CN111436420A - 一种长效新鲜猪精液的稀释保存剂及其使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种长效新鲜猪精液的稀释保存剂及其使用方法，稀释保存剂中各组分的配方是由20‑25克葡萄糖，2‑7克氨基葡萄糖，8‑10克柠檬酸三钠，1.3‑1.5克EDTA二钾，0.4‑0.5克尿素，0.6克聚乙二醇10000，80万单位青霉素，100毫克硫酸链霉素，100毫克维生素C等组成，和适量碳酸氢钠混合。在使用前将其溶解在1升水中灭菌即可，公猪精液与稀释保存液以1:5混合稀释，稀释后的猪精液恒温保存，定期翻动，定期观察，使用该稀释保存剂保持新鲜猪精液7天，其活度仍然为70%以上，所配制的稀释精液使用和贮藏都比较方便，人工受精时可以即开即用，方便快捷。
Description
技术领域
本发明属于现代生物技术领域，具体涉及一种长效新鲜猪精液的稀释保存剂及其使用方法。
背景技术
在生猪的养殖业中，采集优质公猪的精液通过人工繁殖的方式进行生猪的生产已经非常普遍，猪的人工受精已是规模化养殖的一项常规技术，能够提高优秀公猪的利用率，保证猪的高品质，增加养殖户的经济效益。随着人工受精技术的广泛应用，精液的保鲜技术也在不断的发展。精液体外保鲜的关键点在于减缓精子的新陈代谢强度，从而达到延长精子在体外存活时间的目的。这其中有一个重要的技术环节就是优质公猪精液的有效保存问题，现有的方法是将采集到的新鲜的猪精液用某种特效的稀释保存剂稀释，然后室温保存。
目前，我国养猪场所使用的猪精液稀释剂多以葡萄糖作为主要营养成分，保存后随着时间的推移，体系的营养成分越来越少，渗透压和酸度不断升高，积累到一定程度后精子的生存环境发生突变，使之难以成活，所以通常2-3天后精子大量失去活度，存在保存时间短；同时由于种猪来源的多样性、气候环境的复杂性等因素的影响，现有市面销售的稀释保存剂使用效果有着明显的不同。
因此，研发出适用于我国养猪场使用的保鲜效果好，保存时间长，性价比高的长效猪精液稀释保存剂具有重要的意义。
专利内容
针对现有技术保存时间短、使用效果明显有差异等的不足，本发明提供一种长效新鲜猪精液的稀释保存剂及其使用方法。
本发明解决上述技术问题采用的技术方案是：一种新鲜猪精液的稀释保存剂，由葡萄糖，氨基葡萄糖，柠檬酸三钠，EDTA二钾，尿素，聚乙二醇10000，青霉素钾，硫酸链霉素，碳酸氢钠，维生素C等制成。
优先的该稀释保存剂中各组分的配方如下：20-25克葡萄糖，2-7克氨基葡萄糖，8-10克柠檬酸三钠，1.3-1.5克EDTA二钾，0.4-0.5克尿素，0.6克聚乙二醇10000，80万单位青霉素，100毫克硫酸链霉素，100毫克维生素C，适量碳酸氢钠。
优选的该稀释保存剂按具体配方的质量将葡萄糖，氨基葡萄糖，柠檬酸三钠，EDTA二钾，尿素，聚乙二醇10000，青霉素钾，硫酸链霉素，维生素C等组分称重，量取1升的超纯水，将称重的各组分混合溶于1升的超纯水中，用碳酸氢钠调节溶液的pH为7.5，无菌过滤即得稀释保存液。
优选的一种新鲜猪精液的稀释保存剂的使用方法，具体包括以下步骤：
第一步：根据权利要求3的步骤制备好新鲜猪精液的稀释保存剂；
第二步：随机抽取健康公猪精液，将采集到的适量的新鲜猪精液与该稀释保存剂混合，公猪精液与稀释保存液以1:5混合稀释，注意稀释液温度和原精液温度保持一致；
第三步：稀释后的猪精液，用毛巾裹上一同置于15-20℃之间恒温保存，定期12小时翻动保存瓶一次，确保精子与保存剂充分接触，每24小时观察一次精子的活度；
本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：
本发明涉及到的猪精液稀释保存剂能有效地降低营养成分的消耗，同时也有效地控制了渗透压和酸度上升，从而使得猪精液在稀释保存液中恒温保存7天，其活度仍然在70%以上；同时本发明的稀释保存剂兼有保存和稀释作用，所配制的稀释精液使用和贮藏都比较方便，人工受精时可以即开即用，方便快捷。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施例对本发明的具体实施方式进行清楚和完整的描述。
实例一
猪精液稀释保存剂组成及配方如下：20克葡萄糖、7克氨基葡萄糖、8克柠檬酸三钠、1.5克EDTA二钾、0.5克尿素、0.6克聚乙二醇10000、80万单位青霉素、100毫克硫酸链霉素、100毫克维生素C和适量碳酸氢钠。
配制方法为：将葡萄糖、氨基葡萄糖、柠檬酸三钠、EDTA二钾、尿素、青霉素钾、硫酸链霉素和维生素C混合溶于1升的超纯水中，用碳酸氢钠调节溶液的pH为7.5，无菌过滤即得稀释保存液A。
实例二
配方如下：25克葡萄糖、2克氨基葡萄糖、10克柠檬酸三钠、1.3克EDTA二钾、0.4克尿素、0.6克聚乙二醇10000、80万单位青霉素、100毫克硫酸链霉素、100毫克维生素C和适量碳酸氢钠。
配制方法为：将葡萄糖、氨基葡萄糖、柠檬酸三钠、EDTA二钾、尿素、青霉素钾、硫酸链霉素和维生素C混合溶于1升的超纯水中，用碳酸氢钠调节溶液的pH为7.5，无菌过滤即得稀释保存液B。
实例三
配方如下：22克葡萄糖、4克氨基葡萄糖、9克柠檬酸三钠、1.4克EDTA二钾、0.45克尿素、0.6克聚乙二醇10000、80万单位青霉素、100毫克硫酸链霉素、100毫克维生素C和适量碳酸氢钠。
配制方法为：将葡萄糖、氨基葡萄糖、柠檬酸三钠、EDTA二钾、尿素、青霉素钾、硫酸链霉素和维生素C混合溶于1升的超纯水中，用碳酸氢钠调节溶液的pH为7.5，无菌过滤即得稀释保存液C。
效果试验
试验过程及注意事项：随机抽取健康公猪精液，混匀分装，使用稀释保存液以1:5稀释。稀释时间严格控制，注意稀释液温度和原精液温度保持一致，以保证精子的活力。稀释后的精液，用毛巾裹上一同置于17℃恒温箱，同时每隔12小时翻动一次，确保精子与保存剂充分接触，每24小时观察一次。
精子活力：检查时将稀释精液预热至37℃，用量微量移液器取稀释精液20ul，置于干净载玻片上，用400倍显微镜观察10个视野，分别记录精子活动状况，采用10级制评估法检测视野中直线运动的精子占总精子的百分率，例如有70%的精子呈前进运动，则活力为0.7，以此类推。
精子活率：用10ml试管取伊红染液（1%浓度）1ml加含精液的测试液0.2ml置37℃水浴锅中恒温浸染20min,取1滴伊红染后精液再加1滴5%苯胺黑或苯胺蓝混匀染色后抹片，用显微镜在400倍下观察，死精子染色为红色，活精子不着色，每个抹片观察200个以上精子，得到活率以“%”表示。
上述三个实施实例中的A、B、C三种保存稀释液七天保存期中精子的活率跟踪测试结果如下：
| 稀释保存液A | 稀释保存液B | 稀释保存液C | |
| 第一天 | 85 | 87 | 89 |
| 第二天 | 80 | 85 | 85 |
| 第三天 | 77 | 82 | 83 |
| 第四天 | 76 | 80 | 79 |
| 第五天 | 75 | 78 | 77 |
| 第六天 | 74 | 77 | 76 |
| 第七天 | 72 | 75 | 74 |
| 第八天 | 70 | 73 | 72 |
Claims (4)
1.一种长效新鲜猪精液的稀释保存剂，其特征在于由葡萄糖，氨基葡萄糖，柠檬酸三钠，EDTA二钾，尿素，聚乙二醇10000，青霉素钾，硫酸链霉素，碳酸氢钠，维生素C等制成。
2.如权利要求1所述的一种长效新鲜猪精液的稀释保存剂，其特征在于该稀释保存剂中各组分的配方如下：20-25克葡萄糖，2-7克氨基葡萄糖，8-10克柠檬酸三钠，1.3-1.5克EDTA二钾，0.4-0.5克尿素，0.6克聚乙二醇10000，80万单位青霉素，100毫克硫酸链霉素，100毫克维生素C，适量碳酸氢钠。
3.如权利要求1所述的一种长效新鲜猪精液的稀释保存剂，其特征在于：按具体配方的质量将葡萄糖，氨基葡萄糖，柠檬酸三钠，EDTA二钾，尿素，聚乙二醇10000，青霉素钾，硫酸链霉素，维生素C等组分称重，量取1升的超纯水，将称重的各组分混合溶于1升的超纯水中，用碳酸氢钠调节溶液的pH为7.5，无菌过滤即得稀释保存液。
4.如权利要求1所述的一种长效新鲜猪精液的稀释保存剂的使用方法，具体包括以下步骤：
第一步：根据权利要求3的步骤制备好新鲜猪精液的稀释保存剂；
第二步：随机抽取健康公猪精液，将采集到的适量的新鲜猪精液与该稀释保存剂混合，公猪精液与稀释保存液以1:5混合稀释，注意稀释液温度和原精液温度保持一致；
第三步：稀释后的猪精液，用毛巾裹上一同置于15-20℃之间恒温保存，定期12小时翻动保存瓶一次，确保精子与保存剂充分接触，每24小时观察一次精子的活度。
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Cited By (1)
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