CN114277078B - 绿豆多肽的提取转化及在化妆品中的应用 - Google Patents
绿豆多肽的提取转化及在化妆品中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114277078B CN114277078B CN202111654603.XA CN202111654603A CN114277078B CN 114277078 B CN114277078 B CN 114277078B CN 202111654603 A CN202111654603 A CN 202111654603A CN 114277078 B CN114277078 B CN 114277078B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mung bean
- polypeptide
- bean polypeptide
- protein
- enzyme
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 97
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 93
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 91
- 240000004922 Vigna radiata Species 0.000 title claims abstract description 83
- 235000010721 Vigna radiata var radiata Nutrition 0.000 title claims abstract description 83
- 235000011469 Vigna radiata var sublobata Nutrition 0.000 title claims abstract description 83
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 title claims description 18
- 230000009466 transformation Effects 0.000 title description 2
- 235000019707 mung bean protein Nutrition 0.000 claims abstract description 42
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims abstract description 34
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 33
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 33
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 20
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims abstract description 14
- 108091005508 Acid proteases Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 13
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 6
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 claims description 2
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 11
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 abstract description 9
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 abstract description 9
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 abstract description 9
- 230000007760 free radical scavenging Effects 0.000 abstract description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 description 23
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 18
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 14
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 11
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 11
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 9
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 9
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 7
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 7
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 7
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 7
- 239000012520 frozen sample Substances 0.000 description 7
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 description 7
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 6
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N biuret Chemical compound NC(=O)NC(N)=O OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 description 3
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 3
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 3
- 238000003916 acid precipitation Methods 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 1-[1-[2-[[5-amino-2-[[1-[5-(diaminomethylideneamino)-2-[[1-[3-(1h-indol-3-yl)-2-[(5-oxopyrrolidine-2-carbonyl)amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbon Chemical compound C1CCC(C(=O)N2C(CCC2)C(O)=O)N1C(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C1CCC(=O)N1 UUUHXMGGBIUAPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 102100030988 Angiotensin-converting enzyme Human genes 0.000 description 2
- 101800000068 Antioxidant peptide Proteins 0.000 description 2
- 101000984728 Chiropsoides quadrigatus Angiotensin-converting enzyme inhibitory peptide Proteins 0.000 description 2
- 108090000882 Peptidyl-Dipeptidase A Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- LJCNRYVRMXRIQR-OLXYHTOASA-L potassium sodium L-tartrate Chemical compound [Na+].[K+].[O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O LJCNRYVRMXRIQR-OLXYHTOASA-L 0.000 description 2
- 229940074439 potassium sodium tartrate Drugs 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 108060006613 prolamin Proteins 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 235000011006 sodium potassium tartrate Nutrition 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 DPPH free radical Chemical class 0.000 description 1
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 101710136524 X polypeptide Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YVNQAIFQFWTPLQ-UHFFFAOYSA-O [4-[[4-(4-ethoxyanilino)phenyl]-[4-[ethyl-[(3-sulfophenyl)methyl]amino]-2-methylphenyl]methylidene]-3-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]-ethyl-[(3-sulfophenyl)methyl]azanium Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C(=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S(O)(=O)=O)C)C=2C(=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S(O)(=O)=O)C)C=C1 YVNQAIFQFWTPLQ-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 244000000005 bacterial plant pathogen Species 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009920 chelation Effects 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011436 enzymatic extraction method Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 1
- 230000009758 senescence Effects 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 235000019640 taste Nutrition 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 1
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Landscapes
- Cosmetics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供了一种绿豆多肽的提取方法，所述的提取方法从绿豆蛋白中提取绿豆多肽，其中包括使用两种酶，一种是木瓜蛋白酶；另一种选自中性蛋白酶或酸性蛋白酶。本发明的提取方法制备绿豆多肽时，产物中多肽含量可达91.21％；多肽得率可达75.49％；制得的绿豆多肽在浓度10mg/mL的时即可达到很好的DPPH自由基清除能力。
Description
技术领域
本发明属于多肽提取方法领域，具体涉及绿豆多肽的提取转化及在化妆品中的应用。
背景技术
绿豆中活性成分充足，目前对绿豆的利用主要是将淀粉简单应用于食品加工，对蛋白和肽的研究较少，肽类原料是化妆品的热点原料，但如今在化妆品领域对绿豆多肽的研究还较少。
绿豆蛋白质含量高，绿豆蛋白质主要是由球蛋白、清蛋白和醇溶蛋白组成，其中80％为球蛋白，有研究对4种绿豆蛋白进行分级提取，发现绿豆中各含量为清蛋白49.1％、球蛋白23.6％、谷蛋白19.42％、醇溶蛋白7.5％。
目前提取绿豆蛋白的方法主要有碱溶酸沉法、热水浸提法、超声波协助提取法、酶法提取等，其中碱溶酸沉法是相对较成熟的方法。
绿豆多肽是绿豆蛋白水解一定程度得到的，介于蛋白和氨基酸的中间产物。目前提取出的绿豆多肽种类主要有抗氧化肽、ACE抑制肽、抗菌肽。其中抗氧化肽作为天然的抗氧化剂在抗氧化方面发挥着不容小视的作用；ACE抑制肽能够调节血压，是医药医学领域的一大福音；抗菌肽能够抑制植物致病菌，对金黄色葡萄球菌也有一定抑制作用。
相对于绿豆蛋白，绿豆多肽具有诸多优点。绿豆蛋白在等电点析出，且受热不稳定，绿豆多肽的溶解性不受温度和pH影响。绿豆蛋白随温度升高而降低，绿豆多肽却随温度升高而增加。当绿豆多肽溶液浓度增加时，黏度变化不明显。绿豆多肽的氨基酸组成与绿豆蛋白的相同，营养性高，易于杯消化吸收；绿豆多肽的抗原性仅为绿豆蛋白的0.1％-1％。此外绿豆多肽中含有可抑制血管紧张素转换酶活性的短肽，绿豆多肽通过抑制血管紧张素转换酶活性来降低血压、调节血糖，对血压正常的人是无害的。绿豆多肽可以和人体中的钙、锌、铜等离子发生螯合反应，在肠道中处溶解状，可促进矿物质吸收；对肥胖症患者的治疗中，采用控制脂肪摄入并适当口服绿豆多肽，可加强脂肪代谢，有减肥效果。绿豆多肽理化性质优于绿豆蛋白，具有更广泛的应用前景。
较为常用的制备绿豆多肽的方法有酶解法、酸解法、微生物发酵法、化学合成法等。酶解法为蛋白酶水解蛋白质，产物性能较稳定，但产物有苦味；酸解法是蛋白质在酸性条件下水解，制备工艺简单，但肽结构会改变，分离提纯难；微生物发酵法通过微生物产生蛋白酶，微生物来源广，成本低，所产蛋白酶不用分离，但可用微生物种类少，周期较长；化学合成法为氨基酸间形成酰胺键，合成多肽，其产物易分离产率高，但该方法耗时长，分子量大的多肽难合成。
酶解法制备绿豆多肽的方法产品性能比较稳定，此法所题绿豆多肽若是应用于食品行业对口感是有影响的，但若应用于化妆品行业，是可以考虑的制备方法。绿豆蛋白的水解度与酶的选择有关，有研究表明蛋白质的水解在最初的1小时内高速进行，酶反应稳定，水解2h后，绿豆蛋白的水解度从高到低依次为碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶。为了提高提取效率，可采用复合酶进行水解，目前较理想的组合有：碱性蛋白酶+中性蛋白酶(水解度可达30.89％)；木瓜蛋白酶+碱性蛋白酶(水解度可达32.85％)。但现有技术中的的水解度仍有进一步优化的空间。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种绿豆多肽的提取方法。通过优化水解酶的种类和配比，提高了绿豆蛋白到绿豆多肽的水解度，使绿豆多肽的应用更为便捷。
一方面，本发明提供了一种绿豆多肽的提取方法。
所述的提取方法从绿豆蛋白中提取绿豆多肽，其中包括使用两种酶，一种是木瓜蛋白酶；另一种选自中性蛋白酶或酸性蛋白酶。
优选地，所述的两种酶的比例为1：1。
优选地，所述的提取方法中各酶的加入量为7000-9000U/g；进一步优选为8000U/g。
所述的提取方法中木瓜蛋白酶和中性蛋白酶同时作用或分前后作用；
或，所述的提取方法中木瓜蛋白酶和酸性蛋白酶同时作用或分前后作用。
优选地，所述的木瓜蛋白酶在中性蛋白酶之前使用；
或，优选地，所述的木瓜蛋白酶在酸性蛋白酶之前使用。
优选地，所述的提取方法中包括以下步骤：
(1)提取制备绿豆蛋白；
(2)蛋白酶水解绿豆蛋白。
另一方面，本发明提供了一种绿豆多肽。
所述的绿豆多肽通过前述的提取方法制备。
再一方面，本发明提供了前述的提取方法在制备化妆品中的应用。
所述的应用为通过前述的提取方法制备绿豆多肽以添加至化妆品中。
又一方面，本发明提供了前述的绿豆多肽制备在化妆品中的应用。
所述的应用为向化妆品中添加绿豆多肽。
又一方面，本发明提供了一种抗氧化和/或抗衰老的化妆品。
所述的化妆品中包括前述的绿豆多肽。
所述的绿豆多肽在化妆品中的含量为1.0-5.0％(重量比)。
或，所述的绿豆多肽的含量为1-50mg/mL。
所述的化妆品中还包括载体和赋形剂。
所述的化妆品的类型包括但不限于护肤品、彩妆。
所述的护肤品的类型包括但不限于：爽肤水、乳液、精华、面霜、眼霜、面膜、保湿喷雾。
所述的彩妆的类型包括但不限于：粉底液、粉膏、粉霜、妆前乳。
本发明的有益效果：
本发明的提取方法制备绿豆多肽时，产物中多肽含量可达91.21％；多肽得率可达75.49％；制得的绿豆多肽在浓度10mg/mL的时即可达到很好的DPPH自由基清除能力。
附图说明
图1为绿豆多肽清对DPPH清除率结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
基础实验例一种绿豆蛋白的制备方法
为了制备绿豆多肽并研究其价值与功效，先以绿豆为原料制备绿豆蛋白再酶解蛋白制备肽。制备绿豆蛋白的方法为碱溶酸沉法，实验条件参照已有文献的最佳条件进行提取制备，意在提取较高含量的绿豆蛋白；对所提绿豆蛋白用福林酚法进行含量测定，验证绿豆中蛋白含量是比较高的，为制备绿豆多肽提供原料基础。
本基础实验例中牛血清蛋白购自国药集团化学试剂有限公司。无水碳酸钠、氢氧化钠、酒石酸钾钠、硫酸铜为分析纯。酶标仪为infinite M200 PRO。粉碎机(800A)；筛子(50目)；冻干机(FD-1A-50)；离心机(TG16G)；pH计(phs-25-3E)。
(1)绿豆蛋白的制备
绿豆粉碎过50目筛称取8克绿豆粉，按1：15加入蒸馏水搅拌并用NaOH(1mol/L)调节pH为9.0，40℃水浴保温超声20min，冷却至室温后离心10min(4000r/min)，离心后的上清液用HCl(1mol/L)调节pH至4.5，离心10min(4000r/min)弃上清，收集沉淀反复水洗若干次(每次加去离子水后用涡旋震荡后离心，反复水洗5次以上)，加少量蒸馏水复溶置于-80℃冰箱中冷冻5h，再将预冻后的样品移入真空冷冻干燥设备中，腔内压强50Pa，低温-79℃，连续干燥12h，冻干后得绿豆蛋白冻干粉备用。
提取得到绿豆蛋白冻干粉，得率为13.9±0.1％。
(2)绿豆蛋白含量测定(考马斯亮蓝法)
a.溶液配置
考马斯亮蓝溶液：称取10mg考马斯亮蓝G-250溶于5mL 95％的乙醇溶液，转移至100mL容量瓶中，向容量瓶中加入10mL 85％的磷酸水溶液，用去离子水定容、混匀备用。
牛血清白蛋白溶液：称取10mg牛血清白蛋白置于10mL容量瓶中，用pH为9.0的去离子水定容，得1mg/mL的蛋白溶液。
样品溶液：称取1mg绿豆蛋白冻干粉，用1mLpH为9.0的去离子水将其溶解备用。
b.构建标准曲线：取五支试管，分别加入0、50、100、150、200μL牛血清白蛋白溶液(1mg/mL)，随后用pH为9.0的去离子水将体积补至1mL，混匀；向试管中加入5mL考马斯亮蓝溶液，5min后在595nm处测定吸光度；以浓度和吸光度分别为横纵坐标绘制标准曲线。
c.参照b中的方法测量绿豆蛋白样品在595nm处的吸光度，计算可得绿豆蛋白含量，即绿豆蛋白含量为90.2±2.5％。
实施例1一种绿豆多肽的制备方法
采用基础实验例1制备的绿豆蛋白进行绿豆多肽的制备。
制备方法如下：
(1)称取自制绿豆蛋白冻干粉若干，加入去离子水使底物浓度为4％(质量体积比)，调节pH＝7.5，放入50℃水浴锅，当温度达到50℃后加入木瓜蛋白酶，加酶量8000U/g，在此条件下酶解3h后灭酶15min，冷却至室温，离心得上清、置于-80℃冰箱中冷冻5h，再将预冻后的样品移入真空冷冻干燥设备中，腔内压强50Pa，低温-79℃，连续干燥12h，即得样品绿豆多肽1。
(2)称取自制绿豆蛋白冻干粉若干，加入去离子水使底物浓度为4％(质量体积比)，调节pH＝3.0，放入50℃水浴锅，当温度达到50℃后加入酸性蛋白酶，加酶量8000U/g，在此条件下酶解3h后灭酶15min，冷却至室温，离心得上清、置于-80℃冰箱中冷冻5h，再将预冻后的样品移入真空冷冻干燥设备中，腔内压强50Pa，低温-79℃，连续干燥12h，即得样品绿豆多肽2。
(3)称取自制绿豆蛋白冻干粉若干，加入去离子水使底物浓度为4％(质量体积比)，调节pH＝7.5，放入50℃水浴锅，当温度达到50℃后加入中性蛋白酶，加酶量8000U/g，在此条件下酶解3h后灭酶15min，冷却至室温，离心得上清，置于-80℃冰箱中冷冻5h，再将预冻后的样品移入真空冷冻干燥设备中，腔内压强50Pa，低温-79℃，连续干燥12h，即得样品绿豆多肽3。
(4)称取自制绿豆蛋白冻干粉若干，加入去离子水使底物浓度为4％(质量体积比)，调节pH＝7.5，放入50℃水浴锅，当温度达到50℃后加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶各8000U/g，在此条件下酶解3h后灭酶15min，冷却至室温，离心得上清，置于-80℃冰箱中冷冻5h，再将预冻后的样品移入真空冷冻干燥设备中，腔内压强50Pa，低温-79℃，连续干燥12h，即得样品绿豆多肽4。
(5)称取自制绿豆蛋白冻干粉若干，加入去离子水使底物浓度为4％(质量体积比)，调节pH＝7.5，放入50℃水浴锅，当温度达到50℃后加入木瓜蛋白酶，加酶量8000U/g，在此条件下酶解3h后灭酶15min冷却至室温；调节pH＝7.5，放入50℃水浴锅，当温度达到后加入中性蛋白酶，加酶量8000U/g，在此条件下酶解3h后灭酶15min冷却至室温，离心得上清，置于-80℃冰箱中冷冻5h，再将预冻后的样品移入真空冷冻干燥设备中，腔内压强50Pa，低温-79℃，连续干燥12h，即得样品绿豆多肽5。
(6)称取自制绿豆蛋白冻干粉若干，加入去离子水使底物浓度为4％(质量体积比)，调节pH＝7.5，放入50℃水浴锅，当温度达到50℃后加入木瓜蛋白酶，加酶量8000U/g，在此条件下酶解3h后灭酶15min冷却至室温；调节pH＝3.0，放入50℃水浴锅，当温度达到50℃后加入酸性蛋白酶，加酶量8000U/g，在此条件下酶解3h后灭酶15min冷却至室温，离心得上清，置于-80℃冰箱中冷冻5h，再将预冻后的样品移入真空冷冻干燥设备中，腔内压强50Pa，低温-79℃，连续干燥12h，即得样品绿豆多肽6。
实施例2绿豆多肽含量检测
对实施例1制备的绿豆多肽进行含量检测，具体步骤如下：
a.试剂的准备：
双缩脲试剂：称取0.15g硫酸铜、0.6g酒石酸钾钠溶于50mL去离子水中得A；称取3g氢氧化钠固体溶于30mL去离子水中得B；将A、B混合即得双缩脲试剂，备用。
牛血清白蛋白溶液：称取100mg牛血清白蛋白置于10mL容量瓶中，用去离子水定容，得10mg/mL的蛋白溶液。
b.标准曲线的建立：
取六支试管，分别加入0、100、300、500、700、900μL牛血清白蛋白溶液(1mg/mL)，随后用去离子水将体积补至1mL，混匀；向试管中加入4mL双缩脲试剂，30min后在540nm处测定吸光度；以浓度和吸光度分别为横纵坐标绘制标准曲线。
c.样品测定：
在10mg/mL的绿豆多肽水溶液中加入等体积10％的三氯乙酸溶液，震荡均匀，离心后取上清液作为待测样品溶液；取1mL待测样品溶液于试管中，加入4mL双缩脲试剂，30min后在540nm处测定吸光度，将吸光度代入标准曲线即可计算样品中多肽含量。
绿豆多肽得率的计算：
多肽得率(％)＝(冻干后固体质量×多肽含量)/绿豆蛋白质量；
结果分析：
结果发现通过复合酶水解的多肽含量和得率均高于单酶水解。
实施例3绿豆多肽的功效评价
对实施例1制备的6种绿豆多肽进行抗氧化性检测，通过开展DPPH清除自由基实验完成，以探求本申请提供的绿豆多肽作为延缓衰老原料的用途。
本实施例中试剂或仪器来源如下：
(1)抗氧化测评
先称取2mg DPPH，溶于25mL无水乙醇配成DPPH溶液(注意现配现用，4h内使用，且要在0-4℃下避光保存)。
再将待测绿豆多肽样品用去离子水分别配制浓度为50mg/mL、10mg/mL、5mg/mL、1mg/mL的待测样品溶液。
按照以下步骤进行实验：
分别取1mL的待测样品溶液与1mL的DPPH溶液混匀作A管；
取1mL的去离子水与1mL的DPPH溶液混匀作B管；
取1mL的去离子水与1mL的待测液混匀作C管；
反应30min后，在517nm下测A、B、C管吸光度值。
按照下面的公式计算样品的清除率：
(2)抗氧化性结果与分析：
六种不同条件制备的绿豆多肽在1-50mg/mL的浓度范围内均具有良好的DPPH自由基清除能力，见图1。其中绿豆多肽6在浓度10mg/mL即可达到其他绿豆多肽50mg/mL时的清除能力，表明绿豆多肽6具有更好的DPPH自由基清除能力。
由以上数据可知，复合酶水解制备绿豆多肽粉末的得率和多肽含量明显高于单酶水解；制备的绿豆多肽均具有良好的清除DPPH自由基能力，且绿豆多肽粉末具有良好的水溶性，可以广泛应用于化妆品中作为抗氧化功效原料。
对比例1-2
参照实施例1中绿豆多肽5的制备方法设置对比例，具体条件和结果如下：
在底物充足而又不受其他因素影响情况下，随着蛋白酶添加量的增大，绿豆蛋白被分解为小分子多肽，多肽含量及得率增加；但当蛋白酶添加量过大时，底物达到酶饱和，进一步添加酶多肽含量及得率变化较小，本申请提供的双酶技术方案在酶的添加量在7000-9000U/g，效果最好。
Claims (4)
1.一种绿豆多肽的提取方法，其特征在于，所述的提取方法从绿豆蛋白中提取绿豆多肽，其中包括使用两种酶，一种是木瓜蛋白酶；另一种是酸性蛋白酶；所述的两种酶的比例为1：1；所述的提取方法中各酶的加入量为8000U/g；所述的木瓜蛋白酶在酸性蛋白酶之前使用。
2.一种绿豆多肽，其特征在于，通过权利要求1所述的提取方法制备。
3.权利要求1所述的提取方法和/或权利要求2所述的绿豆多肽在制备化妆品中的应用。
4.一种抗氧化和/或抗衰老的化妆品，其特征在于，所述的化妆品中包括权利要求2所述的绿豆多肽。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111654603.XA CN114277078B (zh) | 2021-12-30 | 2021-12-30 | 绿豆多肽的提取转化及在化妆品中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111654603.XA CN114277078B (zh) | 2021-12-30 | 2021-12-30 | 绿豆多肽的提取转化及在化妆品中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114277078A CN114277078A (zh) | 2022-04-05 |
| CN114277078B true CN114277078B (zh) | 2024-02-27 |
Family
ID=80879139
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111654603.XA Active CN114277078B (zh) | 2021-12-30 | 2021-12-30 | 绿豆多肽的提取转化及在化妆品中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114277078B (zh) |
Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005097269A (ja) * | 2003-08-18 | 2005-04-14 | Nagase Chemtex Corp | アンジオテンシン変換酵素阻害活性及び活性酸素除去活性を有する緑豆蛋白分解物含有組成物 |
| CN101979655A (zh) * | 2010-11-11 | 2011-02-23 | 湖北远成药业有限公司 | 一种酶法生产绿豆肽的方法 |
| JP2013112683A (ja) * | 2011-11-25 | 2013-06-10 | Amorepacific Corp | 大豆から低分子ペプチド抽出物を分離する方法及び得られた抽出物を含有する化粧料組成物 |
| CN104531816A (zh) * | 2015-01-04 | 2015-04-22 | 黑龙江八一农垦大学 | 酶法联产绿豆ace抑制肽和免疫活性肽的工艺方法 |
| CN108813615A (zh) * | 2018-07-05 | 2018-11-16 | 中国农业科学院农产品加工研究所 | 具有抗氧化活性的绿豆提取液的制备方法 |
| CN109845929A (zh) * | 2019-01-23 | 2019-06-07 | 辽宁科技大学 | 一种绿豆抗氧化多肽饮料及其制备方法 |
| CN110577976A (zh) * | 2018-10-09 | 2019-12-17 | 杏辉天力（杭州）药业有限公司 | 一种绿豆低聚肽粉及其制备方法 |
| JP2020145927A (ja) * | 2019-03-11 | 2020-09-17 | 味の素株式会社 | プロテアーゼを用いた豆腐の製造方法 |
| CN111670997A (zh) * | 2020-06-26 | 2020-09-18 | 润科生物工程（福建）有限公司 | 增强免疫复合蛋白肽酶解液的制备方法、增强免疫复合蛋白肽饮品及其制备方法 |
| CN112877392A (zh) * | 2021-04-13 | 2021-06-01 | 刘尚顺 | 一种绿豆蛋白肽制取方法 |
| CN113197316A (zh) * | 2021-05-21 | 2021-08-03 | 江南大学 | 一种双功能型豆源多肽及其制备方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102112106B (zh) * | 2008-07-31 | 2013-03-20 | 高丽雅娜化妆品股份有限公司 | 包含经发酵和酶处理的绿豆种子提取物、用于皮肤抗老化的化妆品组合物 |
| US10501509B2 (en) * | 2016-04-11 | 2019-12-10 | Zhejiang Academy Of Agricultural Sciences | Method of preparing functional peptides from germinated beans |
| CN109797183B (zh) * | 2019-02-28 | 2020-12-29 | 江南大学 | 一种具有抗油脂氧化功能的活性肽及其制备方法和应用 |
-
2021
- 2021-12-30 CN CN202111654603.XA patent/CN114277078B/zh active Active
Patent Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005097269A (ja) * | 2003-08-18 | 2005-04-14 | Nagase Chemtex Corp | アンジオテンシン変換酵素阻害活性及び活性酸素除去活性を有する緑豆蛋白分解物含有組成物 |
| CN101979655A (zh) * | 2010-11-11 | 2011-02-23 | 湖北远成药业有限公司 | 一种酶法生产绿豆肽的方法 |
| JP2013112683A (ja) * | 2011-11-25 | 2013-06-10 | Amorepacific Corp | 大豆から低分子ペプチド抽出物を分離する方法及び得られた抽出物を含有する化粧料組成物 |
| CN104531816A (zh) * | 2015-01-04 | 2015-04-22 | 黑龙江八一农垦大学 | 酶法联产绿豆ace抑制肽和免疫活性肽的工艺方法 |
| CN108813615A (zh) * | 2018-07-05 | 2018-11-16 | 中国农业科学院农产品加工研究所 | 具有抗氧化活性的绿豆提取液的制备方法 |
| CN110577976A (zh) * | 2018-10-09 | 2019-12-17 | 杏辉天力（杭州）药业有限公司 | 一种绿豆低聚肽粉及其制备方法 |
| CN109845929A (zh) * | 2019-01-23 | 2019-06-07 | 辽宁科技大学 | 一种绿豆抗氧化多肽饮料及其制备方法 |
| JP2020145927A (ja) * | 2019-03-11 | 2020-09-17 | 味の素株式会社 | プロテアーゼを用いた豆腐の製造方法 |
| CN111670997A (zh) * | 2020-06-26 | 2020-09-18 | 润科生物工程（福建）有限公司 | 增强免疫复合蛋白肽酶解液的制备方法、增强免疫复合蛋白肽饮品及其制备方法 |
| CN112877392A (zh) * | 2021-04-13 | 2021-06-01 | 刘尚顺 | 一种绿豆蛋白肽制取方法 |
| CN113197316A (zh) * | 2021-05-21 | 2021-08-03 | 江南大学 | 一种双功能型豆源多肽及其制备方法 |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| Anti-allergic Effects and Related Active Constituents of Mung Bean (Vignaradiatus Linn) Sprouts;Li Li等;《Food Science and Biotechnology》;20160430;第25卷(第2期);第553-559页 * |
| 吴卓夫等.木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶水解制备绿豆多肽.《吉林大学学报（理学版）》.2018,第第56卷卷(第第4期期),第1029-1034页. * |
| 复合酶协同水解法制备绿豆抗氧化多肽;马诗文等;《食品工业科技》(第15期);第161-183页 * |
| 孙丽丽等.绿豆萌芽中生物活性成分及 其制备工艺研究进展.《北方园艺》.2013,(第第1期期),第194-200页. * |
| 张玉霞等.胰蛋白酶水解制备绿豆分离蛋白多肽的工艺.《食品工业》.2021,第第42卷卷(第第5期期),第54-58页. * |
| 李彤彤等.中性蛋白酶水解绿豆蛋白制备多肽的研究.《粮食与油脂》.2021,第第34卷卷(第第4期期),第79-86页. * |
| 绿豆萌芽中生物活性成分及其制备工艺研究进展;孙丽丽等;《北方园艺》(第1期);第194-200页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114277078A (zh) | 2022-04-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Li et al. | Optimization of ACE inhibitory peptides from black soybean by microwave-assisted enzymatic method and study on its stability | |
| CN102316886B (zh) | 抗皮肤老化肽 | |
| CN100999752B (zh) | 一种源自胶原蛋白的抗氧化肽混合物及其制备方法和用途 | |
| US20110077382A1 (en) | Collagen Peptide Having Immune-enhancing Activity from Cyanea Nozakii and Preparation Method and Uses Thereof | |
| CN100467030C (zh) | 厚壳贻贝的提取物、制造方法及其用途 | |
| CN102379359B (zh) | 酶法水解酪蛋白的方法及水解产物 | |
| KR101822752B1 (ko) | 녹용의 고생리활성성분을 함유한 녹용효소가수분해추출물의 제조방법 및 녹용효소가수분해추출물 | |
| AU2021103416A4 (en) | Polypeptide, composition, compound preparation for lowering uric acid, preparation method and use thereof | |
| Chen et al. | Preparation, characterization and the in vitro bile salts binding capacity of celery seed protein hydrolysates via the fermentation using B. subtilis | |
| CN114032273B (zh) | 一种多功能西洋参水解肽及其制备方法和应用 | |
| CN111378712B (zh) | 可食用酵母多肽及其制备方法和应用 | |
| CN110819674A (zh) | 一种复合蛋白酶酶解核桃粕制备降血压肽的方法 | |
| CN114277078B (zh) | 绿豆多肽的提取转化及在化妆品中的应用 | |
| CN106074207B (zh) | 一种含燕麦蛋白活性肽的化妆品添加剂 | |
| CN112795611A (zh) | 一种不可溶性蛋白制备核桃蛋白多肽的方法 | |
| US20220248737A1 (en) | Oyster peptide with effect of improving sexual function and preparation method thereof | |
| CN115317432B (zh) | 一种包含乳双歧杆菌发酵产物的面膜 | |
| CN112654362A (zh) | 用于优化营养补充的β-二肽和氨基酸的组合 | |
| CN110105466A (zh) | 基于酵母自溶结合机械化学法提取酵母β-葡聚糖的方法 | |
| CN110812379A (zh) | 红龙果胚珠萃取物用于制备推迟皮肤老化的组合物的用途 | |
| CN110669127A (zh) | 一种新型钙螯合肽及其制备方法和应用 | |
| CN111778305B (zh) | 一种用于提高免疫力的脾多肽组合物及口服液 | |
| CN115820779B (zh) | 一种鱼皮胶原蛋白及其制备方法 | |
| CN112176015B (zh) | 一种海参活性肽高效仿生制备方法 | |
| CN106046142A (zh) | 一种从猪肝中分离蛋白的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |