CN115267003B - 一种s(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯异构体含量的检测方法 - Google Patents

一种s(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯异构体含量的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种S(‑)‑4‑氯‑3‑羟基丁酸乙酯异构体含量的检测方法，涉及化学分析技术领域，本发明采用多糖衍生物涂敷型手性色谱柱和紫外检测器，以二乙醇胺的正己烷溶液作为流动相A，异丙醇作为流动相B，以对甲基苯磺酰异氰酸酯的乙腈溶液作为衍生试剂；本发明采用面积归一化法进行S(‑)‑4‑氯‑3‑羟基丁酸乙酯异构体杂质的含量计算，重现性好；且结果可完全真实地反映R(+)‑4‑氯‑3‑羟基丁酸乙酯的含量，从而可以快速测得S(‑)‑4‑氯‑3‑羟基丁酸乙酯中异构体的含量。

Description

一种S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯异构体含量的检测方法
技术领域：
本发明涉及化学分析技术领域，具体涉及一种S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯异构体含量的检测方法。
背景技术：
4-氯-3-羟基丁酸乙酯，简称CHBE，两种对映异构体的结构式如下：
CHBE在有机合成过程中是一种重要的手性中间体，其两种构型的对映异构体均是重要的手性砌块，可通过氯原子的置换、还原等反应将手性中心导入药物分子的手性侧链当中。其中，S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯是降血脂药物阿伐他汀钙的主要合成原料。
想要获得高纯度的S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯就必须控制其异构体含量，现有检测方法如气相色谱法，色谱柱洗脱出来的峰存在峰型差、分离度差、检出限高等缺陷，不能准确检出异构体含量；而通过酸酐法衍生出来的产品稳定性差，在液相色谱检测过程中容易分解。
本发明旨在提供一种S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯异构体含量的检测方法，通过考虑各因素对分离检测的综合影响，选择合适的衍生试剂、分析柱、流动相、流速以及柱温的参数，使得异构体杂质的检测结果达到最优化，具有快速简便、灵敏度高、准确可靠的优点。
发明内容：
本发明所要解决的技术问题在于提供一种S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯异构体含量的检测方法，采用HPLC法实现S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯异构体及其含量的快速检测，且该方法的专属性好，灵敏度高，准确度好，耐用性好、稳定性好。
本发明所要解决的技术问题采用以下的技术方案来实现：
一种S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯异构体含量的检测方法，采用多糖衍生物涂敷型手性色谱柱和紫外检测器，以二乙醇胺的正己烷溶液作为流动相A，异丙醇作为流动相B，以对甲基苯磺酰异氰酸酯的乙腈溶液作为衍生试剂。
所述S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的稀释溶剂为无水乙醇和正己烷的混合溶液，进样浓度为0.1～5.0mg/mL，进样体积为1～100μL。
所述紫外检测器的检测波长为210～280nm，优选为226nm。
所述正己烷、二乙醇胺的体积比为100:0.1。
所述衍生试剂中对甲基苯磺酰异氰酸酯的体积浓度为20％。
所述流动相的流速为0.5～1.5mL/min，优选为0.8～1.0mL/min。
所述色谱柱温度在20～60℃。
所述色谱柱的型号为大赛璐AD-H，4.6mm×250mm，5μm。
所述流动相采用如下的等度洗脱方式：
时间/min 流动相A/％ 流动相B/％
0 92 8
75 92 8
本发明的有益效果是：本发明提供的检测方法可以采用面积归一化法进行S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯异构体杂质的含量计算，面积归一化法具有与称样量及进样量基本不相关的特点，因此该检测方法的重现性好；而且该异构体杂质与S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的响应因子相同，其结果可完全真实地反映R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的含量，从而可以快速测得S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中异构体的含量。
附图说明：
图1为实施例1专属性试验的空白溶液的色谱图；
图2为实施例1专属性试验的系统适用性溶液的色谱图；
图3为实施例1专属性试验的异构体定位溶液的色谱图；
图4为实施例1专属性试验的供试品溶液的色谱图。
具体实施方式：
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例和图示，进一步阐述本发明。
实施例1：专属性试验
色谱条件：
仪器：岛津LC-20A液相色谱仪；
色谱柱：大赛璐AD-H，4.6mm×250mm，5μm；
检测器：UV检测器，检测波长226nm；
流速：0.9mL/min；
柱温：30℃；
等度洗脱：
时间/min 流动相A/％ 流动相B/％
0 92 8
75 92 8
流动相A：正己烷-二乙醇胺(体积比为100:0.1)
流动相B：异丙醇
衍生试剂配制：20％对甲基苯磺酰异氰酸酯的乙腈溶液(取2mL对甲基苯磺酰异氰酸酯至10mL容量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度，注：乙腈的含水量要小于0.1％，因为衍生试剂会和水起反应)。
空白溶液：取2mL乙腈，加入1mL衍生试剂反应10min，再加入无水乙醇5mL，反应5min，将衍生后溶液倒入蒸发皿中至100℃水浴锅中蒸干，用10mL无水乙醇分两次溶解并转移至25mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为空白溶液。
供试品溶液：精密称取供试品50mg至10mL容量瓶中，加2mL乙腈溶解，加入1mL衍生试剂反应10min，再加入无水乙醇5mL，反应5min，将衍生后溶液转移至100℃水浴锅中蒸干，用10mL无水乙醇分两次溶解并转移至25mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
异构体定位溶液：精密称取R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯对照品50mg至10mL容量瓶中，加2mL乙腈溶解，加入1mL衍生试剂反应10min，再加入无水乙醇5mL，反应5min，将衍生后溶液转移至100℃水浴锅中蒸干，用10mL无水乙醇分两次溶解并转移至25mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为异构体定位溶液。
异构体对照母液：精密称取R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯对照品50mg至25mL容量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为异构体对照母液。
系统适用性溶液：精密称取S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯对照品50mg至10mL容量瓶中，加2mL乙腈溶解，加入异构体对照母液0.25mL及衍生试剂1mL反应10min，再加入无水乙醇5mL，反应5min，将衍生后溶液至100℃水浴锅中蒸干，用10mL无水乙醇分两次将衍生物溶解并转移至25mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。
分别取空白溶液、供试品溶液、系统适用性溶液和异构体定位溶液，采用上述色谱条件进样检测，记录色谱图。空白溶液图谱如图1，系统适用性溶液图谱如图2，异构体定位溶液图谱如图3和供试品溶液图谱如图4。按面积归一化法计算S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯主要含量，结果如表1。
表1
异构体R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的含量不得大于0.1％。
实施例1的试验结果和图1-4表明，本发明提供的方法在检测R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯含量时，空白无干扰，具有很好的专属性，且S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯与R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的分离度均为2.0以上。
实施例2：耐用性试验
本实施例通过改变部分色谱条件的参数考察色谱方法的耐用性，以如下色谱条件为基础：
色谱条件：
仪器：岛津LC-20A液相色谱仪；
色谱柱：大赛璐AD-H，4.6×250mm，5μm；
检测器：UV检测器，检测波长226nm；
流速：0.9mL/min；
柱温：30℃；
等度洗脱：见表1。
表1
时间/min 流动相A/％ 流动相B/％
0 92 8
75 92 8
流动相A：正己烷-二乙醇胺(体积比为100:0.1)
流动相B：异丙醇
以单因素变化的方式考察改变流速、色谱柱温度、流动相比例等色谱条件对检测系统适用性溶液和灵敏度溶液的影响。主要考察改变色谱条件对系统适应性溶液中各峰分离度以及异构体杂质检出的影响。
衍生试剂配制：20％对甲基苯磺酰异氰酸酯乙腈溶液(取4mL对甲基苯磺酰异氰酸酯至20mL容量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度)。
空白溶液：取2mL乙腈溶解，加入1mL衍生试剂反应10min，再加入无水乙醇5mL，反应5min，将衍生后溶液倒入蒸发皿中至100℃水浴锅中蒸干，用10mL无水乙醇将衍生物分两次溶解并转移至25mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为空白溶液。
供试品溶液：精密称取供试品50mg至10mL容量瓶中，加2mL乙腈溶解，加入1mL衍生试剂反应10min，再加入无水乙醇5mL，反应5min，将衍生后溶液至100℃水浴锅中蒸干，用10mL无水乙醇将衍生物分两次溶解并转移至25mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
异构体对照母液：精密称取R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯对照品50mg至25mL容量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为异构体对照母液。
系统适用性溶液：精密称取S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯对照品50mg至10mL容量瓶中，加2mL乙腈溶解，加入异构体对照母液0.25mL及衍生试剂1mL反应10min，再加入无水乙醇5mL，反应5min，将衍生后溶液至100℃水浴锅中蒸干，用10mL无水乙醇将衍生物分两次溶解并转移至25mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。
在各考察色谱方法下，分别取空白溶液、系统适用性溶液和供试品溶液各进一针，检测结果如表2。
表2
实施例2的试验结果表明在单因素改变部分色谱参数的情况下，本方法依然适用于R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的含量测定，其中考察的系统适应性溶液的分离度和供试品溶液的检测情况受影响不大，所述方法具有较好的耐用性，在适当范围内变更色谱条件完全不影响本发明方法实现分析目的。
实施例3：检测限定量限试验
色谱条件同实施例1。
空白溶液：取2mL乙腈溶解，加入1mL衍生试剂反应10min，再加入无水乙醇5mL，反应5min，将衍生后溶液倒入蒸发皿中至100℃水浴锅中蒸干，用10mL无水乙醇将衍生物分两次溶解并转移至25mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为空白溶液。
S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯对照溶液：精密称取S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯对照品50mg至10mL容量瓶中，加2mL乙腈溶解，加入1mL衍生试剂反应10min，再加入无水乙醇5mL，反应5min，将衍生后溶液至100℃水浴锅中蒸干，用10mL无水乙醇分两次溶解并转移至25mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯对照溶液。
R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯对照溶液：精密称取R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯对照品50mg至10mL容量瓶中，加2mL乙腈溶解，加入1mL衍生试剂反应10min，再加入无水乙醇5mL，反应5min，将衍生后溶液至100℃水浴锅中蒸干，用10mL无水乙醇分两次溶解并转移至25mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯对照溶液。
各取上述S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯对照溶液、R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯对照溶液适量，稀释制成一系列不同浓度的溶液，测定检测限和定量限。当主峰峰高为噪音峰高的3倍时，该物质的浓度或量即为该物质的检测限；当主峰峰高为噪音峰高的10倍时，该物质的浓度或量即为该物质的定量限。结果见下表3。
表3
检测限 占供试品百分百 进样量(μg) 信噪比(S/N)
S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯 0.01％ 2.032 8.35
R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯 0.02％ 3.728 7.64
定量限 占供试品百分百 进样量(μg) 信噪比(S/N)
S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯 0.02％ 4.064 13.56
R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯 0.03％ 5.592 14.34
实施例3的试验结果表明R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的检测限为0.02％，定量限为0.03％，杂质检出良好。
实施例4：重复性试验
色谱条件同实施例1。
衍生试剂配制：20％对甲基苯磺酰异氰酸酯乙腈溶液(取2mL对甲基苯磺酰异氰酸酯至10mL容量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度)。
空白溶液：取4mL乙腈溶解，加入2mL衍生试剂反应10min，再加入无水乙醇10mL，反应5min，将衍生后溶液倒入蒸发皿中至100℃水浴锅中蒸干，用20mL无水乙醇将衍生物分两次溶解并转移至50mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为空白溶液。
异构体对照母液：精密称取R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯对照品50mg至25mL容量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为异构体对照母液。
异构体对照溶液：精密量取异构体对照母液1mL至100mL容量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为异构体对照溶液。
重复性试验溶液：精密称取供试品100mg至20mL容量瓶中，加5mL异构体对照溶液，加入2mL衍生试剂反应10min，再加入无水乙醇10mL，反应5min，将衍生后溶液至100℃水浴锅中蒸干，用20mL无水乙醇将衍生物分两次溶解并转移至50mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为重复性试验溶液，平行配制6份。
待基线平衡后，取空白溶液及重复性试验溶液6份各进样1针，记录色谱图。按面积归一化法计算6份分析重复性试验溶液中异构体的含量、平均值、相对标准偏差值(RSD)，以含量计算RSD，验证要求：RSD应小于10％。结果如表4。
表4
实施例4的试验结果表明采用本发明提供的方法检测含有杂质的精密度溶液，进样6针后R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯含量的RSD％小于5％，所述方法具有较好的重复性。
实施例5：回收率试验
色谱条件同实施例1。
衍生试剂配制：20％对甲基苯磺酰异氰酸酯乙腈溶液(取5mL对甲基苯磺酰异氰酸酯至25mL容量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度)。
空白溶液：取4mL乙腈溶解，加入2mL衍生试剂反应10min，再加入无水乙醇10mL，反应5min，将衍生后溶液倒入蒸发皿中至100℃水浴锅中蒸干，用20mL无水乙醇将衍生物分两次溶解并转移至50mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为空白溶液。
供试品溶液：精密称取供试品100mg至20mL容量瓶中，加4mL乙腈溶解，加入2mL衍生试剂反应10min，再加入无水乙醇10mL，反应5min，将衍生后溶液至100℃水浴锅中蒸干，用20mL无水乙醇将衍生物分两次溶解并转移至50mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
异构体对照母液：精密称取R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯对照品50mg至25mL容量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为异构体对照母液。
异构体对照溶液：精密量取异构体对照母液1mL至100mL容量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为异构体对照溶液。
系统适用性溶液：精密称取S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯对照品100mg至20mL容量瓶中，加4mL乙腈溶解，加入异构体对照母液0.5mL及衍生试剂2mL反应10min，再加入无水乙醇10mL，反应5min，将衍生后溶液至100℃水浴锅中蒸干，用20mL无水乙醇将衍生物分两次溶解并转移至50mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。
回收率试验溶液：精密称取S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯供试品100mg至20mL容量瓶中，分别量取4mL、5mL、6mL不同体积的异构体对照溶液于上述容量瓶中，再分别加入2mL衍生试剂反应10min，再加入无水乙醇10mL，反应5min，将衍生后溶液至100℃水浴锅中蒸干，用20mL无水乙醇将衍生物分两次溶解并转移至50mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为回收率试验溶液，每个浓度配制3份。
待系统适用性合格后，取1份供试品溶液各进1针，各浓度水平下回收率试验溶液各进样1针，记录色谱图。计算并报告9份样品的回收率单值，平均回收率(n＝9)和回收率(n＝9)的相对标准偏差值(RSD)。按照面积归一化法计算杂质的含量，然后按照以下公式分别计算各浓度水平下回收率试验溶液中杂质回收率，检测结果见表5。
式中：
W测的量：测得的回收率试验溶液中的R异构体杂质百分比；
W加入：加入回收率试验溶液中的R异构体杂质百分比；
W含有量：回收率试验溶液中样品本身含有的R异构体杂质百分比；
回收率试验样品溶液与杂质对照溶液相比的百分比，80％、100％、120％；
表5
实施例5的试验结果通过测定S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中含有不同浓度水平的R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的回收率，考察本发明的分析方法在测定R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯含量的准确性。经试验结果表明，不同浓度水平的R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的回收率均在80-120％之间，多个样品回收率的RSD％小于10％。因此所述方法具有很好的准确性。
综上所述，本发明提供的检测方法在测定S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯含量时具有专属性好，灵敏度高，重现性好，准确度高等优点。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (8)

1.一种S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯异构体含量的检测方法，其特征在于：异构体为R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯，采用多糖衍生物涂敷型手性色谱柱和紫外检测器，以二乙醇胺的正己烷溶液作为流动相A，异丙醇作为流动相B，以对甲基苯磺酰异氰酸酯的乙腈溶液作为衍生试剂；
配制空白溶液、供试品溶液、异构体定位溶液、异构体对照母液和系统适用性溶液；
分别取所述空白溶液、所述供试品溶液、所述系统适用性溶液和所述异构体定位溶液，采用色谱进样检测，记录色谱图；按面积归一化法计算S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯主要含量；
所述流动相采用如下的等度洗脱方式：
时间/min 流动相A/% 流动相B/%
0 92 8
75 92 8；
所述空白溶液的配制方法为：取乙腈，加入衍生试剂和无水乙醇，将衍生后溶液倒入蒸发皿中至水浴锅中蒸干，用无水乙醇溶解并转移至容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为空白溶液；
所述供试品溶液的配制方法为：精密称取供试品，加乙腈溶解，加入衍生试剂和无水乙醇，将衍生后溶液转移至水浴锅中蒸干，用无水乙醇溶解并转移至容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；
所述异构体定位溶液的配制方法为：精密称取R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯对照品，加乙腈溶解，加入衍生试剂和无水乙醇，将衍生后溶液转移至水浴锅中蒸干，用无水乙醇溶解并转移至容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为异构体定位溶液；
所述异构体对照母液的配制方法为：精密称取R(+)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯对照品至容量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为异构体对照母液；
所述系统适用性溶液的配制方法为：精密称取S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯对照品，加乙腈溶解，加入异构体对照母液及衍生试剂和无水乙醇，将衍生后溶液转移至水浴锅中蒸干，用无水乙醇溶解并转移至容量瓶中，正己烷定容至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述S(-)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的稀释溶剂为无水乙醇和正己烷的混合溶液，进样浓度为0.1~5.0 mg/mL，进样体积为1~100 μL。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述紫外检测器的检测波长为210~280 nm，优选为226 nm。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述正己烷、二乙醇胺的体积比为100: 0.1。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述衍生试剂中对甲基苯磺酰异氰酸酯的体积浓度为20%。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述流动相的流速为0.5~1.5 mL/min，优选为0.8~1.0 mL/min。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述色谱柱温度在20~60℃。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述色谱柱的型号为大赛璐AD-H，4.6mm×250mm，5μm。
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Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0573184A1 (en) * 1992-06-02 1993-12-08 Takasago International Corporation t-Butyl (R)-(-)-4-Cyano-3-hydroxybutyrate and process for its preparation
CN101863850A (zh) * 2010-07-09 2010-10-20 中国药品生物制品检定所 (r，s)-告依春中表告依春和s-告依春的分离方法
CN104198611A (zh) * 2014-09-16 2014-12-10 德州博诚制药有限公司 奥拉西坦样品杂质检测装置
CN204165948U (zh) * 2014-09-16 2015-02-18 德州博诚制药有限公司 奥拉西坦样品杂质检测装置
CN104483400A (zh) * 2014-11-20 2015-04-01 美吉斯制药（厦门）有限公司 一种用液相色谱法分离测定奥拉西坦及其中间体的方法
WO2016021192A1 (en) * 2014-08-08 2016-02-11 Eisai R&D Management Co., Ltd. Process for production of (s)-(tetrahydrofuran-3-yl)hydrazine
CN107192766A (zh) * 2016-03-14 2017-09-22 广东东阳光药业有限公司 一种用hplc测定苏沃雷生手性异构体的方法
CN108918700A (zh) * 2018-05-18 2018-11-30 合肥合源药业有限公司 一种同时检测他汀侧链及其对映异构体杂质的方法
CN111650288A (zh) * 2020-04-16 2020-09-11 江苏艾立康药业股份有限公司 一种(r)-3-叔丁氧羰基氨基哌啶对映异构体的检测方法
CN112147261A (zh) * 2020-10-27 2020-12-29 精晶药业股份有限公司 一种左旋肉碱反应液中r-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的高效液相检测方法
CN113092629A (zh) * 2021-04-14 2021-07-09 合肥利夫生物科技有限公司 一种s-(+)-3-羟基四氢呋喃的纯化和异构体检测方法
CN113358773A (zh) * 2021-05-21 2021-09-07 健民药业集团股份有限公司 一种检测盐酸托莫西汀对映异构体的反相液相色谱方法
WO2022062961A1 (zh) * 2020-09-23 2022-03-31 海南通用三洋药业有限公司 一种检测依折麦布辛伐他汀片中6-氧代辛伐他汀含量的方法
CN114660183A (zh) * 2020-12-22 2022-06-24 重庆药友制药有限责任公司 一种分离测定l-丙氨酸异丙酯盐酸盐对映异构体的高效液相色谱分析方法

Patent Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0573184A1 (en) * 1992-06-02 1993-12-08 Takasago International Corporation t-Butyl (R)-(-)-4-Cyano-3-hydroxybutyrate and process for its preparation
CN101863850A (zh) * 2010-07-09 2010-10-20 中国药品生物制品检定所 (r，s)-告依春中表告依春和s-告依春的分离方法
WO2016021192A1 (en) * 2014-08-08 2016-02-11 Eisai R&D Management Co., Ltd. Process for production of (s)-(tetrahydrofuran-3-yl)hydrazine
CN104198611A (zh) * 2014-09-16 2014-12-10 德州博诚制药有限公司 奥拉西坦样品杂质检测装置
CN204165948U (zh) * 2014-09-16 2015-02-18 德州博诚制药有限公司 奥拉西坦样品杂质检测装置
CN104483400A (zh) * 2014-11-20 2015-04-01 美吉斯制药（厦门）有限公司 一种用液相色谱法分离测定奥拉西坦及其中间体的方法
CN107192766A (zh) * 2016-03-14 2017-09-22 广东东阳光药业有限公司 一种用hplc测定苏沃雷生手性异构体的方法
CN108918700A (zh) * 2018-05-18 2018-11-30 合肥合源药业有限公司 一种同时检测他汀侧链及其对映异构体杂质的方法
CN111650288A (zh) * 2020-04-16 2020-09-11 江苏艾立康药业股份有限公司 一种(r)-3-叔丁氧羰基氨基哌啶对映异构体的检测方法
WO2022062961A1 (zh) * 2020-09-23 2022-03-31 海南通用三洋药业有限公司 一种检测依折麦布辛伐他汀片中6-氧代辛伐他汀含量的方法
CN112147261A (zh) * 2020-10-27 2020-12-29 精晶药业股份有限公司 一种左旋肉碱反应液中r-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的高效液相检测方法
CN114660183A (zh) * 2020-12-22 2022-06-24 重庆药友制药有限责任公司 一种分离测定l-丙氨酸异丙酯盐酸盐对映异构体的高效液相色谱分析方法
CN113092629A (zh) * 2021-04-14 2021-07-09 合肥利夫生物科技有限公司 一种s-(+)-3-羟基四氢呋喃的纯化和异构体检测方法
CN113358773A (zh) * 2021-05-21 2021-09-07 健民药业集团股份有限公司 一种检测盐酸托莫西汀对映异构体的反相液相色谱方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘兰英 主编.《仪器分析》.中国商业出版社,2008,第245页. *

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Publication number Publication date
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