CN115044412A - 一种陈皮精油及其制备方法和应用 - Google Patents

一种陈皮精油及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN115044412A
CN115044412A CN202210580092.XA CN202210580092A CN115044412A CN 115044412 A CN115044412 A CN 115044412A CN 202210580092 A CN202210580092 A CN 202210580092A CN 115044412 A CN115044412 A CN 115044412A
Authority
CN
China
Prior art keywords
essential oil
dried orange
orange peel
preparation
eutectic solvent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210580092.XA
Other languages
English (en)
Inventor
刘智谋
乐雅武
文句平
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hunan Nuoz Biological Technology Co ltd
Original Assignee
Hunan Nuoz Biological Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hunan Nuoz Biological Technology Co ltd filed Critical Hunan Nuoz Biological Technology Co ltd
Priority to CN202210580092.XA priority Critical patent/CN115044412A/zh
Publication of CN115044412A publication Critical patent/CN115044412A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B9/00—Essential oils; Perfumes
    • C11B9/02—Recovery or refining of essential oils from raw materials
    • C11B9/025—Recovery by solvent extraction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/75—Rutaceae (Rue family)
    • A61K36/752—Citrus, e.g. lime, orange or lemon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B9/00—Essential oils; Perfumes
    • C11B9/02—Recovery or refining of essential oils from raw materials
    • C11B9/022—Refining

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明提出了一种陈皮精油及其制备方法和应用，属于植物精油技术领域。包括以下步骤：S1.将尿素、氯化胆碱混合均匀后，加入水，加热搅拌至形成稳定、均匀的透明液体，得到低共熔溶剂；S2.将陈皮经筛选、清洗、阴干后，粉碎过筛，得到陈皮粉；S3.将步骤陈皮粉加入低共熔溶剂中，超声加热提取，离心，上清液中加入乙酸乙酯提取，分离得到乙酸乙酯层，除去溶剂，得到陈皮精油。本发明发现了一种绿色制备陈皮精油的方法，并分析了制得的陈皮精油的组分，研究了体外抗癌细胞的活性，可以应用于预防及治疗、辅助治疗抗癌症药物的制备，具有广阔的应用前景。

Description

一种陈皮精油及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及植物精油技术领域，具体涉及一种陈皮精油及其制备方法和应用。
背景技术
恶性肿瘤就是人们所说的癌症，它是100多种相关疾病的统称。当身体内细胞发生突变后，它会不断地分裂，不受身体控制，最后形成癌症。人们身体内所有器官都是由细胞组成。细胞增长和分化可满足身体需要，这种有序的过程可保持人们身体健康。然而，如果细胞继续分裂，这些额外的大量细胞就形成肿瘤。恶性肿瘤的细胞能侵犯、破坏邻近的组织和器官。而且，癌细胞可从肿瘤中穿出，进入血液或淋巴系统，这就是癌症如何从原发的部位到其它器官形成新的肿瘤，这个过程就叫癌症转移，多数癌症是根据他们起始的器官或细胞类型来命名的。近年来，植物精油的抗癌活性越来越受到研究者们的重视，但其与细胞是如何结合而发挥作用，特别是植物精油的化学成分如何与靶点作用发挥生物学效应的问题一直困扰诸多研究者。此外，天然植物提取物成分复杂，传统试验方法在筛选有效成分方面费时耗力，周期长成本高，利用各种生物信息学方法进行新药研发和靶点预测已经成为热点。因此采用分子对接技术研究植物精油抗癌活性，有助于提高活性成分的筛选效率，揭示植物精油抗癌活性的机制。
植物精油是萃取植物特有的芳香物质，取自于草本植物的花、叶、根、树皮、果实、种子、树脂等以蒸馏、压榨方式提炼出来的。由于香熏精油挥发性高，且分子小，很容易被人体吸收，并能迅速渗透人体内器官，将多余的成分排出体外，整个过程只需要几分钟，而植物本身的香味，也直接刺激脑下垂体的分泌，酵素及荷尔蒙分泌等，平衡体内机能，起到美容护肤的作用。可想而知精油对人体的奥秘是无比宽广的。精油是芳香植物的高度浓缩提取物。植物精油的提取方式取决于所提取植物的材料，不同种类的植物或者同种植物的不同部位的精油适宜采取的提取方式也不同。不同的提取方法也会影响植物精油的品质，甚至会影响植物精油的某些生物活性或损失植物精油的部分理化性质等天然特质。经典的植物精油的提取方法包括水蒸汽蒸馏法、有机溶剂萃取提取法、压榨法和吸附法等。
橘皮，又称为陈皮，为芸香科植物橘及其栽培变种的成熟果皮。橘常绿小乔木或灌木，栽培于丘陵、低山地带、江河湖泊沿岸或平原。分布于长江以南各地区。10至12月果实成熟时，摘下果实，剥取果皮，阴干或通风干燥。广橘皮(陈皮)剥取时多割成3至4瓣。橘皮(陈皮)药材分"陈皮"和"广陈皮"。性温，味辛、味苦。入脾经、胃经、肺经。理气健脾，调中，燥湿，化痰。主治脾胃气滞之脘腹胀满或疼痛、消化不良。湿浊阻中之胸闷腹胀、纳呆便溏。痰湿壅肺之咳嗽气喘。用于胸脘胀满，食少吐泻，咳嗽痰多。
发明内容
本发明的目的在于提出一种陈皮精油及其制备方法和应用，分析了制得的陈皮精油的组分，研究了体外抗癌细胞的活性，进一步地，通过分子对接技术研究了其主要成分之一d-柠檬烯与癌细胞关键酶蛋白分子对接方法，得出了该陈皮精油有很好的抗癌活性，可以应用于预防及治疗、辅助治疗抗癌症药物的制备，具有广阔的应用前景。
本发明的技术方案是这样实现的：
1.本发明提供一种陈皮精油的制备方法，采用低共熔溶剂提取法制备陈皮精油，包括以下步骤：
S1.低共熔溶剂的制备：将尿素、氯化胆碱混合均匀后，加入水，加热搅拌至形成稳定、均匀的透明液体，得到低共熔溶剂；
S2.陈皮的预处理：将陈皮经筛选、清洗、阴干后，粉碎过筛，得到陈皮粉；
S3.陈皮精油的制备方法：将步骤S2制得的陈皮粉加入步骤S1制得的低共熔溶剂中，超声加热提取，离心，上清液中加入乙酸乙酯提取，分离得到乙酸乙酯层，除去溶剂，得到陈皮精油。
作为本发明的进一步改进，步骤S1中所述尿素、氯化胆碱和水的质量比为(5-12)：10：(1-3)。
作为本发明的进一步改进，步骤S2中所述筛网的目数为100-200目。
作为本发明的进一步改进，步骤S3中所述陈皮粉、低共熔溶剂的质量比为1：(2-5)。
作为本发明的进一步改进，步骤S3中所述超声加热提取中，超声功率为1000-1200W，所述加热至温度为70-90℃，提取时间为3-5h。
本发明进一步保护一种上述的制备方法制得的陈皮精油。
作为本发明的进一步改进，包含以下原料：d-柠檬烯、γ-萜品烯、邻甲氨基苯甲酸甲酯。
本发明进一步保护如上述陈皮精油在制备预防及治疗、辅助治疗抗癌症药物中的应用。
作为本发明的进一步改进，所述癌症为肝癌或者结肠癌。
本发明具有如下有益效果：本发明发现了一种绿色制备陈皮精油的方法，并分析了制得的陈皮精油的组分，研究了体外抗癌细胞的活性，进一步地，通过分子对接技术研究了其主要成分之一d-柠檬烯与癌细胞关键酶蛋白分子对接方法，得出了该陈皮精油有很好的抗癌活性，可以应用于预防及治疗、辅助治疗抗癌症药物的制备，具有广阔的应用前景。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为陈皮精油总离子流图；
图2为d-柠檬烯与结肠癌、肝癌靶点韦恩图；
图3为受体与配体3D结构图；
图4为d-柠檬烯与2REW(左)、2KI9(右)相互作用图；
图5为阴性对照组处理后结肠癌HCT116细胞光镜图；
图6为陈皮精油处理后结肠癌HCT116细胞光镜图；
图7为阴性对照组肝癌HepG2细胞光镜图；
图8为陈皮精油处理后肝癌HepG2细胞光镜图。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种陈皮精油的制备方法，采用低共熔溶剂提取法制备陈皮精油，包括以下步骤：
S1.低共熔溶剂的制备：将5g尿素、10g氯化胆碱混合均匀后，加入1g水，加热搅拌至形成稳定、均匀的透明液体，得到低共熔溶剂；
S2.陈皮的预处理：将陈皮经筛选、清洗、阴干后，粉碎过100目筛，得到陈皮粉；
S3.陈皮精油的制备方法：将10g步骤S2制得的陈皮粉加入20g步骤S1制得的低共熔溶剂中，1000W超声加热至70℃，提取3h，离心，上清液中加入乙酸乙酯提取，分离得到乙酸乙酯层，除去溶剂，得到陈皮精油。
实施例2
一种陈皮精油的制备方法，采用低共熔溶剂提取法制备陈皮精油，包括以下步骤：
S1.低共熔溶剂的制备：将12g尿素、10g氯化胆碱混合均匀后，加入3g水，加热搅拌至形成稳定、均匀的透明液体，得到低共熔溶剂；
S2.陈皮的预处理：将陈皮经筛选、清洗、阴干后，粉碎过200目筛，得到陈皮粉；
S3.陈皮精油的制备方法：将10g步骤S2制得的陈皮粉加入50g步骤S1制得的低共熔溶剂中，1200W超声加热至90℃，提取5h，离心，上清液中加入乙酸乙酯提取，分离得到乙酸乙酯层，除去溶剂，得到陈皮精油。
实施例3
一种陈皮精油的制备方法，采用低共熔溶剂提取法制备陈皮精油，包括以下步骤：
S1.低共熔溶剂的制备：将9g尿素、10g氯化胆碱混合均匀后，加入2g水，加热搅拌至形成稳定、均匀的透明液体，得到低共熔溶剂；
S2.陈皮的预处理：将陈皮经筛选、清洗、阴干后，粉碎过150目筛，得到陈皮粉；
S3.陈皮精油的制备方法：将10g步骤S2制得的陈皮粉加入35g步骤S1制得的低共熔溶剂中，1100W超声加热至80℃，提取4h，离心，上清液中加入乙酸乙酯提取，分离得到乙酸乙酯层，除去溶剂，得到陈皮精油。
测试例1
将实施例3制得的陈皮精油进行GC-MS分析。
GC色谱条件：进样口温度250℃，进样量1.0μL，柱流量为1.0mL/min，分流比1:20，程序升温：初始温度50℃，先以1℃/min上升至70℃，接着5℃/min上升至190℃，最后10℃/min上升至250℃。采用峰面积归一化法计算成分的相对含量。
MS质谱条件：电离方式为EI电离源；电离能为70eV；离子源温度250℃，四级杆温度为150℃。质量扫描模式全扫描，扫描范围为m/z：30～550u。仪器自带数据库鉴定成分进行成分比对。
GC-MS总离子流图见图1。检测结果见表1，在陈皮精油中共检测出9个色谱峰，鉴定出5种化合物。其中值得注意的是，陈皮精油中含有大量的d-柠檬烯，占总含量的88.47％，是陈皮精油的主要化学成分。其次为γ-萜品烯(7.62％)、邻甲氨基苯甲酸甲酯(1.69％)、α-thujene(1.23％)、Bicyclo[4.1.0]heptane,7-methylene-(0.99％)。
表1陈皮精油主要化学成分
Figure BDA0003661987180000081
测试例2柠檬烯与癌细胞关键酶蛋白分子对接
柠檬烯是陈皮精油中含量最高的成分。
(1)从https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/网站查找枯茗醛(cuminaldehyde)结构信息，获得SMILES式为：CC(C)C1＝CC＝C(C＝C1)C＝O。柠檬烯(4-Methyl-1-(prop-1-en-2-yl)cyclohexene)结构信息，获得SMILES式为：CC1＝CCC(CC1)C(＝C)C。
(2)在http://www.swisstargetprediction.ch/网站中插入枯茗醛结构信息CC(C)C1＝CC＝C(C＝C1)C＝O，点“＝”后得到结构信息，选择“Homo sapiens”，获得柠檬烯预测靶点信息，见表2，共有92个。优先选择“Probability”系数大的靶点，系数为零的可不考虑。
表2柠檬烯、肝癌与结肠癌共有靶点
Figure BDA0003661987180000082
Figure BDA0003661987180000091
Figure BDA0003661987180000101
(3)分别在https://www.genecards.org/网站输入关键词：“colon cancer”、输出结肠癌靶点，共有21464个；输入关键词：“Hepatocellular Carcinoma”，获得肝癌的靶点，共有7392个。
(4)采用绘制韦恩图，找出枯茗醛与结肠癌、肝癌的共有靶点70个，见图2。其中两个靶点“Probability”值最大，为0.04，分别是GSK3β(糖原合成激酶)和ALDH1A1(乙醛脱氢酶1A1)，见表3。
表3柠檬烯与结肠癌、肝癌靶点表
Figure BDA0003661987180000111
(5)在Uniprot数据库中获取PPARA和CNR2对应的“Uniprot ID”(PPARA对应Q07869；CNR2对应P34972)。
(6)根据“Uniprot ID”在PDB蛋白质结构数据库找到对应蛋白分子编码(PPARA对应2REW；CNR2对应2KI9)的3D结构作为受体结构(见图3)。使用AutoDock Tools 1.5.6软件自带的RDKit程序对柠檬烯分子进行模型构建，并运用其能量最小化模块，分别优化得到能量最低的构象，作为配体结构。
(7)分子结构预处理：4DIT和4WJ9作为本次对接的受体，枯茗醛作为本次对接的配体。使用AutoDock Tools 1.5.6软件预处理，将4DIT和4WJ9中的所有水分子和配体删除，添加极性氢原子并计算Gasteiger电荷。将枯茗醛添加原子电荷，分配原子类型，所有柔性键均默认可旋转。
(8)分子对接细节：采用AutoDock Vina 1.1.2进行分子对接，并对接结果进行分析处理。配体设置为柔性，受体设置为刚性。4DIT活性中心Gridbox位置设置为center_x＝12.089，center_y＝2.573，center_z＝-12.558；大小设置为size_x＝60，size_y＝60，size_z＝60；spaces＝1。4WJ9的活性中心Gridbox位置设置为center_x＝45.056，center_y＝-1.414，center_z＝19.163；大小设置为size_x＝60，size_y＝60，size_z＝60；spaces＝1。搜寻精度exhaustiveness设为32，num_modes＝5，其他参数默认。
结果如图4，柠檬烯与2REW，2KI9主要为疏水结合方式，柠檬烯在2REW中位于疏水口袋，被氨基酸残基His411，Ser373，Ala207，Leu377，Tyr211，Lys208包围，形成疏水结合；柠檬烯在2KI9中被残基Leu15，Leu16，Ttrp19，Pro21，Phe20包围，形成疏水结合。根据AutoDock Vina 1.1.2软件计算，柠檬烯与2REW，2KI9的分子结合能分别为-4.70，-3.90kcal/mol(1kcal＝4.185kJ)。
测试例3体外抗肿瘤活性
样品溶液的配制：分别称取实施例3制得的陈皮精油适量溶解于0.5g/mL的PEG2000溶液，配制成10mg/mL的精油溶液，再分别稀释为25、50、100、200μg/mL不同浓度的精油供试液。顺铂和紫杉醇则分别溶解于0.5g/mL DMSO中(顺铂和紫杉醇难溶于PEG2000溶液)，并分别稀释为12.5、25、50、100μg/mL，作为阳性对照液。
缓冲盐溶液(PBS)的配制：准确称量NaCl 2.0g、KCl 0.05g、Na2HPO4·12H2O 0.9g、KH2PO40.05 g，于灭菌超纯水中溶解，然后定容至250mL，高压灭菌锅灭菌后保存备用。
癌细胞复苏：将结肠癌HCT116细胞与肝癌HepG2细胞冻存管从液氮储存罐中取出，分别置于37℃水浴锅中，持续轻微摇动冻存管，使其快速解冻，待解冻完成后，在超净工作台中用移液器将细胞打匀，并加入至装有1640培养基2mL的离心管内，在转速为800rpm离心5min，弃掉上层清液，向离心管中加入新鲜1640培养基使细胞悬浮，吸装到培养皿中，补加培养基至8mL。将其转入培养箱中在37℃、5％CO2和饱和湿度条件下进行培养，每24h更换一次培养基，观察贴壁情况，当细胞长满80-90％培养皿时即可进行细胞培养。
癌细胞培养：将生长状态良好的贴壁细胞用PBS缓冲液清洗两次，滴加1mL的0.05％胰蛋白酶进行消化，摇动培养皿，让胰蛋白酶与细胞充分的接触，用移液器吸掉一部分胰蛋白酶，再将其转入37℃恒温培养箱中消化2min后拿出，然后加入4mL的1640培养基终止消化。用移液器轻轻吹打细胞，待细胞吹打均匀后，按照需要吸取适量体积细胞液至新的培养皿中，每个培养皿中补加新鲜的培养基至8mL，将其转入培养箱中在37℃、5％CO2和饱和湿度条件下进行培养，每24h更换新培养基，观察细胞培养情况。
取对数生长期的结肠癌HCT-116细胞或肝癌HepG2细胞，滴加适量的0.05％胰蛋白酶进行充分消化，用1640培养基调整细胞浓度为5×103个/mL的细胞悬浮液。在96孔板中，每孔加入100μL细胞悬浮液进行接种，将96孔板转移至恒温培养箱中在37℃、5％CO2和饱和湿度条件下进行培养，待细胞贴壁后，分别加入不同浓度精油供试溶液100μL，每个浓度设3个平行组。另外以添加了100μL的顺铂、紫杉醇阳性对照液的细胞悬浮液作为阳性对照组，添加了PEG2000溶液100μL的细胞悬浮液作为阴性对照组，各实验组配制情况见表3。将96孔板放置于细胞培养箱中孵育18h后，在倒置荧光显微镜下进行观察。
表3实验组配制情况表
细胞悬浮液μL 精油μL 紫杉醇/顺铂μL PBS溶液μL PEGμL
样品组 100 100
阴性对照组 100 100
阳性对照组 100 100
在倒置显微镜镜下拍照后，继续向96孔板每孔加入MTS试剂10μL，37℃孵育30min，使用酶标仪在490nm处测定吸光值(OD)，计算癌细胞增殖抑制率，计算方法如下：
Figure BDA0003661987180000141
ODb：空白组吸光值，ODs：样品吸光值，ODp为培养基吸光值。
采用MTS法测定了陈皮精油对结肠癌HCT116细胞体外增殖的抑制率，结果见表4。
表4
浓度μg/mL 抑制率(％)
25 40.32±6.78
50 30.97±3.57
100 38.02±4.03
200 45.83±7.57
表5阳性对照药物抑制结肠癌HCT116细胞体外增殖实验结果(n＝3)
Figure BDA0003661987180000142
Figure BDA0003661987180000151
由上表可知，在精油浓度为200μg/mL条件下，陈皮精油的抑制率达到了45.83％。因此，可以认为，陈皮精油具有良好的抑制结肠癌细胞体外增殖的活性。
在倒置显微镜下拍摄HCT-116细胞生长的照片。在同一面积视野下，阴性对照组HCT-116细胞生长旺盛(图5)，细胞形态正常。经过200μg/mL陈皮精油处理后细胞数量明显减少(图6)，细胞胞体出现不同程度的细胞体破裂，细胞轮廓呈不规则状。这表明陈皮精油能抑制结肠癌HCT116细胞的增殖，与MTS法实验研究结论吻合。
采用MTS法测定了陈皮精油对肝癌HepG2细胞体外增殖的抑制率，结果见表6。
表6
浓度μg/mL 抑制率(％)
25 14.23±2.53
50 32.40±6.44
100 46.42±6.24
200 46.09±2.56
表5阳性对照药物抑制肝癌HepG2细胞体外增殖实验结果(n＝3)
Figure BDA0003661987180000161
由上表可知，在精油浓度为200μg/mL条件下，陈皮精油的抑制率达到了46.09％。因此，可以认为，陈皮精油具有良好的抑制肝癌细胞体外增殖的活性。
在倒置显微镜下拍摄肝癌HepG2生长的照片。在同一面积视野下，阴性对照组肝癌HepG2生长旺盛(图7)，细胞形态正常。经过200μg/mL陈皮精油处理后细胞数量明显减少(图8)，细胞胞体出现不同程度的细胞体破裂，细胞轮廓呈不规则状。这表明陈皮精油能抑制肝癌HepG2细胞的增殖，与MTS法实验研究结论吻合。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种陈皮精油的制备方法，其特征在于，采用低共熔溶剂提取法制备陈皮精油，包括以下步骤：
S1.低共熔溶剂的制备：将尿素、氯化胆碱混合均匀后，加入水，加热搅拌至形成稳定、均匀的透明液体，得到低共熔溶剂；
S2.陈皮的预处理：将陈皮经筛选、清洗、阴干后，粉碎过筛，得到陈皮粉；
S3.陈皮精油的制备方法：将步骤S2制得的陈皮粉加入步骤S1制得的低共熔溶剂中，超声加热提取，离心，上清液中加入乙酸乙酯提取，分离得到乙酸乙酯层，除去溶剂，得到陈皮精油。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述尿素、氯化胆碱和水的质量比为(5-12)：10：(1-3)。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述筛网的目数为100-200目。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述陈皮粉、低共熔溶剂的质量比为1：(2-5)。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述超声加热提取中，超声功率为1000-1200W，所述加热至温度为70-90℃，提取时间为3-5h。
6.一种如权利要求1-5任一项所述的制备方法制得的陈皮精油。
7.根据权利要求6所述的陈皮精油，其特征在于，包含以下原料：d-柠檬烯、γ-萜品烯、邻甲氨基苯甲酸甲酯。
8.如权利要求5或6所述陈皮精油在制备预防及治疗、辅助治疗抗癌症药物中的应用。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述癌症为肝癌或者结肠癌。
CN202210580092.XA 2022-05-25 2022-05-25 一种陈皮精油及其制备方法和应用 Pending CN115044412A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210580092.XA CN115044412A (zh) 2022-05-25 2022-05-25 一种陈皮精油及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210580092.XA CN115044412A (zh) 2022-05-25 2022-05-25 一种陈皮精油及其制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115044412A true CN115044412A (zh) 2022-09-13

Family

ID=83158595

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210580092.XA Pending CN115044412A (zh) 2022-05-25 2022-05-25 一种陈皮精油及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115044412A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115919821A (zh) * 2022-12-12 2023-04-07 南昌大学第二附属医院 胆碱在制备预防肝癌产品中的用途及一种胆碱口服液

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107669774A (zh) * 2017-09-26 2018-02-09 雅安太时生物科技股份有限公司 柑橘皮中柑橘精油和黄酮类化合物的提取方法以及柑橘皮提取物及其应用
CN109609270A (zh) * 2018-11-21 2019-04-12 浙江工业大学 基于天然低共熔溶剂-微波辅助水蒸气提取香料中精油的方法
CN111718799A (zh) * 2020-06-30 2020-09-29 三沙南海美源岛生物科技有限公司 一种低共熔溶剂法超声辅助蒸馏提取胡椒叶精油的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107669774A (zh) * 2017-09-26 2018-02-09 雅安太时生物科技股份有限公司 柑橘皮中柑橘精油和黄酮类化合物的提取方法以及柑橘皮提取物及其应用
CN109609270A (zh) * 2018-11-21 2019-04-12 浙江工业大学 基于天然低共熔溶剂-微波辅助水蒸气提取香料中精油的方法
CN111718799A (zh) * 2020-06-30 2020-09-29 三沙南海美源岛生物科技有限公司 一种低共熔溶剂法超声辅助蒸馏提取胡椒叶精油的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
黄巧娟等: "D-柠檬烯抗癌机制的研究进展", 《食品科学》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115919821A (zh) * 2022-12-12 2023-04-07 南昌大学第二附属医院 胆碱在制备预防肝癌产品中的用途及一种胆碱口服液

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105542024B (zh) 红藻龙须菜多糖及其制备、抗肿瘤活性检测方法和应用
CN104068398B (zh) 一种具有增强免疫力功能的保健品及其制备方法
CN105641000A (zh) 一种含灰树花提取物的抗肿瘤组合物及其制备方法
CN115044412A (zh) 一种陈皮精油及其制备方法和应用
CN109232760A (zh) 桑黄护肝多糖ppb-2及其制备方法
CN108315264A (zh) 一种海漆内生真菌来源的聚酮化合物及其在制备抗炎药物中的应用
CN1956725B (zh) 抗肿瘤剂
JP2008212137A (ja) 生物転換法を利用したペリヌスリンテウス菌糸体の液体培養による人参からの新規のジンセノサイド製造方法
CN104706554B (zh) 一种莲叶细胞次生代谢物冻干粉的制备方法及其应用
CN103191143B (zh) 一种强心苷化合物的用途
CN109929006B (zh) 阿魏菇中麦角甾醇过氧化物的提取方法及应用
CN107173815A (zh) 一种北太平洋鱿鱼缠卵腺抗氧化酶解寡肽的用途
JP2003342188A (ja) 抗ガン剤
CN114989891A (zh) 一种当归精油及其制备方法和应用
CN105669630A (zh) 适于用作肝癌靶向药物的脱氧二氢黄当归醇h查尔酮的提取方法
CN112760235A (zh) 一株老鼠簕内生真菌Diaporthe goulteri及其代谢产物的应用
CN115044411A (zh) 一种五味子精油及其制备方法和应用
CN104398532B (zh) 一种强心苷化合物的用途
CN100446802C (zh) 预防肿瘤转移的天然药物
CN109771452A (zh) 虎奶菇提取物在制备治疗肿瘤药物中的应用
CN107260768A (zh) 一种香菇复合多糖组合物及其制备方法和应用
CN104324043B (zh) 一种强心苷化合物的用途
CN109984955A (zh) 一种含有银耳芽孢胞外多糖的保湿爽肤水
CN109548943A (zh) 一种机制槐米炒制茶加工方法
CN114989890A (zh) 一种孜然精油及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination