CN115184518A

CN115184518A - 一种盐酸左旋咪唑对映异构体的分析方法

Info

Publication number: CN115184518A
Application number: CN202210766961.8A
Authority: CN
Inventors: 黄勤; 夏行; 曹雨倩; 黄想亮; 周长岳
Original assignee: Zhejiang Menovo Pharmaceuticals Co ltd
Current assignee: Zhejiang Menovo Pharmaceuticals Co ltd
Priority date: 2022-07-01
Filing date: 2022-07-01
Publication date: 2022-10-14

Abstract

本发明提供一种盐酸左旋咪唑原料药或者制剂中对映异构体的检测分析方法，采用高效液相色谱法，使用直链淀粉衍生物涂敷型手型色谱柱，实现了在盐酸左旋咪唑原料药或制剂中，控制对映异构体的质量要求。不仅解决了中国兽药典、欧洲药典和美国药典中仅用比旋度方法，无法准确控制对映异构体的问题；而且该方法通用性强，对液相设备的要求低，分离效果好，运行时间短，可以快速灵敏地完成样品检测。

Description

一种盐酸左旋咪唑对映异构体的分析方法

技术领域

本发明涉及药物分析领域，具体涉及一种盐酸左旋咪唑原料药或制剂中对映异构体的测定方法。

背景技术

盐酸左旋咪唑(Levamisole Hydrochloride)，CAS号：16595-80-5，化学名：(S)-6-苯基-2,3,5,6-四氢-咪唑[2,1-B]噻唑单盐酸盐，是一种合成噻唑类化合物的衍生物，作为一种广谱驱肠虫药，主要用于治疗蛔虫、钩虫、蛲虫和粪类圆线虫感染。盐酸左旋咪唑是盐酸四咪唑的左旋体，其活性为盐酸四咪唑(消旋体)的1-2倍，且毒副作用更低；而盐酸四咪唑的右旋体并无驱虫效果。

现有技术合成盐酸左旋咪唑的方法，主要是利用手性拆分剂对盐酸四咪唑(消旋体)进行拆分，得到左旋咪唑，再与盐酸反应得到盐酸左旋咪唑。因此，在最终产品中确定盐酸左旋咪唑的对映异构体含量，是控制产品质量的重要一环。

目前，盐酸左旋咪唑的中国兽药典、欧洲药典和美国药典标准中，仅通过比旋度的检查项，来控制对映异构体的含量。但是，比旋度方法缺少专属性，该数值的变化不一定能灵敏、准确地反映出立体异构体含量的变化。通常情况下，仅采用比旋度作为光学纯度的质控指标是不完善的，该方法需与其它立体专属性更强、灵敏度更高的分析方法相结合，才能较好地控制盐酸左旋咪唑的对映异构体含量。

现有文献中也报道了多种检测盐酸左旋咪唑对映异构体的方法，包括电泳法、高效液相色谱法等。其中，J.Sep.Sci.2002,25,733-740报道了使用电泳法和液相色谱法对盐酸左旋咪唑对映异构体的分离。在电泳法中，当HMdiSu-β-CD用作手性选择剂时，左旋咪唑和对映异构体可以达到完全分离；但是，电泳法分析技术在药品质量控制中并不常见，如果仅是因为对映异构体的分离而被应用，将会极大地提高分析和管理成本；同时，当手性色谱柱为Chiralpak OD(硅胶表面涂敷有纤维素衍生物)，流动相为正己烷、2-丙醇和二乙胺的混合溶剂时，较低浓度下左旋咪唑与对映异构体可以达到基本分离；但是，仍然难以确保在实际测试所需的样品浓度下，两者仍然可以达到基本分离，不利于药品质量的有效控制。

Journal of Chromatography A,1363,(2014)150-154报道了使用HPLC法和圆二色谱法检测查获的可卡因样品中的左旋咪唑和四咪唑。当手性色谱柱为Chiralcel OD-H(硅胶表面涂敷有纤维素衍生物)，流动相为正己烷、2-丙醇和二乙胺的混合溶剂时，可以让左旋咪唑和右旋咪唑达到基本分离或者完全分离。但是，该色谱条件下的柱温为15℃，不仅对柱温箱的控温效果提出更高的要求，而且也增加了实验室的控温成本。

发明内容

基于上述技术问题，本发明的目的在于开发一种盐酸左旋咪唑原料药或者制剂中对映异构体的检测分析方法，实现了在盐酸左旋咪唑原料药或制剂中，控制对映异构体的质量要求。不仅解决了中国兽药典、欧洲药典和美国药典中仅用比旋度方法，无法准确控制对映异构体的问题；而且该方法通用性强，对液相设备的要求低，分离效果好，运行时间短，可以快速灵敏地完成样品检测。

为了实现上述目的，本发明提供以下解决方案：

一种盐酸左旋咪唑原料药或制剂中对映异构体的检测分析方法，包括以下步骤：

采用高效液相色谱法，使用直链淀粉衍生物涂敷型手性色谱柱，以碱性有机溶液为流动相，进行等度洗脱。

优选地，所述高效液相色谱法的色谱条件如下：

色谱柱：CHIRALPAK AD-H，250mm×4.6mm，5μm

检测器：UV检测器

检测波长：225nm

流动相：二乙胺-无水乙醇-正己烷

柱温：25℃

流速：0.5mL/min

运行时间：20分钟

优选地，所述流动相为二乙胺-无水乙醇-正己烷的体积比为(1:900:100,v/v/v)～(1:1000:0,v/v/v)；更为优选地二乙胺-无水乙醇-正己烷的体积比为(1:1000:0,v/v/v)。

优选地，所述流速为0.5mL/min～1.0mL/min；更为优选地，所述流速为0.5mL/min。

优选地，所述柱温为25℃～35℃；更为优选地，所述柱温为25℃。

本发明还包括溶液配制，溶液配制过程为：

空白溶液：无水乙醇

杂质储备溶液：精密称取盐酸右旋咪唑对照品约10mg，置于10mL容量瓶中，加入无水乙醇适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀。

系统适应性溶液：精密称取盐酸左旋咪唑对照品约25mg，置于50mL容量瓶中，精密移取杂质储备溶液约0.5mL，加入无水乙醇适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀。

样品溶液：精密称取盐酸左旋咪唑样品约25mg，置于50mL容量瓶中，加入无水乙醇适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀。

取上述各溶液5μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明通过使用直链淀粉衍生物涂敷型手型色谱柱，简单的等度洗脱即可达到盐酸左旋咪唑原料药或制剂中对映异构体的完全分离，分离度为2.04，能够准确严格地控制盐酸左旋咪唑原料药或制剂的质量，而且能够弥补药典规定的比旋度检测方法不够准确的缺点。该方法专属性强，灵敏度高，准确度与耐用性良好。

附图说明

图1为空白溶液的HPLC图谱；

图2为系统适应性溶液的HPLC图谱；

图3为样品溶液的HPLC图谱；

图4为盐酸四咪唑(消旋体)的HPLC图谱。

具体实施方式

为对本发明进行详细说明，下面结合具体实施例做进一步说明，以下实施例仅用于说明本发明，并不限制本发明的保护范围。凡是依据本发明的技术实质对以下实施例所作的任何简单修改、等同变化及修饰，均属于本发明要求保护的范围。

实施例1：

本发明的高效液相色谱法色谱条件如下所示：

色谱柱：CHIRALPAK AD-H,250mm×4.6mm,5μm

检测器：UV检测器

检测波长：225nm

流动相：二乙胺-无水乙醇(1:1000,v/v)

柱温：25℃

流速：0.5mL/min

运行时间：20分钟

空白溶液：无水乙醇

样品溶液：精密称取样品约25mg，置于50mL容量瓶中，加入无水乙醇适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀。

取上述各溶液5μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

空白溶剂的结果见附图1。

系统适用性溶液的结果见附图2。右旋咪唑的保留时间为8.204min，主峰左旋咪唑的保留时间为8.954min。右旋咪唑与主峰左旋咪唑的分离度为2.04。

样品溶液的结果见附图3。

根据附图的检测结果可知，右旋咪唑的保留时间为8.204min，主峰左旋咪唑的保留时间为8.954min。右旋咪唑与主峰左旋咪唑的分离度为2.04。本发明的方法可以将两者完全分离，而且空白溶剂不干扰右旋咪唑和左旋咪唑的检测，说明本发明的分离方法具有专属性。

实施例2

按照实施例1的高效液相色谱方法进行检测限和定量限试验。

检测限和定量限溶液：取盐酸左旋咪唑和盐酸右旋咪唑对照品适量，分别加无水乙醇使溶解，后用无水乙醇稀释成一系列浓度的溶液，依法测定。以信噪比判定物质的定量限和检测限。

表1.系统适应性测试结果

序号	化合物名称	保留时间(min)	相对保留时间	分离度
					1	右旋咪唑	8.204	0.92	/
2	左旋咪唑	8.954	1.00	2.04

表2.检测限和定量限测试结果

杂质名称	信噪比S/N	占样品浓度(％)	信噪比S/N	占样品浓度(％)
					右旋咪唑	6.96	0.0075％	17.18	0.0250％

结论：从表1可知，异构体杂质右旋咪唑与左旋咪唑的分离度为2.04，达到完全分离；右旋咪唑的定量限为0.0250％，检测限为0.0075％，具有高度的灵敏度。

实施例3

按照实施例1的高效液相色谱方法进行线性关系的试验。

线性溶液：分别取盐酸左旋咪唑和盐酸右旋咪唑对照品适量，分别加无水乙醇使溶解，后用无水乙醇稀释成一系列浓度的溶液，依法测定。

表3.盐酸右旋咪唑的线性测试结果

结论：从表3可知盐酸右旋咪唑在LOQ％～200％限度浓度下，线性相关性良好，截距不大于100％响应值的10％，在可接受范围内，符合规定。

实施例4

按照实施例1的高效液相色谱方法进行回收率试验。

杂质储备溶液：取盐酸右旋咪唑对照品适量，分别加无水乙醇使溶解，后用无水乙醇稀释成一浓度的溶液。

准确度溶液：取盐酸左旋咪唑样品适量，分别加无水乙醇使溶解，移取适量的杂质储备溶液，后用无水乙醇稀释成一系列浓度的溶液，依法测定。

表4.盐酸右旋咪唑的准确度测试结果

结论：从表4可知，盐酸右旋咪唑在LOQ～150％限度浓度下，加标回收率约为103.2％～108.7％，在可接受范围标准80％～120％范围内，符合规定。

实施例5

按照实施例1的高效液相色谱方法进行中间精密度试验。

样品溶液：精密称取盐酸左旋咪唑样品约25mg，置50mL容量瓶中，加入适量无水乙醇使溶解，后用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。

表5.盐酸左旋咪唑中间精密度测试结果

结论：6份样品溶液中盐酸右旋咪唑含量的重复性结果，在可接受范围内(≤10.0％)；12份样品溶液中盐酸右旋咪唑的中间精密度结果，在可接受范围内(≤10.0％)，因此该方法具有良好的重复性和中间精密度。

实施例6：

按照实施例1的高效液相色谱方法进行比旋度与光学纯度(ee值)的线性关系验证盐酸左旋咪唑比旋度的方法(参照欧洲药典10.0)：

比旋度溶液配制：精密称取约2.5g的盐酸左旋咪唑，置于50mL容量瓶中，加入适量的新沸冷水使溶解，并稀释至刻度，摇匀。

用上述溶液进行比旋度测试，应为-128°～121°(以干燥品计)

分别配制不同的比旋度溶液，并往里面加入一系列浓度的杂质储备溶液，标记为加标样品溶液，用于检测比旋度。同时，将上述加标样品溶液稀释至0.5mg/mL浓度水平后，采用HPLC法测试不同加标样品溶液中对映异构体的含量再将其折算成光学纯度(ee)值。

以比旋度和光学纯度的结果做线性拟合，计算其线性相关系数，相关系数(r)的绝对值不得低于0.990。

表6.盐酸左旋咪唑比旋度与光学纯度线性测试结果

从实施例2～实施例5可知，该方法具有高度的专属性、灵敏度、线性和准确度、中间精密度，可以准确地测试盐酸左旋咪唑原料药或制剂中对映异构体的含量。

从实施例6可知，以比旋度和光学纯度做线性拟合的相关系数为-0.9982，说明该分析方法的光学纯度与比旋度的结果一一吻合，有良好的线性关系，进一步验证了对映异构体测试结果的准确性。

以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims

1.一种盐酸左旋咪唑或盐酸四咪唑原料药或制剂的对映异构体的检测分析方法，其特征在于采用高效液相色谱法，使用直链淀粉衍生物涂敷型手型色谱柱，以碱性有机溶液为流动相，进行等度洗脱。

2.根据权利要求1所述的检测分析方法，其特征在于所述高效液相色谱法的色谱条件如下：

色谱柱：CHIRALPAKAD-H，250mm×4.6mm，5μm；

检测器：UV检测器；

检测波长：225nm；

流动相：二乙胺-无水乙醇-正己烷；

柱温：25℃；

流速：0.5mL/min；

运行时间：20分钟。

3.根据权利要求2所述的检测分析方法，其特征在于所述流动相为二乙胺-无水乙醇-正己烷的体积比为(1:900:100,v/v/v)～(1:1000:0,v/v/v)。

4.根据权利要求3所述的检测分析方法，其特征在于二乙胺-无水乙醇-正己烷的体积比为(1:1000:0,v/v/v)。

5.根据权利要求2所述的检测分析方法，其特征在于所述流速为0.5mL/min～1.0mL/min。

6.根据权利要求5所述的检测分析方法，其特征在于所述流速为0.5mL/min。

7.根据权利要求2所述的检测分析方法，其特征在于所述柱温为25℃～35℃。

8.根据权利要求7所述的检测分析方法，其特征在于所述柱温为25℃。