CN105054021A - 一种红曲霉转化玉米皮发酵液的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明一种红曲霉转化玉米皮发酵液的制备方法及其应用,属于生物发酵及医药领域。本发明以红曲霉为出发菌株,进行液体摇瓶培养,液体种子扩大培养,液体发酵得到含有多糖、洛伐他汀和红曲色素发酵液。该发酵液含多糖100-500mg/L,洛伐他汀5-50mg/L,红曲色素4-60mg/L。由此生产的发酵液可以用于生产调节血糖、血脂的保健食品,或提取其活性成分多糖、洛伐他汀和红曲色素用于生产治疗高血脂和糖尿病的药物。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域,特指利用红曲霉采用液体发酵技术转化玉米皮中活性成分多糖,同时降解玉米皮中淀粉等糖类物质,经过种子扩大培养和固体发酵生产含有多糖、洛伐他汀和红曲色素的功能性食品。
背景技术
随着我国经济的发展、人民生活水平的提高以及人们饮食结构的变化,尤其是高脂膳食摄入的增多,高血压、高血脂和高血糖等“三高”疾病的发病率逐年上升。“三高”疾病已成为影响国民身体健康的头号大敌,每年因“三高”疾病死亡的人数居各种疾病死亡人数的首位。控制和预防“三高”,西药虽然效果较好,但因副作用大、价格相对较高,并非每个病人都能接受,因此幵发疗效更好、副作用更小的药品及保健食品有着良好的发展前景。
红曲霉已经广泛地被应用于酿酒、酿醋、食品着色和作为中药使用。红曲霉在我国已使用千余年。红曲应用广泛,最先被用于酿造黄酒。关于红曲的药用价值,明代李时珍在《本草纲目》中记述:“红曲气温味甘,无毒。主消食、活血、健脾、燥胃,治赤白痢,下水谷。”《本草经解要卷四》记述:“红曲以白饭蒸署成红色,与营血有同气相求之理;能升血而健脾,脾健,则为胃行其律液而胃燥矣。治赤白痢者,以有活血消食之功也;下水谷者,气温达肝味甘益脾之力也……’。现代医学研究证明红曲具有降血脂、降血压、保护肝脏、抗肿瘤和促进骨骼再生等功效。
玉米皮又称玉米纤维,是玉米籽粒的外皮,玉米淀粉加工过程中的的副产物,约占玉米质量的10%。其中残留的淀粉量高,且含较多的半纤维素,水解后总糖产率较高,国内外报道均在60%左右。玉米皮组织的主要成分为纤维素、半纤维素、木质素及其类似物,其中半纤维素主要是山L-阿拉伯糖和D-木糖构成。根高效液相色谱分析显示,玉米皮水解后的糖液中三种主要糖为葡萄糖(24.4%)、木糖(42.7%)、阿拉伯糖(25.8%)。玉米黄色素是玉米皮中一种天然黄色素,其主要成分为玉米黄色素属多烯色素即类胡萝卜素,是一种安全、无毒且营养价值很高的天然植物色素,具有促进人体生长发育,延长寿命保护视觉与上皮组织等功能。尽管玉米皮含有较高的利用价值,但是国内大都把玉米皮作为饲料使用,没有能充分的开发利用。以玉米皮和红曲霉作为关键词没有检索到相关专利,以玉米皮为关键词可以检索到相关专利共150条,专利“一种借助快中子辐照技术提高玉米皮粗多糖提取率的方法”(专利号CN201410155282)公开一种借助快中子辐照技术提高玉米皮粗多糖提取率的方法,玉米多糖可以用作保健品或饲料;专利“一种玉米皮为原料的真姬菇栽培料及其制备方法”(CN201310355310)公开了以玉米皮为主要原料栽培真姬菇的方法;专利“混合酶解玉米皮制作保健饮料”公开了以利用液化酶、糖化酶和蛋白酶分布水解玉米皮生产含有多种氨基酸饮料的方法;该饮料具有饮料具有扫除体内“垃圾”、治疗便秘、降脂、降压、预防肠胆瘤、养颜美容等作用。专利“一种玉米皮活性多糖的提取”(CN201210541686)公开了利用玉米皮发酵丁醇并联产膳食纤维的方法;专利“一种食用菌固态发酵玉米渣制作玉米粉的方法”(专利号CN201210193685)公布了一种鹿角灵芝和猴菇菌发酵玉米皮,该发酵液不仅具有丰富的营养而且具有含有抗氧化和提高免疫力等功能。可见这些专利均未涉及利用红曲霉转化玉米皮,生产降血脂降血压等功能性食品生产工艺。利用玉米皮作为关键词查阅文献,共检索到280多篇,但是利用红曲霉转化玉米皮生产降血压和降血脂药物未见报道。文章“黑曲霉固态发酵及酶解玉米皮”(生物加工过程,2011年,9(2))报道了以玉米皮为主要原料,采用黑曲霉固态发酵产酶再酶解的二步法降解玉米皮中的纤维素物质;文章“利用玉米皮渣固体法酿造食醋的研究”(中国酿造,2006(7))报道了以玉米皮渣为糖化曲制备原料和食醋酿造原料!采用边糖化边酒化,再醋化工艺,固态法酿造食醋的工艺;论文:“玉米淀粉糖渣为原料培养米曲和红曲及酱油酿造”(江南大学2010硕士论文)报道了以玉米淀粉糖渣为原料分别制备米曲和红曲,然后将米曲和红曲混合发酵酿造酱油,一方面充分利用玉米淀粉糖渣,生产酱油酿造所需的米曲和红曲,可大大降低酱油生产成本;另一方面,可利用糖渣生产红曲色素,并使红曲色素参与酱油的酿造,提高酱油的着色效果。但是该论文只是用红曲霉提高着色效果而没有注重红曲霉功能型物质的合成。本发明人经过深入的研究,摸索出一种以玉米皮为主要原料,通过红曲霉菌体液态摇瓶培养、液体种子罐扩大培养、液体深层发酵培养获得红曲霉转化玉米皮的发酵液。该方法不同于过去的方法之处在于:①目的不同,以前申请的专利主要是获得红曲,而不是以生产活性成分功能性食品为目的,本发明是以生产含有多糖、洛伐他汀和红曲色素的功能性食品为目的;②以前的专利只是根据产品含有洛伐他汀、多糖和红曲色素,推测其具有生物学功能,本发明生产的产品经过严格的动物实验和含量分析,确证了使用本发明技术生产的功能性食品;③以前的专利公开的规模都是实验室规模,其工艺技术能否用于工业化还不能确定,本发明人经过深入研究和反复工业化生产试验,摸索出工业化规模固态发酵生产红曲玉米皮功能性食品技术。因而无论从产品的生产目的、功能和工业化生产规模,本发明都有别于以往的专利和文章报道的内容。
发明内容
本发明提供的一种液体深层发酵与生物转化相结合,以红曲霉为菌种,玉米皮为主要原料,生产具有降血糖、降血脂功能的保健食品为目的,红曲玉米皮功能性发酵液生产技术以及该发酵液的应用技术。
红曲玉米皮功能性食品,其为粉红色至紫红色,具有特有的发酵香味,含有多糖100-500mg/L,洛伐他汀5-50mg/L,红曲色素4-60mg/L;该发酵液具有显著的降低血糖和血脂功效,用于生产治疗或辅助治疗糖尿病和高血脂症的功能性食品或药品。
本发明另一方面提供了红曲霉转化玉米皮发酵液的制备方法,按照下述步骤进行:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中进行培养,制得红曲霉试管斜面孢子;b.液体摇瓶培养:将红曲霉试管斜面孢子接种到装有液体摇瓶培养基的摇瓶中,进行培养,制得液体摇瓶菌种;c.一级种子罐种子培养:将液体摇瓶菌种接种到种子罐培养基,进行培养,制成一级种子罐菌种;d.液体发酵培养:将一级种子罐菌种接种到发酵罐培养基中,进行发酵培养,制得红曲霉转化玉米皮的发酵液。
进一步的改进,所述的红曲转化玉米皮发酵液的制备方法包括如下步骤:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中,在温度20-45℃下培养3-10d后,进行1-10℃保藏,制得红曲霉试管斜面孢子;马铃薯葡萄糖培养基来源(诸葛健、王正祥.工业微生物实验技术手册,1994:367页)。b.液体摇瓶培养:将一环红曲霉试管斜面孢子接种于装有20-150mL液体摇瓶培养基的250mL三角瓶中,三角瓶在转速为50-200转/分,温度20-43℃的条件下,摇床培养18-86h,制成液体摇瓶菌种;每1L液体摇瓶培养基所含有的各成分的重量为:麸皮5-20g,葡萄糖5-20g,蛋白胨1-5g,酵母浸膏2-8g,硫酸镁0.01-0.2g,磷酸氢二钾0.01-0.2g;c.一级种子罐种子培养:按接种量为1%-20%(液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比)将液体摇瓶菌种接种于种子罐培养基中,在温度为20-43℃,搅拌转速为50-160转/分,通气量为0.2-1.8:1(每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比)的条件下,培养18-50h,制成一级种子罐菌种;每1L种子罐培养基所含有的各成分的重量为:麸皮5-20g,葡萄糖5-20g,蛋白胨1-5g,酵母浸膏2-8g,硫酸镁0.01-0.2g,磷酸氢二钾0.01-0.2g;
d.红曲霉转化玉米皮发酵液:按接种量为1-20%(一级种子罐菌种液体体积与液体发酵培养基的体积比)将种子罐菌种接种到发酵培养基中。在温度为20-43℃,搅拌转速为50-160转/分,通气量为0.2-1.8:1(每分钟通入气体的体积与发酵培养基的体积比)的条件下,培养54-150h,得到红曲霉转化玉米皮发酵液;每1L发酵基培养基所含有的各成分的重量为:玉米皮10-40g,蛋白胨5-20g,葡萄糖4-30g,酵母浸膏2-10g,硫酸镁0.01-0.2g,磷酸氢二钾0.01-0.2g。
e.红曲霉转化玉米皮发酵液可以直接生产具有辅助降低血糖调节血脂的片剂、胶囊、饮料、黄酒、酸奶、醋。
本发明所红使用的红曲霉为红曲霉属中的红色红曲菌(Monascusruber)、紫色红曲菌(Monascuspurpureu)、丛毛红曲菌(Monascuspilosus)、红曲红曲菌(Monascusanka)的任意一种,,所使用的玉米皮为栽培使用。
本发明所提供的液体摇瓶培养基和发酵培养基经过100-130℃灭菌30-120min。
进一步的改进,所述的红曲霉转化玉米皮发酵液制备方法包括如下步骤:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中,在温度20-45℃下培养3-10d后,进行1-10℃保藏,制得红曲霉试管斜面孢子;b.液体摇瓶培养:将一环红曲霉试管斜面孢子接种于装有20-150mL液体摇瓶培养基的250mL三角瓶中,在温度20-43℃,在搅拌转速为50-200转/分的条件下,摇床培养18-86h,制得液体摇瓶菌种;c.一级种子罐种子培养:按接种量为1%-20%液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比将液体摇瓶菌种接种于种子罐培养基中,在温度为20-43℃,搅拌转速为50-160转/分,通气量为0.2-1.8:1每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比的条件下,培养18-50h,制得一级种子罐菌种;d.红曲霉转化玉米皮液体发酵培养:按接种量为1-20%(一级种子罐菌种液体体积与发酵培养基的重量比)将种子罐菌种接种到发酵罐培养基中。在温度为20-43℃,搅拌转速为50-160转/分,通气量为0.2-1.8:1(每分钟通入气体的体积与发酵罐培养基的体积比)的条件下,培养54-150h,得到红曲霉转化玉米皮发酵液;
e.红曲霉玉米皮功能性食品;红曲霉转化玉米皮发酵液可以直接生产具有辅助降低血糖调节血脂的片剂、胶囊、饮料、黄酒、酸奶、醋。
通过以上方法获得的红曲转化玉米皮发酵液外观为粉红色至紫红色,具有特有的发酵香味,含有多糖100-500mg/L,洛伐他汀5-50mg/L,红曲色素4-60mg/L;该发酵液具有显著的降低血糖和血脂功效,用于生产治疗或辅助治疗糖尿病和高血脂症的功能性食品或药品。
进一步的改进,所述一级种子罐菌种经二级种子罐种子培养后,再进行固体发酵培养,所述二级种子罐种子培养工艺为:按接种量为1-20%将一级种子罐菌种接种于种子罐培养基中,在温度为20-43℃,搅拌转速为50-160转/分,每分钟通气量为0.2-1.8:1的条件下,培养18-50h,制得二级种子罐菌种;所述接种量为一级种子罐菌种与液体摇瓶培养基的体积比;所述通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基的体积比。
进一步的改进,所述二级种子罐菌种经三级种子罐种子培养后,再进行液体发酵培养,所述三级种子罐种子培养工艺为:按接种量为1-20%将二级种子罐菌种接种于种子罐培养基中,在温度20-43℃,搅拌转速为50-160转/分,通气量为0.2-1.8:1的条件下,培养18-50h,制成三级种子罐菌种;所述接种量为二级种子罐菌种与三级种子罐的种子罐培养基的体积比;所述通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;
本发明另一方面提供了以发酵液为原料,经过后续加工可以直接生产具有辅助降低血糖调节血脂的片剂、胶囊、饮料、黄酒、酸奶、醋
本发明另一方面提供一种从红曲霉转化玉米皮发酵液中提取含有多糖、洛伐他汀和红曲色素的活性成分生产降血糖降血脂药物的方法,该方法包括以本发明所述的红曲霉转化玉米皮发酵液为原料,通过浓缩或大孔树脂吸附生产红曲霉转化玉米皮的发酵粉。
进一步的改进,所述方法包括如下步骤:
a)发酵液离心,得到上清液;
b)上清液真空浓缩、喷雾干燥得到红曲霉转化玉米皮提取物。
c)或者上清液依次经过大孔树脂吸附、水洗、解吸
d)解吸液经过浓缩、喷雾干燥得到,红曲霉转化玉米皮提取物。
红曲霉转化玉米皮提取物可以加工成片剂和胶囊,该片剂和胶囊具有显著的降低血糖和降低血脂功效。
优选地红曲霉转化玉米皮的所述方法包括如下步骤:
a)红曲霉转化玉米皮发酵液3000-8000rpm离心10-30分钟,得到上清液。
b)上清液真空40-70℃浓缩至原上清液的1/100-1/20倍体积;
c)或上清液用1/50-1/5体积的大孔树脂静态吸附5-20小时,吸附后10-20倍树脂体积的水洗涤,装到层析柱中,用10-20倍树脂体积的20-80%酒精解吸解吸液合并在温度20-50℃,真空浓缩至上清液体积的1/100-1/50;
d)浓缩液通过调节流速控制进气口温度160-190℃,出气口温度100-120℃进行喷雾干燥得到红曲霉转化玉米皮发酵粉
e)上述红曲霉转化玉米皮发酵粉含有多糖10-30%,洛伐他汀2-8%,红曲色素1.5-6%;可以作为生产降血糖降血脂的原料药物;
优选地多糖、洛伐他汀和红曲色素的含量为质量比。
f)利用上述原料药物可以生产降血糖降血脂的药物组合包括胶囊、片剂。含有这些原料药物组合的片剂或胶囊具有降低血糖和血脂功效。
为了进一步阐述本发明的技术方案所涉及的材料及工艺,给出了以下实施例,但是这些实施例不以任何形式限制本发明的范围。
具体实施方式
本发明所述的多糖含量采用硫酸苯酚法(闫文娟等广东虫草液体发酵产胞外多糖的实验条件大连工业大学学报,2009(2))。准确称取标准葡聚糖(或葡萄糖)20mg于500mL容量瓶中,加水至刻度,分别吸取0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8及0.9mL,各以蒸馏水补至1.0mL,然后加入6%苯酚0.5mL及浓硫酸5.0mL,摇匀冷却,室温放置20min以后于490nm测光密度,以2.0mL水按同样显色操作为空白,横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,得标准曲线。精密吸取取红曲霉转化玉米皮发酵液1mL,定容至10mL,100000分子筛过滤,吸取1mL滤液,加入6%苯酚0.5mL及浓硫酸5.0mL,摇匀冷却,室温放置20min以后于490nm测光密度,根据标准曲线计算多糖含量。所述洛伐他汀含量采用双波长紫外分光光度法测定:精确称取样品1g用30mL75%酒精重复提取3次,提取液合并。6000rpm离心10分钟,上清液以0.5mL/分钟流速流过直径9mm的层析柱,层析柱填料为10克100℃活化30分钟的中性氧化铝,过虑液分别在246nm和254nm处测定吸光度A246和A254,根据吸光度差⊿Asample=A246-A254和浓度为1mg/mL标准洛伐他汀的吸光度差⊿Astandard=A246-A254,根据下列公式计算洛伐他汀含量p:
这里n:为稀释倍数。
本发明所述红曲色素含量法测定按照《中华人民共和国国家标准食品添加剂红曲米GB4926-85》方法测定。
本发明所述的动物实验评价产品降血压功能的方法:将32只SHR随机分为4组,包括:模型对照组、阳性药物对照组、供试药物低剂量组、供试药物高剂量组。每组8只,其中空白对照组给予生理盐水,阳性药物对照组给予卡托普利(Captopril),供试药物组组分别给予低、高剂量的功能性食品。给药途径为经口灌胃。按设计好的剂量一次性给药后,观察各个试验组随时间变化的血压值,每只大白鼠每次测定5次,取平均值,并记录其数值。时间分别为0、2、4、6、8h。原发性高血压大白鼠(SHR)的血压测定采用大白鼠尾动脉收缩压(systolicbloodpressure,SBP)测定方法。测定之前,将大白鼠在36℃条件下保温,稳定后进行测定,每次重复测定5次,取平均值为大白鼠尾动脉血压。实验结果进行统计学分析,与模型对照组相比,试验鼠血压值低于模型对照组血压值30%以上,统计学分析误差<0.05,认为具有显著降血糖作用。
本发明所述的动物实验评价产品的降血脂功能:体重为150g左右的SD大鼠,适应性喂养5天后,给药高脂饲料(正常饲料:猪油:白糖=5:3:1)饲喂2个月。利用南京建成生物工程公司试剂盒测定,磷酸甘油三酯、总胆固醇含量。磷酸甘油三酯>3mmol/L,总胆固醇>10mmol/L的大鼠被认为是高血脂症大鼠。高血脂症大鼠分为一个模型对照组、阳性对照组和试验组,每组小鼠8只。试验组为任意一种实施例的样品。其中实施例试验剂量为26mL/Kg体重,阳性对照组给药洛伐他汀,剂量为100mg/Kg体重。对照组给以等量的蒸馏水,连续给药28天后,禁食5小时,眼眶静脉取血,分析血清中甘油三酯,总胆固醇值的变化。实验结果进行统计学分析,与模型对照组相比,试验组甘油三酯和总胆固醇分别低于模型对照组的甘油三酯和总胆固醇值的30%以上,统计学分析误差<0.05,认为具有显著降血脂作用。
实施例1一种红曲转化玉米皮发酵液的制备方法
所述红曲霉转化玉米皮发酵液外观为粉红色至紫红色,具有特有的发酵香味,含有多糖100-500mg/L,洛伐他汀5-50mg/L,红曲色素4-60mg/L;所述红曲霉转化玉米皮发酵液是以玉米皮为主要原料,红曲霉为菌株,经试管扩大培养、液体摇瓶培养、种子罐种子培养和液体发酵培养制备得到的。
实施例2一种红曲转化玉米皮发酵液的制备方法
所述方法包括如下步骤:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中,在温度为20℃下培养10d,进行1℃保藏,制得红曲霉试管斜面孢子;
b.液体摇瓶培养:将一环红曲霉试管斜面孢子接种于装有20mL液体摇瓶培养基的250mL三角瓶中,三角瓶在转速为50转/分,温度20℃的条件下,摇床培养18h,制成液体摇瓶菌种;其中每1L培养基中含有的原料各成分的重量为:麸皮5g,葡萄糖5g,蛋白胨1g,酵母浸膏2g,硫酸镁0.01g,磷酸氢二钾0.01g,培养基经过100℃,60min灭菌。
c.一级种子罐种子培养:按接种量为1%将液体摇瓶菌种接种于种子罐培养基中,在温度为20℃,搅拌转速为50转/分,通气量为0.2:1的条件下,培养18h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基;
d.红曲霉转化玉米皮发酵液制备:按接种量为1%将种子罐菌种到液体发酵罐培养基中。在温度为20℃,搅拌转速为50转/分,通气量为0.2:1的条件下,培养54h,得到红曲霉转化玉米皮发酵液;所述接种量为一级种子罐菌种液体体积与发酵培养基的体积比;所述通气量为每分钟通入气体的体积与发酵培养基的体积比。其中每1L发酵基培养基所含有的各成分的重量为:玉米皮10g,蛋白胨5g,葡萄糖4g,酵母浸膏2g,硫酸镁0.01g,磷酸氢二钾0.01g培养基经过100℃,60min灭菌。该发酵液外观为粉红色,具有特有的发酵香味,含有多糖100mg/L,洛伐他汀5mg/L,红曲色素4mg/L;该发酵液具有显著的降低血糖和血脂功效,用于生产治疗或辅助治疗糖尿病和高血脂症的功能性食品或药品。
实施例3一种红曲转化玉米皮发酵液的制备方法
所述方法包括如下步骤:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中,在温度为20℃下培养5d,进行4℃保藏,制得红曲霉试管斜面孢子;
b.液体摇瓶培养:将一环红曲霉试管斜面孢子接种于装有20mL液体摇瓶培养基的250mL三角瓶中,三角瓶在转速为80转/分,温度28℃的条件下,摇床培养40h,制成液体摇瓶菌种;其中每1L培养基中含有的原料各成分的重量为麸皮5g,葡萄糖8g,蛋白胨2g,酵母浸膏3.5g,硫酸镁0.05g,磷酸氢二钾0.05g,培养基经过110℃,50min灭菌;
c.一级种子罐种子培养:按接种量为1%将液体摇瓶菌种接种于种子罐培养基中,在温度为28℃,搅拌转速为80转/分,通气量为0.7:1的条件下,培养28h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过110℃,50min灭菌;
d.二级种子罐种子培养:按接种量为1%将一级种子罐菌种接种于二级种子罐培养基中,在温度为28℃,搅拌转速为80转/分,通气量为0.7:1的条件下,培养28h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过110℃,50min灭菌;
e.红曲霉转化玉米皮发酵液的制备:按接种量为1%将种子罐菌种接种到发酵培养基,在温度为28℃,搅拌转速为80转/分,通气量为0.7:1的条件下,培养84h,得到红曲霉转化玉米皮发酵液;所述接种量为一级种子罐菌种液体体积与发酵培养基的体积比;所述通气量为每分钟通入气体的体积与液体发酵培养基的体积比。其中每1L发酵基培养基所含有的各成分的重量为:玉米皮20g,蛋白胨5g,葡萄糖17g,酵母浸膏6g,硫酸镁0.1g,磷酸氢二钾0.1g,培养基经过110℃,50min灭菌。该发酵液外观为粉红色,具有特有的发酵香味,含有多糖300mg/L,洛伐他汀25mg/L,红曲色素32mg/L;该发酵液具有显著的降低血糖和血脂功效,用于生产治疗或辅助治疗糖尿病和高血脂症的功能性食品或药品。
实施例4一种红曲转化玉米皮发酵液的制备方法
所述方法包括如下步骤:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中,在温度为20℃下培养3d,进行8℃保藏,制得红曲霉试管斜面孢子;
b.液体摇瓶培养:将一环红曲霉试管斜面孢子接种于装有20mL液体摇瓶培养基的250mL三角瓶中,三角瓶在转速为120转/分,温度36℃的条件下,摇床培养60h,制成液体摇瓶菌种;其中每1L培养基中含有的原料各成分的重量为麸皮5g,葡萄糖12g,蛋白胨3g,酵母浸膏5g,硫酸镁0.1g,磷酸氢二钾0.1g,培养基经过120℃,40min灭菌;
c.一级种子罐种子培养:按接种量为1%将液体摇瓶菌种接种于种子罐培养基中,在温度为36℃,搅拌转速为120转/分,通气量为1.3:1的条件下,培养39h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过120℃,40min灭菌;
d.二级种子罐种子培养:按接种量为1%将一级种子罐菌种接种于二级种子罐培养基中,在温度为36℃,搅拌转速为120转/分,通气量为1.3:1的条件下,培养39h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过120℃,40min灭菌;
e.三级种子罐种子培养:按接种量为1%将二级种子罐菌种接种于三级种子罐培养基中,在温度为36℃,搅拌转速为120转/分,通气量为1.3:1的条件下,培养39h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过120℃,40min灭菌;
f.红曲霉转化玉米皮发酵液制备:按接种量为1%将种子罐菌种接种到液体发酵培养基中。在温度为36℃,搅拌转速为120转/分,通气量为1.3:1的条件下,培养117h,得到红曲霉转化玉米皮发酵液;所述接种量为一级种子罐菌种液体体积与发酵培养基的体积比;所述通气量为每分钟通入气体的体积与液体发酵培养基的体积比。其中每1L发酵基培养基所含有的各成分的重量为:玉米皮30g,蛋白胨5g,葡萄糖30g,酵母浸膏10g,硫酸镁0.2g,磷酸氢二钾0.2g,培养基经过120℃,40min灭菌。该发酵液外观为粉红色,具有特有的发酵香味,含有多糖500mg/L,洛伐他汀50mg/L,红曲色素60mg/L;该发酵液具有显著的降低血糖和血脂功效,用于生产治疗或辅助治疗糖尿病和高血脂症的功能性食品或药品。
实施例5一种红曲转化玉米皮发酵液的制备方法
所述方法包括如下步骤:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中,在温度为20℃下培养3d,进行10℃保藏,制得红曲霉试管斜面孢子;
b.液体摇瓶培养:将一环红曲霉试管斜面孢子接种于装有20mL液体摇瓶培养基的250mL三角瓶中,三角瓶在转速为160转/分,温度43℃的条件下,摇床培养86h,制成液体摇瓶菌种;其中每1L培养基中含有的原料各成分的重量为麸皮5g,葡萄糖16g,蛋白胨4g,酵母浸膏6.5g,硫酸镁0.15g,磷酸氢二钾0.15g,培养基经过130℃,30min灭菌;
c.一级种子罐种子培养:按接种量为7%将液体摇瓶菌种接种于种子罐培养基中,在温度为20℃,搅拌转速为80转/分,通气量为1.3:1的条件下,培养50h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过130℃,30min灭菌;
d.红曲霉转化玉米皮发酵液制备:按接种量为6%将种子罐菌种接种到液体发酵培养基中。在温度为20℃,搅拌转速为80转/分,通气量为1.3:1的条件下,培养150h,得到红曲霉转化玉米皮发酵液;所述接种量为一级种子罐菌种液体体积与发酵培养基的体积比;所述通气量为每分钟通入气体的体积与液体发酵培养基的体积比。其中每1L发酵基培养基所含有的各成分的重量为:玉米皮40g,蛋白胨8g,葡萄糖10g,酵母浸膏6g,硫酸镁0.15g,磷酸氢二钾0.15g,培养基经过130℃,30min灭菌。该发酵液外观为粉红色,具有特有的发酵香味,含有多糖335mg/L,洛伐他汀44mg/L,红曲色素58mg/L;该发酵液具有显著的降低血糖和血脂功效,用于生产治疗或辅助治疗糖尿病和高血脂症的功能性食品或药品。
实施例6一种红曲转化玉米皮发酵液的制备方法
所述方法包括如下步骤:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中,在温度为30℃下培养10d,进行1℃保藏,制得红曲霉试管斜面孢子;
b.液体摇瓶培养:将一环红曲霉试管斜面孢子接种于装有60mL液体摇瓶培养基的250mL三角瓶中,三角瓶在转速为50转/分,温度28℃的条件下,摇床培养60h,制成液体摇瓶菌种;其中每1L培养基中含有的原料各成分的重量为麸皮20g,葡萄糖20g,蛋白胨5g酵母浸膏8g,硫酸镁0.2g,磷酸氢二钾0.2g,培养基经过100℃,60min灭菌;
c.一级种子罐种子培养:按接种量为7%将液体摇瓶菌种接种于种子罐培养基中,在温度为28℃,搅拌转速为50转/分,通气量为1.8:1的条件下,培养18-50h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过100℃,60min灭菌;
d.二级种子罐种子培养:按接种量为7%将一级种子罐菌种接种于二级种子罐培养基中,在温度为28℃,搅拌转速为50转/分,通气量为1.8:1的条件下,培养18-50h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过100℃,60min灭菌;
e.红曲霉转化玉米皮发酵液制备:按接种量为6%将种子罐菌种接种到液体发酵培养基中。在温度为28℃,搅拌转速为50转/分,通气量为1.8:1的条件下,培养18-150h,得到红曲霉转化玉米皮的发酵液;所述接种量为一级种子罐菌种液体体积与发酵培养基的体积比;所述通气量为每分钟通入气体的体积与液体发酵培养基的体积比。其中每1L发酵基培养基所含有的各成分的重量为:玉米皮10g,蛋白胨8g,葡萄糖24g,酵母浸膏10g,硫酸镁0.01g,磷酸氢二钾0.01g,培养基经过100℃,60min灭菌。该发酵液外观为红色,具有特有的发酵香味,含有多糖150mg/L,洛伐他汀28mg/L,红曲色素58mg/L;该发酵液具有显著的降低血糖和血脂功效,用于生产治疗或辅助治疗糖尿病和高血脂症的功能性食品或药品。
实施例7一种红曲转化玉米皮发酵液的制备方法
所述方法包括如下步骤:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中,在温度为43℃下培养10d,进行1℃保藏,制得红曲霉试管斜面孢子;
b.液体摇瓶培养:将一环红曲霉试管斜面孢子接种于装有60mL液体摇瓶培养基的250mL三角瓶中,三角瓶在转速为80转/分,温度20℃的条件下,摇床培养86h,制成液体摇瓶菌种;其中每1L培养基中含有的原料各成分的重量为:麸皮9g,葡萄糖8g,蛋白胨1g,酵母浸膏5g,硫酸镁0.15g,磷酸氢二钾0.2g,培养基经过110℃,70min灭菌;
c.一级种子罐种子培养:按接种量为7%将液体摇瓶菌种接种于种子罐培养基中,在温度为36℃,搅拌转速为160转/分,通气量为0.2:1的条件下,培养28h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过110℃,50min灭菌;
d.二级种子罐种子培养:按接种量为7%将一级种子罐菌种接种于二级种子罐培养基中,在温度为36℃,搅拌转速为160转/分,通气量为0.2:1的条件下,培养28h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过110℃,50min灭菌;
e.三级种子罐种子培养:按接种量为7%将二级种子罐菌种接种于三级种子罐培养基中,在温度为36℃,搅拌转速为160转/分,通气量为0.2:1的条件下,培养28h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过110℃,50min灭菌;
f.红曲霉转化玉米皮发酵液制备:按接种量为11%将种子罐菌种接种到液体发酵培养基中。在温度为36℃,搅拌转速为160转/分,通气量为0.2:1的条件下,培养84h,得到红曲霉转化玉米皮发酵液;所述接种量为一级种子罐菌种液体体积与发酵培养基的体积比;所述通气量为每分钟通入气体的体积与液体发酵培养基的体积比。其中每1L发酵基培养基所含有的各成分的重量为:玉米皮20g,蛋白胨12g,葡萄糖4g,酵母浸膏6g,硫酸镁0.2g,磷酸氢二钾0.2g,培养基经过110℃,50min灭菌。该发酵液外观为红色,具有特有的发酵香味,含有多糖300mg/L,洛伐他汀49mg/L,红曲色素6mg/L;该发酵液具有显著的降低血糖和血脂功效,用于生产治疗或辅助治疗糖尿病和高血脂症的功能性食品或药品。
实施例8一种红曲转化玉米皮发酵液的制备方法
所述方法包括如下步骤:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中,在温度为22℃下培养5d,进行4℃保藏,制得红曲霉试管斜面孢子;
b.液体摇瓶培养:将一环红曲霉试管斜面孢子接种于装有60mL液体摇瓶培养基的250mL三角瓶中,三角瓶在转速为120转/分,温度43℃的条件下,摇床培养18h,制成液体摇瓶菌种;其中每1L培养基中含有的原料各成分的重量为:麸皮9g,葡萄糖12g,蛋白胨2g,酵母浸膏6.5g,硫酸镁0.2g,磷酸氢二钾0.01g,,培养基经过120℃,40min灭菌;
c.一级种子罐种子培养:按接种量为7%将液体摇瓶菌种接种于种子罐培养基中,在温度为43℃,搅拌转速为120转/分,通气量为0.7:1的条件下,培养18h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过120℃,40min灭菌;;
d.红曲霉转化玉米皮发酵液制备:按接种量为11%将种子罐菌种接种到液体发酵培养基中。在温度为43℃,搅拌转速为120转/分,通气量为0.7:1的条件下,培养84h,得到红曲霉转化玉米皮发酵液;所述接种量为一级种子罐菌种液体体积与发酵培养基的体积比;所述通气量为每分钟通入气体的体积与液体发酵培养基的体积比。其中每1L发酵基培养基所含有的各成分的重量为:玉米皮30g,蛋白胨12g,葡萄糖17g,酵母浸膏10g,硫酸镁0.05g,磷酸氢二钾0.05g,培养基经过120℃,40min灭菌。该发酵液外观为红色,具有特有的发酵香味,含有多糖270mg/L,洛伐他汀11mg/L,红曲色素93mg/L;该发酵液具有显著的降低血糖和血脂功效,用于生产治疗或辅助治疗糖尿病和高血脂症的功能性食品或药品。
实施例9一种红曲转化玉米皮发酵液的制备方法
所述方法包括如下步骤:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中,在温度为33℃下培养5d,进行4℃保藏,制得红曲霉试管斜面孢子;
b.液体摇瓶培养:将一环红曲霉试管斜面孢子接种于装有60mL液体摇瓶培养基的250mL三角瓶中,三角瓶在转速为160转/分,温度36℃的条件下,摇床培养40h,制成液体摇瓶菌种;其中每1L培养基中含有的原料各成分的重量为:麸皮16g,葡萄糖16g,蛋白胨3g,酵母浸膏8g,硫酸镁0.01g,磷酸氢二钾0.05g,培养基经过130℃,30min灭菌;;
c.一级种子罐种子培养:按接种量为14%将液体摇瓶菌种接种于种子罐培养基中,在温度为20℃,搅拌转速为120转/分,通气量为1.8:1的条件下,培养28h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过130℃,30min灭菌;
d.红曲霉转化玉米皮发酵液制备:按接种量为11%将种子罐菌种接种到液体体发酵培养基中。,在温度为20℃,搅拌转速为120转/分,通气量为1.8:1的条件下,培养88h;所述接种量为一级种子罐菌种液体体积与液体发酵培养基的体积比;所述通气量为每分钟通入气体的体积与液体发酵培养基的体积比。其中每1L发酵基培养基所含有的各成分的重量为:玉米皮40g,蛋白胨12g,葡萄糖30g,酵母浸膏4g,硫酸镁0.15g,磷酸氢二钾0.15g,培养基经过130℃,30min灭菌;该发酵液外观为紫红色,具有特有的发酵香味,含有多糖135mg/L,洛伐他汀49mg/L,红曲色素40mg/L;该发酵液具有显著的降低血糖和血脂功效,用于生产治疗或辅助治疗糖尿病和高血脂症的功能性食品或药品。
实施例10一种红曲转化玉米皮发酵液的制备方法
所述方法包括如下步骤:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中,在温度为43℃下培养5d,进行4℃保藏,制得红曲霉试管斜面孢子;
b.液体摇瓶培养:将一环红曲霉试管斜面孢子接种于装有100mL液体摇瓶培养基的250mL三角瓶中,三角瓶在转速为50转/分,温度36℃的条件下,摇床培养86h,制成液体摇瓶菌种;其中每1L培养基中含有的原料各成分的重量为:麸皮9g,葡萄糖20g,蛋白胨4g,酵母浸膏2g,硫酸镁0.05g,磷酸氢二钾0.1g,培养基经过100℃,80min灭菌;
c.一级种子罐种子培养:按接种量为14%将液体摇瓶菌种接种于种子罐培养基中,在温度为28℃,搅拌转速为160转/分,通气量为1.3:1的条件下,培养18h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过100℃,80min灭菌;
d.红曲霉转化玉米皮发酵液制备:按接种量为11%将种子罐菌种接种到液体发酵培养基中。在温度为28℃,搅拌转速为160转/分,通气量为1.3:1的条件下,培养54h,得到红曲霉转化玉米皮发酵液;所述接种量为一级种子罐菌种液体体积与发酵培养基的体积比;所述通气量为每分钟通入气体的体积与液体发酵培养的体积比。其中每1L发酵基培养基所含有的各成分的重量为:玉米皮10g,蛋白胨16g,葡萄糖4g,酵母浸膏8g,硫酸镁0.05g,磷酸氢二钾0.05g,培养基经过100℃,60min灭菌。该发酵液外观为紫红色,具有特有的发酵香味,含有多糖300mg/L,洛伐他汀5mg/L,红曲色素60mg/L;该发酵液具有显著的降低血糖和血脂功效,用于生产治疗或辅助治疗糖尿病和高血脂症的功能性食品或药品。
实施例11一种红曲转化玉米皮发酵液的制备方法
所述方法包括如下步骤:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中,在温度为21℃下培养3d,进行8℃保藏,制得红曲霉试管斜面孢子;
b.液体摇瓶培养:将一环红曲霉试管斜面孢子接种于装有100mL液体摇瓶培养基的250mL三角瓶中,三角瓶在转速为80转/分,温度43℃的条件下,摇床培养60h,制成液体摇瓶菌种;其中每1L培养基中含有的原料各成分的重量为:麸皮16g,葡萄糖5g,蛋白胨5g,酵母浸膏3.5g,硫酸镁0.1g,磷酸氢二钾0.15g;培养基经过110℃,70min灭菌。
c.一级种子罐种子培养:按接种量为14%将液体摇瓶菌种接种于种子罐培养基中,在温度为36℃,搅拌转速为50转/分,通气量为0.7:1的条件下,培养50h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过110℃,70min灭菌;
d.红曲霉转化玉米皮发酵液制备:按接种量为16%将种子罐菌种接种到液体发酵培养基中。在温度为36℃,搅拌转速为50转/分,通气量为0.7:1的条件下,培养150h,得到红曲霉转化玉米皮发酵液;所述接种量为一级种子罐菌种液体体积与发酵培养基的体积比;所述通气量为每分钟通入气体的体积与液体发酵培养基的体积比。其中每1L发酵基培养基所含有的各成分的重量为:玉米皮20g,蛋白胨16g,葡萄糖17g,酵母浸膏2g,硫酸镁0.15g,磷酸氢二钾0.15g,培养基经过110℃,50min灭菌。该发酵液外观为紫红色,具有特有的发酵香味,含有多糖500mg/g,洛伐他汀25mg/g,红曲色素4mg/g;该发酵液具有显著的降低血糖和血脂功效,用于生产治疗或辅助治疗糖尿病和高血脂症的功能性食品或药品。
实施例12一种红曲转化玉米皮发酵液的制备方法
所述方法包括如下步骤:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中,在温度为36℃下培养3d,进行10℃保藏,制得红曲霉试管斜面孢子;
b.液体摇瓶培养:将一环红曲霉试管斜面孢子接种于装有100mL液体摇瓶培养基的250mL三角瓶中,三角瓶在转速为120转/分,温度20℃的条件下,摇床培养40h,制成液体摇瓶菌种;其中每1L培养基中含有的原料各成分的重量为:麸皮12g,葡萄糖16g,蛋白胨1g,酵母浸膏2g,硫酸镁0.05g,磷酸氢二钾0.15g,培养基经过120℃,40min灭菌;
c.一级种子罐种子培养:按接种量为14%将液体摇瓶菌种接种于种子罐培养基中,在温度为43℃,搅拌转速为80转/分,通气量为0.2:1的条件下,培养39h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过120℃,40min灭菌;
d.红曲霉转化玉米皮发酵液制备:按接种量为16%将种子罐菌种接种到液体发酵培养基中。在温度为43℃,搅拌转速为80转/分,通气量为0.2:1的条件下,培养117h,得到红曲霉转化玉米皮发酵液;所述接种量为一级种子罐菌种液体体积与发酵培养基的体积比;所述通气量为每分钟通入气体的体积与发酵培养的体积比。其中每1L发酵基培养基所含有的各成分的重量为:玉米皮30g,蛋白胨16g,葡萄糖24g,酵母浸膏4g,硫酸镁0.2g,磷酸氢二钾0.2g,培养基经过120℃,40min灭菌。该发酵液外观为粉红色,具有特有的发酵香味,含有多糖100mg/L,洛伐他汀5mg/L,红曲色素4mg/L;该发酵液具有显著的降低血糖和血脂功效,用于生产治疗或辅助治疗糖尿病和高血脂症的功能性食品或药品。
实施例13一种红曲转化玉米皮发酵液的制备方法
所述方法包括如下步骤:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中,在温度为44℃下培养4d,进行9℃保藏,制得红曲霉试管斜面孢子;
b.液体摇瓶培养:将一环红曲霉试管斜面孢子接种于装有100mL液体摇瓶培养基的250mL三角瓶中,三角瓶在转速为160转/分,温度28℃的条件下,摇床培养18h,制成液体摇瓶菌种;其中每1L培养基中含有的原料各成分的重量为:麸皮12g,葡萄糖16g,蛋白胨2g,酵母浸膏2g,硫酸镁0.15g,磷酸氢二钾0.01g,培养基经过130℃,30min灭菌;
c.一级种子罐种子培养:按接种量为20%将液体摇瓶菌种接种于种子罐培养基中,在温度为20℃,搅拌转速为160转/分,通气量为0.7:1的条件下,培养39h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过120℃,40min灭菌;
d.红曲霉转化玉米皮发酵液制备:按接种量为16%将种子罐菌种接种到液体发酵培养基中。在温度为20℃,搅拌转速为160转/分,通气量为0.7:1的条件下,培养118h,得到红曲霉转化玉米皮发酵液;所述接种量为一级种子罐菌种液体体积与发酵培养基的体积比;所述通气量为每分钟通入气体的体积与液体发酵培养的体积比。其中每1L发酵基培养基所含有的各成分的重量为:玉米皮40g,蛋白胨16g,葡萄糖30g,酵母浸膏6g,硫酸镁0.01g,磷酸氢二钾0.01g,培养基经过120℃,40min灭菌。该发酵液外观为粉红色,具有特有的发酵香味,含有多糖300mg/L,洛伐他汀25mg/L,红曲色素32mg/L;该发酵液具有显著的降低血糖和血脂功效,用于生产治疗或辅助治疗糖尿病和高血脂症的功能性食品或药品。
实施例14一种红曲转化玉米皮发酵液的制备方法
所述方法包括如下步骤:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中,在温度为25℃下培养3d,进行9℃保藏,制得红曲霉试管斜面孢子;
b.液体摇瓶培养:将一环红曲霉试管斜面孢子接种于装有150mL液体摇瓶培养基的250mL三角瓶中,三角瓶在转速为80转/分,温度36℃的条件下,摇床培养18h,制成液体摇瓶菌种;其中每1L培养基中含有的原料各成分的重量为:麸皮16g,葡萄糖12g,蛋白胨5g,酵母浸膏2g,硫酸镁0.15g,磷酸氢二钾0.1g,培养基经过130℃,30min灭菌;
c.一级种子罐种子培养:按接种量为20%将液体摇瓶菌种接种于种子罐培养基中,在温度为28℃,搅拌转速为120转/分,通气量为0.2:1的条件下,培养50h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过130℃,30min灭菌;
d.二级种子罐种子培养:按接种量为20%将一级种子罐菌种接种于二级种子罐培养基中,在温度为28℃,搅拌转速为120转/分,通气量为0.2:1的条件下,培养50h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过130℃,30min灭菌;
e.红曲霉转化玉米皮发酵液制备:按接种量为16%将种子罐菌种接种到液体发酵培养基中,在温度为28℃,搅拌转速为120转/分,通气量为0.2:1的条件下,培养150h,得到红曲霉转化玉米皮发酵液;所述接种量为一级种子罐菌种液体体积与发酵培养基的体积比;所述通气量为每分钟通入气体的体积与液体发酵培养基的体积比。其中每1L发酵基培养基所含有的各成分的重量为:玉米皮10g,蛋白胨20g,葡萄糖4g,酵母浸膏10g,硫酸镁0.15g,磷酸氢二钾0.15g,培养基经过130℃,30min灭菌。该发酵液外观为红色,具有特有的发酵香味,含有多糖500mg/L,洛伐他汀5mg/L,红曲色素38mg/L;该发酵液具有显著的降低血糖和血脂功效,用于生产治疗或辅助治疗糖尿病和高血脂症的功能性食品或药品。
实施例15一种红曲转化玉米皮发酵液的制备方法
所述方法包括如下步骤:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中,在温度为34℃下培养8d,进行9℃保藏,制得红曲霉试管斜面孢子;
b.液体摇瓶培养:将一环红曲霉试管斜面孢子接种于装有150mL液体摇瓶培养基的250mL三角瓶中,三角瓶在转速为120转/分,温度28℃的条件下,摇床培养86h,制成液体摇瓶菌种;其中每1L培养基中含有的原料各成分的重量为:麸皮20g,葡萄糖12g,蛋白胨3g,酵母浸膏6.5g,硫酸镁0.16g,磷酸氢二钾0.2g,培养基经过130℃,30min灭菌;
c.一级种子罐种子培养:按接种量为20%将液体摇瓶菌种接种于种子罐培养基中,在温度为36℃,搅拌转速为80转/分,通气量为1.8:1的条件下,培养18h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过130℃,30min灭菌;
d.红曲霉转化玉米皮发酵液制备:按接种量为20%将种子罐菌种接种到液体发酵培养基中,在温度为36℃,搅拌转速为80转/分,通气量为1.8:1的条件下,培养54h,得到红曲霉转化玉米皮发酵液;所述接种量为一级种子罐菌种液体体积与发酵培养基的体积比;所述通气量为每分钟通入气体的体积与液体发酵培养基的体积比。其中每1L发酵基培养基所含有的各成分的重量为:玉米皮20g,蛋白胨20g,葡萄糖10g,酵母浸膏2g,硫酸镁0.2g,磷酸氢二钾0.2g,培养基经过130℃,30min灭菌。该发酵液外观为粉红色,具有特有的发酵香味,含有多糖340mg/g,洛伐他汀29mg/g,红曲色素48mg/g;该发酵液具有显著的降低血糖和血脂功效,用于生产治疗或辅助治疗糖尿病和高血脂症的功能性食品或药品。
实施例16一种红曲转化玉米皮发酵液的制备方法
所述方法包括如下步骤:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中,在温度为45℃下培养5d,进行6℃保藏,制得红曲霉试管斜面孢子;
b.液体摇瓶培养:将一环红曲霉试管斜面孢子接种于装有150mL液体摇瓶培养基的250mL三角瓶中,三角瓶在转速为160转/分,温度20℃的条件下,摇床培养60h,制成液体摇瓶菌种;其中每1L培养基中含有的原料各成分的重量为:麸皮20g,葡萄糖20g,蛋白胨5g,酵母浸膏0.05g,硫酸镁0.01g,磷酸氢二钾0.05g,培养基经过130℃,30min灭菌;
c.一级种子罐种子培养:按接种量为20%将液体摇瓶菌种接种于种子罐培养基中,在温度为43℃,搅拌转速为50转/分,通气量为1.3:1的条件下,培养28h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过130℃,30min灭菌;
d.二级种子罐种子培养:按接种量为20%将一级种子罐菌种接种于二级种子罐培养基中,在温度为43℃,搅拌转速为50转/分,通气量为1.3:1的条件下,培养28h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过130℃,30min灭菌;
e.三级种子罐种子培养:按接种量为20%将二级种子罐菌种接种于三级种子罐培养基中,在温度为43℃,搅拌转速为50转/分,通气量为1.3:1的条件下,培养28h,制成一级种子罐菌种;其中接种量为液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比;通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比;所使用的培养基同于液体摇瓶培养的培养基,培养基经过130℃,30min灭菌;
f.红曲霉转化玉米皮发酵液制备:按接种量为20%将种子罐菌种接种到液体发酵培养基中,在温度为43℃,搅拌转速为50转/分,通气量为1.3:1的条件下,培养84h,得到红曲霉转化玉米皮发酵液;所述接种量为一级种子罐菌种液体体积与发酵培养基的体积比;所述通气量为每分钟通入气体的体积与液体发酵培养基的体积比。其中每1L发酵基培养基所含有的各成分的重量为:玉米皮30g,蛋白胨2Kg,葡萄糖3Kg,酵母浸膏4g,硫酸镁0.01g,磷酸氢二钾0.01g,培养基经过130℃,30min灭菌。该发酵液外观为紫红色,具有特有的发酵香味,含有多糖500mg/g,洛伐他汀50mg/g,红曲色素60mg/g;该发酵液具有显著的降低血糖和血脂功效,用于生产治疗或辅助治疗糖尿病和高血脂症的功能性食品或药品。
实施例17红曲霉转化玉米皮发酵液加工成红曲玉米皮片剂的方法
该方法包括以下步骤:
红曲霉发酵液5000转离心20分钟去除菌丝体,清夜50℃真空浓缩至清夜体积的1/50,加入浓缩液重量的1.2倍的糊精、10克羧甲基纤维素和1g其他辅助,拌匀,压片,包装,红外线烘干。
实施例18红曲霉转化玉米皮发酵液加工成红曲玉米皮胶囊的方法
该方法包括以下步骤:
红曲霉发酵液5000转离心20分钟去除菌丝体,清夜50℃真空浓缩至清夜体积的1/50,加入浓缩液重量的1.2倍糊精、10克羧甲基纤维素和1g其他辅助,拌匀,制粒,红外杀菌,包装,制得红曲玉米皮功能性胶囊。
实施例19红曲霉转化玉米皮发酵液加工成红曲玉米皮饮料的方法
该方法包括以下步骤:
红曲霉转化玉米皮发酵液5000转离心20分钟去除菌丝体,滤液加入柠檬酸8g/L,阿斯巴甜0.2g/L,80℃杀菌1小时,灌装,80℃二次杀菌,包装,成品。
实施例20红曲霉转化玉米皮发酵液加工成红曲玉米皮黄酒的方法
该方法包括以下步骤:
红曲霉转化玉米皮发酵液,加入20%的葡萄糖(葡萄糖与发酵液体积比),0.05%(酵母粉重量与发酵液体积比)用2%葡萄糖液活化的酵母粉,25℃发酵10天,板框压滤,滤液灌装,70℃灭菌1小时,包装,室温放置1年,制得红曲霉转化玉米皮黄酒。
实施例21红曲霉转化玉米皮发酵液加工成红曲玉米皮醋的方法
该方法包括以下步骤:
红曲霉转化玉米皮发酵液,加入20%的葡萄糖(葡萄糖与发酵液体积比),0.05%(酵母粉重量与发酵液体积比)用2%葡萄糖液活化的酵母粉,25℃发酵10天,板框压滤,滤液用去离子水调节酒精浓度5%(酒精体积与发酵液体积比),加入接入0.01%的醋酸菌(陕西鼎丰酿造科技有限公司),在温度35℃,搅拌转速120转/分钟,通气量1:1(每分钟通气量与发酵液体积比)发酵15小时,板框压滤,灌装,80℃灭菌,室温放置半年制得红曲霉转化玉米皮醋。
实施例22红曲霉转化玉米皮发酵液加工成红曲玉米皮酸奶的方法
该方法包括以下步骤:
红曲霉转化玉米皮发酵液5000转离心20分钟去除菌丝体,滤液加入5%奶粉(奶粉重量与发酵液体积比),接入1%(乳酸菌菌液与发酵液体积比)浓度为1012(个/mL)的乳酸菌液,37℃培养10小时得到红曲转化玉米皮酸奶。
实施例23一种红曲霉转化玉米皮发酵粉的制备方法
该方法包括以下步骤:
红曲霉转化玉米皮发酵液3000rpm离心30分钟,得到上清液,上清液真空40℃浓缩至原上清液的1/100倍体积;浓缩液通过调节流速控制进气口温度160℃,出气口温度100℃进行喷雾干燥得到红曲霉转化玉米皮发酵粉,该红曲霉转化玉米皮发酵粉含有多糖10%,洛伐他汀8%,红曲色素6%;可以作为生产降血糖降血脂的原料药物;多糖、洛伐他汀和红曲色素的含量为质量比。
实施例24一种红曲霉转化玉米皮发酵粉的制备方法
该方法包括以下步骤:
红曲霉转化玉米皮发酵液8000rpm离心10分钟,得到上清液;上清液真空70℃浓缩至原上清液的1/20倍体积;浓缩液通过调节流速控制进气口温度190℃,出气口温度120℃进行喷雾干燥得到红曲霉转化玉米皮发酵粉,该红曲霉转化玉米皮发酵粉含有多糖30%,洛伐他汀2%,红曲色素1.5%;可以作为生产降血糖降血脂的原料药物;多糖、洛伐他汀和红曲色素的含量为质量比。
实施例25一种红曲霉转化玉米皮发酵粉的制备方法
该方法包括以下步骤:
红曲霉转化玉米皮发酵液6000rpm离心20分钟,得到上清液。上清液真空65℃浓缩至原上清液的1/60倍体积;浓缩液通过调节流速控制进气口温度175℃,出气口温度110℃进行喷雾干燥得到红曲霉转化玉米皮发酵粉;该红曲霉转化玉米皮发酵粉含有多糖25%,洛伐他汀6%,红曲色素3%;可以作为生产降血糖降血脂的原料药物;多糖、洛伐他汀和红曲色素的含量为质量比。
实施例26一种红曲霉转化玉米皮发酵粉的制备方法
红曲霉转化玉米皮发酵液7500rpm离心15分钟,得到上清液。上清液用1/50体积的大孔树脂静态吸附20小时,吸附后20倍树脂体积的水洗涤,装到层析柱中,用10倍树脂体积的80%酒精解吸,解吸液在温度20℃,真空浓缩至上清液体积的1/100;浓缩液通过调节流速控制进气口温度165℃,出气口温度105℃进行喷雾干燥得到红曲霉转化玉米皮发酵粉,该红曲霉转化玉米皮发酵粉含有多糖13%,洛伐他汀7.5%,红曲色素4%;可以作为生产降血糖降血脂的原料药物;多糖、洛伐他汀和红曲色素的含量为质量比。
实施例27一种红曲霉转化玉米皮发酵粉的制备方法
红曲霉转化玉米皮发酵液3500rpm离心25分钟,得到上清液,上清液用1/5体积的大孔树脂静态吸附5小时,吸附后10倍树脂体积的水洗涤,装到层析柱中,用20倍树脂体积的20%酒精解吸解吸液合并在温度50℃,真空浓缩至上清液体积的1/50;浓缩液通过调节流速控制进气口温度185℃,出气口温度118℃进行喷雾干燥得到红曲霉转化玉米皮发酵粉,该红曲霉转化玉米皮发酵粉含有多糖28%,洛伐他汀2.2%,红曲色素1.8%;可以作为生产降血糖降血脂的原料药物;多糖、洛伐他汀和红曲色素的含量为质量比。
实施例28一种红曲霉转化玉米皮发酵粉的制备方法
红曲霉转化玉米皮发酵液6500rpm离心18分钟,得到上清液。上清液用1/20体积的大孔树脂静态吸附15小时,吸附后15倍树脂体积的水洗涤,装到层析柱中,用15倍树脂体积的53%酒精解吸解吸液合并在温度40℃,真空浓缩至上清液体积的1/70;浓缩液通过调节流速控制进气口温度180℃,出气口温度114℃进行喷雾干燥得到红曲霉转化玉米皮发酵粉,该红曲霉转化玉米皮发酵粉含有多糖17%,洛伐他汀4.9%,红曲色素5.8%;可以作为生产降血糖降血脂的原料药物;多糖、洛伐他汀和红曲色素的含量为质量比。
实施例29一种红曲霉转化玉米皮发酵粉片剂的制备方法
红曲霉转化玉米皮发酵粉可以加入40%糊精,20%去离子水,经过制粒、干燥、压片、包装等生产降血糖降血脂的片剂。该片剂具有降低血糖和血脂功效。
实施例30一种红曲霉转化玉米皮发酵粉胶囊的制备方法
红曲霉转化玉米皮发酵粉可以直接制成胶囊,该胶囊具有降低血糖和血脂功效。
Claims (9)
1.红曲霉转化玉米皮发酵液功能性食品,其特征在于其为粉红色至紫红色,具有特有的发酵香味,含有多糖100-500mg/L,洛伐他汀5-50mg/L,红曲色素4-60mg/L;该发酵液具有显著的降低血糖和血脂功效,用于生产治疗或辅助治疗糖尿病和高血脂症的功能性食品或药品。
2.根据权利要求1所述的红曲霉转化玉米皮发酵液的制备方法,其特征在于按照下述步骤进行:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中进行培养,制得红曲霉试管斜面孢子;
b.液体摇瓶培养:将红曲霉试管斜面孢子接种到装有液体摇瓶培养基的摇瓶中,进行培养,制得液体摇瓶菌种;
c.一级种子罐种子培养:将液体摇瓶菌种接种到种子罐培养基,进行培养,制成一级种子罐菌种;
d.液体发酵培养:将一级种子罐菌种接种到发酵罐培养基中,进行发酵培养,制得红曲霉转化玉米皮的发酵液。
3.根据权利要求2所述的红曲霉转化玉米皮发酵液的制备方法,其特征在于所述的红曲转化玉米皮发酵液的制备方法包括如下步骤:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中,在温度20-45℃下培养3-10d后,进行1-10℃保藏,制得红曲霉试管斜面孢子;
b.液体摇瓶培养:将一环红曲霉试管斜面孢子接种于装有20-150mL液体摇瓶培养基的250mL三角瓶中,三角瓶在转速为50-200转/分,温度20-43℃的条件下,摇床培养18-86h,制成液体摇瓶菌种;每1L液体摇瓶培养基所含有的各成分的重量为:麸皮5-20g,葡萄糖5-20g,蛋白胨1-5g,酵母浸膏2-8g,硫酸镁0.01-0.2g,磷酸氢二钾0.01-0.2g;c.一级种子罐种子培养:按接种量为1%-20%(液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比)将液体摇瓶菌种接种于种子罐培养基中,在温度为20-43℃,搅拌转速为50-160转/分,通气量为0.2-1.8:1(每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比)的条件下,培养18-50h,制成一级种子罐菌种;每1L种子罐培养基所含有的各成分的重量为:麸皮5-20g,葡萄糖5-20g,蛋白胨1-5g,酵母浸膏2-8g,硫酸镁0.01-0.2g,磷酸氢二钾0.01-0.2g;
d.红曲霉转化玉米皮发酵液:按接种量为1-20%(一级种子罐菌种液体体积与液体发酵培养基的体积比)将种子罐菌种接种到发酵培养基中;
在温度为20-43℃,搅拌转速为50-160转/分,通气量为0.2-1.8:1(每分钟通入气体的体积与发酵培养基的体积比)的条件下,培养54-150h,得到红曲霉转化玉米皮发酵液;每1L发酵基培养基所含有的各成分的重量为:玉米皮10-40g,蛋白胨5-20g,葡萄糖4-30g,酵母浸膏2-10g,硫酸镁0.01-0.2g,磷酸氢二钾0.01-0.2g;
e.红曲霉转化玉米皮发酵液可以直接生产具有辅助降低血糖调节血脂的片剂、胶囊、饮料、黄酒、酸奶、醋。
4.根据权利要求2所述的红曲霉转化玉米皮发酵液的制备方法,其特征在于使用的红曲霉为红曲霉属中的红色红曲菌(Monascusruber)、紫色红曲菌(Monascuspurpureu)、丛毛红曲菌(Monascuspilosus)、红曲红曲菌(Monascusanka)的任意一种,,所使用的玉米皮为栽培使用。
5.根据权利要求2所述的红曲霉转化玉米皮发酵液的制备方法,其特征在于所提供的液体摇瓶培养基和发酵培养基经过100-130℃灭菌30-120min。
6.根据权利要求1所述的红曲霉转化玉米皮发酵液的制备方法,其特征在于按照下述步骤进行:
a.试管扩大培养:将红曲霉菌种接种于马铃薯葡萄糖培养基中,在温度20-45℃下培养3-10d后,进行1-10℃保藏,制得红曲霉试管斜面孢子;
b.液体摇瓶培养:将一环红曲霉试管斜面孢子接种于装有20-150mL液体摇瓶培养基的250mL三角瓶中,在温度20-43℃,在搅拌转速为50-200转/分的条件下,摇床培养18-86h,制得液体摇瓶菌种;
c.一级种子罐种子培养:按接种量为1%-20%液体摇瓶菌种与种子罐培养基的体积比将液体摇瓶菌种接种于种子罐培养基中,在温度为20-43℃,搅拌转速为50-160转/分,通气量为0.2-1.8:1每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比的条件下,培养18-50h,制得一级种子罐菌种;
d.红曲霉转化玉米皮液体发酵培养:按接种量为1-20%(一级种子罐菌种液体体积与发酵培养基的重量比)将种子罐菌种接种到发酵罐培养基中;
在温度为20-43℃,搅拌转速为50-160转/分,通气量为0.2-1.8:1(每分钟通入气体的体积与发酵罐培养基的体积比)的条件下,培养54-150h,得到红曲霉转化玉米皮发酵液;
e.红曲霉玉米皮功能性食品;红曲霉转化玉米皮发酵液可以直接生产具有辅助降低血糖调节血脂的片剂、胶囊、饮料、黄酒、酸奶、醋。
7.根据权利要求2所述的红曲霉转化玉米皮发酵液的制备方法,其特征在于所述一级种子罐菌种经二级种子罐种子培养后,再进行固体发酵培养,所述二级种子罐种子培养工艺为:按接种量为1-20%将一级种子罐菌种接种于种子罐培养基中,在温度为20-43℃,搅拌转速为50-160转/分,每分钟通气量为0.2-1.8:1的条件下,培养18-50h,制得二级种子罐菌种;所述接种量为一级种子罐菌种与液体摇瓶培养基的体积比;所述通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基的体积比;
所述二级种子罐菌种经三级种子罐种子培养后,再进行液体发酵培养,所述三级种子罐种子培养工艺为:按接种量为1-20%将二级种子罐菌种接种于种子罐培养基中,在温度20-43℃,搅拌转速为50-160转/分,通气量为0.2-1.8:1的条件下,培养18-50h,制成三级种子罐菌种;所述接种量为二级种子罐菌种与三级种子罐的种子罐培养基的体积比;所述通气量为每分钟通入气体的体积与种子罐培养基体积比。
8.根据权利要求2所述的红曲霉转化玉米皮发酵液的制备方法,其特征在于其特征在于按照下述步骤进行:
发酵液离心,得到上清液;
上清液真空浓缩、喷雾干燥得到红曲霉转化玉米皮提取物;
c)或者上清液依次经过大孔树脂吸附、水洗、解吸;
d)解吸液经过浓缩、喷雾干燥得到,红曲霉转化玉米皮提取物。
9.根据权利要求2所述的红曲霉转化玉米皮发酵液的制备方法,其特征在于其特征在于按照下述步骤进行:
红曲霉转化玉米皮发酵液3000-8000rpm离心10-30分钟,得到上清液;
上清液真空40-70℃浓缩至原上清液的1/100-1/20倍体积;
或上清液用1/50-1/5体积的大孔树脂静态吸附5-20小时,吸附后10-20倍树脂体积的水洗涤,装到层析柱中,用10-20倍树脂体积的20-80%酒精解吸解吸液合并在温度20-50℃,真空浓缩至上清液体积的1/100-1/50;
d)浓缩液通过调节流速控制进气口温度160-190℃,出气口温度100-120℃进行喷雾干燥得到红曲霉转化玉米皮发酵粉
e)上述红曲霉转化玉米皮发酵粉含有多糖10-30%,洛伐他汀2-8%,红曲色素1.5-6%;可以作为生产降血糖降血脂的原料药物;
优选地多糖、洛伐他汀和红曲色素的含量为质量比;
f)利用上述原料药物可以生产降血糖降血脂的药物组合包括胶囊、片剂;
含有这些原料药物组合的片剂或胶囊具有降低血糖和血脂功效。
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