CN115011485A - 桑黄之菌丝体及/或其衍生物、其制造方法及其用于制备改善睡眠之组成物的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明系有关于一种桑黄之菌丝体及/或其衍生物、其制造方法及其用于制备改善睡眠之组成物的用途。将自行筛选的桑黄进行多阶段培养步骤,所得之桑黄之菌丝体及/或其衍生物可应用于制备改善睡眠之组成物。
Description
【技术领域】
本发明系有关于一种真菌菌丝体及/或其衍生物、其制造方法及其用途,特别是有关于一种桑黄(Phellinus linteus)之菌丝体及/或其衍生物、其制造方法及其用于制备改善睡眠之组成物的用途。
【现有技术】
良好的睡眠可使身体可以正常代谢,心灵得到放松,倘若无法拥有良好的睡眠,将影响生活的各个层面,包含生理、心理、认知、社会功能及生活质量。于生理方面,长期失眠可能导致肥胖、心血管系统、内分泌系统、恶性肿瘤、支气管哮喘、溃疡病、糖尿病及性功能障碍等方面疾病相关。于心理、认知、社会功能方面,影响白天的情绪、工作表现及人际关系。根据世界卫生组织统计,全球睡眠障碍率达27%,而台湾睡眠医学学会调查则发现,全台至少有200万人有慢性失眠困扰,亦即每5人有1人有失眠的症状。
治疗失眠的药物包含苯二氮平(Benzodiazepines,BZD)类药物、非苯二氮平(Non-Benzodiazepines,Non-BZD)类药物、三环抗忧郁剂(Tricyclic Antidepressants,TCA)类药物、褪黑素致效剂(Melatonin Agonist)类药物及抗组织胺类药物。前述药物除了会产生头昏、头痛、胃肠不适或嗜睡等副作用外,长期使用苯二氮平类药物,有可能产生依赖性及戒断症状。非苯二氮平类药物有可能造成短暂失忆及梦游的副作用。三环抗忧郁剂则亦有戒断症状。
桑黄(Phellinus linteus)的中文学名为裂蹄木层孔菌,属于刺革菌科(Hymenochaetaceae)木层孔菌属(Phellinus)。桑黄生长于桑属植物的树干上,又称桑耳或桑臣。明代李时珍《本草纲目》中即记载其性寒、味微苦,能利五脏、宣肠气、排毒气或止血等,为中医常用于利尿、健胃或止泻等。然而,对于桑黄在改善睡眠的效果,则少有研究。
【发明内容】
因此,本发明之一方面是提供一种桑黄(Phellinus linteus)之菌丝体及/或其衍生物,其中桑黄之菌丝体及/或其衍生物系源自于保藏在日本独立行政法人制品评价技术基盘机构(NITE)特许生物保藏中心(IPOD)且保藏编号为NITE BP-03321之菌株。
本发明之另一方面系在提供一种桑黄之菌丝体及/或其衍生物的制造方法,其系利用多阶段培养步骤,以获得桑黄之菌丝体及/或其衍生物。
本发明之又一方面系在提供一种桑黄之菌丝体及/或其衍生物,其系利用上述之制造方法所制得。
本发明之再一方面系在提供一种上述桑黄之菌丝体及/或其衍生物用于制备改善睡眠之组成物的用途。
根据本发明之上述之方面,提出一种桑黄(Phellinus linteus)之菌丝体及/或其衍生物,其中桑黄之菌丝体及/或其衍生物系于2020年11月12日保藏于日本NITE的IPOD且保藏编号为NITE BP-03321之菌株。
根据本发明之上述之另一方面,提出一种桑黄菌丝体及/或其衍生物的制造方法,包含将桑黄之第一菌丝体进行多阶段培养步骤,以获得桑黄之菌丝体及/或其衍生物。多阶段培养步骤如下。首先,进行固态培养步骤,其系利用固态培养基于15℃至30℃培养第一菌丝体达1周至2周,以获得第二菌丝体。桑黄是保藏编号为NITE BP-03321之菌株。
接着,进行液态培养步骤,其系利用第一培养液于15℃至30℃培养第二菌丝体达3天至14天,以获得第三菌丝体,其中第一培养液之酸碱值为pH 2至pH 6。然后,进行发酵培养步骤,其系利用第二培养液于15℃至30℃培养第三菌丝体达3天至21天,以获得桑黄发酵液,其中第二培养液之酸碱值为pH 2至pH 6,且桑黄发酵液包含桑黄之菌丝体及/或其衍生物。
依据本发明上述之实施例,上述之发酵培养步骤系于发酵槽中进行,且在进行发酵培养步骤时,可选择包含对发酵槽导入气体,气体系选自于由空气、氧气、二氧化碳、氦气或上述任意组合所组成之一族群。
依据本发明上述之实施例,上述之发酵培养步骤系于0.5kg/cm2至1.0kg/cm2之槽压及0.01〔通入气体体积/发酵液体积/分钟,VVM〕至1.5VVM之通气速率下进行。
依据本发明上述之实施例,上述之发酵培养步骤后更包含对桑黄发酵液进行干燥步骤,以获得桑黄发酵干燥物。
依据本发明上述之实施例,在干燥步骤后,更包含利用极性溶剂对桑黄发酵干燥物进行萃取步骤,以获得桑黄萃取液。
依据本发明上述之实施例,上述之极性溶剂包含水及/或低级醇。
依据本发明上述之实施例,在萃取步骤后,更包含对桑黄萃取液进行浓缩步骤,以获得桑黄萃取浓缩物。
根据本发明之上述之又一方面,提出一种桑黄之菌丝体及/或其衍生物,其系利用上述之制造方法所制得,其中桑黄之菌丝体及/或其衍生物包含桑黄发酵液、桑黄发酵干燥物、桑黄萃取液及/或桑黄萃取浓缩物。
根据本发明之上述之再一方面,提出一种如上述的桑黄之菌丝体及/或其衍生物用于制备改善睡眠之组成物的用途,其中组成物为口服组成物。
应用本发明的桑黄之菌丝体及/或其衍生物及/或含有桑黄之菌丝体及/或其衍生物之组成物,其系将自行筛选的桑黄进行多阶段培养步骤,所得之桑黄之菌丝体及/或其衍生物可应用于制备改善睡眠之组成物。
【生物材料保藏】
桑黄(Phellinus linteus)系于2020年11月12日保藏于日本千叶木更津市上总镰足2-5-8 120号室的独立行政法人制品评价技术基盘机构(NITE)特许生物保藏中心(IPOD),且保藏编号为NITE BP-03321。
【附图简单说明】
为让本发明之上述和其他目的、特征、优点与实施例能更明显易懂,所附图式之详细说明如下:
[图1]系绘示根据本发明一实施例的桑黄之菌丝体及/或其衍生物的制造方法之流程图。
[图2]系绘示桑黄(NITE BP-03321)与其他习知桑黄的18s rRNA序列比对的演化树。
[图3A]系绘示根据本发明一实施例之非快速眼动(non-rapid eye movement,NREM)睡眠的折线图。
[图3B]系绘示根据本发明一实施例之快速眼动(rapid eye movement,REM)睡眠的折线图。
【实施方式】
承上所述,本发明提供一种桑黄(Phellinus linteus)之菌丝体及/或其衍生物、其制造方法及其用于制备改善睡眠之组成物的用途。
本发明之桑黄(Phellinus linteus)属于刺革菌科(Hymenochaetaceae)木层孔菌属(Phellinus),中文学名为裂蹄木层孔菌,其系于2020年11月12日保藏在日本千叶木更津市上总镰足2-5-8 120号室的独立行政法人制品评价技术基盘机构(NITE)特许生物保藏中心(IPOD),保藏编号为NITE BP-03321之菌株。
本发明另提出一种桑黄之菌丝体及/或其衍生物的制造方法,包含将桑黄之菌丝体进行多阶段培养步骤,以获得桑黄之菌丝体及/或其衍生物。
请参阅图1,其系绘示根据本发明一实施例的桑黄之菌丝体及/或其衍生物的制造方法100之流程图。首先,如方法100步骤110所示,提供桑黄之第一菌丝体。桑黄之第一菌丝体系保藏编号为NITE BP-03321之菌株。
接着,如步骤120所示,将桑黄之第一菌丝体进行多阶段培养步骤。由于营养成分与环境因子等条件,对于桑黄的生长与分化有直接的影响,透过多阶段培养步骤可调控桑黄在每个阶段的生长条件,而可获得不同成分的产物。
在此实施例中,如步骤121所示,多阶段培养步骤包含对第一菌丝体进行固态培养步骤,以获得第二菌丝体。固态培养步骤是利用固态培养基进行。固态培养基包含可提供桑黄之菌丝体生长的碳源、氮源及必须的营养物质。固态培养基可例如为马铃薯糊精培养基(Potato Dextrose Agar,PDA)。
在此实施中,固态培养步骤的条件为于15℃至30℃培养第一菌丝体达1周至2周。倘温度超出前述范围,则将抑制菌丝体的生长。倘培养时间少于1周,则菌丝体尚未完全生长。此外,当培养时间达2周,菌丝体已完全生长,故无需培养超过2周的时间。
接着,如步骤123所示,对第二菌丝体进行液态培养步骤,以获得第三菌丝体。液态培养步骤是利用第一培养液进行。第一培养液包含1重量%至3重量%的综合性碳氮源(例如谷类及/或豆类)、1重量%至4重量%的糖类(例如单糖及/或双糖)、0.1重量%至1重量%的酵母提取物、0.1重量%至1重量%的蛋白胨及0.01重量%至0.05重量%的无机盐类(例如磷酸盐及/或硫酸盐)。应理解的是,前述第一培养液的成份可视使用需求做适当的调整。
上述第一培养液之酸碱值为pH 2至pH 6。倘酸碱值超出前述范围,将导致菌丝体生长不佳。
在此实施例中,液态培养步骤的培养条件为,于15℃至30℃培养第二菌丝体达3天至14天。倘温度超出前述范围,则将抑制菌丝体的生长。倘培养时间超过14天,对菌丝体生长没有帮助甚至抑制其生长。
在其他实施例中,液态培养步骤的转速为110rpm至130rpm。
然后,如步骤125所示,对第三菌丝体进行发酵培养步骤。发酵培养步骤是利用第二培养液进行。第二培养液的成份可相同于前述之第一培养液,或可视使用需求适当调整其成份。前述第二培养液之酸碱值为pH 2至pH 6,倘酸碱值超出前述范围,将导致菌丝体生长不佳。
发酵培养步骤的条件为于15℃至30℃培养第三菌丝体达3天至21天。倘温度超出前述范围,则将抑制菌丝体的生长。倘发酵培养时间少于3天,则桑黄之菌丝体及/或其衍生物的有效量不足。此外,当发酵培养时间超过21天,对菌丝体生长没有帮助甚至抑制其生长。
发酵培养步骤系于发酵槽中进行。在一实施例中,在进行发酵培养步骤时,对发酵槽导入气体,气体系选自于由空气、氧气、二氧化碳、氦气上述任意组合所组成之一族群。在一实施例中,槽压为0.5kg/cm2至1.0kg/cm2。在一实施例中,通气速率为0.01(通入气体体积/发酵液体积/分钟,VVM)至1.5VVM。在其他实施例中,发酵培养步骤的转速为50rpm至150rpm。
接下来,如方法100步骤130所示,藉由上述的多阶段培养步骤,可获得含有特定成分的桑黄发酵液,其中桑黄发酵液包含桑黄之菌丝体及/或其衍生物。
在一实施例中,于发酵培养步骤后,可选择包含对桑黄发酵液进行干燥步骤,以获得桑黄发酵干燥物。桑黄发酵液可利用习知之干燥处理方法进行干燥步骤,例如:冷冻干燥法、真空干燥法或喷雾干燥法。
在一实施例中,在干燥步骤后,可选择包含利用极性溶剂对桑黄发酵干燥物进行萃取步骤,以获得桑黄萃取液。在其他实施例中,极性溶剂包含水及/或低级醇(例如:甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇等)。
在一实施例中,在萃取步骤后,可选择包含对桑黄萃取液进行浓缩步骤,以获得桑黄萃取浓缩物。桑黄萃取液可利用习知之浓缩方法进行浓缩步骤,例如:减压浓缩、蒸发浓缩法或膜浓缩法。
本发明又提出一种桑黄之菌丝体及/或其衍生物,其系利用如上所述之制造方法所制得。上述桑黄之菌丝体及/或其衍生物包含但不限于桑黄发酵液、桑黄发酵干燥物、桑黄萃取液及/或桑黄萃取浓缩物。
本发明再提出一种桑黄之菌丝体及/或其衍生物用于制备改善睡眠之组成物的用途。在一实施例中,上述组成物为口服组成物,其种类并无特别限制,任何含有桑黄之菌丝体及/或其衍生物皆属之。
在一实施例中,上述组成物可例如食品组成物或医药组成物。在一实施例中,上述组成物可选择性地包含食品或药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂、辅助剂及/或添加剂,可例如溶剂、乳化剂、悬浮剂、崩解剂、黏合剂、安定剂、螯合剂、稀释剂、胶凝剂、防腐剂、润滑剂及/或吸收推迟剂等。
本发明组成物之剂型并无特别限制。在一实施例中,组成物之剂型可例如但不限于水溶液、悬浮液、分散液、乳液(单相或多相分散体系、单室或多室脂质体)、水胶、凝胶、固体脂质纳米粒、锭剂、颗粒剂、粉剂及/或胶囊剂等。
前述的食品组成物可例如但不限于谷物类制品、水果类制品、蔬菜类制品、肉类制品、鱼类制品、蛋类制品、奶类制品、饮品、健康食品、保健食品、机能性食品、营养补充食品或特殊营养食品。
以下利用数个实施例以说明本发明之应用,然其并非用以限定本发明,本发明技术领域中具有通常知识者,在不脱离本发明之精神和范围内,当可作各种之更动与润饰。
实施例一、桑黄之菌丝体及/或其衍生物的制备
(1)桑黄的形态特征及亲缘分析
桑黄之菌丝体及/或其衍生物系源自于2020年11月12日保藏于日本千叶木更津市上总镰足2-5-8 120号室的独立行政法人制品评价技术基盘机构(NITE)特许生物保藏中心(IPOD),保藏编号为NITE BP-03321之桑黄。
上述桑黄的形态特征如下所述。桑黄的菌丝不分枝且无横膈,直径为3微米至5微米。上述桑黄的孢子近球型,表面光滑,其中孢子的长径约有5微米至6微米,且短径约有4微米至5微米。上述桑黄的子实体质地为硬木质,无菌柄,菌盖约有3厘米至20厘米宽,背部为褐色或黑褐色,腹面为黄色。
接着,藉由亲缘分析,评估上述桑黄(NITE BP-03321)与同种习知菌种的相异处。首先,抽取桑黄之菌丝体的gDNA,利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)获得18s rRNA的基因序列并进行定序。上述PCR的方法为本发明所属技术领域中具有通常知识者所熟知,可视实际需求任意调整,在此不另赘述。
接下来,将桑黄(NITE BP-03321)之18s rRNA序列[如序列辨识编号(SEQ ID NO):1所示]与习知桑黄菌株[例如基因银行(Gene Bank)编号KT862140(韩国)、AY558629(哥斯达黎加)及JQ860322(美国)]之18s rRNA序列利用市售软件,例如分子演化遗传学分析(Molecular Evolutionary Genetics Analysis,MEGA)软件,对上述18s rRNA序列进行亲缘分析,并利用Neighbor-Joining模式绘制演化树,如图2所示。
图2系绘示桑黄(NITE BP-03321)与其他习知桑黄的18s rRNA序列比对的演化树,其中横线表示以基因多样性为单位量测之演化变化,且横线的比例尺标示于左下方。如图2所示,桑黄(NITE BP-03321)与习知桑黄菌株虽属同种,但与习知桑黄在演化关系上有所区隔,而自成一线。此结果说明从基因上的差异性来看,桑黄(NITE BP-03321)与习知桑黄间确实存在明显的差异,而为新的桑黄菌株。
(2)桑黄菌丝体及/或其衍生物的制备
首先,将上述桑黄(NITE BP-03321)接种于马铃薯糊精培养基(Potato DextroseAgar,PDA)上,于25℃下培养7天。然后,刮取部分的桑黄之菌丝体接种于第一培养液(包含1重量%的综合性碳氮源、1.5重量%的糖类、0.3重量%的酵母提取物、0.3重量%的蛋白胨及0.05重量%的无机盐类)中,于25℃、pH 5、转速120rpm之下,进行7天的培养步骤。上述综合性碳氮源为谷类(麦粉及/或麸皮粉)及/或豆类(黄豆粉、绿豆粉、大豆粉及/或肉桂粉)。上述糖类为单糖(葡萄糖及/或果糖)及/或双糖(麦芽糖及/或蔗糖)。上述无机盐类为磷酸盐(磷酸氢二钾、磷酸二氢钾)及/或硫酸盐(硫酸镁及/或硫酸铁)。
接着,取第一培养液中的部分桑黄之菌丝体接种于含有第二培养液(成份相同于第一培养液)的发酵槽内,以25℃、pH 5、0.5kg/cm2的气压、1.0VVM的空气通气速率及80rpm搅拌速度进行发酵14天,以获得桑黄发酵液。
取桑黄发酵液进行冷冻干燥,可获得桑黄发酵干燥物。再来,于桑黄发酵干燥物中加入20倍重量之乙醇,以超音波震荡进行萃取1小时,离心后取上清液进行减压浓缩,以获得桑黄萃取浓缩物。
实施例二、建立分析睡眠的动物模式
选用购自乐斯科生物科技公司(BioLASCOTaiwan Co.,Ltd.,Taiw an)的Sprague-Dawley(SD)品系的雄性大鼠,且体重为250g至300g。将大鼠饲养温度22±3℃,湿度40%至70%,12小时照光及12小时黑暗之循环光照,且提供充足饲料及无菌逆渗透水予大鼠自由取食。动物试验均依循台湾大学研究发展处实验动物照护及使用委员会之相关规定进行。
试验前将大鼠以无菌之手术刀片进行头部切创,将脑壳上之软组织刮除并以电烧止血器止血后,于脑壳植入记录用之脑波(Electroencephalography,EEG)电极及固定用之螺丝。于术后第1天将EEG电极集线插接脑波记录之缆线,连接讯号EEG电极与讯号放大器至计算机。大鼠脑波及活动情形均系使用ICELUS软件(Mark R.Opp,University ofMichigan)进行记录大鼠脑波,并于术后第8天开始记录脑波基准值(baseline),作为基础EEG。另使用红外线动作传感器侦测大鼠活动情形。
将大鼠随机分为2组,每组5只,分别为桑黄组及对照组,并进行24小时EEG及动作侦测的记录。在黑暗光照开始前20分钟,大鼠管喂150mg/kg的桑黄萃取浓缩物(桑黄组)或0.1mL 5.5%的乙醇(对照组)。
实施例三、桑黄菌丝体及/或其衍生物于改善睡眠的效果
脑波波形以每12秒为一个波段(epoch)单位,利用上述ICELUS软件所提供的快速傅利叶转换(fast Fourier transform,FFT)图,以人工依照波形判断老鼠是在非快速眼动(non-rapid eye movement,NREM)睡眠或快速眼动(rapid eye movement,REM)睡眠。一般来说,NREM睡眠波形频率较低,振幅较大且一致。REM睡眠波形频率较高、振幅较小且没有活动讯号。
请参阅图3A,其系绘示根据本发明一实施例之NREM睡眠的折线图。X轴代表注射后时间(time post-injection),单位为小时。Y轴代表NREM睡眠量,单位为百分比。图3A之统计方式系使用成对样本t检定(paired sample t-test)分析各项百分比,图号*代表在统计上具有显著差异(p<0.05),下图3B亦同。
图3A之结果显示,相较于对照组(折线303),桑黄组(折线301)在第19小时至第24小时的NREM睡眠量由30.3±4.0%上升至51.3±3.3%。因此,桑黄萃取浓缩物可显著的增加大鼠NREM睡眠量。
另请参阅图3B,其系绘示根据本发明一实施例之REM睡眠的折线图。X轴代表注射后时间(time post-injection),单位为小时。Y轴代表REM睡眠量,单位为百分比。
图3B之结果显示,相较于对照组(折线307),桑黄组(折线305)在第17小时至第21小时的REM睡眠量由12.3±1.8%上升至23.3±2.2%。因此,桑黄萃取浓缩物可显著的增加大鼠REM睡眠量。
由上述实施例可知,本发明之桑黄(Phellinus linteus)菌丝体及/或其衍生物、其制造方法及其用于制备改善睡眠之组成物的用途,其优点在于利用多阶段培养步骤培养自行筛选的桑黄,而获得桑黄之菌丝体及/或其衍生物。向一对象施用含有桑黄之菌丝体及/或其衍生物之组成物,可改善其睡眠。
应理解的是,本发明虽使用桑黄萃取浓缩物证实桑黄之菌丝体及/或其衍生物具有改善睡眠的效果,然本发明所属领域具有通常知识者应可得知,利用桑黄之菌丝体、含桑黄之菌丝体之培养液、不含桑黄之菌丝体之培养液、桑黄之发酵液、桑黄之干燥发酵物及/或桑黄之萃取液亦可产生相似的效果。
需补充的是,本发明虽以特定的制程、特定的分析方法及/或特定仪器作为例示,说明本发明之桑黄(Phellinus linteus)之菌丝体及/或其衍生物、其制造方法及其用于制备改善睡眠之组成物的用途,惟本发明所属技术领域中任何具有通常知识者可知,本发明并不限于此,在不脱离本发明之精神和范围内,本发明之桑黄(Phellinus linteus)之菌丝体及/或其衍生物、其制造方法及其用于制备改善睡眠之组成物的用途亦可使用其他制程、其他的分析方法或其他仪器进行。
虽然本发明已以数个实施例揭露如上,然其并非用以限定本发明,在本发明所属技术领域中任何具有通常知识者,在不脱离本发明之精神和范围内,当可作各种之更动与润饰,因此本发明之保护范围当视后附之申请专利范围所界定者为准。
【附图中的符号说明】
100:方法
110:提供桑黄之第一菌丝体
120:进行多阶段培养步骤
121:对第一菌丝体进行固态培养步骤,以获得第二菌丝体
123:对第二菌丝体进行液态培养步骤,以获得第三菌丝体
125:对第三菌丝体进行发酵培养步骤
130:获得桑黄发酵液,其中桑黄发酵液包含桑黄之菌丝体及/或其衍生物
301,303,305,307:折线
序列表
<110> 葡萄王生技股份有限公司
<120> 桑黄之菌丝体及/或其衍生物、其制造方法及其用于制备改善睡眠之组成物的用途
<160> 1
<210> 1
<211> 737
<212> DNA
<213> 桑黃(Phellinus linteus)(NITE BP-03321)
<400> 1
ctgactgcgc atctacctga tttgaggtca aaggtgtcaa gaaggaggtg actccttgtc 60
cgacgacgcg gacggctaga agcaagctcg tcaggcaagc gctcgttggt gaatggaatc 120
aactattaca ccgtaaacgc gagccaaagc ccagctaatg tatttaagag gagccgaccc 180
ctcgaaaggc gccagcagta aacctccaag tccaaacctc aagcccttca attaagaaag 240
acgagcggtt tgagataaac atgacactca aacaggcatg cccctcggaa taccaagggg 300
cgcaaggtgc gttcaaagat tcgatgattc actgaattct gcaattcaca ttacttatcg 360
catttcgctg cgttcttcat cgatgcgaga gccaagagat ccgttgttga aagttgtatt 420
tattttcgcc cacaaggagc attacattca caaagacaat ataaggtgtt ttgtaacgac 480
aagccgaagt cttcacccga cgcactcgct ttcattttcg aaaggctacc taacgagcaa 540
gactcgcttt cgcccttcta ctaattactt acaagacctc aggctactaa cttcgactcg 600
cgatatataa ggtgcacagg ggtttgagtt ggatttgagc gcgaagaccg tgcacatgcg 660
cgatttcgca ccagcagcag gtctcgcttt caaaactcga taatgatcct tccgcaggtc 720
ccctctctag gggagag 737
Claims (10)
1.一种桑黄(Phellinus linteus)之菌丝体及/或其衍生物,其特征在于,其中该桑黄之该菌丝体及/或其衍生物系源自于2020年11月12日保藏于独立行政法人制品评价技术基盘机构特许生物保藏中心,保藏编号为NITE BP-03321之菌株。。
2.一种桑黄之菌丝体及/或其衍生物的制造方法,其特征在于,包含将桑黄之一第一菌丝体进行一多阶段培养步骤,以获得该桑黄之该菌丝体及/或其衍生物,其中该多阶段培养步骤包含:
进行一固态培养步骤,其系利用一固态培养基于15℃至30℃培养该第一菌丝体达1周至2周,以获得一第二菌丝体,其中该桑黄系于保藏编号为NITE BP-03321之菌株;
进行一液态培养步骤,其系利用一第一培养液于15℃至30℃培养该第二菌丝体达3天至14天,以获得一第三菌丝体,其中该第一培养液之一酸碱值为pH 2至pH 6;以及
进行一发酵培养步骤,其系利用一第二培养液于15℃至30℃培养该第三菌丝体达3天至21天,以获得一桑黄发酵液,其中该第二培养液之一酸碱值为pH 2至pH 6,且该桑黄发酵液包含该桑黄之该菌丝体及/或其衍生物。
3.如权利要求2所述之桑黄之菌丝体及/或其衍生物的制造方法,其特征在于,其中该发酵培养步骤系于一发酵槽中进行,且在进行该发酵培养步骤时,更包含对该发酵槽导入一气体,该气体系选自于由空气、氧气、二氧化碳、氦气或上述任意组合所组成之一族群。
4.如权利要求3所述之桑黄之菌丝体及/或其衍生物的制造方法,其特征在于,其中该发酵培养步骤系于0.5kg/cm2至1.0kg/cm2之一槽压、0.01(通入气体体积/发酵液体积/分钟,VVM)至1.5VVM之一通气速率下进行。
5.如权利要求2所述之桑黄之菌丝体及/或其衍生物的制造方法,其特征在于,在该发酵培养步骤后,更包含对该桑黄发酵液进行一干燥步骤,以获得一桑黄发酵干燥物。
6.如权利要求5所述之桑黄之菌丝体及/或其衍生物的制造方法,其特征在于,在该干燥步骤后,更包含利用一极性溶剂对该桑黄发酵干燥物进行一萃取步骤,以获得一桑黄萃取液。
7.如权利要求6所述之桑黄之菌丝体及/或其衍生物的制造方法,其特征在于,其中该极性溶剂包含水及/或低级醇。
8.如权利要求6所述之桑黄之菌丝体及/或其衍生物的制造方法,其特征在于,在该萃取步骤后,更包含对该桑黄萃取液进行一浓缩步骤,以获得一桑黄萃取浓缩物。
9.一种桑黄之菌丝体及/或其衍生物,其系利用如权利要求2至8任一项所述之制造方法所制得,其特征在于,其中该桑黄之菌丝体及/或其衍生物包含一桑黄发酵液、一桑黄发酵干燥物、一桑黄萃取液及/或一桑黄萃取浓缩物。
10.一种如权利要求9所述之桑黄之菌丝体及/或其衍生物用于制备改善睡眠之组成物的用途,其特征在于,其中该组成物为一口服组成物。
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