CN115252658A - 一种去壁灵芝孢子粉的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种去壁灵芝孢子粉及其用途，所述去壁灵芝孢子粉含有9.60～23.90％的多糖和4.9～19.6％的三萜，所述去壁灵芝孢子粉是通过将预处理后的灵芝孢子粉采用闪式提取、浓缩干燥后得到；所述去壁灵芝孢子粉用于制备预防、减轻或治疗老年痴呆相关疾病的药物。本发明中得到的去壁灵芝孢子粉质量上乘，其中包含16.60～23.90％的多糖和4.9～5.6％的三萜，同时通过验证大鼠模型该去壁灵芝孢子粉对老年痴呆具有显著的疗效。制备该去壁灵芝孢子粉的总体工序流程简单，其主要含有原料初筛‑清洗过滤‑闪式提取‑浓缩干燥等工艺流程，得到的去壁灵芝孢子粉的有效成分含量多，且无杂质引入。
Description
技术领域
本发明涉及中草药技术领域，尤其涉及一种去壁灵芝孢子粉的应用。
背景技术
老年痴呆患者不仅本人痛苦，而且对家庭和社会造成很大的负担，CN201310196819采用芦笋和褪黑素的混合来预防和改善老年痴呆，然而其改善效果不理想，周期长，CN201810104935通过采用水苏糖、海藻糖、低聚异麦芽糖、低聚果糖、异麦芽酮糖、菊粉、魔芋多糖等益生元和嗜酸乳杆菌、短乳杆菌、枯草芽孢杆菌、婴儿双歧杆菌、青春双歧杆菌、长双歧杆菌、屎肠球菌等益生菌来预防老年痴呆，然而其只是起到预防的作用，效果单一。CN201810533553采用将灵芝孢子粉提取废料碎后与水混合，加热提取、分离后得到灵芝孢子粉壁壳粗多糖，然而其只是粗糖的提取，在提取过程中也不能保证有效活性物质的稳定性。
本发明意在提供一种去壁灵芝孢子粉应用，所述去壁灵芝孢子粉用于制备预防、减轻或治疗老年痴呆相关疾病的药物中。所述去壁灵芝孢子粉通过先预处理 -分级提取-浓缩干燥的方法获得，其中该种去壁灵芝孢子粉包含9.60～23.90％的多糖和4.9～19.6％的三萜类物质。
发明内容
为了解决上述问题，本发明第一方面提供一种去壁灵芝孢子粉的应用，所述去壁灵芝孢子粉用于制备预防、减轻或治疗老年痴呆相关疾病的药物。
本申请中所述药物的剂型包括但不限于粉剂、颗粒剂、膏剂、片剂、胶囊、汤剂、散剂、丸剂等。
在一种实施方式中，所述去壁灵芝孢子粉含有16.60～23.90wt％的多糖和 4.9～5.6wt％的三萜。
本申请中多糖含量以葡萄糖计，三萜含量以齐墩果酸计。
在一些优选的实施方式中，所述老年痴呆相关疾病包括早老性痴呆、血管性痴呆或早老性痴呆和血管性痴呆二者兼有的混合型痴呆。
在一些优选的实施方式中，所述药物针对于老年痴呆中的学习认知记忆功能障碍、思维迟钝、焦虑与恐惧或存在空间定向障碍。
在一些优选的实施方式中，所述药物可抑制β-淀粉样蛋白沉积和Tau蛋白超磷酸化、以及BDNF-TrkB神经营养信号通路。
所述去壁灵芝孢子粉以每天3.6-7.2g/60Kg体重的量施用。
本申请中每天3.6-7.2g/60Kg体重的量的施用对象为人，换算为以每天 0.36-0.72g/kg体重的量施用SD大鼠。
在一些优选的实施方式中，所述去壁灵芝孢子粉是通过将预处理后的灵芝孢子粉采用闪式提取、浓缩干燥后得到。
在一些优选的实施方式中，所述预处理过程为将灵芝孢子粉进行除杂、清洗过滤。
在一些优选的实施方式中，在除杂时，需将灵芝孢子粉原料过筛处理。
在一些更优选的实施方式中，在清洗过滤时，用纯水将过筛的灵芝孢子粉浸没、静置后取中间层进行过滤处理。
在一些更优选的实施方式中，在清洗过滤时，用纯水将过筛的灵芝孢子粉浸没、静置后取中间层进行离心处理。
在一些优选的实施方式中，在闪式提取过程中，采用水或不同浓度的乙醇溶液进行提取。
在一些优选的实施方式中，不同浓度的乙醇溶液中至少还包含一种辅料，所述辅料优选为壳聚糖。
通过长时间的浸泡，孢子粉外壁上的几丁质纤维素在水中膨胀，自身吸收大量的水分，在提取过程中，纤维素进一步迅速膨胀，这一过程可能导致纤维素之间的作用力被分散，可以促进活性物质的释放，而辅料优选的壳聚糖，由于结构与纤维素接近，且作为糖分子，提高活性物质稳定性。
在一些优选的实施方式中，所述壳聚糖的添加量为去壁灵芝孢子粉的添加量的1％～5％，优选为1.5％～3.5％，更优选为2％；所述添加量指的是质量。
在一些优选的实施方式中，所述闪式提取过程中乙醇溶液的体积浓度为 10％-80％。
在一些更优选的实施方式中，所述闪式提取过程中乙醇溶液的体积浓度为 20％-60％。
在一些更优选的实施方式中，所述闪式提取过程中乙醇溶液的体积浓度分别为20％、30％、50％。
研究中，辅料的加入在提取时能容易将多糖或三萜被提取出来，此时去杂去瘪的灵芝孢子粉还存在少量水，将其在50％的乙醇浓度下提取实际浓度要比 50％低，若此时浓度过高，则溶液极性过低，容易提取出多种杂质，影响产品质量；若浓度过低，提取时间过长，在提取中不能避免活性物质的氧化，所以较好的是采用分级提取的方式，研究后最佳的提取方式为先采用1～3倍的50％乙醇提取0.5～1h后离心收集上清液；再依次用30％、20％的乙醇提取1～2h，此时产品质量保持良好。
本发明第二方面提供一种所述的去壁灵芝孢子粉的制备工艺，包括以下步骤：
S1，原料初筛，将灵芝孢子粉原料过筛除去大颗粒杂质，得到过筛的灵芝孢子粉；
S2，清洗过滤：将过筛的灵芝孢子粉加入纯化水搅拌浸没，然后静置至出现沉淀，除去上层瘪壳、下层泥沙，取中层灵芝孢子粉悬浮液采用过滤或者离心去除大量水分，得到去杂去瘪的灵芝孢子粉；
S3，闪式提取：将经步骤S2处理后的灵芝孢子粉置于闪式提取器中，加入壳聚糖和不同体积浓度的乙醇溶液(灵芝孢子粉与乙醇溶液的料液比为1：8-20，优选为1：12)在室温下浸泡4-48h，间断破碎提取30min-180min，直至匀浆后过滤，将过滤后的药渣继续按照步骤S3重复提取1～2次。
S4，浓缩、干燥：将步骤S3后的提取液混合，浓缩至比重1.1～1.3，喷雾干燥，得所述去壁灵芝孢子粉。
在闪式提取过程中先浸泡处理能使外层先行软化，此外通过浸泡隔绝氧气避免活性物质发生氧化。浸泡时间可依据原料的重量进行调节。
本发明的方法，总体工序流程简单，但却在每一步骤的实施中不引进外来杂质的前提下，通过本发明优选的原料初筛-清洗过滤-闪式提取-浓缩干燥的方法获得一种新的工艺流程，此种工艺流程得到的去壁灵芝孢子粉质量上乘，其中包含9.60～23.90％的多糖和4.9～19.6％的三萜，同时，通过验证大鼠模型试验，该去壁灵芝孢子粉对老年痴呆具有非常好的疗效，不论是此种方法或是产品都能够大量推广使用。
有益效果
本发明中得到的去壁灵芝孢子粉质量上乘，苦味浓郁、不含油蒿味且色泽厚重、可观，其中包含9.60～23.90％的多糖和4.9～19.6％的三萜，通过验证大鼠模型试验，结果显示该去壁灵芝孢子粉对老年痴呆具有非常好的疗效。本发明的方法，总体工序流程简单，通过本发明优选的原料初筛-清洗过滤-闪式提取-浓缩干燥的方法获得一种新的工艺流程，此种工艺流程得到的去壁灵芝孢子粉质量上乘。
具体实施方式
实施例
实施例1
实施例1提供了一种去壁灵芝孢子粉
所述去壁灵芝孢子粉由下述制备工艺制备而得，具体包括以下步骤：
S1，原料初筛，将灵芝孢子粉原料过筛除去大颗粒杂质，得到过筛的灵芝孢子粉；
S2，清洗过滤：将过筛的灵芝孢子粉加入纯化水搅拌浸没，然后静置至出现沉淀，除去上层瘪壳、下层泥沙，取中层灵芝孢子粉悬浮液采用过滤或者离心去除大量水分，得到去杂去瘪的灵芝孢子粉；
S3，闪式提取：将经步骤S2处理后的灵芝孢子粉置于闪式提取器中，加入壳聚糖和体积浓度为60％的乙醇溶液(所述壳聚糖加入的质量为去壁灵芝孢子粉加入质量的1％，灵芝孢子粉与乙醇的料液比为1：8)在室温下浸泡4h；再利用体积浓度为60％的乙醇对浓缩液进行提取1.5h，过滤后收集提取液；依次再利用体积浓度为40％的乙醇、体积浓度为30％的乙醇对浓缩液各提取1h，过滤后收集提取液，最后合并三次过滤所得的提取液。
S4，浓缩、干燥：将步骤S3后的提取液浓缩至比重1.1，喷雾干燥，得所述去壁灵芝孢子粉。
实施例2
实施例2提供了一种去壁灵芝孢子粉
所述去壁灵芝孢子粉由下述制备工艺制备而得，具体包括以下步骤：
S1，原料初筛，将灵芝孢子粉原料过筛除去大颗粒杂质，得到过筛的灵芝孢子粉；
S2，清洗过滤：将过筛的灵芝孢子粉加入纯化水搅拌浸没，然后静置至出现沉淀，除去上层瘪壳、下层泥沙，取中层灵芝孢子粉悬浮液采用过滤或者离心去除大量水分，得到去杂去瘪的灵芝孢子粉；
S3，闪式提取：将经步骤S2处理后的灵芝孢子粉置于闪式提取器中，加入壳聚糖和体积浓度为70％的乙醇溶液(所述壳聚糖加入的质量为去壁灵芝孢子粉加入质量的5％，灵芝孢子粉与乙醇的料液比为1：20)在室温下浸泡48h；再利用体积浓度为70％的乙醇对浓缩液进行提取1.5h，过滤后收集提取液；依次再利用体积浓度为50％的乙醇、体积浓度为40％的乙醇对浓缩液各提取1h，过滤后收集提取液，最后合并三次过滤所得的提取液。
S4，浓缩、干燥：将步骤S3后的提取液浓缩至比重1.25，喷雾干燥，得所述去壁灵芝孢子粉。
实施例3
实施例3提供了一种去壁灵芝孢子粉
所述去壁灵芝孢子粉由下述制备工艺制备而得，具体包括以下步骤：
S1，原料初筛，将灵芝孢子粉原料过筛除去大颗粒杂质，得到过筛的灵芝孢子粉；
S2，清洗过滤：将过筛的灵芝孢子粉加入纯化水搅拌浸没，然后静置至出现沉淀，除去上层瘪壳、下层泥沙，取中层灵芝孢子粉悬浮液采用过滤或者离心去除大量水分，得到去杂去瘪的灵芝孢子粉；
S3，闪式提取：将经步骤S2处理后的灵芝孢子粉置于闪式提取器中，加入壳聚糖和体积浓度为50％的乙醇溶液(所述壳聚糖加入的质量为去壁灵芝孢子粉加入质量的2％，灵芝孢子粉与纯水的料液比为1：12)在室温下浸泡24h；利用体积浓度为50％的乙醇对浓缩液进行提取1.5h，过滤后收集提取液；依次再利用体积浓度为30％的乙醇、体积浓度为20％的乙醇对浓缩液各提取1h，过滤后收集提取液，最后合并三次过滤所得的提取液。
S4，浓缩、干燥：将步骤S3后的提取液浓缩至比重1.2，喷雾干燥，得所述去壁灵芝孢子粉。
实施例4去壁灵芝孢子粉对STZ-icv诱导的散发性老年痴呆模型大鼠的学习人之记忆功能的影响
4.1试验药物
实施例3制备所得的去壁灵芝孢子粉
4.2受试动物
SD大鼠，体重180-220g，雄性，由北京大学医学部动物部提供。
4.3剂量设计
空白组及模型组：生理盐水，给药1mL/250g体重，灌胃给药。
低剂量：每天0.18g/kg，45mg/mL，溶于生理盐水，给药1mL/250g体重。
中剂量：每天0.36g/kg，90mg/mL，溶于生理盐水，给药1mL/250g体重。
高剂量：每天0.72g/kg，90mg/mL，溶于生理盐水，给药1mL/250g体重。
其中中剂量是由对应人用剂量4g/天，按体表面积换算所得。
每日一次灌胃给药，连续给药14天。
4.4实验方法
(1)SD雄性大鼠，按体重随机分为5组、空白对照组，模型组、模型+低剂量组、模型+中剂量组和模型+高剂量组，每组动物8-12只，
(2)制作STZ-icv大鼠散发型AD模型：取SD雄性大鼠32只，腹腔注射 10％水合氯醛麻醉(0.4mL100g体重)。用大鼠脑立体定位仪，经手术将微注射套管准确插入侧脑室。术后大鼠给予青霉素钠盐5U肌注抗炎，每日一次，连续4 天。大鼠术后恢复7天，在术后第8天和第10天，用微量注射器沿插管轻轻插入侧脑室，分别缓慢注射链脲佐菌素或溶媒人工脑脊液，注射后留针1min。其中对照组注射4μL人工脑脊液，模型组和给药组注射4μL3mg/kgSTZ，注射速度为0.84μL/min。
(3)从造模第1天开始，连续灌胃给与去壁灵芝孢子粉14天，每日一次。
(4)旷场实验评价：将物放入旷场反应箱内底面中心，同时进行摄像和计时。观察一定时间后停止摄像，观察时间可根据实验定，一般为3-5min。
(5)Morris水迷宫评价：开始造模第8天至第13天进行水迷宫训练，连续训练5天。给药后第14天进行水迷宫实验。
5实验结果
去壁灵芝孢子粉可明显抑制STZ-icv诱导的散发型AD模型大鼠形成学习记忆功能障碍。
根据实验结果，在水迷宫实验训练过程中，对大鼠上台潜伏期进行分析的结果表明，散发型AD模型大鼠的学习记忆能力明显受损，灌胃给予中剂量及高剂量的去壁灵孢子粉可以抑制STZ-icv诱导的大鼠学习记忆能力损伤，但低剂量组无效(数据见表1)。
表1
性能测试
1、苦味浓度评价：对实施例1～3得到的去壁灵芝孢子粉进行苦味浓度评价，评价标准为选取10位本领域资深技术人员，所述资深即为在本领域工作时长达 10年以上，其中有9人及以上认为该去壁灵芝孢子粉苦味浓郁，则为优；只有 6-8人觉得苦味浓重则为良，不到6人觉得苦味浓重，则为中；结果见表2。
2、油蒿味测试：对实施例1～3得到的去壁灵芝孢子粉进行油蒿味测试，将实施例所得到的去壁灵芝孢子粉密封贮存一个月，一个月后观察其是否产生酸败味，具体见表2。
3、色泽：对实施例1～3得到的去壁灵芝孢子粉用肉眼观察其色泽度，具体见表2。
表2
Claims (10)
1.一种去壁灵芝孢子粉的应用，其特征在于，所述去壁灵芝孢子粉用于制备预防、减轻或治疗老年痴呆相关疾病的药物；所述去壁灵芝孢子粉含有16.60～23.90wt％的多糖和4.9～5.6wt％的三萜；所述去壁灵芝孢子粉以每天3.6-7.2g/60Kg体重的量施用。
2.根据权利要求1所述的去壁灵芝孢子粉的应用，其特征在于，所述老年痴呆相关疾病包括早老性痴呆、血管性痴呆或早老性痴呆和血管性痴呆二者兼有的混合型痴呆。
3.根据权利要求2所述的去壁灵芝孢子粉的应用，其特征在于，所述药物针对于老年痴呆中的学习认知记忆功能障碍、思维迟钝、焦虑与恐惧或存在空间定向障碍。
4.根据权利要求3所述的去壁灵芝孢子粉的应用，其特征在于，所述药物可抑制β-淀粉样蛋白沉积和Tau蛋白超磷酸化、以及BDNF-TrkB神经营养信号通路。
5.根据权利要求1所述的去壁灵芝孢子粉的应用，其特征在于，所述去壁灵芝孢子粉是通过将预处理后的灵芝孢子粉采用闪式提取、浓缩干燥后得到。
6.根据权利要求5所述的去壁灵芝孢子粉的应用，其特征在于，所述预处理过程为将灵芝孢子粉进行除杂、清洗过滤。
7.根据权利要求5所述的去壁灵芝孢子粉的应用，其特征在于，在闪式提取过程中，采用水或不同浓度的乙醇溶液进行提取。
8.根据权利要求7所述的去壁灵芝孢子粉的应用，其特征在于，所述不同浓度的乙醇溶液中至少还包含一种辅料，所述辅料为壳聚糖。
9.根据权利要求8所述的去壁灵芝孢子粉的应用，其特征在于，所述壳聚糖的添加量为去壁灵芝孢子粉的添加量的1％～5％。
10.根据权利要求7所述的去壁灵芝孢子粉的应用，其特征在于，所述闪式提取过程中乙醇溶液的体积浓度为10％-80％。
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