CN115074255A - 镰刀菌及其发酵化合物在防治坏死样凋亡相关疾病中的应用 - Google Patents

镰刀菌及其发酵化合物在防治坏死样凋亡相关疾病中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN115074255A
CN115074255A CN202210721964.XA CN202210721964A CN115074255A CN 115074255 A CN115074255 A CN 115074255A CN 202210721964 A CN202210721964 A CN 202210721964A CN 115074255 A CN115074255 A CN 115074255A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fusarium
compound
apoptosis
necrosis
zen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210721964.XA
Other languages
English (en)
Inventor
杨献文
马华彬
汪朝凤
邹正彪
徐琳
谢明敏
郝优佳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Third Institute of Oceanography MNR
Original Assignee
Third Institute of Oceanography MNR
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Third Institute of Oceanography MNR filed Critical Third Institute of Oceanography MNR
Priority to CN202210721964.XA priority Critical patent/CN115074255A/zh
Publication of CN115074255A publication Critical patent/CN115074255A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D313/00—Heterocyclic compounds containing rings of more than six members having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C12P17/08—Oxygen as only ring hetero atoms containing a hetero ring of at least seven ring members, e.g. zearalenone, macrolide aglycons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C12R2001/77—Fusarium

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)

Abstract

本发明公开了镰刀菌(Fusarium sp.)ZEN‑48、利用其制备发酵化合物及其发酵化合物在制备防治坏死样凋亡(necroptosis)相关疾病中的应用。镰刀菌(Fusarium sp.)ZEN‑48于2022年4月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2022503；本发明镰刀菌Fusarium sp.ZEN‑48的发酵产物为大环内酯类化合物或其盐，具有靶向性抑制TNFα诱导的坏死样凋亡的作用，可用于制备抗坏死样凋亡相关疾病的治疗药物。本发明对我国海洋药物开发具有重要意义，对坏死样凋亡相关的疾病治疗和新药开发具有重要意义。

Description

镰刀菌及其发酵化合物在防治坏死样凋亡相关疾病中的应用
技术领域
本发明涉及微生物、药物化合物技术领域，具体涉及镰刀菌ZEN-48、利用其制备发酵化合物及其发酵化合物在防治坏死样凋亡相关疾病中的应用。
背景技术
坏死样凋亡(Necroptosis)是一种非Caspase依赖的程序性细胞死亡，被认为与多种人类疾病有关，如神经退行性疾病和炎症性疾病及病毒感染引发的相关疾病。坏死样凋亡可由死亡受体、Toll样受体、干扰素受体等激活诱导。在坏死样凋亡中，有一个核心信号轴，RIPK1(受体相互作用蛋白激酶1)-RIPK3(受体相互作用蛋白激酶3)-MLKL(混合谱系激酶结构域样假激酶)，并形成由RIPK1-RIPK3-MLKL组成的坏死小体，最终诱导MLKL的磷酸化和寡聚化，进而转移到质膜并触发膜溶解，导致细胞内容物完全释放并促进炎症。
大量的研究证实RIPK1是细胞凋亡和坏死以及炎症通路中的一个关键调节因子。RIPK1逐渐成为神经退行性疾病、自身免疫性疾病和炎症等多种疾病治疗的有效靶点之一。目前，用于自身免疫性疾病的GSK′772、用于肌萎缩侧索硬化症(ALS)的DNL747等，正在临床试验中进行研究。但是，总的来说，对程序性坏死的研究以及相关靶点，包括RIPK1、RIPK3和MLKL的研究还处于初期。因此，具有选择性、有效性和安全性的坏死样凋亡小分子抑制剂有待于进一步的被发现和开发。
大环内酯类是一类以大环内酯环为特征并以可变侧链/基团为特征的疏水化合物。大环内酯类药物已被证明具有治疗特性。事实上，一些广为人知的抗生素化合物，包括红霉素，是大环内酯类。除了抗生素特性外，大环内酯类还显示出其他广泛的药理作用，如抗病毒、抗寄生虫、抗真菌和免疫抑制作用等。因此，开发大环内酯类药物在防治坏死样凋亡疾病中应用是有必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种镰刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48及其发酵化合物在制备坏死样凋亡药物中的应用。本发明提供的大环内酯类化合物为brefeldin A或其盐，分离自镰刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48的发酵产物，其对TNFα诱导的坏死样凋亡具有显著的靶向抑制作用，对坏死样凋亡相关的疾病治疗和新药开发具有重要意义。
本发明的第一方面，提供保藏编号为CCTCC M 2022503的镰刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48，保藏于中国典型培养物保藏中心。
本发明的第二方面，提供镰刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48在制备发酵化合物中的应用，所述发酵化合物为大环内酯类化合物或其盐，其结构如式(I)所示：
Figure BDA0003711733630000021
本发明的第三方面，提供镰刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48的发酵化合物的制备方法，包括以下步骤：
S1、将保藏编号为CCTCC M 2022503的镰刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48进行发酵培养，得到发酵物；
S2、将步骤S1得到的发酵物用乙酸乙酯进行萃取，取有机萃取物进行层析，分别使用石油醚、二氯甲烷和甲醇进行洗脱，浓缩二氯甲烷层，得到粗提物；
S3、将步骤S2得到的粗提物用正相硅胶柱色谱进行分离，用二氯甲烷-甲醇体系进行梯度洗脱，依次得到3个粗馏分：Fr.1～Fr.3；
S4、将粗馏分Fr.1先使用ODS柱色谱进行分离，再使用水-甲醇体系进行梯度洗脱依次得到两段粗馏分：Fr.1-1、Fr.1-2；
S5、将粗馏分Fr.1-1用葡聚糖凝胶柱分离后重结晶得到所述发酵化合物。
本发明的第四方面，提供镰刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48的发酵化合物在制备防治坏死样凋亡相关疾病的药物中的应用，所述镰刀菌ZEN-48的发酵化合物如本发明第二方面中所定义或通过本发明第三方面的制备方法获得。
在其中一些实施例中，所述坏死样凋亡为TNFα诱导的坏死样凋亡或TNFα+ZVAD诱导的坏死样凋亡。
在其中一些实施例中，所述药物通过靶向RIPK3破坏坏死体形成及RIPK3的磷酸化，进而抑制坏死样凋亡。
在其中一些实施例中，所述坏死样凋亡疾病包括神经退行性疾病、炎症性肠病、动脉粥样硬化，急性胰腺炎，急性/药物诱导的肝损伤、急性肾损伤、病毒性感染及肿瘤中的一种或多种。
在其中一些实施例中，所述神经退行性疾病包括阿尔茨海默症和肌萎缩侧索硬化。
在其中一些实施例中，所述肿瘤包括脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、肝癌、食管癌、结直肠癌和前列腺癌；
优选地，所述肿瘤为结直肠癌、肝癌。
在其中一些实施例中，所述坏死样凋亡疾病包括阿尔茨海默症、肌萎缩侧索硬化、炎症性肠病、动脉粥样硬化、急性胰腺炎、急性/药物诱导的肝损伤、急性肾损伤、病毒性感染(如HSV)引发的相关症状。
在其中一些实施例中，所述药物包含化合物brefeldinA或其盐及药物辅料。
在其中一些实施例中，所述药物的剂型为丸剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、管饲制剂、混悬剂、喷雾剂或膏剂。
本发明的第五方面，提供一种药物组合物，所述药物组合物包含本发明第二方面中所述的发酵化合物，所述发酵化合物通过本发明第四方面的制备方法获得。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
本发明提供了新的大环内酯类化合物，其分离自深海镰刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48的发酵提取物。本发明经实验验证了所述大环内酯类化合物对抗坏死样凋亡的作用，并且进一步通过细胞周期分析、主要标志物分析，证明了所述化合物通过抑制细胞增殖来达到治疗效果。本发明提供的大环内酯类化合物在制备抗坏死样凋亡相关疾病方面具有良好的应用前景。
附图说明
通过阅读下文优选实施方式的详细描述，各种其他的优点和益处对于本领域普通技术人员将变得清楚明了。附图仅用于示出优选实施方式的目的，而并不认为是对本发明的限制。在附图中：
图1化合物1对L929的细胞活性抑制作用；
图2化合物1对TNFα及TNFα+ZVAD诱导L929坏死样凋亡的作用(检测ATP法)；
图3化合物1对TNFα+ZVAD诱导坏死小体形成的作用；
图4化合物1对TNFα+ZVAD诱导RIPK3/MLKL的磷酸化的作用；
图5化合物1与RIPK3的分子对接3D图；
图6化合物1与RIPK3的分子对接二维投影图；
该菌株的保藏信息为：
镰刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏编号为CCTCC M 2022503，保藏日期为2022年4月27日。
具体实施方式
下面将参照附图更详细地描述本公开的示例性实施方式。虽然附图中显示了本公开的示例性实施方式，然而应当理解，可以以各种形式实现本公开而不应被这里阐述的实施方式所限制。相反，提供这些实施方式是为了能够更透彻地理解本公开，并且能够将本公开的范围完整的传达给本领域的技术人员。
实施例1镰刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48的培养、发酵液及发酵化合物的制备
1、制备镰刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48发酵液
(1)将镰刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48(保藏编号CCTCC M 2022503)在PDA平板上于25℃培养2天；
(2)将新鲜的菌丝体接到含有1100mL PDB的培养液中；24h后，将20mL种子液接种到1L的三角烧瓶中(50瓶)进行发酵，所述三角烧瓶中包括4g葡萄糖、8g甘露醇、2g蛋白胨、2g味精、1.2g酵母提取物和1.2g麦芽糖，上述物质溶解于400mL去离子水中并用NaOH调节PH至7.5，得到发酵液。
2、制备镰刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48的发酵化合物
(1)将上述得到的发酵液用乙酸乙酯萃取三次，减压蒸发掉有机溶剂，得到有机萃取物；
(2)将这些萃取物过正相柱层析柱，分别使用石油醚，二氯甲烷和甲醇进行洗脱，浓缩二氯甲烷层，得到粗提物；
(3)将步骤(2)得到的粗提物使用正相硅胶柱色谱进行分离，用二氯甲烷-甲醇体系进行梯度洗脱，得到3个馏分(Fr.1～Fr.3)；
(4)将步骤(3)中的馏分Fr.1先使用ODS柱色谱进行分离，使用甲醇-水体系进行梯度洗脱，继而使用Sephadex葡聚糖凝胶色谱柱(纯甲醇)分离，经重结晶得到化合物1。
将上述步骤中得到的化合物1进行核磁检测，核磁数据结果见表1：
表1.化合物1在CD3OD溶剂中的1H和13C-NMR核磁数据
Figure BDA0003711733630000051
结合X-射线单晶衍射结果，其X-射线单晶衍射图见式II。最终确定了化合物1是大环内酯类化合物，其结构如式I所示：
Figure BDA0003711733630000052
Figure BDA0003711733630000061
实施例2化合物1对L929细胞的活性抑制作用
(1)L929细胞经常规消化后，于培养基中重悬并吹打成单细胞悬液，然后以每孔4000个细胞接种到96孔板，每孔体积100μL；
(2)37℃，5％CO2的培养箱中培养12h，然后分别加入如下浓度(0.1μM，1μM，10μM，25μM)的式I化合物处理细胞，以DMSO作为对照；
(3)继续培养24h后，每孔加10μL的CCK-8(HY-K0301,MCE)，37℃避光反应0.5h；
(4)酶标仪测定450nm吸收值，计算细胞活率。
实验结果如图1所示，当化合物1的处理浓度达到25μM的时候，对L929细胞的抑活率为50％，表现出一定的抑制细胞生长的活性。
实施例3、化合物1对TNFα和TNFα+ZVAD诱导的L929坏死样凋亡的作用
(1)L929细胞经常规消化后，于培养基中重悬并吹打成单细胞悬液，然后以每孔10000个细胞接种到96孔板，每孔体积100μL；
(2)37℃，5％CO2的培养箱中培养12h，然后分别加入如下浓度(0.1μM，0.25μM，0.5μM，0.75μM，1μM，2μM，5μM)的化合物1处理细胞，预处理半个小时，DMSO作为溶剂对照(0)；
(3)然后分别加入TNFα(10ng/mL)刺激处理细胞12h，或者TNFα(10ng/mL)+ZVAD(10μM)刺激处理细胞4h；
(4)在对应的时间，检测细胞的ATP含量(G7570，Promega)。
结果如图2所示，化合物1对TNFα或者TNFα+ZVAD诱导的L929细胞坏死样凋亡具有显著的抑制活性，EC50分别为0.75μM和0.5μM。
实施例4、化合物1对TNFα+ZVAD诱导坏死小体形成的作用
(1)Flag-Ripk1-Knock in-L929细胞经常规消化后，于培养基中重悬并吹打成单细胞悬液，然后以1x107个细胞接种到10cm盘，体积10mL；
(2)37℃，5％CO2的培养箱中培养12h，然后加入化合物1(1μM)预处理半个小时，DMSO作为对照；
(3)然后，分别加入TNFα(10ng/mL)+ZVAD(10μM)刺激处理细胞3h，DMSO作为对照(-)；
(4)收取细胞，在冰上裂解，利用M2 beads(Anti-Flag)对坏死细胞进行免疫共沉淀，然后通过western blot分析。
结果如图3所示，TNFα(10ng/mL)+ZVAD(10μM)刺激下诱导坏死小体(RIPK1-RIPK3-MLKL)形成，化合物1(1μM)预处理后，坏死小体不能形成。
实施例5、化合物1对TNFα+ZVAD诱导RIPK3/MLKL的磷酸化的作用
(1)L929细胞经常规消化后，于培养基中重悬并吹打成单细胞悬液，然后以每孔1×105个细胞接种到12孔板，每孔体积1mL；
(2)37℃，5％CO2的培养箱中培养12h，然后加入化合物1(1μM)预处理半个小时,DMSO作为对照；
(3)然后，加入TNFα(10ng/mL)+ZVAD(10μM)刺激处理细胞1h,2h；
(4)收取细胞，裂解，western blot分析。
结果如图4所示，TNFα(10ng/mL)+ZVAD(10μM)刺激下诱导RIPK3/MLKL发生磷酸化，化合物1(1μM)预处理后，磷酸化不能发生。
实施例6、化合物1与RIPK3的分子对接
受体源于RCSB蛋白质数据库下载的人类RIPK3晶体结构(PDB ID：6OKO)。基于Discovery Studio 2019软件的CDOCKER程序用于探索化合物化合物1与RIPK3的结合模式。通过自动“准备蛋白质”程序准备对接，包括去除水分子、添加氢原子和质子化氨基酸驻留在指定的pH值为7.4。从ZINC数据库下载化合物1的3D结构，并通过“制备配体”程序在指定的pH＝7.4下构建和制备。6OKO结合位点的坐标为x：-26.906093；y：11.526759；z：-9.429040，半径为
Figure BDA0003711733630000081
化合物1与RIPK3的分子对接的3D结果如图5所示，其二维投影结果如图6所示，化合物1与受体蛋白形成了多个范德华力(van der vaals)，配体分子结构中两个羟基相连的碳原子分别与蛋白氨基酸残基LYS51以及ASP161各生成1个hydrogen作用。此外，化合物1的大环内酯骨架与残基ALA64和LEU139可形成2个烷基(alkyl)相互作用。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (10)

1.镰刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48菌株，保藏编号为CCTCC M 2022503，2022年4月27日保藏于中国典型培养物保藏中心。
2.镰刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48在制备发酵化合物中的应用，其特征在于，所述发酵化合物为大环内酯类化合物或其盐，其结构如式(I)所示：
Figure FDA0003711733620000011
3.如权利要求2所述发酵化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将保藏编号为CCTCC M 2022503的镰刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48进行发酵培养，得到发酵物；
S2、将步骤S1得到的发酵物用乙酸乙酯进行萃取，取有机萃取物进行层析，分别使用石油醚、二氯甲烷和甲醇进行洗脱，浓缩二氯甲烷层，得到粗提物；
S3、将步骤S2得到的粗提物用正相硅胶柱色谱进行分离，用二氯甲烷-甲醇体系进行梯度洗脱，依次得到3个粗馏分：Fr.1～Fr.3；
S4、将粗馏分Fr.1先使用ODS柱色谱进行分离，再使用水-甲醇体系进行梯度洗脱依次得到两段粗馏分：Fr.1-1、Fr.1-2；
S5、将粗馏分Fr.1-1用葡聚糖凝胶柱分离后重结晶得到所述发酵化合物。
4.镰刀菌(Fusarium sp.)ZEN-48的发酵化合物在制备防治坏死样凋亡相关疾病的药物中的应用，其特征在于，所述镰刀菌ZEN-48的发酵化合物如权利要求2中所定义或如权利要求3所述制备方法获得。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述坏死样凋亡为TNFα诱导的坏死样凋亡或TNFα+ZVAD诱导的坏死样凋亡。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述药物是通过靶向RIPK3破坏坏死小体的形成和RIPK3/MLKL的磷酸化，进而抑制坏死样凋亡。
7.如权利要求4-6任一项所述的应用，其特征在于，所述坏死样凋亡疾病包括神经退行性疾病、炎症性肠病、动脉粥样硬化、急性胰腺炎、急性/药物诱导的肝损伤、急性肾损伤、病毒性感染及肿瘤中的一种或多种。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述神经退行性疾病包括阿尔茨海默症和肌萎缩侧索硬化；和/或，所述肿瘤包括脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、肝癌、食管癌、结直肠癌和前列腺癌中的一种或多种。
9.如权利要求4-6、8中任一项或权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物包含药学有效量的发酵化合物及药物辅料，所述酵化合物如权利要求2中所定义；和/或，所述药物的剂型为丸剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、管饲制剂、混悬剂、喷雾剂或膏剂。
10.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含权利要求2所述的发酵化合物，所述发酵化合物通过权利要求3所述的制备方法获得。
CN202210721964.XA 2022-06-24 2022-06-24 镰刀菌及其发酵化合物在防治坏死样凋亡相关疾病中的应用 Pending CN115074255A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210721964.XA CN115074255A (zh) 2022-06-24 2022-06-24 镰刀菌及其发酵化合物在防治坏死样凋亡相关疾病中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210721964.XA CN115074255A (zh) 2022-06-24 2022-06-24 镰刀菌及其发酵化合物在防治坏死样凋亡相关疾病中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115074255A true CN115074255A (zh) 2022-09-20

Family

ID=83256522

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210721964.XA Pending CN115074255A (zh) 2022-06-24 2022-06-24 镰刀菌及其发酵化合物在防治坏死样凋亡相关疾病中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115074255A (zh)

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6362218B1 (en) * 1997-12-18 2002-03-26 Purdue Research Foundation Brefeldin A derivatives
CN101580805A (zh) * 2009-03-31 2009-11-18 中国人民解放军第二军医大学 布雷菲德菌素a产生菌及发酵法生产布雷菲德菌素a
CN101982462A (zh) * 2010-09-29 2011-03-02 中国海洋大学 一种由海洋镰刀霉菌属分离提取的化合物及其应用
CN104877910A (zh) * 2014-02-27 2015-09-02 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种植物内生真菌布雷正青霉菌F4a及其应用
CN109111422A (zh) * 2017-06-23 2019-01-01 沈阳药科大学 大环内酯类化合物及其在制备防治植物病原性致病菌药物中的应用
CN110151755A (zh) * 2018-02-14 2019-08-23 浙江大学 一种布雷菲德菌素a在制备炎症因子活性抑制剂药物中的应用
CN110527629A (zh) * 2018-05-27 2019-12-03 扬州蓝色生物医药科技有限公司 一种海洋真菌来源的布雷菲德菌素a、制备方法及其在抗农业致病菌方面的应用
CN114058516A (zh) * 2020-08-01 2022-02-18 中国海洋大学 一株海洋来源产布雷菲德菌素a青霉真菌n29及其应用

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6362218B1 (en) * 1997-12-18 2002-03-26 Purdue Research Foundation Brefeldin A derivatives
CN101580805A (zh) * 2009-03-31 2009-11-18 中国人民解放军第二军医大学 布雷菲德菌素a产生菌及发酵法生产布雷菲德菌素a
CN101982462A (zh) * 2010-09-29 2011-03-02 中国海洋大学 一种由海洋镰刀霉菌属分离提取的化合物及其应用
CN104877910A (zh) * 2014-02-27 2015-09-02 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种植物内生真菌布雷正青霉菌F4a及其应用
CN109111422A (zh) * 2017-06-23 2019-01-01 沈阳药科大学 大环内酯类化合物及其在制备防治植物病原性致病菌药物中的应用
CN110151755A (zh) * 2018-02-14 2019-08-23 浙江大学 一种布雷菲德菌素a在制备炎症因子活性抑制剂药物中的应用
CN110527629A (zh) * 2018-05-27 2019-12-03 扬州蓝色生物医药科技有限公司 一种海洋真菌来源的布雷菲德菌素a、制备方法及其在抗农业致病菌方面的应用
CN114058516A (zh) * 2020-08-01 2022-02-18 中国海洋大学 一株海洋来源产布雷菲德菌素a青霉真菌n29及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JIRAPORN ARUNPANICHLERT;VATCHARIN RUKACHAISIRIKUL;YAOWAPA SUKPONDMA;SOUWALAK PHONGPAICHIT;ORATHAI SUPAPHONJARIYA SAKAYAROJ: "A β-resorcylic macrolide from the seagrass-derived fungus Fusarium sp. PSU-ES73", ARCHIVES OF PHARMACAL RESEARCH, vol. 34, no. 10 *
JIRAPORN ARUNPANICHLERT等: "A β-Resorcylic Macrolide from the Seagrass-derived Fungus Fusarium sp. PSU-ES73", ARCH PHARM RES, vol. 34, no. 10, pages 1633 - 1637 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107475146B (zh) 一种链霉菌及其代谢产物粉蝶霉素类化合物在抗肾癌中的应用
CN111499649B (zh) 一种具有抗肿瘤活性的苯并二呋喃酮类化合物、制备方法及其用途
CN112939865A (zh) 一种大环内酰胺化合物FW05328-d及其高效发酵方法
CN110218200B (zh) 一种红树内生真菌中环缩肽化合物及其制备方法与应用
CN115074255A (zh) 镰刀菌及其发酵化合物在防治坏死样凋亡相关疾病中的应用
CN111689895B (zh) 两个支链异构化粉蝶霉素类化合物及其在制备抗肾癌药物中的应用
CN111960937B (zh) 混源萜类化合物及其制备方法和在制备抗乳腺癌或二氢乳清酸脱氢酶抑制剂药物中的应用
CN102816212A (zh) 茜草科类型环肽及其药物组合物和应用
CN112300243B (zh) 一种环肽化合物及其制备方法和应用
CN111909021B (zh) Sorbicillinoids化合物及其制备方法与应用
CN109384823B (zh) 两个粉蝶霉素葡萄糖苷及其在抗肾癌药物中的应用
CN103214543A (zh) 新山楂酸衍生物、其制备方法及其在抗肿瘤药物中的应用
CN112094174B (zh) 鸟巢烷型二萜化合物及其应用
JP6130248B2 (ja) 新規化合物キノフラシン類、その製造方法、及びその用途、並びに新規微生物
CN116041305B (zh) 青霉菌（Penicillium mali）的发酵化合物及其制备方法和抗肿瘤应用
CN111440200A (zh) 一种混源萜生物碱及其抗寨卡病毒用途
CN105112322A (zh) 灰霉醌a和b及其制备方法和医药用途
CN111500467A (zh) 一种制备抗丙型肝炎病毒活性化合物雷斯吲哚甲的海洋青霉菌
US5498627A (en) Octahydro-2-naphthalenecarboxylic acid derivative, its production and use
CN116178463B (zh) 一种蒽酮糖苷类化合物及其制备方法和应用
JPH07196686A (ja) 化合物ｔａｎ−１７４６類、その製造法および用途
CN115850379B (zh) 一种海绵共附生真菌来源线性肽类化合物及其制备方法与应用
CN114073757B (zh) 环肽化合物及其制备方法和抗病毒用途
CN113133994B (zh) 三环二萜天然产物Vinigrol或其药物组合物在制备抗癌药物中的用途
CN109081842A (zh) 一种深海真菌来源蒽醌类化合物及其在制备抗过敏药物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination