CN113444686B - 一种使用生物反应器培养石斑鱼细胞的方法 - Google Patents

一种使用生物反应器培养石斑鱼细胞的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN113444686B
CN113444686B CN202110769430.XA CN202110769430A CN113444686B CN 113444686 B CN113444686 B CN 113444686B CN 202110769430 A CN202110769430 A CN 202110769430A CN 113444686 B CN113444686 B CN 113444686B
Authority
CN
China
Prior art keywords
cells
grouper
bioreactor
culturing
cell growth
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110769430.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN113444686A (zh
Inventor
尹顺义
袁春燕
伍活镰
蒋东阳
任政华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Qizhi Biological Engineering Equipment Co ltd
Original Assignee
Guangzhou Qizhi Biological Engineering Equipment Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangzhou Qizhi Biological Engineering Equipment Co ltd filed Critical Guangzhou Qizhi Biological Engineering Equipment Co ltd
Priority to CN202110769430.XA priority Critical patent/CN113444686B/zh
Publication of CN113444686A publication Critical patent/CN113444686A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113444686B publication Critical patent/CN113444686B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0648—Splenocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/34—Sugars
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/70—Undefined extracts
    • C12N2500/80—Undefined extracts from animals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2531/00—Microcarriers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种使用生物反应器培养石斑鱼细胞的方法。本发明提供的方法，是通过在BC‑7L生物反应器中微载体贴壁悬浮大规模培养石斑鱼细胞，并加入了一种GS细胞生长液，即在DMEM基础培养基中添加50ml～80ml半乳糖及100ml～160ml石斑鱼组织养液，能够促进低等生物代谢。本发明提供的方法实现了石斑鱼细胞的大规模微载体培养，微载体细胞收率高，培养得到的细胞形态正常，保持了原细胞的活力和遗传特性，具有感染病毒和繁殖病毒的能力，可用于繁殖鱼类病毒和大规模生产鱼类疫苗。

Description

一种使用生物反应器培养石斑鱼细胞的方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种使用生物反应器培养石斑鱼细胞的方法。
背景技术
生物反应器是指为活细胞增殖及细胞内部的生化反应提供适宜环境的设备，它是生物制药过程中的关键设备。影响生物反应器效率或者功能的因素很多，反应器的结构、反应器的质量、操作方式、操作条件的选定等对生物制品的质量和生产效率和耗能等都有着密切的关系。近年来，生物反应器在生物制药领域中被广泛应用于动物培养，且动物细胞培养反应器的总规模还在不断地往大规模方向发展。
使用生物反应器培养动物细胞，具有控制精确和可靠的优点。利用动物细胞反应器来保证对生产工艺参数非常敏感的疫苗、抗体等生产的稳定性和连续性是很有必要的，其中利用动物细胞表达生产的产品--疫苗、抗体、重组蛋白药物等产品的年销售额占生物制药市场的70％以上。
石斑鱼主要分布于热带及温带海洋，是礁栖暖水性鱼类。石斑鱼肉质肥美鲜嫩，蛋白质含量高，是一种高蛋白、低脂肪具有较高的经济价值和营养价值，是我国东南沿海各省及东南亚各国名贵的海水养殖鱼类。
近年来，由于供不应求的市场关系，石斑鱼养殖业迅猛发展，但是随之而来的各类疫病病原的频繁爆发，严重影响石斑鱼养殖产业的发展。其中，石斑鱼虹彩病毒是严重威胁石斑鱼养殖的高致病性传染性病毒。因此，研发出有效疫苗对石斑鱼养殖业的发展意义重大。而适合用于生产疫苗的鱼类细胞的驯化培养技术，对于实现疫苗的大规模生产，尤为重要。目前国内外鲜见使用生物反应器培养石斑鱼细胞的方法。
发明内容
本发明旨在提供一种使用生物反应器培养石斑鱼细胞的方法。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种使用生物反应器培养石斑鱼细胞的方法，包括以下步骤：
1)取石斑鱼GS细胞使用0.2～0.3％胰酶消化液进行消化处理，制备为细胞悬液；
2)将步骤1)制备的细胞悬液接种至含有细胞生长液和微载体的BC-7L的生物反应器中进行动态培养；
3)连续培养3～6天至细胞长成致密单层。
优选的，所述步骤1)中胰酶消化液，以质量分数计，包括0.01～0.03％的乙二胺四乙酸和0.25％Trypsin。
优选的，所述步骤2)中细胞生长液的加入量为900～1500mL；其中1000ml 细胞生长液中包括760ml～850ml基础培养基，50ml～80ml半乳糖，100ml～160ml 石斑鱼组织液。
优选的，所述基础培养基为DMEM基础培养基，所述石斑鱼组织液的制备过程为：石斑鱼组织10g加入100ml生理盐水，研磨搅拌，10000rpm离心后的上清液，除菌过滤，即得。
优选的，所述步骤2)中的微载体为Cytodex 1，Cytodex 1参数：密度1.03g/ml, 表面积4400cm2/g干重，加入量为2～4g/L。
优选的，所述步骤2)中细胞接种密度为2.5～3.9×105cells/mL。
优选的，所述步骤)2中进行动态培养时，生物反应器的参数设置如下：进气为含2％～3％CO2的无菌空气，溶氧40％～50％，pH7.1～7.3，温度22～28℃，转速40～60rpm。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明提供的使用生物反应器培养石斑鱼细胞的方法，实现了石斑鱼细胞的大规模微载体培养，微载体细胞收率高，培养得到的细胞形态正常，保持了原细胞的活力和遗传特性，具有感染病毒和繁殖病毒的能力，可用于繁殖鱼类病毒和大规模生产鱼类疫苗；
(2)本发明在培养石斑鱼细胞过程中，加入了GS细胞生长液，即在DMEM 培养基中添加50ml～80ml半乳糖及100ml～160ml石斑鱼组织养液，能够促进低等生物代谢，这是一种有利于石斑鱼细胞快速生长的细胞生长液。
附图说明
图1为石斑鱼细胞使用BC-7L生物反应器悬浮培养过程PID控制曲线；
图2为培养24h时光学显微镜下观察石斑鱼细胞在微载体上的生长形态图；
图3为培养48h时光学显微镜下观察石斑鱼细胞在微载体上的生长形态图；
图4为培养72h时光学显微镜下观察石斑鱼细胞在微载体上的生长形态图；
图5为培养96h时光学显微镜下观察石斑鱼细胞在微载体上的生长形态图。
图6为培养基中采用添加2％石斑鱼组织液后，培养24h时光学显微镜下观察石斑鱼细胞在微载体上的生长形态图；
图7为培养基中采用添加4％石斑鱼组织液后，培养48h时光学显微镜下观察石斑鱼细胞在微载体上的生长形态图；
图8为培养基中采用添加,6％石斑鱼组织液后，培养72h时光学显微镜下观察石斑鱼细胞在微载体上的生长形态图；
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。
所述石斑鱼细胞来源于ATCC库石斑鱼脾细胞系(GS细胞)，所述胎牛血清购自GiBCO公司，所述胰蛋白酶购自GiBCO公司，所述球状微载体Cytodex1 购自GE公司，所述生物反应器购自广州齐志生物工程设备有限公司的BC-7L 生物反应器；所述DMEM基础培养基可购自GiBCO公司，型号为02-5062EJ；所述Trypsin(1:250)来源于Gibco公司，型号27250-018。
实施例1使用BC-7L生物反应器悬浮培养石斑鱼细胞方法
所述使用BC-7L生物反应器培养石斑鱼细胞的方法，包括以下步骤：
1)取石斑鱼GS细胞使用0.25％胰酶消化液进行消化处理，制备为细胞悬液；所述胰酶消化液以质量分数计，包括0.02％的乙二胺四乙酸和 0.25％Trypsin(1:250)；
2)将步骤1)制备的细胞悬液接种至含有细胞生长液和微载体的BC-7L的生物反应器中进行动态培养；细胞生长液的加入量为1000ml；其中包括800ml 基础培养基，50ml半乳糖，150ml石斑鱼组织液；所述基础培养基为DMEM基础培养基，所述石斑鱼组织液的制备过程为：石斑鱼组织10g加入100ml生理盐水，研磨搅拌，10000rpm离心后的上清液，除菌过滤，即得；微载体为Cytodex 1；加入量为2g/L；细胞接种密度为3.5×105cells/mL；进行动态培养时，生物反应器的参数设置如下：进气为含2％CO2的无菌空气，溶氧40％，pH7.1，温度22℃，转速40rpm；
3)连续培养3天至细胞长成致密单层。
实施例2使用BC-7L生物反应器悬浮培养石斑鱼细胞方法
所述使用BC-7L生物反应器培养石斑鱼细胞的方法，包括以下步骤：
1)取石斑鱼GS细胞使用0.25％胰酶消化液进行消化处理，制备为细胞悬液；所述胰酶消化液，以质量分数计，包括0.02％的乙二胺四乙酸和 0.25％Trypsin(1:250)；
2)将步骤1)制备的细胞悬液接种至含有细胞生长液和微载体的BC-7L的生物反应器中进行动态培养；细胞生长液的加入量为900ml，其中包括738ml 基础培养基，72ml半乳糖，90ml石斑鱼组织液；所述基础培养基为DMEM基础培养基，所述石斑鱼组织液的制备过程为：石斑鱼组织10g加入100ml生理盐水，研磨搅拌，10000rpm离心后的上清液，经除菌过滤，即得；添加量10％；微载体为Cytodex 1；加入量为3g/L；细胞接种密度为2.8×105cells/mL；进行动态培养时，生物反应器的参数设置如下：进气为含2.5％CO2的无菌空气，溶氧48％，pH7.2，温度22℃，转速45rpm；
3)连续培养5天至细胞长成致密单层。
实施例3使用BC-7L生物反应器悬浮培养石斑鱼细胞方法
所述使用BC-7L生物反应器培养石斑鱼细胞的方法，包括以下步骤：
1)取石斑鱼GS细胞使用0.22％胰酶消化液进行消化处理，制备为细胞悬液；所述胰酶消化液，以质量分数计，包括0.01％的乙二胺四乙酸和 0.22％Trypsin(1:250)；
2)将步骤1)制备的细胞悬液接种至含有细胞生长液和微载体的BC-7L的生物反应器中进行动态培养；细胞生长液的加入量为900ml，其中包括738ml 基础培养基，72ml半乳糖，90ml石斑鱼组织液；所述基础培养基为DMEM基础培养基，所述石斑鱼组织液的制备过程为：石斑鱼组织10g加入100ml生理盐水，研磨搅拌，10000rpm离心后的上清液，经除菌过滤，即得；微载体为Cytodex 1；加入量为2g/L；细胞接种密度为3.7×105cells/mL；进行动态培养时，生物反应器的参数设置如下：进气为含3％CO2的无菌空气，溶氧40％，pH7.1，温度22℃，转速55rpm；
3)连续培养6天至细胞长成致密单层。
对比例1
本对比例与实施例3相比，石斑鱼GS细胞生长液为石斑鱼组织10g加入100ml生理盐水，研磨搅拌，10000rpm离心后的上清液，经除菌过滤率，添加量2％。
对比例2
本对比例与实施例3相比，石斑鱼GS细胞生长液为石斑鱼组织10g加入 100ml生理盐水，研磨搅拌，10000rpm离心后的上清液，经除菌过滤，添加量 4％。
对比例3
本对比例与实施例3相比，石斑鱼GS细胞生长液为石斑鱼组织10g加入 100ml生理盐水，研磨搅拌，10000rpm离心后的上清液，经除菌过滤率，添加量6％。
实验一石斑鱼GS细胞培养实验
采用实施例3使用BC-7L生物反应器悬浮培养石斑鱼细胞的方法培养石斑鱼GS细胞，如图1所示，为石斑鱼细胞使用BC-7L生物反应器悬浮培养过程 PID控制曲线；图2～图5为使用BC-7L生物反应器悬浮培养24h、48h、72h、 96h时利用光学显微镜观察到的石斑鱼细胞在微载体上的生长形态图，由图中可知，采用本发明的培养方法，培养得到的细胞形态正常，保持了原细胞的活力和遗传特性，具有感染病毒和繁殖病毒的能力。
实验二石斑鱼GS细胞培养实验
采用实施例1～3和对比例1～3的方法培养石斑鱼GS细胞，在个实施例、对比例培养结束后收集石斑鱼GS细胞，采用台盼蓝染色法进行细胞计数，计算细胞总量和活率，结果如表1所示。
表1石斑鱼细胞收率表
Figure BDA0003152234120000071
如表1所示，相比于实施例1，对比例1～3获得的石斑鱼GS细胞数量最多只有2.2×109个，细胞回收率均偏低，而本发明实施例1～3获得的石斑鱼GS细胞的数量最多为3.68×109个，是初始细胞量的14.6倍，是对比例3的1.67倍，且对比例1～3的活率也明显偏低，生长速度慢，所以，说明本发明的细胞生长液对石斑鱼GS细胞培养起着积极的作用，且适用于大规模培养石斑鱼GS细胞，在专利范围内的培养条件是最佳培养方案，可用于繁殖鱼类病毒和大规模生产鱼类疫苗。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (4)

1.一种使用生物反应器培养石斑鱼细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）取石斑鱼GS细胞使用0.2~0.3%胰酶消化液进行消化处理，制备为细胞悬液；
2）将步骤1）制备的细胞悬液接种至含有细胞生长液和微载体的BC-7L的生物反应器中进行动态培养；
3）连续培养3~6天至细胞长成致密单层；
所述步骤2）中细胞生长液的加入量为1000mL，其中1000mL细胞生长液中包括800mL基础培养基，50mL半乳糖，150mL石斑鱼组织液；或所述步骤2）中细胞生长液的加入量为900mL，其中900mL细胞生长液中包括738mL基础培养基，72mL半乳糖，90mL石斑鱼组织液；
所述基础培养基为DMEM基础培养基，所述石斑鱼组织液的制备过程为：石斑鱼组织10g加入100mL生理盐水，研磨搅拌，10000rpm离心后的上清液，除菌过滤，即得；
所述步骤2）中的微载体为Cytodex 1，Cytodex 1参数：密度1.03g/mL,表面积4400cm2/g干重，加入量为2~4g/L。
2.根据权利要求1所述的使用生物反应器培养石斑鱼GS细胞的方法，其特征在于，所述步骤1）中胰酶消化液，以质量分数计，包括0.01~0.03%的乙二胺四乙酸和0.25%Trypsin。
3.根据权利要求1所述的使用生物反应器培养石斑鱼GS细胞的方法，其特征在于，所述步骤2）中细胞接种密度为2.5~3.9×105cells/mL。
4.根据权利要求1所述的使用生物反应器培养石斑鱼GS细胞的方法，其特征在于，所述步骤）2中进行动态培养时，生物反应器的参数设置如下：进气为含2%~3%CO2的无菌空气，溶氧40%~50%，pH7.1~7.3，温度22~28℃，转速40~60rpm。
CN202110769430.XA 2021-07-07 2021-07-07 一种使用生物反应器培养石斑鱼细胞的方法 Active CN113444686B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110769430.XA CN113444686B (zh) 2021-07-07 2021-07-07 一种使用生物反应器培养石斑鱼细胞的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110769430.XA CN113444686B (zh) 2021-07-07 2021-07-07 一种使用生物反应器培养石斑鱼细胞的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113444686A CN113444686A (zh) 2021-09-28
CN113444686B true CN113444686B (zh) 2023-01-24

Family

ID=77815280

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110769430.XA Active CN113444686B (zh) 2021-07-07 2021-07-07 一种使用生物反应器培养石斑鱼细胞的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113444686B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101451122A (zh) * 2008-12-26 2009-06-10 中国海洋大学 褐点石斑鱼鳔细胞系的构建方法
CN102727879A (zh) * 2012-07-11 2012-10-17 中国科学院南海海洋研究所 一种石斑鱼虹彩病毒（sgiv）灭活疫苗的转瓶生产方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106337035B (zh) * 2016-08-24 2019-12-13 广州齐志生物工程设备有限公司 一种应用生物反应器大规模培养鱼成纤维细胞的工艺
CN108384748A (zh) * 2018-03-14 2018-08-10 广州齐志生物工程设备有限公司 一种自动化培养二倍体细胞的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101451122A (zh) * 2008-12-26 2009-06-10 中国海洋大学 褐点石斑鱼鳔细胞系的构建方法
CN102727879A (zh) * 2012-07-11 2012-10-17 中国科学院南海海洋研究所 一种石斑鱼虹彩病毒（sgiv）灭活疫苗的转瓶生产方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN113444686A (zh) 2021-09-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN100389193C (zh) 安全连续封闭式细胞培养、病毒生产和灭活的方法
CN101979518B (zh) 一种制备伪狂犬病病毒的方法
US11629338B2 (en) Method for acclimating and suspending Vero and second order production process for virus
CN106011083A (zh) 一种在无血清全悬浮培养的mdck细胞生长的禽流感病毒的制备方法及获得的禽流感病毒
CN110804587A (zh) 采用改良的微载体细胞培养法规模化生产间充质干细胞的方法
CN107267468A (zh) 一种无血清悬浮培养伪狂犬病毒的方法
CN108570454A (zh) Mdbk驯化悬浮方法和二阶病毒生产工艺
CN102807964A (zh) 一种动物细胞放大培养的方法
CN116555171A (zh) 一种适应无载体无血清悬浮培养的猪肌肉干细胞的驯化方法、干细胞系和应用
CN104894054B (zh) 一种猴胚胎肾上皮细胞Marc‑145悬浮适应株及其在培养蓝耳病病毒、生产蓝耳病毒疫苗中的应用
WO2022068029A1 (zh) 一种3d生物组织专用培养装置和块状培育肉的制备方法
CN112342185B (zh) 一种鸡胚细胞狂犬病病毒的生物反应器工艺
CN1556203A (zh) 动物细胞多孔微载体固定化高效培养方法及其培养基
CN113444686B (zh) 一种使用生物反应器培养石斑鱼细胞的方法
CN113265366A (zh) 一种提高硅藻中金藻昆布多糖产量的方法及其应用
CN116769697A (zh) 一种适合无血清全悬浮培养的siec-s细胞、驯化方法及应用
CN114540292B (zh) 一种麻鸭鸭胚肝间充质干细胞的悬浮驯化方法及应用
CN116064409A (zh) 一种大规模高产量细胞连续培养和收获的生产工艺
CN103083653B (zh) 一种采用微载体高密度细胞培养技术生产猪瘟活疫苗的方法
CN115287269A (zh) 一种微载体高密度培养Vero细胞生产狂犬病病毒的方法
CN102154220B (zh) 超高密度大规模产猪繁殖与呼吸综合征病毒的方法及设备
WO2021104360A1 (zh) 一种提高人多功能干细胞体外悬浮培养的效率的方法
CN101451122B (zh) 褐点石斑鱼鳔细胞系的构建方法
CN107326016B (zh) 一种微载体悬浮培养cpb细胞生产鳜传染性脾肾坏死病毒和鳜弹状病毒的方法
CN111662881A (zh) 新型冠状病毒Vero细胞灭活疫苗病毒液及其生产方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant