CN115074259A - 耐碱香菇菌株金香194及其应用 - Google Patents
耐碱香菇菌株金香194及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及生物技术领域,特别涉及耐碱香菇菌株金香194及其应用。本发明的耐碱香菇菌株金香194保藏编号为CGMCCNO.40137,该菌株与现有的香菇菌株相比,具有耐碱能力强、具有良好的抗霉菌性,碱性条件下生长能力优于目前广西的主栽品种,如果能进行推广,将能大大提高香菇菌株对于碱性基质的适应能力,从而降低香菇菌棒感染杂菌比率,提高菌棒成功率。经过实验发现该菌株的菌丝生长的酸碱度范围为pH4‑11,最适宜pH为4‑8,耐碱性能力远高于现有推广栽培的香菇品种;本发明的香菇菌种,在用石灰调节pH至9的培养料中菌丝生长旺盛,菌棒杂菌感染率低,菌棒成功率达97‑100%,具有高耐碱性、抗霉菌等优良性能。
Description
【技术领域】
本发明涉及生物技术领域,特别涉及耐碱香菇菌株金香194及其应用。
【背景技术】
香菇隶属于担子菌门,伞菌纲,伞菌目,光茸菌科,香菇属,是我国第一大食用菌栽培品种,年产量达900多万吨。香菇味道鲜美、营养丰富,素有“植物皇后”美誉,在民间素有“山珍”之称,是我国传统的菜肴,是最受普通老百姓喜爱的日常食品之一,消费市场巨大。
pH是影响食用菌生长发育的一个重要因子,现有香菇品种菌丝生长的pH范围为4-9,最适宜pH为5-6。可见,香菇适宜在偏酸性的环境生长,而食用菌生产中常见的多数杂菌如绿霉、曲霉等也适宜在偏酸性的环境生长。食用菌菌棒生产时,在培养料中添加石灰调节pH至7-8,可以降低菌棒培养期间杂菌感染率。但是该方法不适用于常规香菇品种,因为培养料pH值大于7.0时,香菇就会出现菌丝生长缓慢甚至不萌发的现象。故此,香菇菌棒生产要求有更严格的环境卫生条件,否则容易感染杂菌,导致菌棒烂棒。本发明选育耐碱性香菇品种,可通过添加石灰对培养料进行酸碱度调节和消毒,从而提高菌棒成功率,应用前景广阔。
目前,现有技术中还没有选育出具有高耐碱性的香菇品种,因此,开发香菇的耐碱品种有助于丰富香菇的种质资源,通过育种开发出更多更具商品性的耐碱香菇品种。
【发明内容】
鉴于上述开发更高商品性的耐碱香菇,本发明的目的在于提供一种耐碱香菇菌株金香194该香菇具有较高的耐碱性,可在较高的pH条件下生长。
为达到上述目的,本发明筛选出一种耐碱香菇(Lentinula edodes.)菌株金香194,其保藏编号为CGMCC NO.40137。属于食用菌,属于香菇(Lentinula edodes.)种。所述耐碱香菇保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号为CGMCC No.40137,保藏日期为2022年04月24日。
本发明还包括通过培养所述菌株得到的耐碱香菇(Lentinula edodes.)孢子。
本发明还包括通过培养所述菌株得到的耐碱香菇(Lentinula edodes.)的菌丝体。
本发明还包括通过培养所述菌株得到的耐碱香菇(Lentinula edodes.)的子实体。
本发明还包括所述耐碱香菇(Lentinula edodes.)菌株的栽培方法,所述方法为:将培养料的pH调至9,再制作料棒并接种,之后在20-25℃条件下进行菌丝培养,长满菌丝后形成菌棒,菌棒转色后脱袋,并进行出菇培养;所述培养料的配方为:重量百分数78%-81%的杂木屑,18%-21%的麸皮,1%的糖,0-1%的石膏粉;所述培养料的pH值采用生石灰粉和水调节。
本发明还包括所述子实体在食品加工中的应用。
本发明还包括所述菌株在香菇杂交中的应用。
本发明具有以下有益效果:
本申请的耐碱香菇(Lentinula edodes.)菌株金香194是一株新的耐碱香菇菌株,该菌株与现有的香菇菌株相比,具有耐碱能力强、具有良好的抗霉菌性,碱性条件下生长能力优于目前广西的主栽品种,如果能进行推广,将能大大提高香菇菌株对于碱性基质的适应能力,从而降低香菇菌棒感染杂菌比率,提高菌棒成功率。经过实验发现该菌株的菌丝生长的酸碱度范围为pH4-11,最适宜pH为4-8,耐碱性能力远高于现有推广栽培的香菇品种;本发明的香菇菌种,在用石灰调节pH至9的培养料中菌丝生长旺盛,菌棒杂菌感染率低,菌棒成功率达97-100%,该菌株的选育有效的提高了香菇的耐碱能力,可以通过杂交选育的方法获得更多具有高耐碱性、抗霉菌等优良性能的香菇后代。
【附图说明】
图1为本发明金香194香菇的系统发育树图;
图2为本发明金香194菌株在pH为5-11的PDA平板上的生长情况图;
图3为香菇808菌株在pH为5-10的PDA平板上的生长情况图;
图4为庆科20菌株在pH为5-10的PDA平板上的生长情况图;
图5为本发明金香194菌株在pH为7-9的木屑袋料培养基上的生长情况图;
图6为香菇808菌株在pH为7-9的木屑袋料培养基上的生长情况图;
图7为庆科20菌株在pH为7-9的木屑袋料培养基上的生长情况图;
图8为金香194、香菇808、庆科20在pH为9的木屑袋料培养基上的生长对比图;
图9为金香194、香菇808、庆科20在木屑袋料培养基上的抗霉菌情况对比图;
图10为金香194栽培子实体图。
【具体实施方式】
下面结合附图、实施例和试验对本发明作进一步说明。
实施例1:
本实施例筛选出了一种耐碱香菇(Lentinula edodes.)菌株金香194,其保藏编号为CGMCC NO.40137。属于食用菌,属于香菇(Lentinula edodes.)种。所述耐碱香菇保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号为CGMCC No.40137,保藏日期为2022年04月24日。
上述耐碱香菇(Lentinula edodes.)菌株金香194为采集自广西来宾市金秀县山区的野生香菇,其具体选育方法如下:
(1)2019年采集野生香菇16株,通过组织分离获得16个菌株的菌丝培养物,在不同pH值下培养筛选,发现其中一株可在pH10的PDA培养基中生长。
(2)2019年底至2020年初对筛选出的耐碱性香菇菌株进行栽培出菇,选择出菇多的菌棒挑取菇形圆整、肉厚的子实体,再次进行组织分离,获得一次驯化菌株的菌丝培养物。2020年底至2021年初再次对驯化菌株进行栽培出菇驯化选育,最终获得耐碱性香菇菌株金香194。
分子鉴定:
测序获得金香194菌株的ITS序列,在NCBI网站上用BLASTN程序进行比对,采用ITS序列构建系统发育树,结果如图1所示,从图1可见,金香194与其他香菇品种有较远的遗传距离,是一个新的香菇品种。
实施例2:
耐碱性评价:
1、在不同pH值的平板培养基上生长的情况:
将实施例1筛选出来的耐碱香菇(Lentinula edodes.)菌株金香194、与目前广西的通用适栽品种:香菇808和庆科20在不同的pH条件下进行平皿试验,具体如下:
采用HCL溶液和NaOH溶液将灭好菌的PDA培养基(马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂粉20g、蒸馏水1000ml)分别调整至pH4、5、6、7、8、9、10和11,调好pH值后,制成不同pH的PDA平板。
将香菇菌株金香194(CGMCC NO.40137)、808和庆科20预先接种在常规PDA平皿培养基,25℃培养长满菌丝,再用直径6mm打孔器打取菌片,并接种到不同pH的PDA平板中心,每个处理3个重复,置于25℃培养。当菌丝生长最快的处理菌丝体准备长满皿时,即可测量菌落半径,计算菌丝生长日均速度。
得到的结果如图2-4所示,图2为菌株金香194在pH为4-11的平皿中的生长情况;图3为香菇808在pH为4-10的平皿中的生长情况;图4为庆科20在pH为4-10的平皿中的生长情况;从图中可见,本申请的菌株金香194在pH为11的平板上仍能萌发,而菌株香菇808在pH为9的平板上已经停止萌发,庆科20在pH为8的平板上已经停止萌发。
得到的菌丝生长速度结果如表1所示:
表1三个香菇菌株在不同pH的PDA培养基上的生长速度(单位:mm/d)
香菇菌株 | pH4 | pH5 | pH6 | pH7 | pH8 | pH9 | pH10 | pH11 |
金香194 | 5.20±0.27 | 5.61±0.26 | 5.20±0.20 | 4.90±0.30 | 4.51±0.35 | 3.58±0.10 | 2.80±0.21 | 1.11±0.11 |
香菇808 | 5.09±0.23 | 5.27±0.11 | 5.19±0.22 | 5.01±0.30 | 1.25±0.13 | 0 | 0 | 0 |
庆科20 | 5.15±0.23 | 5.26±0.29 | 5.08±0.24 | 3.33±0.23 | 0 | 0 | 0 | 0 |
表1可见,在pH4-6的范围内,3株菌株的长势相差不大;在pH为7的平板中,香菇808与金香194的长势相当,但优于庆科20;在pH达到8以上时,金香194生长速度远高于两个常规栽培品种,其中庆科20不能萌发;在pH达到9以上,金香194还能生长,而香菇808和庆科20均不能萌发。由此说明,本申请的菌株金香194相比于其他香菇菌株具有较高的耐碱性。
2、在不同pH值木屑袋料培养基中的生长情况:
将实施例1筛选出来的耐碱香菇(Lentinula edodes.)菌株金香194、与目前广西的通用适栽品种:香菇808和庆科20在不同的pH条件下进行袋料栽培试验,具体如下:
袋料培养基配方:杂木屑78%、麦麸21%、白糖1%(重量百分比);培养料含水量调节至60%,并用生石灰粉调节培养料pH值,按照4个酸碱度梯度处理,分别将培养料调节至pH6、pH7、pH8和pH9。用长宽规格为28cm×14cm聚丙烯塑料袋包装培养料,每袋重量1斤,于121℃高压灭菌,每个pH值的培养料生产菌袋12包,4个酸碱度处理共48包。
将香菇菌株金香194(CGMCC NO.40137)、808和庆科20预先接种在常规PDA平皿培养基,25℃培养长满菌丝,再用直径10mm打孔器打取菌片,接种至菌袋,每袋接种2个点。每个香菇菌株不同pH处理分别接种4袋。接种后,菌袋均置于25℃培养15天,采用划线法测定香菇菌丝生长速度。
结果如图5-8所示,其中,图5为金香194菌株在pH值为7(左)、8(中)和9(右)的培养基质中的菌丝生长情况;图6为香菇808菌株在pH值为7(左)、8(中)和9(右)的培养基质中的菌丝生长情况;图7为庆科20菌株在pH值为7(左)、8(中)和9(右)的培养基质中的菌丝生长情况;图8为金香194(左)、香菇808(中)和庆科20(右)在pH9的培养基质中的菌丝生长情况;从图中可见,金香194的菌丝在pH为7-9的袋料中生长相差不大,而香菇808和庆科20在pH为8和pH为9的袋料中生长明显受到抑制,且在pH为9的袋料中菌丝生长速度急速下降。
测试得到的菌丝生长情况如表2所示:
表2三个香菇菌株在不同pH的木屑培养基上的生长速度(单位:mm/d)
表2可见,在pH6-7条件下,3个菌株的菌丝生长速度相差不大;在pH为8时,菌株香菇808和庆科20的菌丝生长速度开始下滑;在pH为9时,金香194菌丝仍能保持较快的生长速度,而香菇808和庆科20菌株的菌丝生长速度急剧下降。
由此说明,无论是在平皿上还是在袋料栽培中,金香194菌株仍能在碱性培养基中保持较好的生长态势,说明,金香194菌株具有较好的耐碱性。
实施例3:
香菇菌株在木屑培养基上的抗霉菌试验,具体如下:
制备pH为8的木屑培养基:杂木屑78%、麦麸21%、白糖1%(重量百分比)培养料含水量调节至60%,并用生石灰粉调节培养料pH值为8;分别接种金香194(CGMCC NO.40137)、香菇808和庆科20的菌种,25℃培养5天后在香菇菌落边缘刺孔接种绿霉菌,置于25℃下继续培养,观测香菇菌株抗霉菌情况。
结果如图9所示,图中,左边为金香194、中间为香菇808和右边为庆科20菌株在木屑培养基上的抗霉菌情况;从图中可见,在pH8的木屑培养基中,金香194菌丝生长旺盛,能够覆盖霉菌菌落生长,表现出很强的抗霉菌能力;香菇808和庆科20菌株菌丝生长缓慢,并受霉菌菌落抑制,菌丝难以往下生长,抗霉菌能力远远低于金香194菌株。
实施例4:
金香194菌株的栽培应用,该应用包括如下步骤:
1、菌棒制作:按照配方:杂木屑81%,麸皮18%,糖1%,石膏粉1%(重量百分数)配料,加水和生石灰粉调节含水量和酸碱度,含水量调至55%-60%,pH调至9.0,拌匀后,装于规格为15cm×55cm的筒料袋中,每袋重量约1.8Kg。装袋后,料棒于100℃下灭菌15h。冷却后搬入接种房,在袋身的一面等间距打孔3个,迅速往孔内接入预先准备好的金香194香菇菌种,套上外袋,置于培养室培养。
2、菌丝培养管理:培养期间培养温度控制在20-25℃,并注意通风换气。当3个菌落生长圈将要相连时,用1.5寸铁钉在每个接种四周刺孔4个,深度在1.0cm以内;当菌丝长满袋,且菌棒表面出现部分白色瘤状物突起时,采用2.5cm长的铁钉在每段菇木刺孔20个左右;菌棒排场脱袋前7-10d时,第三次沿菌袋纵向刺孔4排,每排孔数为10~12孔,孔深1.5cm。每次刺孔后要加大通风换气,并将培养温度控制在20-28℃。
3、出菇管理:当菌棒大部分转色,并有少量菇蕾出现时,可以将菌棒移到出菇场地,脱袋后将菌棒排开出菇。脱袋后保持温度在22℃以下,2d后每天喷水保湿,直至出菇。采收完一潮菇后停止喷水10-15d,再进行喷水出菇管理。若菌棒干燥,重量低于1Kg时,需要对菌棒进行注水,促使菇蕾发生。(得到的子实体参见图10)
4、采收:鲜销的菇要在未开膜前采收,准备烘干的菇应在菌盖尚未全展开仍保持内卷即七八分成熟时采收。
实施例5:
金香194菌株的在香菇杂交中的应用,该应用包括如下步骤:
1、耐碱性香菇优良品种单孢杂交选育
利用金香194的孢子单核体与另一个亲本的孢子单核体进行两两配对杂交,获得带有金香194耐碱性性状的杂交菌株,具体如下:
(1)两亲本栽培出菇后,选择菇形圆整、开伞程度七八分的2个亲本子实体,分别在无菌环境下分别收集其孢子。
(2)对收集到的孢子,采用稀释涂板法进行单孢分离,获得孢子单核体,并显微镜检确定无锁状联合后保存备用。将两个亲本的孢子单核体相距2cm同时接种于PDA平板,进行两两配对对峙培养,待两单孢菌落彼此接触5天后,挑取相交处菌丝进行转接,对转接生长后的菌丝进行显微镜检和与两亲本的拮抗试验,有锁状联合且与两亲本发生拮抗的为杂交子。
(3)将杂交子转接至pH10的PDA培养基上,菌丝能萌发生长的菌株为耐碱性杂交子。对耐碱性杂交子进行栽培出菇,菇型好、产量高的品种即为耐碱性香菇优良杂交品种。
2、耐碱性香菇优良品种双单杂交选育
利用金香194的双核菌丝与另一个亲本的孢子单核体进行两两配对杂交,获得带有金香194耐碱性性状的杂交菌株。
(1)将金香194的双核菌丝和另一亲本的孢子单核体相距2cm同时接种于PDA平板,进行两两配对对峙培养15天后,挑取孢子单核体菌落的远离金香194菌株菌落一端的菌丝进行转接,对转接生长后的菌丝进行显微镜检和与两亲本的拮抗试验,有锁状联合且与两亲本发生拮抗的为杂交子。
(2)将杂交子转接至pH10的PDA培养基上,菌丝能萌发生长的菌株为耐碱性杂交子。
(3)对耐碱性杂交子进行栽培出菇,菇型好、产量高的品种即为耐碱性香菇优良杂交品种。
实施例6:
从实施例2、3的耐碱效果和抗霉菌效果来看,新菌株金香194可以种植在pH为9的环境中生长,且具有较好的霉菌抗性,是一株较容易栽培的香菇菌株,可以进行广泛推广和种植,能进行量产,用来制备食品将能获得更优的商业价值,具有适应能力强、产量高的优势。
综上所述,本申请的耐碱香菇菌株金香194属于新菌株,该菌株与现有的香菇菌株相比,具有耐碱能力强、具有良好的抗霉菌性,生长能力大大优于目前广西的主栽品种,如果能进行推广,将能大大提高香菇菌株对于高碱环境的生长能力,商品性能优良。
上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明,但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围,凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更,均应属于本发明所涵盖专利范围。
Claims (7)
1.耐碱香菇(Lentinula edodes.)菌株金香194,其保藏编号为CGMCC NO.40137。
2.一种耐碱香菇(Lentinula edodes.)孢子,其特征在于,通过培养如权利要求1所述菌株得到的孢子。
3.一种耐碱香菇(Lentinula edodes.)菌丝体,其特征在于,通过培养如权利要求1所述菌株得到的菌丝体。
4.一种耐碱香菇(Lentinula edodes.)子实体,其特征在于,通过培养如权利要求1所述菌株得到的子实体。
5.一种栽培权利要求1所述耐碱香菇(Lentinula edodes.)菌株的方法,其特征在于,所述方法为:将培养料的pH调至9,再制作料棒并接种,之后在20-25℃条件下进行菌丝培养,长满菌丝后形成菌棒,菌棒转色后脱袋,并移至出菇场地,进行出菇培养;所述培养料的配方为:重量百分数78%-81%的杂木屑,18%-21%的麸皮,1%的糖,0-1%的石膏粉;所述培养料的pH值采用生石灰粉和水调节。
6.一种权利要求4所述子实体在食品加工中的应用。
7.一种权利要求1所述菌株在香菇杂交中的应用。
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