CN111440200A - 一种混源萜生物碱及其抗寨卡病毒用途 - Google Patents

一种混源萜生物碱及其抗寨卡病毒用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种混源萜生物碱及其抗寨卡病毒用途。该混源萜生物碱分离自海洋真菌黑葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)的发酵物，体外实验表明，所述混源萜生物碱具有显著的抗寨卡病毒活性，具有进一步开发成新型抗病毒药物的潜力。

Description

一种混源萜生物碱及其抗寨卡病毒用途
技术领域
本发明属于药学领域，涉及一种新的混源萜生物碱及其制备方法，本发明还涉及所述化合物及其组合物的抗寨卡病毒用途。
背景技术
寨卡病毒(ZIKV)是一种黄病毒科黄病毒属RNA病毒，最早于1947年分离自乌干达寨卡森林的恒河猴血清样本，主要通过伊蚊进行传播，曾于2015年在巴西引起100多万感染病例。截至2019年5月，该病毒已迅速传播至84个国家和地区，成为世界范围内的公共卫生问题。
到目前为止，还没有特定的抗病毒药物被批准用于治疗ZIKV感染，临床上多使用常用药物来缓解症状，而ZIKV抑制剂的发现策略也主要集中于从小分子化合物库中筛选药物先导化合物，但仅有极少数化合物进入临床试验阶段，对于新型ZIKA抑制剂的发现仍迫在眉睫。
发明内容
本发明在研究一株海洋来源真菌葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)的化学成分的过程中，分离并鉴定了一种结构新颖的混源萜生物碱类化合物。体外抗ZIKV活性评价结果初步表明，该化合物具有显著的抗ZIKV活性，具有新型抗病毒先导化合物开发潜力。
本发明提供的新型混源萜生物碱类化合物，具有式I所述的化学结构：
Figure BDA0002424986110000011
本发明第二方面提供上述混源萜生物碱类式I化合物的制备方法，包括如下步骤：
1)以海洋真菌黑葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)为菌种，发酵培养获得含式I化合物的发酵物；
2)将发酵物用有机溶剂提取后，通过色谱法分离与纯化，制备得到式Ⅰ化合物。
上述步骤1)中，优选采用固体发酵培养黑葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)，室温下避光培养20～40天，得到固体发酵物。在本发明的一个实施例中采用人工海水浸泡大米，然后高压湿热灭菌配制的大米培养基。
上述步骤2)中，优选的，用乙酸乙酯提取发酵物得到浸膏，然后依次利用硅胶柱色谱、反向柱色谱分离和高效液相色谱纯化，从发酵物浸膏中分离纯化出式I化合物。其中所述硅胶柱色谱优选以二氯甲烷/甲醇为流动相进行梯度洗脱，得到的洗脱组分经ODS反相柱色谱分离，再利用半制备高效液相色谱进一步分离纯化，得到式I化合物。
在本发明的一个实施例中，将发酵物捣碎后用乙酸乙酯超声提取多次，减压浓缩得浸膏；浸膏用等比例硅胶扮样，利用减压硅胶柱色谱以二氯甲烷/甲醇为流动相梯度洗脱；二氯甲烷/甲醇(10:1，v/v)洗脱组分用ODS柱色谱以70％～100％甲醇水溶液为流动相梯度洗脱，90％甲醇水溶液洗脱组分用半制备高效液相色谱以68％乙腈水溶液为流动相等度洗脱，纯化得到式I化合物。
本发明还提供了式I化合物及其可药用盐在制备抗病毒药物中的应用。
本发明还提供了一种抗病毒组合物，包含式I化合物或其可药用盐。
上述抗病毒药物和抗病毒组合物中，所述病毒为寨卡病毒。
所述抗病毒药物或抗病毒组合物还包括药学上可接受的载体或稀释剂。所述抗病毒药物或抗病毒组合物可以是药学上可接受的任意一种剂型，包括具有适当组成的固态制剂(片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂等)、液体制剂(溶液剂、混悬剂、乳剂等)
本发明公开的式I化合物可以通过真菌发酵制备，产量高，绿色环保，利于可持续的工业化生产。通过体外实验证明了本发明的式I化合物抗寨卡病毒效果显著，具有进一步开发成新型抗病毒药物的潜力。
附图说明
图1.式Ⅰ化合物的化学结构及各碳的位置编号。
图2.式Ⅰ化合物的1H NMR图谱。
图3.式Ⅰ化合物的APT图谱。
图4.式Ⅰ化合物在三种浓度下抑制ZIKV蛋白的Western-blot实验结果。
具体实施方式
根据本发明所公开的技术内容，本领域技术人员将很清楚本发明的其他实施方案，下述实施方案仅作示例。
实施例1：海洋真菌黑葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)的固体发酵培养
1.菌株背景
本实验所用黑葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)分离于中国南海海绵Niphates sp.，菌种保藏于北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验室海洋微生物菌株库。其他来源的黑葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)也可用于本发明。
2.固体培养基的制备
将100mL人工海水与100g大米加入500mL三角瓶中，静置12h，后于121℃高压湿热灭菌30min，放凉待用。
3.菌株发酵
在PDA(马铃薯﹑葡萄糖﹑琼脂)培养皿上挑取长有新鲜Stachybotrys chartarum的琼脂片(1～2cm2)，接种于大米培养基，25℃下避光恒温培养30d，得到发酵产物。
实施例2：混源萜生物碱的制备
发酵产物捣碎后用乙酸乙酯超声萃取3次，每次1.5h，减压浓缩得粗浸膏(30g)。粗浸膏用等比例硅胶(160～200目)扮样，利用减压硅胶柱色谱以二氯甲烷/甲醇为流动相梯度洗脱(50:1～1:1，v/v)。二氯甲烷/甲醇(10:1，v/v)洗脱组分(3.7g)用ODS柱色谱以甲醇水溶液为流动相(体积百分比浓度70％～100％)梯度洗脱，90％洗脱组分用半制备高效液相色谱以68％乙腈水溶液(体积百分比浓度)为流动相等度洗脱，纯化得到式Ⅰ化合物(7.9mg)。
实施例3：式Ⅰ化合物化学结构的确认
根据高分辨谱(HEESIMS)数据，确定该化合物分子式为C50H64NO11，具有19个不饱和度。通过核磁共振1H-NMR谱及13C-NMR谱分析，确定化合物中含有19个季碳，10个次甲基，11个亚甲基，以及10个甲基，共50个碳信号(见图2和3)；并通过2D-NMR(HSQC，HMBC，COSY)实验推导出该化合物的平面结构。后根据NOESY谱中关键偶合信号，确定该化合物的相对构型。实施例4：化合物的抗ZIKV活性实验
实验中使用的细胞、病毒及抗体：
宿主细胞采用A549和Vero细胞系(ATCC，Manassas，VA，USA)，使用DMEM(添加10％的FBS)培养基，于37摄氏度青-链霉素双重抗性的5％二氧化碳培养箱培养。非系ZIKA病毒株MR766购自ATCC并在Vero细胞内进行传代保存。E特异性单克隆抗体(D1-4G2-4-15)购自于ATCC，ZIKV NS5单克隆抗体(8B8)购自于BioFront公司，人β-actin单克隆抗体和HRP标记的山羊抗小鼠抗体购自于Easybio公司。
实验方法：
式I化合物溶于DMSO并稀释至10mM浓度作为母液保存，实验中在DMEM培养基中稀释至浓度20μM。A549细胞接种于24孔无菌板上，每孔为5×104个细胞，并在DMEM(添加10％的FBS)培养基中静置过夜，后使用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗，向每孔中加入250μL DMEM(含10％FBS)培养基和250μL DMEM(含10％FBS和含20μM浓度的式I化合物)培养基，转染病毒培养24小时候进行Western-blot检测。
实验结果：
在20μM浓度下，式I化合物抑制病毒效果明显，后采用1、5和10μM浓度进行测试，发现式I化合物在5μM浓度下即能明显抑制ZIKV(见图4)。

Claims (10)

1.式I化合物：
Figure FDA0002424986100000011
2.权利要求1所述式I化合物的制备方法，包括如下步骤：
1)以海洋真菌黑葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)为菌种，发酵培养获得含式I化合物的发酵物；
2)将发酵物用有机溶剂提取后，通过色谱法分离与纯化，制备得到式Ⅰ化合物。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤1)采用固体发酵培养黑葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)，室温下避光培养20～40天，得到固体发酵物。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤1)固体发酵培养采用的是人工海水浸泡大米，然后高压湿热灭菌配制的大米培养基。
5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤2)中，用乙酸乙酯提取发酵物得到浸膏，然后依次利用硅胶柱色谱、反向柱色谱分离和高效液相色谱纯化，从发酵物浸膏中分离纯化出式I化合物。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中硅胶柱色谱以二氯甲烷/甲醇为流动相梯度洗脱，得到的洗脱组分经ODS反相柱色谱分离，再利用半制备高效液相色谱进一步分离纯化，分别得到式I化合物。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，在步骤2)中将发酵物捣碎后用乙酸乙酯超声提取多次，减压浓缩得浸膏；浸膏用等比例硅胶扮样，利用减压硅胶柱色谱以二氯甲烷/甲醇为流动相梯度洗脱；体积比为10:1的二氯甲烷/甲醇洗脱下来的组分用ODS柱色谱以70％～100％甲醇水溶液为流动相梯度洗脱，90％甲醇水溶液洗脱组分用半制备高效液相色谱以68％乙腈水溶液为流动相等度洗脱，纯化得到式I化合物。
8.权利要求1所述式I化合物或其可药用盐在制备抗病毒药物中的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述抗病毒药物是抗寨卡病毒的药物。
10.一种抗病毒组合物，包含权利要求1所述的式I化合物或其可药用盐。
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CN116535417A (zh) * 2022-12-07 2023-08-04 华南师范大学 一种海洋真菌来源的含氯混源萜化合物及其制备方法和应用

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116535417A (zh) * 2022-12-07 2023-08-04 华南师范大学 一种海洋真菌来源的含氯混源萜化合物及其制备方法和应用
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