CN115287269A - 一种微载体高密度培养Vero细胞生产狂犬病病毒的方法 - Google Patents
一种微载体高密度培养Vero细胞生产狂犬病病毒的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115287269A CN115287269A CN202211127652.2A CN202211127652A CN115287269A CN 115287269 A CN115287269 A CN 115287269A CN 202211127652 A CN202211127652 A CN 202211127652A CN 115287269 A CN115287269 A CN 115287269A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture
- virus
- microcarrier
- microcarriers
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 32
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 title claims abstract description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 40
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 38
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 claims abstract description 25
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 13
- 239000005723 virus inoculator Substances 0.000 claims description 13
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 12
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 10
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 10
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims description 8
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims description 7
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 7
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 7
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 5
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 5
- 230000008961 swelling Effects 0.000 claims description 5
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 5
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 5
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 2
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 claims description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000005086 pumping Methods 0.000 claims 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims 1
- 229960003127 rabies vaccine Drugs 0.000 abstract description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 14
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 9
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 9
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 5
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000867607 Chlorocebus sabaeus Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 208000035472 Zoonoses Diseases 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 206010048282 zoonosis Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0684—Cells of the urinary tract or kidneys
- C12N5/0686—Kidney cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2531/00—Microcarriers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/20011—Rhabdoviridae
- C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
- C12N2760/20151—Methods of production or purification of viral material
Abstract
本发明涉及一种微载体高密度培养Vero细胞生产狂犬病病毒的方法。相对现有技术，本发明使用高密度的微载体进行细胞灌注培养，在细胞培养过程中，往生物反应器中不断地添加新鲜培养基，同时通过沉降器分离微载体排出培养液。灌注培养可及时回收产品至低温下保存，有利于保持产品活性，连续收获的病毒液都可以达到很高的病毒滴度LD50，用本发明收获的病毒液制备的狂犬疫苗都具有很高的效价。
Description
技术领域
本发明涉及生物制品技术领域，具体涉及一种微载体高密度培养Vero细胞生产狂犬病病毒的方法。
背景技术
狂犬病是一种由狂犬病病毒引起的人畜共患疾病，在全球分布广泛，每年死于狂犬病的人数超过5.5万人，其中约95％发生在亚洲和非洲。大多数死亡事件均是被狂犬病毒感染的狗咬伤所致，受害者中30％～60％为15岁以下儿童。狂犬病的预防和治疗通常采用狂犬病疫苗。
目前，狂犬疫苗所必需的狂犬病病毒的生产主要是通过培养Vero细胞，并在Vero细胞上增殖狂犬病病毒的工艺来进行。国内目前主要采用转瓶、片状载体和微载体培养Vero细胞进行狂犬病病毒液的制备。
与传统转瓶培养细胞相比，微载体培养细胞可以提供极高的表面积与体积比，增加病毒产量，并且显著减少所需传统培养容器的数量，节约空间和成本，且生产流程及过程自动化程度高，不仅减少了污染细胞的机会，同时减少人为操作因素影响。
片状载体培养Vero细胞不能实时取样，难以目视观察细胞的生长状态，只能通过细胞的葡萄糖消耗量来估算细胞在培养过程中的生长状态，且罐转罐和放大问题则是更明显的问题，低的细胞回收率，难以实现罐转罐的逐级放大，然而，微载体培养细胞可以随时取样观察细胞的生长状态，且可以轻易实现罐转罐培养，可放大至1000L的规模。
目前国内微载体培养Vero细胞的微载体密度较低，一般在10g/L以下，本发明专利采用的是高密度微载体培养Vero细胞，微载体密度达到20g/L。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：克服现有技术中的缺陷，提供一种微载体高密度培养Vero细胞生产狂犬病病毒的方法。
为了解决上述问题，本发明提供的技术方案如下：
一种微载体高密度培养Vero细胞生产狂犬病病毒的方法，包括如下步骤：
1)按照密度为15-25g/L进行微载体配制、灭菌和洗涤；
2)将制备的Vero细胞悬液打入Cytodex 1微载体中，与微载体混匀后打入生物反应器中灌流培养；
3)待生物反应器内细胞生长6-7天，进行病毒接种、培养；
4)病毒接种后第3天开始进行病毒液收获，连续收获12-14天。
本发明所述的Vero细胞是非洲绿猴肾细胞，属于可以连续传代的细胞，是对狂犬病病毒敏感的宿主细胞。经液氮冷冻保藏的Vero细胞在使用前需要复苏和扩增。
优选的，所述步骤1具体包括：根据生物反应器工作体积，按照微载体密度称量微载体于硅化的玻璃瓶中，用PBS对其进行溶胀和洗涤，于121-125℃高压灭菌60-65分钟后，用199和DMEM混合培养基对灭菌后微载体进行洗涤备用。
优选的，所述步骤2培养条件为：36-38℃的温度，40-60RPM的搅拌转速，10-30％的溶氧浓度。
优选的，所述步骤2中制备Vero细胞悬液具体包括：经液氮冷冻保藏的Vero细胞在使用前经过复苏和扩增，将连续扩增后的Vero细胞，用0.25％胰蛋白酶/EDTA对其进行消化，用含牛血清的199和DMEM混合培养基悬浮，制备成细胞悬液。
优选的，所述步骤2中Vero细胞接种密度为0.6-1.2×106cells/ml。
优选的，所述步骤3中病毒接种感染复数MOI为0.0025-0.005。
优选的，所述步骤3中病毒接种8±1小时后，按照每天1个培养体积的灌注速率使用含人血白蛋白的L-15液体培养基进行连续灌流培养。
优选的，所述步骤3中病毒培养条件为：32-34℃的温度，40-60RPM的搅拌转速，10-30％的溶氧浓度。
优选的，所述生物反应器上设置有沉降器截留微载体。
本发明的有益效果是，本发明使用高密度的微载体进行细胞灌注培养，在细胞培养过程中，往生物反应器中不断地添加新鲜培养基，同时通过截留装置排出培养上清，而贴附细胞的微载体被继续截留在生物反应器中，培养基的不断流出，可带走代谢副产物如乳酸、氨等，使其维持在低浓度水平，不会成为细胞生长的抑制因素，所以细胞可生长在良好培养环境中，能获得很高的细胞培养密度。灌注培养可及时回收产品至低温下保存，有利于保持产品活性，连续收获的病毒液都可以达到7.0lgLD50/ml以上的病毒滴度，用本发明收获的病毒液制备的狂犬病疫苗原液都具有很高的效价，达到43IU/ml以上。
具体实施方式
以下结合实例说明本发明，但不限制本发明。在本领域内，技术人员对本发明所做的简单替换或改进均属于本发明所保护的技术方案内。
实施例1：
1)从液氮中取出1个冻存管，在38℃水浴迅速融化，加入预先准备的含30ml细胞培养基的F75瓶中，于37℃培养6小时后进行换液操作，然后置于37℃继续培养3天后，即可进行传代扩增；
2)根据生物反应器工作体积，按照微载体密度为20g/L称量微载体于硅化的玻璃瓶中，用PBS对其进行溶胀和洗涤，于121℃高压灭菌60分钟后，用199和DMEM混合培养基对灭菌后微载体进行洗涤备用；
3)将连续扩增后的Vero细胞，用0.25％胰蛋白酶/EDTA对其进行消化，用细胞培养基悬浮，制备成细胞悬液，加入2)中的微载体中，根据生物反应器体积，细胞接种密度应满足1.2×106cells/ml，将含细胞的微载体打入生物反应器中，培养条件为：37℃的温度，60RPM的搅拌转速，30％的溶氧浓度；
4)细胞接种生物反应器7小时后，使用细胞培养基进行连续灌流培养，并根据细胞生长情况每天调整灌注速率，逐步提高灌注速率到达每天4个培养体积；
5)细胞培养6天，细胞密度可达到1.2×107cells/ml，然后按照感染复数MOI为0.005进行狂犬病毒的接种，病毒培养条件为：34℃的温度，60RPM的搅拌转速，30％的溶氧浓度；
6)病毒接种9小时后，按照每天1个培养体积的灌注速率使用病毒维持液进行连续灌流培养；
7)病毒接种后第3天，开始病毒液收获，连续收获12天。对连续收获的病毒液采用小鼠脑内滴定法检测病毒滴度，每天收获病毒液的病毒滴度可达到7.0lgLD50/ml以上；
8)将收获的病毒液超滤浓缩30倍、病毒灭活及分子筛层析后制得狂犬疫苗原液，采用NIH法进行效价测定，可达到53IU/ml。
实施例2：
1)从液氮中取出1个冻存管，在38℃水浴迅速融化，加入预先准备的含30ml细胞培养基的F75瓶中，于37℃培养5小时后进行换液操作，然后置于37℃继续培养3天后，即可进行传代扩增；
2)根据生物反应器工作体积，按照微载体密度为25g/L称量微载体于硅化的玻璃瓶中，用PBS对其进行溶胀和洗涤，于121℃高压灭菌60分钟后，用199和DMEM混合培养基对灭菌后微载体进行洗涤备用；
3)将连续扩增后的Vero细胞，用0.25％胰蛋白酶/EDTA对其进行消化，用细胞培养基悬浮，制备成细胞悬液，加入2)中的微载体中，根据生物反应器体积，细胞接种密度应满足0.6×106cells/ml，将含细胞的微载体打入生物反应器中，培养条件为：37℃的温度，40RPM的搅拌转速，10％的溶氧浓度；
4)细胞接种生物反应器9小时后，使用细胞培养基进行连续灌流培养，并根据细胞生长情况每天调整灌注速率，逐步提高灌注速率到达每天4个培养体积；
5)细胞培养7天，细胞密度可达到0.8×107cells/ml，然后按照感染复数MOI为0.0025进行狂犬病毒的接种，病毒培养条件为：32℃的温度，40RPM的搅拌转速，10％的溶氧浓度；
6)病毒接种7小时后，按照每天1个培养体积的灌注速率使用病毒维持液进行连续灌流培养；
7)病毒接种后第3天，开始病毒液收获，连续收获13天。对连续收获的病毒液采用小鼠脑内滴定法检测病毒滴度，每天收获病毒液的病毒滴度可达到7.0lgLD50/ml以上；
8)将收获的病毒液超滤浓缩30倍、病毒灭活及分子筛层析后制得狂犬疫苗原液，采用NIH法进行效价测定，可达到43.4IU/ml。
实施例3：
1)从液氮中取出1个冻存管，在38℃水浴迅速融化，加入预先准备的含30ml细胞培养基的F75瓶中，于37℃培养5小时后进行换液操作，然后置于37℃继续培养3天后，即可进行传代扩增；
2)根据生物反应器工作体积，按照微载体密度为15g/L称量微载体于硅化的玻璃瓶中，用PBS对其进行溶胀和洗涤，于125℃高压灭菌65分钟后，用199和DMEM混合培养基对灭菌后微载体进行洗涤备用；
3)将连续扩增后的Vero细胞，用0.25％胰蛋白酶/EDTA对其进行消化，用细胞培养基悬浮，制备成细胞悬液，加入2)中的微载体中，根据生物反应器体积，细胞接种密度应满足1.0×106cells/ml，将含细胞的微载体打入生物反应器中，培养条件为：37℃的温度，40RPM的搅拌转速，30％的溶氧浓度；
4)细胞接种生物反应器7小时后，使用细胞培养基进行连续灌流培养，并根据细胞生长情况每天调整灌注速率，逐步提高灌注速率到达每天4个培养体积；
5)细胞培养6天，细胞密度可达到1.0×107cells/ml，然后按照感染复数MOI为0.004进行狂犬病毒的接种，病毒培养条件为：34℃的温度，50RPM的搅拌转速，20％的溶氧浓度；
6)病毒接种8小时后，按照每天1个培养体积的灌注速率使用病毒维持液进行连续灌流培养；
7)病毒接种后第3天，开始病毒液收获，连续收获14天。对连续收获的病毒液采用小鼠脑内滴定法检测病毒滴度，每天收获病毒液的病毒滴度可达到7.0lgLD50/ml以上；
8)将收获的病毒液超滤浓缩30倍、病毒灭活及分子筛层析后制得狂犬疫苗原液，采用NIH法进行效价测定，可达到45.7IU/ml。
| 收获天数(D) | 病毒滴度(lgLD<sub>50</sub>/ml) |
| 1 | 7.5 |
| 2 | 7.8 |
| 3 | 7.5 |
| 4 | 7.5 |
| 5 | 7.5 |
| 6 | 7.3 |
| 7 | 7.3 |
| 8 | 7.1 |
| 9 | 7.3 |
| 10 | 7.0 |
| 11 | 7.1 |
| 12 | 7.0 |
| 13 | 7.1 |
| 14 | 7.0 |
以上所述的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种微载体高密度培养Vero细胞生产狂犬病病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)按照密度为15-25g/L进行微载体配制、灭菌和洗涤；
2)将制备的Vero细胞悬液打入Cytodex 1微载体中，与微载体混匀后打入生物反应器中灌流培养；
3)待生物反应器内细胞生长6-7天，进行病毒接种、培养；
4)病毒接种后第3天开始进行病毒液收获，连续收获12-14天。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1具体包括：根据生物反应器工作体积，按照微载体密度称量微载体于硅化的玻璃瓶中，用PBS缓冲液对其进行溶胀和洗涤，于121-125℃高压灭菌60-65分钟后，用199和DMEM混合培养基对灭菌后微载体进行洗涤备用。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2培养条件为：36-38℃的温度，40-60RPM的搅拌转速，10-30％的溶氧浓度。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2中制备Vero细胞悬液具体包括：经液氮冷冻保藏的Vero细胞在使用前经过复苏和扩增，将连续扩增后的Vero细胞，用0.25％胰蛋白酶/EDTA对其进行消化，用含牛血清的199和DMEM混合培养基进行细胞悬浮，制备成细胞悬液。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2中Vero细胞接种密度为0.6-1.2×106cells/ml。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3中病毒接种感染复数MOI为0.0025-0.005。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3中病毒接种8±1小时后，按照每天1个培养体积的灌注速率使用含人血白蛋白的L-15液体培养基进行连续灌流培养。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3中病毒培养条件为：32-34℃的温度，40-60RPM的搅拌转速，10-30％的溶氧浓度。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物反应器上设置有沉降器截留微载体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211127652.2A CN115287269A (zh) | 2022-09-16 | 2022-09-16 | 一种微载体高密度培养Vero细胞生产狂犬病病毒的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211127652.2A CN115287269A (zh) | 2022-09-16 | 2022-09-16 | 一种微载体高密度培养Vero细胞生产狂犬病病毒的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115287269A true CN115287269A (zh) | 2022-11-04 |
Family
ID=83834158
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211127652.2A Pending CN115287269A (zh) | 2022-09-16 | 2022-09-16 | 一种微载体高密度培养Vero细胞生产狂犬病病毒的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115287269A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117070474A (zh) * | 2023-10-10 | 2023-11-17 | 北京华龛生物科技有限公司 | 一种三维多孔微载体悬浮培养细胞生产病毒的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1966076A (zh) * | 2006-11-14 | 2007-05-23 | 广州市嘉合生物技术有限公司 | 大规模生产狂犬病疫苗的方法 |
| CN1970080A (zh) * | 2006-12-04 | 2007-05-30 | 上海乔南生泰科学仪器有限公司 | 用悬浮的Vero细胞生产病毒疫苗的方法 |
| CN106834239A (zh) * | 2017-01-20 | 2017-06-13 | 江苏中慧元通生物科技有限公司 | 一种无血清Vero细胞制备狂犬病疫苗原液的方法以及无血清狂犬病疫苗制品 |
| CN111840535A (zh) * | 2020-08-07 | 2020-10-30 | 成都柏奥特克生物科技股份有限公司 | 利用无血清Vero细胞和狂犬病病毒rPV-2061制备狂犬病疫苗的工艺 |
-
2022
- 2022-09-16 CN CN202211127652.2A patent/CN115287269A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1966076A (zh) * | 2006-11-14 | 2007-05-23 | 广州市嘉合生物技术有限公司 | 大规模生产狂犬病疫苗的方法 |
| CN1970080A (zh) * | 2006-12-04 | 2007-05-30 | 上海乔南生泰科学仪器有限公司 | 用悬浮的Vero细胞生产病毒疫苗的方法 |
| CN106834239A (zh) * | 2017-01-20 | 2017-06-13 | 江苏中慧元通生物科技有限公司 | 一种无血清Vero细胞制备狂犬病疫苗原液的方法以及无血清狂犬病疫苗制品 |
| CN111840535A (zh) * | 2020-08-07 | 2020-10-30 | 成都柏奥特克生物科技股份有限公司 | 利用无血清Vero细胞和狂犬病病毒rPV-2061制备狂犬病疫苗的工艺 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117070474A (zh) * | 2023-10-10 | 2023-11-17 | 北京华龛生物科技有限公司 | 一种三维多孔微载体悬浮培养细胞生产病毒的方法 |
| CN117070474B (zh) * | 2023-10-10 | 2024-02-06 | 北京华龛生物科技有限公司 | 一种三维多孔微载体悬浮培养细胞生产病毒的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107201333B (zh) | 可悬浮培养的牛肾细胞在病毒培养及疫苗生产的应用 | |
| CN101979518B (zh) | 一种制备伪狂犬病病毒的方法 | |
| US11629338B2 (en) | Method for acclimating and suspending Vero and second order production process for virus | |
| CN107460156B (zh) | 无血清全悬浮mdck细胞株及其在生产流感病毒中的应用 | |
| CN102178946B (zh) | Bhk-21细胞无血清悬浮培养技术在口蹄疫疫苗生产中的应用 | |
| CN102559617A (zh) | 生物反应器微载体培养人二倍体细胞生产病毒疫苗的方法 | |
| CN102988972B (zh) | 一种运用激流式生物反应器生产猪细小病毒灭活疫苗的方法 | |
| CN115287269A (zh) | 一种微载体高密度培养Vero细胞生产狂犬病病毒的方法 | |
| CN103520715B (zh) | 利用wave波浪生物反应器生产猪圆环病毒2型灭活疫苗的方法 | |
| CN112342185B (zh) | 一种鸡胚细胞狂犬病病毒的生物反应器工艺 | |
| US9932562B2 (en) | Drain down and re-feed of microcarrier bioreactor | |
| CN116656628A (zh) | 一种痘病毒载体疫苗的制备方法 | |
| CN111440770A (zh) | 人源细胞悬浮培养的培养基组合及溶瘤痘苗病毒的制备方法 | |
| CN102743749B (zh) | 应用篮式生物反应器制备人二倍体细胞风疹减毒活疫苗的方法 | |
| CN108866012A (zh) | 一种猪流行性腹泻病毒悬浮培养连续收毒生产方法 | |
| CN106237324A (zh) | 一种使用全悬浮技术生产猪传染性胃肠炎疫苗的方法 | |
| CN111979200A (zh) | 一种鸭坦布苏病毒的无血清全悬浮培养方法及其在疫苗中的应用 | |
| CN109602900A (zh) | 鸡马立克氏病毒活疫苗的制备方法及其产品 | |
| CN109280649B (zh) | 一种制备水貂犬瘟热抗原蛋白复合物的方法、抗原蛋白复合物及其应用 | |
| CN116474087A (zh) | 一种新型水痘减毒活疫苗制备方法 | |
| CN117070474B (zh) | 一种三维多孔微载体悬浮培养细胞生产病毒的方法 | |
| CN113444686B (zh) | 一种使用生物反应器培养石斑鱼细胞的方法 | |
| CN102154220A (zh) | 超高密度大规模产猪繁殖与呼吸综合征病毒的方法及设备 | |
| CN117402813A (zh) | 一种猫肾crfk贴壁细胞系的建立及悬浮驯化与应用 | |
| CN117025551A (zh) | 一种牛结节性皮肤病病毒毒株、以及由其制备的灭活疫苗和疫苗的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |