CN114982713A - 2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型的构建方法、评价方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及动物模型技术领域，具体涉及一种2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型的构建方法、评价方法及应用。本发明将患糖尿病的db/db小鼠适应性喂养3天后，每天灌服复方煎剂，灌胃量为0.1mL/10 g，持续4周，然后灌服六味地黄汤进行干预，用来验证2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型动物模型构建是否成功。采用宏观表征及客观指标对构建的模型进行评估，解决了阴虚证动物模型评价标准不一致的问题，所得的动物模型可应用中医辩证施治和2型糖尿病阴虚证治疗药物筛选和制备。本发明模型构建方法简单、经济，为实现阴虚证模型评价的标准化与规范化提供思路。
Description
技术领域
本发明涉及动物模型技术领域，具体涉及一种2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型的构建方法、评价方法及应用。
背景技术
中医证候动物模型基于整体观念和辨证论治的中医思想，结合病因病机等中医理论，将人类疾病的某些特征在动物身上加以复制而成，是探索证候发生与演变的重要载体。建立标准化的中医证候动物模型是中医药现代化研究的基本前提之一。
中医以“辨证”为原则，西医以“辨病”为特点。病证结合动物模型兼备西医“病”与中医“证”的基本特征，将现代医学发病机制与中医病因学说密切结合，是开展中医证候生物学基础研究较为理想的动物模型。
2型糖尿病属于中医学“消渴”范畴，阴虚是该病的主要病理基础，阴虚证是人体阴精或津液亏虚所导致的中医基本证候之一，阴虚证在中医临床疾病中分布较广，以糖尿病最为常见其中，2型糖尿病患者占糖尿病患者总数的90%以上。
由于证候的主观性，阴虚证动物模型评价目前存在标准不一致的问题，制约了阴虚证科学内涵的研究进程，因此，建立标准化的2型糖尿病病证结合动物模型是探索中医证候本质和临床新药研发的重要基础。
发明内容
本发明所述的2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型，是基于2型糖尿病的基础上建立的阴虚证，体现了西医“病”与中医“证”的紧密联系。采取中医病因结合西医病理因素造模，系统地观察模型出现的证候，体现中医证的表征和西医病的指标，使动物在生物表征上模拟人的表现，构建2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型。
本发明所要解决的一个问题是提供一种2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型的构建方法。
发明所要解决的另一个问题是提供一种2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型的评价方法。
发明所要解决的另一个问题是提供利用上述方法建立的一种2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型进行制备和筛选2型糖尿病阴虚病药物。
发明所要解决的另一个问题是提供利用上述方法建立的一种2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型在2型糖尿病阴虚证的中医辩证施治的应用。
本发明提供一种2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型的构建方法，将患糖尿病的db/db小鼠适应性喂养3天后，每天灌服复方煎剂组合物，灌胃量为0.1mL/10g，持续4周。
所述的复方煎剂为取重量份比为1:1:1的黑顺片、肉桂和制吴茱萸用水煎并浓缩成1g/mL生药。
一种2型糖尿病阴虚证动物模型的构建方法，具体包括以下步骤：
步骤1：小鼠选取阶段，选取SPF级雄性db/db小鼠，鼠龄6周，体重为32-45g；选取同窝m/m小鼠，鼠龄6周，体重18-20 g；
步骤2：小鼠分类阶段，将db/db小鼠小鼠分类，分为糖尿病组和病证结合模型组，m/m小鼠分为正常组；
步骤3：造模阶段，采用灌服方式给药小鼠，病证结合模型组每天灌服复方煎剂组合物，灌胃量为0.1 mL/10 g，连续给药4周，正常组和糖尿病组每天灌服等体积超纯水，连续给药4周；
在步骤（3）造模之后，进一步包括将病证结合模型组灌服六味地黄汤进行干预，用来验证2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型动物模型构建是否成功。
进一步，将病证结合模型组分为六味地黄汤低、中、高剂量组，每日灌服六味地黄汤，灌胃量为0.1mL/10g，连续给药4周，正常组和糖尿病组每天灌服等体积超纯水，连续给药4周。
一种2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型评价方法，从空腹血糖、口服葡萄糖耐量、胰岛素耐量、旷场实验、体温测定、饮水量、唾液流率、皮肤含水量、粪便含水量、粪便含水量、24 h尿量、体质量、食量和拉力进行评价。
所述的旷场试验为小鼠在正中格停留时间及次数、运动距离、运动速度。
本发明构建方法制备获得的2型糖尿病阴虚证动物模型应用在制备或筛选2型糖尿病阴虚证治疗药物中。
本发明构建方法制备获得的2型糖尿病阴虚证动物模型应用在2型糖尿病阴虚证的中医辩证施治中。
与现有技术相比本发明具有以下有益效果：
本发明选用六味地黄汤进行反证，证实六味地黄汤能够改善糖尿病阴虚证小鼠阴虚内热及五心温度升高、口干、局部皮肤干燥、大便干燥、尿少、消瘦及乏力的表现，调节血糖，改善其高血糖状态。旷场实验常用于评价小鼠的自发活动和类似烦躁的行为。通过观察小鼠在旷场中的活动情况，我们发现灌服六味地黄汤后小鼠中央格穿格次数、旷场区运动总距离和速度降低，烦躁表现得以缓解，进一步验证了2型糖尿病阴虚证模型造模成功。
本发明的制备的2型糖尿病阴虚证模型方法简单、经济，为疾病的辨证论治提供实验动物模型，特别是使中医辨证施治、新药药理实验有相应的动物模型采用，加速中医疾病证候研究的进展与新药开发，为药物评价提供技术服务，极具应用价值。
本研究采用阴虚证造模方法进行模型构建，创新性结合 “五心烦热、潮热、口干、皮肤干燥、便干、形体消瘦、尿赤”等阴虚证典型表现制定评价指标，探索阴虚证动物模型评价方法，为实现阴虚证模型评价的标准化与规范化提供思路。
附图说明
图1为模型评价方法示意图。
图2为各组FBG水平比较。
图3各组小鼠在旷场中活动情况。
图4阴虚证造模阶段各组体温变化。
图5各组小鼠粪便含水量变化。
图6各组小鼠24 h尿量变化。
图7各组小鼠体质量变化。
图8各组小鼠食量变化。
图9各组小鼠拉力变化。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1。
1、材料和方法。
1.1主要试剂、材料与仪器。
复方煎剂成分黑顺片、肉桂、制吴茱萸均购自南通三越中药饮片有限公司；六味地黄汤成分熟地黄、酒萸肉、山药、泽泻、牡丹皮、茯苓均购自南通三越中药饮片有限公司；
葡萄糖注射液（湖北天圣）、胰岛素注射液（江苏万邦）、CareSens血糖试纸条( 苏州第壹制药有限公司)、ACS-D11型三峰牌电子秤（上海乾峰电子仪器有限公司）、BSA224S-CW电子天平（赛多利斯）、伯乐CareSens血糖测试仪（GM505B）、VM-01S快速水分测定仪（江苏维科特仪器仪表有限公司）、HKJ-SK03便携弹性水分油光皮肤测试仪（日本Huntkey公司)）、DT-8838红外测温仪（深圳市精海量电子科技有限公司）、自发活动视频跟踪分析系统（北京吉安得尔）、大小鼠抓力测试仪ZS-ZL（北京众实迪创）、小鼠日常喂食Co60辐照实验鼠生长繁殖饲料（江苏协同生物）。
1.2实验动物。
SPF 级6周龄雄性db/db小鼠（体质量32-45 g）50只及其同窝对照野生型m/m小鼠（体质量18-20 g）9只，购自常州卡文斯实验动物有限公司，SPF级环境饲养，温度22 ± 3℃。
2、实验方法。
2.1、复方煎剂制备。
黑顺片、肉桂、制吴茱萸按照1:1:1比例组成，常规水煎，浓缩至生药浓度1 g/mL，4℃保存备用。
2.2、六味地黄汤制备。
称取熟地黄24 g，酒萸肉12 g，山药12 g，泽泻9 g，牡丹皮9 g，茯苓9 g，第一次煎煮前加10倍超纯水浸泡所有药材2h，煮沸后温火继续煎煮30min，倒出药液，再加8倍超纯水煎煮30min，倒出药液，两次煎煮的药液用八层纱布过滤混合后使用旋转蒸发仪进行药物浓缩。向真空泵和水浴锅中加入适量水，连接冷凝管和药管，保持冷凝管内流动的水流，并吸入适量药液。接通电源，调节仪器转速及温度（60r/min，65℃），真空泵值至≤0.08。将六味地黄汤旋蒸至低、中、高剂量组生药浓度分别为0.565 g/mL、1.13 g/mL、2.26 g/mL，冷却后放置于4℃冰箱保存。
2.3、小鼠分组。
小鼠适应性喂养3天后，将db/db小鼠随机分为糖尿病组（简称D组）10只和病证结合模型组（简称M组）40只，m/m小鼠正常组（简称C组）9只，2型糖尿病阴虚证造模结束后，将M组随机分为糖尿病阴虚证组（简称DY组）、六味地黄汤低剂量组（简称DY-L组）、六味地黄汤中剂量组（简称DY-M组）和六味地黄汤高剂量组（简称DY-H组），每组10只。
2.4、2型糖尿病阴虚证模型建立。
M组小鼠每日灌服复方煎剂，灌胃量为0.1 mL/10 g，C组和D组灌服等体积超纯水为对照，连续4周；在前4周试验基础上，DY-L组、DY-M组和DY-H组每日增加灌服相应剂量六味地黄汤0.1 mL/10 g，余组灌服等量超纯水，连续4周。
3、统计学分析。
测量结果以
±s表示。采用GraphPad 8.0统计软件对两组间数据进行t检验，多组间数据进行单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。
4、模型评价。
本研究创新性结合 “五心烦热、潮热、口干、皮肤干燥、便干、形体消瘦、尿赤”等阴虚证典型表现制定评价指标，探索阴虚证动物模型评价方法，为实现阴虚证模型评价的标准化与规范化提供思路。
模型评价方法见图1。
4.1、空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）测定。
禁食不禁水6 h后，尾静脉采血测定小鼠FBG，每周1次。
如图2所示，其中A为阴虚证造模阶段各组FBG水平；B为六味地黄汤干预阶段各组FBG水平。
实验第1-8周2型糖尿病模型小鼠较正常对照小鼠FBG显著升高（均为P＜0.0001）。第1-4周M组FBG逐渐上升，相比于D组有增长趋势。第5周DY组FBG较D组升高（P＜0.001），第6-8周有上升趋势，但无统计学意义；相比于DY组，第5周DY-L和DY-H组小鼠FBG下降（均为P＜0.05），第7周DY-M组降低（P＜0.05），第8周DY-L组降低（P＜0.05）。
4.2、口服葡萄糖耐量（oral glucose tolerance test, OGTT）测定。
实验第8周末进行OGTT。禁食12 h后，用50%葡萄糖溶液，按2 g/kg体质量灌胃，在服糖前（0 min）、服糖后30、60、90、120 min时尾静脉取血, 测定血糖水平，评价小鼠是否存在糖耐量异常。
试验结果见表1。
表1：OGTT不同时间点血糖比较 (
±s)。
注：与C组相比，* P＜0.05，** P＜0.01，*** P＜0.001，**** P＜0.0001；与D组相比，# P＜0.05，### P＜0.001。
从表中可以看出在OGTT中，D、DY、DY-L、DY-M和DY-H组小鼠各时间点血糖值和OGTT曲线下面积（Area Under Curve, AUC）均大于C组小鼠，说明实验8周db/db小鼠葡萄糖机能受损，出现明显的糖耐量异常；0时DY组及DY-H组血糖值高于D组（分别为P＜0.001，P＜0.05），120 min时DY组血糖值高于D组（P＜0.05），且DY组AUC高于D组（P＜0.01），说明灌服伤阴药能够加重葡萄糖机能受损；相比于DY组，DY-L、DY-M、DY-H组血糖值和AUC有降低趋势（P＞0.05）。
4.3胰岛素耐量（insulin tolerance test, ITT）测定。
于实验第8周末进行ITT。小鼠禁食6 h，腹腔注射普通短效胰岛素（0.75 u/kg体质量），于注射胰岛素前（0 min）及注射后15、30、60、90、120min尾静脉取血测定血糖水平，反映胰岛素抵抗情况。
实验结果见表2。
表2：ITT不同时间点血糖比较(
±s)。
注：与C组相比，* P＜0.05，** P＜0.01，*** P＜0.001，**** P＜0.0001；与D组相比，#### P＜0.0001；与DY组相比，▲ P＜0.05。
从表中可看出，在ITT中，相比于C组，DY、DY-L、DY-M和DY-H组小鼠各时间点血糖值及AUC均明显升高；D组在0、15、30 min时血糖高于C组，但在60、90、120 min时血糖值有增加趋势（P＞0.05）。D组AUC大于C组（P＜0.01）。0时DY-H组血糖低于DY组（P＜0.05）。DY组在0、30min、60min、90min、120min时血糖高于D组，说明DY组小鼠存在更为严重的胰岛素抵抗状态。与DY组相比，DY-L、DY-M、DY-H组AUC有降低趋势（P＞0.05）。
4.4旷场实验测定。
于实验第8周末进行旷场实验。以视频追踪系统记录小鼠的探索行为，记录小鼠在5min内活动情况，包括小鼠在正中格停留时间及次数、运动距离、运动速度，以评价阴虚证典型症状“五心烦热”中的“烦躁”程度。
如图3所示，其中A中央格穿格次数；B 中央格停留时间百分比；C旷场区运动总距离；D旷场区运动速度；E各组小鼠典型运动轨迹图。
从图3可看出，D组、DY组、DY-L组、DY-M组和DY-H组小鼠中央格穿格次数、中央格停留时间百分比、旷场区运动总距离和速度均明显高于C组小鼠（均为P＜0.0001）。DY组相比于D组中央格穿格次数、中央格停留时间百分比、旷场区运动总距离和速度有增加趋势，但差异未见显著性。与DY组比较，DY-H组中央格穿格次数减少（P＜0.05），DY-L、DY-M和DY-H组旷场区运动总距离和速度均下降（分别为P＜0.01，P＜0.001，P＜0.05）。各组小鼠旷场实验典型运动轨迹结果显示：C组、D组、DY-L组、DY-M组与DY-H组小鼠活动区域为四周及角落为主，中心区域活动较少；DY组小鼠活动轨迹较为分散，中心区域活动增加，运动轨迹明显长于D组、DY-L组、DY-M组及DY-H组。
4.5体温测定。
检测小鼠肛温、心前区温度、左上肢爪心温度、右上肢爪心温度、左下肢爪心温度、右下肢爪心温度，每周1次，评价“五心烦热”中“热”的表现。
详细情况见图4，其中A-F分别为第1-4周各组小鼠左上肢爪心温度、右上肢爪心温度、左下肢爪心温度、右下肢爪心温度、心前区温度和肛温变化。
如图4所示，灌服伤阴药4周后，相比于D组，M组小鼠左上肢爪心温度、右上肢爪心温度、左下肢爪心温度、右下肢爪心温度、心前区温度和肛温均明显上升（分别为P＜0.001，P＜0.01，P＜0.01，P＜0.001，P＜0.01，P＜0.01）。
实验第5-8周，灌服伤阴药，实验结果见表3、表4、表5。
表3：六味地黄汤干预阶段肛温和心前区温度变化(
±s)。
注：与C组相比，* P＜0.05，** P＜0.01，*** P＜0.001，**** P＜0.0001；与D组相比，# P＜0.05，## P＜0.01，### P＜0.001，#### P＜0.0001；与DY组相比，▲ P＜0.05，▲▲ P＜0.01，▲▲▲ P＜0.001，▲▲▲▲ P＜0.0001。
表4：六味地黄汤干预阶段左、右上肢爪心温度变化(
±s)。
注：与C组相比，* P＜0.05，** P＜0.01，*** P＜0.001，**** P＜0.0001；与D组相比，# P＜0.05，## P＜0.01，### P＜0.001，#### P＜0.0001；与DY组相比，▲ P＜0.05，▲▲ P＜0.01，▲▲▲ P＜0.001，▲▲▲▲ P＜0.0001。
表5：六味地黄汤干预阶段左、右下肢爪心温度变化(
±s)。
注：与C组相比，* P＜0.05，** P＜0.01，*** P＜0.001，**** P＜0.0001；与D组相比，# P＜0.05，## P＜0.01，### P＜0.001，#### P＜0.0001；与DY组相比，▲ P＜0.05，▲▲ P＜0.01，▲▲▲ P＜0.001，▲▲▲▲ P＜0.0001。
DY组较D组肛温升高（分别为P＜0.001，P＜0.01，P＜0.01，P＜0.05），说明灌服伤阴药能够导致糖尿病阴虚证小鼠出现更为明显的阴虚内热表现；与DY组相比，第5-8周DY-L、DY-M、DY-H组肛温均下降（DY-L组显著性分别为P＜0.001，P＜0.05，P＜0.01，P＜0.01；DY-M组显著性分别为P＜0.0001，P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001；DY-H组显著性分别为P＜0.01，P＜0.05，P＜0.01，P＜0.01），说明六味地黄汤能够改善糖尿病阴虚证小鼠阴虚内热的症状。第5-8周DY组小鼠心前区温度明显高于D组（分别为P＜0.001，P＜0.001，P＜0.0001，P＜0.001），左上肢爪心温度升高（分别为P＜0.01，P＜0.01，P＜0.001，P＜0.01），右上肢爪心温度在第5周上升（P＜0.0001），第6周有增加趋势（P＞0.05），第7周和第8周上升（P＜0.01，P＜0.01），左下肢爪心温度在第5-8周上升（分别为P＜0.001，P＜0.0001，P＜0.001，P＜0.05），第7-8周右下肢爪心温度均高于D组（均为P＜0.001）。灌服六味地黄汤4周后，与DY组相比，DY-L组左上肢、右上肢、左下肢、右下肢爪心温度和心前区温度下降（分别为P＜0.01，P＜0.001，P＜0.001，P＜0.01，P＜0.001），DY-M组左上肢、右上肢、左下肢、右下肢爪心温度和心前区温度下降（分别为P＜0.001，P＜0.001，P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01），DY-H组左上肢、右上肢、右下肢爪心温度和心前区温度下降（分别为P＜0.001，P＜0.01，P＜0.001，P＜0.001）。说明六味地黄汤能够下调糖尿病阴虚证小鼠四肢爪心及心前区温度。
4.6 饮水量和唾液流率测定。
检测小鼠每日平均饮水量，评价小鼠“口干”情况。
将定性滤纸剪成半径约2 cm的等大扇形，用镊子夹持探入小鼠口中，在舌面停留5秒后取出，用电子天平称重，检测小鼠唾液流率，每周1次。唾液流率（mg/s）=（滤纸湿重-滤纸干重）/5 s。评价小鼠“口干”情况。
实验1-8周db/db小鼠较正常小鼠水量均明显增加（均为P＜0.0001），“多饮”症状明显。在阴虚证造模阶段，M组较D组小鼠水量有所增加，且在第4周差异具有显著性（P＜0.001）。在六味地黄汤干预阶段，相比于D组，DY组水量在第5-8周增加（均为P＜0.0001），说明糖尿病阴虚证小鼠较单纯糖尿病模型小鼠口渴喜饮的症状更为明显；灌服六味地黄汤4周后，DY-L、DY-M和DY-H组小鼠饮水量较DY组明显下降（均为P＜0.0001），说明六味地黄汤能够改善糖尿病小鼠口干程度。
第1-8周M组小鼠唾液流率较C组明显下降。阴虚证造模阶段第4周M组较D组小鼠唾液流率减少（P＜0.05）。六味地黄汤干预阶段第5-8周DY组唾液流率低于D组（P＜0.05，P＜0.001，P＜0.01, P＜0.05），出现更为明显的口干表现。DY-L、DY-M和DY-H在灌服六味地黄汤4周后，唾液流率较DY组上升（P＜0.05，P＜0.01, P＜0.001），说明六味地黄汤能改善糖尿病阴虚证小鼠口干症状。
4.8皮肤含水量测定。
剔除小鼠背部区域约1cm×1cm毛发，为背部皮肤含水量检测区。使用便携弹性水分油光皮肤测试仪检测小鼠背部和四肢皮肤含水量，评价“皮肤干燥”程度,每周1次。
六味地黄汤干预阶段皮肤含水量变化见表6、表7、和表8。
表6：六味地黄汤干预阶段背部皮肤含水量变化(
±s)。
表7：六味地黄汤干预阶段左、右上肢皮肤含水量变化(
±s)。
表8：六味地黄汤干预阶段左、右下肢皮肤含水量变化(
±s)。
灌服伤阴药第4周M组小鼠左上肢、右上肢、左下肢、右下肢及背部皮肤含水量均低于D组（分别为P＜0.001，P＜0.01，P＜0.01，P＜0.0001，P＜0.05）。在六味地黄汤干预阶段，DY组背部皮肤含水量在第6周和第7周低于D组，且在第7、8周低于C组（P＜0.01，P＜0.05）；DY组在第5-6周相比于D组右上肢皮肤含水量下降（P＜0.05，P＜0.01），第7-8周有降低趋势；在实验第8周DY组较D组左上肢和右下肢皮肤含水量降低（P＜0.05，P＜0.01）；与D组相比，DY组左下肢皮肤含水量变化不显；说明灌服伤阴药导致DY组小鼠左上肢、右上肢和右下肢皮肤干燥。DY-L、DY-M、DY-H组与DY组左上肢和左下肢皮肤含水量差异不显。相比于DY组，DY-L组右上肢皮肤含水量在第5、6周增加（P＜0.01，P＜0.001），DY-M组和DY-H组在第6周上升（均为P＜0.01）；在实验第5周，DY-L、DY-M、DY-H组右下肢皮肤含水量均高于DY组，且在实验第8周，DY-M组右下肢皮肤含水量高于DY组（P＜0.01）；第8周DY-H组较DY组背部皮肤含水量增加（P＜0.001）；说明六味地黄汤干预4周对于改善右下肢和背部皮肤干燥具有一定作用。
4.9粪便含水量测定。
收集小鼠刚排出的新鲜粪便2-3粒（约30 mg），立即放入快速卤素水分测定仪托盘中，选择自动模式105℃加热烘干，记录粪便含水量数值，每周1次。评价“大便干燥”程度。
试验检测结果见图5，其中图5中A为阴虚证造模阶段C组和Y组小鼠粪便含水量变化；B为阴虚证造模阶段D组和M组小鼠粪便含水量变化；C为六味地黄汤干预阶段各组小鼠粪便含水量变化。
阴虚证造模阶段，M证组较D组小鼠降低，在第4周差异具有统计学意义（P＜0.05），说明灌服伤阴药4周导致M组小鼠出现明显的“大便干燥”表现。在六味地黄汤干预阶段，DY组粪便含水量低于D组，且在第6周具有统计学意义（P＜0.01）；DY-L、DY-M组在灌服六味地黄汤4周后，粪便含水量高于DY组（均为P＜0.01），说明灌服六味地黄汤4周能够改善糖尿病阴虚证模型小鼠大便干燥的程度。
4.10 24 h尿量。
使用代谢笼收集尿量，禁食不禁水，测定24 h尿量，每周1次，评价“尿少”。
评价结果见图6，其中A为阴虚证造模阶段各组小鼠24 h尿量变化；B为六味地黄汤干预阶段各组小鼠24 h尿量变化。
在阴虚证造模阶段第1周、第4周M组24 h尿量明显低于D组（均为P＜0.0001），说明灌服伤阴药4周糖尿病阴虚证小鼠相比于糖尿病小鼠“尿少”。六味地黄汤干预阶段，D与DY组小鼠尿量差异不显，但均明显高于正常小鼠，说明糖尿病小鼠“多尿”；DY-L、DY-M、DY-H组24h尿量在灌服六味地黄汤4周后均高于DY组（P＜0.0001，P＜0.01，P＜0.01），说明灌服六味地黄汤4周能够在一定程度上改善糖尿病阴虚证小鼠尿少表现。
4.11体质量测定。
检测每只小鼠体质量（检测前不禁食水），每周1次，评价“形体消瘦”程度。
评价结果见图7，其中A为阴虚证造模阶段C组和Y组小鼠体质量变化；B为阴虚证造模阶段D组和M组小鼠体质量变化；C为六味地黄汤干预阶段各组小鼠体质量变化。
db/db小鼠较正常对照小鼠体质量增加（均为P＜0.0001）。在阴虚证造模阶段，M组小鼠体质量较D组降低，且在第3、4周有统计学意义（P＜0.01，P＜0.0001）, 说明灌服伤阴药4周导致了M组小鼠消瘦。六味地黄汤干预阶段，DY组较D组体质量明显下降（均为P＜0.0001）；与DY组相比，DY-H组在第5-8周体质量明显上升（均为P＜0.0001），说明灌服高剂量六味地黄汤可增加糖尿病阴虚证小鼠体质量，改善形体消瘦程度。
4.12食量测定。
检测小鼠每日平均食量，评价小鼠是否出现“纳差”表现。
评价结果见图8，其中A为阴虚证造模阶段各组小鼠食量变化；B为六味地黄汤干预阶段各组小鼠食量变化。
db/db小鼠较正常对照小鼠出现明显的“多食”表现。在阴虚证造模阶段第1-4周M组与D组小鼠相比，第1周差异不显，在实验第2-4周均明显降低（分别为P＜0.0001, P＜0.0001, P＜0.001），出现纳差表现；在六味地黄汤干预阶段，DY组第7周和第8周时食量高于D组（均为P＜0.05），说明糖尿病阴虚证小鼠食量时增时减。DY-L和DY-M组食量较DY组差异不显，DY-H组在实验第6周食量显著低于DY组（P＜0.01）），说明灌服六味地黄汤对于改善小鼠纳差表现不显著。
4.13 拉力测定。
于实验第4周和第8周进行拉力检测。将小鼠轻轻放置于抓力板上，轻轻向后牵拉鼠尾，待小鼠四肢抓牢抓力板后，均匀用力匀速后拉，直至小鼠四肢完全脱离抓力板，记录小鼠抓力，评价小鼠是否出现乏力表现。
评价结果见图9，其中A为阴虚证造模阶段各组小鼠拉力变化；B为六味地黄汤干预阶段各组小鼠拉力变化。
阴虚证干预阶段M组低于D组小鼠拉力（P＜0.05），说明阴虚证造模阶段糖尿病阴虚证组小鼠相比于单纯糖尿病小鼠的乏力程度更为明显。在六味地黄汤干预阶段，DY组拉力低于D组（P＜0.05）；DY-M组拉力高于DY组（P＜0.05），乏力程度得以改善。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (10)
1.一种2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型的构建方法，其特征在于，将患糖尿病的db/db小鼠适应性喂养3天后，每天灌服复方煎剂，灌胃量为0.1mL/10 g，持续4周。
2.根据权利要求1所述的一种2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型的构建方法，其特征在于，所述的复方煎剂为取重量份比为1:1:1的黑顺片、肉桂和制吴茱萸用水煎并浓缩成1g/mL生药。
3.根据权利要求1或2所述的一种2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型的构建方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
步骤1：小鼠选取阶段，选取SPF级雄性db/db小鼠，鼠龄6周，体重为32-45g，选取同窝m/m小鼠，鼠龄6周，体重18-20 g；
步骤2：小鼠分类阶段，将db/db小鼠分类，分为糖尿病组和病证结合模型组，m/m小鼠分为正常组；
步骤3：造模阶段，采用灌服方式给药小鼠，病证结合模型组每天灌服复方煎剂组合物，灌胃量为0.1 mL/10 g，连续给药4周，正常组和糖尿病组每天灌服等体积超纯水，连续给药4周。
4.根据权利要求3中所述一种2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型的构建方法，其特征在于，在步骤（3）造模阶段之后，进一步包括将病证结合模型组灌服六味地黄汤进行干预，用来验证2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型动物模型构建是否成功。
5.根据权利要求4中所述一种2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型的构建方法，将病证结合模型组分为六味地黄汤低、中、高剂量组，每日灌服六味地黄汤，灌胃量为0.1mL/10g，连续给药4周，正常组和糖尿病组每天灌服等体积超纯水，连续给药4周。
6.根据权利要求5中所述一种2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型的构建方法，其特征在于，六味地黄汤低、中、高剂量分别为0.565 g/mL、1.13 g/mL和2.26 g/mL。
7.一种2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型评价方法，其特征在于，从空腹血糖、口服葡萄糖耐量、胰岛素耐量、旷场实验、体温测定、饮水量、唾液流率、皮肤含水量、粪便含水量、粪便含水量、24 h尿量、体质量、食量和拉力进行评价。
8.根据权利要求7所述的一种2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型的评价方法，其特征在于，所述的旷场试验为小鼠在正中格停留时间及次数、运动距离、运动速度。
9.一种2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型的构建方法制备获得的2型糖尿病阴虚证动物模型在制备或筛选2型糖尿病阴虚证治疗药物的应用。
10.一种2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型的构建方法制备获得的2型糖尿病阴虚证动物模型在2型糖尿病阴虚证的中医辩证施治的应用。
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Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005110632A (ja) * | 2003-10-10 | 2005-04-28 | Sankyo Co Ltd | 肥満糖尿病モデル動物 |
| CN1903022A (zh) * | 2005-07-08 | 2007-01-31 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 新的糖尿病模型 |
| CN102228699A (zh) * | 2011-05-11 | 2011-11-02 | 广州中医药大学 | 一种构建中医脾虚证艾滋病猴模型的方法及用途 |
| CN102940800A (zh) * | 2012-11-08 | 2013-02-27 | 西安福安创意咨询有限责任公司 | 治疗糖尿病的中药 |
| CN105748651A (zh) * | 2014-09-19 | 2016-07-13 | 烟台市华文欣欣医药科技有限公司 | 一种制备生精壮阳的药物组合物的方法 |
| CN109661173A (zh) * | 2016-09-05 | 2019-04-19 | 株式会社大贵 | 排泄物处理材料的制造方法及制造装置 |
| CN109674829A (zh) * | 2019-02-20 | 2019-04-26 | 山东中医药大学 | 一种肝郁脾虚外感动物模型的建立及评价方法 |
-
2022
- 2022-06-09 CN CN202210646126.0A patent/CN114982713B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005110632A (ja) * | 2003-10-10 | 2005-04-28 | Sankyo Co Ltd | 肥満糖尿病モデル動物 |
| CN1903022A (zh) * | 2005-07-08 | 2007-01-31 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 新的糖尿病模型 |
| CN102228699A (zh) * | 2011-05-11 | 2011-11-02 | 广州中医药大学 | 一种构建中医脾虚证艾滋病猴模型的方法及用途 |
| CN102940800A (zh) * | 2012-11-08 | 2013-02-27 | 西安福安创意咨询有限责任公司 | 治疗糖尿病的中药 |
| CN105748651A (zh) * | 2014-09-19 | 2016-07-13 | 烟台市华文欣欣医药科技有限公司 | 一种制备生精壮阳的药物组合物的方法 |
| CN109661173A (zh) * | 2016-09-05 | 2019-04-19 | 株式会社大贵 | 排泄物处理材料的制造方法及制造装置 |
| CN109674829A (zh) * | 2019-02-20 | 2019-04-26 | 山东中医药大学 | 一种肝郁脾虚外感动物模型的建立及评价方法 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| 向璐: "黄芪-当归化学成分、药理作用及临床应用的研究进展", 中草药, vol. 1, pages 2196 - 2213 * |
| 周方圆: "2型糖尿病病证结合动物模型研究进展" * |
| 孙晓霞: "阴虚证动物模型的建立与评价", pages 1156 - 1163 * |
| 潘秋: "浅谈糖尿病病证结合动物模型研究的思路" * |
| 百度知道: "黑顺片有什么作用", Retrieved from the Internet <URL:https://zhidao.baidu.com/question/1753909936993292348.html> * |
| 董天宝: "阴虚热盛型2型糖尿病动物模型的初步研究", pages 059 - 8 * |
Also Published As
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