55℃加入蛋白提取物质量0.005~0.02倍的碱性蛋白酶,酶解1~3h后,置于90~100℃的水浴中10~17min,4500~4700rpm离心8~14min,取上清液,-22~-18℃冷冻10~14h,得多肽;
(3)将多肽、蒸馏水、无水氯化钙按质量比1:28:0.3~1:34:0.6混合,搅拌均匀后,加入氢氧化钠至溶液pH为7.5~8.0,56~62℃恒温反应60~77min后,冷却至室温,按质量比0.01:7:1:0.2~0.03:10:1:0.4加入正己烷、去离子水、碳酸钠、吐温-8,碳酸钠和无水氯化钙的质量比为5:1~7:1,得混合溶液A,然后向混合溶液A加入混合溶液A体积0.2~0.5倍的碳酸钠混合液,25~35kHz超声28~34min,得混合溶液B,然后向混合溶液B加入混合溶液B体积2~4倍的氯化钙溶液,40~60rpm搅拌6~10h后,静置10~20min,抽滤,用蒸馏水和无水乙醇交替洗涤6~8次,于40~50℃干燥10~13h,得多肽-钙;
(4)将多肽-钙、蒸馏水、多酚化合物按质量比1:17:0.5~1:20:2混合,再加入氢氧化钠至溶液pH为8~10,88~95℃水浴2~5h后,迅速冷却至室温,-22~-18℃冷冻9~13h得复合固体;将复合固体、多糖化合物、磷酸盐缓冲液按质量比0.5:1:1~1.3:1:4混合,-22~-18℃冷冻12~16h后,粉碎过120目筛,进行美拉德反应,透析,得多肽纳米复合物。
进一步的,步骤(1)所述预处理小麦麸皮的制备方法为:将小麦麸皮和二氧化硅按质量比5:1混合,加入液氮研磨过100目筛;所述去离子水、盐酸盐缓冲液先预冷至2~6℃。
进一步的,步骤(3)所述碳酸钠混合液为聚乙烯吡咯烷酮、碳酸钠、去离子水按质量比0.1:1:8~0.2:1:10混合;所述氯化钙溶液为氯化钙和去离子水按质量比1:70~1:106混合。
进一步的,步骤(4)所述多酚化合物的制备方法为:将丙酮、冰醋酸、质量分数为36%的盐酸按质量比1:10:2~1:16:3混合,50~70rpm搅拌8~12min后,加入丙酮质量3~5倍的2,3-二羟基对苯二甲,继续搅拌44~49h,加入饱和碳酸钠溶液至溶液pH为6~7,萃取,取有机相,40~50℃、真空度0.01~0.05MPa下浓缩2~4h,层析。
进一步的,步骤(4)所述多糖化合物的制备方法为:按料液比1:20加入小麦麸皮、质量分数3.6%的盐酸,40~50℃水浴加热2~4h,取上清液,300~400rpm、50~60℃加热60~72min,得浓缩液;向浓缩液加入浓缩液体积4倍的质量分数为95%乙醇,静置10~13h后,6000~6300rpm离心9~17min,取沉淀,-30~-20℃冷冻18~25h。
进一步的,步骤(4)所述美拉德反应的条件为:反应在固相中进行,反应的相对湿度为70~79%,温度为60~70℃,pH为7~8,反应时间为18~22h。
与现有技术相比,本发明所达到的有益效果是:
本发明采用小麦麸皮,经过真空处理、酶解处理、螯合处理,获得多肽-钙,再与多酚化合物、碳水化合物反应,制得多肽纳米复合物,可用于冷冻汤圆,以实现抗氧化、抗冻、补钙的效果。
首先,本发明以小麦麸皮为原料,进行真空处理,能过透过外壳,提取蛋白,增加蛋白含量,有利于提高多肽纳米复合物的抗冻活性;然后进行酶解处理,在碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合作用下,提取出抗冻多肽,其羟基与冷冻汤圆的冰晶棱面结合,使得冰晶原来的生长方向被阻挡,有效抑制重结晶生长;接着进行螯合处理,吸附钙离子,实现多肽纳米复合物补钙效果,且以螯合物的形式能够被小肠主动吸收,不易形成磷酸钙沉积物,提高补钙效果,然后再碳酸钠的作用下,形成碳酸钙微球,在多肽表面形成疏水表面,通过疏水作用,抑制冰晶生长,增益多肽纳米复合物的抗冻性。
其次,本发明利用2,3-二羟基对苯二甲醛的醛基和丙酮的酮基反应,形成多酚化合物,具有自由基清除能力,从而多肽纳米复合物具有抗氧化效果;多酚化合物与多肽-钙发生美拉德反应,有效清除机体自由基,提高抗氧化酶活性,增益多肽纳米复合物的抗氧化性;然后,在盐酸的帮助下,提取出小麦麸皮多糖,小麦麸皮多糖继续与多肽发生美拉德反应,提高多肽纳米复合物的还原力,从而增益多肽纳米复合物的抗氧化性。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
为了更清楚的说明本发明提供的方法通过以下实施例进行详细说明,在以下实施例中制作的多肽纳米复合物的各指标测试方法如下:
抗冻性:取相同质量的实施例与对比例作为添加剂,分别以相对于糯米粉2.5%的添加量加入到糯米粉与温水中,搓圆,放置-60℃的超低温冰箱中存放,测量第一次穿冲冷冻的压力。
抗氧化性:取相同质量的实施例与对比例进行DPPH自由基清除活性的测定,取试样溶于水中,取1mL样品液与4mL0.02mmol/LDPPH-无水乙醇溶液混合,混匀后在室温避光放置30min,混合液于3000r/min离心5min,取上清液,测定517nm处的吸光值,用体积比l:1的无水乙醇与水混合液作为参比;自由基清除率=[1-(A1-A2)]/A0×100%。
实施例1
(1)将小麦麸皮和二氧化硅按质量比5:1混合,加入液氮研磨过100目筛,得预处理小麦麸皮;将预处理小麦麸皮,用2℃的去离子水冲洗2次,每次10min,然后按料液比1:6加入2℃盐酸盐缓冲液,0℃冷藏11h后,抽真空至30kPa,静置8min后,取出,室温下放置2min,超声8次,每次超声10s,两次超声的时间间隔为60s,20℃、10000rpm离心7min,取上清液,加入饱和硫酸铵至沉淀出现,过滤,取沉淀物;将沉淀溶于沉淀质量2倍的蒸馏水中,2℃透析8h,得蛋白提取物;
(2)将蛋白提取物和去离子水按质量比1:17混合,40℃加入蛋白提取物质量0.005倍的木瓜蛋白酶,反应1h后,置于90℃的水浴中10min,冷却至室温,然后加入氢氧化钠至溶液pH为8.5,45℃加入蛋白提取物质量0.005倍的碱性蛋白酶,酶解1h后,置于90℃的水浴中10min,4500rpm离心8min,取上清液,-22℃冷冻10h,得多肽;
(3)将多肽、蒸馏水、无水氯化钙按质量比1:28:0.3混合,搅拌均匀后,加入氢氧化钠至溶液pH为7.5,56℃恒温反应60min后,冷却至室温,按质量比0.01:7:1:0.2加入正己烷、去离子水、碳酸钠、吐温-8,碳酸钠和无水氯化钙的质量比为5:1,得混合溶液A,然后向混合溶液A加入混合溶液A体积0.2倍的碳酸钠混合液,碳酸钠混合液中聚乙烯吡咯烷酮、碳酸钠、去离子水的质量比为0.1:1:8,25kHz超声28min,得混合溶液B,然后向混合溶液B加入混合溶液B体积2倍的氯化钙溶液,氯化钙溶液中氯化钙和去离子水的质量比为1:70,40rpm搅拌6h后,静置10min,抽滤,用蒸馏水和无水乙醇交替洗涤6次,于40℃干燥10h,得多肽-钙;
(4)将丙酮、冰醋酸、质量分数为36%的盐酸按质量比1:10:2混合,50rpm搅拌8min后,加入丙酮质量3倍的2,3-二羟基对苯二甲,继续搅拌44h,加入饱和碳酸钠溶液至溶液pH为6,萃取,取有机相,40℃、真空度0.015MPa下浓缩2h,层析,得多酚化合物;
(5)按料液比1:20加入小麦麸皮、质量分数3.6%的盐酸,40℃水浴加热2h,取上清液,300rpm、50℃加热60min,得浓缩液;向浓缩液加入浓缩液体积4倍的质量分数为95%乙醇,静置10h后,6000rpm离心9min,取沉淀,-30℃冷冻18h,得多糖化合物;
(6)将多肽-钙、蒸馏水、多酚化合物按质量比1:17:0.5混合,再加入氢氧化钠至溶液pH为8,88℃水浴2h后,迅速冷却至室温,-22℃冷冻9h得复合固体;将复合固体、多糖化合物、磷酸盐缓冲液按质量比0.5:1:1混合,-22℃冷冻12h后,粉碎过120目筛,进行美拉德反应,反应在固相中进行,反应的相对湿度为70%,温度为60℃,pH为7,反应时间为18h,透析,得多肽纳米复合物。
实施例2
(1)将小麦麸皮和二氧化硅按质量比5:1混合,加入液氮研磨过100目筛,得预处理小麦麸皮;将预处理小麦麸皮,用4℃的去离子水冲洗3次,每次12min,然后按料液比1:7加入4℃盐酸盐缓冲液,2℃冷藏14h后,抽真空至32.5kPa,静置14min后,取出,室温下放置4min,超声9次,每次超声10s,两次超声的时间间隔为60s,23℃、11000rpm离心11min,取上清液,加入饱和硫酸铵至沉淀出现,过滤,取沉淀物;将沉淀溶于沉淀质量3.5倍的蒸馏水中,3℃透析10h,得蛋白提取物;
(2)将蛋白提取物和去离子水按质量比1:18.5混合,42℃加入蛋白提取物质量0.012倍的木瓜蛋白酶,反应2h后,置于95℃的水浴中13min,冷却至室温,然后加入氢氧化钠至溶液pH为9,50℃加入蛋白提取物质量0.012倍的碱性蛋白酶,酶解2h后,置于95℃的水浴中13min,4600rpm离心11min,取上清液,-20℃冷冻12h,得多肽;
(3)将多肽、蒸馏水、无水氯化钙按质量比1:31:0.45混合,搅拌均匀后,加入氢氧化钠至溶液pH为7.7,59℃恒温反应69min后,冷却至室温,按质量比0.02:9:1:0.3加入正己烷、去离子水、碳酸钠、吐温-8,碳酸钠和无水氯化钙的质量比为6:1,得混合溶液A,然后向混合溶液A加入混合溶液A体积0.35倍的碳酸钠混合液,碳酸钠混合液中聚乙烯吡咯烷酮、碳酸钠、去离子水的质量比为0.15:1:9,30kHz超声31min,得混合溶液B,然后向混合溶液B加入混合溶液B体积3倍的氯化钙溶液,氯化钙溶液中氯化钙和去离子水的质量比为1:88,50rpm搅拌8h后,静置15min,抽滤,用蒸馏水和无水乙醇交替洗涤7次,于45℃干燥11.5h,得多肽-钙;
(4)将丙酮、冰醋酸、质量分数为36%的盐酸按质量比1:13:2.5混合,60rpm搅拌10min后,加入丙酮质量4倍的2,3-二羟基对苯二甲,继续搅拌46.5h,加入饱和碳酸钠溶液至溶液pH为6.5,萃取,取有机相,45℃、真空度0.03MPa下浓缩3h,层析,得多酚化合物;
(5)按料液比1:20加入小麦麸皮、质量分数3.6%的盐酸,45℃水浴加热3h,取上清液,350rpm、55℃加热66min,得浓缩液;向浓缩液加入浓缩液体积4倍的质量分数为95%乙醇,静置11.5h后,61500rpm离心13min,取沉淀,-25℃冷冻21.5h,得多糖化合物;
(6)将多肽-钙、蒸馏水、多酚化合物按质量比1:18.5:1.3混合,再加入氢氧化钠至溶液pH为9,91℃水浴3.5h后,迅速冷却至室温,-20℃冷冻11h得复合固体;将复合固体、多糖化合物、磷酸盐缓冲液按质量比0.9:1:2.5混合,-20℃冷冻14h后,粉碎过120目筛,进行美拉德反应,反应在固相中进行,反应的相对湿度为74%,温度为65℃,pH为7.5,反应时间为20h,透析,得多肽纳米复合物。
实施例3
(1)将小麦麸皮和二氧化硅按质量比5:1混合,加入液氮研磨过100目筛,得预处理小麦麸皮;将预处理小麦麸皮,用6℃的去离子水冲洗4次,每次15min,然后按料液比1:8加入6℃盐酸盐缓冲液,5℃冷藏17h后,抽真空至35kPa,静置20min后,取出,室温下放置6min,超声10次,每次超声10s,两次超声的时间间隔为60s,25℃、12000rpm离心16min,取上清液,加入饱和硫酸铵至沉淀出现,过滤,取沉淀物;将沉淀溶于沉淀质量5倍的蒸馏水中,5℃透析12h,得蛋白提取物;
(2)将蛋白提取物和去离子水按质量比1:20混合,45℃加入蛋白提取物质量0.02倍的木瓜蛋白酶,反应3h后,置于100℃的水浴中17min,冷却至室温,然后加入氢氧化钠至溶液pH为9.5,55℃加入蛋白提取物质量0.02倍的碱性蛋白酶,酶解3h后,置于100℃的水浴中17min,4700rpm离心14min,取上清液,-18℃冷冻14h,得多肽;
(3)将多肽、蒸馏水、无水氯化钙按质量比1:34:0.6混合,搅拌均匀后,加入氢氧化钠至溶液pH为8,62℃恒温反应77min后,冷却至室温,按质量比0.03:10:1:0.4加入正己烷、去离子水、碳酸钠、吐温-8,碳酸钠和无水氯化钙的质量比为7:1,得混合溶液A,然后向混合溶液A加入混合溶液A体积0.5倍的碳酸钠混合液,碳酸钠混合液中聚乙烯吡咯烷酮、碳酸钠、去离子水的质量比为0.2:1:10,35kHz超声34min,得混合溶液B,然后向混合溶液B加入混合溶液B体积4倍的氯化钙溶液,氯化钙溶液中氯化钙和去离子水的质量比为1:106,60rpm搅拌10h后,静置20min,抽滤,用蒸馏水和无水乙醇交替洗涤8次,于50℃干燥13h,得多肽-钙;
(4)将丙酮、冰醋酸、质量分数为36%的盐酸按质量比1:16:3混合,70rpm搅拌12min后,加入丙酮质量5倍的2,3-二羟基对苯二甲,继续搅拌49h,加入饱和碳酸钠溶液至溶液pH为7,萃取,取有机相,50℃、真空度0.05MPa下浓缩4h,层析,得多酚化合物;
(5)按料液比1:20加入小麦麸皮、质量分数3.6%的盐酸50℃水浴加热4h,取上清液,400rpm、60℃加热72min,得浓缩液;向浓缩液加入浓缩液体积4倍的质量分数为95%乙醇,静置13h后,6300rpm离心17min,取沉淀,-20℃冷冻25h,得多糖化合物;
(6)将多肽-钙、蒸馏水、多酚化合物按质量比1:20:2混合,再加入氢氧化钠至溶液pH为10,95℃水浴5h后,迅速冷却至室温,-18℃冷冻13h得复合固体;将复合固体、多糖化合物、磷酸盐缓冲液按质量比1.3:1:4混合,-18℃冷冻16h后,粉碎过120目筛,进行美拉德反应,反应在固相中进行,反应的相对湿度为79%,温度为70℃,pH为8,反应时间为22h,透析,得多肽纳米复合物。
对比例1
对比例1与实施例2的区别在于步骤(1)的不同,将步骤(1)改为:将小麦麸皮和二氧化硅按质量比5:1混合,加入液氮研磨过100目筛,得预处理小麦麸皮;将预处理小麦麸皮;按料液比1:8加入预处理小麦麸皮、盐酸盐缓冲液,130rpm搅拌6h后,,23℃、11000rpm离心11min,取上清液,加入饱和硫酸铵至沉淀出现,过滤,取沉淀物;将沉淀溶于沉淀质量3.5倍的蒸馏水中,3℃透析10h,得蛋白提取物。其余步骤同实施例2。
对比例2
对比例2与实施例2的区别在于无步骤(3),步骤(6)改为:将多肽、蒸馏水、多酚化合物按质量比1:18.5:1.3混合,再加入氢氧化钠至溶液pH为9,91℃水浴3.5h后,迅速冷却至室温,-20℃冷冻11h得复合固体;将复合固体、多糖化合物、磷酸盐缓冲液按质量比0.9:1:2.5混合,-20℃冷冻14h后,粉碎过120目筛,进行美拉德反应,反应在固相中进行,反应的相对湿度为74%,温度为65℃,pH为7.5,反应时间为20h,透析,得多肽纳米复合物。其余步骤同实施例2。
对比例3
对比例3与实施例2的区别在于无步骤(4),步骤(6)改为:将多肽-钙、多糖化合物、磷酸盐缓冲液按质量比0.9:1:2.5混合,-20℃冷冻14h后,粉碎过120目筛,进行美拉德反应,反应在固相中进行,反应的相对湿度为74%,温度为65℃,pH为7.5,反应时间为20h,透析,得多肽纳米复合物。其余步骤同实施例2。
对比例4
对比例4与实施例2的区别在于无步骤(5),步骤(6)改为:将多肽-钙、蒸馏水、多酚化合物按质量比1:18.5:1.3混合,再加入氢氧化钠至溶液pH为9,91℃水浴3.5h后,迅速冷却至室温,-20℃冷冻11h得多肽纳米复合物。其余步骤同实施例2。
效果例
下表1给出了采用本发明实施例1至3与对比例1至4的多肽纳米复合物的性能分析结果。
表1
从实施例与对比例的硬度值实验数据对比可发现,本发明以小麦麸皮为原料,进行真空处理,增加蛋白含量,有利于提高多肽纳米复合物的抗冻活性;然后进行酶解处理,在碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合作用下,提取出抗冻多肽,其羟基与冷冻汤圆的冰晶棱面结合,使得冰晶原来的生长方向被阻挡,有效抑制重结晶生长;接着进行螯合处理,吸附钙离子,然后在碳酸钠的作用下,形成碳酸钙微球,在多肽表面形成疏水表面,通过疏水作用,抑制冰晶生长,增益多肽纳米复合物的抗冻性;从实施例与对比例的自由基清除率实验数据对比可发现,本发明利用2,3-二羟基对苯二甲醛和丙酮反应,形成多酚化合物,具有自由基清除能力,从而多肽纳米复合物具有抗氧化效果;多酚化合物、小麦麸皮多糖与多肽-钙分别发生美拉德反应,提高自由基清除能力,提高抗氧化酶活性,增益多肽纳米复合物的抗氧化性。
对于本领域技术人员而言,显然本发明不限于上述示范性实施例的细节,而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下,能够以其他的具体形式实现本发明。因此,无论从哪一点来看,均应将实施例看作是示范性的,而且是非限制性的,本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定,因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何标记视为限制所涉及的权利要求。
Claims (10)
1.一种多肽纳米复合物及其制备方法,其特征在于,所述多肽纳米复合物由以下方法制得,将多肽、蒸馏水、无水氯化钙混合,再加入氢氧化钠调节pH,恒温反应一段时间后,冷却至室温,然后加入正己烷、去离子水、碳酸钠、吐温-8,得混合溶液A,然后向混合溶液A加入碳酸钠混合液,得混合溶液B,然后向混合溶液B加入氯化钙溶液,搅拌一段时间,得多肽-钙;将多肽-钙、蒸馏水、多酚化合物混合,再加入氢氧化钠调节pH,水浴加热一段时间后,迅速冷却至室温,冷冻得复合固体;将复合固体、多糖化合物、磷酸盐缓冲液混合,冷冻干燥后,粉碎过筛,进行美拉德反应,透析,得多肽纳米复合物。
2.根据权利要求1所述的一种多肽纳米复合物,其特征在于,所述多肽由以下方法制得,将小麦麸皮和二氧化硅混合,加入液氮研磨过筛,得预处理小麦麸皮;将预处理小麦麸皮用去离子水冲洗,然后加入盐酸盐缓冲液,冷藏后,真空静置一段时间,取出,进行超声、离心,取上清液,加入饱和硫酸铵至沉淀出现,过滤,取沉淀物;将沉淀溶于蒸馏水中,透析,得蛋白提取物;将蛋白提取物和去离子水混合,加入木瓜蛋白酶,酶解、灭酶,冷却至室温,然后加入氢氧化钠调节溶液pH,加入碱性蛋白酶,酶解、灭酶、离心,取上清液,冷冻。
3.根据权利要求1所述的一种多肽纳米复合物,其特征在于,所述多酚化合物由2,3-二羟基对苯二甲醛和丙酮制得。
4.根据权利要求3所述的一种多肽纳米复合物,其特征在于,所述多糖化合物为小麦麸皮多糖。
5.一种多肽纳米复合物的制备方法,其特征在于,包括以下制备步骤:
(1)将预处理小麦麸皮,用去离子水冲洗2~4次,每次10~15min,然后按料液比1:6~1:8加入盐酸盐缓冲液,0~5℃冷藏11~17h后,抽真空至30~35kPa,静置8~20min后,取出,室温下放置2~6min,超声8~10次,每次超声10s,两次超声的时间间隔为60s,20~25℃、10000~12000rpm离心7~16min,取上清液,加入饱和硫酸铵至沉淀出现,过滤,取沉淀物;将沉淀溶于沉淀质量2~5倍的蒸馏水中,2~5℃透析8~12h,得蛋白提取物;
(2)将蛋白提取物和去离子水按质量比1:17~1:20混合,40~45℃加入蛋白提取物质量0.005~0.02倍的木瓜蛋白酶,反应1~3h后,置于90~100℃的水浴中10~17min,冷却至室温,然后加入氢氧化钠至溶液pH为8.5~9.5,45~55℃加入蛋白提取物质量0.005~0.02倍的碱性蛋白酶,酶解1~3h后,置于90~100℃的水浴中10~17min,4500~4700rpm离心8~14min,取上清液,-22~-18℃冷冻10~14h,得多肽;
(3)将多肽、蒸馏水、无水氯化钙按质量比1:28:0.3~1:34:0.6混合,搅拌均匀后,加入氢氧化钠至溶液pH为7.5~8.0,56~62℃恒温反应60~77min后,冷却至室温,按质量比0.01:7:1:0.2~0.03:10:1:0.4加入正己烷、去离子水、碳酸钠、吐温-8,碳酸钠和无水氯化钙的质量比为5:1~7:1,得混合溶液A,然后向混合溶液A加入混合溶液A体积0.2~0.5倍的碳酸钠混合液,25~35kHz超声28~34min,得混合溶液B,然后向混合溶液B加入混合溶液B体积2~4倍的氯化钙溶液,40~60rpm搅拌6~10h后,静置10~20min,抽滤,用蒸馏水和无水乙醇交替洗涤6~8次,于40~50℃干燥10~13h,得多肽-钙;
(4)将多肽-钙、蒸馏水、多酚化合物按质量比1:17:0.5~1:20:2混合,再加入氢氧化钠至溶液pH为8~10,88~95℃水浴2~5h后,迅速冷却至室温,-22~-18℃冷冻9~13h得复合固体;将复合固体、多糖化合物、磷酸盐缓冲液按质量比0.5:1:1~1.3:1:4混合,-22~-18℃冷冻12~16h后,粉碎过120目筛,进行美拉德反应,透析,得多肽纳米复合物。
6.根据权利要求5所述的一种多肽纳米复合物的制备方法,其特征在于,步骤(1)所述预处理小麦麸皮的制备方法为:将小麦麸皮和二氧化硅按质量比5:1混合,加入液氮研磨过100目筛;所述去离子水、盐酸盐缓冲液先预冷至2~6℃。
7.根据权利要求5所述的一种多肽纳米复合物的制备方法,其特征在于,步骤(3)所述碳酸钠混合液为聚乙烯吡咯烷酮、碳酸钠、去离子水按质量比0.1:1:8~0.2:1:10混合;所述氯化钙溶液为氯化钙和去离子水按质量比1:70~1:106混合。
8.根据权利要求5所述的一种多肽纳米复合物的制备方法,其特征在于,步骤(4)所述多酚化合物的制备方法为:将丙酮、冰醋酸、质量分数为36%的盐酸按质量比1:10:2~1:16:3混合,50~70rpm搅拌8~12min后,加入丙酮质量3~5倍的2,3-二羟基对苯二甲,继续搅拌44~49h,加入饱和碳酸钠溶液至溶液pH为6~7,萃取,取有机相,40~50℃、真空度0.01~0.05MPa下浓缩2~4h,层析。
9.根据权利要求5所述的一种多肽纳米复合物的制备方法,其特征在于,步骤(4)所述多糖化合物的制备方法为:按料液比1:20加入小麦麸皮、质量分数3.6%的盐酸,40~50℃水浴加热2~4h,取上清液,300~400rpm、50~60℃加热60~72min,得浓缩液;向浓缩液加入浓缩液体积4倍的质量分数为95%乙醇,静置10~13h后,6000~6300rpm离心9~17min,取沉淀,-30~-20℃冷冻18~25h。
10.根据权利要求5所述的一种多肽纳米复合物的制备方法,其特征在于,步骤(4)所述美拉德反应的条件为:反应在固相中进行,反应的相对湿度为70~79%,温度为60~70℃,pH为7~8,反应时间为18~22h。
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