CN115251042A - 一种家禽精液稀释缓冲液及其制备和家禽精液冷存方法 - Google Patents
一种家禽精液稀释缓冲液及其制备和家禽精液冷存方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种家禽精液稀释缓冲液,包括:第一组分和第二组分;第一组分包括:基础缓冲液、复合溶液a、灭活卵黄,基础缓冲液、复合溶液a、灭活卵黄的质量比为80‑130:1‑5:1‑5;第二组分包括:基础缓冲液、复合溶液b、二甲基甲酰胺、灭活卵黄,基础缓冲液、复合溶液b、灭活卵黄、二甲基甲酰胺的质量比为80‑130:1‑5:20‑30:1‑5;其中,基础缓冲液包括:葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素、双蒸水;葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素、双蒸水的质量比为1‑5:1‑5:5‑10:0.01‑0.05:0.01‑0.05:150‑250。
Description
技术领域
本发明涉及家禽育种技术领域,尤其涉及一种家禽精液稀释缓冲液及其制备方法,以及一种家禽精液的冷存方法。
背景技术
目前,随着家禽的推广普及,越来越多的家禽饲养户及生产厂家开始采用人工授精技术,这对提高种禽的利用率和节省种禽饲料具有重要意义。家禽人工授精技术是现代育种和生产中必不可少的手段,其主要优越性是加速良种化进程;提高优秀家禽的利用率;利于防止疾病的相互传播等。由于家禽精子的密度大且采精量很少,一般将家禽精液稀释后输精,精液冷冻稀释液是保障精液冷冻降温过程中的缓冲和生存环境,是冷冻保存精液的必要基础物质,它必须具备较强的缓冲能力、适宜的pH值及渗透压,采用精液冷冻稀释液可最大限度地利用优秀种禽的精液,更能节约饲养成本,可提高经济效益。
一般情况下,正常的精液是比较黏稠的,它是由精子和精浆两部分组成。精子是在睾丸内产生,并且在附睾内成熟,再通过雄性输精管道排出,在精液中占的比例约为5%左右。目前,精液冷冻稀释液主要成分有冷冻保护剂、缓冲液、盐类、糖类以及抗生素等。随着人们对禽类食品需求量的日益增加,中国养禽业规模化与集约化程度逐年提高,稀释液不仅可以使密度高、容量低的精液分布均勾,扩大其精液量,增强其授精能力,充分提高优良种禽的配种效率,而且还能短期甚至长期保存精液,利于运输。
目前如何确定家禽稀释缓冲液的化学成分是一个十分复杂的课题。同一稀释缓冲液对不同动物的精液作用不同,并且同种物质且不同的物质剂量对同种动物精液作用亦不同,同时家禽精液经过冷冻保存后,对家禽精子造成的机械损伤直接导致解冻后精子活力的下降,目前如何制备一种适用于家禽的稀释缓冲液,成为目前需要解决的技术问题。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点,而提出的一种家禽精液稀释缓冲液及其制备方法,以及一种家禽精液的冷存方法。
一种家禽精液稀释缓冲液,包括:第一组分和第二组分;第一组分包括:基础缓冲液、复合溶液a、灭活卵黄,基础缓冲液、复合溶液a、灭活卵黄的质量比为80-130:1-5:1-5;第二组分包括:基础缓冲液、复合溶液b、灭活卵黄、二甲基甲酰胺,基础缓冲液、复合溶液b、灭活卵黄、二甲基甲酰胺的质量比为80-130:1-5:20-30:1-5;其中,基础缓冲液包括:葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素、双蒸水;葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素、双蒸水的质量比为1-5:1-5:5-10:0.01-0.05:0.01-0.05:150-250。
优选地,复合溶液a包括:咖啡酸苯乙酯、表儿茶素、双蒸水;咖啡酸苯乙酯、表儿茶素、双蒸水的质量比为0.01-0.05:0.01-0.05:10-20。
优选地,咖啡酸苯乙酯、表儿茶素的质量比为0.02-0.04:0.02-0.04。
优选地,复合溶液b包括:槲皮素、海藻酸、双蒸水;槲皮素、海藻酸、双蒸水的质量比为0.01-0.05:0.01-0.05:10-20。
优选地,槲皮素、海藻酸的质量比为0.02-0.04:0.02-0.04。
优选地,基础缓冲液的pH值为7-7.5。
上述家禽精液稀释缓冲液的制备方法,包括如下步骤:
(1)将咖啡酸苯乙酯、表儿茶素溶于双蒸水得到复合溶液a;
(2)将槲皮素、海藻酸溶于双蒸水得到复合溶液b;
(3)将葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素加入双蒸水中搅拌均匀,调节体系pH值为7-7.5得到基础缓冲液;
(4)向基础缓冲液依次加入复合溶液a、灭活卵黄搅拌均匀得到第一组分;
(5)向基础缓冲液依次加入复合溶液b、二甲基甲酰胺、灭活卵黄搅拌均匀得到第二组分。
一种家禽精液的冷存方法,包括如下步骤:将家禽精液与上述家禽精液稀释缓冲液中第一组分混合均匀,分装于冻存管内,降温至2-5℃,再加入上述家禽精液稀释缓冲液中第二组分混合均匀,移入液氮气相中熏蒸2-6min,加入至液氮中冷冻保存。
优选地,家禽精液与上述家禽精液稀释缓冲液中第一组分的质量比为1:5-7。
优选地,家禽精液与上述家禽精液稀释缓冲液中第二组分的质量比为1:2-5。
本发明的技术效果如下所示:
(1)由于咖啡酸苯乙酯结构中含有O-二羟基(儿茶酚)苯基结构,可有效清除自由基,本发明采用其与表儿茶素复配,不仅可清除体系中自由基,而且可与参与自由基生成的金属离子反应,从源头减少自由基的产生。将第一组分首先与家禽精液混合复配,可有效维持精子细胞内氧化还原系统的平衡,降低过氧化反应对精子质膜结构的损伤,进而提高精子活力。
而咖啡酸苯乙酯表面的酚羟基,可有效降低精液低温环境下冰晶的形成量,减少针形冰晶的形成,即使未添加二甲基甲酰胺,也可减少冰晶对精子的机械性损伤,最终提高家禽冷冻精液的存活率、活力、顶体完整性和质膜完整性。
(2)本发明采用槲皮素与海藻酸配合,可有效降低液氮冷冻过程中精子的冷应激,并可避免液氮环境细胞膜通透性增强和膜上通道受损,有效维持低温环境精子代谢平衡,避免低温环境镜子膜发生结构损伤,有效改善冷冻效果。
其中,槲皮素亲水性差,其结构上的苯环可与蛋白质脯氨酸残基、酚羟基的氢键作用,并吸附或渗透到脂质双分子层中与膜相互作用,从而保护精子质膜和顶体结构的完整性,而配合海藻酸与膜上的生物大分子如糖类、蛋白质等形成稳定复合物,从而维持精子膜构。
本发明在冷冻保存过程中,降温至5℃后,加入第二组分进行液氮熏蒸后进行液氮冷冻,可有效维持超低温环境下精子膜构及其结构功能,保证解冻后精子保持正常的运动性能。本精液稀释液普遍适用于鸡、鸭、鹅等家禽精液的稀释或超低温冷冻保存。
附图说明
图1为采用实施例5、对比例1-2的方法冻存复苏后4℃时精子存活率对比图。
图2为采用实施例5、对比例1-2的方法冻存复苏后精子的畸形率和顶体完整率对比图。
图3为采用实施例5、对比例1-2的方法冻存复苏后精子进行受精测试,其产蛋率、受精率、死淘率的对比图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。
实施例1
一种家禽精液稀释缓冲液,包括:第一组分和第二组分。
第一组分包括:基础缓冲液80kg,复合溶液a1kg,灭活卵黄1kg。复合溶液a包括:咖啡酸苯乙酯0.01kg,表儿茶素0.01kg,双蒸水10kg。
第二组分包括:基础缓冲液80kg,复合溶液b1kg,灭活卵黄20kg,二甲基甲酰胺1kg。复合溶液b包括:槲皮素0.01kg,海藻酸0.01kg,双蒸水10kg。
其中,基础缓冲液包括:葡萄糖1kg,柠檬酸1kg,三羟甲基氨基甲烷5kg,青霉素0.01kg,链霉素0.01kg,双蒸水150kg。
上述家禽精液稀释缓冲液的制备方法,包括如下步骤:
(1)将咖啡酸苯乙酯、表儿茶素溶于双蒸水得到复合溶液a;
(2)将槲皮素、海藻酸溶于双蒸水得到复合溶液b;
(3)将葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素加入双蒸水中搅拌均匀,调节体系pH值为7-7.5得到基础缓冲液;
(4)向基础缓冲液依次加入复合溶液a、灭活卵黄搅拌均匀得到第一组分;
(5)向基础缓冲液依次加入复合溶液b、二甲基甲酰胺、灭活卵黄搅拌均匀得到第二组分。
一种家禽精液的冷存方法,包括如下步骤:将家禽精液与第一组分按质量比为1:5混合均匀,分装于冻存管内,降温至2℃,加入第二组分混合均匀,家禽精液与第二组分的质量比为1:2,移入液氮气相中熏蒸2min,加入至液氮中冷冻保存。
实施例2
一种家禽精液稀释缓冲液,包括:第一组分和第二组分。
第一组分包括:基础缓冲液130kg,复合溶液a5kg,灭活卵黄5kg。复合溶液a包括:咖啡酸苯乙酯0.05kg,表儿茶素0.05kg,双蒸水20kg。
第二组分包括:基础缓冲液130kg,复合溶液b5kg,灭活卵黄30kg,二甲基甲酰胺5kg。复合溶液b包括:槲皮素0.05kg,海藻酸0.05kg,双蒸水20kg。
其中,基础缓冲液包括:葡萄糖5kg,柠檬酸5kg,三羟甲基氨基甲烷10kg,青霉素0.05kg,链霉素0.05kg,双蒸水250kg。
上述家禽精液稀释缓冲液的制备方法,包括如下步骤:
(1)将咖啡酸苯乙酯、表儿茶素溶于双蒸水得到复合溶液a;
(2)将槲皮素、海藻酸溶于双蒸水得到复合溶液b;
(3)将葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素加入双蒸水中搅拌均匀,调节体系pH值为7-7.5得到基础缓冲液;
(4)向基础缓冲液依次加入复合溶液a、灭活卵黄搅拌均匀得到第一组分;
(5)向基础缓冲液依次加入复合溶液b、二甲基甲酰胺、灭活卵黄搅拌均匀得到第二组分。
一种家禽精液的冷存方法,包括如下步骤:将家禽精液与第一组分按质量比为1:7混合均匀,分装于冻存管内,降温至5℃,加入第二组分混合均匀,家禽精液与第二组分的质量比为1:5,移入液氮气相中熏蒸6min,加入至液氮中冷冻保存。
实施例3
一种家禽精液稀释缓冲液,包括:第一组分和第二组分。
第一组分包括:基础缓冲液90kg,复合溶液a4kg,灭活卵黄2kg。复合溶液a包括:咖啡酸苯乙酯0.04kg,表儿茶素0.02kg,双蒸水17kg。
第二组分包括:基础缓冲液90kg,复合溶液b4kg,灭活卵黄22kg,二甲基甲酰胺4kg。复合溶液b包括:槲皮素0.02kg,海藻酸0.04kg,双蒸水13kg。
其中,基础缓冲液包括:葡萄糖4kg,柠檬酸2kg,三羟甲基氨基甲烷8kg,青霉素0.02kg,链霉素0.04kg,双蒸水180kg。
上述家禽精液稀释缓冲液的制备方法,包括如下步骤:
(1)将咖啡酸苯乙酯、表儿茶素溶于双蒸水得到复合溶液a;
(2)将槲皮素、海藻酸溶于双蒸水得到复合溶液b;
(3)将葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素加入双蒸水中搅拌均匀,调节体系pH值为7-7.5得到基础缓冲液;
(4)向基础缓冲液依次加入复合溶液a、灭活卵黄搅拌均匀得到第一组分;
(5)向基础缓冲液依次加入复合溶液b、二甲基甲酰胺、灭活卵黄搅拌均匀得到第二组分。
一种家禽精液的冷存方法,包括如下步骤:将家禽精液与第一组分按质量比为1:5.5混合均匀,分装于冻存管内,降温至3℃,加入第二组分混合均匀,家禽精液与第二组分的质量比为1:4,移入液氮气相中熏蒸3min,加入至液氮中冷冻保存。
实施例4
一种家禽精液稀释缓冲液,包括:第一组分和第二组分。
第一组分包括:基础缓冲液120kg,复合溶液a2kg,灭活卵黄4kg。复合溶液a包括:咖啡酸苯乙酯0.02kg,表儿茶素0.04kg,双蒸水13kg。
第二组分包括:基础缓冲液120kg,复合溶液b2kg,灭活卵黄28kg,二甲基甲酰胺2kg。复合溶液b包括:槲皮素0.04kg,海藻酸0.02kg,双蒸水17kg。
其中,基础缓冲液包括:葡萄糖2kg,柠檬酸4kg,三羟甲基氨基甲烷6kg,青霉素0.04kg,链霉素0.02kg,双蒸水220kg。
上述家禽精液稀释缓冲液的制备方法,包括如下步骤:
(1)将咖啡酸苯乙酯、表儿茶素溶于双蒸水得到复合溶液a;
(2)将槲皮素、海藻酸溶于双蒸水得到复合溶液b;
(3)将葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素加入双蒸水中搅拌均匀,调节体系pH值为7-7.5得到基础缓冲液;
(4)向基础缓冲液依次加入复合溶液a、灭活卵黄搅拌均匀得到第一组分;
(5)向基础缓冲液依次加入复合溶液b、二甲基甲酰胺、灭活卵黄搅拌均匀得到第二组分。
一种家禽精液的冷存方法,包括如下步骤:将家禽精液与第一组分按质量比为1:6.5混合均匀,分装于冻存管内,降温至4℃,加入第二组分混合均匀,家禽精液与第二组分的质量比为1:3,移入液氮气相中熏蒸5min,加入至液氮中冷冻保存。
实施例5
一种家禽精液稀释缓冲液,包括:第一组分和第二组分。
第一组分包括:基础缓冲液100kg,复合溶液a3kg,灭活卵黄3kg。复合溶液a包括:咖啡酸苯乙酯0.03kg,表儿茶素0.03kg,双蒸水15kg。
第二组分包括:基础缓冲液100kg,复合溶液b3kg,灭活卵黄25kg,二甲基甲酰胺3kg。复合溶液b包括:槲皮素0.03kg,海藻酸0.03kg,双蒸水15kg。
其中,基础缓冲液包括:葡萄糖3kg,柠檬酸3kg,三羟甲基氨基甲烷7kg,青霉素0.03kg,链霉素0.03kg,双蒸水200kg。
上述家禽精液稀释缓冲液的制备方法,包括如下步骤:
(1)将咖啡酸苯乙酯、表儿茶素溶于双蒸水得到复合溶液a;
(2)将槲皮素、海藻酸溶于双蒸水得到复合溶液b;
(3)将葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素加入双蒸水中搅拌均匀,调节体系pH值为7-7.5得到基础缓冲液;
(4)向基础缓冲液依次加入复合溶液a、灭活卵黄搅拌均匀得到第一组分;
(5)向基础缓冲液依次加入复合溶液b、二甲基甲酰胺、灭活卵黄搅拌均匀得到第二组分。
一种家禽精液的冷存方法,包括如下步骤:将家禽精液与第一组分按质量比为1:6混合均匀,分装于冻存管内,降温至3.5℃,加入第二组分混合均匀,家禽精液与第二组分的质量比为1:3.5,移入液氮气相中熏蒸4min,加入至液氮中冷冻保存。
对比例1
一种家禽精液稀释缓冲液,包括:第一组分和第二组分。
第一组分包括:基础缓冲液100kg,灭活卵黄3kg。
第二组分包括:基础缓冲液100kg,灭活卵黄25kg,二甲基甲酰胺3kg。
其中,基础缓冲液包括:葡萄糖3kg,柠檬酸3kg,三羟甲基氨基甲烷7kg,青霉素0.03kg,链霉素0.03kg,双蒸水200kg。
上述家禽精液稀释缓冲液的制备方法,包括如下步骤:
(3)将葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素加入双蒸水中搅拌均匀,调节体系pH值为7-7.5得到基础缓冲液;
(4)向基础缓冲液依次加入灭活卵黄搅拌均匀得到第一组分;
(5)向基础缓冲液依次加入二甲基甲酰胺、灭活卵黄搅拌均匀得到第二组分。
一种家禽精液的冷存方法,包括如下步骤:将家禽精液与第一组分按质量比为1:6混合均匀,分装于冻存管内,降温至3.5℃,加入第二组分混合均匀,家禽精液与第二组分的质量比为1:3.5,移入液氮气相中熏蒸4min,加入至液氮中冷冻保存。
对比例2
一种家禽精液稀释缓冲液,包括:基础缓冲液100kg,复合溶液3kg,二甲基甲酰胺25kg,灭活卵黄3kg。复合溶液包括:咖啡酸苯乙酯0.03kg,表儿茶素0.03kg,槲皮素0.03kg,海藻酸0.03kg,双蒸水15kg。
其中,基础缓冲液包括:葡萄糖3kg,柠檬酸3kg,三羟甲基氨基甲烷7kg,青霉素0.03kg,链霉素0.03kg,双蒸水200kg。
上述家禽精液稀释缓冲液的制备方法,包括如下步骤:
(1)将咖啡酸苯乙酯、表儿茶素、槲皮素、海藻酸溶于双蒸水得到复合溶液;
(2)将葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素加入双蒸水中搅拌均匀,调节体系pH值为7-7.5得到基础缓冲液;
(3)向基础缓冲液依次加入复合溶液、二甲基甲酰胺、灭活卵黄搅拌均匀。
一种家禽精液的冷存方法,包括如下步骤:将家禽精液与上述家禽精液稀释缓冲液按质量比为1:9.5混合均匀,分装于冻存管内,降温至3.5℃,移入液氮气相中熏蒸4min,加入至液氮中冷冻保存。
选择皖西白羽肉鸡养殖基地20只健康白羽肉鸡,采用腹背联合按摩法采集鸡精液,采集的精液进行混合,采集过程中要求精液无粪便、血液等污染。
采用实施例5和对比例1-2所得家禽精液稀释缓冲液按实施例5和对比例1-2的各自冷存方法对上述白羽肉鸡精液进行冻存7d。
将各组冻存精液复苏后,置于4℃保存,间隔时间段取样检测精子的存活率,记录精子的存活时间。
精子存活时间(h)=检查间隔时间的总和-最末两次检查间隔时间/2
经检测:精子存活时间如下:实施例5组的存活时间为204h,对比例1组的存活时间为84h,对比例2组的存活时间为156h。精子的存活率如图1所示,白羽肉鸡精液4℃保存120h时,精子的存活率最高。
将各组冻存精液复苏后,进行精子畸形率的检测及精子顶体染色观察,具体如下:
(1)精子畸形率检测染色
准备洁净的载玻片进行涂片,风干后用95%的酒精固定3min,蒸馏水冲洗晾干,用蓝墨水染色,水洗晾干后镜检,每样抹片两张。记录视野下200个精子的畸形率。
畸形率=200个精子中畸形精子总数÷200×100%
(2)精子顶体染色
准备洁净的载玻片进行涂片,风干后用中性福尔马林溶液固定15min,蒸馏水冲洗晾干,姬姆萨染液扣染2h,水洗晾干后镜检,每样抹片两张。记录视野下200个精子的顶体完整率。
顶体完整率=200个精子中顶体完整精子总数÷200×100%
精子畸形率和精子顶体完整率如图2所示,实施例5组的畸形率最低,而精子顶体完整率最高。
本申请人认为:这是由于本发明采用咖啡酸苯乙酯与表儿茶素复配,不仅可清除体系中自由基,而且可与参与自由基生成的金属离子反应,从源头减少自由基的产生。咖啡酸苯乙酯表面的酚羟基,可有效降低精液低温环境下冰晶的形成量,减少针形冰晶的形成,即使未添加二甲基甲酰胺,也可减少冰晶对精子的机械性损伤,最终提高家禽冷冻精液的存活率、活力、顶体完整性和质膜完整性。同时采用槲皮素与海藻酸配合,可有效降低液氮冷冻过程中精子的冷应激,并可避免液氮环境细胞膜通透性增强和膜上通道受损,有效维持低温环境精子代谢平衡,避免低温环境镜子膜发生结构损伤,有效改善冷冻效果。
将各组冻存精液复苏后,检测总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和活性氧(ROS)水平,具体如下:
实施例5 | 对比例1 | 对比例2 | |
T-AOC,U/mL | 12.45 | 8.26 | 10.37 |
CAT,U/mL | 18.91 | 13.39 | 15.72 |
SOD,U/mL | 274.59 | 222.64 | 251.45 |
MDA,nmol/mL | 4.45 | 9.02 | 7.36 |
ROS Level | 4784 | 8773 | 6821 |
如上表所示,实施例5的总抗氧化能力、过氧化氢酶活性和超氧化物歧化酶活性最高,而丙二醛含量和活性氧水平最低。
本申请人认为:这是由于本发明将第一组分首先与家禽精液混合复配,可有效维持精子细胞内氧化还原系统的平衡,降低过氧化反应对精子质膜结构的损伤,进而提高精子活力。
将各组冻存精液复苏后,预热至37℃备用,母鸡输精用翻肛法,每只母鸡每5d输精1次,每次输入稀释精液30-50μL。于输精后的48h收集种蛋,种蛋在产出1周以内入孵,于孵化的第7d照蛋测定受精率。
如图3所示,实施例5的产蛋率和受精率最高,而死淘率最低。
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种家禽精液稀释缓冲液,其特征在于,包括:第一组分和第二组分;
第一组分包括:基础缓冲液、复合溶液a、灭活卵黄,基础缓冲液、复合溶液a、灭活卵黄的质量比为80-130:1-5:1-5;
第二组分包括:基础缓冲液、复合溶液b、二甲基甲酰胺、灭活卵黄,基础缓冲液、复合溶液b、灭活卵黄、二甲基甲酰胺的质量比为80-130:1-5:20-30:1-5;
其中,复合溶液a包括:咖啡酸苯乙酯、表儿茶素、双蒸水;咖啡酸苯乙酯、表儿茶素、双蒸水的质量比为0.01-0.05:0.01-0.05:10-20;
复合溶液b包括:槲皮素、海藻酸、双蒸水;槲皮素、海藻酸、双蒸水的质量比为0.01-0.05:0.01-0.05:10-20;
基础缓冲液包括:葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素、双蒸水;葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素、双蒸水的质量比为1-5:1-5:5-10:0.01-0.05:0.01-0.05:150-250。
2.根据权利要求1所述家禽精液稀释缓冲液,其特征在于,复合溶液a中,咖啡酸苯乙酯、表儿茶素的质量比为0.02-0.04:0.02-0.04。
3.根据权利要求1所述家禽精液稀释缓冲液,其特征在于,复合溶液b中,槲皮素、海藻酸的质量比为0.02-0.04:0.02-0.04。
4.根据权利要求1所述家禽精液稀释缓冲液,其特征在于,基础缓冲液的pH值为7-7.5。
5.一种如权利要求1-4任一项所述家禽精液稀释缓冲液的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)将咖啡酸苯乙酯、表儿茶素溶于双蒸水得到复合溶液a;
(2)将槲皮素、海藻酸溶于双蒸水得到复合溶液b;
(3)将葡萄糖、柠檬酸、三羟甲基氨基甲烷、青霉素、链霉素加入双蒸水中搅拌均匀,调节体系pH值为7-7.5得到基础缓冲液;
(4)向基础缓冲液依次加入复合溶液a、灭活卵黄搅拌均匀得到第一组分;
(5)向基础缓冲液依次加入复合溶液b、灭活卵黄、二甲基甲酰胺搅拌均匀得到第二组分。
6.一种家禽精液的冷存方法,其特征在于,包括如下步骤:将家禽精液与如权利要求1-5任一项所述家禽精液稀释缓冲液中第一组分混合均匀,分装于冻存管内,降温至2-5℃,再加入如权利要求1-5任一项所述家禽精液稀释缓冲液中第二组分混合均匀,移入液氮气相中熏蒸2-6min,加入至液氮中冷冻保存。
7.根据权利要求6所述家禽精液的冷存方法,其特征在于,家禽精液与上述家禽精液稀释缓冲液中第一组分的质量比为1:5-7。
8.根据权利要求6所述家禽精液的冷存方法,其特征在于,家禽精液与上述家禽精液稀释缓冲液中第二组分的质量比为1:2-5。
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