CN112654362A - 用于优化营养补充的β-二肽和氨基酸的组合 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种营养补充剂，其包含一种或多种含β‑天冬氨酰的二肽、其低聚物或其盐的组合，其中每种β‑二肽包含作为第一氨基酸残基的β‑天冬氨酰和作为第二氨基酸残基的选自精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸和瓜氨酸的氨基酸，以及各自的第二氨基酸或其盐。本发明还涉及所述组合用于营养补充的应用，以及用于氨基酸治疗的组合。

Description

用于优化营养补充的β-二肽和氨基酸的组合
本发明涉及一种营养补充剂，其包含一种或多种含β-天冬氨酰的二肽、其低聚物或其盐的组合，其中每种β-二肽包含作为第一氨基酸残基的β-天冬氨酰和作为第二氨基酸残基的选自精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸和瓜氨酸的氨基酸，以及各自的第二氨基酸或其盐。本发明还涉及所述组合用于营养补充的应用，以及用于氨基酸治疗的组合。
发明背景
氨基酸的补充普遍用于处于精神或身体压力下的人或用于某些受试者，如锻炼运动员和健美运动员，但剂量通常高于生理可利用的限度。例如，制造商通常建议氨基酸精氨酸的剂量为每天6-12克。然而，人体一次能吸收多少精氨酸是有自然限制的。人类使用数据表明，血液中的精氨酸水平不会超过口服2.5g精氨酸的水平。例如，摄入5克精氨酸与2.5克精氨酸导致相同的血液水平。此外，大量精氨酸会导致胃肠道痉挛或腹泻等副作用。目前可用的口服精氨酸补充剂有两个局限性:第一，增加精氨酸水平很困难；由于饱和问题和与大量精氨酸摄入相关的负面副作用，增加身体可用的精氨酸(例如在高强度锻炼阶段)在实践中很难实现。第二，频繁给药不方便；锻炼者需要每天服用几次精氨酸，以获得制造商推荐的每日剂量(每天4×1.5g或更高)。
另一方面，WO2009/150252公开了β-二肽，例如β-Asp-Arg是一种潜在的含氨基酸和精氨酸的补充剂，其可通过酶消化蓝藻素获得。然而，WO2009/150252没有提供任何关于上述氨基酸如精氨酸的摄取限制的解决方案。
此外，从WO2017/174398、WO2017/068149和WO2017/162879中已知，β-L-天冬氨酰二肽与游离氨基酸的组合及其在营养或化妆品组合物中的用途，其中所述β-L-天冬氨酰二肽第二个氨基酸残基选自精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、谷氨酸、瓜氨酸和刀豆氨酸。同样，在所述参考文献中没有提及氨基酸如精氨酸的摄取限制，因为游离氨基酸的选择与β-L-天冬氨酰二肽的第二个氨基酸无关。
发明简述
现已发现，某些具有精氨酸或其结构相关衍生物β-L-aspartyl二肽，特别是从WO2009/150252中已知的那些，例如瓜氨酸或鸟氨酸作为结合的第二氨基酸残基，其与各自分别的(单个)氨基酸精氨酸、瓜氨酸和鸟氨酸结合，确实提供了对这些氨基酸的增强和延长的摄取。据信，这种效应是由β-二肽相对于单个氨基酸的不同摄取机制引起的(两种不同的特定摄取途径)。同样，在分别摄取两种成分(二肽和氨基酸)后，每种成分都表现出不同的生理行为；除了组合物的游离氨基酸组分之外，二肽组分对参与其组成氨基酸代谢的血浆酶具有抗性(这种效应被认为是由于二肽的β-肽键)。因此，两种组分的组合表现为一种理想的组合物/方法，用于提供其组成氨基酸的短期和广泛的可用性(单一氨基酸)，以及长期和靶向递送(通过所述二肽)。因此，本发明提供：
(1)一种营养补充剂，其包含一种组合，所述组合由：
一种或多种含β-天冬氨酰的二肽、其低聚物或其盐，其中每个β-二肽包含作为第一氨基酸残基的β-天冬氨酰残基，其结合到选自精氨酸、鸟氨酸和瓜氨酸的第二氨基酸残基，
以及分别的单独的(以下也称为“单一”或“游离”)第二氨基酸或其盐组成；
(2)在上述(1)中定义的营养补充剂的一个优选实施方案中，所述组合包括：二肽β-L-天冬氨酰-L-精氨酸和，游离L-精氨酸或其盐；或，二肽β-L-天冬氨酰-L-精氨酸和β-L-天冬氨酰-L-赖氨酸，和游离L-精氨酸或其盐，以及任选的游离赖氨酸或其盐；
(3)一种用于氨基酸治疗的上述(1)或(2)中定义的组合；
(4)上述(1)或(2)中定义的组合作为氨基酸补充剂，用于人类营养和运动营养的用途；和
(5)一种氨基酸治疗或补充的方法，其包括将上述(1)或(2)中定义的组合应用于需要所述治疗或补充的受试者。
附图简述
图1:口服给药2.5g(Δ)或5g(·)二肽后全血中的浓度。误差线代表平均值的标准误差。
图2:口服给药2.5g(Δ)或5g(·)图1所示的二肽后全血中的浓度曲线下的面积。
图3:口服给药2.5g(Δ)或5g(·)后全血中单一氨基酸组分(此处为精氨酸)的浓度。误差线代表平均值的标准误差。
图4:口服给药每种组分2.5g的组合后全血中二肽组分(Δ)和氨基酸组分(·)的浓度。误差线代表平均值的标准误差。
图5:精氨酸酶控制反应(摩尔浓度％)。
图6:精氨酸酶水解游离精氨酸和二肽(浓度百分比)。
图7:用不同蛋白酶处理二肽24小时(浓度百分比)。
图8:在37℃，4小时的时间尺度下，牛肝提取物切割二肽(·)并释放天冬氨酸(Δ)。
发明详述
本发明方面(1)的组合的β-二肽或β-二肽低聚物通过选择性水解蓝藻素(也缩写为CGP，蓝藻素颗粒肽，Cyanophycin Granule Peptide)或类蓝藻素聚合物获得。在自然界中，除了几种异养细菌之外，大多数蓝细菌物种(蓝绿藻)积累多肽CGP作为碳和氮的储备材料。CGP在细菌的早期稳定生长期积累，主要由两种氨基酸组成，即天冬氨酸和精氨酸。在结构上类似于精氨酸如赖氨酸、鸟氨酸、谷氨酸、瓜氨酸和刀豆氨酸的一种或多种氨基酸可根据环境/培养条件部分取代CGP的精氨酸残基。
与化学合成的二肽相比，CGP二肽是以生物技术和环境友好的方式从生物物质中产生的天然和立体特异性(结构均一)物质。CGP二肽的生产还需要更少的技术消耗和精力、更少的时间和显著更少的资金投入。由于生产过程既不使用保护基团，也不使用有害或对环境不安全的溶剂，因此能够始终确保这些二肽的生物相容性(Sallam et al.2009.AEM75:29-38)。
可通过降解/水解获得的这种CGPβ-二肽组合物可以由单一类型的β-二肽、不同的β-二肽的混合物、单一类型的β-二肽低聚物或不同类型的β-二肽低聚物的混合物组成。然而，优选地，所述β-二肽包含选自天冬氨酸、精氨酸、赖氨酸和在CGP或类CGP聚合物中存在的其他氨基酸残基的氨基酸残基。特别优选地，所述β-二肽为β-L-天冬氨酰-L-精氨酸。
用于CGP降解的合适CGPase(CGP酶)是来自P.alcaligenes的CGPase，特别优选来自P.alcaligenes菌株DIP1。所述CGPASE：(i)具有45kDa的分子量，50℃的最适温度和7-8.5的优选pH范围并将CGP降解为β-Asp-Arg；和/或(ii)是能够将CGP或类CGP聚合物切割成二肽的已在DSMZ保藏的P.alcaligenes DIP1 CGPASECphEal，作为DSM 21533，或者其突变体、衍生物或片段。
上述天然CGPase的突变体、衍生物或片段包括：片段(具有至少50个连续的天然序列氨基酸残基，优选N-和/或C-末端截断产物，其中去除多达50个末端氨基酸残基)、衍生物(尤其是与功能蛋白和肽的融合产物，例如分泌肽，前导序列等，以及与化学部分，例如PEG，醇，胺等的反应产物)和突变体(尤其是添加、取代、反转和缺失突变体，在氨基酸基础上与天然酶具有至少80％、优选至少90％、最优选至少95％的序列同一性，或其中添加、取代、反转和/或缺失1至20、优选1至10、连续或分离的氨基酸残基；对于取代突变体，尤其优选保守替换)，然而，前提是所述修饰的CGPase具有天然CGPase的酶活性。
可在提供CGP或类CGP聚合物制备的步骤之前进行降解过程，即通过培养原核或真核细胞系。生产细胞系可以是能够产生CGP或类CGP聚合物的任何细胞系。优选地，所述生产细胞系选自大肠埃希氏杆菌(Escherichia coli)、罗尔斯通氏菌(Ralstonia eutropha)、巴氏不动杆菌(Acinetobacter bayly)、谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)、酵母菌株和植物生物质。特别优选的生产细胞系为罗尔斯通氏菌(Ralstonia eutropha)H16–PHB–4–Δeda(pBBR1MCS–2:：cphA6308/edaH16)和E.coli DH1(pMa/c5–914:：cphAPC6803)。
上述过程还可包括分离、纯化和/或化学修饰通过培养生产细胞系获得的CGP产物的步骤。这种分离、纯化、化学修饰和分开可通过本领域中已建立的方法来实现。
然而，优选地，通过培养所述生产细胞系获得的CGP产物直接(即不经分离或纯化)经受CGPase的降解。
另一方面，降解产物可经纯化和/或化学修饰。同样，此类纯化、分离或化学修饰可通过本领域中已建立的方法来实现。特别地，其包括将β-Asp-Arg中的精氨酸残基碱性水解为瓜氨酸和鸟氨酸，以得到β-Asp-Cit和β-Asp-Orn，如下面的实施例2中所述。
在方面(1)的组合中，一种或多种β-二肽中的每一个包含作为第一氨基酸残基的β-L-天冬氨酸，其共价结合到选自精氨酸、鸟氨酸和瓜氨酸的第二氨基酸残基。此外，所述组合可包含结构相似的β-二肽，其中所述第二氨基酸残基选自赖氨酸或刀豆氨酸。这些β-二肽中的任一个，所述第二个氨基酸残基可以为L-构型或D-构型。因此，所述二肽可具有式I的结构：
(β-L-天冬氨酰-R)，
并且所述二肽低聚物可具有式II的结构：
(β-L-天冬氨酰-R)n，
其中R独立地选自本文之前定义的氨基酸残基，并且n为2至150，优选2至30，最优选2至10的整数。
方面(1)的组合可以进一步包含如上所述的两个或更多个共价结合在一起的二肽，并且其中每个二肽的结合的第二氨基酸残基独立地选择，优选选自精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、瓜氨酸和刀豆氨酸。所述第二氨基酸残基最优选为精氨酸或赖氨酸。在另一个实施方案中，一种或多种β-二肽被化学修饰。这种化学修饰包括磷酸化、法尼基化、泛素化、糖基化、乙酰化、甲酰化、酰胺化、SUMO化(sumoylatio)、生物素化、N-酰化、酯化和环化。
最后，将两种组分β-天冬氨酰二肽和氨基酸组合以获得所需的最终组合。此步骤可以通过将粉末形式的两种组分一起研磨来进行，例如通过标准的“球磨碾磨”。两种组分的所得组合是盐还是掺合物(混合物)或两种形式的混合取决于所述的两种组分之间的比例和进行此步骤期间的可用湿度。如果需要液体形式的最终组合，则两种组分都应通过共同溶解在合适的液相中结合，例如水。根据本发明的组合的剂型不受限制。
在一个优选实施方案中，方面(1)和(2)的营养补充剂的日常剂量包括，0.01至25gβ-二肽、其低聚物或其盐以及0.01至25g的游离碱性氨基酸或其盐，优选1至15g的β-二肽、其低聚物或其盐以及1至15g游离碱性氨基酸或其盐，最优选2至5g wt.％的β-二肽寡聚物或其盐以及2至5g或2至3g游离碱性氨基酸或其盐。在另一优选的实施方案中，方面(1)和(2)的营养补充剂的组合，其β-二肽或其盐：组合中的氨基酸的摩尔比分别包含，99：1至1：99，优选3：1至1：3的比例，并且最优选的摩尔比为约1:1。
所述β-二肽的低聚物包括同聚体(即由一个β-二肽组成)和异聚体(即由两个或更多个不同的β-二肽组成)结构，其中β-二肽单元彼此共价连接。
上述β-二肽产物在几种条件下高度稳定，适用于与常规用于营养补充剂的可接受化合物混合。
方面(1)和(2)的产物因此可以进一步包含一种或多种游离氨基酸或其盐，包括但不限于谷氨酰胺、组氨酸、酪氨酸、BCAA或色氨酸。所述产物还可以包含一种或多种常见的营养成分，包括但不限于肌酸、乳清蛋白、牛磺酸、苏打胺(Sustamine)或肌肽。
本发明方面(1)和(2)的营养补充剂特别适用于需要氨基酸补充的人，包括肌肉生长和能力、训练/锻炼持续时间、锻炼耐受性、刺激生长激素分泌、尿素排泄、免疫调节、体重控制、支持血流和心血管功能，如勃起功能障碍(ED)和血压调节、一氧化氮(NO)刺激和人内皮细胞的细胞活力、脂肪细胞的NO刺激和褐变、骨骼肌细胞的增殖和活力，以及平滑肌细胞的增殖和活力。
本发明的方面(3)涉及用于氨基酸补充或治疗的方面(1)和(2)的组合，特别是用于刺激生长激素分泌、尿素分泌、免疫调节、支持血流和心血管功能，如勃起功能障碍(ED)和血压调节、一氧化氮(NO)刺激和人内皮细胞的细胞活力、脂肪细胞的NO刺激和褐变、骨骼肌细胞的增殖和活力，以及平滑肌细胞的增殖和活力。
本发明的方面(4)和(5)，涉及在方面(1)和(2)中定义的组合在食品和人类营养、运动营养中作为一种营养补充剂的应用，以及涉及一种用于氨基酸治疗或补充方法，其包括将在方面(1)和(2)中定义的组合应用于需要所述治疗或补充的受试者。在所述应用或方法中，所述治疗和补充优选用于肌肉生长和能力、训练/锻炼持续时间、锻炼耐受性、刺激生长激素分泌、尿素排泄、免疫调节、体重控制、支持血流和心血管功能，如勃起功能障碍(ED)和血压调节、一氧化氮(NO)刺激和人内皮细胞的细胞活力、脂肪细胞的NO刺激和褐变、骨骼肌细胞的增殖和活力，以及平滑肌细胞的增殖和活力。
所述DIP1 CGPASECphEal由位于德国蒙斯特柯灵斯街道3号的
Figure GDA0002967993900000071
Wilhelms-
Figure GDA0002967993900000072
Münster大学(邮编48149)保藏在德国微生物菌种保藏中心(DSMZ)，地址为德国布伦瑞克市英豪丰大街7B(邮编38124)，保藏编号为DSM 21533。
在以下实施例中将进一步描述本发明，这些实施例不应解释为对本发明的限制。
实施例
实施例1：β-天冬氨酰二肽的制备
CGP和胞外CGPase酶是在CGPase催化CGP分解为二肽之前通过单独发酵产生的。利用大肠杆菌K12的重组衍生物，其含有携带集胞藻(Synechocystis sp.)PCC6308的CGP合成酶基因(cphA)的商业质粒，在500L发酵条件下生产CGP，同时利用重组毕赤酵母(Pichiapastoris)产生CGPase，所述重组毕赤酵母含有产碱芽孢杆菌(P.alcaligenes)DIP1菌株的cphEal的基因组整合，所述DIP1已作为DSM 21533保藏于DSMZ。然后从产生的生物物质中提取CGP并进行纯化。采用CGPase酶作为培养上清。在特定条件下结合产生的CGP和CGPase，然后将生物聚合物分解为组成其的β-二肽。然后从反应的剩余部分分离β-L-天冬氨酰-L-精氨酸和β-L-天冬氨酸-L-赖氨酸二肽片段，通过HPLC分析纯度，并且最后干燥成粉末(WO2009150252和Sallam等人，AEM 75:29-38(2009))。为了分离两种所述的二肽，例如，为了获得其中一种纯净的形式，可以在干燥所需的单个重结晶的二肽之前，采用标准的乙醇重结晶程序作为最后步骤。
实施例2：碱性水解β-Asp-Arg制备β-Asp-Cit和β-Asp-Orn
通过选择合适的条件，β-L-天冬氨酰-精氨酸的胍基部分可以在碱性pH条件下水解生成β-L-天冬氨酰-L-瓜氨酸和β-L-天冬氨酰-L-鸟氨酸而不损害肽键。
在室温下，将β-L-天冬氨酰-L-精氨酸溶解于水，浓度达到其溶解度极限。然后使用碱或碱土类氢氧化物溶液将pH值调到12.5和13之间。然后将溶液加热至所需温度。随着温度的升高，反应速度加快，适宜的温度是在水的沸点或略低于沸点。在反应过程中，通过适当加入碱性溶液保持pH值不变。当pH值保持稳定而无需调整时，反应完成。然后将溶液冷却至室温，并用色析法纯化二肽。典型的转化率超过95％。β-L-天冬氨酰-L-瓜氨酸与β-L-天冬氨酰-L-鸟氨酸的比例可以通过初始二肽浓度、pH值和碱性溶液的选择来控制。
实施例3：单独补充β-天冬氨酰二肽或与氨基酸成分结合补充
β-天冬氨酰-精氨酸单独口服或与精氨酸联合口服，以不同的剂量。随时间检测血液中二肽的水平。实验所用的物质是一种白色的β-天冬氨酰-精氨酸粉末。用高效液相色谱法测定其纯度>99％。
实验过程：3名健康男性志愿者(年龄41～51岁，身高173～187cm，体重80～85kg，BMI约25kg/m2)。试验物质(β-Asp-Arg二肽、精氨酸(作为精氨酸-天门冬氨酸盐)或两者的组合)在禁食过夜后以400ml水溶液形式给予。志愿者们在整个实验过程中始终禁食。使用柳叶刀装置从指尖采集血液，并将其涂抹在样本卡上，二肽和氨基酸的水平由外部服务提供商(德国Singen Labor Blission)通过UPLC-MSMS测定。
结果：检测血液中的β-天冬氨酰-精氨酸或精氨酸：在所有三名志愿者中，全血中二肽的浓度在大约6小时内增加，之后开始下降，12小时内仍然可以检测到(图1)。游离精氨酸仅在基线水平检测到。将口服剂量从2.5g增加一倍至5g，大约使最大浓度增加一倍，并导致曲线下面积增加一倍(图2)。相反，等摩尔剂量的游离精氨酸(作为精氨酸-天门冬氨酸盐)导致血液浓度在两小时内快速增加，但在4小时内浓度恢复到基线水平。5克剂量并未导致血液浓度显著增加(图3)。由于精氨酸天然存在于血流中，因此未计算曲线下面积。
β-天冬氨酰-精氨酸和精氨酸的联合给药：与单独给药的两种物质的浓度曲线相比，口服含β-天冬氨酰-精氨酸和精氨酸各2.5g的组合不会导致血液中浓度曲线的变化(图4)。
结论：口服施用的β-天冬氨酰-精氨酸以未切割的二肽形式被吸收到血流中。由于施用二肽时未检测到游离精氨酸的增加，因此肠和血液中的裂解率可以忽略不计。实验还表明2.5g的精氨酸已经处于血液饱和极限，因为该物质的量加倍并未导致精氨酸血浓度的相应增加。相反，将二肽的口服剂量从2.5g加倍到5g，导致血液中浓度大约也加倍，这表明尚未达到饱和极限。同时施用二肽和游离精氨酸表明，两种物质之间的摄取没有干扰。应该注意的是，这也意味着不同的摄取途径，其中观察到的不同摄取动力学也可能是反映。
因此，天冬氨酰-精氨酸被肠道吸收并以未水解的形式进入血流。
实施例4：β-天冬氨酰二肽的水解酶敏感性
精氨酸酶催化尿素循环的最后一步，并将L-精氨酸转化为L-鸟氨酸和尿素。其他测试的酶(蛋白酶)能够切割包含及天冬氨酰和/或精氨酸的α-肽键。通过HPLC监测用这些酶处理后游离氨基酸或修饰的二肽的释放。
用于实验的物质是β-L-天冬氨酰-L-精氨酸的白色粉末。通过HPLC分析确定其纯度>99％。
过程：所有测试酶的反应条件和规格总结在下表中。
Figure GDA0002967993900000101
结果：HPLC分析-精氨酸酶反应：精氨酸酶的对照反应(含游离精氨酸)表明该酶具有活性，精氨酸几乎完全水解为鸟氨酸(图5)。与对照反应相反，二肽的起始浓度没有显著差异(图6)。
HPLC分析-蛋白酶：任何测试的蛋白酶均未观察到起始二肽浓度的显著差异(图7)。
结论：β-天冬氨酰-精氨酸不易被任何测试的酶水解。
材料：
酶 编号 供应商 订单编号
精氨酸酶(牛) EC 3.5.3.1 Alexis Bio/Sigma ALX-201-081-C020
胞内蛋白酶ArgC(小鼠) EC 3.4.21.35 Sigma P6056
胰蛋白酶(牛胰腺) EC 3.4.21.4 Sigma T1426-50MG
糜蛋白酶(牛胰腺) EC 3.4.21.1 Applichem A4531
梭菌蛋白酶(Cl.histolyticum) EC 3.4.22.8 Sigma C0888-250UN
蛋白酶(Rhizopus sp.) CAS 9001-92-7 Sigma P0107
蛋白酶N(Bacillus subtilis) CAS 116405-24-4 Sigma 82458
实施例5：哺乳动物酶切割β-天冬氨酰二肽
β-天冬氨酰二肽包含异天冬氨酸肽键，而不是蛋白质中常见的α键。因此，它对大多数普通蛋白酶和肽酶的切割均具有抗性。虽然这种抗性在肠道和血流中是一个优势，因为它可以防止到达目标组织之前发生裂解，但确实引发了有关如何将二肽引入代谢的问题。已经在哺乳动物组织中发现了能够裂解多种β-天冬氨酰二肽和相关化合物的特异性胞质异天冬氨酸酶(也称为β-天冬氨酰肽酶)。特异性针对β-天冬氨酰部分，与该残基结合的部分的重要性不高。总体反应可总结为：
β-精氨酸-X+H2O→天冬氨酸+X
用于实验的物质是β-L-天冬氨酰-L-精氨酸的白色粉末。通过HPLC分析测定其纯度>99％。
实验过程：已知肝脏具有高度的代谢活性，并且先前已证明其具有β-天冬氨酰二肽酶活性(Dorer等，1968)。由于其易得，因此选择了从屠夫购买的牛肝作为模型。使用瓦林粉碎机器将肝脏(鲜重50g)在其四倍体积的冰冷磷酸盐缓冲盐液中匀浆。通过在4℃下以9,000×g离心15分钟除去不溶物。上清液(肝提取物)立即用作测试溶液。
测试装置：将1.5ml聚丙烯试管中的900μl肝脏提取物等分试样置于37℃的加热块中，加热10分钟。然后，加入100μl的100mM的β-天冬氨酰-精氨酸磷酸缓冲盐溶液，使最终浓度为10mM。在加入二肽后的0、1、2、3和4h取100μl样品。采集每个样品后，立即将其添加到装有100μl 10％SDS水溶液和700μl的软化水1.5ml的旋盖聚丙烯试管中。立即将该管加热至100℃，保持10分钟，以停止任何进一步的酶活性。然后将试管冷却至室温，并加入100μl10％KCl溶液。然后将溶液在冰上冷却至少30分钟，以沉淀十二烷基硫酸钾，将其与其他不溶性碎屑一起在4℃下以13,000×g离心10分钟使其沉淀。然后将样品用软化水适当稀释并通过HPLC分析。
结果：观察到二肽明显减少，同时游离天冬氨酸随之增加。随着实验的进行，水解速率呈现减缓，并且在两个小时内天冬氨酸的释放几乎停止。由于这可能是因为随着时间的推移活性降低和隔离天冬氨酸的副反应，因此在一个较小的时间尺度上重复了该实验(图8)。这发现更高的总体活性，以及更好的二肽水解和天冬氨酸释放速率的相关性。活性相当于每小时每克肝组织水解2.5毫克二肽的活性。这相当于0.065U/mg蛋白质，与Dorer等人发现的使用β-天冬氨酰-甘氨酸作为底物的大鼠肝脏提取物的值(0.028U/mg)相当。因此，β-天冬氨酰-精氨酸被牛肝中存在的酶裂解。预计在哺乳动物体内，β-天冬氨酰-精氨酸被切割成其组成氨基酸，很可能也在发现了β-天冬氨酰肽酶的其他组织中被切割。
PCT
Figure GDA0002967993900000131

Claims (15)

1.一种营养或治疗性的补充剂，其包含一种混合物，所述混合物为：
一种或多种含β-天冬氨酰的二肽、其低聚物或其盐，其中每种的β-二肽包含β-L-天冬氨酰作为第一氨基酸残基，所述第一氨基酸残基结合到选自精氨酸、鸟氨酸和瓜氨酸的第二氨基酸残基，
以及，各自的游离的第二氨基酸或其盐，
组成的混合物。
2.如权利要求1所述的补充剂，其特征在于，所述含β-天冬氨酰的二肽的氨基酸组分和所述第二氨基酸为L-构型或D-构型，优选为L-构型。
3.如权利要求1或2所述的补充剂，其特征在于，所述混合物还包含一种或多种β-二肽、其低聚物或其盐，其中，每一种所述的β-二肽包含作为第一氨基酸残基的β-L-天冬氨酰，和，选自赖氨酸和刀豆氨酸的结合的第二氨基酸残基。
4.如权利要求3所述的补充剂，其特征在于，
(i)所述第二氨基酸残基为赖氨酸；和/或
(ii)所述第二氨基酸残基为L-构型或D-构型。
5.如权利要求1所述的补充剂，其特征在于，所述混合物包含：
(i)二肽β-L-天冬氨酰-L-精氨酸，和，氨基酸精氨酸，或其盐；或
(ii)二肽β-L-天冬氨酰-L-精氨酸和β-L-天冬氨酰-L-赖氨酸，以及氨基酸精氨酸和任选地氨基酸赖氨酸，或其盐；
(iii)二肽β-L-天冬氨酰-L-鸟氨酸，和，氨基酸鸟氨酸，或其盐；或
(iv)二肽β-L-天冬氨酰-L-瓜氨酸，和，氨基酸瓜氨酸，或其盐；或
(v)(i)至(iv)中所述的任何组合的混合物。
6.如权利要求1～4任一项所述的补充剂，其特征在于，
(i)所述低聚物包含两个或多个共价结合的β-二肽，和/或
(ii)一种或多种所述的β-二肽经过化学修饰。
7.如权利要求1～6任一项所述的补充剂，其包含：
所述β-二肽或其盐与氨基酸组分之间的摩尔比分别在99:1到1:99范围内，优选在3:1到1:3范围内，最优选为约1:1的摩尔比。
8.如权利要求1～7任一项所述的补充剂，其特征在于，所述混合物进一步包含适用浓度的一种或多种游离氨基酸或其盐，优选自但不限于谷氨酰胺、组氨酸、酪氨酸、BCAA或色氨酸。
9.如权利要求1～7任一项所述的补充剂，其特征在于，所述混合物进一步包含适用浓度的常规用于食品或饲料补充剂的一种或多种组分，所述组分包括但不限于肌酸、乳清蛋白、牛磺酸、维生素、肌肽、维生素或矿物质。
10.如权利要求1～9任一项所述的补充剂，其用于需要精氨酸补充的人，其包括肌肉生长和能力、训练/锻炼持续时间、锻炼耐受性、刺激生长激素分泌、尿素排泄、免疫调节、体重控制、支持血流和心血管功能，如勃起功能障碍(ED)和血压调节、一氧化氮(NO)刺激和人内皮细胞的细胞活力、脂肪细胞的NO刺激和褐变、骨骼肌细胞的增殖和活力，以及平滑肌细胞的增殖和活力。
11.如权利要求1～9任一项所定义的补充剂，其用于营养治疗。
12.如权利要求1～9任一项所定义的补充剂在食品和人类营养、运动营养中作为氨基酸补充剂中的应用。
13.如权利要求12所述的应用，其特征在于，所述补充剂用于肌肉生长和能力、训练/锻炼持续时间、锻炼耐受性、刺激生长激素分泌、尿素排泄、免疫调节、体重控制、支持血流和心血管功能，如勃起功能障碍(ED)和血压调节、一氧化氮(NO)刺激和人内皮细胞的细胞活力、脂肪细胞的NO刺激和褐变、骨骼肌细胞的增殖和活力，以及平滑肌细胞的增殖和活力。
14.一种用于氨基酸治疗或补充的方法，其包括将权利要求1～9中任一项所定义的组合应用于需要所述治疗或补充的受试者。
15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述治疗和补充用于肌肉生长和能力、训练/锻炼持续时间、锻炼耐受性、刺激生长激素分泌、尿素排泄、免疫调节、体重控制、支持血流和心血管功能，如勃起功能障碍(ED)和血压调节、一氧化氮(NO)刺激和人内皮细胞的细胞活力、脂肪细胞的NO刺激和褐变、骨骼肌细胞的增殖和活力，以及平滑肌细胞的增殖和活力。
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