CN102836416A - 一种水蛭粉的仿生酶解制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种水蛭粉的仿生酶解制备方法，包括以下步骤：（1）水蛭活体冷冻干燥至含水量5%以下，粉碎成粉状；（2）加入水均匀搅拌成浆状，调节pH至1.0～3.0，加入胃蛋白酶于35～45℃保温酶解0.5～4小时，再调节pH至8.0～8.6，加入胰蛋白酶于45～50℃保温酶解7.5～8小时；（3）酶解产物喷雾干燥。本发明将水蛭活体冷冻干燥后磨粉匀浆，然后模拟人体消化过程，对其采用先以胃蛋白酶酶解、再以胰蛋白酶酶解的仿生酶解方法，将水蛭中的大分子蛋白质酶解成水溶性的小分子肽，所得的酶解液同时具有抗凝及纤溶活性，而且较水煎液的活力更强，可更大程度提高生物利用度，降低毒副反应发生率。
Description
技术领域
本发明涉及一种水蛭粉的制备方法。
背景技术
水蛭为贵重药材，一般的匀浆法、水煎煮、水煎醇沉等工艺的得膏率较低，其药材利用率低，提取后的药渣仍有较大活性；水蛭细粉直接口服，只有少部分经胃肠道消化吸收，大部分以原型排出体外，大大浪费药材。水蛭水煎液及其醇溶部分含抗凝活性物质，水煎液及其非醇溶部分含纤溶活性物质。具有很好的药用价值。但是现有的水蛭制品的各种制备方法均存在各种缺陷。
发明内容
本发明所解决的技术问题是提供一种更有效的水蛭粉的仿生酶解制备方法，其得到的水蛭粉仿生酶解产物安全有效。
一种水蛭粉的仿生酶解制备方法，包括以下步骤：
（1）水蛭活体冷冻干燥至含水量5%以下，粉碎成粉状；
（2）加入水均匀搅拌成浆状，调节pH至1.0～3.0，加入胃蛋白酶于35～45℃保温酶解0.5～4小时，再调节pH至8.0～8.6，加入胰蛋白酶于45～50℃保温酶解7.5～8小时；
（3）酶解产物喷雾干燥。
本发明的制备方法，其中所述步骤（1）中冷冻干燥的温度是-20～-25℃。本发明采用水蛭活体直接冷冻干燥得到粉体，保证水蛭体中的营养分子不会分解，保持活性。
本发明的制备方法，其中所述步骤（2）中加水量为8～12倍量。此加水量有利于后续的酶解过程。
本发明的制备方法，其中所述步骤（2）中胃蛋白酶的加入量为水蛭粉重量的1～2%。可以保证水蛭酶解产物中蛋白质大分子的充分水解。
本发明的制备方法，其中所述步骤（2）中胰蛋白酶的加入量为5000NFU·g-1。可以保证水蛭酶解产物中蛋白质大分子的进一步充分水解。
本发明的制备方法，其中所述步骤（2）中加水后先加热至80～100℃并保温10～20分钟后，再冷却至所需温度进行酶解。此步骤为了使水蛭中的大分子蛋白质受热变性，破坏其空间结构，从而利于后续过程中蛋白质的水解，可使后续的酶解过程进行得更充分。
本发明的制备方法，其中所述步骤（3）中喷雾干燥的温度是40～60℃。保证水蛭酶解产物中的小分子多肽的结构和活性。
本发明将水蛭活体冷冻干燥后磨粉匀浆，然后模拟人体消化过程，对其采用先以胃蛋白酶酶解、再以胰蛋白酶酶解的仿生酶解方法，将水蛭中的大分子蛋白质酶解成水溶性的小分子肽，所得的酶解液同时具有抗凝及纤溶活性，而且较水煎液的活力更强，可更大程度提高生物利用度，降低毒副反应发生率。
本发明的方法所得的水蛭酶解产物，将大分子的蛋白直接降解为小分子的肽，与人体经自身胃肠道消化吸收的物质相同，能直接吸收人血，生物利用度高，抗凝血、溶栓作用等生理活性更强。
具体实施方式
为进一步说明本发明，结合以下实施例具体说明：
实施例1：
一种水蛭粉的仿生酶解制备方法，包括以下步骤：
（1）养殖或购买的水蛭活体在-22℃条件下冷冻干燥至含水量5%以下，取500g，粉碎成粉状；
（2）加10倍量水匀浆，用柠檬酸或稀盐酸调节pH至2.0，加入水蛭粉重量2％的胃蛋白酶（酶活为1：3000）于40℃保温酶解2.5小时，再调节pH至8.0，加入胰蛋白酶，酶用量5000NFU·g-1，于50℃保温酶解8小时；
（3）加入适量糊精喷雾干燥，温度40度左右，得成品。
实施例2：
一种水蛭粉的仿生酶解制备方法，包括以下步骤：
（1）养殖或购买的水蛭活体在-22℃条件下冷冻干燥至含水量5%以下，取500g，粉碎成粉状；
（2）加10倍量水匀浆，用柠檬酸或稀盐酸调节pH至1.5，加入水蛭粉重量1.5％的胃蛋白酶（酶活为1：3000）于45℃保温酶解1小时，再调节pH至8.5，加入胰蛋白酶，酶用量5000NFU·g-1，于50℃保温酶解7.5小时；
（3）加入适量糊精喷雾干燥，温度40度左右，得成品。
本发明的制备方法制备得到的水蛭酶解产物，同时具有抗凝及纤溶活性，而且较水煎液的活力更强，可更大程度提高生物利用度，降低毒副反应发生率。本发明分别测定了水蛭粉加水后得到的匀浆液、加水后煎煮得到的水煎煮液、加水后煎煮加乙醇沉淀的水煎醇沉液、以及匀浆后只加胃蛋白酶酶解的酶解液和只加胰蛋白酶酶解的酶解液、与本发明的仿生酶解方法酶解得到的酶解液的抗凝活性与溶纤活性，结果见下表：
表1 抗凝活性、溶纤活性的测定结果
| 组别 | PT/s | 溶纤活性/mm |
| 匀浆液 | 23.15±2.45 | 8.7±2.1 |
| 水煎煮液 | 24.67±2.27 | 10.6±1.6 |
| 水煎醇沉液 | 22.35±3.16 | 10.9±1.6 |
| 胃蛋白酶酶解液 | 31.47±2.53 | 14.9±1.8 |
| 胰蛋白酶酶解液 | 29.65±1.95 | 14.5±2.1 |
| 仿生酶解液 | 45.12±2.56 | 20.9±2.1 |
| 空白对照液 | 15.49±1.85 | 5.1±0.2 |
从上述结果可以看出，本发明的仿生酶解制备方法制得的酶解产物具有更高的抗凝活性与溶纤活性。
以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。
Claims (8)
1.一种水蛭粉的仿生酶解制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）水蛭活体冷冻干燥至含水量5%以下，粉碎成粉状；
（2）加入水均匀搅拌成浆状，调节pH至1.0～3.0，加入胃蛋白酶于35～45℃保温酶解0.5～4小时，再调节pH至8.0～8.6，加入胰蛋白酶于45～50℃保温酶解7.5～8小时；
（3）酶解产物喷雾干燥。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中冷冻干燥的温度是-20～-25℃。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中加水量为8～12倍量。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中胃蛋白酶的加入量为水蛭粉重量的1～2%。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中胰蛋白酶的加入量为5000NFU·g-1。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中加水后先加热至80～100℃并保温10～20分钟后，再冷却至所需温度进行酶解。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中喷雾干燥的温度是40～60℃。
8.权利要求1-7任一项所述的制备方法制备得到的水蛭仿生酶解产物。
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